一種利用湖羊生產(chǎn)抗補(bǔ)體c3多抗血清的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種利用湖羊生產(chǎn)抗補(bǔ)體C3多抗血清的方法，補(bǔ)體C3抗原20mg的血清0.1ml，無菌roS1.9ml，弗氏佐劑2ml混合并乳化，得到免疫原乳劑；然后湖羊免疫第一針，在湖羊的前后腹股溝，每腹股溝分2個(gè)區(qū)域注射，總共12個(gè)注射點(diǎn)，皮下注射，足底部2個(gè)注射點(diǎn)平均注射，然后間隔二十天注射第二針，再每次間隔10天注射3?6針，間隔五天對(duì)免疫的湖羊動(dòng)脈采血，血液放入水箱中1小時(shí)溫度40°C，待血清充分析出，經(jīng)離心沉淀分離出抗血清。本發(fā)明將補(bǔ)體C3抗原經(jīng)皮下注入湖羊腹股溝外并進(jìn)行多次加強(qiáng)免疫，使其產(chǎn)生高效羊抗補(bǔ)體C3抗體可達(dá)1：64以上。為生物試劑廠提供原料、為醫(yī)療診斷提供方便，使湖羊產(chǎn)生了高的效益。
【專利說明】一種利用湖羊生產(chǎn)抗補(bǔ)體C3多抗血清的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種羊抗人血清生產(chǎn)方法，具體涉及一種利用湖羊生產(chǎn)抗補(bǔ)體C3多 抗血清的方法及其使用方法。

【背景技術(shù)】
[0002] C3是血清中含量最高的補(bǔ)體成分，分子量為195000,主要有巨噬細(xì)胞和肝臟合 成，在C3轉(zhuǎn)化酶的作用下，裂解成C3a和C3b兩個(gè)片段，在補(bǔ)體經(jīng)典激活途徑和旁路激活途 徑中均發(fā)揮重要作用。C3是生物試劑的重要原料，現(xiàn)有的生產(chǎn)方法采用傳統(tǒng)的免疫方式，產(chǎn) 量與效價(jià)較低，已無法滿足日益增長的使用需求。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 發(fā)明目的：為了克服上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供一種可提高產(chǎn)量與效價(jià)的 利用湖羊生產(chǎn)抗補(bǔ)體C3多抗血清的方法。
[0004] 技術(shù)方案：為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供的利用湖羊生產(chǎn)抗補(bǔ)體C3多抗血清 的方法包括以下步驟：
[0005] 1)免疫原乳劑的制備，將含有補(bǔ)體C3抗原20mg的血清0. 1ml，無菌PBSL 9ml，弗 氏佐劑2ml混合并乳化，得到免疫原乳劑；
[0006] 2)湖羊免疫第一針，在湖羊的前后腹股溝，每腹股溝分2個(gè)區(qū)域注射，總共12個(gè)注 射點(diǎn)，皮下注射，足底部2個(gè)注射點(diǎn)平均注射；
[0007] 3)與步驟2)間隔二十天注射第二針，前后腹股溝分2個(gè)區(qū)域注射，總共12個(gè)注射 點(diǎn)，后腹股溝淋巴結(jié)左右2個(gè)注射點(diǎn)；
[0008] 4)與步驟3)間隔十天注射第三針，前后腹股溝分2個(gè)區(qū)域注射，總共12個(gè)注射 占.
[0009] 5)與步驟4)間隔十天注射第四針，前后腹股溝分2個(gè)區(qū)域注射，總共12個(gè)注射 占.
[0010] 6)與步驟5)間隔十天注射第五針，前后腹股溝分2個(gè)區(qū)域注射，總共12個(gè)注射 占.
[0011] 7)與步驟6)間隔十天注射第六針，前后腹股溝分2個(gè)區(qū)域注射，總共12個(gè)注射 占.
[0012] 8)與步驟7)間隔五天對(duì)免疫的湖羊動(dòng)脈采血，血液放入水箱中1小時(shí)溫度40°C， 待血清充分析出，經(jīng)離心沉淀分離出抗血清，放進(jìn)冰箱保存溫度在4°C一8°C之間；
[0013] 9)對(duì)步驟7)所得抗血清進(jìn)行效價(jià)測定。
[0014] 作為優(yōu)選，所述步驟1)所述抗原量是指每二頭羊的免疫抗原量。
[0015] 所述步驟2)中注射的免疫原乳劑乳化時(shí)采用的弗氏佐劑是弗氏完全佐劑。
[0016] 作為優(yōu)選，所述步驟3)、4)、5)、6)、7)中注射的免疫原乳劑乳化時(shí)采用的弗氏佐 劑是弗氏不完全佐劑。
[0017] 作為優(yōu)選，所述步驟7)的效價(jià)測定采用的方法為瓊擴(kuò)方法。
[0018] 有益效果：本發(fā)明將補(bǔ)體C3抗原經(jīng)皮下注入湖羊腹股溝外并進(jìn)行多次加強(qiáng)免疫， 使其產(chǎn)生高效羊抗補(bǔ)體C3抗體可達(dá)1:64以上。為生物試劑廠提供原料、為醫(yī)療診斷提供 方便，使湖羊產(chǎn)生了高的效益。

【具體實(shí)施方式】
[0019] 實(shí)施例：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選用湖羊公羊20只，體重50公斤左右健康羊，免疫前全部打上 耳標(biāo)，羊群采用圈養(yǎng)，結(jié)合放養(yǎng)，保持正常體況，避免羊只過肥，提高免疫力，自動(dòng)飲水器，每 天牧草供給，適量添加精料、醋糟、麩皮和維生素等。
[0020] 人的補(bǔ)體C3接種0· Iml (合抗原20mg) I. 9ml無菌PBS完全弗氏（或不完全）佐 劑2ml制成免疫原乳劑備用。
[0021] 湖羊免疫第一針，前后腹股溝，每腹股溝分2個(gè)區(qū)域注射，總共12個(gè)注射點(diǎn)，皮下 注射，頸部兩側(cè)2個(gè)注射點(diǎn)平均注射。
[0022] 第二針，間隔二十天，前后腹股溝分2個(gè)點(diǎn)注射，總共12個(gè)注射點(diǎn)，后腹股溝淋巴 結(jié)左右2個(gè)點(diǎn)。
[0023] 第三針，間隔十天，前后腹股溝分2個(gè)點(diǎn)注射，總共12個(gè)注射點(diǎn)。
[0024] 第四針，間隔十天，前后腹股溝分2個(gè)點(diǎn)注射，總共12個(gè)注射點(diǎn)
[0025] 第五針，間隔十天，前后腹股溝分2個(gè)點(diǎn)注射，總共12個(gè)注射點(diǎn)，
[0026] 第六針，間隔十天,前后腹股溝分2個(gè)點(diǎn)注射，總共12個(gè)注射點(diǎn)，
[0027] 其中第一針即第一次免疫注射的免疫原乳劑乳化時(shí)采用的弗氏佐劑是弗氏完全 佐劑。
[0028] 其余免疫中即第二、三、四、五針注射的免疫原乳劑乳化時(shí)采用的弗氏佐劑是弗氏 不完全佐劑。
[0029] 五天后對(duì)免疫的湖羊動(dòng)脈采血，血液放入水箱中1小時(shí)溫度40°C，待血清充分析 出，經(jīng)離心沉淀分離出抗血清，放進(jìn)冰箱保存溫度在4 °?C8 °C之間；
[0030] 采用瓊擴(kuò)方法對(duì)所得抗血清進(jìn)行效價(jià)測定
[0031] 1.配制瓊脂：稱取1.2g瓊脂粉，加入IOOml生理鹽水中，水浴加熱溶解后，以 115°C滅菌10分鐘；
[0032] 滅菌結(jié)束后，取出瓊脂溶液，冷卻至70°C左右，用吸管吸取瓊脂液，加入干凈的平 皿中，每塊平皿16ml，待冷卻后收起平皿，放于2?8°C冰箱中保存，可保存2周；
[0033] 用前在平皿上用梅花打孔器打孔，中間孔加入抗原，外周孔加稀釋后的待檢血清。
[0034] 2.樣品血清稀釋：取出96孔細(xì)胞培養(yǎng)板或血凝板，在每孔中加入25 μ 1生理鹽水 或 PBS ;
[0035] 在每行的第1列孔中加入25 μ 1樣品血清，從第1孔向后倍比稀釋至第10孔。
[0036] 3.加樣檢測：取出打好梅花孔的瓊脂平皿，在外周孔中按順序加入倍比稀釋的樣 品血清，每孔約加20 μ 1，以孔加滿為宜；
[0037] 在梅花孔的中央孔中加入上述分離出的抗血清；
[0038] 將加好樣的瓊脂平皿放入濕盒中，置37°C過夜；
[0039] 4.血清效價(jià)評(píng)定：
[0040] 觀察外周孔與中央孔沉淀線出現(xiàn)位置，計(jì)算樣品血清的效價(jià)。測得第6孔有沉淀 線（凝集反應(yīng)）說明測定此批次抗血清的效價(jià)為1:64。
【權(quán)利要求】
1. 一種利用湖羊生產(chǎn)抗補(bǔ)體C3多抗血清的方法，其特征在于，包括以下步驟： 1) 免疫原乳劑的制備，將含有補(bǔ)體C3抗原20mg的血清0. lml，無菌PBSL 9ml，弗氏佐 劑2ml混合并乳化，得到免疫原乳劑； 2) 湖羊免疫第一針，在湖羊的前后腹股溝，每腹股溝分2個(gè)區(qū)域注射，總共12個(gè)注射 點(diǎn)，皮下注射，足底部2個(gè)注射點(diǎn)平均注射； 3) 與步驟2)間隔二十天注射第二針，前后腹股溝分2個(gè)區(qū)域注射，總共12個(gè)注射點(diǎn)， 后腹股溝淋巴結(jié)左右2個(gè)注射點(diǎn)； 4) 與步驟3)間隔十天注射第三針，前后腹股溝分2個(gè)區(qū)域注射，總共12個(gè)注射點(diǎn)； 5) 與步驟4)間隔十天注射第四針，前后腹股溝分2個(gè)區(qū)域注射，總共12個(gè)注射點(diǎn)； 6) 與步驟5)間隔十天注射第五針，前后腹股溝分2個(gè)區(qū)域注射，總共12個(gè)注射點(diǎn)； 7) 與步驟6)間隔十天注射第六針，前后腹股溝分2個(gè)區(qū)域注射，總共12個(gè)注射 占. 8) 與步驟7)間隔五天對(duì)免疫的湖羊動(dòng)脈采血，血液放入水箱中1小時(shí)溫度40°C，待血 清充分析出，經(jīng)離心沉淀分離出抗血清，放進(jìn)冰箱保存溫度在4°C一8°C之間； 9) 對(duì)步驟8)所得抗血清進(jìn)行效價(jià)測定。
2. 如權(quán)利要求1所述的一種利用湖羊生產(chǎn)抗補(bǔ)體C3多抗血清的方法，其特征在于，步 驟1)所述抗原量是指每二頭羊的免疫抗原量。
3. 如權(quán)利要求1所述的一種利用湖羊生產(chǎn)抗補(bǔ)體C3多抗血清的方法，其特征在于，所 述步驟2)中注射的免疫原乳劑乳化時(shí)采用的弗氏佐劑是弗氏完全佐劑。
4. 如權(quán)利要求1所述的一種利用湖羊生產(chǎn)抗補(bǔ)體C3多抗血清的方法，其特征在于，所 述步驟3)、4)、5)、6)、7)中注射的免疫原乳劑乳化時(shí)采用的弗氏佐劑是弗氏不完全佐劑。
5. 如權(quán)利要求1所述的一種利用湖羊生產(chǎn)抗補(bǔ)體C3多抗血清的方法，其特征在于，所 述步驟7)的效價(jià)測定采用的方法為瓊擴(kuò)方法。
【文檔編號(hào)】C07K16/06GK104211805SQ201410413400
【公開日】2014年12月17日 申請(qǐng)日期:2014年8月20日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月20日
【發(fā)明者】徐志偉, 劉照亭, 劉偉忠, 魯群 申請(qǐng)人:鎮(zhèn)江萬山紅遍農(nóng)業(yè)園