一種植硫肽的類似物及制備方法
【專利摘要】一種植硫肽的類似物及制備方法，序列為Phs-Ile-Phs-Thr-Gln；其制備方法，包括：(1)樹脂Gln-王樹脂置于接肽瓶中，浸泡在DMF的溶液里；(2)加入Fmoc-Thr(tBu)-OH、DIC、HOBt進行反應(yīng)后脫去Fmoc基團；(3)加入Fmoc-Phs-OH、DIC、HOBt進行反應(yīng)后脫去Fmoc基團；(4)加入Fmoc-Ile-OH、DIC、HOBt進行反應(yīng)后脫去Fmoc基團；(5)加入Fmoc-Phs-OH、DIC、HOBt進行反應(yīng)后脫去Fmoc基團；(6)用三氟乙酸／二氯甲烷溶液切割樹脂即可。本發(fā)明較天然的植硫肽結(jié)構(gòu)更為穩(wěn)定，并且具備和天然植硫肽同樣的生理活性。
【專利說明】一種植硫肽的類似物及制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于植物激素領(lǐng)域，具體為一種植硫肽的類似物及制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]在植物懸浮細胞培養(yǎng)中存在密度效應(yīng)，即培養(yǎng)細胞被稀釋到一定程度后很難再繼續(xù)分裂。即使在補充植物激素和培養(yǎng)基之后也難以提高其有絲分裂的活性，說明懸浮培養(yǎng)體系中存在一種能夠被培養(yǎng)細胞感受的密度因子。當把低密度的靶細胞和高密度的滋養(yǎng)細胞一起非接觸性共培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)低密度的培養(yǎng)細胞可以感受由高密度的培養(yǎng)細胞釋放到細胞外的某種細胞分裂的促進因子。經(jīng)純化分析后發(fā)現(xiàn)這種促進有絲分裂的因子是帶有硫基化修飾的5個或4個氨基酸殘基的多肽化合物，即硫化酪氨酸-異亮氨酸-硫化酪氨酸-蘇氨酸-谷氨酰胺[Tyr (S03H) -1le-Tyr (S03H) -Thr-Gln]和硫化酪氨酸-異亮氨酸_硫化酪氨酸-蘇氨酸[Tyr (S03H) -1le-Tyr (S03H) -Thr]被稱為植硫肽PSK_a和PSK_b。植硫肽在納摩爾濃度下就可以刺激細胞增殖，PSK-b的活性只有PSK-a的活性的1/ 10.[0003]植硫肽除了能夠促進植物懸浮細胞的增殖以外，還可以在植物的生長發(fā)育的許多方面發(fā)揮調(diào)節(jié)作用。例如，植硫肽可以促進黃瓜黃化葉子葉細胞葉綠素的合成，能促進下胚軸形成不定根，刺激懸浮細胞的葉肉細胞向?qū)Ч芗毎姆只?，促進密度依賴的體外花粉管的明發(fā)等。
[0004]目前植硫肽的來源主要由生物提純得到，生物提純得到的植硫肽不但量少，而且純化分離成本很高，不利于大規(guī)模生產(chǎn)和使用。尋求化學(xué)的方法合成植硫肽曾有報道用酶法合成(美國科學(xué)院院刊，1996，93卷，頁7623)，但這種酶不但難以獲取，而且存在活性不穩(wěn)定的缺點。
[0005]植硫肽的結(jié)構(gòu)式為:
[0006]硫化酪氨酸-異亮氨酸-硫化酪氨酸-蘇氨酸-谷氨酰胺
[0007][Tyr (S03H) -1le-Tyr (S03H) -Thr-Gln]植硫肽a和硫化酪氨酸_異亮氨酸_硫化酪氨酸-蘇氨酸[Tyr (S03H) -1le-Tyr (S03H) -Thr]植硫肽 b。
[0008]
【權(quán)利要求】
1.一種植硫肽的類似物，其特征是，序列為(4-甲磺酸基)苯丙氨酸-異亮氨酸-(4-甲磺酸基)苯丙氨酸-蘇氨酸-谷氨酰胺，既Phs-1le-Phs-Thr-Gln,其化學(xué)結(jié)構(gòu)式為:
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種植硫肽的類似物，其特征是，所述4-甲磺酸基-苯丙氨酸，其結(jié)構(gòu)式為:
3.—種植硫肽的類似物的制備方法，其特征是，包括以下步驟: (1)將樹脂Gln-王樹脂置于接肽瓶中，浸泡在DMF的溶液里； (2)加入Fmoc-Thr(tBu)-OH、DIC、HOBt在20-30攝氏度下的搖床中反應(yīng)35-45分鐘，用DMF洗3次,再用piperidine-DMF溶液脫去Fmoc基團； (3)加入Fmoc-Phs-OH、DIC、HOBt在20-30攝氏度下的搖床中反應(yīng)35-45分鐘，用DMF洗3次,再用piperidine-DMF溶液脫去Fmoc基團； (4)加入Fmoc-1le-0H、DIC、H0Bt在20-30攝氏度下的搖床中反應(yīng)35-45分鐘，用DMF洗3次,再用piperidine-DMF溶液脫去Fmoc基團； (5)加入Fmoc-Phs-OH、DIC、HOBt在20-30攝氏度下的搖床中反應(yīng)35-45分鐘，用DMF洗3次,再用piperidine-DMF溶液脫去Fmoc基團；(6)用三氟乙酸/二氯甲烷溶液切割樹脂，得到植硫肽類似物Phs-1le-Phs-Thr-Gln。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種植硫肽的類似物的制備方法，其特征是，所述Gln-王樹脂載量為0.4毫摩爾/克。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種植硫肽的類似物的制備方法，其特征是，所述piperidine-DMF溶液的濃度為20%。
【文檔編號】C07K7/06GK103739668SQ201310730784
【公開日】2014年4月23日 申請日期:2013年12月18日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月18日
【發(fā)明者】鄧方坤 申請人:鄧方坤