專利名稱：免疫抑制性多肽與核酸的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明總體上涉及結(jié)合⑶80和/或⑶86的新穎多肽類，編碼此類多肽的核酸，以及制備并使用此類多肽及核酸的方法。本發(fā)明的背景T細(xì)胞在免疫應(yīng)答的起始及調(diào)控中發(fā)揮重要作用。為了產(chǎn)生T細(xì)胞的完全活化，要求至少兩個(gè)不同的信號(hào)傳導(dǎo)事件。一個(gè)第一信號(hào)是通過表達(dá)于T細(xì)胞表面上的T細(xì)胞受體與(TCR)與在表達(dá)于抗原呈遞細(xì)胞(APC)上的主要組織相容性復(fù)合物(MHC)分子的環(huán)境中存在的特定抗原(Ag)之間的 相互作用而產(chǎn)生。一個(gè)第二 (共刺激)信號(hào)是由表達(dá)于APC上的共刺激性配體與它們的表達(dá)于T細(xì)胞上的對(duì)應(yīng)受之體間的相互作用而產(chǎn)生。一種優(yōu)勢(shì)共刺激通路涉及在表達(dá)于APC上的⑶80 (B7-1或B7.1)以及⑶86 (B7-2或B7.2)配體與主要表達(dá)于T細(xì)胞上的⑶28以及CTLA-4 (也稱為⑶152)之間的相互作用。CTLA-4 (細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞抗原4)以及⑶28充當(dāng)這些⑶80以及⑶86配體的受體。正向信號(hào)傳導(dǎo)是通過⑶28受體介導(dǎo)的。這種或這些⑶80和/或⑶86配體與CD28的結(jié)合通過促進(jìn)免疫突觸的形成而降低了 T細(xì)胞活化的閾值(Viola A.etal., Science283:680-682 (1999))。此外，CD28的共刺激活化或增強(qiáng)了對(duì)于T細(xì)胞的增殖以及存活具有重要性的因子的形成，如，白介素-2 (IL-2)、NF-K B,以及Bcl-XL(Norton S.D.et at., J.1mmunol.149: 1556-1561 ( 1992 ) ; Vel la A.T.et al., J.1mmunol.158:4714-4720 (1997))。在體內(nèi)，⑶28-缺陷的小鼠是嚴(yán)重免疫妥協(xié)的，并且顯示了不良的抗原特異的 T 細(xì)胞應(yīng)答(Green, J.M.et al., Immunityl: 501-508 (1994))。當(dāng)T細(xì)胞在這種共刺激性信號(hào)的缺失下被活化時(shí)，可造成T細(xì)胞的無(wú)反應(yīng)性或耐受。負(fù)向信號(hào)傳導(dǎo)是通過CTLA-4受體介導(dǎo)的。這些⑶80以及⑶86配體各自以高親和力結(jié)合到CTLA-4上，并且衍生自⑶28信號(hào)傳導(dǎo)的平衡免疫增生性反應(yīng)。CTLA-4信號(hào)傳導(dǎo)的潛在機(jī)制包括競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合共刺激性分子⑶80/⑶86 (Masteller, Ε.M.et al.，J.1mmunol.164:5319 (2000))、通過將磷酸酶誘導(dǎo)至免疫突觸上而抑制TCR信號(hào)傳導(dǎo)(LeeK.M.et al.，Science282:2263 (1998))、以及破壞這種免疫突觸(Pentcheva-Hoang T.etal., Immunity21:401 (2004) ;Chikuma S.et al., J.Exp.Medl97:129 (2003) ;SchneiderH.et al., Science313:1972 (2006))。在體內(nèi)，CTLA-4缺陷的小鼠顯示了深度的自身免疫表型，其特征為大量的組織浸潤(rùn)以及器官破壞(Waterhouse P.et al.，Science270:985(1995))。設(shè)計(jì)成拮抗這種⑶80/⑶86共刺激通路的治療劑(如，可溶性人類CTLA-4-1g)具有用于治療自身免疫疾病以及紊亂的可能。本發(fā)明提供了具有改進(jìn)的能力以調(diào)整或阻抑經(jīng)由這種⑶80/⑶86共刺激通路的信號(hào)傳導(dǎo)的的有利分子，以及將此類分子用于所選擇且不同的T細(xì)胞應(yīng)答的操縱的方法。此類分子在如以下詳細(xì)討論的不同應(yīng)用中具有有益的用途。本發(fā)明的概述在第一個(gè)方面，本 發(fā)明提供了一種分離或重組的CTLA-4多肽，該多肽包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列與在SEQ ID NO: 159中所示的人類CTLA-4細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的多肽序列具有達(dá)到15個(gè)氨基酸殘基差異，其中該分離或重組的CTLA-4多肽具有結(jié)合⑶80或⑶86或二者之一的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的能力，和/或具有阻抑或抑制一種免疫應(yīng)答的能力。根據(jù)本發(fā)明第一方面的一種多肽可與SEQ ID NO:36的多肽序列具有至少90%的序列一致性，或至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%的序列一致性。根據(jù)本發(fā)明第一方面的一種多肽可包括SEQ ID N0:36的多肽序列。根據(jù)本發(fā)明第一方面的一種多肽可與SEQ ID NO:50的多肽序列具有至少90%的序列一致性，或至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%的序列一致性。根據(jù)本發(fā)明第一方面的一種多肽可包括SEQ ID N0:50的多肽序列。根據(jù)本發(fā)明第一方面的一種多肽可具有結(jié)合人類⑶80或人類⑶86或二者之一的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的能力。根據(jù)本發(fā)明第一方面的一種多肽可包括長(zhǎng)度為124個(gè)氨基酸殘基的一個(gè)多肽序列。根據(jù)本發(fā)明第一方面的一種多肽可包括一個(gè)氨基酸取代，該取代在選自下組的一個(gè)氨基酸位置上，該組的構(gòu)成為:對(duì)應(yīng)于相對(duì)SEQ ID N0:159的位置50、54、55、56、64、65、70、或85的多個(gè)氨基酸位置根據(jù)本發(fā)明第一方面的一種多肽可包括二、三、或四個(gè)氨基酸取代，這些取代在選自下組的多個(gè)氨基酸位置上，該組的構(gòu)成為:對(duì)應(yīng)于相對(duì)SEQ ID N0:159的位置50、54、55、56、64、65、70、或85的氨基酸位置。本發(fā)明第一方面的一種多肽可包括在相對(duì)SEQ ID NO: 159的位置70上的一個(gè)氨基酸取代，如取代S70F。本發(fā)明第一方面的一種多肽可包括在相對(duì)SEQ ID NO: 159的位置104上的一個(gè)氨基酸取代，如取代L104E。本發(fā)明第一方面的一種多肽可包括在相對(duì)SEQ ID NO: 159的位置30上的氨基酸取代，如取代T30N/D/A或取代T30N。本發(fā)明第一方面的一種多肽可包括在相對(duì)SEQ ID NO: 159的位置64上的一個(gè)氨基酸取代，如取代S64P。
本發(fā)明第一方面的一種多肽可包括在相對(duì)SEQ ID NO: 159的位置50上的一個(gè)氨基酸取代，如取代A50M。本發(fā)明第一方面的一種多肽可包括在相對(duì)SEQ ID NO: 159的位置54上的一個(gè)氨基酸取代，如取代M54K/V或取代M54K。本發(fā)明第一方面的一種多肽可包括在相對(duì)SEQ ID NO: 159的位置65上的一個(gè)氨基酸取代，如取代I65S。本發(fā)明第一方面的一種多肽可包括在相對(duì)SEQ ID NO: 159的位置56上的一個(gè)氨基酸取代，如取代N56D。本發(fā)明第一方面的一種多肽可包括在相對(duì)SEQ ID NO: 159的位置55上的一個(gè)氨基酸取代，如取代G55E。本發(fā)明第一方面的一種多肽可包括在相對(duì)SEQ ID NO: 159的位置85上的一個(gè)氨基酸取代，如取代M85A。本發(fā)明第一方面的一種多肽可包括在相對(duì)SEQ ID NO: 159的位置24上的一個(gè)氨基酸取代，如取代A24E/S或取代A24E。本發(fā)明第一方面的一種多肽可具有對(duì)于⑶86或它的一根細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的一種結(jié)合親和力，該結(jié)合親和力是大約等于或大于一種單體人類CTLA-4細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域?qū)τ贑D86或CD86細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的結(jié)合親和力。本發(fā)明第一方面 的一種多肽可具有對(duì)于⑶80或它的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的一種結(jié)合親和力，該結(jié)合親和力大于一種單體人類CTLA-4細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域?qū)τ贑D80或CD80細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的結(jié)合親和力。本發(fā)明第一方面的一種多肽可具有阻抑一種免疫應(yīng)答的能力。本發(fā)明第一方面的一種多肽可具有抑制T細(xì)胞活化或T細(xì)胞增殖的能力。在第二方面中，本發(fā)明提供了一種分離或重組的多肽多聚體，該多肽多聚體包括本發(fā)明第一方面的至少兩個(gè)多肽。在第三方面中，本發(fā)明提供了一種分離或重組的融合蛋白，該融合蛋白包括(a)根據(jù)本發(fā)明第一方面的一種多肽，以及(b) —種第二多肽，其中該第二多肽是一種Ig Fe多肽，并且其中該融合蛋白具有結(jié)合CD80和/或CD86、或二者之一的或兩者的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的能力，和/或調(diào)整或調(diào)節(jié)一種免疫應(yīng)答的能力。在第四方面中，本發(fā)明提供了一種分離或重組的二聚體融合蛋白，該二聚體融合蛋白包括根據(jù)本發(fā)明第三方面的兩個(gè)單體融合蛋白。在第五方面中，本發(fā)明提供了一種分離或重組的核酸，該核酸包括一個(gè)核苷酸序列，該核苷酸序列編碼了本發(fā)明第一方面的一種多肽、本發(fā)明第二方面的一種多聚體、本發(fā)明第三方面的一種融合蛋白、或本發(fā)明第四方面的一種二聚體融合蛋白。在第六方面中,本發(fā)明提供了一種載體，該載體包括本發(fā)明第五方面的一種核酸。在第七方面中，本發(fā)明提供了一種分離或重組的宿主細(xì)胞，該宿主細(xì)胞包括本發(fā)明第一方面的一種多肽、本發(fā)明第二方面的一種多聚體、本發(fā)明第三方面的一種融合蛋白、本發(fā)明第四方面的一種二聚體融合蛋白、本發(fā)明第五方面的一種核酸、和/或本發(fā)明第六方面的一種載體。在第八方面中，本發(fā)明提供了一種藥物組合物，該藥物組合物包括一種藥學(xué)上可接受的賦形劑、藥學(xué)上可接受的載體、或藥學(xué)上可接受的稀釋劑，以及以下的一項(xiàng)或多項(xiàng):本發(fā)明第一方面的一種多肽、本發(fā)明第二方面的一種多聚體、本發(fā)明第三方面的一種融合蛋白、本發(fā)明第四方面的一種二聚體融合蛋白、本發(fā)明第五方面的一種核酸、本發(fā)明第六方面的一種載體、和/或本發(fā)明第七方面的一種宿主細(xì)胞。在第九方面中，本發(fā)明提供了阻抑一種免疫應(yīng)答的方法，所述方法包括將一種B7-陽(yáng)性細(xì)胞與一個(gè)有效量的以下的至少一項(xiàng)進(jìn)行接觸:本發(fā)明第一方面的一種多肽、本發(fā)明第二方面的一種多聚體、本發(fā)明第三方面的一種融合蛋白、本發(fā)明第四方面的一種二聚體融合蛋白、本發(fā)明第五方面的一種核酸、本發(fā)明第六方面的一種載體、和/或本發(fā)明第七方面的一種宿主細(xì)胞，以阻抑一種免疫應(yīng)答，其中一種免疫應(yīng)答由此受到阻抑。在第十方面中，本發(fā)明提供了本發(fā)明第一方面的一種多肽、本發(fā)明第二方面的一種多聚體、本發(fā)明第三方面的一種融合蛋白、本發(fā)明第四方面的一種二聚體融合蛋白、本發(fā)明第五方面的一種核酸、本發(fā)明第六方面的一種載體、和/或本發(fā)明第七方面的一種宿主細(xì)胞，用于阻抑一種免疫應(yīng)答。在第十一方面中，本發(fā)明提供了本發(fā)明第一方面的一種多肽、本發(fā)明第二方面的一種多聚體、本發(fā)明第三方面的一種融合蛋白、本發(fā)明第四方面的一種二聚體融合蛋白、本發(fā)明第五方面的一種核酸、本發(fā)明第六方面的一種載體、和/或本發(fā)明第七方面的一種宿主細(xì)胞，在制造用于阻抑一種免疫應(yīng)答的一種藥物的用途。在第十二方面中，本發(fā)明提供了一種偶聯(lián)物，該偶聯(lián)物包括本發(fā)明第一方面的一種多肽、本發(fā)明第二方面的一種多聚體、本發(fā)明第三方面的一種融合蛋白、或本發(fā)明第四方面的一種二聚體融合蛋白，以及共價(jià)連附于這種多肽、多聚體、融合蛋白、或二聚體融合蛋白上的一個(gè)非多肽部分，其中所述偶聯(lián)物具有阻抑一種免疫應(yīng)答的能力。本發(fā)明的其他方面如以下說明。

在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種分離或重組的多肽，該多肽包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列具有與選自下組的至少一種多肽序列至少95%、96%、97%、98%、99%、或100%的序列一致性，該組的構(gòu)成為:SEQ ID NOS:1至73，其中該多肽結(jié)合⑶80或⑶86或二者之一的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(ECD)，和/或具有阻抑或抑制一種免疫應(yīng)答的能力。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種分離或重組的多肽，該多肽包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列具有與選自下組的至少一種多肽序列至少95%、96%、97%、98%、99%、或100%的序列一致性，該組的構(gòu)成為:SEQ ID NOS:1至73，其中該多肽具有對(duì)于一個(gè)人類⑶86細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域或人類CD80細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的一種結(jié)合親和力，該結(jié)合親和力對(duì)應(yīng)地是大約等于或大于一個(gè)人類CTLA-4細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域?qū)τ谠撊祟怌D86細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域或人類CD80細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的結(jié)合親和力，并且其中該多肽可任選地具有阻抑一種免疫應(yīng)答的能力。一些此類多肽具有對(duì)于該人類CD86細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的一種結(jié)合親和力，該結(jié)合親和力大于該人類CTLA-4細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域?qū)τ谠撊祟怌D86細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的結(jié)合親和力。一些此類多肽具有對(duì)于該人類CD80細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的一種結(jié)合親和力，該結(jié)合親和力大于該人類CTLA-4細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域?qū)τ谠撊祟怌D80細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的結(jié)合親和力。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種分離或重組的突變CTLA-4多肽，該多肽包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列(a)與在SEQ ID NO: 159中所示的人類CTLA-4細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的多肽序列具有不超過10、9、8、7、或6個(gè)氨基酸殘基(例如，不超過1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10個(gè)氨基酸殘基)的差異，并且(b)包括至少一個(gè)氨基酸取代，該取代在對(duì)應(yīng)于相對(duì)SEQ IDNO: 159的位置50、54、55、56、64、65、70、或85的一個(gè)氨基酸位置上，其中該突變CTLA-4多肽具有結(jié)合CD80或CD86或二者之一的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的能力，和/或具有阻抑或抑制一種免疫應(yīng)答的能力。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種分離或重組的多肽，該多肽包括一個(gè)多肽序列，該多肽包括(i)與SEQ ID NOSil至73所構(gòu)成的組中選出的一個(gè)多肽序列至少95%的序列一致性，以及(ii) 一個(gè)苯丙胺酸殘基，該苯丙胺酸殘基在對(duì)應(yīng)于由SEQ ID NOSil至73所構(gòu)成的組中選出的所述多肽序列的位置70的氨基酸位置上，其中該多肽具有結(jié)合CD80和/或CD86、或二者之一的或兩者的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的能力，和/或具有阻抑或抑制一種免疫應(yīng)答的能力。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種分離或重組的突變CTLA-4多肽，該突變CTLA-4多肽結(jié)合CD80和/或CD86、和/或二者之一的或兩者的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域，和/或可阻抑一種免疫應(yīng)答，其中所述多肽包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列(a)與在SEQ ID N0:159中所示的人類CTLA-4細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域多肽的多肽序列具有不超過10、9、8、7、或6個(gè)氨基酸殘基(例如，不超過1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10個(gè)氨基酸殘基)的差異，并且(b)包括至少一個(gè)氨基酸取代，其中所述至少一個(gè)氨基酸取代包括S70F，其中根據(jù)SEQ ID NO: 159對(duì)多個(gè)氨基酸殘基位置進(jìn)行編號(hào)。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種分離或重組的突變CTLA-4多肽，該突變CTLA-4多肽包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列(a)與在SEQ ID N0:159中所示的人類CTLA-4細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的多肽序列具有不超過11、10、9、8、7、或6個(gè)氨基酸殘基(例如，不超過1、2、3、4、5、
6、7、8、9、10、或11個(gè)氨基酸殘基)的差異，并且(b)包括至少一個(gè)氨基酸取代，該取代在對(duì)應(yīng)于相對(duì) SEQ ID NO: 159 的位置 24、30、32、50、54、55、56、64、65、70、或 85 的一個(gè)氨基酸殘基位置上，其中該突變CTLA-4多肽具有結(jié)合⑶80或⑶86或二者之一的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的能力，和/或具有阻抑或抑制一種免疫應(yīng)答的能力。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種分離或重組的多肽，該多肽包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列(a)與在SEQ ID N0:31所示的多肽序列具有不超過10、9、8、7、或6個(gè)氨基酸殘基(例如，不超過1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10個(gè)氨基酸殘基)的差異，并且(b)包括以下的至少一項(xiàng):在對(duì)應(yīng)于SEQ ID NO: 31的位置50的一個(gè)位置上的一個(gè)甲硫氨酸殘基、在對(duì)應(yīng)于SEQ ID NO:31的位置54的一個(gè)位置上的一個(gè)賴氨酸殘基、在對(duì)應(yīng)于SEQ ID NO:31的位置55的一個(gè)位置上的一個(gè)谷氨酸殘基、在對(duì)應(yīng)于SEQ ID NO:31的位置64的一個(gè)位置上的一個(gè)脯氨酸殘基、在對(duì)應(yīng)于SEQ ID NO: 31的位置65的一個(gè)位置上的一個(gè)絲氨酸殘基、在對(duì)應(yīng)于SEQ ID NO:31的位置70的一個(gè)位置上的一個(gè)苯丙氨酸殘基，其中根據(jù)SEQ ID N0:31對(duì)多個(gè)氨基酸殘基位置進(jìn)行編號(hào)，并且該多肽結(jié)合CD80和/或CD86、和/或二者之一的或兩者的一個(gè)ECDjP /或抑制一種免疫應(yīng)答。
在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種分離或重組的融合蛋白二聚體，該融合蛋白二聚體包括經(jīng)由至少一個(gè)二硫鍵連接的兩個(gè)單體融合蛋白，該二硫鍵在每個(gè)單體突變?nèi)诤系鞍字写嬖诘膬蓚€(gè)半胱氨酸殘基之間形成，其中每個(gè)單體融合蛋白包括(a) —種多肽，該多肽包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列具有與選自下組的至少一個(gè)多肽序列至少95%、96%、97%、98%、99%、或100%的一致性，該組的構(gòu)成為:SEQ ID NOS:1至73，以及(b) —種Ig Fe多肽，其中該融合蛋白具有結(jié)合CD80和/或CD86、和/或CD80-1g和/或CD86_Ig的能力，和/或具有抑制或阻抑一種免疫應(yīng)答的能力。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種分離或重組的融合蛋白二聚體，該融合蛋白二聚體包括兩個(gè)單體融合蛋白，每個(gè)這種單體融合蛋白包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列具有與選自下組的至少一個(gè)多肽序列至少95%、96%、97%、98%、99%、或100%的序列一致性，該組的構(gòu)成為:SEQ ID NOS:74至79、197至200、205至214、以及219至222，其中該多肽結(jié)合CD80和/或CD86、和/或它的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域，和/或阻抑一種免疫應(yīng)答，或它們的一個(gè)互補(bǔ)的多核苷酸序列。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種分離或重組的融合蛋白二聚體，該融合蛋白二聚體包括兩個(gè)單體融合蛋白，其中每個(gè)單體融合蛋白包括:(I) 一種多肽，該多肽包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列與選自下組的一個(gè)多肽序列具有不超過10、9、8、7、或6個(gè)氨基酸殘基(例如，不超過1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10個(gè)氨基酸殘基)的差異，該組的構(gòu)成為:SEQ IDNOS:1至73，并且其中在該多肽序列中在位置41、50、54、55、56、64、65、70或85上的氨基酸殘基是與在所述所選擇的多肽序列的對(duì)應(yīng)位置上的氨基酸殘基相同的，以及(2) —種IgFe多肽，其中該融合蛋白二聚體結(jié)合CD80和/或CD86，和/或抑制一種免疫應(yīng)答。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種分離或重組的融合蛋白二聚體，該融合蛋白二聚體包括兩個(gè)單體融合蛋白，其中每個(gè)單體融合蛋白包括:(I) 一種突變CTLA-4細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域多肽，該多肽包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列(i)與在SEQ ID勵(lì):159的人類(:1'1^-4細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的多肽序列具有不超過10、9、8、7或6個(gè)氨基酸殘基(如，不超過1、2、3、4、5、6、
7、8、9或10個(gè)氨基酸殘基)的差異，并且(ii)包括至少一個(gè)氨基酸取代，該取代是在對(duì)應(yīng)于相對(duì)SEQ ID NO: 159的位置50、54、55、56、64、65、70或85的氨基酸位置；以及(2) —種Ig Fe多肽，其中該融合蛋白二聚體結(jié)合CD80和/或CD86，和/或阻抑或抑制一種免疫應(yīng)答。一些此類融合蛋白二聚體在相對(duì)SEQ ID NO: 159的多個(gè)氨基酸位置上包括一個(gè)或多個(gè)取代，這個(gè)或這些取代選自下組，其構(gòu)成為:A50M、M54K、G55E、N56D、S64P、I65S、以及S70F ；以及⑵一種Ig Fe多肽，該Ig Fe多肽可任選地是IgG2Fc多肽，其中該突變CTLA-4-1g二聚體結(jié)合h⑶80或h⑶86，和/或阻抑或抑制一種免疫應(yīng)答。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種分離或重組的多肽，該多肽包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列具有與選自下組的一個(gè)多肽序列至少95%、96%、97%、98%、99%、或100%的序列一致性，該組的構(gòu)成為:SEQ ID NO: 26,SEQ ID NO: 36,SEQ ID NO: 38,SEQ ID NO: 50、以及 SEQID NO:56，其中該多肽(i)結(jié)合⑶80和/或⑶86、或二者之一的或兩者的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域，和/或(ii)阻抑一種免疫應(yīng)答。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種分離或重組的多肽，該多肽包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列具有與選自下組的一種多肽序列至少95%、96%、97%、98%、99%或100%的序列一致性，該組的構(gòu)成為:SEQ ID NOS: 74至79、197至200、205至214、以及219至222，其中該多肽(i)結(jié)合CD80和/或CD86、或二者之一的或兩者的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域，(ii)結(jié)合一種⑶80-1 g融合蛋白和/或⑶86-1 g融合蛋白，和/或(iii)阻抑一種免疫應(yīng)答。還提供了一種分離或重組的融合蛋白二聚體，該二聚體包括經(jīng)由至少一個(gè)二硫鍵連接的兩個(gè)單體融合蛋白，該二硫鍵在每個(gè)單體突變 融合蛋白中存在的兩個(gè)半胱氨酸殘基之間形成，其中每個(gè)單體融合蛋白包括(a) —種多肽，該多肽包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列具有與選自下組的至少一個(gè)多肽序列至少95%的一致性，該組的構(gòu)成為:SEQ ID NO: 79,SEQ ID NO: 197,SEQ ID NO: 198,SEQ ID NO: 199、以及 SEQ ID NO: 200，以及(b) 一種 Ig Fe多肽，其中該融合蛋白具有(i)結(jié)合CD80和/或CD86、和/或CD80和/或CD86的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的能力，( )結(jié)合⑶80-1g和/或⑶86-1g的能力，和/或(iii)具有抑制或阻抑一種免疫應(yīng)答的能力。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種分離或重組的核酸，該核酸包括一個(gè)多核苷酸序列，該多核苷酸序列編碼了包括一種多肽序列的一種多肽，該多肽序列具有與選自下組的至少一個(gè)多肽序列至少95%、96%、97%、98%、99%、或100%的序列一致性，該組的構(gòu)成為:SEQ ID勵(lì)5:1至79、197至200、205至214，以及219至222，其中該多肽結(jié)合0)80和/或CD86、和/或二者之一的或兩者的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域，和/或具有阻抑一種免疫應(yīng)答的能力，或它的一個(gè)互補(bǔ)的多核苷酸序列。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種分離或重組的核酸，該核酸包括一個(gè)多核苷酸序列，該多核苷酸序列編碼了包括一種多肽序列的一種融合蛋白，該多肽序列具有與選自下組的至少一個(gè)多肽序列至少95%、96%、97%、98%、99%、或100%的序列一致性，該組的構(gòu)成為:SEQ ID NOS: 74至79、197至200、205至214、以及219至222，其中該多肽結(jié)合CD80和/或CD86、和/或它的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域，和/或阻抑一種免疫應(yīng)答，或它的一個(gè)互補(bǔ)的多核苷酸序列。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種分離或重組的核酸，該核酸包括:(a) 一個(gè)多核苷酸序列，該多核苷酸序列具有與選自下組的至少一個(gè)多核苷酸序列至少95%、96%、97%、98%、99%、或100%的序列一致性，該組的構(gòu)成:SEQ ID NOS:80至158,201至204、223、以及224 ； (b) (a)的一個(gè)互補(bǔ)的多核苷酸序列；或(c) (a)或(b)的任何多核苷酸序列的一個(gè)片段，其中該核酸編碼了一種多肽，該多肽結(jié)合CD80和/或CD86、和/或二者之一的或兩者的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域，和/或具有阻抑或抑制一種免疫應(yīng)答的能力。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種分離或重組的核酸，該核酸包括一個(gè)多核苷酸序列，該多核苷酸序列編碼了包括一個(gè)多肽序列的一種多肽，(a)該多肽序列與選自下組的一個(gè)多肽序列具有不超過10、9、8、7、或6個(gè)氨基酸殘基(例如，不超過1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10個(gè)氨基酸殘基)的差異，該組的構(gòu)成為:SEQ ID NOS:1至73，并且(b)其中在該多肽序列中在位置41、50、54、55、56、64、65、70、或85位置上的氨基酸殘基是與在選自下組的所述多肽序列的對(duì)應(yīng)位置上的氨基酸殘基相同的，該組的構(gòu)成為=SEQ ID N0S:1至73，其中該多肽結(jié)合CD80和/或CD86、和/或二者之一者的或二者的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域，和/或抑制一種免疫應(yīng)答，或它的一個(gè)互補(bǔ)的多核苷酸序列。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種分離或重組的核酸，該核酸包括一個(gè)多核苷酸序列，該多核苷酸序列編碼了包括一個(gè)多肽序列的一種多肽，該多肽序列(a)與在SEQ IDNO: 159中所示的人類CTLA-4細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的多肽序列具有不超過10、9、8、7、或6個(gè)氨基酸殘基(例如，不超過1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10個(gè)氨基酸殘基)的差異，并且(b)包括至少一個(gè)氨基酸取代，該取代在對(duì)應(yīng)于相對(duì)SEQ ID N0:159的位置50、54、55、56、64、65、70、或85的一個(gè)氨基酸位 置上，其中所述多肽具有結(jié)合⑶80和/或⑶86、和/或二者之一的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的能力，和/或具有阻抑或抑制一種免疫應(yīng)答的能力，或它的一個(gè)互補(bǔ)的多核苷酸序列。
在另一個(gè)方面,本發(fā)明提供了一種分離或重組的核酸,該核酸包括一個(gè)多核苷酸序列，該多核苷酸序列編碼了包括一個(gè)多肽序列的一種多肽，該多肽序列具有(i)與選自下組的一個(gè)多肽序列至少95%、96%、97%、98%、99%、或100%的序列一致性，該組的構(gòu)成為:SEQ ID N0S:1至73，以及(ii) 一個(gè)苯丙氨酸殘基，該苯丙氨酸殘基在對(duì)應(yīng)于所述選自下組的多肽序列的位置70的一個(gè)氨基酸位置上，該組的構(gòu)成為:SEQ ID NO:1至73，其中該多肽結(jié)合hCD80和/或hCD86、或它的一個(gè)ECD，和/或抑制一種免疫應(yīng)答，其中該氨基酸取代可任選地包括S70F,或它的一個(gè)互補(bǔ)的多核苷酸序列。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種分離或重組的核酸，該核酸包括一個(gè)多核苷酸序列，該多核苷酸序列編碼了包括兩個(gè)多肽的一種重組多肽二聚體，其中每個(gè)這種多肽包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列具有與選自下組的一個(gè)序列至少95%、96%、97%、98%、99%、或100%的一致性，該組的構(gòu)成為:SEQ ID勵(lì)3:1至73，其中該二聚體結(jié)合110)80和/或110)86，和/或抑制一種免疫應(yīng)答，或其它的一根互補(bǔ)的多核苷酸序列。在另一個(gè) 方面，本發(fā)明提供了一種分離或重組的核酸，該核酸包括一個(gè)多核苷酸序列，該多核苷酸序列編碼了一種融合蛋白，該融合蛋白包括(a) —種多肽，該多肽包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列具有與選自下組的至少一個(gè)多肽序列至少95%、96%、97%、98%、99%或100%的一致性，該組的構(gòu)成為:SEQ ID NOS:1至73，以及(b) —種Ig多肽，其中該融合蛋白結(jié)合CD80和/或CD86，和/或具有阻抑一種免疫應(yīng)答的能力，或它的一個(gè)互補(bǔ)的多核苷酸序列。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種分離或重組的核酸，該核酸包括一個(gè)多核苷酸序列，該多核苷酸序列編碼了包括一個(gè)多肽序列的一種多肽，該多肽序列(a)與在SEQ IDN0:31中所示的多肽序列具有不超過10、9、8、7、或6個(gè)氨基酸殘基(例如，不超過1、2、3、4、
5、6、7、8、9、或10個(gè)氨基酸殘基)的差異，并且(b)包括以下的至少一項(xiàng):在對(duì)應(yīng)于SEQ IDNO: 31的位置50的一個(gè)位置上的一個(gè)甲硫氨酸殘基、在對(duì)應(yīng)于SEQ ID NO: 31的位置54的一個(gè)位置上的一個(gè)賴氨酸殘基、在對(duì)應(yīng)于SEQ ID NO:31的位置55的一個(gè)位置上的一個(gè)谷氨酸殘基、在對(duì)應(yīng)于SEQ ID NO:31的位置64的一個(gè)位置上的一個(gè)脯氨酸殘基、在對(duì)應(yīng)于SEQID NO:31的位置65的一個(gè)位置上的一個(gè)絲氨酸殘基、在對(duì)應(yīng)于SEQ ID N0:31的位置70的一個(gè)位置上的一個(gè)苯丙氨酸殘基，其中SEQ ID NO:31對(duì)多個(gè)氨基酸殘基位置進(jìn)行編號(hào)，并且該多肽結(jié)合CD80和/或CD86，和/或抑制一種免疫應(yīng)答，或它的一個(gè)互補(bǔ)的多核苷酸序列。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種表達(dá)載體，該表達(dá)載體包括:(i) 一個(gè)第一多核苷酸序列，該第一多核苷酸序列編碼了一種第一多肽，該第一多肽包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列具有與選自下組的至少一個(gè)多肽序列至少95%、96%、97%、98%、99%、或100%的一致性，該組的構(gòu)成為:SEQ ID NOS:1至73，其中所述第一多肽結(jié)合人類⑶86和/或人類⑶80、和/或二者之一的或兩者的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域，和/或阻抑一種免疫應(yīng)答，以及(ii) 一個(gè)第二多核苷酸序列，該第二多核苷酸序列編碼了一種第二多肽，該第二多肽包括一種免疫球蛋白(Ig)多肽的一個(gè)鉸鏈區(qū)、一個(gè)CH2結(jié)構(gòu)域、以及一個(gè)CH3結(jié)構(gòu)域，該Ig多肽可任選地是人類IgG2Fc多肽。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種分離或重組的宿主細(xì)胞，該宿主細(xì)胞用編碼了一種融合蛋白的一種核酸進(jìn)行轉(zhuǎn)染，該核酸包括:(i) 一個(gè)第一核苷酸序列，該第一核苷酸序列編碼了包括一種多肽序列的一種第一多肽，該多肽序列具有與選自下組的至少一個(gè)多肽序列至少95%、96%、97%、98%、99%、或100%的一致性，該組的構(gòu)成為:SEQ ID NOS:1至73，其中所述第一多肽具有結(jié)合人類CD86和/或人類CDSOJP /或二者之一的或兩者的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的能力，和/或具有阻抑一種免疫應(yīng)答的能力；以及(ii) 一個(gè)第二核苷酸序列，該第二核苷酸序列編碼了一種第二多肽，該第二多肽包括一種免疫球蛋白(Ig)多肽的一個(gè)鉸鏈區(qū)、一個(gè)CH2結(jié)構(gòu)域、以及一個(gè)CH3結(jié)構(gòu)域，該Ig多肽可任選地是人類IgG2Fc多肽，其中該宿主細(xì)胞可表達(dá)該融合蛋白。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了阻抑一種免疫應(yīng)答的方法，所述方法包括將一種B7-陽(yáng)性細(xì)胞與一個(gè)有效量的本發(fā)明的至少一種多肽、偶聯(lián)物、核酸、載體、或細(xì)胞進(jìn)行接觸以阻抑一種免疫應(yīng)答，其中一種免疫應(yīng)答由此受到阻抑。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了調(diào)整表達(dá)了⑶28和/或CTLA-4的多個(gè)T細(xì)胞與多個(gè)B7-陽(yáng)性細(xì)胞的相互作用的方法，該方法包括將B7-陽(yáng)性細(xì)胞與一個(gè)有效量的本發(fā)明的至少一種多肽、偶聯(lián)物、核酸、載體、或細(xì)胞繼續(xù)擰接觸以調(diào)整多個(gè)B7-陽(yáng)性細(xì)胞與多個(gè)⑶28-陽(yáng)性T細(xì)胞和/或多個(gè)CTLA-4-陽(yáng)性T細(xì)胞的相互作用，其中該多個(gè)B7-陽(yáng)性細(xì)胞與多個(gè)⑶28-陽(yáng)性T細(xì)胞和/或多個(gè)CTLA-4-陽(yáng)性T細(xì)胞的相互作用受到調(diào)整。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了抑制多個(gè)⑶28-陽(yáng)性T細(xì)胞和/或多個(gè)CTLA-4-陽(yáng)性T細(xì)胞與多個(gè)B7-陽(yáng)性細(xì)胞的相互作用的方法，該方法包括將多個(gè)B7-陽(yáng)性細(xì)胞與一個(gè)有效量的本發(fā)明的至少一種多肽、偶聯(lián)物、核酸、載體、或細(xì)胞進(jìn)行接觸，其中該多個(gè)CD28-陽(yáng)性T細(xì)胞和/或多個(gè)CTLA-4-陽(yáng)性T細(xì)胞與多個(gè)B7-陽(yáng)性細(xì)胞的相互作用受到抑制。

在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了在一位受試者體內(nèi)抑制多個(gè)CD28-陽(yáng)性T細(xì)胞與多個(gè)B7-陽(yáng)性細(xì)胞的相互作用的方法，該方法包括對(duì)一位受試者給予一個(gè)有效量的本發(fā)明的至少一種多肽、偶聯(lián)物、核酸、載體、或細(xì)胞，其中在該受試者體內(nèi)的多個(gè)內(nèi)源性CD28-陽(yáng)性T細(xì)胞與多個(gè)內(nèi)源性B7-陽(yáng)性細(xì)胞的相互作用受到阻抑。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了治療患有一種免疫系統(tǒng)疾病或紊亂的一位受試者的方法，該疾病或紊亂通過多個(gè)內(nèi)源性T細(xì)胞與表達(dá)CD80和/或CD86的多個(gè)內(nèi)源性細(xì)胞的相互作用調(diào)整的，所述方法包括對(duì)需要這種治療的一位受試者給予一個(gè)治療有效量的本發(fā)明的至少一種多肽、偶聯(lián)物、核酸、載體、或細(xì)胞，其中這種或這些在多個(gè)內(nèi)源性T細(xì)胞與表達(dá)所述CD80和/或所述CD86的多個(gè)內(nèi)源性細(xì)胞之間的相互作用受到抑制，由此治療在該受試者體內(nèi)的免疫系統(tǒng)疾病或紊亂。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了抑制一位受方受試者對(duì)于來(lái)自一個(gè)供方的一個(gè)組織或器官移植體的排斥的方法，該方法包括對(duì)需要該方法的受方受試者給予一個(gè)治療有效量的本發(fā)明的至少一種多肽、偶聯(lián)物、核酸、載體、或細(xì)胞，由此阻抑受方受試者對(duì)于該組織或器官移植體的排斥。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了制備一種融合蛋白的方法，該方法包括:(1)在一種培養(yǎng)基中培養(yǎng)用一種核酸轉(zhuǎn)化的一種宿主細(xì)胞，其中該核酸包括:(i) 一個(gè)第一核苷酸序列，該第一核苷酸序列編碼了一種多肽，該多肽具有與SEQ ID N0S:1至73中任何一個(gè)的一個(gè)多肽序列至少95%、96%、97%、98%、99%或100%的一致性，該多肽結(jié)合CD86和/或CD80、和/或⑶86或⑶80之一的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域，以及(ii) 一個(gè)第二核苷酸序列，該第二核苷酸序列編碼了一種Ig多肽，該Ig多肽包括一個(gè)鉸鏈區(qū)、CH2結(jié)構(gòu)域、以及CH3結(jié)構(gòu)域，由此表達(dá)了該核酸并且產(chǎn)生了一種融合蛋白；并且(2)回收該融合蛋白。還提供了生產(chǎn)一種多肽的方法，該方法包括將本發(fā)明的一種核酸引入到多個(gè)細(xì)胞的一個(gè)群體之中，其中該核酸被可操作地連接到有效生產(chǎn)由該核酸所編碼的多肽的一個(gè)調(diào)節(jié)序列上；在一種培養(yǎng)基中培養(yǎng)這些細(xì)胞以生產(chǎn)該多肽；并且將該多肽從這些細(xì)胞或培養(yǎng)基中分離。還提供了多種組合物，這些組合物包括本發(fā)明的一種分子(例如，突變CTLA-4分子)以及一種賦形劑、載體、或稀釋劑。還包括了多種藥物組合物，這些誒藥物組合物包括本發(fā)明的一種分子以及一種藥學(xué)上可接受的賦形劑、載體、或稀釋劑。本發(fā)明涉及下述各項(xiàng)。1.一種分離或重組的CTLA-4多肽，該多肽包括與在SEQ ID NO: 159中所示的人類CTLA-4細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的多肽序列具有達(dá)到15個(gè)氨基酸殘基差異的一個(gè)多肽序列，其中該分離或重組的CTLA-4多肽具有結(jié)合⑶80或⑶86或二者之一的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的能力，和/或具有阻抑或抑制一種免疫應(yīng)答的能力。2.根據(jù)項(xiàng)I所述的一種分離或重組的多肽，該多肽具有與SEQ ID NO: 36的多肽序列至少90%的序列一致性。3.根據(jù)項(xiàng)2所述的一種分離或重組的多肽，該多肽具有與SEQ ID NO: 36的多肽序列至少95%的序列一致性。4.根據(jù)項(xiàng)3所述的一種分離或重組的多肽，該多肽包括SEQ ID NO:36的多肽序列。5.根據(jù)項(xiàng)I所述的一種分離或重組的多肽，該多肽具有與SEQ ID N0:50的多肽序列至少90%的序列一致 性。6.根據(jù)項(xiàng)5所述的一種分離或重組的多肽，該多肽具有與SEQ ID NO: 50的多肽序列至少95%的序列一致性。7.根據(jù)項(xiàng)6所述的一種分離或重組的多肽，該多肽包括SEQ ID NO:50的多肽序列。8.如以上項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的多肽，其中⑶80是人類⑶80并且⑶86是人類⑶86。9.如以上項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的多肽，其中該多肽包括長(zhǎng)度為124個(gè)氨基酸殘基的一個(gè)多肽序列。10.如以上項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的多肽，該多肽包括一個(gè)氨基酸取代，該取代在選自下組的一個(gè)氨基酸位置上，該組的構(gòu)成為:對(duì)應(yīng)于相對(duì)SEQ ID N0:159的位置50、54、55、56、64、65、70、或85的多個(gè)氨基酸位置。11.如以上項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的多肽，該多肽包括兩個(gè)氨基酸取代，這些取代在選自下組的多個(gè)氨基酸位置上，該組的構(gòu)成為:對(duì)應(yīng)于相對(duì)SEQ ID NO: 159的位置50、54、55、56、64、65、70、或85的多個(gè)氨基酸位置。12.如以上項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的多肽，該多肽包括三個(gè)氨基酸取代，這些取代在選自下組的多個(gè)氨基酸位置上，該組的構(gòu)成為:對(duì)應(yīng)于相對(duì)SEQ ID NO: 159的位置50、54、55、56、64、65、70、或85的多個(gè)氨基酸位置。13.如以上項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的多肽，該多肽包括四個(gè)氨基酸取代，這些取代在選自下組的多個(gè)氨基酸位置上，該組的構(gòu)成為:對(duì)應(yīng)于相對(duì)SEQ ID NO: 159的位置50、54、55、56、64、65、70、或85的多個(gè)氨基酸位置。14.如項(xiàng)10至13中任一項(xiàng)所述的多肽，該多肽包括一個(gè)在相對(duì)SEQ ID NO: 159的位置70上的氨基酸取代。15.根據(jù)如項(xiàng)14所述的多肽，其中該在相對(duì)SEQ ID NO: 159的位置70上的氨基酸取代是S70F。16.如項(xiàng)10至15中任一項(xiàng)所述的多肽，該多肽進(jìn)一步包括一個(gè)在相對(duì)SEQ IDNO: 159的位置104上的氨基酸取代。17.如項(xiàng)16所述的多肽，其中該在相對(duì)SEQ ID NO: 159的位置104上的氨基酸取代是L104E。 18.如項(xiàng)10至17中任一項(xiàng)所述的多肽，該多肽進(jìn)一步包括一個(gè)在相對(duì)SEQ IDNO: 159的位置30上的氨基酸取代。19.如項(xiàng)18所述的多肽，其中該在相對(duì)SEQ ID NO: 159的位置30上的取代是T30N/D/A。20.如項(xiàng)19所述的多肽，其中該在相對(duì)SEQ ID NO: 159的位置30上的取代是T30N。21.如項(xiàng)10至20中任一項(xiàng)所述的多肽，該多肽包括一個(gè)在相對(duì)SEQ ID NO: 159的位置64上的氨基酸取代。22.如項(xiàng)21所述的多肽，其中該在相對(duì)SEQ ID NO: 159的位置64上的氨基酸取代是 S64P。23.如項(xiàng)10至22中任一項(xiàng)所述的多肽，該多肽包括一個(gè)在相對(duì)SEQ ID NO: 159的位置50上的氨基酸取代。24.如項(xiàng)23所述的多肽，其中該在相對(duì)SEQ ID NO: 159的位置50上的氨基酸取代是A50M。25.如項(xiàng)10至24中任一項(xiàng)所述的多肽，該多肽包括一個(gè)在相對(duì)SEQ ID NO: 159的位置54上的氨基酸取代。26.根據(jù)如項(xiàng)25所述的多肽，其中該在相對(duì)SEQ ID NO: 159的位置54上的氨基酸取代是M54K/V。27.如項(xiàng)26所述的多肽，其中該在相對(duì)SEQ ID NO: 159的位置54上的氨基酸取代是 M54K。28.如項(xiàng)10至17中任一項(xiàng)所述的多肽，該多肽包括一個(gè)在相對(duì)SEQ ID NO: 159的位置65上的氨基酸取代。29.如項(xiàng)28所述的多肽，其中該在相對(duì)SEQ ID NO: 159的位置65上的氨基酸取代是 I65S。30.如項(xiàng)10至17中任一項(xiàng)所述的多肽，該多肽包括一個(gè)在相對(duì)SEQ ID N0:159的位置56上的氨基酸取代。31.如項(xiàng)30所述的多肽，其中該在相對(duì)SEQ ID NO: 159的位置56上的氨基酸取代是 N56D。32.如項(xiàng)10至17中任一項(xiàng)所述的多肽，該多肽包括一個(gè)在相對(duì)SEQ ID NO: 159的位置55上的氨基酸取代。
33.如項(xiàng)32所述的多肽，其中該在相對(duì)SEQ ID NO: 159的位置55上的氨基酸取代是 G55E。34.如項(xiàng)10至17中任一項(xiàng)所述的多肽，該多肽包括一個(gè)在相對(duì)SEQ ID NO: 159的位置85上的氨基酸取代。35.如項(xiàng)34所述的多肽，其中該在相對(duì)SEQ ID NO: 159的位置55上的氨基酸取代是 M85A。36.如項(xiàng)10至17中任一項(xiàng)所述的多肽，該多肽進(jìn)一步包括一個(gè)在相對(duì)SEQ IDNO: 159的位置24上的氨基酸取代。37.如項(xiàng)36所述的多肽，其中該在相對(duì)SEQ ID NO: 159的位置24上的氨基酸取代是A24E/S。38.如項(xiàng)37所述的多肽，其中該在相對(duì)SEQ ID NO: 159的位置24上的氨基酸取代是A24E。39.如以上項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的多肽，其中該多肽具有對(duì)于CD86或它的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的一種結(jié)合親和力，該結(jié)合親和力是大約等于或大于一種單體人類CTLA-4細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域?qū)τ贑D86或CD86細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的結(jié)合親和力。40.如以上項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的多肽，其中該多肽具有對(duì)于⑶80或它的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的一種結(jié)合親和力，該結(jié)合親和力大于一種單體人類CTLA-4細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域?qū)τ冖?0或⑶80細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的結(jié)合親和力。41.如以上項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的多肽，其中該多肽具有阻抑一種免疫應(yīng)答的能力。42.如以上項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的多肽，其中該多肽具有抑制T細(xì)胞活化或T細(xì)胞增殖的能力。43.一種分離或重組的多肽多聚體，該多肽多聚體包括至少兩個(gè)如以上項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的多肽。44.一種分離或重組的融合蛋白，該融合蛋白包括(a)如項(xiàng)I至42中任一項(xiàng)所述的一種多肽，以及(b) —種第二多肽，其中該第二多肽是一種IgFc多肽，并且其中該融合蛋白具有結(jié)合CD80和/或CD86、或二者之一的或兩者的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的能力，和/或調(diào)整或調(diào)節(jié)一種免疫應(yīng)答的能力。45.一種分離或重組的二聚體融合蛋白，該二聚體融合蛋白包括兩個(gè)根據(jù)項(xiàng)44所述的單體融合蛋白。46.一種分離或重組的核酸，該核酸包括一個(gè)核苷酸序列，該核苷酸序列編碼了如項(xiàng)I至42中任一項(xiàng)所述的一種多肽、項(xiàng)43所述的一種多聚體、項(xiàng)44所述的一種融合蛋白、或項(xiàng)45所述的一種二聚體融合蛋白。47.一種載體，該載體包括如項(xiàng)46所述的一種核酸。48.一種分離或重組的宿主細(xì)胞，該宿主細(xì)胞包括:(a)如項(xiàng)I至42中任一項(xiàng)所述的一種多肽；(b)如項(xiàng)43所述的一種多聚體；(c)如項(xiàng)44所述的一種融合蛋白；(d)如項(xiàng)45所述的一種二聚體融合蛋白；(e)如項(xiàng)46所述的一種核酸； 和/或。
(f)如項(xiàng)47所述的一種載體。49.一種藥物組合物，該藥物組合物包括一種藥學(xué)上可接受的賦形劑或藥學(xué)上可接受的載體、以及以下的一項(xiàng)或多項(xiàng):(a)如項(xiàng)I至42中任一項(xiàng)所述的一種多肽；(b)如項(xiàng)43所述的一種多聚體；(c)如項(xiàng)44所述的一種融合蛋白；(d)如項(xiàng)45所述的一種二聚體融合蛋白；(e)如項(xiàng)46所述的一種核酸；(f)如項(xiàng)47所述的一種載體；和/或。(g)如項(xiàng)48所述的一種宿主細(xì)胞。50.用于阻抑一種免疫應(yīng)答的一種方法，所述方法包括將一種B7-陽(yáng)性細(xì)胞與一個(gè)有效量的以下的至少一項(xiàng)進(jìn)行接觸:(a)如項(xiàng)I至42中任一項(xiàng)所述的一種多肽；(b)如項(xiàng)43所述的一種多聚體；(c)如項(xiàng)44所述的一種融合蛋白；(d)如項(xiàng)45所述的 一種二聚體融合蛋白；(e)如項(xiàng)46所述的一種核酸；(f)如項(xiàng)47所述的一種載體；和/或。(g)如項(xiàng)48所述的一種宿主細(xì)胞以阻抑一種免疫應(yīng)答，其中一種免疫應(yīng)答由此受到阻抑。51.如項(xiàng)I至42中任一項(xiàng)所述的一種多肽、項(xiàng)43所述的一種多聚體、項(xiàng)44所述的一種融合蛋白、項(xiàng)45所述的一種二聚體融合蛋白、項(xiàng)46所述的一種核酸、項(xiàng)47所述的一種載體、和/或項(xiàng)48所述的一種宿主細(xì)胞,用于阻抑一種免疫應(yīng)答。52.如項(xiàng)I至42中任一項(xiàng)所述的一種多肽、項(xiàng)43所述的一種多聚體、項(xiàng)44所述的一種融合蛋白、項(xiàng)45所述的一種二聚體融合蛋白、項(xiàng)46所述的一種核酸、項(xiàng)47所述的一種載體、和/或項(xiàng)48所述的一種宿主細(xì)胞，在制造用于阻抑一種免疫應(yīng)答的藥物中的用途。53.一種分離或重組的多肽，該多肽包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列具有與選自下組的至少一種多肽序列至少95%的序列一致性，該組的構(gòu)成為:SEQ ID NOS:1至73，其中該多肽結(jié)合CD80或CD86或二者之一的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域，和/或具有阻抑或抑制一種免疫應(yīng)答的能力。54.如項(xiàng)53所述的多肽，其中⑶80是人類⑶80并且⑶86是人類⑶86。55.如項(xiàng)53至54中任一項(xiàng)所述的多肽，其中該多肽具有阻抑或抑制一種免疫應(yīng)答的能力。56.如項(xiàng)53至55中任一項(xiàng)所述的多肽，其中該多肽具有抑制T細(xì)胞活化的能力。57.如項(xiàng)53至55中任一項(xiàng)所述的多肽，其中該多肽具有抑制T細(xì)胞增殖的能力。58.如項(xiàng)53至57中任一項(xiàng)所述的多肽，其中該多肽與CTLA-4相比具有阻抑或抑制一種免疫應(yīng)答的更大的能力。59.如項(xiàng)53所述的多肽，其中該多肽具有抑制T細(xì)胞活化或T細(xì)胞增殖的一種能力，該能力大于人類CTLA-4抑制T細(xì)胞活化或T細(xì)胞增殖的能力。
60.如項(xiàng)53所述的多肽，其中該多肽具有抑制T細(xì)胞活化或T細(xì)胞增殖的能力，該能力大于人類CTLA-4的一種細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域?qū)細(xì)胞活化或T細(xì)胞增殖進(jìn)行抑制的能力。61.如項(xiàng)53至57中任一項(xiàng)所述的多肽，其中該多肽具有抑制一種免疫應(yīng)答的一種能力，該能力大于包括了在SEQ ID NO: 168中所示的多肽序列的一種LEA29Y多肽抑制一種免疫應(yīng)答的能力。62.如項(xiàng)53至61中任一項(xiàng)所述的多肽,其中該多肽包括一個(gè)多肽序列,該多肽序列具有與選自下組的至少一種多肽序列至少96%、97%、98%、或99%的序列一致性，該組的構(gòu)成為:SEQ ID N0S:1 至 73。63.如項(xiàng)53至62中任一項(xiàng)所述的多肽，其中該多肽包括選自下組的一個(gè)多肽序列，該組的構(gòu)成為:SE Q ID N0S:1至73。64.一種分離或重組的多肽，該多肽包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列具有與選自下組的至少一種多肽序列至少95%的序列一致性，該組的構(gòu)成為:SEQ ID NOS:1至73，其中該多肽結(jié)合一個(gè)單體人類CD80或單體人類CD86或二者之一的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域。65.如項(xiàng)64所述的多肽，其中該多肽具有對(duì)于單體人類CD86的一種結(jié)合親和力，該結(jié)合親和力是大約等于或大于單體人類CTLA-4對(duì)于單體人類CD86的結(jié)合親和力。66.如項(xiàng)64所述的多肽，其中該多肽具有對(duì)于單體人類CD86的一種結(jié)合親和力，該結(jié)合親和力是大約等于或大于單體人類CTLA-4對(duì)于單體人類CD86的結(jié)合親和力。67.如項(xiàng)65所述的多肽，其中該多肽具有對(duì)于單體人類CD86的一種結(jié)合親和力，該結(jié)合親和力是大約等于或大于單體人類CTLA-4對(duì)于單體人類CD86的結(jié)合親和力。68.如項(xiàng)64至67中任一項(xiàng)所述的多肽，其中該多肽與單體人類CTLA-4相比具有阻抑一種免疫應(yīng)答的更大的能力、抑制T細(xì)胞活化的更大的能力、和/或抑制T細(xì)胞增殖的更大的能力。69.一種分離或重組的多肽，該多肽包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列具有與選自下組的至少一種多肽序列至少95%的序列一致性，該組的構(gòu)成為:SEQ ID NOS:1至73，其中該多肽具有對(duì)于一個(gè)人類CD86細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域或人類CD80細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的一種結(jié)合親和力，該結(jié)合親和力對(duì)應(yīng)地是大約等于或大于一種人類CTLA-4細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域?qū)τ谠撊祟怌D86細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域或人類CD80細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的結(jié)合親和力，并且其中該多肽可任選地具有阻抑一種免疫應(yīng)答的能力。70.如項(xiàng)69所述的多肽，其中該多肽具有對(duì)于該人類CD86細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的一種結(jié)合親和力，該結(jié)合親和力大于該人類CTLA-4細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域?qū)τ谠撊祟怌D86細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的結(jié)合親和力。71.如項(xiàng)70所述的多肽，其中該多肽具有對(duì)于該人類CD80細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的一種結(jié)合親和力，該結(jié)合親和力大于該人類CTLA-4細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域?qū)τ谠撊祟怌D80細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的結(jié)合親和力。72.如項(xiàng)69至71中任一項(xiàng)所述的多肽，其中該多肽與該人類CTLA-4細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域相比具有阻抑一種免疫應(yīng)答的更大的能力、抑制T細(xì)胞活化的更大的能力、和/或抑制T細(xì)胞增殖的更大的能力。73.如項(xiàng)53所述的多肽，其中該突變多肽包括長(zhǎng)度為124個(gè)氨基酸殘基的一個(gè)多肽序列。
74.一種分離或重組的突變CTLA-4多肽，該多肽包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列(a)與在SEQ ID NO: 159中所示的人類CTLA-4細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的多肽序列具有不超過11個(gè)、不超過10個(gè)、不超過9個(gè)、不超過8個(gè)、不超過7個(gè)、或不超過6個(gè)氨基酸殘基的
差異，并且(b)包括至少一個(gè)氨基酸取代，該取代是在對(duì)應(yīng)于相對(duì)SEQ ID NO: 159的位置24、30、32、50、54、55、56、64、65、70、或85的一個(gè)氨基酸殘基位置上，其中該突變CTLA-4多肽具有結(jié)合⑶80或⑶86或二者之一的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的能力，和/或具有阻抑或抑制一種免疫應(yīng)答的能力。75.如項(xiàng)74所述的多肽，其中⑶80是人類⑶80并且⑶86是人類⑶86。76.如項(xiàng)74所述的多肽，其中該突變多肽包括長(zhǎng)度為124個(gè)氨基酸殘基的一個(gè)多肽序列。77.如項(xiàng)74所述的多肽，該多肽包括兩個(gè)氨基酸取代，這些取代是在選自下組的多個(gè)氨基酸位置上，該組的構(gòu)成為:對(duì)應(yīng)于相對(duì)SEQ ID N0:159的位置24、30、32、50、54、55、56、64、65、70、85、或104的多個(gè)氨基酸位置。78.如項(xiàng)74所述的多肽，該多肽包括三個(gè)氨基酸取代，這些取代是在選自下組的多個(gè)氨基酸位置上，該組的構(gòu)成為:對(duì)應(yīng)于相對(duì)SEQ ID N0:159的位置24、30、32、50、54、55、56、64、65、70、85、或104的多個(gè)氨基酸位置。79.如項(xiàng)74所述的多肽，該多肽包括四個(gè)氨基酸取代，這些取代是在選自下組的多個(gè)氨基酸位置上，該 組的構(gòu)成為:對(duì)應(yīng)于相對(duì)SEQ ID N0:159的位置24、30、32、50、54、55、56、64、65、70、85、或104的多個(gè)氨基酸位置。80.如項(xiàng)74所述的多肽，該多肽包括一個(gè)在相對(duì)SEQ ID NO: 159的位置70上的氨
基酸取代。81.如項(xiàng)80所述的多肽，其中該在相對(duì)SEQ ID NO: 159的位置70上的氨基酸取代是 S70F。82.如項(xiàng)74至81中任一項(xiàng)所述的多肽，該多肽進(jìn)一步包括一個(gè)在相對(duì)SEQ IDNO: 159的位置104上的氨基酸取代。83.如項(xiàng)82所述的多肽，其中該在相對(duì)SEQ ID NO: 159的位置104上的氨基酸取代是L104E。84.如項(xiàng)74至83中任一項(xiàng)所述的多肽，該多肽進(jìn)一步包括一個(gè)在相對(duì)SEQ IDNO: 159的位置30上的氨基酸取代。85.如項(xiàng)84所述的多肽，其中該在相對(duì)SEQ ID NO: 159的位置30上的取代是T30N/D/A。86.如項(xiàng)85所述的多肽，其中該在相對(duì)SEQ ID NO: 159的位置30上的取代是T30N。87.如項(xiàng)74至86中任一項(xiàng)所述的多肽，該多肽包括一個(gè)在相對(duì)SEQ ID NO: 159的位置64上的氨基酸取代。88.如項(xiàng)87所述的多肽，其中該在相對(duì)SEQ ID NO: 159的位置64上的氨基酸取代是 S64P。89.如項(xiàng)74至88中任一項(xiàng)所述的多肽，該多肽包括一個(gè)在相對(duì)SEQ ID NO: 159的位置50上的氨基酸取代。90.如項(xiàng)89所述的多肽，其中該在相對(duì)SEQ ID NO: 159的位置50上的氨基酸取代是A50M。91.如項(xiàng)74至83中任一項(xiàng)所述的多肽，該多肽包括一個(gè)在相對(duì)SEQ ID NO: 159的位置54上的氨基酸取代。92.如項(xiàng)91所述的多肽，其中該在相對(duì)SEQ ID NO: 159的位置54上的氨基酸取代是 M54K/V。93.如項(xiàng)92所述的多肽，其中該在相對(duì)SEQ ID NO: 159的位置54上的氨基酸取代是 M54K。94.如項(xiàng)74至83中任一項(xiàng)所述的多肽，該多肽包括一個(gè)在相對(duì)SEQ ID NO: 159的位置65上的氨基酸取代。95.如項(xiàng)94所述的多肽，其中該在相對(duì)SEQ ID NO: 159的位置65上的氨基酸取代是 I65S。
96.如項(xiàng)74至83中任一項(xiàng)所述的多肽，該多肽包括一個(gè)在相對(duì)SEQ ID NO: 159的位置56上的氨基酸取代。97.如項(xiàng)96所述的多肽，其中該在相對(duì)SEQ ID NO: 159的位置56上的氨基酸取代是 N56D。98.如項(xiàng)74至83中任一項(xiàng)所述的多肽，該多肽包括一個(gè)在相對(duì)SEQ ID NO: 159的位置55上的氨基酸取代。99.如項(xiàng)98所述的多肽，其中該在相對(duì)SEQ ID NO: 159的位置55上的氨基酸取代是 G55E。100.如項(xiàng)74至83中任一項(xiàng)所述的多肽，該多肽包括一個(gè)在相對(duì)SEQ ID NO: 159的位置85上的氨基酸取代。101.如項(xiàng)100所述的多肽，其中該在相對(duì)SEQ ID NO: 159的位置55上的氨基酸取代是M85A。102.如項(xiàng)74至83中任一項(xiàng)所述的多肽，該多肽進(jìn)一步包括一個(gè)在相對(duì)SEQ IDNO: 159的位置24上的氨基酸取代。103.如項(xiàng)102所述的多肽，其中該在相對(duì)SEQ ID NO: 159的位置24上的氨基酸取代是 A24E/S。104.如項(xiàng)103所述的多肽，其中該在相對(duì)SEQ ID NO: 159的位置24上的氨基酸取代是A24E。105.如項(xiàng)74至104中任一項(xiàng)所述的多肽，其中該多肽具有對(duì)于⑶86或它的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的一種結(jié)合親和力，該結(jié)合親和力是大約等于或大于一種單體人類CTLA-4細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域?qū)τ贑D86或CD86細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的結(jié)合親和力。106.如項(xiàng)74至105中任一項(xiàng)所述的多肽，其中該多肽具有對(duì)于⑶80或它的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的一種結(jié)合親和力，該結(jié)合親和力大于一種單體人類CTLA-4細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域?qū)τ冖?0或⑶80細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的結(jié)合親和力。107.如項(xiàng)74至106中任一項(xiàng)所述的多肽，其中該多肽具有阻抑一種免疫應(yīng)答的能力。
108.如項(xiàng)74至107中任一項(xiàng)所述的多肽，其中該多肽具有抑制T細(xì)胞活化或T細(xì)胞增殖的能力。109.一種分離或重組的多肽，該多肽包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列包括:(i)與由SEQ ID N0S:1至73所構(gòu)成的組中選出的一個(gè)多肽序列至少95%的序列一致性，以及(ii)一個(gè)苯丙胺酸殘基，該苯丙胺酸殘基在對(duì)應(yīng)于由SEQ ID N0S:1至73所構(gòu)成的組中選出的所述多肽序列的位置70的氨基酸位置上，其中該多肽具有結(jié)合⑶80和/或⑶86、或二者之一的或兩者的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的能力，和/或具有阻抑或抑制一種免疫應(yīng)答的能力。110.如項(xiàng)109所述的多肽，其中該多肽包括以下的一項(xiàng)或多項(xiàng):在對(duì)應(yīng)于位置24的一個(gè)氨基酸位置上的一個(gè)谷氨酸殘基；在對(duì)應(yīng)于對(duì)應(yīng)位置30的一個(gè)氨基酸位置上的一個(gè)天冬酰胺殘基；在對(duì)應(yīng)于位置32的一個(gè)氨基酸位置上的一個(gè)異亮氨酸殘基；在對(duì)應(yīng)于位置50的一個(gè)氨基酸位置上的一個(gè)甲硫氨酸殘基；在對(duì)應(yīng)于位置54的一個(gè)氨基酸位置上的一個(gè)賴氨酸殘基；在對(duì)應(yīng)于位置55的一個(gè)氨基酸位置上的一個(gè)谷氨酸殘基；

在對(duì)應(yīng)于位置56的一個(gè)氨基酸位置上的一個(gè)天冬氨酸殘基；在對(duì)應(yīng)于位置64的一個(gè)氨基酸位置上的一個(gè)脯氨酸殘基；在對(duì)應(yīng)于位置65的一個(gè)氨基酸位置上的一個(gè)絲氨酸殘基；以及在對(duì)應(yīng)于位置104的一個(gè)氨基酸位置上的一個(gè)谷氨酸殘基；111.一種分離或重組的突變CTLA-4多肽，該多肽結(jié)合⑶80和/或⑶86、和/或二者之一的或兩者的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域，和/或可阻抑一種免疫應(yīng)答，所述多肽包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列:(a)與在SEQ ID NO: 159中所示的人類CTLA-4細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域多肽的多肽序列具有不超過6個(gè)氨基酸殘基的差異，并且(b)包括至少一個(gè)氨基酸取代，其中所述至少一個(gè)氨基酸取代包括S70F，其中根據(jù)SEQ ID NO: 159對(duì)多個(gè)氨基酸殘基位置進(jìn)行編號(hào)。112.如項(xiàng)111所述的多肽，該多肽進(jìn)一步包括至少一個(gè)氨基酸取代，該氨基酸取代選自下組，其構(gòu)成為:A24E、T30N、V321、D41G、A50M、M54K、G55E、N56D、S64P、I65S、M85A、L104E、以及 I106F。113.一種分離或重組的多肽，該多肽包括選自下組的一個(gè)多肽序列，該組的構(gòu)成為:SEQ ID NOS:1至79，或任何所述多肽序列的一個(gè)片段，其中所述片段結(jié)合⑶80和/或CD86、和/或二者之一的或兩者的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域，和/或具有阻抑或抑制一種免疫應(yīng)答的能力。114.如項(xiàng)113所述的多肽，其中該片段結(jié)合人類CD80以及人類CD86和/或它們對(duì)應(yīng)的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域。115.如項(xiàng)53至114中任一項(xiàng)所述的多肽，其中該多肽是一種可溶性多肽。116.一種分離或重組的蛋白，該蛋白包括:(a)如項(xiàng)53至115中任一項(xiàng)所述的一種多肽，以及(b)協(xié)助該多肽的分泌的一種肽。
117.如項(xiàng)116所述的蛋白，其中該肽是一種信號(hào)肽。118.如項(xiàng)117所述的蛋白，其中該信號(hào)肽包括一種氨基酸序列，該氨基酸序列具有與SEQ ID NO: 182或SEQ ID NO:216的氨基酸序列至少95%的序列一致性。119.如項(xiàng)118所述的蛋白，其中該信號(hào)肽包括SEQ ID N0:182或SEQ ID N0:216
的氨基酸序列。120.一種分離或重組的蛋白，該蛋白包括如項(xiàng)53至115中任一項(xiàng)所述的一種多肽，以及一個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域。121.如項(xiàng)120所述的蛋白，其中該跨膜結(jié)構(gòu)域包括一個(gè)氨基酸序列，該氨基酸序列與包括SEQ ID NO: 160的氨基酸殘基162至182的一個(gè)氨基酸序列具有至少95%的一致性。122.如項(xiàng)121所述的蛋白，其中該跨膜結(jié)構(gòu)域包括SEQ ID NO: 160的氨基酸殘基162 至 182。123.如項(xiàng)120所述的蛋白，該蛋白進(jìn)一步包括一個(gè)胞質(zhì)域。124.如項(xiàng)122所述的蛋白，其中該胞質(zhì)域包括一個(gè)氨基酸序列，該氨基酸序列與包括SEQ ID NO: 160的氨基酸殘基183至223的一個(gè)氨基酸序列具有至少95%的一致性。125.如項(xiàng)124所述的蛋白，其中該胞質(zhì)域包括一個(gè)氨基酸序列，該氨基酸序列包括SEQ ID NO: 160的氨基酸殘基183至223。126.如項(xiàng)120至125中任一項(xiàng)所述的蛋白，該蛋白進(jìn)一步包括一種信號(hào)肽。127.如項(xiàng)53至115中任一項(xiàng)所述的多肽或如項(xiàng)116至126中任一項(xiàng)所述的蛋白，其中該多肽的氨基酸殘基中的一個(gè)或多個(gè)被糖基化。128.如項(xiàng)53至115或127中任一項(xiàng)所述的多肽或如項(xiàng)116至127中任一項(xiàng)所述
的蛋白，其中該多肽的氨基酸殘基中的一個(gè)或多個(gè)被聚乙二醇化。129.一種分離或重組的多肽多聚體，該多肽多聚體包括至少兩個(gè)如項(xiàng)53至115中任一項(xiàng)所述的多肽或至少兩個(gè)項(xiàng)116至128中任一項(xiàng)所述的蛋白。130.如項(xiàng)129所述的多聚體，其中該至少兩個(gè)多肽中的所有都是相同的。131.如項(xiàng)129所述的多聚體，其中該多聚體是可阻抑或抑制一種免疫應(yīng)答的。132.如項(xiàng)129所述的多聚體，其中該多聚體是可抑制T細(xì)胞活化或T細(xì)胞增殖的。133.如項(xiàng)129所述的多聚體，其中該多聚體包括四個(gè)多肽。134.一種分離或重組的多肽二聚體，該二聚體包括兩個(gè)如項(xiàng)53至115中任一項(xiàng)所述的多肽。135.如項(xiàng)134所述的二聚體，其中該二聚體是一種同型二聚體。136.如項(xiàng) 134所述的二聚體，其中該二聚體是一種異型二聚體。137.如項(xiàng)134所述的二聚體，其中該二聚體是可阻抑或抑制一種免疫應(yīng)答的。138.如項(xiàng)134所述的二聚體，其中該二聚體是可抑制T細(xì)胞活化或T細(xì)胞增殖的。139.一種分離或重組的多肽二聚體，該多肽二聚體包括兩個(gè)如項(xiàng)53至115中任一項(xiàng)所述的多肽，其中該二聚體具有對(duì)于人類CD86或它的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的一種結(jié)合親合力，該結(jié)合親合力對(duì)應(yīng)地是大約等于或大于包括兩個(gè)人類CTLA-4細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的一個(gè)二聚體對(duì)于人類CD86或它的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的結(jié)合親合力。140.一種分離或重組的多肽二聚體，該多肽二聚體包括兩個(gè)如項(xiàng)53至115中任一項(xiàng)所述的多肽，其中該二聚體具有對(duì)于人類CD80或它的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的一種結(jié)合親合力，該結(jié)合親合力對(duì)應(yīng)地是大約等于或大于包括兩個(gè)人類CTLA-4細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的一個(gè)二聚體對(duì)于人類CD80或它的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的結(jié)合親合力。141.如項(xiàng)139所述的二聚體，其中該二聚體具有對(duì)于人類⑶80或它的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的一種結(jié)合親合力，該結(jié)合親合力對(duì)應(yīng)地是大約等于或大于包括兩個(gè)人類CTLA-4細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的一個(gè)二聚體對(duì)于人類CD80或它的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的結(jié)合親合力。142.如項(xiàng)140所述的二聚體，其中該二聚體具有對(duì)于人類⑶86或它的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的一種結(jié)合親合力，該結(jié)合親合力對(duì)應(yīng)地是大于包括兩個(gè)LEA29Y多肽的一個(gè)二聚體對(duì)于人類CD86或它的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的結(jié)合親合力，其中每個(gè)LEA29Y多肽包括在SEQ ID NO: 168中所示的多肽序列。143.如項(xiàng)140所述的二聚體，其中該二聚體以一個(gè)速率從結(jié)合的人類⑶86或它的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域中解離，該速率對(duì)應(yīng)地是小于包括兩個(gè)人類CTLA-4細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的一個(gè)二聚體從結(jié)合的人類CD86或它的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域中解離的速率。144.如項(xiàng)140所述的二聚體，其中該二聚體以一個(gè)速率從結(jié)合的人類⑶86或它的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域中解離，該速率對(duì)應(yīng)地是小于包括兩個(gè)LEA29Y多肽的一個(gè)二聚體從結(jié)合的人類CD86或它的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域中解離的速率，其中每個(gè)LEA29Y多肽包括在SEQID NO: 168中所示的多肽序列。145.如項(xiàng)140所述的二聚體，其中該二聚體以一個(gè)速率與人類⑶86或它的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域相結(jié)合，該速率對(duì)應(yīng)地是大于包括兩個(gè)人類CTLA-4細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的一個(gè)二聚體與人類CD86或它的一個(gè)細(xì)胞 外結(jié)構(gòu)域相結(jié)合的速率。146.如項(xiàng)140所述的二聚體，其中該二聚體以一個(gè)速率與人類⑶86或它的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域相結(jié)合，該速率對(duì)應(yīng)地是大于包括兩個(gè)LEA29Y多肽的一個(gè)二聚體與人類CD86或它的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域相結(jié)合的速率，其中每個(gè)LEA29Y多肽包括在SEQ ID N0:168中所示的多肽序列。147.一種分離或重組的多肽二聚體，該多肽二聚體包括兩個(gè)如項(xiàng)53至115中任一項(xiàng)所述的多肽，其中包括兩個(gè)人類CTLA-4細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域或兩個(gè)LEA29Y多肽的一個(gè)二聚體相比該二聚體具有阻抑一種免疫應(yīng)答的更大的能力。148.如項(xiàng)147所述的二聚體，其中該二聚體與包括兩個(gè)人類CTLA-4細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的一個(gè)二聚體相比具有抑制T細(xì)胞活化或T細(xì)胞增殖的更大的能力。149.一種分離或重組的多肽二聚體，該二聚體包括兩個(gè)如項(xiàng)53至115中任一項(xiàng)所述的多肽，其中該二聚體具有一個(gè)CD86平衡解離常數(shù)(KD)，該CD86平衡解離常數(shù)小于包括了兩個(gè)人類CTLA-4細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域或兩個(gè)LEA29Y多肽的一種二聚體的CD86平衡解離常數(shù)(Kd)0150.一種分離或合成的偶聯(lián)物，該偶聯(lián)物包括:(a)如項(xiàng)I至115中任一項(xiàng)所述的一種多肽，以及(b)共價(jià)地附連至該多肽上的一個(gè)非多肽部分。151.如項(xiàng)150所述的偶聯(lián)物，其中該偶聯(lián)物結(jié)合了⑶80或⑶86或二者之一的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域。152.如項(xiàng)151所述的偶聯(lián)物，其中⑶80是人類⑶80并且⑶86是人類⑶86。
153.如項(xiàng)150所述的偶聯(lián)物，該偶聯(lián)物包括至少兩個(gè)非多肽部分。154.如項(xiàng)153所述的偶聯(lián)物，其中該非多肽部分是一個(gè)糖分子。155.如項(xiàng)154所述的偶聯(lián)物，其中該糖分子是附連于一個(gè)N-糖基化位點(diǎn)上的。156.如項(xiàng)150所述的偶聯(lián)物，其中該非多肽部分是一種聚合物。157.如項(xiàng)156所述的偶聯(lián)物，其中該聚合物是一個(gè)聚乙二醇部分。158.如項(xiàng)157所述的偶聯(lián)物，其中該聚乙二醇部分是共價(jià)地附連于該多肽的一個(gè)半胱氨酸殘基上的。159.如項(xiàng)157所述的偶聯(lián)物，該偶聯(lián)物包括共價(jià)地附連于該多肽的一個(gè)賴氨酸殘基上的一個(gè)聚乙二醇部分。160.如項(xiàng)159所述的偶聯(lián)物，該偶聯(lián)物包括共價(jià)地附連于該多肽的N-端氨基基團(tuán)上的一個(gè)聚乙二醇部分。161.一種分離或重組的融合蛋白，該融合蛋白包括(a) —個(gè)第一多肽，該多肽包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列具有與選自下組的至少一種多肽序列至少95%的一致性，該組的構(gòu)成為:SEQ ID N0S:1至73，以及(b) —個(gè)第二多肽，其中該第二多肽是一個(gè)Ig Fe多肽，其中該融合蛋白具有結(jié)合CD80和/或CD86、或二者之一的或兩者的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的一種能力，和/或調(diào)整或調(diào)節(jié)一種免疫應(yīng)答的能力。162.如項(xiàng)161所述的融合蛋白，其中該融合蛋白調(diào)整或調(diào)節(jié)了 T細(xì)胞的活化或增殖或細(xì)胞因子的產(chǎn)生。

163.如項(xiàng)161或162所述的融合蛋白，其中該第二多肽是直接地與該第一多肽進(jìn)行融合的。164.如項(xiàng)161或162所述的融合蛋白，其中該第二多肽是與一個(gè)連接物氨基酸序列進(jìn)行融合的，該氨基酸序列是與該第一多肽進(jìn)行融合的。165.如項(xiàng)161所述的融合蛋白，其中該第二多肽是與該第一多肽的C-端進(jìn)行融合的。166.如項(xiàng)161所述的融合蛋白，其中該第二多肽包括一個(gè)Ig重鏈恒定區(qū)的一個(gè)或多個(gè)結(jié)構(gòu)域。167.如項(xiàng)161所述的融合蛋白，其中該第二多肽包括一種Ig多肽的一個(gè)鉸鏈區(qū)、CH2結(jié)構(gòu)域、以及CH3結(jié)構(gòu)域。168.如項(xiàng)161所述的融合蛋白，其中該Ig Fe多肽是一種野生型人類IgFc多肽或一種突變Ig Fe多肽。169.如項(xiàng)161所述的融合蛋白，其中該第二多肽包括一種人類Ig多肽的一個(gè)鉸鏈區(qū)、CH2結(jié)構(gòu)域、以及CH3結(jié)構(gòu)域。170.如項(xiàng)169所述的融合蛋白，其中該人類Ig多肽是一種人類IgG多肽，該人類IgG2多肽可任選地是人類IgG2Fc多肽。171.一種分離或重組的融合蛋白二聚體，該融合蛋白二聚體包括經(jīng)由至少一個(gè)二硫鍵連接的兩個(gè)單體融合蛋白，該二硫鍵在每個(gè)單體突變?nèi)诤系鞍字写嬖诘膬蓚€(gè)半胱氨酸殘基之間形成，其中每個(gè)單體融合蛋白包括(a) —個(gè)多肽，該多肽包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列具有與選自下組的至少一個(gè)多肽序列至少95%的一致性，該組的構(gòu)成為:SEQ IDNOS:1至73，以及(b) —個(gè)Ig Fe多肽，其中該融合蛋白二聚體具有結(jié)合⑶80和/或⑶86、和/或⑶80-1g和/或⑶86-1g的能力，和/或具有抑制或阻抑一種免疫應(yīng)答的能力。172.一種分離或重組的融合蛋白二聚體，該融合蛋白二聚體包括兩個(gè)單體融合蛋白，其中每個(gè)這種單體融合蛋白包括:(1) 一個(gè)多肽，該多肽包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列與選自下組的一種多肽序列具有不超過10、9、8、7或6個(gè)氨基酸殘基的差異，該組的構(gòu)成為:SEQ ID N0S:1至73，并且其中在該多肽序列中在位置24、30、32、41、50、54、55、56、64、65、70、或85上的氨基酸殘基是與在所述所選擇的多肽序列的對(duì)應(yīng)位置上的氨基酸殘基相同的，以及⑵一個(gè)Ig Fe多肽，其中該融合蛋白二聚體結(jié)合CD80和/或CD86，和/或抑制一種免疫應(yīng)答。173.一種分離或重組的融合蛋白二聚體，該融合蛋白二聚體包括兩個(gè)單體融合蛋白，其中每個(gè)單體融合蛋白包括:(I)一個(gè)突變CTLA-4細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域多肽，該多肽包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列(i)與在SEQ ID NO: 159中所示的人類CTLA-4細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的多肽序列具有不超過10、9、8、7、或6個(gè)氨基酸殘基的差異，并且(ii)包括至少一個(gè)氨基酸取代，該取代是在對(duì)應(yīng)于 相對(duì)SEQ ID NO: 159的位置24、30、32、50、54、55、56、64、65、70、或85的一個(gè)氨基酸位置上；以及⑵一個(gè)Ig Fe多肽，其中該融合蛋白二聚體結(jié)合CD80和/或CD86、和/或阻抑或抑制一種免疫應(yīng)答。174.一種分離或重組的突變CTLA-4-1g融合蛋白二聚體，該融合蛋白二聚體包括兩個(gè)突變CTLA-4-1g融合蛋白單體，其中每個(gè)突變CTLA-4-1g融合單體包括:(I) 一個(gè)突變CTLA-4-E⑶多肽，該多肽包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列(a)與在SEQ ID NO: 159中所示的人類CTLA-4細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的多肽序列具有不超過10、9、8、7、或6個(gè)氨基酸殘基的差異，并且(b)包括在相對(duì)于SEQ ID NO: 159的多個(gè)氨基酸位置上的一個(gè)或多個(gè)取代，這種或這些取代選自下組，其構(gòu)成為:A50M、M54K、G55E、N56D、S64P、I65S、以及S70F ;以及(2) —個(gè)Ig Fe多肽，該Ig Fe多肽可任選地是IgG2Fc多肽，其中該突變CTLA-4-1g 二聚體結(jié)合了h⑶80或h⑶86，和/或阻抑或抑制一種免疫應(yīng)答。175.一種分離或重組的融合蛋白二聚體，該融合蛋白二聚體包括兩個(gè)如項(xiàng)161至171以及314至316中任一項(xiàng)所述的單體融合蛋白，其中這兩個(gè)單體融合蛋白是經(jīng)由以下各項(xiàng)連接的:(i)在兩個(gè)半胱氨酸殘基之間形成的至少一個(gè)二硫鍵，其中每個(gè)半胱氨酸殘基是存在于這兩個(gè)第一多肽之一中的，和/或(ii)在兩個(gè)半胱氨酸殘基之間形成的至少一個(gè)二硫鍵，其中每個(gè)半胱氨酸殘基是存在于這兩個(gè)第二多肽之一中的。176.如項(xiàng)171、172、173、或174所述的融合蛋白二聚體，其中該融合蛋白二聚體具有對(duì)于人類CD86或它的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域或hCD86-1g的一種結(jié)合親合力，該結(jié)合親合力對(duì)應(yīng)地是大于一種融合蛋白二聚體對(duì)于人類⑶86或它的一種細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域或h⑶86-1g的結(jié)合親合力，該融合蛋白二聚體包括兩個(gè)單體融合蛋白，各自包括與一種Ig多肽進(jìn)行融合的一種野生型人類CTLA-4細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域。177.如項(xiàng)171、172、173、或174所述的融合蛋白二聚體，其中該融合蛋白二聚體具有對(duì)于人類CD86或它的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域或hCD86-1g的一種結(jié)合親合力，該結(jié)合親合力對(duì)應(yīng)地是大于一種CTLA-4-1gG2融合蛋白二聚體對(duì)于人類⑶86或它的一種細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域或h⑶86-1g的結(jié)合親合力，其中該CTLA-4-1gG2融合蛋白二聚體包括兩個(gè)單體CTLA-4-1gG2融合蛋白，每個(gè)CTLA-4-1gG2融合蛋白包括SEQ ID NO: 162的多肽序列。178.如項(xiàng)171、172、173、或174所述的融合蛋白二聚體，其中該融合蛋白二聚體具有對(duì)于人類CD86或它的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域或hCD86-1g的一種結(jié)合親合力，該結(jié)合親合力對(duì)應(yīng)地是至少等于或大于一種人類CTLA-4-1g融合蛋白二聚體對(duì)于人類⑶86或它的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域或hCD86-1g的結(jié)合親合力，其中該人類CTLA-4-1g融合蛋白二聚體包括兩個(gè)融合蛋白單體，每個(gè)這種單體包括SEQ ID NO: 164的多肽序列。179.如項(xiàng)171、172、173、或174所述的融合蛋白二聚體，其中該融合蛋白二聚體具有對(duì)于人類CD86或它的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域或hCD86-1g的一種結(jié)合親合力，該結(jié)合親合力對(duì)應(yīng)地是至少等于或大于一種LEA29Y-1g融合蛋白二聚體對(duì)于人類⑶86或它的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域或hCD86-1g的結(jié)合親合力，其中該LEA29Y-1g融合蛋白二聚體包括兩個(gè)單體LEA29Y-1g融合蛋白，各自包括SEQ ID N0:166的多肽序列。180.如項(xiàng)171、172、173、或174所述的融合蛋白二聚體，其中該融合蛋白二聚體具有一種能力來(lái)阻抑一種免疫應(yīng)答、抑制T細(xì)胞活化、或抑制T細(xì)胞增殖，該能力是至少等于或大于一種融合蛋白的能力，該融合蛋白包括兩個(gè)單體融合蛋白，這兩個(gè)單體融合蛋白各自包括與一種Ig多肽進(jìn)行融合的一個(gè)野生型人類CTLA-4細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域。181.如項(xiàng)171、172、173、或174所述的融合蛋白二聚體，其中該融合蛋白二聚體具有一種能力來(lái)阻抑一種免疫應(yīng)答、抑制T細(xì)胞活化、或抑制T細(xì)胞增殖，該能力是至少等于或大于一種CTLA-4-1gG2融合蛋白 二聚體阻抑一種免疫應(yīng)答、抑制T細(xì)胞活化、或抑制T細(xì)胞增殖的能力，該CTLA-4-1gG2融合蛋白二聚體包括兩個(gè)單體融合蛋白，這兩個(gè)單體融合蛋白各自具有SEQ ID NO: 162的多肽序列。182.如項(xiàng)171、172、173、或174所述的融合蛋白二聚體，其中該融合蛋白二聚體具有一種能力來(lái)阻抑一種免疫應(yīng)答、抑制T細(xì)胞活化、或抑制T細(xì)胞增殖，該能力是至少等于或大于一種人類CTLA-4-1g融合蛋白二聚體阻抑一種免疫應(yīng)答、抑制T細(xì)胞活化、或抑制T細(xì)胞增殖的能力，其中該人類CTLA-4-1g融合蛋白二聚體包括兩個(gè)融合蛋白單體，每個(gè)這種單體包括SEQ ID NO: 164的多肽序列。183.如項(xiàng)171、172、173、或174所述的融合蛋白二聚體，其中該融合蛋白二聚體以一個(gè)速率從結(jié)合的人類CD86或它的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域或hCD86-1g中解離，該速率是對(duì)應(yīng)地小于包括兩個(gè)人類CTLA-4細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的一種融合蛋白二聚體從結(jié)合的人類CD86或它的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域或hCD86-1g中解離的速率。184.如項(xiàng)171、172、173、或174所述的融合蛋白二聚體，其中該融合蛋白二聚體以一個(gè)速率從結(jié)合的人類CD86或它的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域或hCD86-1g中解離，該速率是對(duì)應(yīng)地小于一種CTLA-4-1gG2融合蛋白二聚體從結(jié)合的人類⑶86或它的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域或h⑶86-1g中解離的速率。185.如項(xiàng)171、172、173、或174所述的融合蛋白二聚體，其中該融合蛋白二聚體是以一個(gè)速率從結(jié)合的人類CD86或它的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域或hCD86-1g中解離，該速率是對(duì)應(yīng)地小于一種人類CTLA-4-1g融合蛋白二聚體從結(jié)合的人類⑶86或它的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域或hCD86-1g中解離的速率，其中該人類CTLA-4-1g融合蛋白二聚體包括兩個(gè)融合蛋白單體,每個(gè)這種單體包括SEQ ID NO: 164的多肽序列。186.如項(xiàng)171、172、173、或174所述的融合蛋白二聚體，其中該融合蛋白二聚體以一個(gè)速率從結(jié)合的人類CD86或它的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域或hCD86-1g中解離，該速率是對(duì)應(yīng)地小于一種LEA29Y-1g融合蛋白二聚體從結(jié)合的人類CD86或它的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域或h⑶86-1g中解離的速率，其中該LEA29Y-1g融合蛋白二聚體包括兩個(gè)融合蛋白，這兩個(gè)融合蛋白各自具有SEQ ID NO:166的序列。187.如項(xiàng)171、172、173、或174所述的融合蛋白二聚體，其中該融合蛋白二聚體以一個(gè)速率與人類CD86或它的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域或hCD86-1g相結(jié)合，該速率是對(duì)應(yīng)地至少等于或大于包括兩個(gè)人類CTLA-4細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的一個(gè)融合蛋白二聚體與人類CD86或它的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域或h⑶86-1g相結(jié)合的速率。188.如項(xiàng)171、172、173、或174所述的融合蛋白二聚體，其中該融合蛋白二聚體以一個(gè)速率與人類CD86或它的一種細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域或hCD86-1g相結(jié)合，該速率是對(duì)應(yīng)地至少等于或大于一種CTLA-4-1gG2融合蛋白二聚體與人類⑶86或它的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(或hCD86-1g)相結(jié)合的速率。189.如項(xiàng)171、172、173、或174所述的融合蛋白二聚體，其中該融合蛋白二聚體以一個(gè)速率與人類CD86或它的一種細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域或hCD86-1g相結(jié)合，該速率是對(duì)應(yīng)地至少等于或大于一種人類CTLA-4-1g融合蛋白二聚體與人類⑶86或它的一種細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域或h⑶86-1g相結(jié)合的速率，其中該人類CTLA-4-1g融合蛋白二聚體包括兩個(gè)融合蛋白單體，每個(gè)這種單體包括SEQ ID NO: 164的多肽序列。190.如項(xiàng)171、172、173、或174所述的融合蛋白二聚體，其中該融合蛋白二聚體以一個(gè)速率與人類CD86或它的一種細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域或hCD86-1g相結(jié)合，該速率是對(duì)應(yīng)地至少等于或大于一種LEA29Y-1g融合蛋白二聚體與人類CD86或它的一種細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域或h⑶86-1 g相結(jié)合的速率。191.如項(xiàng)171、172、173、或174所述的融合蛋白二聚體，其中該融合蛋白二聚體具有一個(gè)⑶86平衡解離常數(shù)(KD)，該⑶86平衡解離常數(shù)小于包括了兩個(gè)人類CTLA-4細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的一種融合蛋白二聚體的CD86平衡解離常數(shù)(KD)。192.如項(xiàng)171、1 72、173、或174所述的融合蛋白二聚體，其中該融合蛋白二聚體具有一個(gè)⑶86平衡解離常數(shù)(KD)，該⑶86平衡解離常數(shù)小于一種CTLA-4-1gG2融合蛋白二聚體的⑶86平衡解離常數(shù)(Kd)。193.如項(xiàng)171、172、173、或174所述的融合蛋白二聚體，其中該融合蛋白二聚體具有一個(gè)⑶86平衡解離常數(shù)(KD)，該⑶86平衡解離常數(shù)小于一種人類CTLA-4-1g融合蛋白二聚體的⑶86平衡解離常數(shù)(KD)，其中該人類CTLA-4-1g融合蛋白二聚體包括兩個(gè)融合蛋白單體，每個(gè)這種單體包括SEQ ID NO: 164的多肽序列。194.如項(xiàng)171、172、173、或174所述的融合蛋白二聚體，其中該融合蛋白二聚體具有一個(gè)⑶86平衡解離常數(shù)(KD)，該⑶86平衡解離常數(shù)小于一種LEA29Y-1g融合蛋白二聚體的⑶86平衡解離常數(shù)(Kd)。195.一種分離或重組的核酸，該核酸包括一個(gè)多核苷酸序列，該多核苷酸序列編碼了如項(xiàng)53至115中任一項(xiàng)所述的一種多肽、項(xiàng)161至171以及314至316中任一項(xiàng)所述的一種融合蛋白、或項(xiàng)172至194以及317中任一項(xiàng)所述的一種融合蛋白二聚體、或它的一個(gè)互補(bǔ)的多核苷酸序列。196.一種分離或重組的核酸，該核酸包括一個(gè)多核苷酸序列，該多核苷酸序列編碼了包括一個(gè)多肽序列的一種多肽，該多肽序列具有與選自下組的至少一個(gè)多肽序列至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%的序列一致性，該組的構(gòu)成為:SEQ ID NOS:1至79、197至200,205至214、以及219至222，其中該多肽具有結(jié)合CD80和/或CD86、和/或二者之一的或兩者的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的能力，和/或具有阻抑一種免疫應(yīng)答的能力，或它的一個(gè)互補(bǔ)的多核苷酸序列。197.如項(xiàng)196所述的核酸，其中該核酸編碼了一種多肽，與一種人類CTLA-4單體或它的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域相比，該多肽具有對(duì)應(yīng)地對(duì)于人類CD86或它的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的更大的結(jié)合親和力。 198.一種分離或重組的核酸，該核酸包括一個(gè)多核苷酸序列，該多核苷酸序列編碼了包括一個(gè)多肽序列的一種融合蛋白，該多肽序列具有與選自下組的至少一種多肽序列至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%的序列一致性，該組的構(gòu)成為:SEQ IDNOS: 74至79、197至200,205至214、以及219至222，其中該多肽結(jié)合CD80和/或CD86、和/或它的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域，和/或阻抑一種免疫應(yīng)答，或它的一個(gè)互補(bǔ)的多核苷酸序列。199.一種分離或重組的核酸，該核酸包括:(a) —個(gè)多核苷酸序列，該多核苷酸序列具有與選自下組的至少一個(gè)多核苷酸序列至少95%的序列一致性，該組的構(gòu)成為:SEQ IDN0S:80至158、201至204、223、以及224 ;(b) (a)的一個(gè)互補(bǔ)的多核苷酸序列；或(c) (a)或(b)的任何多核苷酸序列的一個(gè)片段，其中該核酸編碼了一種多肽，該多肽結(jié)合CD80和/或CD86、和/或二者之一的或兩者的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域，和/或具有阻抑或抑制一種免疫應(yīng)答的能力。200.一種分離或重組的核酸，該核酸包括一個(gè)多核苷酸序列，該多核苷酸序列編碼了一種多肽，該多肽包括一個(gè)多肽序列，(a)該多肽序列與選自下組的一個(gè)多肽序列具有不超過10、9、8、7、或6個(gè)氨基酸殘基的差異，該組的構(gòu)成為:SEQ ID N0S:1至73，并且(b)其中在該多肽序列中在位置24、30、32、41、50、54、55、56、64、65、70、或85上的氨基酸殘基是與在所述選自下組的多肽序列的對(duì)應(yīng)位置上的氨基酸殘基相同的，該組的構(gòu)成為:SEQID NOS:1至73，其中該多肽結(jié)合⑶80和/或⑶86、和/或二者之一的或兩者的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域，和/或抑制一種免疫應(yīng)答，或它的一個(gè)互補(bǔ)的多核苷酸序列。201.一種分離或重組的核酸，該核酸包括一個(gè)多核苷酸序列，該多核苷酸序列編碼了包括一個(gè)多肽序列的一種多肽，該多肽序列(a)與在SEQ ID N0:159中所示的人類CTLA-4細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的多肽序列具有不超過6個(gè)氨基酸殘基的差異，并且(b)包括至少一個(gè)氨基酸取代，該氨基酸取代是在對(duì)應(yīng)于相對(duì)SEQ ID N0:159的位置30、32、50、54、55、56、64,65,70或85上的一個(gè)氨基酸位置，其中所述多肽具有結(jié)合⑶80和/或⑶86、和/或二者之一的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的能力，和/或具有阻抑或抑制一種免疫應(yīng)答的能力，或它的一個(gè)互補(bǔ)的多核苷酸序列。202.如項(xiàng)201所述的核酸，其中所述核酸包括至少一個(gè)相對(duì)SEQ ID NO: 159的氨基酸取代，該氨基酸取代選自下組，其構(gòu)成為:A50M、M54K、G55E、N56D、S64P、I65S、以及S70F，并且可任選地進(jìn)一步包括至少一個(gè)相對(duì)SEQ ID NO: 159的氨基酸取代，該氨基酸取代選自下組，其構(gòu)成為:L104E/D、T30N/D/A、以及V32I。203.一種分離或重組的核酸，該核酸包括一個(gè)多核苷酸序列，該多核苷酸序列編碼了包括一個(gè)多肽序列的一種多肽，該多肽序列具有(i)至少95%—致性的一個(gè)多肽序列，該多肽序列選自下組，其構(gòu)成為:SEQ ID N0S:1至73，以及(ii) 一個(gè)苯丙氨酸殘基，該苯丙氨酸殘基在對(duì)應(yīng)于所述選自下組的多肽序列的位置70的一個(gè)氨基酸位置上，該組的構(gòu)成為:SEQ ID NOS:1至73，其中該多肽結(jié)合h⑶80和/或h⑶86或它的一個(gè)E⑶，和/或抑制一種免疫應(yīng)答，其中所述氨基酸取代可任選地包括S70F，或它的一個(gè)互補(bǔ)的多核苷酸序列。204.一種分離或重組的核酸，該核酸包括一個(gè)多核苷酸序列，該多核苷酸序列編碼了一種重組多肽二聚體，該重組多肽二聚體包括兩個(gè)多肽，其中每個(gè)這種多肽包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列具有與選自下組的一個(gè)序列至少95%的一致性，該組的構(gòu)成為:SEQID NOS:1至73，其中該二聚體結(jié)合h⑶80和/或h⑶86、和/或抑制一種免疫應(yīng)答，或它的一種互補(bǔ)的多核苷酸序列。205.一種分離或重組的核酸，該核酸包括一個(gè)多核苷酸序列，該核苷酸序列編碼了一種融合蛋白，該融合蛋白包括(a) —種多肽，該多肽包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列具有與選自下組的至少一個(gè)多肽序列至少95%的一致性，該組的構(gòu)成為:SEQ ID NOS:1至73，以及(b) —種Ig多肽，其中該融合蛋白結(jié)合CD80和/或CD86、和/或具有阻抑一種免疫應(yīng)答的能力，或它的一個(gè)互補(bǔ)的多核苷酸序列。206.如項(xiàng)205所述的核酸，其中所述核酸編碼了一種融合蛋白二聚體。207.如項(xiàng)196所述的核酸，其中該核酸編碼了一種多肽，該多肽與一種人類CTLA-4單體或它的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域相比具有阻抑一種免疫應(yīng)答的更大的能力。208.如項(xiàng)207所述的核酸，其中該核酸編碼了一種多肽，該多肽與一種人類CTLA-4單體或它的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域相比具有抑制T細(xì)胞活化或T細(xì)胞增殖的更大的能力。209.如項(xiàng)196所述的核酸，其中該核酸編碼了一種多肽，該多肽以一個(gè)速率從結(jié)合的人類CD86或它的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域中解離，該速率是小于一種人類CTLA-4單體或它的一種細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域從結(jié)合的人類CD86或它的一種細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域中解離的速率。210.一種分離或重組的核酸，該核酸包括:(a) 一種多核苷酸序列,該多核苷酸序列具有與一種RNA多核苷酸序列至少95%的序列一致性，其中該RNA多核苷酸序列包括選自下組的一種DNA序列，該組的構(gòu)成為:SEQID NOS:80至158、201至204、223、以及224，其中在該DNA序列中所有的胸腺嘧啶核苷酸殘基被尿嘧啶核苷酸殘基替換；(b) (a)的一個(gè)互補(bǔ)的多核苷酸序列；或(c) (a)或(b)的任何多核苷酸序列的一個(gè)片段，其中該核酸編碼了一種多肽，該多肽(i)結(jié)合⑶80和/或⑶86、和/或二者之一的或兩者的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域，和/或(ii)具有阻抑一種免疫應(yīng)答的能力，該免疫應(yīng)答可任選地包括T細(xì)胞活化和/或T細(xì)胞增殖。211.如項(xiàng)195至210中任一項(xiàng)所述的核酸，該核酸進(jìn)一步包括編碼了一種信號(hào)肽的一個(gè)核苷酸序列。212.一種分離或重組的核酸，該核酸包括一個(gè)多核苷酸序列，該多核苷酸序列編碼了包括一個(gè)多肽序列的一種多肽，該多肽 序列(a)與在SEQ ID N0:31中所示的多肽序列具有不超過6個(gè)氨基酸殘基的差異，并且(b)包括以下的至少一項(xiàng):在對(duì)應(yīng)于SEQ ID N0:31的位置50的一個(gè)位置上的一個(gè)甲硫氨酸殘基、在對(duì)應(yīng)于SEQ ID NO:31的位置54的一個(gè)位置上的一個(gè)賴氨酸殘基、在對(duì)應(yīng)于SEQ ID NO:31的位置55的一個(gè)位置上的一個(gè)谷氨酸殘基、在對(duì)應(yīng)于SEQ ID NO:31的位置64的一個(gè)位置上的一個(gè)脯氨酸殘基、在對(duì)應(yīng)于SEQ IDNO:31的位置65的一個(gè)位置上的一個(gè)絲氨酸殘基、在對(duì)應(yīng)于SEQ ID NO:31的位置70的一個(gè)位置上的一個(gè)苯丙氨酸殘基，其中根據(jù)SEQ ID NO:31對(duì)多個(gè)氨基酸殘基位置進(jìn)行編號(hào)，并且其中該多肽結(jié)合CD80和/或CD86、和/或二者之一的或兩者的一個(gè)ECDJP /或抑制一種免疫應(yīng)答，或它的一個(gè)互補(bǔ)的多核苷酸序列。213.一種載體,該載體包括如項(xiàng)143至160中任一項(xiàng)所述的一種核酸、編碼了如項(xiàng)53至128以及312至313中任一項(xiàng)所述的一種多肽的一種核酸、編碼了如項(xiàng)129至133中任一項(xiàng)所述的一種多肽多聚體的一種核酸、編碼了如項(xiàng)134至149中任一項(xiàng)所述的一種多肽二聚體的一種核酸、編碼了如項(xiàng)150至160中任一項(xiàng)所述的一種偶聯(lián)物的一種核酸、編碼了如項(xiàng)161至171以及314至316中任一項(xiàng)所述的一種融合蛋白的一種核酸、或編碼了如項(xiàng)172至194以及317中任一項(xiàng)所述的一種融合蛋白二聚體的一種核酸。214.如項(xiàng)213所 述的載體，其中該載體是一種DNA載體。215.如項(xiàng)213所述的載體，其中該載體是一種RNA載體。216.如項(xiàng)213所述的載體，其中該核酸是可操作地連接至一個(gè)啟動(dòng)子上的。217.如項(xiàng)213所述的載體，其中該載體是一種表達(dá)載體。218.如項(xiàng)217所述的載體,其中該表達(dá)載體包括在

圖1C中所示的質(zhì)粒表達(dá)載體。219.如項(xiàng)213所述的載體，其中該載體是一種病毒載體、酵母載體、植物載體、細(xì)菌載體、或昆蟲載體。220.如項(xiàng)所述219的載體,其中該病毒載體是一種腺病毒載體。221.如項(xiàng)213所述的載體，其中該載體是一種質(zhì)粒載體。222.如項(xiàng)213至221中任一項(xiàng)所述的載體，其中該載體進(jìn)一步包括一種選擇性標(biāo)記。223.一種表達(dá)載體,該載體包括:(i) 一個(gè)第一多核苷酸序列，該第一多核苷酸序列編碼了一種第一多肽，該第一多肽包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列具有與選自下組的至少一個(gè)多肽序列至少95%的一致性，該組的構(gòu)成為:SEQ ID NOS:1至73，其中所述第一多肽結(jié)合人類CD86和/或人類CD80、和/或二者之一的或兩者的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域，和/或阻抑一種免疫應(yīng)答，以及(ii) 一個(gè)第二多核苷酸序列，該第二多核苷酸序列編碼了一種第二多肽，該第二多肽包括一種免疫球蛋白(Ig)多肽的一個(gè)鉸鏈區(qū)、一個(gè)CH2結(jié)構(gòu)域、以及一個(gè)CH3結(jié)構(gòu)域，該Ig多肽可任選地是人類IgG2Fc多肽。224.一種分離或重組的宿主細(xì)胞，該宿主細(xì)胞包括:(a)如項(xiàng)53至128以及312至313中任一項(xiàng)所述的一種多肽；(b)如項(xiàng)129至133中任一項(xiàng)所述的一種多聚體；(c)如項(xiàng)134至149中任一項(xiàng)所述的一種二聚體；(d)如項(xiàng)150至160中任一項(xiàng)所述的一種偶聯(lián)物；(e)如項(xiàng)161至171以及314至316中任一項(xiàng)所述的一種融合蛋白；(f)如項(xiàng)172至194以及317中任一項(xiàng)所述的一種融合蛋白二聚體；(g)如項(xiàng)195至212中任一項(xiàng)所述的一種核酸；和/或(h)如項(xiàng)213至223中任一項(xiàng)所述的一種載體。225.一種分離或重組的宿主細(xì)胞，該宿主細(xì)胞用如項(xiàng)143至160中任一項(xiàng)所述的一種核酸進(jìn)行轉(zhuǎn)染或轉(zhuǎn)化。
226.一種分離或重組的宿主細(xì)胞，該宿主細(xì)胞用編碼了一種融合蛋白的一種核酸進(jìn)行轉(zhuǎn)染，該核酸包括:(i) 一個(gè)第一核苷酸序列，該第一核苷酸序列編碼了包括一種多肽序列的一種第一多肽，該多肽序列具有與選自下組的至少一個(gè)多肽序列至少95%的一致性，該組的構(gòu)成為:SEQ ID NOS:1至73，其中所述第一多肽具有結(jié)合人類⑶86和/或人類⑶80、和/或二者之一的或兩者的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的能力，和/或具有阻抑一種免疫應(yīng)答的能力；以及(ii) 一個(gè)第二核苷酸序列，該第二核苷酸序列編碼了一種第二多肽，該第二多肽包括一種免疫球蛋白(Ig)多肽的一個(gè)鉸鏈區(qū)、一個(gè)CH2結(jié)構(gòu)域、以及一個(gè)CH3結(jié)構(gòu)域，該Ig多肽可任選地是人類IgG2Fc多肽，其中該宿主細(xì)胞是可表達(dá)該融合蛋白的。227.一種分離或重組分離的宿主細(xì)胞，該宿主細(xì)胞包括如項(xiàng)213至223中任一項(xiàng)所述的一種載體。228.一種分離的宿主細(xì)胞，該宿主細(xì)胞用根據(jù)項(xiàng)213至223中任一項(xiàng)所述的一種載體進(jìn)行轉(zhuǎn)染或轉(zhuǎn)化。229.如項(xiàng)224至228中任一項(xiàng)所述的宿主細(xì)胞，其中該宿主細(xì)胞是一種真核細(xì)胞。230.如項(xiàng)229所述的宿主細(xì)胞，其中該宿主細(xì)胞是一種中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢(CHO)細(xì)胞或COS細(xì)胞。231.一種無(wú)限增殖化的細(xì)胞系，該細(xì)胞系包括:(a)如項(xiàng)53至128以及312至313中任一項(xiàng)所述的一種多肽；(b)如項(xiàng)129至133中任一項(xiàng)所述的一種多聚體；(c)如項(xiàng)134至149中任一項(xiàng)所述的一種二聚體；(d)如項(xiàng)150至160中任一項(xiàng)所述的一種偶聯(lián)物；(e)如項(xiàng)161至171以及314至316中任一項(xiàng)所述的一種融合蛋白；(f)如項(xiàng)172至194以及317中任一項(xiàng)所述的一種融合蛋白二聚體；(g)如項(xiàng)195至212中任一項(xiàng)所述的一種核酸；(h)如項(xiàng)213至223中任一項(xiàng)所述的一種載體；和/或(i)如項(xiàng)224至230中任一項(xiàng)所述的一種細(xì)胞。232.一種組合物，該組合物包括一種賦形劑或載體、以及以下的一項(xiàng)或多項(xiàng):(a)如項(xiàng)53至128以及312至313中任一項(xiàng)所述的一種多肽；(b)如項(xiàng)129至133中任一項(xiàng)所述的一種多聚體；(c)如項(xiàng)134至149中任一項(xiàng)所述的一種二聚體；(d)如項(xiàng)150至160中任一項(xiàng)所述的一種偶聯(lián)物；(e)如項(xiàng)161至171以及314至316中任一項(xiàng)所述的一種融合蛋白；(f)如項(xiàng)172至194以及317中任一項(xiàng)所述的一種融合蛋白二聚體；(g)如項(xiàng)195至212中任一項(xiàng)所述的一種核酸；(h)如項(xiàng)213至223中任一項(xiàng)所述的一種載體。(i)如項(xiàng)224至230中任一項(xiàng)所述的一種細(xì)胞；和/或(j)如項(xiàng)231所述的一種細(xì)胞系。233.一種藥物組合物，該藥物組合物包括一種藥學(xué)上可接受的賦形劑或藥學(xué)上可接受的載體、以及以下的一項(xiàng)或多項(xiàng):
(a)如項(xiàng)53至128以及312至313中任一項(xiàng)所述的一種多肽；(b)如項(xiàng)129至133中任一項(xiàng)所述的一種多聚體；(c)如項(xiàng)134至149中任一項(xiàng)所述的一種二聚體；(d)如項(xiàng)150至160中任一項(xiàng)所述的一種偶聯(lián)物；(e)如項(xiàng)161至171以及314至316中任一項(xiàng)所述的一種融合蛋白；(f)如項(xiàng)172至194以及317中任一項(xiàng)所述的一種融合蛋白二聚體；(g)如項(xiàng)195至212中任一項(xiàng)所述的一種核酸；(h)如項(xiàng)213至223中任一項(xiàng)所述的一種載體。(i)如項(xiàng)224至230中任一項(xiàng)所述的一種細(xì)胞；和/或(j)如項(xiàng)231所述的一種細(xì)胞系。234.阻抑一種免疫應(yīng)答的一種方法，所述方法包括將一種B7-陽(yáng)性細(xì)胞與一個(gè)有效量的以下的至少一項(xiàng)進(jìn)行接觸:(a)如項(xiàng)53至128以及312至313中任一項(xiàng)所述的一種多肽；(b)如項(xiàng)129至133中任一項(xiàng)所述的一種多聚體；(c)如項(xiàng)134至 149中任一項(xiàng)所述的一種二聚體；(d)如項(xiàng)150至160中任一項(xiàng)所述的一種偶聯(lián)物；(e)如項(xiàng)161至171以及314至316中任一項(xiàng)所述的一種融合蛋白；(f)如項(xiàng)172至194以及317中任一項(xiàng)所述的一種融合蛋白二聚體；(g)如項(xiàng)195至212中任一項(xiàng)所述的一種核酸；(h)如項(xiàng)213至223中任一項(xiàng)所述的一種載體；和/或(i)如項(xiàng)224至230中任一項(xiàng)所述的一種細(xì)胞；以阻抑一種免疫應(yīng)答，其中一種免疫應(yīng)答由此受到阻抑。235.如項(xiàng)234所述的方法，其中該受到阻抑的免疫應(yīng)答是一種T細(xì)胞應(yīng)答。236.如項(xiàng)234所述的方法，其中該方法包括將一種B7-陽(yáng)性細(xì)胞與所述多肽進(jìn)行接觸，其中所述多肽結(jié)合在多個(gè)B7-陽(yáng)性細(xì)胞上表達(dá)的B7-1、和/或結(jié)合了在多個(gè)B7-陽(yáng)性細(xì)胞上表達(dá)的B7-2。237.調(diào)整了表達(dá)⑶28和/或CTLA-4的T細(xì)胞與B7-陽(yáng)性細(xì)胞的相互作用的一種方法，該方法包括將B7-陽(yáng)性細(xì)胞與一個(gè)有效量的以下的至少一項(xiàng)進(jìn)行接觸:(a)如項(xiàng)53至128以及312至313中任一項(xiàng)所述的一種多肽；(b)如項(xiàng)129至133中任一項(xiàng)所述的一種多聚體；(c)如項(xiàng)134至149中任一項(xiàng)所述的一種二聚體；(d)如項(xiàng)150至160中任一項(xiàng)所述的一種偶聯(lián)物；(e)如項(xiàng)161至171以及314至316中任一項(xiàng)所述的一種融合蛋白；(f)如項(xiàng)172至194以及317中任一項(xiàng)所述的一種融合蛋白二聚體；(g)如項(xiàng)195至212中任一項(xiàng)所述的一種核酸；(h)如項(xiàng)213至223中任一項(xiàng)所述的一種載體；和/或(i)如項(xiàng)224至230中任一項(xiàng)所述的一種細(xì)胞；以調(diào)整B7-陽(yáng)性細(xì)胞與⑶28-陽(yáng)性T細(xì)胞和/或CTLA-4-陽(yáng)性T細(xì)胞的相互作用，其中該B7-陽(yáng)性細(xì)胞與⑶28-陽(yáng)性T細(xì)胞和/或CTLA-4-陽(yáng)性T細(xì)胞的相互作用受到了調(diào)節(jié)。238.抑制該⑶28-陽(yáng)性T細(xì)胞和/或CTLA-4-陽(yáng)性T細(xì)胞與B7-陽(yáng)性細(xì)胞的相互作用的一種方法，該方法包括將B7-陽(yáng)性細(xì)胞與一個(gè)有效量的以下的至少一項(xiàng)進(jìn)行接觸:(a)如項(xiàng)53至128以及312至313中任一項(xiàng)所述的一種多肽；(b)如項(xiàng)129至133中任一項(xiàng)所述的一種多聚體；(c)如項(xiàng)134至149中任一項(xiàng)所述的一種二聚體；(d)如項(xiàng)150至160中任一項(xiàng)所述的一種偶聯(lián)物；(e)如項(xiàng)161至171以及314至316中任一項(xiàng)所述的一種融合蛋白；(f)如項(xiàng)172至194以及317中任一項(xiàng)所述的一種融合蛋白二聚體；(g)如項(xiàng)195至212中任一項(xiàng)所述的一種核酸；(h)如項(xiàng)213至223中任一項(xiàng)所述的一種載體；和/或(i)如項(xiàng)224至230中任一項(xiàng)所述的一種細(xì)胞；其中該⑶28-陽(yáng)性T細(xì)胞和/或CTLA-4-陽(yáng)性T細(xì)胞與B7-陽(yáng)性細(xì)胞的相互作用受到抑制。 239.如項(xiàng)238所述的方法，其中T細(xì)胞的活化或增殖受到抑制。240.如項(xiàng)238所述的方法，其中這些B7-陽(yáng)性細(xì)胞是抗原呈遞細(xì)胞。241.在一位受試者體內(nèi)抑制該⑶28-陽(yáng)性T細(xì)胞與B7-陽(yáng)性細(xì)胞的相互作用的一種方法，所述方法包括對(duì)一個(gè)受試者給予一個(gè)有效量的以下的至少一項(xiàng):(a)如項(xiàng)53至128以及312至313中任一項(xiàng)所述的一種多肽；(b)如項(xiàng)129至133中任一項(xiàng)所述的一種多聚體；(c)如項(xiàng)134至149中任一項(xiàng)所述的一種二聚體；(d)如項(xiàng)150至160中任一項(xiàng)所述的一種偶聯(lián)物；(e)如項(xiàng)161至171以及314至316中任一項(xiàng)所述的一種融合蛋白；(f)如項(xiàng)172至194以及317中任一項(xiàng)所述的一種融合蛋白二聚體；(g)如項(xiàng)195至212中任一項(xiàng)所述的一種核酸；(h)如項(xiàng)213至223中任一項(xiàng)所述的一種載體；和/或(i)如項(xiàng)224至230中任一項(xiàng)所述的一種細(xì)胞；其中在該受試者體內(nèi)的該內(nèi)源性⑶28-陽(yáng)性T細(xì)胞與內(nèi)源性B7-陽(yáng)性細(xì)胞的相互作用受到抑制。242.如項(xiàng)241所述的方法，其中內(nèi)源性⑶28-陽(yáng)性T細(xì)胞與表達(dá)B7_2 (⑶86)或B7-1 (⑶80)的內(nèi)源性B7-陽(yáng)性細(xì)胞的相互作用受到抑制。243.如項(xiàng)241所述的方法，其中這些表達(dá)B7-2 (⑶86)和/或B7-1 (⑶80)的B7-陽(yáng)性細(xì)胞以及B7-2 (CD86)和/或B7-1 (CD80)與CD28-陽(yáng)性T細(xì)胞的相互作用受到抑制。244.如項(xiàng)243所述的方法，其中B7-2 (CD86)以及B7-1 (CD80)與CD28-陽(yáng)性T細(xì)胞的相互作用受到抑制。245.在一位受試者體內(nèi)阻抑一種免疫應(yīng)答的一種方法,該方法包括對(duì)需要該方法的一位受試者給予一個(gè)治療有效量的以下的一項(xiàng)或多項(xiàng):(a)如項(xiàng)53至128以及312至313中任一項(xiàng)所述的一種多肽；
(b)如項(xiàng)129至133中任一項(xiàng)所述的一種多聚體；(c)如項(xiàng)134至149中任一項(xiàng)所述的一種二聚體；(d)如項(xiàng)150至160中任一項(xiàng)所述的一種偶聯(lián)物；(e)如項(xiàng)161至171以及314至316中任一項(xiàng)所述的一種融合蛋白；(f)如項(xiàng)172至194以及317中任一項(xiàng)所述的一種融合蛋白二聚體；(g)如項(xiàng)195至212中任一項(xiàng)所述的一種核酸；(h)如項(xiàng)213至223中任一項(xiàng)所述的一種載體；和/或(i)如項(xiàng)224至230中任一項(xiàng)所述的一種細(xì)胞；由此在該受試者體內(nèi)阻抑一種免疫應(yīng)答。246.如項(xiàng)245所述的方法，其中一種可溶性融合蛋白二聚體是以一個(gè)治療有效量給予該受試者的，該治療有效量包括從大約0.001毫克每千克(mg/kg)該受試者體重至大約100毫克每千克(mg/kg)該受試者體重。247.如項(xiàng)246所述的方法，其中該可溶性融合蛋白二聚體的治療有效量包括從大約 0.0Olmg/kg 該受試者體重到至少約 0.005,0.01,0.025,0.05,0.1,0.2,0.3,0.4,0.5、0.6,0.7,0.8,0.9、1、1.5、2、3、4、5、6、7、8、9、10、25、或 50mg/kg 該受試者體重。248.如項(xiàng)245所述的方法，其中該多肽、融合蛋白、二聚體、多聚體、融合蛋白二聚體、核酸、載體、和/或細(xì)胞是在一種藥學(xué)上可接受的賦形劑或載體中給予該受試者的。249.如項(xiàng)245所述的方法，其中經(jīng)胃腸外、皮下、或靜脈內(nèi)給予該多肽、融合蛋白、二聚體、多聚體、融合蛋白二聚體、核酸、載體、和/或細(xì)胞。250.如項(xiàng)245所述的方法，其中該多肽、融合蛋白、二聚體、多聚體、融合蛋白二聚體、核酸、載體、和/或細(xì)胞是每個(gè)月一、二、三或四次經(jīng)皮下給予的。251.如項(xiàng)245至250中任一項(xiàng)所述的方法，其中一種可溶性融合蛋白二聚體是在一種藥學(xué)上可接受的賦形劑或載體中以一種濃度給予該受試者的，該濃度是從大約0.0 lmg/ml至大約200mg/ml、大約0.lmg/ml至大約200mg/ml、大約I至大約200mg/ml、大約I至大約100mg/ml、大約5至大約75mg/ml、大約10至大約50mg/ml、大約25至大約50mg/ml、或大約 50mg/ml 至大約 100mg/ml。252如項(xiàng)245所述的方法，其中該多肽是一種可溶性多肽，該融合蛋白是一種可溶性融合蛋白，該二聚體是一種可溶性二聚體，該多聚體是一種可溶性多聚體，并且該融合蛋白二聚體是一種可溶性融合蛋白二聚體。253.在一位受試者體內(nèi)阻抑一種免疫應(yīng)答的一種方法，該方法包括對(duì)一位需要該方法的受試者給予一個(gè)治療有效量的一個(gè)第一免疫抑制劑或化合物，所述第一免疫抑制劑包括:(a)如項(xiàng)53至128以及312至313中任一項(xiàng)所述的一種多肽；(b)如項(xiàng)129至133中任一項(xiàng)所述的一種多聚體；

(c)如項(xiàng)134至149中任一項(xiàng)所述的一種二聚體；(d)如項(xiàng)150至160中任一項(xiàng)所述的一種偶聯(lián)物；(e)如項(xiàng)161至171以及314至316中任一項(xiàng)所述的一種融合蛋白；(f)如項(xiàng)172至194以及317中任一項(xiàng)所述的一種融合蛋白二聚體；(g)如項(xiàng)195至212中任一項(xiàng)所述的一種核酸；
(h)如項(xiàng)213至223中任一項(xiàng)所述的一種載體；和/或(i)如項(xiàng)224至230中任一項(xiàng)所述的一種細(xì)胞；由此在該受試者體內(nèi)阻抑一種免疫應(yīng)答。254.如項(xiàng)253所述的方法，該方法進(jìn)一步包括給予一個(gè)有效量的至少一種額加的免疫抑制劑或治療劑。255.如項(xiàng)254所述的方法，其中該至少一種額加的免疫抑制劑或治療劑是選自下組，其構(gòu)成為:一種緩解疾病的抗風(fēng)濕藥(DMARD )、留體化合物、非留體化合物、水楊酸鈉或鎂、布洛芬、乙酰水楊酸、撲熱息痛、抗體、阻斷一種抗炎細(xì)胞因子產(chǎn)生的生物劑、依法珠單抗、抗炎劑或化合物、以及非留體抗炎藥物(NSAID)。256.如項(xiàng)25 4或255所述的方法，其中該至少一種額加的免疫抑制劑或治療劑是在一種藥學(xué)上可接受的賦形劑或載體中給予該受試者的。257.如項(xiàng)253至256中任一項(xiàng)所述的方法，其中該多肽、融合蛋白、二聚體、多聚體、融合蛋白二聚體、核酸、載體、和/或細(xì)胞是每天至少一次、每周至少一次、每雙周至少一次、或每月至少一次進(jìn)行給予的。258.如項(xiàng)253至257中任一項(xiàng)所述的方法，其中該至少一種額加的免疫抑制劑或藥劑是(i)與給予該第一免疫抑制劑或化合物的同時(shí)；(ii)在給予該第一免疫抑制劑或化合物之后；或(iii)在給予該第一免疫抑制劑或化合物之前給予的。259.治療患有一種免疫系統(tǒng)疾病或紊亂的一位受試者的一種方法,該疾病或紊亂是通過內(nèi)源性T細(xì)胞與表達(dá)⑶80和/或⑶86的內(nèi)源性細(xì)胞的相互作用調(diào)整的，所述方法包括對(duì)需要這種治療的一位受試者給予一個(gè)治療有效量的以下各項(xiàng):(a)如項(xiàng)53至128以及312至313中任一項(xiàng)所述的一種多肽；(b)如項(xiàng)129至133中任一項(xiàng)所述的一種多聚體；(c)如項(xiàng)134至149中任一項(xiàng)所述的一種二聚體；(d)如項(xiàng)150至160中任一項(xiàng)所述的一種偶聯(lián)物；(e)如項(xiàng)161至171以及314至316中任一項(xiàng)所述的一種融合蛋白；(f)如項(xiàng)172至194以及317中任一項(xiàng)所述的一種融合蛋白二聚體；(g)如項(xiàng)195至212中任一項(xiàng)所述的一種核酸；(h)如項(xiàng)213至223中任一項(xiàng)所述的一種載體；和/或(i)如項(xiàng)224至230中任一項(xiàng)所述的一種細(xì)胞；其中在內(nèi)源性T細(xì)胞與表達(dá)所述⑶80和/或所述⑶86的內(nèi)源性細(xì)胞之間的一種或多種相互作用受到抑制，由此治療該受試者體內(nèi)的免疫系統(tǒng)疾病或紊亂。260.如項(xiàng)259所述的方法，其中⑶80是人類⑶80并且⑶86是人類⑶86。261.如項(xiàng)259所述的方法，其中是表達(dá)⑶28的內(nèi)源性T細(xì)胞與表達(dá)⑶86的內(nèi)源性細(xì)胞和/或表達(dá)CD80的內(nèi)源性細(xì)胞之間的相互作用受到抑制。262.如項(xiàng)所述261的方法，其中⑶80是人類⑶80，⑶86是人類⑶86，并且⑶28是人類⑶28。263.如項(xiàng)259至262中任一項(xiàng)所述的方法，其中該免疫系統(tǒng)疾病或紊亂是一種自身免疫疾病或紊亂。264.如項(xiàng)263所述的方法，其中該免疫系統(tǒng)疾病或紊亂是選自下組，其構(gòu)成為:關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、幼年型特發(fā)性關(guān)節(jié)炎(JIA)、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)、銀屑病、銀屑病性關(guān)節(jié)炎、糖尿病、幼年型糖尿病、I型糖尿病、多發(fā)性硬化癥、克羅恩病、系統(tǒng)性硬皮病、潰瘍性結(jié)腸炎、炎癥性腸病(IBD)、韋格納氏肉芽腫病病、阿狄森氏病、格雷夫斯氏病、肌風(fēng)濕病、風(fēng)濕性疾病、強(qiáng)直性脊柱炎、重癥肌無(wú)力、以及ANCA-相關(guān)性脈管炎。265.如項(xiàng)259至264中任一項(xiàng)所述的方法，其中該多肽、融合蛋白、二聚體、偶聯(lián)物、融合蛋白二聚體、核酸、載體、和/或細(xì)胞是在一種藥學(xué)上可接受的賦形劑或載體中給予該受試者的。266.如項(xiàng)259中任一項(xiàng)所述的方法，其中一種可溶性融合蛋白二聚體是以一個(gè)治療有效量給予的，該治療有效量包括從大約0.001mg/kg該受試者體重至約大100mg/kg該患者體重。267.如項(xiàng)266所述的方法，其中該可溶性融合蛋白二聚體的治療有效量包括至少約 0.001、0.005、0.0U0.025、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、
6、7、8、9、10、25、50、75、或 100mg/kg 該受試者體重。268.如項(xiàng)266所述 的方法，其中該可溶性融合蛋白二聚體的治療有效量包括從大約 0.0Olmg/kg 該受試者體重到至少約 0.005,0.01,0.025,0.05,0.1,0.2,0.3,0.4,0.5、
0.6,0.7,0.8,0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、25、50、75、或 100mg/kg 該受試者體重。269.如項(xiàng)259至268中任一項(xiàng)所述的方法，其中該多肽、融合蛋白、二聚體、偶聯(lián)物、融合蛋白二聚體、核酸、載體、和/或細(xì)胞是每天至少一次、每周至少一次、每雙周至少一次、或每月至少一次進(jìn)行給予。270.制備一種多肽的一種方法，該方法包括在一種培養(yǎng)基中培養(yǎng)如項(xiàng)224至230中任一項(xiàng)所述的一種宿主細(xì)胞，并且回收由該細(xì)胞所表達(dá)的多肽。271.制備一種多肽的一種方法，該方法包括:(a)將如項(xiàng)195至212中任一項(xiàng)所述的一種核酸引入到多個(gè)細(xì)胞的一個(gè)群體之中，其中該核酸被可操作地連接到有效生產(chǎn)由該核酸所編碼的多肽的一個(gè)調(diào)節(jié)序列上；(b)在一種培養(yǎng)基中培養(yǎng)這些細(xì)胞以生產(chǎn)該多肽；并且(c)將該多肽從這些細(xì)胞或培養(yǎng)基中分離。272.一種經(jīng)培養(yǎng)的細(xì)胞，其中已引入如項(xiàng)213至223中任一項(xiàng)所述的一種載體。273.一種經(jīng)培養(yǎng)的細(xì)胞，其中已引入如項(xiàng)161至171中任一項(xiàng)所述的一種表達(dá)載體。274.制備一種融合蛋白的一種方法，該方法包括:(I)在一種培養(yǎng)基中培養(yǎng)用一種核酸轉(zhuǎn)化的一種宿主細(xì)胞，其中該核酸包括:(i)一種第一核苷酸序列，該第一核苷酸序列編碼了一種多肽，該多肽具有與選自下組的一個(gè)多肽序列至少95%的一致性，該組的構(gòu)成為:SEQ ID N0S:1至73，該多肽結(jié)合⑶86和/或⑶80、和/或⑶86或⑶80之一的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域，以及(ii) 一個(gè)第二核苷酸序列，該第二核苷酸序列編碼了一種Ig多肽，該Ig多肽包括一個(gè)鉸鏈區(qū)、CH2結(jié)構(gòu)域、以及CH3結(jié)構(gòu)域，該Ig多肽可任選地是人類IgG2Fc，由此表達(dá)了該核酸并且產(chǎn)生了一種融合蛋白；并且(2)回收該融合蛋白。275.如項(xiàng)274所述的方法，其中該核酸進(jìn)一步包括一個(gè)第三核苷酸序列，該第三核苷酸序列編碼了可操作地連接至該融合蛋白上的一種分泌肽或信號(hào)肽，并且該融合蛋白是作為包括相同的第一以及第二融合蛋白的一種二硫鍵合的融合蛋白二聚體而從該宿主細(xì)胞中分泌的，并且該二硫鍵合的融合蛋白二聚體是從該培養(yǎng)基中回收的。276.如項(xiàng)275所述的方法，其中該二硫鍵合的融合蛋白二聚體是經(jīng)由在該第一融合蛋白的一個(gè)半胱氨酸殘基與該第二融合蛋白的一個(gè)半胱氨酸殘基之間的一個(gè)共價(jià)二硫鍵而形成的。277.如項(xiàng)274所述的方法，其中該融合蛋白是從該培養(yǎng)基、宿主細(xì)胞、或宿主細(xì)胞周質(zhì)中回收的。278.一種分離或重組的核酸，該核酸包括一個(gè)核苷酸序列，該核苷酸序列編碼了(i) 一個(gè)第一多肽，該第一多肽包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列具有與選自下組的至少一個(gè)多肽序列至少95%的序列一致性，該組的構(gòu)成為:SEQ ID NOS:1至73，其中該第一多肽結(jié)合CD86和/或CD80、和/或二者之一的或兩者的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域，以及(ii) 一個(gè)第二多肽，該第二多肽包括一種IgG多肽的一個(gè)鉸鏈區(qū)、CH2結(jié)構(gòu)域、以及CH3結(jié)構(gòu)域。279.如項(xiàng)278所述的核酸分子，其中該第二多肽包括SEQ ID NO: 184的多肽序列。280.一種表達(dá)載體，該載體包括如項(xiàng)278或279所述的核酸。281.如項(xiàng)280所述的表達(dá)載體,該表達(dá)載體進(jìn)一步包括一個(gè)第三核苷酸序列，該第三核苷酸序列協(xié)助該第一多肽以及該第二多肽的表達(dá)。282.如項(xiàng)280所述的表達(dá)載體，該表達(dá)載體進(jìn)一步包括一個(gè)第四核苷酸序列，該第四核苷酸序列協(xié)助該第二多肽的表達(dá)，其中該第三以及第四核苷酸序列是相同或不同的。283.一種宿主 細(xì)胞，該宿主細(xì)胞包括如項(xiàng)280、281、或282所述的表達(dá)載體。284.制備一種融合蛋白二聚體的一種方法，該方法包括培養(yǎng)如項(xiàng)283所述的宿主細(xì)胞。285.如項(xiàng)284所述的方法，其中該融合蛋白二聚體是從該宿主細(xì)胞培養(yǎng)基中回收的。286.如項(xiàng)285所述的方法，其中該二聚體是從該宿主細(xì)胞中回收的。287.如項(xiàng)285所述的方法，其中該二聚體是從該宿主細(xì)胞周質(zhì)中回收的。288.抑制由一位受方受試者對(duì)于來(lái)自一個(gè)供方的一個(gè)組織、細(xì)胞、移植物、或器官的移植體的排斥的一種方法，該方法包括對(duì)其有需要的受方受試者給予一個(gè)治療有效量的以下各項(xiàng):(a)如項(xiàng)53至128以及312至313中任一項(xiàng)所述的一種多肽；(b)如項(xiàng)129至133中任一項(xiàng)所述的一種多聚體；(c)如項(xiàng)134至149中任一項(xiàng)所述的一種二聚體；(d)如項(xiàng)150至160中任一項(xiàng)所述的一種偶聯(lián)物；(e)如項(xiàng)161至171以及314至316中任一項(xiàng)所述的一種融合蛋白；(f)如項(xiàng)172至194以及317中任一項(xiàng)所述的一種融合蛋白二聚體；(g)如項(xiàng)195至212中任一項(xiàng)所述的一種核酸；(h)如項(xiàng)213至223中任一項(xiàng)所述的一種載體；和/或(i)如項(xiàng)224至230中任一項(xiàng)所述的一種細(xì)胞；由此抑制該受方受試者對(duì)于該組織、細(xì)胞、移植物、或器官的移植體的排斥。
289.如項(xiàng)288所述的方法，其中將該多肽、融合蛋白、二聚體、多聚體、偶聯(lián)物、融合蛋白二聚體、核酸、載體、和/或細(xì)胞是在組織、細(xì)胞、移植物、或器官的移植之前、同時(shí)、或之后給予該受方受試者的。290.如項(xiàng)288所述的方法，其中該供方以及該受方受試者是相同的物種。291.如項(xiàng)288所述的方法，其中該供方以及該受方受試者是不同的物種。292.如項(xiàng)290所述的方法，其中該供方以及該受方受試者均是人類。293.如項(xiàng)288所述的方法，其中該有效量包括從大約0.001mg/kg該受試者體重至大約200mg/kg該受試者體重。294.如項(xiàng)293所述的方法，其中該有效量包括從大約0.001毫克每千克(mg/kg)該受試者體重到至少約 0.005,0.01,0.05,0.1,0.2,0.25,0.3,0.4,0.5,0.6,0.7,0.8,0.9、
1、2、3、4、5、10、15、25、50、75、100、125、150、或 175 毫克每千克(mg/kg)該受試者體重。295.如項(xiàng)294所述的方法，其中該有效量包括從大約0.001毫克每千克(mg/kg)該受試者體重到至少約0.005,0.01,0.05,0.1,0.2,0.25,0.5、1、2、3、4、或5毫克每千克(mg/kg)該受試者體重。296.如項(xiàng)288所述的方法，其中該多肽、融合蛋白、二聚體、偶聯(lián)物、融合蛋白二聚體、核酸、載體、和/或細(xì)胞是在組織、細(xì)胞、移植物、或器官的移植之后的那天并且在移植之后每周至少一次或每月至少一次，當(dāng)需要時(shí)，達(dá)到12、24、或36或更多個(gè)月而進(jìn)行給予。297.如項(xiàng)288所述的方法，其中該器官移植體是一種腎移植體、肝移植體、肺移植體、或心臟移植體。298.在一位受試者體內(nèi)治療組織、細(xì)胞、移植物、或器官的移植體的排斥的一種方法，該方法包括對(duì)需要這種治療的一位受試者給予一個(gè)治療有效量的以下各項(xiàng):(a)如項(xiàng)53至128以及312至313中任一項(xiàng)所述的一種多肽；(b)如項(xiàng)129至133中任一項(xiàng)所述的一種多聚體；(c)如項(xiàng)134至149中任一項(xiàng)所述的一種二聚體；(d)如項(xiàng)150至160中任一項(xiàng)所述的一種偶聯(lián)物；(e)如項(xiàng)161至171以及314至316中任一項(xiàng)所述的一種融合蛋白；(f)如項(xiàng)172至194以及317中任一項(xiàng)所述的一種融合蛋白二聚體；(g)如項(xiàng)195至212中任一項(xiàng)所述的一種核酸；(h)如項(xiàng)213至223中任一項(xiàng)所述的一種載體；和/或(i)如項(xiàng)224至230中任一項(xiàng)所述的一種細(xì)胞；由此減少或緩解由該受試者對(duì)該組織、細(xì)胞、移植物、或器官的移植體的排斥。299.如項(xiàng)298所述的方法，其中該多肽、融合蛋白、二聚體、多聚體、偶聯(lián)物、融合蛋白二聚體、核酸、載體、和/或細(xì)胞是在組織、細(xì)胞、移植物、或器官的移植之前、同時(shí)、或之后給予該受試者的。300.根據(jù)項(xiàng)53至128以及312至313中任一項(xiàng)所述的一種多肽、項(xiàng)129至133中任一項(xiàng)所述的一種多肽、項(xiàng)134至149中任一項(xiàng)所述的一種二聚體、項(xiàng)150至160中任一項(xiàng)所述的一種偶聯(lián)物、項(xiàng)161至171以及314至316中任一項(xiàng)所述的一種融合蛋白、項(xiàng)172至194以及317中任一項(xiàng)所述的一種融合蛋白二聚體、項(xiàng)195至212中任一項(xiàng)所述的一種核酸、項(xiàng)213至223中任一項(xiàng)所述的一種載體、 或項(xiàng)224至230中任一項(xiàng)所述的一種細(xì)胞，在制造用于在一個(gè)哺乳動(dòng)物體內(nèi)抑制或阻抑一種免疫應(yīng)答的藥物中的用途。301.根據(jù)項(xiàng)300所述的用途，其中該免疫應(yīng)答是一種T細(xì)胞應(yīng)答。302.根據(jù)項(xiàng)53至128以及312至313中任一項(xiàng)所述的一種多肽、項(xiàng)129至133中任一項(xiàng)所述的一種多肽、項(xiàng)134至149中任一項(xiàng)所述的一種二聚體、項(xiàng)150至160中任一項(xiàng)所述的一種偶聯(lián)物、項(xiàng)161至171以及314至316中任一項(xiàng)所述的一種融合蛋白、項(xiàng)172至194以及317中任一項(xiàng)所述的一種融合蛋白二聚體、項(xiàng)195至212中任一項(xiàng)所述的一種核酸、項(xiàng)213至223中任一項(xiàng)所述的一種載體、或項(xiàng)224至230中任一項(xiàng)所述的一種細(xì)胞，在制造用于治療一種免疫系統(tǒng)疾病或紊亂的藥物中的用途。303.根據(jù)項(xiàng)302所述的用途，其中該免疫系統(tǒng)疾病或紊亂是通過在一個(gè)哺乳動(dòng)物體內(nèi)的T細(xì)胞與CD80-陽(yáng)性細(xì)胞和/或CD86-陽(yáng)性細(xì)胞的相互作用而介導(dǎo)的。304.根據(jù)項(xiàng)303所述的用途，其中該免疫系統(tǒng)疾病或紊亂是一種自身免疫疾病或自身免疫紊亂。

305.根據(jù)項(xiàng)302所述的用途，其中該免疫系統(tǒng)疾病或紊亂是選自下組，其構(gòu)成為:關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、幼年型特發(fā)性關(guān)節(jié)炎(JIA)、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)、銀屑病、銀屑病性關(guān)節(jié)炎、糖尿病、幼年型糖尿病、I型糖尿病、多發(fā)性硬化癥、克羅恩病、系統(tǒng)性硬皮病、潰瘍性結(jié)腸炎、炎癥性腸病(IBD)、韋格納氏肉芽腫病病、阿狄森氏病、格雷夫斯氏病、肌風(fēng)濕病、風(fēng)濕性疾病、強(qiáng)直性脊柱炎、重癥肌無(wú)力、以及ANCA-相關(guān)性脈管炎。306.根據(jù)項(xiàng)53至128以及312至313中任一項(xiàng)所述的一種多肽、項(xiàng)129至133中任一項(xiàng)所述的一種多肽、項(xiàng)134至149中任一項(xiàng)所述的一種二聚體、項(xiàng)150至160中任一項(xiàng)所述的一種偶聯(lián)物、項(xiàng)161至171以及314至316中任一項(xiàng)所述的一種融合蛋白、項(xiàng)172至194以及317中任一項(xiàng)所述的一種融合蛋白二聚體、項(xiàng)195至212中任一項(xiàng)所述的一種核酸、項(xiàng)213至223中任一項(xiàng)所述的一種載體、或項(xiàng)224至230中任一項(xiàng)所述的一種細(xì)胞，在制造用于在一個(gè)哺乳動(dòng)物體內(nèi)治療一種組織或器官移植排斥的藥物的用途。307.根據(jù)項(xiàng)53至128以及312至313中任一項(xiàng)所述的一種多肽、項(xiàng)129至133中任一項(xiàng)所述的一種多肽、項(xiàng)134至149中任一項(xiàng)所述的一種二聚體、項(xiàng)150至160中任一項(xiàng)所述的一種偶聯(lián)物、項(xiàng)161至171以及314至316中任一項(xiàng)所述的一種融合蛋白、項(xiàng)172至194以及317中任一項(xiàng)所述的一種融合蛋白二聚體、項(xiàng)195至212中任一項(xiàng)所述的一種核酸、項(xiàng)213至223中任一項(xiàng)所述的一種載體、或項(xiàng)224至230中任一項(xiàng)所述的一種細(xì)胞，在制造用于抑制CD80-陽(yáng)性細(xì)胞和/或CD86-陽(yáng)性細(xì)胞與CD28-陽(yáng)性細(xì)胞和/或CTLA-4-陽(yáng)性T細(xì)胞的相互作用的藥物的用途。308.如項(xiàng)172所述的多肽，其中在氨基酸位置24、30、32、41、50、54、55、56、64、65、70,85,104以及106上的這些氨基酸殘基是與在所述所選擇的多肽序列中的多個(gè)對(duì)應(yīng)位置上的氨基酸殘基相同。309.一種分離或重組的融合蛋白二聚體，該融合蛋白二聚體包括兩個(gè)單體融合蛋白，每個(gè)這種單體融合蛋白包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列具有與選自下組的至少一種多肽序列至少95%的序列一致性，該組的構(gòu)成為:SEQ ID N0S:74至79、197至200、205至214、以及219至222，其中該多肽結(jié)合CD80和/或CD86、和/或它的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域，和/或阻抑一種免疫應(yīng)答。310.一種分離或重組的多肽，該多肽包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列(a)與在SEQID NO:31中所示的多肽序列具有不超過6個(gè)氨基酸殘基的差異，并且(b)包括以下的至少一項(xiàng):在對(duì)應(yīng)于SEQ ID NO:31的位置50的一個(gè)位置上的一個(gè)甲硫氨酸殘基、在對(duì)應(yīng)于SEQID NO:31的位置54的一個(gè)位置上的一個(gè)賴氨酸殘基、在對(duì)應(yīng)于SEQ ID NO:31的位置55的一個(gè)位置上的一個(gè)谷氨酸殘基、在對(duì)應(yīng)于SEQ ID NO:31的位置64的一個(gè)位置上的一個(gè)脯氨酸殘基、在對(duì)應(yīng)于SEQ ID NO: 31的位置65的一個(gè)位置上的一個(gè)絲氨酸殘基、在對(duì)應(yīng)于SEQ ID NO:31的位置70的一個(gè)位置上的一個(gè)苯丙氨酸殘基，其中根據(jù)SEQ ID NO:31對(duì)多個(gè)氨基酸殘基位置進(jìn)行編號(hào)，并且該多肽結(jié)合CD80和/或CD86、和/或二者之一的或兩者的一個(gè)E⑶，和/或抑制一種免疫應(yīng)答。311.一種分離或重組的多肽，該多肽包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列包括⑴與由SEQ ID N0S: 36至46以及55所構(gòu)成的組中選出的一個(gè)多肽序列至少95%的序列一致性，以及(ii) 一個(gè)谷氨酸殘基，該谷氨酸殘基在所述選出的多肽序列的位置70的氨基酸位置上，其中該多肽(i)結(jié)合CD80和/或CD86、或二者之一的或兩者的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域，和/或(ii)阻抑一種免疫應(yīng)答。312.一種分離或重組的多肽，該多肽包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列具有與選自下組的一個(gè)多肽序列至少95%的序列一致性，該組的構(gòu)成為:SEQ ID NO:26,SEQ ID NO:36、SEQ ID NO: 38,SEQ ID NO: 50、以及 SEQ ID NO: 56，其中該多肽(i)結(jié)合 CD80 和 / 或 CD86、或二者之一的或兩者的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域，和/或(ii)阻抑一種免疫應(yīng)答。313.一種分離或重組的多肽，該多肽包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列具有與選自下組的一個(gè)多肽序列至少95%的序列一致性，該組的構(gòu)成為:SEQ ID NOS:74至79、197至200、205至214、以及219至222，其中該多肽(i)結(jié)合⑶80和/或⑶86、或二者之一的或兩者的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域，( )結(jié)合一種⑶80-1g融合蛋白和/或一種⑶86-1g融合蛋白，和/或(i i i )阻抑一種免疫應(yīng)答。314.如項(xiàng)161所述的分離或重組的融合蛋白，所述融合蛋白包括(a) —個(gè)第一多肽，該多肽包括一個(gè)多肽序列， 該多肽序列具有與選自下組的至少一種多肽序列至少95%的序列一致性，該組的構(gòu)成為:SEQ ID NO:26,SEQ ID NO:36,SEQ ID NO:38,SEQ ID NO:50、以及SEQ ID N0:56，以及(b) —個(gè)第二多肽，其中該第二多肽是一種Ig Fe多肽，其中該融合蛋白具有結(jié)合CD80和/或CD86、或二者之一的或兩者的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的能力，和/或調(diào)整或調(diào)節(jié)一種免疫應(yīng)答的能力。315.如項(xiàng)314所述的融合蛋白，其中該Ig Fe多肽是一種野生型人類IgFc多肽或一種突變Ig Fe多肽。316.如項(xiàng)314所述的融合蛋白，其中該Ig Fe多肽是一種人類IgG Fe多肽，該人類IgG2Fc多肽可任選地是人類IgG2Fc多肽。317.一種分離或重組的融合蛋白二聚體，該融合蛋白二聚體包括經(jīng)由至少一個(gè)二硫鍵連接的兩個(gè)單體融合蛋白，該二硫鍵在每個(gè)單體突變?nèi)诤系鞍字写嬖诘膬蓚€(gè)半胱氨酸殘基之間形成，其中每個(gè)單體融合蛋白包括(a) —種多肽，該多肽包括一個(gè)多肽序列，該多肽序具有與選自下組的至少一個(gè)多肽序列至少95%的一致性，該組的構(gòu)成為:SEQ IDNO: 79、SEQ ID NO: 197、SEQ ID NO: 198、SEQ ID NO: 199、以及 SEQ ID NO: 200，以及(b) 一種Ig Fe多肽，其中該融合蛋白二聚體具有(i)結(jié)合CD80和/或CD86、和/或CD80和/或CD86的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的能力，(ii)結(jié)合CD80-1g和/或CD86_Ig的能力，和/或(iii )具有抑制或阻抑一種免疫應(yīng)答的能力。318.如項(xiàng)263所述的方法，其中該免疫系統(tǒng)疾病或紊亂是選自下組，其構(gòu)成為:阿狄森氏病、過敏、斑禿、阿耳茲海默氏病、抗嗜中性細(xì)胞胞質(zhì)抗體(ANCA)-相關(guān)性脈管炎、強(qiáng)直性脊柱炎、抗磷脂綜合征(休斯綜合征)、關(guān)節(jié)炎、哮喘、動(dòng)脈硬化、動(dòng)脈硬化斑塊、自身免疫疾病(例如，狼瘡、RA、MS、格雷夫斯氏病、等等)、自身免疫性溶血性貧血、自身免疫性肝炎、自身免疫性內(nèi)耳病、自身免疫性淋巴增生綜合征、自身免疫性心肌炎、自身免疫性卵巢炎、自身免疫性睪丸炎、無(wú)精子癥、貝切特氏病、貝切特氏綜合征、貝格爾氏病、大皰性類天皰瘡、心肌癥、心血管疾病、口炎性腹瀉/乳糜瀉、慢性疲勞免疫功能障礙綜合征(CFIDS)、慢性自發(fā)性多發(fā)神經(jīng)炎、慢性炎癥性脫髓鞘性多發(fā)性神經(jīng)疾病(CIPD)、慢性復(fù)發(fā)性多發(fā)性神經(jīng)病變(格-巴二氏綜合征)、丘-施二氏血管炎(CSS)、瘢痕性類天皰瘡、冷凝集素病(CAD)、COPD、CREST綜合征、克羅恩病、皰疹樣皮炎、皮肌炎、糖尿病、盤狀狼瘡、濕疹、后天性大皰性表皮松解癥、原發(fā)性混合型冷凝球蛋白血癥、伊凡斯氏綜合征、眼球突出癥、纖維肌痛、古德帕斯徹氏綜合征、移植物相關(guān)性疾病或紊亂、格雷夫斯氏病、GVHD、橋本甲狀腺炎、特發(fā)性肺纖維化、特發(fā)性血小板減少性紫癜(ITP)、IgA腎病、免疫增生性疾病或紊亂(例如，銀屑病)、炎癥性腸病(IBD)、胰島素依賴型糖尿病(IDDM)、間質(zhì)性肺病、幼年型糖尿病、幼年型關(guān)節(jié)炎、幼年型特發(fā)性關(guān)節(jié)炎(JIA)、川崎氏病、朗-伊二氏肌無(wú)力綜合征、扁平苔蘚、狼瘡、狼瘡腎炎、淋巴細(xì)胞性垂體炎、美尼爾氏病、米勒費(fèi)雪綜合征/急性播散性腦脊髓脊神經(jīng)根病、混合性結(jié)締組織病、多發(fā)性硬化癥癥(MS)、肌風(fēng)濕病、肌痛性腦脊髓炎(ME)、重癥肌無(wú)力、眼部炎癥、落葉型天皰瘡、尋常型天皰瘡、惡性貧血、結(jié)節(jié)性多動(dòng)脈炎、多軟骨炎、多腺體綜合征(懷塔克綜合征)、風(fēng)濕性多肌痛、多發(fā)性肌炎、原發(fā)性無(wú)丙種球蛋白血癥、原發(fā)性膽汁性肝硬化/自身免疫性膽道疾病、銀屑病、銀屑病性關(guān)節(jié)炎、雷諾氏現(xiàn)象、萊特爾氏綜合征/反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎、再狹窄、風(fēng)濕熱、風(fēng)濕性疾病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、肉樣瘤病、施密特氏綜合征、硬皮病、斯耶格倫氏綜合癥、實(shí)體器官移植體排斥(腎、心臟、肝、肺、等等)、僵人綜合征、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)、系統(tǒng)性硬皮病、高安氏動(dòng)脈炎、顳動(dòng)脈炎/巨細(xì)胞動(dòng)脈炎、甲狀腺炎、I型糖尿病、II型糖尿病、潰瘍性結(jié)腸炎、眼色素層炎、脈管炎、白癜風(fēng)、韋格納氏肉芽腫病，以及預(yù)防或阻抑與由一位受方受試者對(duì)于一種供方的組織、細(xì)胞、移植物、或器官移植體的排斥相 關(guān)聯(lián)的一種免疫應(yīng)答。319.如項(xiàng)232或233所述的組合物，該組合物包括一個(gè)有效量的以下各項(xiàng):(a)如項(xiàng)53至128以及312至313中任一項(xiàng)所述的一種多肽；(b)如項(xiàng)129至133中任一項(xiàng)所述的一種多聚體；(c)如項(xiàng)134至149中任一項(xiàng)所述的一種二聚體；(d)如項(xiàng)150至160中任一項(xiàng)所述的一種偶聯(lián)物；(e)如項(xiàng)161至171以及314至316中任一項(xiàng)所述的一種融合蛋白；或(f)如項(xiàng)172至194以及317中任一項(xiàng)所述的一種融合蛋白二聚體。320.如項(xiàng)232、233、或319所述的組合物，該組合物包括可將該組合物的pH維持在大約PH3至大約pHIO范圍內(nèi)的一種緩沖劑、水、可任選的一種非離子型洗滌劑、可任選的一種鹽、以及可任選的一種糖醇、單糖、二糖、或多糖。321.如項(xiàng)319至320中任一項(xiàng)所述的組合物，其中該組合物是在生理的pH下。322.如項(xiàng)319至321中任一項(xiàng)所述的組合物，其中該組合物具有從大約4至大約7.5 的 pH。323.如項(xiàng)319至322中任一項(xiàng)所述的組合物，其中該組合物具有從大約5.0至大約7.5的pH。324.如項(xiàng)319至323中任一項(xiàng)所述的組合物，其中該組合物具有大約6.4的pH。325.如項(xiàng)319至323中任一項(xiàng)所述的組合物，其中該組合物具有大約7.4或7.5的pH。326.如項(xiàng)319至325中任一項(xiàng)所述的組合物，其中該緩沖劑是以從大約ImM至大約IOOmM或ImM至大約50mM的濃度而存在。327.如項(xiàng)319至326中任一項(xiàng)所述的組合物，其中該緩沖劑是以大約5mM至大約35mM的濃度而存在。328.如項(xiàng)319至327中任一項(xiàng)所述的組合物，其中該緩沖劑是以大約IOmM至大約25mM的濃度而存在。329.如項(xiàng)319至328中任一項(xiàng)所述的組合物，其中該緩沖劑是以大約20mM的濃度而存在。330.如項(xiàng)319至329中任一項(xiàng)所述的組合物，其中該緩沖劑是選自下組，其構(gòu)成為:一種HEPES緩沖劑、檸檬酸鹽緩沖劑、琥珀酸鹽緩沖劑、乙酸鹽緩沖劑、檸檬酸鹽緩沖齊U、馬來(lái)酸鹽緩沖劑、磷酸緩沖劑、以及Tris緩沖劑。331.如項(xiàng)319至33 0中任一項(xiàng)所述的組合物，其中該緩沖劑是選自下組，其構(gòu)成為:一種HEPES緩沖劑、檸檬酸鈉緩沖劑、以及琥珀酸鈉緩沖劑。332.如項(xiàng)319至331中任一項(xiàng)所述的組合物，其中該pH是大約6.0至大約6.7，并且該緩沖劑是琥珀酸鈉或檸檬酸鈉。333.如項(xiàng)319至332中任一項(xiàng)所述的組合物，其中該pH是大約7.0至大約7.7，并且該緩沖劑是HEPES。334.如項(xiàng)319至333中任一項(xiàng)所述的組合物，其中該組合物包括一種糖醇或糖類，其中該糖類是一種單糖、二糖、或多糖。335.如項(xiàng)319至334中任一項(xiàng)所述的組合物，其中該二糖是蔗糖或海藻糖。336.如項(xiàng)319至335中任一項(xiàng)所述的組合物，其中該組合物包括以大約ImM至大約50mM的濃度而存在的一種鹽。337.如項(xiàng)319至336中任一項(xiàng)所述的組合物，其中該組合物包括以大約20mM的濃
度而存在的一種鹽。338.如項(xiàng)319至337中任一項(xiàng)所述的組合物，其中該組合物包括一種非離子型洗滌劑。339.如項(xiàng)319至338中任一項(xiàng)所述的組合物，其中該組合物包括一種非離子性清潔劑，該非離子型洗漆劑選自下組，其構(gòu)成為:'i'ween -B0、Tween :-60、i'ween -20>
或普流尼克F-68。340.如項(xiàng)319至339中任一項(xiàng)所述的組合物，其中該多肽、多聚體、二聚體、偶聯(lián)物、融合蛋白、或融合蛋白二聚體是以在大約lmg/ml (重量/體積)至大約200mg/ml (重量/體積)的范圍內(nèi)的濃度而存在。341.如項(xiàng)319至340中任一項(xiàng)所述的組合物，其中該多肽、多聚體、二聚體、偶聯(lián)物、融合蛋白、或融合蛋白二聚體是以在大約25mg/ml (重量/體積)至大約100mg/ml (重量/體積)的范圍內(nèi)的濃度而存在。342.如項(xiàng)319至341中任一項(xiàng)所述的組合物，其中該多肽、多聚體、二聚體、偶聯(lián)物、融合蛋白、或融合蛋白二聚體是以一個(gè)濃度而存在，該濃度是在大約50mg/ml (重量/體積)至大約300mg/ml (重量/體積)的范圍內(nèi)的濃度而存在，任選地大約在大約50mg/ml (重量/體積)至大約100mg/ml (重量/體積)的范圍內(nèi)。343.如項(xiàng)319至342中任一項(xiàng)所述的組合物，其中該組合物的多肽、多聚體、二聚體、偶聯(lián)物、融合蛋白、或融合蛋白二聚體的有效量是從大約0.lmg/kg至大約15mg/kg,并且其中將該組合物給予一個(gè)哺乳動(dòng)物。344.如項(xiàng)319至343中任一項(xiàng)所述的組合物，其中該多肽、多聚體、二聚體、偶聯(lián)物、融合蛋白、或融合蛋白二聚體的有效量是從大約0.5mg/kg至大約10mg/kg,并且該組合物是經(jīng)經(jīng)胃腸外給予的。345.如項(xiàng)319至344中任 一項(xiàng)所述的組合物，其中該多肽、多聚體、二聚體、偶聯(lián)物、融合蛋白、或融合蛋白二聚體的有效量是從大約0.5mg/kg至大約5mg/kg,并且可任選的是大約0.5mg/kg,并且該組合物是經(jīng)皮下給予的。346.如項(xiàng)319至345中任一項(xiàng)所述的組合物，其中該多肽、多聚體、二聚體、偶聯(lián)物、融合蛋白、或融合蛋白二聚體的有效量是從大約10mg/kg至大約5mg/kg,并且任選地的是大約0.5mg/kg,并且該組合物是經(jīng)靜脈內(nèi)給予的。347.如項(xiàng)319至346中任一項(xiàng)所述的組合物，其中該多肽、多聚體、二聚體、偶聯(lián)物、融合蛋白、或融合蛋白二聚體包括一個(gè)氨基酸序列，該氨基酸序列具有與SEQ ID NO:36的氨基酸序列至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%的序列一致性。348.如項(xiàng)319至346中任一項(xiàng)所述的組合物，其中該多肽、多聚體、二聚體、偶聯(lián)物、融合蛋白、或融合蛋白二聚體包括一個(gè)氨基酸序列，該氨基酸序列具有與SEQ ID NO:50的氨基酸序列至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%的序列一致性。349.如項(xiàng)319至348中任一項(xiàng)所述的組合物，其中該組合物是無(wú)菌的。350.如項(xiàng)319至348中任一項(xiàng)所述的組合物，其中該組合物是對(duì)血液等滲的。351.如項(xiàng)319至350中任一項(xiàng)所述的組合物，其中該組合物是一種液體組合物。352.如項(xiàng)319至351中任一項(xiàng)所述的組合物，其中該組合物是一種液體或一種經(jīng)干燥的形式，其中該經(jīng)干燥的形式是選自下組，其構(gòu)成為:一種凍干形式、一種風(fēng)干形式、以及一種經(jīng)噴霧干燥的形式。353.如項(xiàng)319至352中任一項(xiàng)所述的組合物，其中該組合物是處于凍干形式。354.一種藥物組合物，該組合物包括:(a) —種多肽，該多肽包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列選自下組，其構(gòu)成為=SEQ ID N0S:36以及50，以在大約I至大約200mg/ml (重量/體積)的濃度范圍而存在；(b) —種緩沖劑，該緩沖劑以大約5mM至大約50mM的濃度具有在大約PH5.0與大約pH8.0之間的緩沖能力；(c)將該組合物達(dá)到一個(gè)指定體積的一種藥學(xué)上可接受的稀釋劑；(d) —種糖，其濃度為按重量計(jì)大約0.5%至大約10% ； (e) 一種鹽，其濃度為大約ImM至大約200mM ； (f)該pH是在大約pH5.0至大約pH8.0的范圍內(nèi)；以及(g)可任選的一種洗滌劑。355.如項(xiàng)354所述的組合物，其中(a)該多肽包括SEQ ID NO: 36的多肽序列，該多肽序列以從大約50mg/ml至大約100mg/ml的濃度而存在；(b)該緩沖劑是HEPES緩沖劑，以大約20mM的濃度存在；(c)該藥學(xué)上可接受的稀釋劑是水；(d)該糖是蔗糖或海藻糖，其濃度為按重量計(jì)2%; (e)該鹽是氯化鈉，其濃度為大約IOOmM:(f)該pH是大約7.4;并且(g)可任選地，該洗滌劑是存在的，其中該洗滌劑是選自下組，其構(gòu)成為:Tween -80,Tween -60、Tween -20、或普流尼克F-68，濃度為小于或等于約0.lmg/ml。356.如項(xiàng)354所述的組合物，其中(a)該多肽包括SEQ ID NO:50的多肽序列，以在從大約50mg/ml至大約100mg/ml的濃度范圍而存在；(b)該緩沖劑是朽1檬酸鈉緩沖劑，以大約20mM的濃度存在；(c)該藥學(xué)上可接受的稀釋劑是水；(d)該糖是蔗糖或海藻糖，其濃度為按重量計(jì)2%; (e)該鹽是氯化鈉，其濃度為大約IOOmM ;(f)該pH是大約6.5;并且(g)可任選的一種洗滌劑，該洗滌劑選自下組，其構(gòu)成為:Tween +-80、Tween -60、Tween⑩-20或普流尼克F-68,其濃度為小于或等于約0.lmg/ml。357.一種藥物組合物，該組合物包括:(a) 一種多肽，該多肽包括一個(gè)氨基酸序列，該氨基酸序列具有與SEQ ID NO: 36的氨基酸序列至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%的序列一致性；以及(b) HEPES緩沖劑。358.一種藥物組合物，該組合物包括:(a) 一種多肽，該多肽包括一個(gè)氨基酸序列，該氨基酸序列具有與SEQ ID NO: 36的氨基酸序列至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%的序列一致性；以及(b) —種藥學(xué)上可接受的賦形劑或一種藥學(xué)上可接受的載體，其中該組合物具有從大約7至大約8的pH。359.根據(jù)項(xiàng)358所述的一種藥物組合物，其中該組合物具有大約7.4的pH。360.根據(jù)項(xiàng)358或359所述的一種藥物組合物，該組合物包括HEPES緩沖劑。361.一種藥物組合物，該組合物包括:(a) 一種多肽，該多肽包括一個(gè)氨基酸序列，該氨基酸序列具有與SEQ ID NO: 50的氨基酸序列至少97%、至少98%、或至少99%的序列一致性；以及(b)檸檬酸 鈉緩沖劑。362.一種藥物組合物，該組合物包括:(a) 一種多肽，該多肽包括一個(gè)氨基酸序列，該氨基酸序列具有與SEQ ID NO: 50的氨基酸序列至少97%、至少98%、或至少99%的序列一致性；以及(b) —種藥學(xué)上可接受的賦形劑或一種藥學(xué)上可接受的載體，其中該組合物具有從大約6至大約7的pH。363.根據(jù)項(xiàng)362所述的一種藥物組合物，其中該組合物具有大約6.5的pH。364.根據(jù)項(xiàng)362或363所述的一種藥物組合物，該組合物包括檸檬酸鈉緩沖劑。365.根據(jù)項(xiàng)所述302的用途，其中該免疫系統(tǒng)疾病或病癥是選自下組，其構(gòu)成為:該免疫系統(tǒng)疾病或紊亂是選自下組，其構(gòu)成為:阿狄森氏病、過敏、斑禿、阿耳茲海默氏病、抗嗜中性細(xì)胞胞質(zhì)抗體(ANCA)-相關(guān)性脈管炎、強(qiáng)直性脊柱炎、抗磷脂綜合征(休斯綜合征)、關(guān)節(jié)炎、哮喘、動(dòng)脈硬化、動(dòng)脈硬化斑塊、自身免疫疾病(例如，狼瘡、RA、MS、格雷夫斯氏病、等等)、自身免疫性溶血性貧血、自身免疫性肝炎、自身免疫性內(nèi)耳病、自身免疫性淋巴增生綜合征、自身免疫性心肌炎、自身免疫性卵巢炎、自身免疫性睪丸炎、無(wú)精子癥、貝切特氏病、貝切特氏綜合征、貝格爾氏病、大皰性類天皰瘡、心肌癥、心血管疾病、口炎性腹瀉/乳糜瀉、慢性疲勞免疫功能障礙綜合征(CFIDS)、慢性自發(fā)性多發(fā)神經(jīng)炎、慢性炎癥性脫髓鞘性多發(fā)性神經(jīng)疾病(CIPD)、慢性復(fù)發(fā)性多發(fā)性神經(jīng)病變(格-巴二氏綜合征)、丘-施二氏血管炎(CSS)、瘢痕性類天皰瘡、冷凝集素病(CAD)、COPD, CREST綜合征、克羅恩病、皰疹樣皮炎、皮肌炎、糖尿病、盤狀狼瘡、濕疹、后天性大皰性表皮松解癥、原發(fā)性混合型冷凝球蛋白血癥、伊凡斯氏綜合征、眼球突出癥、纖維肌痛、古德帕斯徹氏綜合征、移植物相關(guān)性疾病或紊亂、格雷夫斯氏病、GVHD、橋本甲狀腺炎、特發(fā)性肺纖維化、特發(fā)性血小板減少性紫癜(ITP)、IgA腎病、免疫增生性疾病或紊亂(例如，銀屑病)、炎癥性腸病(IBD)、胰島素依賴型糖尿病(IDDM)、間質(zhì)性肺病、幼年型糖尿病、幼年型關(guān)節(jié)炎、幼年型特發(fā)性關(guān)節(jié)炎(JIA)、川崎氏病、朗-伊二氏肌無(wú)力綜合征、扁平苔蘚、狼瘡、狼瘡腎炎、淋巴細(xì)胞性垂體炎、美尼爾氏病、米勒費(fèi)雪綜合征/急性播散性腦脊髓脊神經(jīng)根病、混合性結(jié)締組織病、多發(fā)性硬化癥癥(MS)、肌風(fēng)濕病、肌痛性腦脊髓炎(ME)、重癥肌無(wú)力、眼部炎癥、落葉型天皰瘡、尋常型天皰瘡、惡性貧血、結(jié)節(jié)性多動(dòng)脈炎、多軟骨炎、多腺體綜合征(懷塔克綜合征)、風(fēng)濕性多肌痛、多發(fā)性肌炎、原發(fā)性無(wú)丙種球蛋白血癥、原發(fā)性膽汁性肝硬化/自身免疫性膽道疾病、銀屑病、銀屑病性關(guān)節(jié)炎、雷諾氏現(xiàn)象、萊特爾氏綜合征/反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎、再狹窄、風(fēng)濕熱、風(fēng)濕性疾病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、肉樣瘤病、施密特氏綜合征、硬皮病、斯耶格倫氏綜合癥、實(shí)體器官移植體排斥(腎、心臟、肝、肺、等等)、僵人綜合征、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)、系統(tǒng)性硬皮病、高安氏動(dòng)脈炎、顳動(dòng)脈炎/巨細(xì)胞動(dòng)脈炎、甲狀腺炎、I型糖尿病、II型糖尿病、潰瘍性結(jié)腸炎、眼色素層炎、脈管炎、白癜風(fēng)、韋格納氏肉芽腫病，以及預(yù)防或阻抑與由一位受方受試者對(duì)于一種供方的組織、細(xì)胞、移植物、或器官移植體的排斥相關(guān)聯(lián)的一種免疫應(yīng)答。以下對(duì)本發(fā)明的其他方面進(jìn)行說明。圖式的簡(jiǎn)單說明圖1是質(zhì)粒表達(dá)載體P⑶NA突變CTLA-4-1g的示意圖，它包括編碼了突變CTLA-4-1g融合蛋白的核苷酸序列。在圖1中，每個(gè)突變CTLA-4-1g融合蛋白包括本發(fā)明的一個(gè)突變CTLA-4E⑶多肽，該多肽在其C-端與人類IgG2 (hIgG2) Fe多肽的N-端進(jìn)行融 圖 2A-2D 對(duì)應(yīng)地是示例性 hCD80_Ig、hCD86_Ig、LEA29Y_Ig。以及 hCTLA-4_IgG2融合蛋白的示意圖。示意性地顯示了每個(gè)融合蛋白的信號(hào)肽、細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(ECD)、連接物(如有任何存在)、以及Ig Fe結(jié)構(gòu)域。還顯示了存在于該信號(hào)肽、ECD、連接物(如有任何存在)、與Ig Fe之間的多個(gè)接合處的氨基酸殘基。每個(gè)融合蛋白的信號(hào)肽典型地在加工過程中受到切割，并且因此該分泌(成熟)的融合蛋白典型地并不含有該信號(hào)肽序列。圖2D展示了人類CTLA-4-1gG2 (“hCTLA-4-1gG2”)融合蛋白的示意圖，該融合蛋白包括一個(gè)人類CTLA-4細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(“hCTLA-4E⑶”)，該人類CTLA-4細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域在其C-端與人類IgG2多肽的N-端進(jìn)行共價(jià)融合。這種hCTLA-4-1gG2融合蛋白的預(yù)測(cè)多肽序列示于SEQ IDNO: 161，并且包括以下片段:hCTLA-4信號(hào)肽(氨基酸殘基1_37)、hCTLA_4E⑶多肽(氨基酸殘基38-161 )、以及人類IgG2Fc多肽(氨基酸殘基162-389)。在該hCTLA_4ECD多肽的C-端與該人IgG2Fc的N-端之間不包括連接物(例如，無(wú)氨基酸殘基)。該人類IgG2Fc多肽包括人類IgG2的鉸鏈區(qū)、CH2結(jié)構(gòu)域、以及CH3結(jié)構(gòu)域。在圖2D中，顯示了在這些不同片段之間的接合處上的氨基酸殘基。具體言之，顯示了該信號(hào)肽的后四個(gè)氨基酸殘基、該hCTLA-4ECD多肽的前五個(gè)以及后五個(gè)氨基酸殘基、以及該人類IgG2Fc多肽的前五個(gè)以及后五個(gè)氨基酸殘基。該信號(hào)肽典型地在加工過程中受到切割，并且因此該hCTLA-4_IgG2的分泌融合蛋白(成熟融合蛋白)典型地并不含有該信號(hào)肽序列。這種hCTLA-4-1gG2融合蛋白的成熟或分泌形式的多肽序列示于SEQ ID ΝΟ:162Αστυν-4ΕΟ)多肽的序列包括SEQ ID NO: 162的氨基酸殘基1-124，并且人類IgG2Fc多肽的序列包括SEQ ID NO: 162的氨基酸殘基125-352。在另一個(gè)方面，這種成熟hCTLA-4Ig并不包括C-端賴氨酸(K)殘基，并且因此包括SEQ IDNO: 162的氨基酸殘基1-351。這種成熟hCTLA-4_IgG2融合蛋白(它具有總共352個(gè)氨基酸)包括在SEQ IDNO: 160中所示的全長(zhǎng)WT hCTLA-4蛋白的多肽序列的氨基酸殘基38-389，并且以下氨基酸殘基序列起始:甲硫氨酸-組氨酸-纈氨酸-丙氨酸。若需要，該成熟形式的氨基酸能夠以Met-His-Val-Ala序列的Met起始來(lái)編號(hào)，將Met指定為第一殘基(例如，該E⑶包括編號(hào)為1-124的氨基酸殘基)，如在SEQ ID NO: 162中。成熟hCTLA_4IgG2是典型地在以下所說明的實(shí)例的測(cè)定中使用的融合蛋白形式，除非另有指明。編碼了這種hCTLA-4-1gG2融合蛋白(它包括與hIgG2Fc多肽相融合的hCTLA-4ECD)的DNA序列示于SEQ ID NO: 163。圖3表示以下蛋白的SDS/PAGE分析:不同質(zhì)量的分子量標(biāo)記物(千道爾頓(kDa))(第I道);基于克隆D3的本發(fā)明的示例性突變CTLA-4-1g融合蛋白(B卩，D3_IgG2)(第2道)；基于克隆D4的一個(gè)示例性突變CTLA-4-1g融合蛋白(即，D4-1gG2)(第3道);以及OrenciaS:(Abatacept)融合蛋白(第 4 道)(Bristol-Myers Squibb C0., Princeton, NJ)。圖4表示本發(fā)明的一種示例性突變CTLA-4-1g融合蛋白(即，D3_IgG2)由SEC分析獲得的洗脫圖，證明本發(fā)明的突變CTLA-4-1g融合蛋白在從瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的COS細(xì)胞中純化時(shí)在尺寸上是同質(zhì)的。圖5顯示了以下融合蛋白與h⑶86-1g的結(jié)合的典型Biacore 分析:Orencia 融合蛋白、LEA29Y-lg、以及D3-lgG2。該分析的解離相以由箭頭標(biāo)記的時(shí)間開始。Orenda 融合蛋白(它是由融合了突變IgGlFc結(jié)構(gòu)域多肽的野生型人類CTLA-4ECD多肽構(gòu)成)有效地充當(dāng)一種野生型人類CTLA-4-1g對(duì)照物。本發(fā)明的一種突變CTLA-4-1g融合蛋白(如，D3-1gG2，它與Orcncia, 融合蛋白相比具有與CD86_Ig相結(jié)合的更高的親和力)與Orencia 融合蛋白相比具有更慢的從⑶86-lg中解離的速率。

圖6是涉及本發(fā)明的示例性突變CTLA-4-1g融合蛋白(D3-04_IgG2、D3_ll_IgG2、D3-12-1gG2、D3-14-1gG2)的PBMC增殖抑制測(cè)定(使用抗-⑶3抗體刺激)結(jié)果的圖示。這些測(cè)定顯示，與Orencia 以及LEA29Y-1g相比，本發(fā)明的突變CTLA-4-1g融合蛋白在體外抑制T細(xì)胞增殖方面是顯著地更加有效的。圖7是涉及本發(fā)明的多個(gè)突變CTLA-4-1g融合蛋白的示例性組的⑶4+T細(xì)胞增殖抑制測(cè)定(使用抗-CD3刺激以及hB7.2-依賴的共刺激)的圖示。將Orencia 以及LEA29Y-1g融合蛋白包括為對(duì)照物用于進(jìn)行比較。圖8是涉及本發(fā)明的多個(gè)突變CTLA-4-1g融合蛋白的示例性組的PBMC增殖抑制分析(使用Pro抗原刺激)的圖示。將Orencia 以及LEA29Y-lg融合蛋白包括為對(duì)照物用于進(jìn)行比較。圖9是涉及本發(fā)明的一個(gè)示例性突變CTLA-4-1g融合蛋白D3_IgG2的單向混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR)增殖抑制測(cè)定的圖示。將Orenda 及LEA29Y-1g融合蛋白包括為對(duì)照物用于進(jìn)行比較。圖10是顯示本發(fā)明的一個(gè)示例性突變CTLA-4-1g融合蛋白的結(jié)構(gòu)的示意圖。示意性地顯示了兩個(gè)相同的單體突變CTLA-4-1g融合蛋白，各自包括一個(gè)成熟突變CTLA-4E⑶，該E⑶在其C-端與人類IgG2Fc多肽的N-端進(jìn)行融合。每個(gè)人類IgG2多肽包括一個(gè)IgG2鉸鏈區(qū)、CH2結(jié)構(gòu)域。以及CH3結(jié)構(gòu)域。還顯示了存在于該E⑶與Ig Fe多肽之間的多個(gè)接合處的示例性氨基酸殘基。在這些成分之間的接合處上的氨基酸殘基可以不同，這取決于該突變CTLA-4E⑶多肽序列和/或Ig多肽序列。這種二聚體融合蛋白是由至少一個(gè)二硫鍵的形成而產(chǎn)生，該二硫鍵在這兩個(gè)單體中類似位置上的半胱氨酸殘基之間形成。潛在性地涉及在這兩個(gè)單體之間形成二硫鍵的半胱氨酸(C)殘基以星號(hào)進(jìn)行標(biāo)記。每個(gè)單體融合蛋白的信號(hào)肽典型地在加工過程中受到切割，并且因此該分泌(成熟)融合蛋白典型地并不包括該信號(hào)肽序列。圖11是涉及hCTLA-4-1gG2、Orenda 以及LEA29Y-1g融合蛋白的CD4+T細(xì)胞增殖抑分析(使用抗-CD3刺激以及hB7.2-依賴性共刺激)的圖示。圖12A-12F表示野生型人類CTLA-4細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的多肽序列(在該圖中稱為“hCTLA4E⑶”)、該LEA29Y多肽的多肽序列(在該圖中稱為“LEA29YE⑶”)、與本發(fā)明的示例性突變CTLA-4E⑶多肽的多肽序列的比對(duì)。本發(fā)明的這些突變CTLA-4E⑶多肽的克隆名稱示于左側(cè)。與在野生型人類CTLA-4ECD多肽中的氨基酸序列相同的氨基酸殘基以句點(diǎn)(.)指明。圖13表示一個(gè)BL0SUM62矩陣。圖14(A-D)顯示 針對(duì)兩個(gè)氨基酸序列的示例性比對(duì)以及通過手動(dòng)計(jì)算所確定所確定的比對(duì)得分。圖15A-15B顯示在大鼠體內(nèi)以lmg/kg作為一個(gè)單一(A)靜脈(IV)團(tuán)藥或(B)皮下(SC)注射所給予的OrenciaS:融合蛋白、人類CTLA-4-1gG2、以及本發(fā)明的代表性突變CTLA-4-1gG2融合蛋白的藥物動(dòng)力學(xué)(PK)曲線。本發(fā)明的詳細(xì)說明定義還應(yīng)當(dāng)理解的是，本文中所用的術(shù)語(yǔ)僅是處于說明聚體的實(shí)施方案的目的并且并不旨在進(jìn)行限制。除非另外定義，本文中所用的所有技術(shù)及科學(xué)術(shù)語(yǔ)具有與本發(fā)明所涉及的領(lǐng)域內(nèi)的普通技術(shù)人員所通常理解的意義相同的意義。術(shù)語(yǔ)“核酸”以及“多核苷酸”是可互換使用的以便是指處于單或雙股形式的多個(gè)核酸殘基(例如，脫氧核糖核苷酸或核糖核苷酸)的聚合物。除非明確限定，這些術(shù)語(yǔ)涵蓋了含有天然核苷酸的已知類似物的核酸，這些核酸與參比核酸具有類似的結(jié)合特性，并且可以按照與天然發(fā)生的核苷酸相類似的方式進(jìn)行代謝。除非另有指明，一種具體的核酸序列還暗示性地涵蓋它的多個(gè)保守性修飾的變體(例如，簡(jiǎn)并密碼子的取代)以及互補(bǔ)的核苷酸序列，連同明確指明的序列。確切地，簡(jiǎn)并密碼子的取代可通過產(chǎn)生多個(gè)序列而達(dá)到，在這些序列中一個(gè)或多個(gè)所選擇(或全部)的密碼子的第三位置被混合的堿基和/或脫氧肌苷殘基取代(Batzer et al., Nucleic Acid Res.19:5081 (1991) ；0htsuka et al., J.Biol.Chem.260:26052608 (1985);及 Cassol et al.(1992) ；Rossolini et al., Mol.Cell.Probes8:9198 (1994))。術(shù)語(yǔ)核酸或多核苷酸是與cDNA或由一個(gè)基因所編碼的mRNA互換使用的。
術(shù)語(yǔ)“基因”廣泛地是指與一種生物功能相關(guān)聯(lián)的任何核酸片段(例如，DNA)。一個(gè)基因可包括它們的表達(dá)所要求的一個(gè)編碼序列和/或調(diào)節(jié)序列。一個(gè)基因還可包括一個(gè)或多個(gè)未經(jīng)表達(dá)的DNA核酸片段，這個(gè)或這些片段(例如)形成了其他的一種或多種蛋白的識(shí)別序列(例如，啟動(dòng)子、增強(qiáng)子、或其他調(diào)節(jié)區(qū)域)。一個(gè)基因可獲自不同的來(lái)源，包括從所感興趣的來(lái)源中克隆或從已知的或預(yù)測(cè)的序列信息而合成，并且可包括一個(gè)或多個(gè)經(jīng)設(shè)計(jì)以具有所希望的參數(shù)的序列。術(shù)語(yǔ)“多肽”、“肽”、以及“蛋白”是互換使用的以便是指多個(gè)氨基酸殘基的聚合物。這些術(shù)語(yǔ)應(yīng)用至多個(gè)氨基酸聚合物上，在這些氨基酸聚合物中一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基是一種對(duì)應(yīng)的自然發(fā)生氨基酸的一個(gè)人工化學(xué)模擬物，連同自然發(fā)生的氨基酸聚合物以及非自然發(fā)生的氨基酸聚合物。如在本文中所使用的，這些術(shù)語(yǔ)涵蓋了任何長(zhǎng)度的氨基酸鏈，包括全長(zhǎng)蛋白(即，抗原)，其中這些氨基酸殘基是由共價(jià)肽鍵連接的。一種給定的氨基酸聚合物或核酸聚合物的編號(hào)“對(duì)應(yīng)于”或是“相對(duì)”一種所選擇的氨基酸聚合物或核酸聚合物的編號(hào)，當(dāng)任何給定的聚合物組分(例如，氨基酸、核苷酸，也通稱為“殘基”)的位置是參比所選擇的氨基酸或核酸聚合物的一個(gè)相同或等效位置而指定，而并非由在該給定聚合物中該組分的實(shí)際編號(hào)位置而指定。因此，例如，一個(gè)給定氨基酸位置在一個(gè)給定多肽序列中的編號(hào)對(duì)應(yīng)于在用作一個(gè)參比序列的一個(gè)所選多肽序列中的相同或等效的氨基酸位置。在本文中，一個(gè)“等效位置”(例如，一個(gè)“等效氨基酸位置”或“等效核酸位置”或“等效殘基位置”)被定義為一種試驗(yàn)多肽(或試驗(yàn)多核苷酸)序列的一個(gè)位置(如，一個(gè)氨基酸位置或核酸位置或殘基位置)，該位置當(dāng)使用在本文中所說明的比對(duì)算法進(jìn)行比對(duì)(優(yōu)選的是最佳比對(duì))時(shí)與參比多肽(或參比多核苷酸)序列的一個(gè)對(duì)應(yīng)位置金進(jìn)行比對(duì)。該試驗(yàn)多肽序列的等效氨基酸位置并不需要具有與該試驗(yàn)多肽的對(duì)應(yīng)位置相同的數(shù)字位置號(hào)。同樣，該試驗(yàn)多核苷酸序列的等效核酸位置并不需要具有與該試驗(yàn)多核苷酸的對(duì)應(yīng)位置相同的數(shù)字位置號(hào)。 一種“突變”多肽包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列與一種親本或參比多肽的多肽序列(例如，一種野生型(WT)多肽序列)具有一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基差異。在一個(gè)方面，一種突變多肽包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列與一種親本或參比多肽的多肽序列具有該親本或參比多肽序列殘基總數(shù)的從大約 1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、20%、30%、40%、50%、或更多的差異。在另一個(gè)方面，一種突變多肽包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列具有與一種親本或參比多肽的多肽序列至少約50%、60%、70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或 99% 的序列一致性。在另一個(gè)方面，一種突變多肽包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列與一種親本或參比多肽的多肽序列具有從I至 100個(gè)或更多的氨基酸殘基(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20個(gè)、或更多的氨基酸殘基)差異。一種突變多肽可包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列與一種親本或參比多肽的多肽序列具有通過(例如)該親本或參比多肽的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20個(gè)、或更多的氨基酸殘基)的缺失、添加、或取代、或這種或這些缺失、插入、和/或取代的任何組合所造成的差異。該參比或親本多肽其本身可以是一種突變多肽。一種“突變”核酸包括一個(gè)核苷酸序列，該核苷酸序列與一種親本或參比核酸(如，一種WT核酸)的核苷酸序列具有一個(gè)或多個(gè)核酸殘基差異。在一個(gè)方面，一種突變核酸包括一個(gè)核苷酸序列，該核苷酸序列與一種親本或參比核酸的核苷酸序列具有該親本或參比核苷酸序列殘基總數(shù)的從大約 1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、20%、30%、40%、50%、或更多的差異。在另一個(gè)方面，一種突變核酸包括一個(gè)核苷酸序列，該核苷酸序列具有與一種親本或參比核酸的核苷酸序列至少約50%、60%、70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或 99% 的序列一致性。在另一個(gè)方面，一種突變核酸包括一個(gè)核苷酸序列，該核苷酸序列與一種親本或參比核酸的核苷酸序列具有從I至100個(gè)或更多的核苷酸殘基(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20個(gè)、或更多的核苷酸殘基)差異。一種突變核酸可包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列與一種親本或參比多肽的多肽序列具有通過(例如)該親本或參比多肽的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20個(gè)、或更多的氨基酸殘基)的缺失、添加、或取代、或這種或這些缺失、插入、和/或取代的任何組合所造成的差異。在一種核酸中的一個(gè)突變還可以產(chǎn)生于一個(gè)可替代的切割或核苷酸的平截或在核苷酸的加工或切割中的錯(cuò)誤。該參比或親本核酸其本身可以是一種突變核酸?！白匀话l(fā)生”當(dāng)應(yīng)用至受試者時(shí)意味著該受試者在自然中被發(fā)現(xiàn)而不同于由人類人工生產(chǎn)的?！胺亲匀话l(fā)生”當(dāng)應(yīng)用至受試者時(shí)意味該受試者不是自然發(fā)生的(即，該受試者不可能在自然中被發(fā)現(xiàn))。例如，一種非自然發(fā)生的多肽是指由人制備的一種多肽，例如，通過體外合成或人工制備。所感興趣的一個(gè)序列的一個(gè)“亞序列”或“片段”是該完整序列的任何部分，達(dá)到但不包括所感興趣的完整序列。一種核酸、蛋白或其他組分當(dāng)它部分地或徹底地與和它正常結(jié)合的多個(gè)組分(其他蛋白、核酸、細(xì)胞、合成試劑、等等)分開時(shí)是“分離的”。在摩爾基礎(chǔ)上，在一個(gè)組合物中一種分離的種類比其他種類更為大量的。例如，該分離的種類可包括存在的所有大分子種類的至少約 50%、70%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或 100%(在摩爾基礎(chǔ)上)。優(yōu)選地，所感興趣的種類被純化達(dá)到實(shí)質(zhì)的均質(zhì)性(即，在該組合物中污染物種類不能通過常規(guī)的檢測(cè)方法檢測(cè)到)。純度和均質(zhì)性可使用本領(lǐng)域中所熟知的多種技術(shù)確定，如，蛋白或核酸樣本的瓊脂糖或聚丙烯酰胺凝膠電泳，之后跟對(duì)染色、然后立即顯像。若希望，可使用一種高分辨率的技術(shù)，如高效液相層析(HPLC)或一種類似手段用于材料的純化。術(shù)語(yǔ)“純化的”當(dāng)應(yīng)用至核酸或多肽上時(shí)總體上代表一種核酸或多肽，該核酸或多肽基本上不含其他組分，如通過本領(lǐng)域所熟知的分析技術(shù)所確定(例如，一種純化的多肽或多核苷酸在電泳膠、色譜洗脫液、和/或經(jīng)受密度梯度離心的媒質(zhì)中形成一個(gè)離散的條帶)。例如，在凝膠電泳中產(chǎn)生基本上一個(gè)條帶的核酸或多肽是“純化的”。一種純化的核酸或多肽是至少約50%純度，通常是至少約75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、99.5%,99.6%,99.7%,99.8%、或更加純的(例如，在摩爾基礎(chǔ)上按重量計(jì)的百分比)。在一個(gè)相關(guān)的意義上，本發(fā)明提供了使組合物富含一種或多種本發(fā)明的分子的方法，如本發(fā)明的一種或多種多肽或多核苷酸。當(dāng)在應(yīng)用一種純化或富集技術(shù)之后一種分子的濃度存在著一種實(shí)質(zhì)的增加時(shí)，一種組合物即富含該分子。一種實(shí)質(zhì)上純的多肽或多核苷酸將典型地包括按重量計(jì)(在摩爾基礎(chǔ)上)在一個(gè)具體組合物中所有大分子種類的至少約 55%、60%、70%、80%、85%、90% 、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98、99%、99.5% 或更多。一種核酸或多肽當(dāng)它是人工或工程處理的，或衍生自一種人工或工程處理的蛋白或核酸時(shí)是“重組”的。術(shù)語(yǔ)“重組”當(dāng)針對(duì)一種細(xì)胞使用時(shí)，典型地是指該細(xì)胞復(fù)制了一種異源核酸或表達(dá)了一種由異源核酸編碼的多肽。重組細(xì)胞可包括不會(huì)在天然(非重組)形式的細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的基因。重組細(xì)胞還包括以下細(xì)胞，這些細(xì)胞包括在天然形式的細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的基因，但這些基因被修飾或通過人工手段重新引入該細(xì)胞中。該術(shù)語(yǔ)還涵蓋了以下細(xì)胞，這些細(xì)胞包括對(duì)于該細(xì)胞為內(nèi)源性的一種核酸，該核酸已經(jīng)得到修飾，未將該核酸從該細(xì)胞中去除；此類修飾包括通過基因置換、位點(diǎn)特異性突變、以及本領(lǐng)域中的普通技術(shù)人員已知的相關(guān)技術(shù)所獲得的那些。重組DNA技術(shù)包括用于在體外生產(chǎn)重組DNA，并將該重組DNA轉(zhuǎn)移至它可表達(dá)或擴(kuò)增的細(xì)胞中、由此產(chǎn)生一種重組多肽的技術(shù)。一個(gè)“重組表達(dá)盒”或簡(jiǎn)稱為“表達(dá)基因盒”是一種重組地或合成地產(chǎn)生的核酸構(gòu)建體，具有可以在與此 類序列兼容的宿主中影響一個(gè)結(jié)構(gòu)基因表達(dá)的多個(gè)核酸元件。表達(dá)基因盒包括至少啟動(dòng)子以及可任選地的轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)。典型地，該重組表達(dá)盒包括一種有待轉(zhuǎn)錄的核酸(例如，編碼一種所希望的蛋白的核酸)以及一個(gè)啟動(dòng)子。在影響表達(dá)方面所需或有幫助的額外的因子也可如本文所說明進(jìn)行使用。例如，一個(gè)表達(dá)基因盒也可包括多個(gè)核苷酸序列，這些核苷酸序列編碼了指導(dǎo)一種表達(dá)的蛋白從宿主細(xì)胞中分泌的信號(hào)序列。轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)、增強(qiáng)子、以及影響基因表達(dá)的其他核酸序列也可包括于一個(gè)表達(dá)基因盒中。如在本文中所使用的，一個(gè)“外源核酸”、“外源DNA片段”、“異源序列”、或“異源核酸”是源自于對(duì)該具體的宿主細(xì)胞而言為外來(lái)的來(lái)源的，或者若來(lái)自相同的來(lái)源，則是從其起始形式修飾的。因此，在一個(gè)宿主細(xì)胞中的異源基因包括對(duì)于該具體的宿主細(xì)胞為內(nèi)源性的、但已經(jīng)過修飾的基因。在本文所說明的應(yīng)用中一個(gè)異源序列的修飾典型地是通過使用定向分子進(jìn)化法而發(fā)生的。因此，該術(shù)語(yǔ)是指一個(gè)DNA片段，該DNA片段對(duì)于該細(xì)胞是外來(lái)的或外源的，或?qū)τ谠摷?xì)胞是同源的，但在該宿主細(xì)胞核酸中的位置是原始無(wú)法發(fā)現(xiàn)該元件的。將外源核酸或外源DNA表達(dá)以產(chǎn)生外源多肽。一個(gè)“載體”可以是能夠在宿主細(xì)胞中遞送或維持一種核酸的任何試劑，例如但不限于:質(zhì)粒(例如，DNA質(zhì)粒)、裸核酸、病毒載體、病毒、與一種或多種多肽或其他分子絡(luò)合的核酸、連同固定在固相顆粒上的核酸。載體在以下進(jìn)行詳細(xì)說明。一個(gè)載體可用作一種試劑用于在宿主細(xì)胞中遞送或維持一個(gè)外源基因和/或蛋白。一個(gè)載體能夠轉(zhuǎn)導(dǎo)、轉(zhuǎn)染、或轉(zhuǎn)化一種細(xì)胞，由此造成該細(xì)胞復(fù)制或表達(dá)核酸和/或蛋白(處理對(duì)于該細(xì)胞而言并非天然的那些)，或以該細(xì)胞而言非屬天然的方式復(fù)制或表達(dá)核酸和/或蛋白。一個(gè)載體可包括協(xié)助一種核酸進(jìn)入該細(xì)胞的材料，如，一種病毒顆粒、脂質(zhì)體、蛋白涂層、或類似物?？墒褂脤⒁环N核酸遞送至該細(xì)胞中的任何方法；除非另有指明，術(shù)語(yǔ)載體并不是指將一種核酸遞送至一個(gè)細(xì)胞中的任何具體方法，或者并不是指任何具體的細(xì)胞類型是轉(zhuǎn)導(dǎo)的受試者。本發(fā)明并不限于用于遞送或維持本發(fā)明的任何核酸的任何特定載體，該核酸包括(例如)編碼了本發(fā)明的一種突變CTLA-4多肽或它的一個(gè)片段(例如，突變CTLA-4E⑶)的一種核酸，該核酸結(jié)合⑶80和/或⑶86或它的一個(gè)片段(例如，一個(gè)⑶80E⑶或⑶86E⑶)的。術(shù)語(yǔ)“表達(dá)載體”典型地是指重組地或合成地產(chǎn)生的一個(gè)核酸構(gòu)建體或序列，具有一系列的特定核酸元件，它允許將一種特定核酸轉(zhuǎn)錄至宿主細(xì)胞中。該表達(dá)載體典型地包括有待轉(zhuǎn)錄的、可操作地連接到一個(gè)啟動(dòng)子上的一種核酸。術(shù)語(yǔ)“表達(dá)”包括涉及生產(chǎn)這種多肽的任何步驟，包括但不限于:轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)錄后修飾、翻譯、翻譯后修飾、和/或分泌。一種“信號(hào)肽”是一個(gè)肽(或氨基酸)序列，該序列典型地是在所感興趣的一種多肽之前，并且與該多肽共同進(jìn)行翻譯，并且指導(dǎo)或協(xié)助該多肽進(jìn)入分泌系統(tǒng)。一種信號(hào)肽典型地是與所感興趣的多肽的氨基端共價(jià)地附連或融合的，并且協(xié)助所感興趣的多肽從宿主細(xì)胞中的分泌。該信號(hào)肽典型地在翻譯之后從所感興趣的多肽中切割。術(shù)語(yǔ)“編碼”是指一種核苷酸對(duì)一個(gè)或多個(gè)氨基酸進(jìn)行編碼的能力。該術(shù)語(yǔ)并不需要一個(gè)起始或終止密碼子。一個(gè)氨基酸序列可以在一個(gè)多核苷酸序列及其互補(bǔ)體所提供的六個(gè)不同讀框中的任何一個(gè)進(jìn)行編碼。術(shù)語(yǔ)“對(duì)照序列”在本文中進(jìn)行定義以便包括對(duì)于表達(dá)本發(fā)明的一種多肽而言是必需的或有利的所有組分。每個(gè)對(duì)照序列可以是對(duì)于編碼該多肽的核苷酸序列而言是天然或外來(lái)的。此類對(duì)照序列包括但不限于:一個(gè)引導(dǎo)子(leader)、多腺苷酸序列、前肽序列、啟動(dòng)子、信號(hào)肽序列、以及轉(zhuǎn)錄終止子。在最小限度，一個(gè)對(duì)照序列包括一個(gè)啟動(dòng)子，以及轉(zhuǎn)錄的和翻譯的終止信號(hào)。這些對(duì)照序列可以與多個(gè)連接物一起提供，這是出于引入特異的限制性位點(diǎn)的目的，這些位點(diǎn)協(xié)助了這些對(duì)照序列與編碼了一種多肽的核苷酸序列的編碼區(qū)域的連接作用。術(shù)語(yǔ)“編碼序列”是指一種核苷酸序列，該核苷酸序列直接指定了其蛋白產(chǎn)物的氨基酸序列。這個(gè)編碼序列的邊界總體上是由一個(gè)開放讀框(ORF)確定的，它可起始于ATG起始密碼子。一種核酸當(dāng)它被放置在與另一種核酸序列的功能性關(guān)系中時(shí)是與另一種核酸序列“可操作地連接”的。例如，一個(gè)啟動(dòng)子或增強(qiáng)子是可操作地連接到一個(gè)編碼序列上，若它指導(dǎo)了該編碼序列的轉(zhuǎn)錄?？刹僮鞯剡B接意 思是所連接的這些DNA序列典型地是鄰近的，并且在必需結(jié)合兩個(gè)蛋白編碼區(qū)域時(shí)是鄰近的并且在閱讀框中。然而，因?yàn)樵鰪?qiáng)子總體上在距離該啟動(dòng)子幾千個(gè)堿基時(shí)發(fā)揮作用并且內(nèi)含子序列可具有可變化的長(zhǎng)度，一些多核苷酸元件可以是可操作地連接的但并非鄰近的。一種“宿主細(xì)胞”是任何易于用一種核酸轉(zhuǎn)化的細(xì)胞?！耙粋€(gè)多核苷酸序列的基本上全長(zhǎng)”或“一個(gè)多肽序列的基本上全長(zhǎng)”對(duì)應(yīng)地是指一個(gè)多核苷酸序列或多肽序列長(zhǎng)度的至少約50%、60%、70%、75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、99.5% 或更多。一種“抗原”是指一種物質(zhì)，它與由特異性免疫原所刺激的免疫應(yīng)答的這種或這些
廣物進(jìn)7TT反應(yīng)。見，如，Julius Cruse et al.，Atlas of Immunology60 (1999)
,Richard Coicci et al., Immunology.-^
Shoet Couese27-30 (5th ed.2003)。一種免疫應(yīng)答可包括一種體液應(yīng)答和/或一種細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答(例如，細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL))。免疫應(yīng)答的產(chǎn)物可包括抗體和/或CTL?？乖湫偷厥谴蠓肿?例如，多肽、核酸、碳水化合物絡(luò)合物、磷脂、多糖類)，這些大分子對(duì)于該宿主而言是外來(lái)的；被稱為抗原決定簇的抗原的部分與該免疫應(yīng)答的這種或這些產(chǎn)物進(jìn)(如一種抗體或在T淋巴細(xì)胞上的特異性T細(xì)胞受體)行反應(yīng)(例如，與它或它們結(jié)合)。一種抗原可以(但非必需)誘發(fā)一種免疫應(yīng)答并且與該免疫應(yīng)答的這種或這些產(chǎn)物進(jìn)行反應(yīng)。“抗原性”是指具有抗原性的狀態(tài)或特性一即，具有一種抗原的特性。一種抗原的特異性可以顯示在一種抗原與它的抗體(反之亦然)的關(guān)系中；一種抗原典型地以高度特異的方式與其對(duì)應(yīng)的抗體進(jìn)行反應(yīng)，并且并不會(huì)以相同程度的特異性與由該免疫原所誘發(fā)的其他抗體進(jìn)行反應(yīng)。一個(gè)“抗原量”是一種抗原的量，該抗原與由一種特異性免疫原所激發(fā)的免疫應(yīng)答的這種或這些產(chǎn)物進(jìn)行可檢測(cè)地反應(yīng)。一種“免疫原”是指一種物質(zhì)，它可誘發(fā)一種免疫應(yīng)答而非免疫耐受。見，如，JuuusCeuse et al.，以上說明文獻(xiàn)于60-61 ；R
ICHAED C0ICOj
以上說明文獻(xiàn)于27-30。免疫原還與所誘發(fā)的免疫應(yīng)答的這種或這些產(chǎn)物進(jìn)行反應(yīng)(例如，結(jié)合)，這種或這些產(chǎn)物已經(jīng)特異地誘對(duì)抗這些抗原。因此，所有的免疫原都是抗原?！懊庖咴浴笔侵妇哂忻庖咴缘臓顟B(tài)或特性-即，具有一種免疫原的特性。一個(gè)“免疫原量”是有效誘發(fā)一種可檢測(cè)的免疫應(yīng)答的一種免疫原的量。一種免疫原可在受試者體內(nèi)弓I起一種強(qiáng)免疫應(yīng)答,如對(duì)于至少一種病原的至少部分或完整的保護(hù)性免疫力。一種“免疫調(diào)節(jié)劑”或“免疫調(diào)節(jié)性”分子(如，一種免疫調(diào)節(jié)性多肽或核酸)調(diào)整了免疫應(yīng)答。提及“調(diào)整”一種免疫應(yīng)答或?qū)ζ洹斑M(jìn)行調(diào)整”是指該免疫應(yīng)答被改變。例如，在一位受試者體內(nèi)“調(diào)整”一種免疫應(yīng)答或?qū)ζ洹斑M(jìn)行調(diào)整”總體上是指在該受試者體內(nèi)激發(fā)、誘發(fā)、抑制、降低、阻抑、增加、增強(qiáng)、或以其他方式改變一種免疫應(yīng)答。一種免疫應(yīng)答的這種調(diào)整可以通過本領(lǐng)域中的普通技術(shù)人員已知的方法進(jìn)行評(píng)估，包括以下所說明的那些。一種“免疫抑制藥”或“免疫抑制劑”是一種分子，如多肽或核酸，它阻抑一種免疫應(yīng)答。如在本文中所使用的，一種“抗體”(縮寫為“Ab”)是指一種免疫球蛋白(縮寫為“Ig”)，不論是天然的或全部或部分地合成產(chǎn)生的。該術(shù)語(yǔ)包括它的所有衍生物，這些衍生物維持了針對(duì)一種抗原的特異性結(jié)合能力。該術(shù)語(yǔ)還涵蓋具有一個(gè)結(jié)合結(jié)構(gòu)域的任何蛋白，該結(jié)合結(jié)構(gòu)域與一種免疫球蛋白結(jié)合結(jié)構(gòu)域是同源的或大致是同源的。此類蛋白可衍生于天然來(lái)源，或部分地或全部合成產(chǎn)生。一種抗體可以是單克隆的或多克隆的。一種抗體可以是任何免疫球蛋白類別的一個(gè)成員，包括以下五個(gè)人類類別中的任何一個(gè)=IgA (它包括亞型IgAl以及IgA2) 、IgD、IgE、IgG (它包括亞型IgGU IgG2、IgG3、以及IgG4)以及IgM。抗體包括成對(duì)的重以及輕多肽鏈，并且每個(gè)這種鏈?zhǔn)怯蓡蝹€(gè)的免疫球結(jié)構(gòu)域構(gòu)成的。每條鏈包括一個(gè)恒定(C)區(qū)以及一個(gè)可變(V)區(qū)。一種典型的抗體結(jié)構(gòu)單元包括一個(gè)四聚體。每個(gè)四聚體是由兩組相同的多肽鏈對(duì)構(gòu)成的，每個(gè)對(duì)具有一條“輕”鏈(大約25kDa)以及一條“重”鏈(大約50_70kDa)。重鏈以五種主要類型(Υ、μ、δ、α、以及ε)存在，這取決于該抗體的類型，并且含有大約450至600個(gè)氨基酸殘基。輕鏈具有兩種主要類型(λ和K )，并且含有大約230個(gè)氨基酸殘基。作為一種例子，一種IgG抗體是一個(gè)四聚蛋白，該四聚蛋白包括兩條重鏈以及兩條輕鏈。每條IgG重鏈含有按照以下順序從N-端至C-端所連接的四個(gè)免疫球結(jié)構(gòu)域:Vh-Ch1-Ch2-Ch3 (有時(shí)也縮寫為VH-CH1-CH2-CH3)。這些縮寫對(duì)應(yīng)地是指重鏈可變結(jié)構(gòu)域、重鏈恒定結(jié)構(gòu)域1、重鏈恒定結(jié)構(gòu)域2、以及重鏈恒定結(jié)構(gòu)域3。一條重鏈也可以指抗體類型，如，Cy 1，它代表IgG抗體的伽瑪(Y )重鏈的第一恒定結(jié)構(gòu)域。每條IgG輕鏈包括按照以下順序從N-端至C-端所連接的兩個(gè)免疫球結(jié)構(gòu)域:Vh-Q，其中Vh和Q對(duì)應(yīng)地是指輕鏈可變結(jié)構(gòu)域以及輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域。一種抗體的可變區(qū)(它在每條多肽鏈的N-端典型地包括大約100至110個(gè)或更多的氨基酸)包括抗原結(jié)合決定簇，并且因此主要負(fù)責(zé)抗原識(shí)和及特異性。多個(gè)抗體之間的最大程度的氨基酸序列變異在該可變區(qū)中見到。大部分的序列變異發(fā)生在位于該可變區(qū)中的互補(bǔ)決定區(qū)(⑶R)。存在著總計(jì)六個(gè)⑶R，三個(gè)⑶R在各條重鏈中，而三個(gè)⑶R在各條輕鏈中，它們共同形成了抗原結(jié)合位點(diǎn)。重鏈⑶R被命名為Vh⑶R1、Vh⑶R2、以及VhCDR3，而輕鏈⑶R被命名為Vl⑶R1、Vl⑶R2、以及Vl⑶R3。位于⑶R之外的區(qū)域稱為框架(FR)區(qū)。不同抗體的框架區(qū)可在氨基酸殘基方面發(fā)生變化，但氨基酸變異的程度并未與不同抗體的可變區(qū)之間變異的程度近似一樣多。在多個(gè)情形下，這些框架區(qū)提供了一個(gè)穩(wěn)定的或恒定的支架用于由CDRs所提出的氨基酸多樣性。術(shù)語(yǔ)“抗體片段”是指小于全長(zhǎng)的一種抗體的任何衍生物。抗體片段的實(shí)例包括但不限于:含有Vh-ChI和Vh-Q的抗原結(jié)合片段(Fab)、含有Vh和\的可變片段(Fv)、含有一起連接在一條鏈中的Vh和\的單鏈可變片段(scFv)、連同其他V區(qū)片段，如Fab’、F(ab)2) F(ab，)2、dsFv 雙抗體(diabody)、Fc、以及 Fd 多肽片段。見 Cqncise Encyclopedia:Biochemistey細(xì) Molecular ^iology (de Gruyter, 3d ed.1997)，以及 Watson, J.D.et al.，Recombinant DNA (2ded.1992)(以下稱為 “Watson”)。一個(gè)抗體片段可以通過本領(lǐng)域中已知的任何手段產(chǎn)生。例如,該抗體片段可通過將一個(gè)完整的抗體斷裂而酶促或化學(xué)產(chǎn)生，或它可從一個(gè)編碼了該部分的抗體序列的基因中重組地產(chǎn)生。例如，抗體的片段可通過用一種肽酶進(jìn)行消化而產(chǎn)生。例如，胃蛋白酶在鉸鏈區(qū)中在這些二硫鍵以下消化了一種抗體以產(chǎn)生F(ab’)2，一種Fab片段的二聚體，該Fab片段其本身是由一個(gè)二硫鍵結(jié)合Vh-ChI的一條輕鏈。該F(ab’)2可以在溫和的條件下被還原以破壞鉸鏈區(qū)中的二硫化物連接體，由此將該(Fab’ ) 2 二聚體轉(zhuǎn)化成為一個(gè)Fab’單體。該Fab’單體實(shí)質(zhì)上是一個(gè)具有部分的鉸鏈區(qū)的Fab片段。對(duì)于抗體和抗體片段的更為詳細(xì)的說明，見，F(xiàn)unmmental Immunology..E.Paul, ed., Raven Press, N.Y.(1993)。盡管就一種完整抗體的消化而言定義了不同的抗體片段，本領(lǐng)域中的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解此類Fab’片段可以從頭化學(xué)地合成或通過使用重組DNA方法學(xué)來(lái)合成。因此，該術(shù)語(yǔ)還包括通過整個(gè)抗體的修飾而產(chǎn)生的或使用重組DNA方法學(xué)從頭合成的抗體片段。可替代地，該抗體片段可以是整個(gè)地或部分地合成產(chǎn)生的。該抗體片段可以可任選地是一個(gè)單鏈抗體片段?？商娲?，該片段可包括連接在一起的多個(gè)鏈，例如通過二硫化物連接體。該片段也可以可任選地是一種多分子絡(luò)合物。一種功能性的抗體片段將典型地包括至少約50個(gè)氨基酸，并 且將更典型地包括至少約200個(gè)氨基酸。一個(gè)免疫球蛋白或抗體分子的Fe區(qū)域或結(jié)構(gòu)域(也被稱為Ig Fe多肽或Fe多肽)大致對(duì)應(yīng)于該免疫球蛋白重鏈的恒定區(qū)，并且負(fù)責(zé)不同的功能，包括抗體的一種或多種效應(yīng)子功能。例如，IgG分子的Ig Fe區(qū)域包括免疫球結(jié)構(gòu)域CH2和CH3以及導(dǎo)向進(jìn)入CH2的N-端鉸鏈區(qū)。鉸鏈區(qū)是在Fe與CHl之間的重鏈的一部分，含有重鏈間的二硫鍵，并給予該抗體分子柔性。Fe區(qū)域的恒定結(jié)構(gòu)域與免疫系統(tǒng)的細(xì)胞相互作用。Fe受體是結(jié)合了抗體的Fe區(qū)域的蛋白。對(duì)于這種IgG抗體類別的一個(gè)重要的Fe受體家族包括Fe伽瑪受體(FcyR)。在細(xì)胞上抗體對(duì)Fe受體的結(jié)合介導(dǎo)了多中抗體功能。不同的IgG亞類對(duì)于Fe伽瑪受體展示了不同的親和力。大體上，與IgG2和IgG4相比，IgGl和IgG3以更大的親和力結(jié)合這些受體。Fc受體表達(dá)在不同的細(xì)胞上,包括例如B細(xì)胞、單核細(xì)胞、樹狀細(xì)胞、嗜中性細(xì)胞、以及某些淋巴細(xì)胞。一個(gè)Ig Fe與它的受體的結(jié)合將這些效應(yīng)子細(xì)胞帶至所結(jié)合的抗原的位點(diǎn)上，最后造成信號(hào)傳導(dǎo)以及免疫應(yīng)答，包括B細(xì)胞活化、炎癥應(yīng)答、細(xì)胞毒性應(yīng)答、以及吞噬細(xì)胞的應(yīng)答。一種Ig Fe融合體是一種分子，該分子包括可操作地連接至一種免疫球蛋白或抗體的Fe區(qū)域上的一個(gè)或多個(gè)多肽(或一個(gè)或多個(gè)小分子)。見，如，Chamow etal., 1996, Trends Biotechnol.14:52-60。因此,一種 Ig Fe 融合蛋白是一種分子，該分子包括可操作地連接至一個(gè)Ig Fe區(qū)域上的一種或多種多肽。一種Ig Fe融合蛋白可包括例如，一種抗體的Fe區(qū)域(它協(xié)助了效應(yīng)子的功能和藥物代謝動(dòng)力學(xué))，以及一種受體蛋白或配體蛋白或其他蛋白或其片段的結(jié)合區(qū)域或結(jié)合結(jié)構(gòu)域。該結(jié)合區(qū)域或結(jié)合結(jié)構(gòu)域介導(dǎo)了該靶受體或配體的識(shí)別(與一種抗體的抗體可變區(qū)對(duì)一種抗原的識(shí)別是可比的)。一個(gè)IgFe區(qū)域可間接或直接連接到一個(gè)或多個(gè)多肽或小分子(融合配偶體)上?？梢詫⒈绢I(lǐng)域中所已知的并且如以下詳細(xì)說明的多個(gè)連接體用將一個(gè)IgFc連接到一個(gè)融合配偶體上以產(chǎn)生一種Ig Fe融合體。一種Ig Fe融合蛋白典型地包括直接或間接共價(jià)連接到至少一個(gè)多肽上的Ig Fe區(qū)域，該多肽典型地結(jié)合一種靶配體或受體。單克隆的或多克隆的抗體可以用本領(lǐng)域中已知的任何技術(shù)進(jìn)行制備(見，如，Kohler&Milstein, Nature256:495497 (1975) ；Kozbor et al., Immunology Today4:72(1983)；Cole et al.，pp.7796 于 Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy (1985))?？梢詫a(chǎn)生單鏈抗體的技術(shù)(美國(guó)專利號(hào)4，946，778)進(jìn)行適應(yīng)以產(chǎn)生針對(duì)本發(fā)明多肽的抗體。此外，可將轉(zhuǎn)基因小鼠或其他生物體(包括哺乳動(dòng)物)用來(lái)表達(dá)人源化的抗體。可以使用噬菌體展示技術(shù)來(lái)鑒定特異性地結(jié)合到所選擇的抗原上的抗體以及雜聚性 Fab 片段(見，如，McCafferty et al., Nature348:552554 (1990) ;Marks et al.，BiotechnologylO:779783 (1992))。術(shù)語(yǔ)“表位”是指特異性結(jié)合到一種抗體的部分上的一個(gè)抗原決定簇。表位通常是由多個(gè)分子的化學(xué)活性表面群集所構(gòu)成，如氨基酸或糖側(cè)鏈，并且通常具有特異的三維結(jié)構(gòu)特征，連同特異的電荷特征。對(duì)構(gòu)象和非構(gòu)象進(jìn)行區(qū)分，這是因?yàn)榕c前者的結(jié)合在變性溶劑的存在下喪失而后者不會(huì)。兩個(gè)分子(例如，一個(gè)配體和一個(gè)受體)之間的一種“特異性結(jié)合親和力”意思指一個(gè)分子對(duì)另一個(gè)分子的偏好結(jié)合。多 個(gè)分子的結(jié)合被典型地認(rèn)為是特異的，若該平衡結(jié)合常數(shù)(例如，KA)是大約IxIO2IT1至大約IxlO13Ir1或更多，包括大約IO4至IO13M'大約IO6至IO12M'大約IO8IT1至IO11ITi或大約IO8至IOkiM'在一個(gè)抗原與一個(gè)抗體之間的結(jié)合相互作用的Ka值典型地在從大約IO5M4至大約IO1I1的范圍內(nèi)，通常是大約IOl1至大約KAf1，并且經(jīng)常是大約IO8M4至大約IOkiM' Ka (M—1)是通過計(jì)算匕/\而確定的，其中ka是結(jié)合速率常數(shù)而kd是解離速率常數(shù)。匕和匕的單位對(duì)應(yīng)地是^^^和^。平衡解離常數(shù)Kd是Ka的倒數(shù)。KD=kd/ka。對(duì)于反應(yīng)A+B〈=>AB(代表結(jié)合到一個(gè)所感興趣的單一蛋白(例如，受體)上的一個(gè)單一配體)，Kd等于([A] [B])/[AB]。用于測(cè)量結(jié)合親和力和/或分子親合力的熟知技術(shù)的非限制性實(shí)例包括例如，Biacore 技術(shù)(GE Healthcare)，如在本文其他地方所討論，等溫滴定微量熱法(isothermal titration microcalorimetry)(MicroCalLLC, Northampton, MA USA)、ELISA、以及熒光激活的細(xì)胞分選(FACS)法。例如，可使用FACS或其他分選法來(lái)選擇分子群(例如，展示細(xì)胞表面的配體)，這些分子群特異地結(jié)合到相關(guān)聯(lián)的結(jié)合對(duì)成員(如，受體，例如一種可溶性受體)上。配體-受體絡(luò)合物可(例如)通過熒光進(jìn)行檢測(cè)并分選(例如，通過將該絡(luò)合物與識(shí)別該絡(luò)合物的一種熒光抗體進(jìn)行反應(yīng))。將結(jié)合一種相關(guān)聯(lián)的結(jié)合對(duì)成員(例如，受體)的所感興趣的分子匯集并且在較低的受體濃度的存在下再次進(jìn)行分選。通過在降低的受體濃度(一個(gè)示例性濃度范圍，在KT6M降至KT13M的數(shù)量級(jí)上，S卩，由I微摩爾濃度(μ Μ)降至I納摩爾濃度(ηΜ)、或更小(例如，1(ΓηΜ或I(T12M)的存在下進(jìn)行多輪分選，根據(jù)該配體-受體相互作用的本質(zhì)，可分離出對(duì)于該受體展示出特異的結(jié)合親和力的所感興趣的分子群。當(dāng)提及一種蛋白時(shí)，短語(yǔ)“特異地(或選擇性地)結(jié)合” 一種抗體或“特異地(或選擇性地)進(jìn)行免疫應(yīng)答”是指一種結(jié)合反應(yīng)，該結(jié)合反應(yīng)是該蛋白在一個(gè)異質(zhì)性蛋白群體以及其他生物制品學(xué)中存在的確定物。因此，在指定的免疫分析條件下，所限定的抗體以背景值的至少兩倍結(jié)合到一種具體的蛋白上，并且不會(huì)以一個(gè)顯著的量基本上結(jié)合到在該樣本中存在的其他蛋白上。在此類條件下特異性結(jié)合到一種抗體上可能要求一種抗體，該抗體是針對(duì)它對(duì)一種具體蛋白的特異性選擇的?？墒褂枚喾N免疫分析形式來(lái)選擇可與一種具體蛋白進(jìn)行特異性免疫應(yīng)答的抗體。例如，例行使用固相ELISA免疫測(cè)定來(lái)選擇與一種蛋白進(jìn)行特性地免疫應(yīng)答的抗體(見，如，Harlow&Lane, Antibodies, A Laboratory Manual(1988)，用來(lái)確定特異性免疫反應(yīng)性的免疫分析形式以及條件的說明)。通常而言，一種特異性或選擇性的反應(yīng)應(yīng)當(dāng)是至少兩倍的背景信號(hào)或噪聲并且更典型地是從10至100倍中背景值的。術(shù)語(yǔ)“細(xì)胞因子”包括例如但不限于:白介素、干擾素(IFN)、趨化因子、造血生長(zhǎng)因子、腫瘤壞死因子(TNF)、以及轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子。大體上，此類細(xì)胞因子是小分子量的蛋白，這些蛋白調(diào)控了免疫系統(tǒng)細(xì)胞的成熟、活化、增殖、以及分化。術(shù)語(yǔ)“篩選”總體上說明了一個(gè)過程，該過程識(shí)別了本發(fā)明的最佳分子，例如包括本發(fā)明的多肽，以及包括其的相關(guān)融合蛋白，以及編碼所有此類分子的核酸?？梢栽谶x擇和篩選中使用對(duì)應(yīng)分子的幾種 特性，例如，一種對(duì)應(yīng)分子在試驗(yàn)系統(tǒng)或在體外、離體、或體內(nèi)的應(yīng)用中誘發(fā)或改變一種所希望的免疫應(yīng)答的能力?！斑x擇”是一種篩選形式，其中通過一個(gè)選擇性標(biāo)記的表達(dá)同時(shí)達(dá)到了識(shí)別和物理分離，它在一些遺傳學(xué)情形下在其他細(xì)胞死亡時(shí)允許表達(dá)該標(biāo)記的細(xì)胞存活(或反之亦然)。篩選標(biāo)記包括例如，熒光素酶、半乳糖苷酶、以及綠色熒光蛋白、反應(yīng)底物、以及類似物。選擇性標(biāo)記包括藥物和毒素耐受基因、以及類似物。另一種選擇模式涉及基于一個(gè)可檢測(cè)事件的物理分選，如，一個(gè)配體與一個(gè)受體的結(jié)合、一種底物與一種酶的反應(yīng)、或任何其他能夠直接地(例如，通過使用一種生色的底物或配體)或間接地(例如，通過與一種生色的第二抗體進(jìn)行反應(yīng))產(chǎn)生一種可檢測(cè)信號(hào)的物理過程。通過物理分選進(jìn)行的選擇可以通過不同的方法完成，這些方法包括但不限于，例如，在全細(xì)胞或微滴形式中的y FACS。由于在體外研究初級(jí)免疫應(yīng)答的限制，體內(nèi)試驗(yàn)是特別有用的篩選方法。在一些此類研究中，首先將本發(fā)明的一種多核苷酸或多肽引入試驗(yàn)受試者(例如，一種哺乳動(dòng)物，如，一種動(dòng)物)體內(nèi)，并且隨后研究了一種經(jīng)誘發(fā)的免疫應(yīng)答，這是通過分析在經(jīng)免疫動(dòng)物體內(nèi)的免疫應(yīng)答類型(例如，經(jīng)免疫動(dòng)物血清中的抗體生產(chǎn)，T細(xì)胞的增殖)，或通過研究在該經(jīng)免疫動(dòng)物體內(nèi)該經(jīng)誘發(fā)免疫應(yīng)答的質(zhì)量或強(qiáng)度(例如，經(jīng)誘發(fā)的抗體效價(jià)水平)而進(jìn)行的。如在本文中所使用的，術(shù)語(yǔ)“受試者”包括但不限于:一種生物或動(dòng)物，包括哺乳動(dòng)物和非哺乳動(dòng)物。一種哺乳動(dòng)物包括例如但不限于:人類、非人類靈長(zhǎng)類(例如，狒狒、紅毛猩猩、猴、大猩猩)、小鼠、狗、豬、牛、山羊、貓、兔、大鼠、豚鼠、倉(cāng)鼠、馬、綿羊、或其他非人類哺乳動(dòng)物。一種非哺乳動(dòng)物包括例如但不限于:一種非哺乳動(dòng)物無(wú)脊椎動(dòng)物以及非哺乳動(dòng)物脊椎動(dòng)物，如，一種鳥(例如,一種雞或鴨)或一種魚。
術(shù)語(yǔ)“藥物組合物”是指適合于在受試者(包括一種動(dòng)物或人類)體內(nèi)的藥物用途的組合物。一種藥物組合物典型地包括一個(gè)有效量的一種活性劑以及一種載體、賦形劑、或稀釋劑。該載體、賦形劑、或稀釋劑典型地對(duì)應(yīng)地是一種藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑。術(shù)語(yǔ)“有效量”是指一種物質(zhì)的一個(gè)劑量或量，該劑量或量足以產(chǎn)生一個(gè)所希望的結(jié)果。所希望的結(jié)果可包括在該劑量或量的受方體內(nèi)的一個(gè)客觀或主觀改進(jìn)。例如，所希望的結(jié)果可包括在一位受試者體內(nèi)的一種免疫應(yīng)答的可測(cè)量、可檢測(cè)或可測(cè)試性的誘發(fā)、促進(jìn)、增強(qiáng)、或調(diào)整，對(duì)該受試者已經(jīng)給予了一個(gè)劑量或量的一種具體抗原或免疫原(或其組合物)?？蓪⒆阋援a(chǎn)生這種結(jié)果的一種免疫原的一個(gè)劑量或量說明為一個(gè)“免疫原性”劑量(藥量)或量。一種“預(yù)防性治療”是給予一位受試者的一種治療，該受試者未顯示一種疾病、病理學(xué)、或紊亂的跡象或癥狀，或僅顯示了其早期跡象或癥狀的，這樣使得出于防止或降低了發(fā)展該疾病、病理學(xué)、或紊亂的風(fēng)險(xiǎn)的目的而給予治療。一種預(yù)防性治療作為對(duì)抗一種疾病、病理學(xué)、或紊亂的防止性治療，或作為抑制或降低一種疾病、病理學(xué)、或紊亂進(jìn)一步發(fā)展或增強(qiáng)的治療而發(fā)揮 作用。一種“預(yù)防活性”是一種試劑的一種活性，該試劑當(dāng)給予一位受試者(該受試者未顯示一種病理學(xué)、疾病、或紊亂的跡象或癥狀，或僅顯示其早期跡象或癥狀)時(shí)防止或降低了發(fā)展該病理學(xué)、疾病、或紊亂的風(fēng)險(xiǎn)。一種“預(yù)防上有用”的試劑(例如，核酸或多肽)是指一種試劑，該試劑在防止一種疾病、病理學(xué)、或紊亂的發(fā)展方面是有用的，或在抑制或降低一種疾病、病理學(xué)、或紊亂進(jìn)一步發(fā)展或增強(qiáng)方面是有用的。一種“治療性治療”是給予一位受試者的一種治療，該受試者顯示了病理學(xué)、疾病、或紊亂的癥狀或跡象，其中出于減少或消除這些跡象或癥狀而將治療給予該受試者。一種“治療活性”是一種試劑的一種活性，該試劑當(dāng)給予一位患有病理學(xué)、疾病、或紊亂的跡象或癥狀的受試者時(shí)消除或減少了這些跡象或癥狀。一種“治療上有用的”試劑是指該試劑用于減少、治療、或消除一種疾病、病理學(xué)、或紊亂的跡象或癥狀。總體上，在本文中使用的命名法以及在以下說明的細(xì)胞培養(yǎng)、分子遺傳學(xué)、分子生物學(xué)、核酸化學(xué)、以及蛋白質(zhì)化學(xué)中的實(shí)驗(yàn)室操作是本領(lǐng)域中的普通技術(shù)人員所熟知的并且經(jīng)常使用的。標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)，如在 Sambrook et al., Molecular Cloning □ A LaboratoryManual (2nd Ed.), Vols.1-3, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NewYork, 1989 (以下稱為 “Sambrook”)以及 CURRENT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY, F.M.Ausubel et al., eds., Current Protocols, Greene Publishing Associates, Inc.與John ffiley&Sons, Inc.的合資企業(yè)(1994,增刊至1999)(以下稱為“Ausubel”)中所說明，用于重組核酸方法、核酸合成、細(xì)胞培養(yǎng)方法、以及轉(zhuǎn)基因的摻入，例如，電穿孔、注射、基因槍、經(jīng)由皮膚印記、以及脂質(zhì)轉(zhuǎn)染(lipofection)?？傮w上,寡核苷酸合成以及純化步驟是根據(jù)說明書而進(jìn)行的。這些技術(shù)和操作典型地是根據(jù)本領(lǐng)域內(nèi)的常規(guī)方法以及子本文件中通篇提供的不同概述性參考文獻(xiàn)而進(jìn)行的。其中的操作據(jù)信是本領(lǐng)域中的普通技術(shù)人員所熟知的，并且是為了讀者方便而進(jìn)行提供。在本文中對(duì)不同的額外術(shù)語(yǔ)是進(jìn)行定義或以其他方式進(jìn)行表征。本發(fā)明的分子及方法_本發(fā)明提供了用于治療免疫系統(tǒng)的疾病、紊亂、以及病況的分子和方法，包括例如，其中調(diào)整免疫系統(tǒng)(例如，T細(xì)胞依賴的免疫應(yīng)答)是希望的那些。本發(fā)明的分子(例如，本發(fā)明的多肽、本發(fā)明的偶聯(lián)物、本發(fā)明的可溶性融合蛋白、編碼此類多肽或融合蛋白的核酸)用于治療其中希望免疫抑制的免疫系統(tǒng)疾病、紊亂、以及病況，包括例如但不限于:自身免疫疾病、紊亂、以及病況、免疫增生性疾病、移植物相關(guān)紊亂的治療，以及涉及由從一個(gè)供方到一個(gè)受方的組織、細(xì)胞、器官、或移植物的移植的治療方法，其中阻抑該受方體內(nèi)對(duì)抗該供方的組織、細(xì)胞、器官、或移植物的免疫應(yīng)答是希望的。在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了新穎的突變CTLA-4分子，它們與一個(gè)CTLA-4分子(例如，結(jié)合⑶80和/或⑶86的野生型人類CTLA-4多肽(“hCTLA_4”)或它的一個(gè)片段，如人類CTLA-4的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(“hCTLA-4E⑶”))相比具有改進(jìn)的特性。如以下更為詳細(xì)的討論，使用不同的誘變和篩選策略來(lái)制得并識(shí)別了結(jié)合CD80和/或CD86的新穎突變CTLA-4分子。特別地，使用此類策略來(lái)制得并識(shí)別對(duì)于⑶80 (B7-1)和/或⑶86 (B7-2)具有改進(jìn)的結(jié)合親合力的CTLA-4突變分子(當(dāng)與人類CTLA-4 (“hCTLA_4”)相比)，和/或?qū)τ冖?0和/或⑶86具有改進(jìn)的結(jié)合親合力的CTLA-4突變分子(當(dāng)與hCTLA-4E⑶相比)。結(jié)合表達(dá)于抗原呈遞細(xì)胞上的內(nèi)源性⑶80和/或⑶86配體的本發(fā)明的突變CTLA-4分子有效地抑制或阻斷這些配體與內(nèi)源性⑶28受體(該受體表達(dá)于T細(xì)胞表面上)的相互作用。作為結(jié)果，由T細(xì)胞表面受體⑶28與B7分子(B卩，⑶80和⑶86)的相互作用所提供的對(duì)T細(xì)胞活化重要的共刺激信號(hào)受到抑制或阻斷。此類T細(xì)胞并未受到最適活化，并且具有降低的增殖能力。在其中一個(gè)⑶80或⑶86配體與一個(gè)⑶28受體之間的信號(hào)傳導(dǎo)受到阻斷的情形下，T細(xì)胞并未受到最適刺激而成為活性的，并且因此并未受到最適誘發(fā)而進(jìn)行增殖。類似地，在其中一個(gè)⑶80或⑶86配體與一個(gè)⑶28受體之間的信號(hào)傳導(dǎo)受到阻抑的情形下，T細(xì)胞的活化及增殖受到阻抑。在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了突變CTLA-4分子，它們作為CTLA-4信號(hào)傳導(dǎo)的拮抗劑而發(fā)揮作用。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了突變CTLA-4分子，它們作為CD28信號(hào)傳導(dǎo)的拮抗劑而發(fā)揮作用，由此阻抑或阻斷T細(xì)胞依賴的免疫應(yīng)答；此類分子作為免疫抑制劑而發(fā)揮作用。在又一個(gè)方面，本發(fā)明提供了突變CTLA-4分子，它們結(jié)合CD80和⑶86，但它們針對(duì)⑶86具有比針對(duì)⑶80的更高的結(jié)合親合力，并且因此可抑制⑶86依賴的共刺激作用的程度大于CD80依賴的共刺激作用。本發(fā)明的所有此類突變CTLA-4分子預(yù)期用于治療其中希望免疫抑制或免疫抑制可能具有益處的疾病、紊亂、或病況。
—種人類CTLA-4-1g融合蛋白以及一種特異的突變CTLA-4_Ig融合蛋白(兩者皆由Bristol-Myers Squibb C0.(Princeton, NJ)研發(fā))已經(jīng)顯示有效治療某些免疫相關(guān)性疾病或病況。Orcndn.K.融合蛋白(也稱為阿巴西普(“ABA”))(Bristol-Myers SquibbC0.(Princeton, NJ))是一種可溶性重組二聚體融合蛋白，它是由通過一個(gè)二硫鍵共價(jià)連接在一起的兩個(gè)相同的單體免疫球蛋白(Ig)融合蛋白構(gòu)成，該二硫鍵在每個(gè)單體融合蛋白中存在的半胱氨酸殘基之間形成。ORENCIA是Bristol-Myers Squibb Company的注冊(cè)商標(biāo)。Orerwia⑩二聚體的每個(gè)單體Ig融合蛋白是由人類CTLA-4的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(SEQ ID N0:159)構(gòu)成，該細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域在其C-端與一種特異的突變IgGlFc多肽(SEQ IDNO: 186)的N-端進(jìn)行融合。每個(gè)這種單體融合蛋白的完整多肽序列示于SEQ ID NO: 164。OrencialV:聚體是在一個(gè)哺乳動(dòng)物表達(dá)系統(tǒng)中生產(chǎn)的，并且具有92kDa的表觀分子量。據(jù)信Orencia 二聚體的兩個(gè)單體Ig融合蛋白是通過一個(gè)單一的二硫鍵共價(jià)連接在一起的，該二硫鍵在位于每個(gè)hCTLA-4-突變IgGl單體的位置120上的半胱氨酸殘基之間形成，并且在這兩個(gè)突變IgGlFc多肽之間沒有形成二硫鍵。Orencia 二聚體是一種選擇性共刺激調(diào)節(jié)劑，它通過結(jié)合⑶80和⑶86并且因此阻斷了與CD28的相互作用而抑制了 T細(xì)胞活化。Orencia .二聚體目前已被批準(zhǔn)用于治療患有中度至嚴(yán)重的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)的人類成人。額外的有關(guān)Orencia 二聚體及其臨床適應(yīng)癥以及有效性的信息以orencia.com和bms.com提供在萬(wàn)維網(wǎng)上。如以上所指出，Orencia 二聚體的每個(gè)融合蛋白單體含有一個(gè)人類CTLA-4細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域。人類CTLA-4是一種膜蛋白，該膜蛋白瞬時(shí)表達(dá)于T細(xì)胞上。WT全長(zhǎng)hCTLA-4的全長(zhǎng)蛋白序列示于SEQ ID NO: 160，并且一個(gè)編碼了 WT全長(zhǎng)hCTLA-4的核酸序列示于SEQID NO: 194。人類CTLA-4包括一種信號(hào)肽(SP)、細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(ECD)、跨膜結(jié)構(gòu)域(TD)、以及細(xì)胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域(⑶)，以該順序共價(jià)連接在一起(例如，SP的C-端共價(jià)連接到E⑶的N-端上，E⑶的C-端共價(jià)連接到TD的N-端上，而TD的C-端共價(jià)連接到⑶的N-端上)。WThCTLA-4ECD多肽典型地包括全長(zhǎng)hCTLA-4蛋白序列(SEQ ID NO: 160)的殘基38-161，并且典型地長(zhǎng)度為124個(gè)氨基酸殘基。這個(gè)hCTLA-4E⑶多肽序列示于SEQ ID NO: 159。該全長(zhǎng)hCTLA-4蛋白的信號(hào)肽(SP)(典型地包括SEQ ID NO: 160的氨基酸殘基1-35或1-37)在加工過程中被切割。見，如，Harper et al., J.1mmunol.147 (3): 1037-1044 (1991)。包括hCTLA-4蛋白的氨基酸殘基1-35或1-37的人類CTLA-4信號(hào)肽序列對(duì)應(yīng)地示于SEQ IDNO: 182或SEQ ID NO: 216。不論該信號(hào)肽序列是示于SEQ ID NO: 182或SEQ ID NO: 216的那個(gè)，當(dāng)該信號(hào)肽被切割時(shí)，該成熟hCTLA-4蛋白典型地以在SEQ ID N0:160中所示的全長(zhǎng)hCTLA-4蛋白序列的氨基酸位置38上的甲硫氨酸殘基起始。因此，即使該hCTLA-4信號(hào)肽序列是SEQ ID NO: 182的那個(gè)(它包括hCTLA-4蛋白的氨基酸殘基1-35)，得到的成熟分泌的hCTLA-4蛋白仍以在全長(zhǎng)hCTLA-4蛋白的位置38上的甲硫氨酸起始。對(duì)應(yīng)地在全長(zhǎng)hCTLA-4蛋白的位置36和37上的賴氨酸(K)和丙氨酸(A)并不存在于成熟hCTLA-4蛋白中，并且據(jù)信它們?cè)诩庸み^程中從該成熟hCTLA-4蛋白中切割。因此，成熟hCTLA-4蛋白序列的氨基酸殘基典型地以在全長(zhǎng)hCTLA-4蛋白的位置38上存在的甲硫氨酸殘基作為第一氨基酸(即，占據(jù)位置I)起始進(jìn) 行編號(hào)；因此，組氨酸殘基占據(jù)了成熟hCTLA-4蛋白中的氨基酸位置2，等等。Orcnc:1a_1i'_二聚體的每個(gè)單體包括在SEQ ID NO: 159中所示的hCTLA_4ECD多肽序列。在全長(zhǎng)WT hCTLA-4蛋白中，該信號(hào)肽包括SEQ ID NO: 160的氨基酸殘基1_37，該細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(E⑶)包括氨基酸殘基38-161，該跨膜結(jié)構(gòu)域(TD)包括氨基酸殘基162-182，并且該細(xì)胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域(⑶)包括氨基酸殘基183-223。該hCTLA-4蛋白的成熟結(jié)構(gòu)域(MD)典型地包括SEQID NO: 160的氨基酸殘基36-223，或在一些情形下包括氨基酸殘基37-223或 38-223。SEQ ID N0:194的核酸包括一個(gè)編碼了信號(hào)肽序列的核酸序列(核苷酸殘基1-111)、一個(gè)編碼了 hCTLA-4E⑶的核酸序列(核苷酸殘基112-483)、一個(gè)編碼了 hCTLA-4跨膜以及細(xì)胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域的核酸序列(核苷酸殘基484-669);最后3個(gè)C-端核苷酸是TGA終止密碼子。貝拉西普(也被稱為“LEA29Y-1g”、“LEA-1g”、或“A29YL104E-1g”)(Bristol-MyersSquibb C0.(Princeton, NJ))是一種可溶性重組二聚體蛋白，它是由通過一個(gè)二硫鍵共價(jià)連接在一起的兩個(gè)相同的Ig融合蛋白構(gòu)成，該二硫鍵在每個(gè)單體融合蛋白中的半胱氨酸殘基之間形成。每個(gè)單體融合蛋白是由一個(gè)突變CTLA-4細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域多肽構(gòu)成，該結(jié)構(gòu)域多肽在其C-端與一種特異的突變IgGl多肽的N-端進(jìn)行融合。該突變CTLA-4E⑶的多肽序列與WT人類CTLA-4ECD具有兩個(gè)突變的差異，確切地是將一個(gè)酪氨酸取代在位置29上的丙氨酸(縮寫為取代A29Y)以及將一個(gè)谷氨酰胺取代在位置104上的亮氨酸(縮寫為取代L104E)，其中在該人CTLA-4E⑶中的氨基酸殘基用在N-端上的甲硫氨酸(表示在位置I上的氨基酸)進(jìn)行編號(hào)。貝拉西普的每個(gè)單體包括在SEQ ID NO: 186中所示的突變IgGlFc多肽序列；這種突變IgGlFc多肽是與包括于Orencia 融合蛋白中的突變IgGlFc多肽相同的。因此，貝拉西普單體融合蛋白與每個(gè)Orencia 單體融合蛋白具有兩個(gè)氨基酸的差異。貝拉西普中每個(gè)單體融合蛋白的多肽序列示于SEQ ID NO: 166。因此，名稱“LEA29Y_Ig”反映了以下事實(shí):貝拉西普二聚體的每個(gè)單體融合蛋白是由一個(gè)突變CTLA-4ECD構(gòu)成的，它與該人類CTLA-4ECD多肽序列具有L104E和A29Y這兩個(gè)突變的差異。與Orencia 二聚體相比，貝拉西普已經(jīng)顯示高出大約4倍親合性地結(jié)合⑶86，并且以高出大約2倍親合性地結(jié)合 CD80 (Larson et al.,Amer.J.Transplant.5:443-453, 444 (2005)。與Oretlcia.U,二聚體相比，在體外抑制T細(xì) 胞活化方面貝拉西普已經(jīng)顯示可以達(dá)到高出大約10倍的強(qiáng)度，并且與Omia背蛋白相比具有改進(jìn)的體內(nèi)免疫抑制強(qiáng)度，如通過其抑制T細(xì)胞依賴的抗體反應(yīng)的增加的能力以及在涉及非人類靈長(zhǎng)類的臨床試驗(yàn)中它的改進(jìn)的腎同種移植存活延長(zhǎng)所顯示。相同文獻(xiàn)。額外的有關(guān)貝拉西普及其臨床適應(yīng)癥以及有效性的信息以bms.com提供在萬(wàn)維網(wǎng)上。在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了突變CTLA-4分子，包括在本文中所說明的新穎可溶性重組突變CTLA-4-lg融合蛋白，它對(duì)⑶86的結(jié)合親合力大于Orencia 二聚體(二聚體hCTLA-4-1g)對(duì)⑶86的結(jié)合親合力。本發(fā)明還提供了突變CTLA-4分子，包括新穎的可溶性重組二聚體突變CTLA-4-1g融合蛋白，它對(duì)⑶80具有一種結(jié)合親合力，該結(jié)合親合力是大約等于或大于Orencia 二聚體對(duì)CD80的結(jié)合親合力。在又另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了突變CTLA-4分子，包括新穎的可溶性重組突變CTLA-4-1g融合蛋白，它比Orencia (阿巴西普)具有阻抑一種或多種免疫應(yīng)答(例如，T細(xì)胞依賴的免疫應(yīng)答)的更大的能力。與Orenem.私二聚體相比，具有一種或多種改進(jìn)特性的本發(fā)明的突變CTLA-4分子預(yù)期更為強(qiáng)效，并且因此在治療其中希望免疫抑制的疾病、紊亂、或病況中比Orencia 二聚體更加有效、有用、并且有利，這些疾病、紊亂、或病況包括Orenda 二聚體已批準(zhǔn)和/或已經(jīng)顯示提供了臨床益處的那些疾病、紊亂、或病況，如免疫疾病(包括，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎及牛皮癬)。在又另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了突變CTLA-4分子，包括在本文中所說明的新穎可溶性重組突變CTLA-4-1g融合蛋白，它對(duì)⑶86具有一種結(jié)合親合力，該結(jié)合親合力大于貝拉西普(LEA29Y-1g)對(duì)⑶86的結(jié)合親合力。本發(fā)明還提供了突變CTLA-4分子，包括在本文中所說明的新穎可溶性重組突變CTLA-4-1g融合蛋白，它對(duì)⑶86具有一種結(jié)合親合力，該結(jié)合親合力大于貝拉西普對(duì)CD86的結(jié)合親合力。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了突變CTLA-4分子，包括在本文中所說明的新穎可溶性重組突變CTLA-4-1g融合蛋白，它比貝拉西普具有阻抑一種或多種免疫應(yīng)答(例如，T細(xì)胞依賴的免疫應(yīng)答)的更大的能力。與貝拉西普相t匕，具有一種或多種改進(jìn)特性的本發(fā)明的突變CTLA-4分子預(yù)期比貝拉西普更加強(qiáng)效，并且因此在治療其中希望免疫抑制的疾病、紊亂、或病況中比貝拉西普更加有效、有用、并且有利，這些疾病、紊亂、或病況包括貝拉西普融合蛋白已經(jīng)顯示提供臨床益處的那些疾病、紊舌L、或病況，如非人類靈長(zhǎng)類的腎同種移植存活。使用與在涉及類似受試者的Orencia 臨床試驗(yàn)中所采用的方法學(xué)可比的那些可以確定本發(fā)明的一個(gè)分子在一位受試者體內(nèi)的安全性、耐受性、藥物代謝動(dòng)力學(xué)、免疫原性、以及臨床功效，該分子例如本發(fā)明的一個(gè)突變CTLA-4分子(例如，以下詳細(xì)說明的突變CTLA-4E⑶多肽或可溶性突變CTLA-4-1g融合蛋白)，該受試者患有一種免疫疾病或紊亂(例如，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化癥、牛皮癬、等等)，以一種特定方式(例如，胃腸外、靜脈內(nèi)、或皮下給藥)對(duì)該受試者給予一個(gè)特定劑量的該分子。見，如，以bms.com和orencia.com為地址的萬(wàn)維網(wǎng)網(wǎng)站。例如,使用與在涉及RA患者的Orencia 臨床試驗(yàn)中所采用的方法學(xué)相類似的那些可以評(píng)估本發(fā)明的一個(gè)突變CTLA-4分子(例如，可溶性突變CTLA-4-1g)在降低患有類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)的受試者體內(nèi)的關(guān)節(jié)損傷的進(jìn)展、在減輕RA的跡象和癥狀(包括疼痛減輕)方面的有效程度。使用與在涉及類似受試者的貝拉西普臨床試驗(yàn)中所采用的方法學(xué)可比的那些可以確定本發(fā)明的一個(gè)分子(例如，以下詳細(xì)說明的突變CTLA-4ECD多肽或可溶性突變CTLA-4-1g融合蛋白)在一位受試者體內(nèi)的安全性、耐受性、藥物代謝動(dòng)力學(xué)、免疫原性、以及臨床功效，在該受試者體內(nèi)免疫抑制是希望的(例如，一位受試者，他經(jīng)受了來(lái)自一個(gè)供方的組織、細(xì)胞、器官、或移植物的移植)并且以一種特定方式(例如，胃腸外、靜脈內(nèi)、或皮下給藥)對(duì)該受試者給予一個(gè)特定劑量的該分子。見，如，以bms.com和orencia.com為地址的萬(wàn)維網(wǎng)網(wǎng)站。例如，使用與在涉及經(jīng)歷腎或腎臟移植的受方患者的貝拉西普臨床試驗(yàn)中所采用的方法學(xué)相類似的那些可以評(píng)估本發(fā)明的一個(gè)突變CTLA-4分子(例如，可溶性突變CTLA-4-1g)在經(jīng)歷腎或腎臟移植的患者體內(nèi)的腎或腎臟移植體的排斥方面的有效程度。本發(fā)明的分子和方法以及本發(fā)明的其他方面在以下進(jìn)行額外的詳細(xì)討論。本發(fā)明的多肽本發(fā)明提供了新穎的多肽，集合稱為“本發(fā)明的多肽”。術(shù)語(yǔ)“本發(fā)明多肽”旨在包括在本文中披露的這些多肽序列的變體和/或衍生物。本發(fā)明的多肽包括重組非自然發(fā)生或突變CTLA-4多肽，該CTLA-4多肽結(jié)合⑶80和/或⑶86和/或抑制或阻抑一種免疫應(yīng)答。本發(fā)明的多肽包括重組融合蛋白，這些重組融合蛋白包括本發(fā)明的一種突變CTLA-4多肽，并且包括此類融合蛋白的單體和二聚體形式。本發(fā)明的多肽包括多聚體，這些多聚體包括本發(fā)明的一個(gè)或多個(gè)突變CTLA-4多肽。本發(fā)明還包括偶聯(lián)物，這些偶聯(lián)物包括本發(fā)明的一個(gè)或多個(gè)突變CTLA-4多肽。本發(fā)明的一些多肽是可溶性多肽。例如，如以下更為詳細(xì)說明的，本發(fā)明包括可溶性的融合蛋白，這些融合蛋白包括與一種不同的多肽(例如，一種免疫球蛋白多肽，例如，一種Ig Fe多肽)連接的一種突變CTLA-4ECD多肽，該不同的多肽增強(qiáng)了該突變CTLA-4E⑶多肽的溶解度。如以下更為詳細(xì)討論的，在本發(fā)明的一個(gè)方面，使用不同的誘變和篩選策略來(lái)制得并識(shí)別了結(jié)合CD80和/或CD86的新穎多肽。特別地，使用此類策略來(lái)制得并識(shí)別具有結(jié)合CD80和/或CD86的改進(jìn)能力的新穎多肽，包括具有對(duì)于CD80和/或CD86的改進(jìn)的結(jié)合親和力或親合力的 新穎突變CTLA-4多肽。結(jié)合了在抗原呈遞細(xì)胞上表達(dá)的CD80和/或⑶86配體的本發(fā)明的多肽干擾或阻斷了這些配體與在T細(xì)胞表面上表達(dá)的⑶28受體的相互作用。作為結(jié)果，由T細(xì)胞表面受體⑶28與B7分子(B卩，⑶80和⑶86)的相互作用所提供的T細(xì)胞共刺激信號(hào)受到抑制或阻斷。此類多肽據(jù)信用于多種疾病、紊亂、以及病況的預(yù)防性以及治療性治療，在這些治療中免疫系統(tǒng)(例如，T細(xì)胞應(yīng)答)的調(diào)控具有益處。突變CTLA-4多肽在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了分離或重組的多肽，該多肽各自包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列具有與選自下組的至少一種多肽序列至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、90.5%,91%,91.5%,92%,92.5%,93%,93.5%,94%,94.5%,95%,95.5%,96%,96.5%,97%,97.5%、98%,98.5%、99%、99.5%、或100%的序列一致性，該組的構(gòu)成為:SEQ ID NOS:1至73 (例如，SEQ ID NO: K SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO:4、SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO:6、SEQID NO:7,SEQ ID NO:8,SEQ ID NO:9,SEQ ID NO: 10,SEQ ID NO:1USEQ ID NO: 12,SEQ IDNO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18、SEQ IDNO:19,SEQ ID NO:20,SEQ ID N0:21、SEQ ID NO:22,SEQ ID NO:23,SEQ ID NO:24,SEQ IDNO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:30,SEQ IDN0:31、SEQ ID NO:32,SEQ ID NO:33,SEQ ID NO:34,SEQ ID NO:35,SEQ ID NO:36,SEQ IDNO:37,SEQ ID NO:38,SEQ ID NO:39,SEQ ID NO:40,SEQ ID NO:41,SEQ ID NO:42,SEQ IDNO:43、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:48、SEQ IDNO:49,SEQ ID NO:50,SEQ ID N0:51、SEQ ID NO:52,SEQ ID NO:53,SEQ ID NO:54,SEQ IDNO:55、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60,SEQ IDN0:61、SEQ ID NO:62,SEQ ID NO:63,SEQ ID NO:64,SEQ ID NO:65,SEQ ID NO:66,SEQ IDNO:67,SEQ ID NO:68,SEQ ID NO:69,SEQ ID NO:70,SEQ ID N0:71、SEQ ID N0:72、以及SEQID NO: 73)，其中該多肽結(jié)合⑶80和/或⑶86、或⑶80和/或⑶86的一個(gè)多肽片段(或二者之一的或兩者的一個(gè)E⑶)，和/或調(diào)整或調(diào)節(jié)一種免疫應(yīng)答。一些此類多肽(如在SEQ IDN0S:1至73中給出的那些中的每一個(gè))被說明為分泌或成熟突變CTLA-4E⑶多肽。在SEQID N0S:1至73中的每個(gè)所給出的突變CTLA-4E⑶多肽并不包括一個(gè)信號(hào)肽；它已經(jīng)在加工過程中被切割，由此產(chǎn)生該成熟或分泌多肽。⑶80的一個(gè)多肽片段可包括例如，一種⑶80多肽的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域多肽，該⑶80多肽例如人類⑶80E⑶多肽(“h⑶80E⑶”)。⑶86的一個(gè)多肽片段可包括例如，一種CD86多肽的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域多肽，該CD86多肽人類⑶86E⑶多肽(“h⑶86 E⑶”)。一些此類多肽結(jié)合一種哺乳動(dòng)物⑶80和/或⑶86或它的一個(gè)多肽片段，例如一個(gè)哺乳動(dòng)物⑶80或⑶86E⑶。一些此類多肽結(jié)合WT人類⑶80(“h⑶80”)和/或WT人類⑶86 (“h⑶86”)或它的一個(gè)多肽片段，例如，h⑶80E⑶或h⑶86E⑶。在一些此類方法中，至少一種免疫應(yīng)答受到阻抑或抑制。一些此類多肽具有對(duì)于h⑶80或它的一個(gè)片段(例如，h⑶80E⑶)的一種結(jié)合親和力或親合力，該結(jié)合親和力或親合力對(duì)應(yīng)地是至少大約等于或大于該hCTLA-4ECD多肽對(duì)于hCD80或它的一個(gè)片段的結(jié)合親和力或親合力。預(yù)測(cè)的全長(zhǎng)hCD80多肽序列在SEQID NO: 195中給出，它包括一個(gè)信號(hào)肽、ECD、跨膜結(jié)構(gòu)域、以及細(xì)胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域，以該順序共價(jià)連接在一起。該信號(hào)肽包括SEQ ID NO: 195的氨基酸殘基1-34，該E⑶包括氨基酸殘基35-242，該跨膜結(jié)構(gòu)域包括氨基酸殘基243-263，并且該細(xì)胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域包括氨基酸殘基264-288。該hCD80ECD的多肽序列示于SEQ ID NO: 174。在SEQ ID NO: 173中所示的核酸序列編碼了該WT人類⑶80信號(hào)肽(在N-端)以及人類⑶80E⑶。一些此類多肽具有對(duì)于h⑶86或它的一個(gè)片段(例如，h⑶86E⑶)的一種結(jié)合親和力或親合力，該結(jié)合親和力或親合力對(duì)應(yīng)地是大約等于或大于hCTLA-4ECD多肽對(duì)于hCD86或它的一個(gè)片段(例如如，ECD)的結(jié)合親和力或親和力。預(yù)測(cè)的全長(zhǎng)hCD86多肽序列在SEQID NO: 175中給出，它包括一個(gè)信號(hào)肽、ECD、跨膜結(jié)構(gòu)域、以及細(xì)胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域，以該順序共價(jià)連接在一起，而編碼了該預(yù)測(cè)全長(zhǎng)h⑶86多肽序列的一種示例性核酸示于SEQ ID NO: 176。該h⑶86E⑶的多肽序列示于SEQ ID NO: 180。一些此類多肽具有對(duì)于h⑶86的一種結(jié)合親和力或親合力，該結(jié)合親和力或親合力是至少大約等于或大于具有在SEQ ID NO: 168中所示的序列的LEA29YECD多肽對(duì)于hCD86的結(jié)合親和力或親合力。具有對(duì)于hCD86或hCD86ECD的結(jié)合親和力或結(jié)合親合力的本發(fā)明的示例性多肽(這種結(jié)合親和力或結(jié)合親合力是對(duì)應(yīng)地至少等于或大于hCTLA-4E⑶以及LEA29Y E⑶(也被稱為“A29YL104E”或“L104EA29Y”E⑶)對(duì)于h⑶86或h⑶86E⑶的那些)包括例如但不限于:包括一個(gè)多肽序列的那些，該多肽序列具有與SEQ ID NOS:4,10至12、15、17、24、26、28、35、以及61中任何一個(gè)的序列至少95%、96%、97%、98%、99%或100%的序列一致性。見，如，實(shí)例4中的表5。在表5中所給出的數(shù)據(jù)反映了一種代表性CTLA-4-1g與單體⑶86E⑶之間的單體相互作用。若未另有指明，術(shù)語(yǔ) LEA29Y (或 A29YL104E 或 L104EA29Y)是指 LEA29Y ECD (或 A29YL104E或 L104EA29Y ECD)?！┐祟惗嚯陌ㄒ粋€(gè)多肽序列，該多肽序列具有與該人類CTLA-4細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的氨基酸長(zhǎng)度大約為相等的氨基酸長(zhǎng)度。此類多肽可被說明為突變CTLA-4ECD多肽。一些此類突變CTLA-4ECD多肽包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列長(zhǎng)度是大約110個(gè)氨基酸至大約138個(gè)氨基酸殘基、大約112至大約136個(gè)氨基酸殘基、大約114至大約134個(gè)氨基酸殘基、大約116至大約132個(gè)氨基酸殘基、大約118至大約130個(gè)氨基酸殘基、大約119至大約129個(gè)氨基酸殘基、大約120至大約128個(gè)氨基酸殘基、大約121至大約127個(gè)氨基酸殘基、大約122至大約126個(gè)氨基酸殘基、大約123至大約125個(gè)氨基酸殘基。一些此類突變CTLA-4ECD多肽包括一個(gè)序列，該序列長(zhǎng)度為124個(gè)氨基酸殘基。示例性的多肽包括例如但不限于:包括一 個(gè)多肽序列的一種多肽，該多肽序列具有與選自下組的至少一種多肽序列至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的序列一致性，該組的構(gòu)成為:SEQ ID N0S:1至73，其中這種多肽結(jié)合⑶80和/或⑶86(或二者之一的或兩者的一個(gè)ECD )。一些以上說明的此類多肽具有調(diào)整或調(diào)節(jié)一種免疫應(yīng)答的能力，這些多肽包括例如，那些分離或重組的多肽，這些多肽每個(gè)包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列具有與選自下組的至少一種多肽序列至少 75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、99.5%、或100%的序列一致性，該組的構(gòu)成為:SEQ ID N0S:1至73，并且它們結(jié)合⑶80和/或⑶86和/或它的一個(gè)E⑶。多種免疫應(yīng)答中的一種或多種可通過本發(fā)明的此類多肽進(jìn)行調(diào)整或調(diào)節(jié)，包括但不限于:例如，T細(xì)胞的活化或增殖、細(xì)胞因子的合成或產(chǎn)生(例如，TNF-α、IFN- Y , IL-2、等的產(chǎn)生)、不同活化標(biāo)記的誘導(dǎo)(例如，⑶25、IL-2受體、等)、炎癥分子的合成或產(chǎn)生、炎癥、關(guān)節(jié)腫脹、關(guān)節(jié)觸痛、疼痛、僵硬、C-反應(yīng)性蛋白的血清水平、抗膠原抗體的產(chǎn)生、和/或T細(xì)胞依賴的抗體反應(yīng)。在一些情形下，與hCTLA-4或hCTLA-4E⑶相比，這種多肽具有阻抑或抑制至少一種此類免疫應(yīng)答的更大的能力。例如，一些此類多肽在體外測(cè)定中可以抑制T細(xì)胞活化或T細(xì)胞增殖。例如，以下給出的實(shí)例4至9證明了本發(fā)明的代表性融合蛋白在體外抑制T細(xì)胞增殖的能力，這些融合蛋白包括一種代表性突變CTLA-4ECD多肽序列，如在本文中所說明的那些。一些此類多肽可以在體內(nèi)抑制或阻抑受試者體內(nèi)的一種免疫應(yīng)答，如通過將一個(gè)治療或預(yù)防有效量的至少一種此類多肽給予需要免疫抑制療法的受試者。一些此類多肽預(yù)期用于不同的應(yīng)用中，包括例如但不限于:用于治療其中希望免疫調(diào)節(jié)的疾病、紊亂、以及病況的預(yù)防和/或治療方法，如以下更為詳細(xì)地討論。此類多肽預(yù)期用于用來(lái)在受試者體內(nèi)阻抑或抑制一種免疫應(yīng)答的預(yù)防和/或治療方法(例如，哺乳動(dòng)物(例如，人類)的免疫系統(tǒng)疾病或紊亂的體內(nèi)治療，其中免疫抑制或免疫調(diào)節(jié)是希望的)、用于抑制由一個(gè)受方(例如，由一種哺乳動(dòng)物，例如人類)對(duì)于來(lái)自供方的一個(gè)組織或器官的移植體排斥的方法、以及在本文的其他地方說明的其他方法。額外地或可替代地，一些此類多肽具有阻抑或抑制一種免疫應(yīng)答的一種能力，該能力是至少大約等于或大于hCTLA-4或hCTLA-4E⑶阻抑或抑制一種或多種類型的免疫應(yīng)答的能力。例如，一些此類多肽在體外和/或體內(nèi)測(cè)定和/或應(yīng)用(如以上說明的并且以下進(jìn)行更為詳細(xì)地說明的那些)中具有抑制T細(xì)胞活化或增殖的一種能力，該能力是至少大約等于或大于hCTLA-4或hCTLA-4E⑶在此類應(yīng)用中抑制T細(xì)胞活化或增殖的能力。額外地，一些此類多肽具有阻抑或抑制一種免疫應(yīng)答的一種能力(例如，T細(xì)胞活化或增殖、細(xì)胞因子的產(chǎn)生、T細(xì)胞依賴的抗體反應(yīng))，該能力大于一種LEA29Y多肽(一種特異的突變CTLA-4E⑶，包括在SEQ ID NO: 168中所示的多肽序列)阻抑或抑制一種免疫應(yīng)答的能力。例如，以下給出的實(shí)例4至9將本發(fā)明的示例性融合蛋白(包括本發(fā)明的一個(gè)突變CTLA-4E⑶多肽序列)在體外抑制T細(xì)胞增殖的能力相對(duì)于一種融合蛋白(包括hCTLA-4E⑶或LEA29Y多肽)在體外抑制T細(xì)胞增殖的能力進(jìn)行了比較。此類分子預(yù)期在不同的治療性應(yīng)用中具有有益的用途，包括自身免疫疾病和紊亂的治療，以及用于抑制器官、細(xì)胞、或組織移植體的移植的排斥的預(yù)防和治療的方法。—些此類多肽彼此之間可具有例如，一種氨基酸缺失、添加和/或取代的差異。一個(gè)氨基酸取代可以是一個(gè)保守性或非保守性取代。見，如，標(biāo)題為“序列變異”的部分。在另一個(gè)方面，本發(fā)明還提供了分離或重組的多肽，這些多肽各組包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列具有與選自下組的至少一種多肽序列至少95%、96%、97%、98%、99%、或100%的序列一致性，該組的成為:SEQ ID NOS:1至73，其中該多肽結(jié)合一個(gè)單體h⑶80或單體h⑶86或二者之一的或兩者的一個(gè)E⑶。一些此類多肽具有(I)對(duì)于單體h⑶86的一種結(jié)合親和力，該結(jié)合親和力是大約等于或大于單體hCTLA-4或一種LEA29Y多肽對(duì)于單體hCD86或它的一個(gè)ECD的結(jié)合親和力，以及(2)對(duì)于單體hCD80的一種結(jié)合親和力，該結(jié)合親和力是大約等于或大于單體hCTLA-4對(duì)于單體h⑶80的結(jié)合親和力。該LEA29Y多肽包括SEQ ID NO: 168的多肽序列。此外，一些此類多肽與單體hCTLA-4、單體hCTLA_4E⑶、或LEA29Y多肽相比具有阻抑在本文中說明的一種或多種免疫應(yīng)答的更高的能力(例如，T細(xì)胞的活化/增殖、細(xì)胞因子的合成/產(chǎn)生、活化標(biāo)記的誘導(dǎo)、炎癥分子的產(chǎn)生、炎癥、抗膠原Ab的產(chǎn)生、T細(xì)胞依賴的Ab應(yīng)答)。本發(fā)明還提供了分離或重組的多 肽，這些多肽各自包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列具有與選自下組的至少一種多肽序列至少95%、96%、97%、98%、99%、或100%的序列一致性，該組的構(gòu)成為:SEQ ID NOS:1至73，其中該多肽具有對(duì)于一個(gè)h⑶86E⑶或h⑶80E⑶的一種結(jié)合親和力，該結(jié)合親和力對(duì)應(yīng)地是大約等于或大于一個(gè)hCTLA-4ECD對(duì)于該h⑶86E⑶或h⑶80E⑶的結(jié)合親和力。一些此類多肽具有對(duì)于該h⑶86E⑶的一種結(jié)合親和力，該結(jié)合親和力大于該 hCTLA-4ECD (SEQ ID N0:159)或該LEA29Y多肽(SEQ ID NO: 168)對(duì)于該h⑶86E⑶的結(jié)合親和力。一些此類多肽具有對(duì)于該h⑶80E⑶的一種結(jié)合親和力，該結(jié)合親和力大于該hCTLA-4E⑶對(duì)于該h⑶80E⑶的結(jié)合親和力。一些此類多肽具有阻抑一種免疫應(yīng)答的能力，在一些情形下是與該hCTLA-4E⑶或該LEA29Y多肽相比阻抑一種或多種免疫應(yīng)答(包括以上說明的以及全文中說明的)的更大的能力。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種分離或重組的CTLA-4多肽變體，該多肽變體包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列(a)它與在SEQ ID N0:159中所示的一個(gè)人類CTLA-4E⑶的多肽序列具有不超過15個(gè)氨基酸殘基、不超過14個(gè)氨基酸殘基、不超過13個(gè)氨基酸殘基、不超過12個(gè)氨基酸殘基、不超過11個(gè)氨基酸殘基、不超過10個(gè)氨基酸殘基、不超過9個(gè)氨基酸殘基、不超過8個(gè)氨基酸殘基、不超過7個(gè)氨基酸殘基、不超過6個(gè)氨基酸殘基、不超過5個(gè)氨基酸殘基(例如，不超過1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、或14個(gè)氨基酸殘基)的差異，并且(b)其中在該hCTLA-4ECD多肽序列(SEQ ID NO: 159)的位置24、30、32、39、41、50、54、55、56、64、65、70、85、104或106上的氨基酸殘基，在該CTLA-4多肽變體序列中被一個(gè)不同的氨基酸殘基取代，其中根據(jù)SEQ ID NO: 159對(duì)該CTLA-4多肽變體的氨基酸殘基位置進(jìn)行編號(hào)，并且其中該CTLA-4多肽變體具有結(jié)合⑶80或⑶86或二者之一的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域或片段的能力，和/或具有阻抑或抑制一種免疫應(yīng)答的能力。一些此類變體具有選自下組的一個(gè)或多個(gè)(如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15個(gè))氨基酸取代，該組的構(gòu)成為:A24E、A24S、S25A、G27H、K28N、T30N、T30D、T30A、V321、Q39K、Q39E、D41G、D41N、D41S、A50M、A50G、M54K、M54E、M54V、G55E、G55K、N56D、D63K、S64P、I65S、I65F、I65T、S70F、M85A、M85V、M85A、L104E、L104D、以及 1106M、1106F、以及 1106L。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種分離或重組的突變CTLA-4多肽，該多肽包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列(a)與在SEQ ID NO: 159中所示的人類CTLA-4細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的多肽序列具有不超過12個(gè)氨基酸殘基(例如，不超過2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、或12個(gè)氨基酸殘基)的差異，并且(b)包括選自下組的2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、或12個(gè)氨基酸取代，該組的構(gòu)成為:對(duì)應(yīng)于SEQ ID N0:159的氨基酸位置24、30、32、50、54、55、56、64、65、70、以及104的氨基酸殘基位置，其中根據(jù)SEQ ID NO: 159對(duì)該突變CTLA-4多肽的氨基酸位置進(jìn)行編號(hào)，并且其中該突變CTLA-4多肽具有結(jié)合CD80或CD86或二者之一的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域或片段的能力，和/或具有阻抑或抑制一種免疫應(yīng)答的能力。在這些位置中的示例性氨基酸取代包括但不限于:在WT hCTLA-4ECD中存在的氨基酸殘基的保守性氨基酸取代和/或 A24S/E (即，A 24S 或 A24E)、T30N/D/A (即，T30N 或 T30D 或 T30A)、V32I/L/M/V、A50M/G、M54E/V/K、G55E/K/R、N56D/A、S64P/M/C、I65S/T/F/V、S70F/Y/W、L104E/M、或它們的任何取代組合。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了分離或重組的多肽(例如，突變CTLA-4E⑶多肽)，這些多肽各自包括多一個(gè)肽序列，該多肽序列(a)與選自下組的多肽序列具有不超過14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或I個(gè)氨基酸殘基的差異，該組的構(gòu)成為:SEQ ID N0S:1至73，并且(b)其中在該多肽序列中在氨基酸位置41、50、54、55、56、64、65、70、或85的氨基酸殘基是與在所述所選擇的多肽序列(例如，選自SEQ ID N0S:1至73的多肽)的對(duì)應(yīng)位置上的氨基酸殘基相同，其中該多肽結(jié)合CD80和/或CD86、和/或二者之一的或兩者的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域，和/或抑制一種或多種免疫應(yīng)答。在一些情形下，該多肽與所選擇的多肽(例如，選自SEQ ID勵(lì)3:1至73)具有不超過10、9、8、7、或6個(gè)氨基酸殘基(例如，不超過1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10個(gè)氨基酸殘基)的差異，但占據(jù)氨基酸殘基位置41、50、54、55、56、64、65、70、以及85中一個(gè)或多個(gè)的氨基酸是與在所選擇的多肽序列(例如，選自SEQ NOS:1至73中的一個(gè))中的位置上所包括的氨基酸殘基相同，并且未缺失或被另一個(gè)氨基酸取代。一些此類多肽包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列與所選擇的多肽序列具有不超過10、9、8、7、或6個(gè)氨基酸殘基(例如，不超過1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10個(gè)氨基酸殘基)的差異，并且它在氨基酸殘基位置24、30、32、41、50、54、55、56、64、65、70、85、104以及106中的一個(gè)或多個(gè)上包括多個(gè)氨基酸殘基，這些氨基酸殘基與在所選擇的多肽序列中在對(duì)應(yīng)位置上的氨基酸殘基相同。此類多肽可以在一個(gè)或多個(gè)位置上與所選擇的多肽序列具有一個(gè)或多個(gè)氨基酸缺失、一個(gè)或多個(gè)添加、和/或一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代的差異，這個(gè)或這些位置并未限定為具有與所選擇序列的氨基酸相同的氨基酸。包括了具有對(duì)于hCD86或它的一個(gè)片段(例如，hCD86ECD)的一種結(jié)合親和力或親合力的此類多肽，該結(jié)合親和力或親合力對(duì)應(yīng)地是至少大約等于或大于該hCTLA-4E⑶或LEA29Y多肽對(duì)于h⑶86或它一個(gè)片段(例如，E⑶)的結(jié)合親和力或親合力。一些此類多肽具有對(duì)于h⑶80或它的一個(gè)片段(例如，h⑶80E⑶)的一種結(jié)合親和力，該結(jié)合親和力對(duì)應(yīng)地是至少大約等于或大于該hCTLA-4E⑶多肽對(duì)于h⑶80或它的一個(gè)片段的結(jié)合親和力或親合力。一些此類多肽包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列具有大約等于該hCTLA-4E⑶的氨基酸長(zhǎng)度的長(zhǎng)度，例如，長(zhǎng)度為118至130、119至129、120至128、121至127、122至126、123至125、或124個(gè)氨基酸殘基。一些此類多肽可阻抑不同免疫應(yīng)答中的一種或多種，包括例如，T細(xì)胞活化、T細(xì)胞增殖、細(xì)胞因子的合成 或產(chǎn)生(例如，TNF-α、IFN-Y、IL-2的產(chǎn)生)、活化標(biāo)記的誘導(dǎo)(例如，⑶25、IL-2受體)、炎癥、炎癥分子的產(chǎn)生、抗膠原Ab的產(chǎn)生、和/或T細(xì)胞依賴的Ab應(yīng)答。與hCTLA-4、hCTLA-4E⑶多肽、或LEA29Y多肽相比，一些此類多肽具有阻抑一種或多種此類免疫應(yīng)答的更大的能力。例如，一些此類多肽可在體外測(cè)定中阻抑T細(xì)胞活化或T細(xì)胞增殖。例如，實(shí)例4至9將本發(fā)明的代表性融合蛋白(本發(fā)明的一個(gè)突變CTLA-4ECD多肽序列)在體外抑制T細(xì)胞增殖的能力相對(duì)于一種融合蛋白(包括該hCTLA-4E⑶或LEA29Y多肽)這樣做的能力進(jìn)行了比較。一些此類多肽可在體內(nèi)抑制或阻抑受試者體內(nèi)的一種免疫應(yīng)答，如，通過將一個(gè)治療或預(yù)防有效量的至少一種此類多肽給予需要免疫抑制療法的受試者。此類多肽預(yù)期用于不同的應(yīng)用中，包括例如但不限于:用于治療其中希望阻抑一種免疫應(yīng)答的免疫系統(tǒng)疾病、紊亂、以及病況的預(yù)防和/或治療方法，包括例如，用于治療自身免疫疾病以及紊亂的預(yù)防和/或治療方法，用于抑制由一個(gè)受方(例如，由一種哺乳動(dòng)物，例如人類)對(duì)于來(lái)自供方的一個(gè)組織或器官移植的排斥的方法、以及在本文的地方所說明的其他方法。

在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種分離或重組的多肽(例如，突變CTLA-4E⑶多肽)，該多肽各自包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列(a)與在SEQ ID NO: 159中所示的人類CTLA-4細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的多肽序列具有不超過10個(gè)氨基酸殘基、不超過9個(gè)氨基酸殘基、不超過8個(gè)氨基酸殘基、不超過7個(gè)氨基酸殘基、不超過6個(gè)氨基酸殘基、不超過5個(gè)氨基酸殘基、不超過4個(gè)氨基酸殘基、不超過3個(gè)氨基酸殘基、不超過2個(gè)氨基酸殘基、或不超過I個(gè)氨基酸殘基(例如，不超過1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10個(gè)氨基酸殘基)的差異，并且(b)包括至少一個(gè)氨基酸取代，該取代是在對(duì)應(yīng)于相對(duì)SEQ ID勵(lì):159的多肽序列的位置50、54、55、56、64、65、70、或85的一個(gè)氨基酸殘基位置上，其中該多肽結(jié)合h⑶80和/或h⑶86、和/或二者之一的或兩者的一個(gè)ECDjP /或抑制一種免疫應(yīng)答(例如，T細(xì)胞的活化或增殖、細(xì)胞因子的合成或產(chǎn)生(例如，TNF-a、IFN-Y、IL-2的產(chǎn)生)、活化標(biāo)記的誘導(dǎo)(例如，⑶25、IL_2受體)、炎癥、炎癥分子的產(chǎn)生、抗膠原Ab的產(chǎn)生、和/或T細(xì)胞依賴的Ab應(yīng)答)，如，在以下更為詳細(xì)說明的體外或體內(nèi)方法和/或測(cè)定中。一些此類多肽包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列長(zhǎng)度是124個(gè)氨基酸殘基。一些此類多肽包括2、3、4、5或6個(gè)氨基酸取代，這些取代是在相對(duì)在SEQ ID NO:159中給出的多肽序列、選自下組的位置上，該組的構(gòu)成為:氨基酸殘基位置50、54、55、56、64、65、70或85。一些此類多肽進(jìn)一步包括一個(gè)氨基酸取代，該氨基酸取代是在對(duì)應(yīng)于相對(duì)SEQ ID NO: 159的位置104和/或30的氨基酸殘基位置上。一些此類多肽包括至少一個(gè)氨基酸取代，該氨基酸取代是在相對(duì)SEQ ID NO: 159在位置70 (可任選地S70F)、位置64 (可任選地S64P)、位置50 (可任選地A50M/G，例如A50M、A50G)、位置54 (可任選地M54K/V，例如M54K)、位置65 (可任選地I65S)、位置56 (可任選地為N56D)、位置55 (可任選地G55E/K，例如G55E、G55K)、位置85 (可任選地M85A)、和/或位置24 (可任選地A24E/S，例如A24E)上。任何此類多肽可進(jìn)一步包括一個(gè)氨基酸取代，該氨基酸取代是相對(duì)SEQ ID NO: 159在位置104 (可任選地L104E/D，例如L104E)、位置30 (可任選地T30N/D/A，例如T30N、T30D或T30A)、和/或位置32 (可任選地V32I)。在一些情形下，該多肽包括在相對(duì)SEQ ID NO: 159的氨基酸位置上的一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代，這些氨基酸取代選自下組的，其構(gòu)成為:A50M、M54K、G55E、N56D、S64P、I65S、W&S70F。一些此類多肽展示了對(duì)于⑶86 (例如，h⑶86)或⑶86E⑶(例如，h⑶86E⑶)一種的結(jié)合親和力，該結(jié)合親和力對(duì)應(yīng)地是大約等于或大于一個(gè)單體hCTLA-4E⑶對(duì)于⑶86或⑶86E⑶的結(jié)合親和力。一些此類多肽展示了對(duì)于⑶80 (例如，h⑶80)或⑶80E⑶(例如，h⑶80E⑶)的一種結(jié)合親和力，該結(jié)合親和力對(duì)應(yīng)地是大于一種單體hCTLA-4E⑶對(duì)⑶80或⑶80E⑶的結(jié)合親和力。一些此類多肽具有阻抑或抑制一種或多種免疫應(yīng)答的能力(例如，T細(xì)胞的活化或增殖、細(xì)胞因子的產(chǎn)生、等)，如，在體外和/或在體內(nèi)。一些此類多肽與hCTLA-4、hCTLA-4ECD、或LEA29Y多肽相比以一種更大的程度來(lái)抑制一種或多種此類免疫應(yīng)答。此類多肽預(yù)期在不同的治療應(yīng)用中具有有益的用途，包括用于治療自身免疫疾病以及紊亂的預(yù)防和/或治療性方法，以及用于抑制器官、細(xì)胞、或組織移植體的移植的排斥的預(yù)防和/或治療方法。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種分離或重組的多肽(例如，突變CTLA-4E⑶多肽)，這些多肽每個(gè)包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列(a)與在SEQ ID N0:159中所示的人類CTLA-4細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的多肽序列具有不超過6個(gè)氨基酸殘基(例如，不超過1、2、3、4、5、或6個(gè)氨基酸殘基)的差異，并且(b)包括在相對(duì)SEQ ID NO: 159的氨基酸位置上的一個(gè)或多個(gè)取代，該取代選自下組，其構(gòu)成為:A50M、M54K、G55E、N56D、S64P、I65S、以及S70F，其中該多肽結(jié)合hCD80和/或hCD86、或二者之一的或兩者的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域，和/或在體外測(cè)定和/或體內(nèi)方法中阻抑一種免疫應(yīng)答(例如，T細(xì)胞的活化或增殖、細(xì)胞因子的合成或產(chǎn)生、活化標(biāo)記的誘導(dǎo)、炎癥分子的產(chǎn)生、炎癥、關(guān)節(jié)腫脹或觸痛、疼痛、僵硬、C-反應(yīng)性蛋白的血清水品、抗膠原Ab的產(chǎn)生和/或T細(xì)胞依賴的Ab應(yīng)答、等)。此類多肽預(yù)期用于治療患有其中免疫抑制療法會(huì)具有益處的疾病、紊亂、以及病況的受試者，包括例如，用于治療自身免疫疾病和紊亂的治療及預(yù)防方法， 以及用于阻抑器官、細(xì)胞、或組織移植體的移植的預(yù)防及治療方法。本發(fā)明還提供了一種分離或重組的多肽，該多肽包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列包括⑴與SEQ ID N0S:24的多肽序列至少95%的序列一致性，以及(ii) 一個(gè)苯丙胺酸殘基，該苯丙胺酸殘基在對(duì)應(yīng)于由SEQ ID N0S:1至73所構(gòu)成的組中選出的所述多肽序列的位置70的氨基酸位置上，其中該多肽結(jié)合h⑶80和/或h⑶86、或二者之一的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域，和/或在體外測(cè)定和/或體內(nèi)方法中抑制一種免疫應(yīng)答(例如，T細(xì)胞的活化或增殖、細(xì)胞因子的合成或產(chǎn)生、活化標(biāo)記的誘導(dǎo)、炎癥分子的產(chǎn)生、炎癥、關(guān)節(jié)或觸痛、疼痛、僵硬、C-反應(yīng)性蛋白的血清水平、抗膠原Ab的產(chǎn)生、和/或T細(xì)胞依賴的Ab應(yīng)答、等)。一些此類多肽包括相對(duì)于所選擇序列的以下中的一個(gè)或多個(gè):在對(duì)應(yīng)于位置24的一個(gè)氨基酸位置上的一個(gè)谷氨酸殘基、在對(duì)應(yīng)于位置30的一個(gè)氨基酸位置上的一個(gè)天冬酰胺殘基、在對(duì)應(yīng)于位置32的一個(gè)氨基酸位置上的一個(gè)異亮氨酸殘基、在對(duì)應(yīng)于位置50的一個(gè)氨基酸位置上的一個(gè)甲硫氨酸殘基、在對(duì)應(yīng)于位置54的一個(gè)氨基酸位置上的一個(gè)賴氨酸殘基、在對(duì)應(yīng)于位置55的一個(gè)氨基酸位置上的一個(gè)谷氨酸殘基、在對(duì)應(yīng)于位置56的一個(gè)氨基酸位置上的一個(gè)天冬氨酸殘基、在對(duì)應(yīng)于位置64的一個(gè)氨基酸位置上的一個(gè)脯氨酸殘基、在對(duì)應(yīng)于位置65的一個(gè)氨基酸位置上的一個(gè)絲氨酸殘基、以及在對(duì)應(yīng)于位置104的氨基酸位置的谷氨酸殘基。此類多肽預(yù)期在不同的應(yīng)用中具有有益的用途，包括用于治療自身免疫疾病和紊亂的方法，以及用來(lái)抑制器官、細(xì)胞、或組織移植體的移植的方法。例如，在一個(gè)非限制性的方面，本發(fā)明包括一種分離或重組的多肽(例如，突變CTLA-4E⑶)，該多肽包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列包括⑴與SEQ ID N0S: 24的多肽序列至少95%、96%、97%、98%、99%或100%的序列一致性，以及(ii) 一個(gè)苯丙胺酸殘基，該苯丙氨酸殘基在對(duì)應(yīng)于SEQ ID NO:24的多肽序列的位置70的一個(gè)氨基酸位置上，其中該多肽結(jié)合hCD80和/或hCD86、和/或二者之一的或兩者的一個(gè)ECD，和/或在體外和/或體內(nèi)阻抑一種免疫應(yīng)答。該多肽可包括相對(duì)SEQ ID N0:24的以下中的至少 一項(xiàng):在位置24上的一個(gè)谷氨酸殘基、在位置30上的一個(gè)天冬酰胺殘基、在位置32上的一個(gè)異亮氨酸殘基、在位置50上的一個(gè)甲硫氨酸殘基、在位置54上的一個(gè)賴氨酸殘基、在位置55上的一個(gè)谷氨酸殘基、在位置56上的一個(gè)天冬氨酸殘基、在位置64上的一個(gè)脯氨酸殘基、在位置65上的一個(gè)絲氨酸殘基、以及在位置104上的一個(gè)谷氨酸殘基。本發(fā)明還包括一種分離或重組的多肽(例如，突變CTLA-4E⑶多肽)，該多肽結(jié)合h⑶80和/或h⑶86 (和/或二者之一的或兩者的一個(gè)E⑶)，和/或抑制一種免疫應(yīng)答(如以上所說明)，例如，在體外和/或體內(nèi)，其中該多肽包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列(a)與在SEQ ID NO: 159中所示的人類CTLA-4ECD多肽的多肽序列具有不超過6個(gè)氨基酸殘基的差異，并且(b)包括至少一個(gè)氨基酸取代，其中所述至少一個(gè)氨基酸取代包括S70F，其中根據(jù)SEQ ID NO: 159對(duì)氨基酸殘基位置進(jìn)行編號(hào)。該多肽可進(jìn)一步包括至少一個(gè)氨基酸取代，這些氨基酸取代選自下組，其構(gòu)成為 A24E、T30N、V321、D41G、A50M、M54K、G55E、N56D、S64P、I65S、M85A、L104E、以及I106F。此類多肽據(jù)信用于不同的應(yīng)用中，包括用于治療自身免疫疾病及紊亂的方法，以及用于阻抑器官、細(xì)胞、組織、或移植體移植的方法。本發(fā)明還包括一種分離或重組的多肽，該多肽包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列(a)與在SEQ ID NO: 31中所示的多肽序列具有不超過6個(gè)氨基酸殘基的差異，額(b)包括以下的至少一項(xiàng):在對(duì)應(yīng)于SEQ ID NO: 31的位置50的一個(gè)位置上的一個(gè)甲硫氨酸殘基、在對(duì)應(yīng)于SEQ ID NO:31的位置54的一個(gè)位置上的一個(gè)賴氨酸殘基、在對(duì)應(yīng)于SEQ ID N0:31的位置55的一個(gè)位置上的一個(gè)谷氨酸殘基、在對(duì)應(yīng)于SEQ ID NO: 31的位置64的一個(gè)位置上的一個(gè)脯氨酸殘基、在對(duì)應(yīng)于SEQ ID NO: 31的位置65的一個(gè)位置上的一個(gè)絲氨酸殘基、在對(duì)應(yīng)于SEQ ID N0:31的位置70的一個(gè)位置上的一個(gè)苯丙氨酸殘基，其中根據(jù)SEQ ID NO:31對(duì)氨基酸殘基位置進(jìn)行編號(hào)，并且該多肽結(jié)合CD80和/或CD86、和/或二者之一的或兩者的一個(gè)ECDjP /或在體外和/或體內(nèi)阻抑如以上所說明的一種免疫應(yīng)答。該多肽可包括在對(duì)應(yīng)于SEQ ID NO:31的位置104的一個(gè)位置上的一個(gè)谷氨酸殘基、在對(duì)應(yīng)的位置30的一個(gè)位置上的一個(gè)天冬酰胺殘基、和/或在對(duì)應(yīng)的位置32的一個(gè)位置上的一個(gè)異亮氨酸殘基。此類多肽據(jù)信用于不同的應(yīng)用中，包括用于治療自身免疫疾病及紊亂的方法，以及用于抑制器官、細(xì)胞、或組織移植體的移植的方法。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種分離或重組的多肽，該多肽包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列包括⑴與SEQ ID N0S:36至46以及55所構(gòu)成的組中選出的一個(gè)多肽序列至少95%、96%、97%、98%、或99%的序列一致性，以及(ii) 一個(gè)谷氨酸殘基，該谷氨酸殘基在所述所選擇的多肽序列的氨基酸位置55上，其中該多肽結(jié)合CD80和/或CD86、或二者之一的或兩者的一個(gè)ECDjP /或阻抑一種免疫應(yīng)答?？墒艿阶枰值拿庖邞?yīng)答包括例如，T細(xì)胞的活化或增殖、細(xì)胞因子的合成或產(chǎn)生(例如，TNF-a、IFN-Y、IL-2的產(chǎn)生)、活化標(biāo)記的誘導(dǎo)(例如，⑶25、IL-2受體)、炎癥、炎癥分子的產(chǎn)生、抗膠原Ab的產(chǎn)生、和/或T細(xì)胞依賴的Ab應(yīng)答。這種多肽序列可進(jìn)一步包括一個(gè)在氨基酸位置70上的苯丙氨酸殘基。這種多肽序列可進(jìn)一步包括一個(gè)在位置64上的脯氨酸殘基和/或一個(gè)在位置30上的天冬酰胺殘基。這種多肽序列可進(jìn)一步包括一個(gè)在位置50上的甲硫氨酸殘基和/或一個(gè)在位置54上的賴氨酸殘基。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種分離或重組的多肽，該多肽包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列包括Q)與SEQ ID勵(lì)5:28、30、36至46、55至57、以及65至73所構(gòu)成的組中選出的一個(gè)多肽序列至少95%、96%、97%、98%、或99%的序列一致性，以及(ii) 一個(gè)谷氨酸殘基，該谷氨酸殘?jiān)谒鏊x擇的多肽序列的氨基酸位置55上，其中該多肽結(jié)合CD80和/或CD86或二者之一的或兩者的 一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域，和/或阻抑一種免疫應(yīng)答，如，T細(xì)胞的活化或增殖、細(xì)胞因子的合成或產(chǎn)生(例如，TNF-a、IFN-Y、IL-2的產(chǎn)生)、活化標(biāo)記的誘導(dǎo)(例如，⑶25、IL-2受體)、炎癥、炎癥分子的產(chǎn)生、抗膠原Ab的產(chǎn)生、和/或T細(xì)胞依賴的Ab應(yīng)答。這種多肽序列可進(jìn)一步包括一個(gè)在氨基酸位置70上的苯丙氨酸殘基。這種多肽序列可進(jìn)一步包括一個(gè)在位置64上的脯氨酸殘基和/或一個(gè)在位置30上的天冬酰胺殘基。這種多肽序列可進(jìn)一步包括一個(gè)在位置50上的甲硫氨酸殘基和/或一個(gè)在位置54上的賴氨酸殘基。以上說明的本發(fā)明的任何多肽可進(jìn)一步包括一種肽，這種肽協(xié)助所述多肽的分泌。因此，在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種分離或重組的多肽，該多肽包括(a)如以上所說明的任何多肽(例如，以上說明的一個(gè)突變CTLA-4E⑶)，以及(b) —種肽，這種肽協(xié)助了經(jīng)表達(dá)的多肽從宿主細(xì)胞中的分泌。這種肽可任選地是一種信號(hào)肽。該信號(hào)肽的C-端典型地共價(jià)連結(jié)到該多肽的N-端上。該信號(hào)肽可包括一個(gè)氨基酸序列，該氨基酸序列具有與SEQIDN0:182 或 SEQ ID N0:216 的氨基酸序列至少 90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%的序列一致性。該信號(hào)肽可包括一個(gè)氨基酸序列，該氨基酸序列具有與包括SEQ ID NO: 160的氨基酸殘基I至35、I至36、或I至37的氨基酸序列至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或 100% 的序列一致性。以上說明的本發(fā)明的任何多肽可進(jìn)一步包括一個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域和/或細(xì)胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域。因此，在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種分離或重組的多肽，該多肽包括(a)以上說明的本發(fā)明的任何多肽(例如，以上說明的一個(gè)突變CTLA-4E⑶)，以及(b) —個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域。這種蛋白可以可任選地進(jìn)一步包括以上說明的一種信號(hào)肽，其中該信號(hào)肽的C-端共價(jià)連接到本發(fā)明的多肽的N-端上。該信號(hào)肽的C-端典型地共價(jià)連接到該跨膜結(jié)構(gòu)域的N-端上。該跨膜結(jié)構(gòu)域的C-端典型地共價(jià)連接到該細(xì)胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域的N-端上。在一些情形下，該跨膜結(jié)構(gòu)域包括一個(gè)氨基酸序列，該氨基酸序列具有與包括SEQ ID NO: 160的氨基酸殘基162至 182 的一個(gè)氨基酸序列至少 90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或 100% 的一致性。在一些情形下，該細(xì)胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域包括一個(gè)氨基酸序列，該氨基酸序列具有與包括SEQID NO: 160的氨基酸殘基183至223的一個(gè)氨基酸序列至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%的一致性。以上說明的多肽中的任何一個(gè)可包括一個(gè)或多個(gè)經(jīng)糖基化或聚乙二醇化的氨基酸殘基。本發(fā)明還包括一種分離或重組的多肽多聚體，該多肽多聚體包括二個(gè)或多個(gè)多肽，其中這些多聚體的多肽中 的至少一個(gè)是如在本文所說明的本發(fā)明的一種突變CTLA-4多肽(例如，一個(gè)突變CTLA-4E⑶或突變CTLA-4-1g)。這種多聚體包括本發(fā)明的至少一個(gè)多肽，并且可進(jìn)一步包括并不需要為本發(fā)明的一種多肽的至少一個(gè)額外的多肽。例如，該多聚體可包括本發(fā)明的至少一個(gè)多肽，以及至少一個(gè)其他多肽，它們可以是例如，一種野生型多肽(例如，hCTLA-4E⑶或hCTLA-4-1g)，和/或至少一種其他的突變多肽(如，非本發(fā)明的一種多肽的突變多肽)。該多聚體(或多聚體多肽)中的一些或所有的多肽可以是彼此相同的，或者在一些情況下，該多聚體中的所有多肽可以是彼此不同的。在一些情況下，該多肽多聚體是一個(gè)二聚體，該二聚體包括本發(fā)明的兩個(gè)多肽，它們可以可任選地是相同的多肽(即，同型二聚體)或不同的多肽(即，異型二聚體)。在一些情況下，該多肽多聚體是一個(gè)四聚體，該四聚體包括本發(fā)明的四個(gè)多肽。該四聚體可包括四個(gè)相同的多肽(即，同型四聚體)，或本發(fā)明的四個(gè)多肽的任何組合，這樣使得至少一個(gè)多肽是與其他三個(gè)多肽不相同的(即，異型四聚體)。本發(fā)明還包括一個(gè)四聚體，該四聚體包括四個(gè)相同的WT CTLA-4E⑶多肽(例如，hCTLA-4ECD)或四個(gè)相同的WT CTLA-4-1g (例如，hCTLA-4-1g)的四聚體。在一些情況下，該多聚體可結(jié)合CD80和/或CD86 (和/或二者之一的或兩者的一個(gè)ECD)、和/或可在體外和/或體內(nèi)方法中阻抑或抑制一種免疫應(yīng)答(例如，T細(xì)胞的增殖或活化、細(xì)胞因子的產(chǎn)生、等)。與 hCTLA-4 或 hCTLA-4-1g (例如，hCTLA_4_IgG2 或Orencia 蛋白)相比，一些此類多聚體在體外和/或體內(nèi)具有阻抑或抑制一種免疫應(yīng)答的更大的能力。這些多聚體的多肽可以連接在一起，如，通過共價(jià)連接體，如經(jīng)由在一個(gè)或多個(gè)多肽中的一個(gè)或多個(gè)半胱氨酸之間的二硫鍵。本發(fā)明的一些此類四聚體包括一種結(jié)構(gòu)，該結(jié)構(gòu)與一種抗體的結(jié)構(gòu)示意上類似，但其中該抗體的可變結(jié)構(gòu)域各自被在此說明的本發(fā)明的任何突變CTLA-4ECD多肽替換。一種抗體的重鏈包括一個(gè)重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH)，該重鏈可變結(jié)構(gòu)域融合到一個(gè)免疫球蛋白(Ig)CHl結(jié)構(gòu)域(例如，IgG2CHl)上，它又融合到一條鉸鏈上。該鉸鏈融合到一個(gè)Ig CH2結(jié)構(gòu)域(例如，IgG2CH2)上，其又融合到一個(gè)Ig CH3結(jié)構(gòu)域(例如，IgG2CH3)上。一個(gè)抗體的輕鏈包括一條輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(')，該輕鏈可變結(jié)構(gòu)域融合到Ig CK (Ck)或CA (Ca)結(jié)構(gòu)域上。這兩條重鏈和兩條輕鏈通過經(jīng)由在這些重鏈及輕鏈中的半胱氨酸殘基所形成的一個(gè)或多個(gè)二硫鍵而共價(jià)連接在一起。本發(fā)明包括一個(gè)突變CTLA-4四聚體，其中這些重鏈及輕鏈的可變結(jié)構(gòu)域中的每個(gè)被本發(fā)明的一種突變CTLA-4ECD多肽替換。因此，這種四聚體包括兩條輕鏈和兩條重鏈。每條輕鏈包括一個(gè)突變CTLA-4E⑶多肽，該多肽融合到一個(gè)Ig CK*CA結(jié)構(gòu)域上。每條重鏈包括一個(gè)突變CTLA-4E⑶，該E⑶融合到一個(gè)Ig CHl結(jié)構(gòu)域(例如，IgG2CHl)，它又融合到一個(gè)鉸鏈上。該鉸鏈融合到一個(gè)Ig CH2結(jié)構(gòu)域(例如，IgG2CH2)上，它又融合到一個(gè)Ig CH3結(jié)構(gòu)域(例如，IgG2CH3)上。這兩條重鏈和兩條輕鏈通過經(jīng)由在這些重鏈及輕鏈中的半胱氨酸殘基所形成的一個(gè)或多個(gè)二硫鍵而共價(jià)連接在一起。這種四聚體可被說明為一個(gè)CTLA-4-1g四聚體。構(gòu)建這種CTLA-4-1g四聚體的方法是已知的，并且是本領(lǐng)域中的普通技術(shù)人員會(huì)理解的。一個(gè)四聚體⑶4-1g構(gòu)建體(它包括一種CD4多肽，并且它中和了原代HIVl型分離物)說明于Allaway，G.P.et al.，AIDS Res.Hum.Retrovirusesll (5):533-9 (1995)中。該四聚體可包括四個(gè)相同的突變CTLA-4ECD多肽，或本發(fā)明的四個(gè)突變CTLA-4E⑶多肽的任何組合，這樣使得至少一個(gè)突變CTLA-4E⑶是與其他三個(gè)突變CTLA-4E⑶多肽不相同的。一些此類四聚體與hCTLA-4(或hCTLA_4_Ig)相比可以具有更高的結(jié)合親合力來(lái)結(jié)合⑶80和⑶86。一些此類四聚體可阻抑或抑制一種免疫應(yīng)答；在一些情形下，這種 四聚體與hCTLA-4或hCTLA-4-1g (例如，hCTLA_4_IgG2或OrenciaS)相比在體外測(cè)定或體內(nèi)應(yīng)用中具有阻抑或抑制一種免疫應(yīng)答(例如，T細(xì)胞的增殖或活化、細(xì)胞因子的產(chǎn)生、等)的更大的能力。本發(fā)明的多聚體預(yù)期在不同的應(yīng)用中具有有益的用途，包括用于治療自身免疫疾病及紊亂的方法，以及用于抑制器官、細(xì)胞、或組織移植體的移植的方法。本發(fā)明還包括一種分離或重組的偶聯(lián)物多聚體，該多聚體包括二個(gè)或多個(gè)偶聯(lián)物，其中該偶聯(lián)物中的至少一個(gè)是本發(fā)明的一種偶聯(lián)物，該偶聯(lián)物包括本發(fā)明的一種突變CTLA-4多肽(例如，一個(gè)突變CTLA-4E⑶或突變CTLA_4_Ig)。在該多聚體中的一些或所有的偶聯(lián)物可以是彼此相的，或者該多聚體中的所有偶聯(lián)物可以是彼此不同的。在一些情況下，該偶聯(lián)物多聚體是一個(gè)二聚體，該二聚體包括兩個(gè)偶聯(lián)物，或是一個(gè)四聚體，該四聚體包括四個(gè)偶聯(lián)物。一些此類偶聯(lián)物多聚體可結(jié)合⑶80及/⑶86(或二者之一的或兩者的一個(gè)ECD)、和/或在體外和/或體內(nèi)阻抑或抑制一種免疫應(yīng)答。在該多聚體中的偶聯(lián)物分子可以連接在一起，如通過共價(jià)連接體，如經(jīng)由在一個(gè)或多個(gè)偶聯(lián)物中的一個(gè)或多個(gè)半胱氨酸之間的二硫鍵。本發(fā)明包括一種分離或重組的多肽二聚體，該多肽二聚體包括以上所說明的本發(fā)明的任何兩個(gè)多肽(例如，以上說明的突變CTLA-4ECD)，其中該二聚體具有對(duì)于人類CD86或它的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的一種結(jié)合親合力，該結(jié)合親合力對(duì)應(yīng)地是大約等于或大于包括兩個(gè)人類CTLA-4細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的一個(gè)二聚體對(duì)于人類CD86或它的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的結(jié)合親合力。本發(fā)明包括分離或重組的多肽二聚體，這些多肽二聚體包括以上說明的本發(fā)明的兩個(gè)多肽(例如，以上說明的突變CTLA-4ECD)，其中該二聚體具有對(duì)于hCD80或它的一個(gè)E⑶的一種結(jié)合親合力，該結(jié)合親合力對(duì)應(yīng)地是大約等于或大于包括兩個(gè)hCTLA-4E⑶多肽(SEQ ID NO: 159)的一個(gè)二聚體對(duì)于hCD80或它的一個(gè)E⑶的結(jié)合親合力。例如，在一個(gè)非限制性的方面中，該二聚體可包括兩個(gè)多肽，其中每個(gè)多肽包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列具有與選自下組的一個(gè)序列至少95%、96%、97%、98%、99%、或100%的序列一致性，該組的構(gòu)成為:SEQ ID NOS:1至73，并且每個(gè)多肽結(jié)合h⑶80和/或h⑶86，和/或抑制一種免疫應(yīng)答。在另一個(gè)非限制性的方面中，該二聚體可包括兩個(gè)多肽，其中每個(gè)多肽與該hCTLA-4ECD的多肽序列(SEQ ID NO: 159)具有不超過6個(gè)氨基酸殘基的差異，并且包括至少一個(gè)氨基酸取代，這些氨基酸取代是在相對(duì)SEQ ID NO: 159的一個(gè)氨基酸位置上，這些氨基酸取代選自下組，其構(gòu)成為:A50M、M54K、G55E、N56D、S64P、I65S、以及S70F ;并且該多肽可任選地進(jìn)一步包括取代L104E，并且每個(gè)多肽結(jié)合h⑶80和/或h⑶86，和/或抑制一種免疫應(yīng)答。在一些情形下，該二聚體具有對(duì)于h⑶80或它的一個(gè)E⑶的一種結(jié)合親合力，該結(jié)合親合力對(duì)應(yīng)地是大約等于或大于包括兩個(gè)hCTLA-4E⑶多肽的一個(gè)二聚體對(duì)于h⑶80或它的一個(gè)ECD的結(jié)合親合力。在一些情形下，該二聚體具有對(duì)于hCD86或它的一 ECD的一種結(jié)合親合力，該結(jié)合親合力對(duì)應(yīng)地是大于包括兩個(gè)LEA29Y多肽的一個(gè)二聚體對(duì)于hCD86或它的一個(gè)E⑶的結(jié)合親合力，其中每個(gè)LEA29Y多肽包括在SEQ ID NO: 168中所示的多肽序列。在一些情形下，該二聚體以一種速率從結(jié)合的hCD86或它的一個(gè)ECD中解離，該速率對(duì)應(yīng)地是小于包括兩個(gè)hCTLA-4E⑶多肽的一個(gè)二聚體從結(jié)合的h⑶86或它的一個(gè)E⑶中解離的速率。在一些情形下，該二聚體以一種速率從結(jié)合的h⑶86或它的一個(gè)E⑶中解離，該速率對(duì)應(yīng)地是小于包括兩個(gè)LEA29Y多肽的一個(gè)二聚體從結(jié)合的h⑶86或它的一個(gè)E⑶中解離的速率，其中每個(gè)LEA29Y多肽包括在SEQ ID NO: 168中所示的多肽序列。在一些情形下，該二聚體以一種速率與h⑶86或它的一個(gè)E⑶相結(jié)合，該速率對(duì)應(yīng)地是大于包括兩個(gè)hCTLA-4E⑶多肽的一個(gè)二聚體與h⑶86或它的一個(gè)E⑶相結(jié)合的速率。在一些情形下，該二聚體以一種速率與h⑶86或它的一個(gè)E⑶相結(jié)合，該速率對(duì)應(yīng)地是大于包括兩個(gè)LEA29Y多肽的一個(gè)二聚體與hCD86或它的一個(gè)ECD相結(jié)合的速率，其中每個(gè)LEA29Y多肽包括在SEQ ID NO: 168中所示的多肽序列。在一些情形下，這種包括一個(gè)突變CTLA-4E⑶，該E⑶與包括兩個(gè)人類CTLA-4細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域或兩個(gè)LEA29Y多肽的一個(gè)二聚體相比具有阻抑一種免疫應(yīng)答(例如，T細(xì)胞的增殖或活化、細(xì)胞因子的產(chǎn)生 、等)的更大的能力。—些此類二聚體具有一個(gè)⑶86平衡解離常數(shù)(KD)，該⑶86平衡解離常數(shù)小于包括兩個(gè)hCTLA-4E⑶多肽或兩個(gè)LEA29Y多肽的一個(gè)二聚體的⑶86平衡解離常數(shù)(KD)。一些此類二聚體具有一個(gè)⑶86平衡解離常數(shù)(KD)，該⑶86平衡解離常數(shù)小于包括兩個(gè)LEA29Y多肽的一個(gè)二聚體的⑶86平衡解離常數(shù)(KD)，每個(gè)LEA29Y多肽包括在SEQ ID NO: 168中所示的多肽序列。與一個(gè)相同化合價(jià)的全長(zhǎng)hCTLA-4的多聚體(即，一個(gè)包括相同數(shù)目的全長(zhǎng)CTLA-4多肽的多聚體)相比，包括本發(fā)明的至少兩個(gè)多肽的一些此類多聚體(例如，包括本發(fā)明的兩個(gè)突變CTLA-4ECD多肽的一個(gè)二聚體)具有阻抑一種免疫應(yīng)答的增強(qiáng)的能力。與一個(gè)相同化合價(jià)的hCTLA-4E(XD的多聚體(即，一個(gè)包括相同數(shù)目的hCTLA-4E⑶多肽的多聚體)，包括本發(fā)明的至少兩個(gè)多肽的一些此類多聚體具有阻抑一種免疫應(yīng)答的增強(qiáng)的能力。以上說明的本發(fā)明的任何多肽可進(jìn)一步包括一個(gè)額外的增強(qiáng)溶解度的多肽序列，如，一種免疫球蛋白(Ig)多肽序列，由此形成例如，一種可溶性融合蛋白，如以下更為詳細(xì)地討論。一個(gè)多肽多聚體的每個(gè)多肽可進(jìn)一步包括一個(gè)額外的增強(qiáng)溶解度的多肽序列，如，一個(gè)Ig多肽序列，由此形成例如，一種可溶性融合蛋白。因此，例如，如以上所說明包括本發(fā)明的二個(gè)或多個(gè)多肽的一個(gè)二聚體的每個(gè)多肽可進(jìn)一步包括一個(gè)額外的增強(qiáng)溶解度的多肽序列,如,一個(gè)Ig多肽序列，由此形成例如,一種可溶性融合蛋白。本發(fā)明的此類多肽和二聚體預(yù)期在不同的應(yīng)用中具有有益的用途，包括用于治療自身免疫疾病及紊亂的方法，以及用于抑制器官、細(xì)胞、或組織移植體的移植的方法。如之前所討論的，該成熟hCTLA-4蛋白序列典型地以在SEQ ID NO: 160中所示的全長(zhǎng)hCTLA-4蛋白序列的氨基酸位置38上的甲硫氨酸殘基起始，并且該成熟hCTLA-4蛋白序列的氨基酸殘基典型地以這個(gè)甲硫氨酸殘基作為該第一氨基酸(即，占據(jù)位置I)起始來(lái)進(jìn)行編號(hào)。本發(fā)明的一些突變CTLA-4多肽(包括單體以及二聚體融合蛋白以及多聚性多肽)包括在一個(gè)氨基酸位置上的至少一個(gè)氨基酸取代，該氨基酸位置對(duì)應(yīng)于經(jīng)典的hCTLA-4/hB7_2 結(jié)合界面(見，如，Schwartz et al.，Nature410:604-608(2001))之外的成熟hCTLA-4蛋白序列中的一個(gè)氨基酸位置，包括但不限于例如，氨基酸位置24、41、54、55、56、64、65、70及85中的任何一個(gè)。大體上，本領(lǐng)域中的普通技術(shù)人員不會(huì)預(yù)期，在以上提及的位置(24、41、54、55、56、64、65、70、和/或85)上的一個(gè)氨基酸取代，或選自下組的一個(gè)或多個(gè)取代的任何組合，該組的構(gòu)成為:位置24、41、54、55、56、64、65、70、以及85，會(huì)具有增強(qiáng)hCTLA-4對(duì)于hB7-2的結(jié)合親和力或親合力的能力，會(huì)具有抑制CD28-陽(yáng)性細(xì)胞與B7-2-陽(yáng)性細(xì)胞的相互作用的增強(qiáng)的能力，或會(huì)提供與例如，hCTLA-4E⑶或hCTLA-4-1g相比阻抑或抑制一種免疫應(yīng)答的更大的能力(例如,T細(xì)胞的活化或增殖、細(xì)胞因子的合成或產(chǎn)生、活化標(biāo)記的誘導(dǎo)、炎癥分子的合成或 產(chǎn)生、抗膠原抗體的產(chǎn)生、T細(xì)胞依賴的抗體反應(yīng)、以及類似物)。此夕卜，本領(lǐng)域中的普通技術(shù)人員將不會(huì)預(yù)期，在以上說明的位置(24、41、54、55、56、64、65、70、和/或85)中的任何一個(gè)上或此類位置的任何組合上在本文中所說明的一個(gè)或多個(gè)具體的氨基酸取代或多個(gè)具體的氨基酸取代的組合，會(huì)具有增進(jìn)hCTLA-4對(duì)于hB7-2的結(jié)合親和力或親合力的能力，具有抑制CD28-陽(yáng)性細(xì)胞與B7-2-陽(yáng)性細(xì)胞的相互作用的增強(qiáng)的能力，或提供與例如，hCTLA-4E⑶或hCTLA-4-1g相比阻抑或抑制一種免疫應(yīng)答的更大的能力。突變CTLA-4融合蛋白本發(fā)明還提供了新穎的分離或重組融合蛋白，該融合蛋白包括一個(gè)第一多肽(它是以上說明的并且全文說明的本發(fā)明的這些多肽中的至少一個(gè)(如，本發(fā)明的一種突變CTLA-4多肽，例如，一種突變CTLA-4E⑶多肽))，該第一多肽連接或融合到一個(gè)第二多肽上，由此形成一種融合蛋白。該第二多肽典型地協(xié)助了該第一多肽的分泌或表達(dá)。示例性的突變CTLA-4E⑶多肽包括了包括識(shí)別為SEQ ID N0S:1至73的序列的那些。本發(fā)明包括融合蛋白，這些融合蛋白包括免疫球蛋白(Ig)結(jié)構(gòu)域(如，Ig Fe結(jié)構(gòu)域)，這些結(jié)構(gòu)域融合到或附連到本發(fā)明的生物活性分子部分(如，本發(fā)明的突變CTLA-4多肽)上。本發(fā)明的融合蛋白據(jù)信用作預(yù)防和/或治療劑，因?yàn)樵诿庖咭种坪?或免疫調(diào)節(jié)中不同的免疫系統(tǒng)疾病以及紊亂以及病況的預(yù)防和/或治療性治療在診斷測(cè)定中是有益的、以及用于制備具有免疫調(diào)節(jié)和/或免疫抑制活性或特性的藥物或試劑，如在本文的其他地方更為詳細(xì)地討論。包括一種突變CTLA-4多肽以及一種Ig多肽(例如，Ig Fe)的本發(fā)明的融合蛋白被典型地稱為CTLA-4-1g融合蛋白。本發(fā)明的這些融合蛋白中的任何一個(gè)(包括以下以及實(shí)例中更為詳細(xì)說明的本發(fā)明的單體以及二聚體融合蛋白)可包括(作為一種Ig多肽)例如，一種Ig Fe多肽，如在本文中以及以上和以下的其他地方所說明。該第二多肽可直接連結(jié)到該第一多肽上。例如，該第二多肽(例如，一種Ig多肽，如，一種Ig Fe多肽)的N-端可直接共價(jià)融合到本發(fā)明的第一多肽(例如，突變CTLA-4ECD多肽)的C-端。可替代地，該第二多肽可間接地連接到該第一多肽上，如，其中在該第一以及第二多肽之間包括了一個(gè)連接物氨基酸序列，該連接物氨基酸序列包括1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10個(gè)或更多的氨基酸殘基。在其中包括了一個(gè)連接物的情形下，該氨基酸連接物序列的N-端典型地共價(jià)融合到該第一多肽(例如，突變CTLA-4E⑶)的C-端上，而該第二多肽(例如，Ig多肽，如，一種Ig Fe)的N-端典型地共價(jià)融合到該氨基酸連接物序列的C-端上。在一些情形下，該第二多肽包括一種Ig多肽的至少一部份，例如，一個(gè)Ig重鏈恒定區(qū)的一個(gè)或多個(gè)結(jié)構(gòu)域。該第二多肽可包括一種Ig多肽的一個(gè)鉸鏈區(qū)、CH2結(jié)構(gòu)域、以及CH3結(jié)構(gòu)域。在一些情形下，該第二多肽包括一種WT Ig多肽的一個(gè)Fe結(jié)構(gòu)域(B卩，WTIg Fe多肽)，例如，一種WT人類Ig多肽的一個(gè)Fe結(jié)構(gòu)域(B卩，WT人類Ig Fe多肽)。如其他地方所討論，該Ig多肽可以來(lái)自不通過的物種，包括例如，哺乳動(dòng)物，例如，人類、小鼠、非人類靈長(zhǎng)類(例如，猴、大猩猩)、貓、狗、馬、等，并且可以來(lái)自不同類別(例如，IgG、IgM、IgE、等)以及亞型(例如，對(duì)IgG而言包括IgGl、IgG2、IgG4、等)，并且可包括任何這種Ig多肽的一個(gè)Fe結(jié)構(gòu)域或部分。此類不同物種的Ig多肽的氨基酸以及核酸序列在本領(lǐng)域內(nèi)是已知的。在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了新穎的分離或重組融合蛋白，這些融合蛋白各自包括以上說明的本發(fā)明的一種分離或重組的突變CTLA-4多肽(例如，突變CTLA-4E⑶)，該突變CTLA-4多肽在其C-端直接地或間接地(經(jīng)由一個(gè)氨基酸連接物序列)共價(jià)連接或融合到一種Ig Fe多肽(B卩，一種Ig多肽的Fe結(jié)構(gòu)域)的N-端上。本發(fā)明的這些融合蛋白中的任何(包括以下以及實(shí)例中更為詳細(xì)說明的本發(fā)明的單體以及二聚體突變CTLA-4-1g融合蛋白)可包括一種Ig Fe多肽，如在本文中以及以上和以下的其他地方所說明的。一種Ig Fe多肽典型地包括該Ig多肽的鉸鏈區(qū)、CH2結(jié)構(gòu)域、以及CH3結(jié)構(gòu)域。該Ig Fe多肽可衍生自不同的物種，包括例如，人類、小鼠、靈長(zhǎng)類、等，并且可包括一種野生型Ig Fe多肽(例如，WT IgGl、IgG2或IgG4) 。示例性的人類IgG Fe多肽包括例如但不限于:人類IgGl、人類IgG2、人類IgG4、等。示例性人類IgGlFc的多肽序列在SEQ ID NO: 185中給出。示例性的人類IgG2Fc多肽的多肽序列對(duì)應(yīng)地在SEQ ID NO: 184及以218中給出?？商娲兀揑gFe多肽可包括一種突變Ig多肽。例如，可以在一種突變CTLA-4-1g融合蛋白中包括一種突變IgGlFc，其中一個(gè)或多個(gè)半胱氨酸殘基已經(jīng)被另一個(gè)氨基酸(例如，一個(gè)絲氨酸殘基)取代，由此消除了在兩個(gè)Ig鏈之間形成的一個(gè)或多個(gè)二硫鍵，或者其中一個(gè)或多個(gè)脯氨酸殘基被另一個(gè)氨基酸(例如，脯氨酸殘基)取代，以降低效應(yīng)子功能(降低的Fe受體結(jié)合)。一種示例性的突變IgGlFc多肽的多肽序列示于SEQ ID NO: 186。本發(fā)明包括一種分離或重組的融合蛋白，如，一種突變CTLA-4-1g 二聚體或突變CTLA-4-1g單體，該融合蛋白包括以上說明的至少一種重組突變CTLA-4多肽，該重組突變CTLA-4多肽在其C-端連結(jié)到一種重組Ig Fe多肽的N-端上，該重組的Ig Fe多肽包括一個(gè)氨基酸序列，該氨基酸序列具有與選自下組的一個(gè)氨基酸序列至少95%、96%、97%、98%、99%、或100%的一致性，該組的構(gòu)成為:SEQ ID N0S: 184 (人類 IgG2Fc 多肽)、185 (人類 IgGlFc 多肽)、186 (突變 IgGlFc 多肽)、以及218 (無(wú)C-端賴氨酸(K)殘基的人類IgG2Fc多肽)。
在一個(gè)方面，本發(fā)明的一種突變CTLA-4-1g融合蛋白的預(yù)測(cè)多肽序列包括以下片段:一個(gè)信號(hào)肽序列，它協(xié)助了該融合蛋白的分泌(例如，hCTLA-4信號(hào)肽(SEQ ID NO: 182或SEQ ID NO: 216)); —種突變CTLA-4E⑶多肽，該突變CTLA-4E⑶多肽典型地但非必須包括從大約118至130個(gè)氨基酸殘基的長(zhǎng)度，并且通常是大約124個(gè)氨基酸殘基；以及一種IgFe多肽。示例性的突變CTLA-4E⑶多肽包括以上和以下所說明的那些。在一些情形下，在該突變CTLA-4ECD多肽的C-端與該人類Ig Fe多肽的N-端之間并不包括氨基酸連接物序列；即，在該突變CTLA-4-1g融合蛋白中，一種突變CTLA-4E⑶多肽的C-端被直接地共價(jià)融合到該Ig Fe多肽的N-端上。然而，若希望，一種突變CTLA-4-1g可以在該突變CTLA-4E⑶多肽的C-端與該人類Ig Fe多肽的N-端之間包括一個(gè)連接物(例如，一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基)。本發(fā)明的預(yù)測(cè)性單體突變CTLA-4-1g融合蛋白的信號(hào)肽典型地在加工過程中從該突變CTLA-4-1g融合蛋白的N-端被切割，并且因此本發(fā)明的一種突變CTLA-4-1g融合蛋白的成熟或分泌形式通常并不包括一個(gè)信號(hào)肽序列。包括兩個(gè)這種單體突變CTLA-4-1g融合蛋白的一種融合蛋白二聚體典型地是在細(xì)胞加工過程中通過產(chǎn)生共價(jià)二硫鍵而形成，這些二硫鍵是在(I) 一個(gè)這種單體融合蛋白的突變CTLA-4ECD以及IgG2Fc中的半胱氨酸殘基與(2)該第二(典型地但并非必須相同)單體融合蛋白的突變CTLA-4E⑶以及IgG2Fc中的半胱氨酸殘基之間。本發(fā)明包括二聚體融合蛋白(也被稱為融合蛋白二聚體)，這些二聚體融合蛋白每個(gè)包括本發(fā)明的兩個(gè)單體融合蛋白。該二聚體可包括兩個(gè)相同或不同的單體融合蛋白。該二聚體融合蛋白是通過在這兩個(gè)單體融合蛋白之間的一個(gè)或多個(gè)連接體而形成的。包括兩個(gè)這種單體融合蛋白的一種二聚體融合蛋白典型地是在細(xì)胞加工過程中通過產(chǎn)生共價(jià)二硫鍵而形成，這些二硫鍵是在一個(gè)單體融合蛋白中的半胱氨酸殘基與在該第二單體融合蛋白中的半胱氨酸殘基之間。因此，在一些情形下，本發(fā)明的一種突變CTLA-4-1g融合蛋白被表達(dá)為包括本發(fā)明的兩個(gè)單體融合蛋白的一個(gè)二聚體。在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了包括兩個(gè)單體融合蛋白的一種分離或重組二聚體突變CTLA-4-1g融合蛋白，其中每個(gè)單體融合蛋白包括本發(fā)明的一種突變CTLA-4E⑶多肽，如以上以及以下進(jìn)一步地詳細(xì)說明，該突變CTLA-4E⑶多肽在其C-端融合到一種Ig Fe多肽上。該二聚體是在細(xì)胞加工過程中通過產(chǎn)生共價(jià)二硫鍵而形成，這些二硫鍵是在一個(gè)單體融合蛋白的突變CTLA-4ECD以及Ig Fe中的半胱氨酸殘基與該第二單體融合蛋白的突變CTLA-4E⑶以及Ig Fe中的半胱氨酸殘基之間。這兩個(gè)單體融合蛋白典型地但并非必須地包括相同的序列。分泌或成熟形式的突變CTLA-4-1g融合蛋白并不包括一種信號(hào)肽，因?yàn)樵撔盘?hào)肽典型地在加工過程中從該蛋白的N-端上切割。該預(yù)測(cè)的突變CTLA-4-1g融合蛋白包括一種信號(hào)肽，該信號(hào)肽的C-端被典型地共價(jià)連接到該突變CTLA-4-1g蛋白的N-端上。一種成熟突變CTLA-4-1g融合蛋白的每個(gè)單體的N-端典型地包括一個(gè)甲硫氨酸(M)。作為一種非限 制性的實(shí)例，本發(fā)明提供了包括兩個(gè)單體CTLA-4-1g融合蛋白的二聚體融合蛋白，其中每個(gè)單體突變CTLA-4-1g融合蛋白包括一種突變CTLA-4E⑶多肽，該突變CTLA-4E⑶多肽在其C-端連接到一種Ig Fe多肽的N-端上，其中該突變CTLA-4E⑶多肽包括一個(gè)多肽序列，該序列選自SEQ ID N0S:1至73中的任何一個(gè)。在一些此類二聚體融合蛋白中，這兩個(gè)單體融合蛋白是通過一個(gè)共價(jià)二硫鍵共價(jià)地連接在一起的，該二硫鍵是在細(xì)胞加工過程中在每個(gè)CTLA-4突變ECD多肽序列中的位置120上的一個(gè)半胱氨酸殘基之間形成的。可替代地，或此外，這兩個(gè)單體融合蛋白是通過一個(gè)共價(jià)二硫鍵共價(jià)地連接在一起的，該二硫鍵是在該第一單體融合蛋白的Ig Fe多肽中的一個(gè)或多個(gè)半胱氨酸殘基與該第二單體融合蛋白的Ig Fe多肽中的一個(gè)或多個(gè)半胱氨酸殘基之間產(chǎn)生的。這些單體融合蛋白可由多個(gè)二硫鍵(例如，一、二、三、四、或多個(gè)二硫鍵)連接在一起，該二硫鍵是在細(xì)胞加工過程中在它們對(duì)應(yīng)的Ig Fe多肽中存在的半胱氨酸殘基之間形成的。在一些情形下，每個(gè)單體融合蛋白是由相同的Ig Fe多肽構(gòu)成(例如，人類IgG2Fc，如例如在SEQ IDNO: 184或218中所示)，并且一個(gè)或多個(gè)共價(jià)二硫鍵可以在細(xì)胞加工過程中在每個(gè)Ig Fe多肽中的等效位置上的半胱氨酸殘基之間產(chǎn)生。一種示例性的突變CTLA-4E⑶多肽是D3-12突變CTLA-4E⑶多肽，該多肽包括SEQ ID NOill的多肽序列。本發(fā)明的一種示例性的突變CTLA-4-1g融合蛋白是D3-12突變CTLA-4E⑶多肽，該多肽在其C-端直接地(無(wú)連接物)共價(jià)連接到或融合到在SEQ ID NO: 218中所示的人類IgG2Fc多肽的N-端上，由此形成在SEQ ID NO: 205中所示的D3_12_IgG2融合蛋白，或者在其C-端直接地(無(wú)連接物)共價(jià)連接到或融合到在SEQ ID NO: 184中所示的人類IgG2Fc多肽的N-端上，由此形成在SEQ ID NO: 74中所示的D3_12_IgG2融合蛋白。SEQ ID NO: 74的序列與SEQ ID NO: 205的序列具有一個(gè)殘基的差異一S卩，在SEQ ID NO: 74的C-端存在著一個(gè)額外的賴氨酸殘基。我們?cè)谕ㄟ^液相色譜質(zhì)譜分析(LCMS )、或類似分析實(shí)驗(yàn)性地發(fā)現(xiàn)，在CHO細(xì)胞中通過轉(zhuǎn)染一個(gè)表達(dá)載體(包括編碼了一個(gè)突變CTLA-4E⑶的一個(gè)核苷酸序列(例如，在SEQ ID NO: 11中所示的D3-12E⑶多肽序列))而得到的一種突變CTLA-4融合蛋白、以及在SEQ ID NO: 184中所示的hIgG2Fc多肽典型地并不包括該預(yù)期的C-端賴氨酸(K)殘基，如基于在SEQ ID NO: 184中所示的hIgG2Fc序列而會(huì)預(yù)期的。例如，SEQ ID NO: 153的核苷酸序列編碼了該hCTLA-4信號(hào)肽以及D3_12_IgG2融合蛋白，并且在其C-端包括終止密碼子TAA。密碼子AAA (它編碼了一個(gè)賴氨酸殘基)直接在SEQ ID NO: 153的序列中位于該終止密碼子TAA之前。通過將包括了 SEQ ID NO: 153的核苷酸序列的一個(gè)表達(dá)載體轉(zhuǎn)染到CHO細(xì)胞中而產(chǎn)生的一種成熟D3-12-1gG2融合蛋白的預(yù)測(cè)多肽序列示于SEQ ID N0:74。該信號(hào)肽不存在于成熟形式的D3_12_IgG2融合蛋白中，因?yàn)樗诩庸み^程中已經(jīng)從該成熟的融合蛋白中北切割。然而，基于LCMS分析，我們發(fā)現(xiàn)，在這種情形下該成 熟D3-12-1gG2典型地并不包括該預(yù)測(cè)的C-端賴氨酸，如基于SEQ IDNO: 153的核苷酸序列而可預(yù)期的。相反地，通過這種方法所產(chǎn)生的得到的成熟D3-12-1gG2多肽序列是在SEQ ID NO: 205中所示的那個(gè)。據(jù)信該IgG2Fc多肽的C-端賴氨酸是在加工過程或在分泌之前被切割。據(jù)信使用另一個(gè)哺乳動(dòng)物細(xì)胞系，通過將這種包括SEQ ID N0:153的核苷酸序列的載體轉(zhuǎn)染到這種哺乳細(xì)胞(例如，COS細(xì)胞或類似細(xì)胞)中而進(jìn)行的D3-12-1gG2蛋白制備，會(huì)因?yàn)轭愃频募庸せ蚍置跈C(jī)制而產(chǎn)生缺乏預(yù)測(cè)C-端賴氨酸殘基的一種類似D3-12-1gG2融合蛋白。該二聚體D3-12_IgG2融合蛋白包括兩個(gè)這種D3_12_IgG2單體，這兩個(gè)單體通過一個(gè)或多個(gè)二硫鍵連接在一起，這些二硫鍵是在細(xì)胞加工過程中通過在多個(gè)半胱氨酸殘基之間產(chǎn)生共價(jià)二硫鍵而形成的。D3-12-1gG2以及本發(fā)明的其他融合蛋白可例如，通過使用在實(shí)例3中給出的方法而制得。例如，可將編碼了一種D3-12多肽的核酸序列(例如，SEQ IDN0:90)克隆到該IgG2Fc融合載體中，可以用該載體轉(zhuǎn)染哺乳動(dòng)物細(xì)胞，并且將得到的融合蛋白表達(dá)(典型地是二聚體形式)，純化，并進(jìn)行評(píng)估，如實(shí)例3中所說明。另一個(gè)示例性的突變CTLA-4E⑶多肽是D3-54突變CTLA-4E⑶多肽，該多肽包括SEQ ID N0:36的多肽序列，而一種示例性的突變CTLA-4-1g融合蛋白包括D3-54突變CTLA-4ECD多肽，該多肽在其C-端直接地(無(wú)連接物)共價(jià)連接到或融合到在SEQ IDNO:218中所示的hIgG2Fc多肽的N-端(無(wú)C-端賴氨酸)上，由此形成在SEQ ID NO:211中所示的D3-54-1gG2融合蛋白，或者在其C-端直接地(無(wú)連接物)共價(jià)連接到或融合到在SEQ ID NO: 184中所示的hIgG2Fc多肽的N-端(無(wú)C-端賴氨酸)上，由此形成在SEQ IDNO: 197中所示的D3-54-1gG2融合蛋白。如以上所討論，實(shí)驗(yàn)性分析指出在CHO細(xì)胞中制得的成熟D3-54-1gG2融合蛋白典型地并不包括該預(yù)期的C-端賴氨酸殘基。據(jù)信該hIgG2Fc的C-端賴氨酸是在加工過程或在分泌之前被切割，這造成了在SEQ ID N0:211中所示的D3-54-1gG2融合蛋白序列。此外，如以上所指出，D3-29-1gG2可使用實(shí)例3的方法制得。二聚體D3-54-1gG2融合蛋白包括兩個(gè)D3-54-1gG2單體，這兩個(gè)單體通過一個(gè)或多個(gè)二硫鍵連接在一起，這些二硫鍵是在細(xì)胞加工過程中通過在多個(gè)半胱氨酸殘基之間產(chǎn)生共價(jià)二硫鍵而形成。在SEQ ID N0:201中所示的核酸序列編碼了在SEQ ID N0S: 197以及211中所示的融合蛋白。 本發(fā)明的其他融合蛋白可類似地包括一種突變CTLA-4E⑶多肽，該多肽連接到或融合到hIgG2 (SEQ ID N0:218或84)上。本發(fā)明的示例性成熟突變CTLA-4_IgG2融合蛋白包括例如，SEQ ID N0S: 74至79、197至200、205至214、以及219至222中每個(gè)的多肽序列。SEQ ID N0S:74至79、197至200、220、以及222的多肽序列中的每個(gè)包括一個(gè)C-端賴氨酸殘基；這個(gè)C-端賴氨酸殘基典型地是在加工過程或在分泌之前受到切割，這對(duì)應(yīng)地造成在SEQ ID勵(lì)5:205至210、211至214、219、以及221中所示的無(wú)(:-端賴氨酸的多肽序列。圖10是一個(gè)示意圖，顯示了本發(fā)明的一個(gè)示例性突變CTLA-4_IgG2融合蛋白的一個(gè)示例性構(gòu)型或結(jié)構(gòu)。示意性地顯示了兩個(gè)相同的單體突變CTLA-4-1gG2融合蛋白，每個(gè)包括一個(gè)成熟突變CTLA-4E⑶多肽，該多肽在其C-端共價(jià)連接到一種人類IgG2Fc多肽的N-端上。每個(gè)人類IgG2Fc多肽包括一個(gè)人類IgG2的鉸鏈區(qū)、CH2結(jié)構(gòu)域、以及CH3結(jié)構(gòu)域。還顯示了存在于該ECD與Ig Fe多肽之間的接合處的示例性氨基酸殘基。在此類組分之間的接合處的氨基酸殘基可有差異，這取決于該突變CTLA-4ECD多肽序列和/或Ig多肽序列。這種二聚體突變CTLA-4-1gG2融合蛋白是由至少一個(gè)二硫鍵的形成而產(chǎn)生，這些二硫鍵是在這兩個(gè)突變CTLA-4-1gG2融合蛋白單體中的類似位置上的半胱氨酸殘基之間。這些潛在地涉及這兩個(gè)單體之間形成二硫鍵的半胱氨酸(C)殘基用星號(hào)標(biāo)記。每個(gè)單體融合蛋白的信號(hào)肽典型地是在加工過程中受到切割，并且因此該分泌(成熟)融合蛋白典型地并不包括該信號(hào)肽序列。該人類IgG2多肽的多肽序列(它包括人類IgG2的鉸鏈區(qū)、CH2結(jié)構(gòu)域、以及CH3結(jié)構(gòu)域)示于SEQ ID NO: 184。在另一個(gè)方面，該人類IgG2多肽的多肽序列(它包括人類IgG2的鉸鏈區(qū)、CH2結(jié)構(gòu)域、以及CH3結(jié)構(gòu)域)示于SEQ ID NO:218 ;在此情形下，該IgG2多肽當(dāng)與SEQ ID NO: 184的序列相比并不包括C-端賴氨酸(K)殘基。可以將本發(fā)明的突變CTLA-4-1g融合蛋白的特性(在其他地方進(jìn)行詳細(xì)說明)與一種或多種參比Ig融合蛋白的特性(例如，hCTLA-4-1gGl、hCTLA-4-1gG2、Orenda*融合蛋白、以及LEA29Y-1g)進(jìn)行比較。可進(jìn)行比較的特性包括例如，結(jié)合⑶80和/或⑶86(和/或CD80-1g和/或CD86-1g)的能力、和/或阻抑或抑制一種免疫應(yīng)答的能力(例如，T細(xì)胞的活化或增殖、細(xì)胞因子的產(chǎn)生、等)。該成熟hCTLA-4-1gGl融合蛋白在溶液中典型地是作為一個(gè)hCTLA-4-1gGl融合蛋白二聚體而存在的，該二聚體包括兩個(gè)相同的單體hCTLA-4-1gGl蛋白，每個(gè)單體hCTLA-4-1gGl融合蛋白包括連接到一種IgGlFc多肽上的hCTLA_4E⑶多肽(SEQ ID NO: 159)。該成熟hCTLA_4_IgG2融合蛋白在溶液中典型地作為一種hCTLA_4_IgG2融合蛋白二聚體而存在，該二聚體包括兩個(gè)相同的單體hCTLA-4-1gG2蛋白，每個(gè)單體hCTLA-4-1gG2融合蛋白(SEQ ID NO: 162)包括連接到一種IgG2Fc多肽上的hCTLA_4ECD多肽(SEQ ID NO: 159)。該成熟Orendat:融合蛋白是一種融合蛋白二聚體，該融合蛋白二聚體包括兩個(gè)相同的單體Orenda1*融合蛋白，每個(gè)單體融合蛋白(SEQ ID NO: 164)包括連接到一種特異的突變 IgGlFc 多肽(SEQ ID NO: 186)上的 hCTLA_4ECD 多肽(SEQ ID N0:159)。該成熟LEA29Y-1g融合蛋白在溶液中典型地作為一種LEA29Y-1g融合蛋白二聚體而存在，該二聚體包括兩個(gè)相同的單體LEA29Y-1g融合蛋白，每個(gè)單體LEA29Y-1g融合蛋白(SEQ IDNO: 166)包括連接到 一個(gè)特異的突變IgGl多肽(SEQ ID NO: 186)上的特異突變CTLA-4ECD多肽(SEQ ID NO: 168)。據(jù)信Orenua"二聚體的兩個(gè)融合蛋白單體是由一個(gè)單一的二硫鍵共價(jià)連接在一起的，該二硫鍵是在每個(gè)hCTLA-4-突變IgGl單體的位置120上的半胱氨酸殘基之間形成，并且在這兩個(gè)突變IgGlFc多肽之間并未形成任何二硫鍵。一些突變CTLA-4融合蛋白結(jié)合⑶80 (例如，h⑶80)和/或⑶86 (例如，h⑶86)。一些此類突變CTLA-4-1g融合蛋白結(jié)合一種⑶80-1g融合蛋白和/或一種⑶86-1g融合蛋白。示例性的CD80-1g融合蛋白包括該hCD80-mIg融合蛋白(SEQ ID N0:225)，它包括連接到一種鼠Ig Fe多肽的人類CD80ECD;以及該hCD80-hIgGl融合蛋白(SEQ ID NO: 171)，它包括連接到人類IgGlFc多肽上的h⑶80E⑶的序列。示例性的⑶86-1g融合蛋白包括該hCD86-mIg融合蛋白(SEQ ID NO: 226)，它包括連接到一種鼠Ig Fe多肽上的hCD86ECD(SEQID N0:180);以及該成熟hCD86-hIgGl融合蛋白(SEQ ID NO: 178)，它包括連結(jié)到該人類IgGlFc 多肽(SEQ ID NO: 185)上的 hCD86ECD (SEQ ID N0:180)的序列。編碼了 hCD86_mIg以及hCD80-mIg的示例性核酸序列對(duì)應(yīng)地示于SEQ ID N0S: 227以及228。在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種分離或重組的融合蛋白，該融合蛋白包括(a) —種多肽，該多肽包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列具有與選自下組的至少一個(gè)多肽序列至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、99.5%、或 100% 的序列一致性，該組的構(gòu)成為:SEQ ID N0S:1至73，以及(b) 一種Ig Fe多肽(例如，hIgG2Fc)，其中該融合蛋白結(jié)合CD80和/或CD86，和/或CD80-1g和/或CD86_Ig融合蛋白，和/或展示了阻抑或抑制一種免疫應(yīng)答的能力。該Ig Fe多肽可包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列具有與選自下組的一個(gè)多肽序列至少 95%、96%、97%、98%、99%、或 100% 的一致性，該組為 SEQ ID NO: 184、185、186、以及218。在一些情形下，該多肽(a)的C-端共價(jià)連接到(b)的Ig Fe多肽的N-端上。一些此類突變CTLA-4-1g融合蛋白結(jié)合一種哺乳動(dòng)物⑶80和/或⑶86 (例如，h⑶80和/或h⑶86)，和/或⑶80-1 g和/或⑶86-1 g融合蛋白。一種⑶80-1 g可包括例如，連接到一種Ig Fe上的人類⑶80E⑶(例如，h⑶80-1g)。在一個(gè)實(shí)施方案中，一種h⑶80-1g是連接到一種人類Ig Fe上的人類⑶80E⑶(例如，h⑶80-hIg);在另一個(gè)實(shí)施方案中，一種h⑶80-1g是連結(jié)到一種鼠Ig Fe上的人類⑶80E⑶(h⑶80-mIg)。在一個(gè)實(shí)施方案中，一種h⑶86-1g是連接到一種人類Ig Fe上的人類⑶86E⑶(h⑶86_hlg);在另一個(gè)實(shí)施方案中，一種h⑶86-1g是連接到一種鼠Ig Fe上的人類⑶86E⑶(h⑶86_mlg)。一些此類融合蛋白在體外和/或體內(nèi)的測(cè)定和/或方法中具有抑制或阻抑不同免疫應(yīng)答種的一個(gè)或多個(gè)的能力，例如，T細(xì)胞活化、T細(xì)胞增殖、細(xì)胞因子的合成或產(chǎn)生(例如，TNF- a、IFN- y、IL_2的產(chǎn)生)、活化標(biāo)記(例如，CD25、IL-2受體)或炎癥分子的誘導(dǎo)、炎癥、抗膠原Ab的產(chǎn)生和/或T細(xì)胞依賴的Ab應(yīng)答。此類融合蛋白預(yù)期在不同的應(yīng)用中具有有益的用途，包括用于治療免疫系統(tǒng)疾病及紊亂(例如，自身免疫疾病)的方法，以及用于抑制器官、細(xì)胞、或組織移植體的移植的方法，如以下所討論。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種分離或重組的突變CTLA-4-1g融合蛋白二聚體，該融合蛋白二聚體包括經(jīng)由至少一個(gè)二硫鍵連接的兩個(gè)單體突變CTLA-4-1g融合蛋白，這些二硫鍵是在每個(gè)單體突變CTLA-4-1g融合蛋白中存在的兩個(gè)半胱氨酸殘基之間形成。每個(gè)突變CTLA-4-1g融合蛋白單體包括:(a) 一種突變CTLA-4E⑶多肽，該多肽包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列具有與選自下組的至少一個(gè)多肽序列至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、99.5%、或 100% 的一致性，該組的構(gòu)成為:SEQ ID N0S:1 至 73，以及(b) 一種Ig Fe多肽(例如，hIgG2Fc)，其中該融合蛋白二聚體結(jié)合⑶80和/或⑶86，和/或CD80-1g和/或CD86-1g融合蛋白，和/或展示了阻抑或抑制一種免疫應(yīng)答的能力。在一些情形下，(a)的多肽的C-端共價(jià)連接到或融合到(b)的Ig Fe多肽的N-端上。該IgFe多肽可包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列具有與選自下組的一個(gè)多肽序列至少95%、96%、97%、98%、99%、或100%的一致性，該組的構(gòu)成為:SEQ ID NO: 184至186以及218。在一些情形下，該融合蛋白二聚體通過一個(gè)共價(jià)二硫鍵而形成，該二硫鍵是在每個(gè)突變CTLA-4E⑶多肽序列的氨基酸位置120上的半胱氨酸殘基之 間，或在對(duì)應(yīng)于相對(duì)在SEQ ID NO: 159中所示的hCTLA-4E⑶多肽序列的每個(gè)突變CTLA-4E⑶多肽序列中的位置120的一個(gè)氨基酸位置上。一些此類融合蛋白在體外和/或體內(nèi)的測(cè)定和/或方法中具有抑制或阻抑不同免疫應(yīng)答中的一個(gè)或多個(gè)的能力，例如，T細(xì)胞活化、T細(xì)胞增殖、細(xì)胞因子的合成或產(chǎn)生(例如，TNF-a、IFN-Y、IL-2的產(chǎn)生)、活化標(biāo)記(例如，⑶25、IL-2受體)或炎癥分子的誘到、炎癥、抗膠原Ab的產(chǎn)生、和/或T細(xì)胞依賴的Ab應(yīng)答。此類融合蛋白二聚體預(yù)期在不同的應(yīng)用中具有有益的用途，包括用于治療免疫系統(tǒng)疾病及紊亂(例如，自身免疫疾病)的方法，以及用于抑制器官、細(xì)胞、或組織移植體的移植的方法，如以下所討論。一些此類突變CTLA-4-1g融合蛋白單體具有對(duì)于h⑶86或h⑶86E⑶的結(jié)合親和力，這些結(jié)合親和力對(duì)應(yīng)地是至少等于或大于hCTLA-4E⑶以及LEA29對(duì)于h⑶86或h⑶86E⑶的那些。見，如，實(shí)例4中的表5。在一些此類二聚體以及單體融合蛋白中存在的突變CTLA-4E⑶多肽包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列具有大約等于該hCTLA-4E⑶氨基酸長(zhǎng)度的氨基酸長(zhǎng)度。例如，一些此類突變CTLA-4ECD多肽包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列長(zhǎng)度為大約 110 至 138、112 至 136、114 至 134、116 至 132、118 至 130、119 至 129、120 至 128、121至127、122至126、或123至125個(gè)氨基酸殘基。一些此類突變CTLA-4E⑶多肽包括一個(gè)具有124個(gè)氨基酸殘基的序列。示例性的突變CTLA-4E⑶多肽包括例如但不限于，包括一種多肽序列的那些，該多肽序列具有與選自下組的至少一種多肽序列至少95%、96%、97%、98%、99%、或100%的序列一致性，該組的構(gòu)成為:SEQ ID NOS:1至73，其中這種突變CTLA-4ECD多肽結(jié)合⑶80和/或⑶86 (或二者之一的或兩者的一個(gè)E⑶)、和/或具有抑制一種免疫應(yīng)答的能力。
一些此類突變CTLA-4-1g融合蛋白二聚體具有對(duì)于h⑶86和/或h⑶86_Ig的一種結(jié)合親合力，該結(jié)合親合力對(duì)應(yīng)地是至少大約等于或大于一種hCTLA-4-1g融合蛋白二聚體(例如，hCTLA-4-1gG2 或 hCTLA-4-1gGl 二聚體XOendai二聚體、和 I 或 LEA29Y_Ig對(duì)于h⑶86和/或h⑶86-1g的結(jié)合親合力。一些此類融合蛋白二聚體具有對(duì)于h⑶86和/或hCD86-mIg的一種結(jié)合親合力，該結(jié)合親合力與Orencia 二聚體對(duì)于hCD86和/或hCD86-mIg 的親和力相比高出 2-10 倍(2χ-10χ)、5_10 倍(5χ_10χ)、10-20 倍(10χ_20χ)、20-40倍(20χ-40χ)、或超過40倍(>40χ)。見，如，以下表3中的本發(fā)明的示例性二聚體融合蛋白?？商娲鼗蝾~外地，一些此類融合蛋白二聚體具有對(duì)于h⑶80和/或h⑶80-1g的一種結(jié)合親合力，該結(jié)合親合力對(duì)應(yīng)地是至少大約等于或大于一種hCTLA-4-1g 二聚體(例如，hCTLA-4-1gG2 或hCTLA-4-1gGl 二聚體)、(.)reiU；ur 二聚體、和 /或LEA29Y-1g對(duì)于hCD80和/或h⑶80-1g的結(jié)合親合力。一些此類融合蛋白二聚體具有對(duì)于h⑶80和/或h⑶80-mIg的一種結(jié)合親合力，該結(jié)合親合力與Orencia*二聚體對(duì)于h⑶86和/或h⑶86-mIg的結(jié)合親合力相比高出0.5-2倍 (0.5x-2x)、2-4倍(2χ-4χ)、或超過2倍(>2χ)。見，如，以下表4中的本發(fā)明的示例性二聚體融合蛋白。一些此類突變CTLA-4-1g融合蛋白二聚體以一種速率從結(jié)合的h⑶86和/或hCD86-1g中解離，該速率對(duì)應(yīng)地是小于一種hCTLA-4-1g 二聚體(例如，hCTLA_4_IgG2或 hCTLA-4-1gGl 二聚體)、Orencias 二聚體、和 / 或 LEA29Y_Ig 從結(jié)合的 hCD86 和 / 或h⑶86-1g中解離的速率。一些此類融合蛋白以一種速率與h⑶86和/或h⑶86-1g相結(jié)合，該速率對(duì)應(yīng)地是至少等于或大于一種hCTLA-4-1g 二聚體(例如，hCTLA-4-1gG2或hCTLA-4-1gGl 二聚體)、Orencia"二聚體、和 I 或 LEA29Y_Ig 與 hCD86 和 / 或 hCD86_Ig 相結(jié)合的速率。對(duì)于一些此類融合蛋白二聚體，針對(duì)在⑶86 (或⑶86-1g)與本發(fā)明的融合蛋白二聚體之間的結(jié)合反應(yīng)的平衡解離常數(shù)(Kd)小于針對(duì)在⑶86 (或⑶86-1g)與一種hCTLA-4-1g 二聚體(例如，hCTLA-4-1gG2 或 hCTLA-4-1gGl 二聚體)、()renUa:; 二聚體、和 /或LEA29Y-1g 二聚體之間的結(jié)合反應(yīng)的平衡解離常數(shù)(KD)。見，如，表3中的本發(fā)明的示例性融合蛋白二聚體。對(duì)于一些此類融合蛋白二聚體，針對(duì)在⑶80 (或⑶80-1g)與本發(fā)明的融合蛋白二聚體之間的結(jié)合反應(yīng)的平衡解離常數(shù)(Kd)是大約等于或小于針對(duì)在CD80(或 CD80-1g)與一種 hCTLA-4-1g 二聚體(例如，hCTLA-4_IgG2 或 hCTLA-4-1gGl 二聚體)、
二聚體、或LEA29Y-1g 二聚體之間的結(jié)合反應(yīng)的平衡解離常數(shù)(KD)。見，如，表4中的本發(fā)明的示例性融合蛋白二聚體。一些此類突變CTLA-4-1g融合蛋白二聚體具有阻抑或抑制一種免疫應(yīng)答的一種能力(例如，抑制T細(xì)胞的活化或增殖、抑制細(xì)胞因子的產(chǎn)生、等)，該能力對(duì)應(yīng)地是大約等于或大于一種 hCTLA-4-1g 二聚體(例如，hCTLA-4-1gG2 或 hCTLA-4-1gGl 二聚體)、0renciak.二聚體、和/或LEA29Y-1g 二聚體抑制或阻抑所述免疫應(yīng)答的能力。例如，一些此類融合蛋白二聚體可在體外測(cè)定中抑制T細(xì)胞活化或T細(xì)胞增殖。例如，以下所示的實(shí)例4至9證明了本發(fā)明的代表性融合蛋白二聚體(包括一種代表性突變CTLA-4ECD多肽序列)在體外抑制T細(xì)胞增殖的能力。一些此類二聚體可以在體內(nèi)抑制或阻抑受試者體內(nèi)的一種免疫應(yīng)答，如，通過將一個(gè)治療或預(yù)防有效量的至少一種這種二聚體給予需要免疫抑制療法的受試者。一些此類融合蛋白二聚體預(yù)期用于不同的應(yīng)用，包括例如但不限于，用于在患有其中希望免疫抑制的免疫系統(tǒng)疾病或紊亂(例如，自身免疫疾病)的受試者體內(nèi)阻抑或抑制一種免疫應(yīng)答的預(yù)防和/或治療方法，以及用于通過一個(gè)受方對(duì)于來(lái)自供方的一個(gè)組織、細(xì)胞、或器官移植體的排斥的方法。一些此類二聚體具有調(diào)整或阻抑通過⑶28的信號(hào)傳導(dǎo)的經(jīng)變化的能力，因?yàn)樗麄兙哂袑?duì)于⑶80和⑶86的不同的比較性結(jié)合親合力。此類二聚體用于其中希望T細(xì)胞應(yīng)答的差異操縱的應(yīng)用，包括用于治療免疫系統(tǒng)疾病及紊亂的治療及預(yù)防方法，例如，免疫缺陷疾病及紊亂(例如，RA、MS、牛皮癬、等)。包括本發(fā)明多肽的示例性二聚體融合蛋白(具有以上說明的差異CD80/CD86結(jié)合親合力以及免疫抑制特性)示于實(shí)例4。一些此類突變CTLA-4-1g 二聚體具有阻抑或抑制一種免疫應(yīng)答的一種能力，該能力對(duì)應(yīng)地是大約等于或大于hCTLA-4蛋白或hCTLA-4-1g 二聚體阻抑或抑制一種或多種類型免疫應(yīng)答的能力。例如，一些此類二聚體在體外和/或活體內(nèi)的測(cè)定和/或應(yīng)用(如以上和以下所說明的那些)中具有抑制T細(xì)胞的活化或增殖的一種能力，該能力是至少大約等于或大于該 hCTLA-4 蛋白或一種 hCTLA-4-1g 二聚體(例如，(_)renei;:rf.hCTLA-4_IgG2 二聚體、或hCTLA-4-1gGl 二聚體)在此類應(yīng)用中抑制T細(xì)胞的活化或增殖的能力。額外地，一些此類二聚體具有抑制或阻抑一種免疫應(yīng)答的一種能力(例如，T細(xì)胞的活化或增殖、細(xì)胞因子的產(chǎn)生、T細(xì)胞依賴的抗體反應(yīng))，該能力大于一個(gè)LEA29Y-1g 二聚體抑制或阻抑一種免疫應(yīng)答的能力。例如，實(shí)例4至9將本發(fā)明的代表性二聚體融合蛋白(包括本發(fā)明的一個(gè)突變CTLA-4E⑶多肽序列)在體外抑制T細(xì)胞增殖的能力相對(duì)于二聚體hCTLA-4-1gG2、Orencia 、以及LEAY29-1g在體外阻抑T細(xì)胞增殖的能力進(jìn)行了比較。見，如，以下表6至9。一些此類二聚體具有結(jié)合h⑶80和/或h⑶86 (或h⑶80-1g和/或h⑶86_Ig)的能力，以及在體外和/或體內(nèi)的測(cè)定和/或應(yīng)用(如以上以及以下更為詳細(xì)說明的那些)中抑制或阻抑一種免疫應(yīng)答的能力(例如，一種體內(nèi)方法，其中給予了一個(gè)治療或預(yù)防有效量的至少一種此類二聚體)。一 些此類二聚體具有對(duì)于h⑶80和/或h⑶86 (或h⑶80-1g和/或h⑶86-1g)的一種結(jié)合親合力，該結(jié)合親合力對(duì)應(yīng)地是至少大約等于或大于hCTLA-4蛋白、一種二聚體 hCTLA-4-1g (例如，hCTLAHgGZOencia")或二聚體 LEA29Y_Ig 對(duì)于 hCD80和/或h⑶86 (或h⑶80-1g和/或h⑶86-1g)的結(jié)合親合力，以及阻抑一種免疫應(yīng)答的能力，該能力是至少等于或大于hCTLA-4蛋白、一種二聚體hCTLA-4-1g(例如，hCTLA-4-1gG2、Orencia")或二聚體LEA29Y-1g抑制一種免疫應(yīng)答的能力。此類突變CTLA-4-1g融合蛋白二聚體預(yù)期用于不同的應(yīng)用，包括例如，用于治療免疫系統(tǒng)疾病、紊亂、及病況的預(yù)防和/或治療方法，如以下更為詳細(xì)地討論。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種分離或重組的融合蛋白二聚體(例如，突變CTLA-4-1g融合蛋白二聚體)，該融合蛋白二聚體包括兩個(gè)相同的單體融合蛋白(例如，兩個(gè)單體突變CTLA-4-1g融合蛋白)，其中每個(gè)這種單體融合蛋白包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列具有與選自下組的一個(gè)多肽序列至少90%、90.5%、91%、91.5%,92%,92.5%,93%,93.5%、94%,94.5%,95%,95.5%,96%,96.5%,97%,97.5%,98%,98.5%,99%,99.5%、或 100% 的一致性，該組的構(gòu)成為:SEQ ID N0S:74至79、197至200、205至214、以及219至222，其中該二聚體結(jié)合CD80和/或CD86 (和/或一種CD80-1g和/或CD86_Ig，對(duì)應(yīng)地如hCD80_mIg和/或h⑶86-mIg)，和/或具有抑制一種免疫應(yīng)答的能力，包括以上所說明并且以下進(jìn)一步說明的那些。在SEQ ID N0S: 74至79、197至200、205至214、以及219至222中給出的多肽序列中的每個(gè)是一個(gè)成熟突變CTLA-4E⑶，該E⑶在其C-端融合到一種IgG2Fc多肽的N-端上，并且每個(gè)這種序列可被稱為一種突變CTLA-4-1g融合蛋白。SEQ ID NOS:74至79、197至200、220、以及222中每個(gè)的多肽序列是與SEQ ID N0S:205至214、219、以及221相同的，除了 SEQ ID N0S: 74至79、197至200、220、以及222中的每個(gè)在其C-端包括一個(gè)賴氨酸之外。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種分離或重組的融合蛋白單體，該融合蛋白單體包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列具有與包括SEQ ID勵(lì)3:74至79、197至200、205至214、以及219至222中任何一個(gè)的氨基酸殘基I至351的一個(gè)多肽序列至少90%、90.5%、91%、91.5%,92%,92.5%,93%,93.5%,94%,94.5%,95%,95.5%,96%,96.5%,97%,97.5%,98%,98.5%、99%,99.5%、或100%的一致性，其中該融合蛋白結(jié)合⑶80和/或⑶86(和/或一種⑶80_Ig和/或⑶86-1g，對(duì)應(yīng)地如h⑶80-mIg和/或h⑶86_mlg)、和/或具有抑制一種免疫應(yīng)答的能力，包括以上所說明并且以下進(jìn)一步說明的那些。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種分離或重組的融合蛋白二聚體，該融合蛋白二聚體包括兩個(gè)相同的單體融合蛋白，其中每個(gè)這種單體融合蛋白包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列具有與包括SEQ ID N0S: 74至79、197至200、205至214、以及219至222中任何一個(gè)的氨基酸殘基1-351的多肽序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%的一致性，其中該融合蛋白結(jié)合⑶80和/或⑶86(和/或⑶80-1g和/或⑶86_Ig，對(duì)應(yīng)地如h⑶80-mIg和/或h⑶86-mIg)，和/或具有抑制一種免疫應(yīng)答的能力，包括以上所說明并且以下進(jìn)一步說明的那些。還提供了一種突變單體CTLA-4-1g融合蛋白，該融合蛋白包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列具有與選自下組的一個(gè)多肽序列至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的一致性，該組的構(gòu)成為:SEQ ID NOS: 74至79、197至200、205至214、以及219至222，其中所述單體融合蛋白結(jié)合CD80和/或CD86 (和/或CD80_Ig和/或CD86_Ig，對(duì)應(yīng)地如h⑶80-mIg和/或h⑶86-mIg)、和/或具有抑制一種免疫應(yīng)答的能力。一些此類融合蛋白單體以及二聚體在體外和/或體內(nèi)的測(cè)定和/或方法中具有抑制或阻抑一種或多種免疫應(yīng)答的能力，包括例如，T細(xì)胞的活化或增殖、細(xì)胞因子的合成或產(chǎn)生(例如，TNF-α、IFN-y ,IL-2的產(chǎn)生)、活化標(biāo)記的誘導(dǎo)(例如，⑶25、IL-2受體)、炎癥、抗膠原Ab的產(chǎn)生、和/或T細(xì)胞依賴的Ab應(yīng)答(例如，在患有一種疾病、紊亂、或病況的一位受試者體內(nèi)，其中免疫抑制療法會(huì)具有益處，并且對(duì)該受試者給予一個(gè)治療有效量的這種二聚體融合蛋白的受試者體內(nèi)，如以下更為詳細(xì)地討論)。此類融合蛋白單體以及二聚體預(yù)期用于不同的應(yīng)用，包括用于治療免疫系統(tǒng)疾病的治療和/或預(yù)防方法，包括以下所討論的那些。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種分離或重組的融合蛋白二聚體(例如，突變CTLA-4-1g融合蛋白二聚體)，該融合蛋白二聚體包括兩個(gè)單體融合蛋白(例如，單體突變CTLA-4-1g融合蛋白)，其中每個(gè)這種單體融合蛋白包括:⑴一種多肽(例如，突變CTLA-4細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域多肽)，該多肽包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列與選自下組的一個(gè)多肽序列具有不超過6個(gè)氨基酸殘基(例如，不超過1、2、3、4、5、或6個(gè)氨基酸殘基)的差異，該組的構(gòu)成為:SEQ ID N0S:1至73，并且其中在該多肽序列中在氨基酸位置41、50、54、55、56、64、65、70、或85的氨基酸殘基是與在所述所選擇的多肽序列(例如，選自SEQ ID N0S:1至73的一種多肽)的對(duì)應(yīng)位置上的氨基酸殘基相同，以 及(2) —種Ig Fe多肽(例如，IgG2Fc)，其中該融合蛋白二聚體結(jié)合CD80和/或CD86 (和/或CD80-1g和/或CD86_Ig)、和/或在體外和/或體內(nèi)的測(cè)定和/或方法中抑制一種免疫應(yīng)答(例如，T細(xì)胞的活化或增殖、細(xì)胞因子的產(chǎn)生、活化標(biāo)記或炎癥分子的誘導(dǎo)、抗膠原Ab的產(chǎn)生、和/或T細(xì)胞依賴的Ab應(yīng)答、等)，如以下所詳細(xì)討論。本發(fā)明還包括如以上所說明的一種分離或重組的單體融合蛋白，它結(jié)合CD80和/或CD86 (和/或CD80-1g和/或CD86_Ig)，和/或在體外或體內(nèi)誘導(dǎo)一種免疫應(yīng)答。在該融合蛋白二聚體中，這兩個(gè)單體融合蛋白(例如，突變CTLA-4-1g單體)可任選地通過經(jīng)由在每個(gè)單體中的半胱氨酸殘基的一個(gè)或多個(gè)二硫鍵而共價(jià)連接在一起，并且這兩個(gè)單體典型地是彼此相同的。在一些情形下，在這種融合蛋白二聚體或單體中的突變CTLA-4E⑶多肽與所選擇的多肽(例如，選自SEQ ID NOS:1至73)具有不超過6個(gè)氨基酸殘基的差異，但占據(jù)位置41、50、54、55、56、64、65、70、及85中的氨基酸是與在所選擇的多肽序列中的位置上的氨基酸殘基相同；即，在這種位置上的氨基酸殘基不能缺失或取代。在這種融合蛋白中的一些此類CTLA-4ECD多肽包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列與所選擇的多肽序列具有不超過6個(gè)氨基酸殘基的差異，并且它包括了在位置24、30、32、41、50、54、55、56、64、65、70、85、104、以及106上的氨基酸殘基，這些氨基酸殘基與在所選擇的多肽序列中的對(duì)應(yīng)位置上的氨基酸殘基相同。此類CTLA-4ECD多肽可以與所選擇的多肽序列具有一種或多種氨基酸缺失、一種或多種氨基酸添加、和/或一種或多種氨基酸取代的差異。一個(gè)氨基酸取代可以是一個(gè)保守性或非保守性取代。見，如，“序列變異”章節(jié)。一些此類二聚體融合蛋白具有對(duì)于hCD86或hCD86-1g的一種結(jié)合親合力，該結(jié)合親合力對(duì)應(yīng)地是至少大約等于或大于 hCTLA-4、二聚體 hCTLA-4-1g、二聚體 LEA29Y_Ig、或Orcncia.A.蛋白對(duì)于 hCD86 或h⑶86-1g的結(jié)合親合力。一些此類單體融合蛋白具有對(duì)于h⑶86、h⑶86-1g、或h⑶86E⑶的一種結(jié)合親和力或親合力，該結(jié)合親和力或親合力對(duì)應(yīng)地是至少大約等于或大于該單體hCTLA-4、單體 hCTLA-4-1g、或單體 LEA29Y_Ig 對(duì)于 hCD86、hCD86_Ig 或 hCD86ECD 的結(jié)合親和力或親合力?？商娲鼗蝾~外地，一些此類二聚體融合蛋白具有對(duì)于h⑶80或h⑶80-1g的一種結(jié)合親合力，該結(jié)合親合力對(duì)應(yīng)地是至少大約等于或大于hCTLA-4或hCTLA-4-1g對(duì)于h⑶80的親合力。可替代地或額外地，一些此類單體融合蛋白具有對(duì)于h⑶80、h⑶80-1g、或hCD80ECD的一種結(jié)合親和力或親合力，該結(jié)合親和力或親合力對(duì)應(yīng)地是至少大約等于或大于單體hCTLA-4或單體hCTLA-4-1g對(duì)于hCD80、hCD80_Ig、或hCD80ECD的一種結(jié)合親和力或親合力。在一些情形下，在這種融合蛋白二聚體或單體中的突變CTLA-4E⑶多肽包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列具有大約等于該hCTLA-4ECD氨基酸長(zhǎng)度的長(zhǎng)度，例如從大約118 至 130,119 至 129,120 至 128,121 至 127,122 至 126,123 至 125、或 124 個(gè)氨基酸殘基的長(zhǎng)度。該Ig Fe多肽(例如，IgG2Fc、IgGlFc, IgG4Fc、或一種降低效應(yīng)子功能或Fe受體結(jié)合的一種突變IgG Fe)的N-端可直接地或間接地(經(jīng)由包括例如從I至10個(gè)氨基酸殘基的一個(gè)連接物)共價(jià)地連接到或融合到該突變CTLA-4E⑶多肽的C-端上。該Ig Fe多肽可包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列具有與選自下組的一個(gè)多肽序列至少95%、96%、97%、98%、99%、或100%的序列一致性，該組的構(gòu)成為:SEQ ID NOS: 184至186以及218，例如SEQ IDNO: 184、185、186 以及 218 的任何一個(gè)。
—些此類突變CTLA-4-1g融合蛋白二聚體或單體可阻抑不同免疫應(yīng)答中的一個(gè)或多個(gè)，包括例如，T細(xì)胞活化、T細(xì)胞增殖、細(xì)胞因子的合成或產(chǎn)生(例如，TNF-α、IFN- Y、IL-2的生成)、活化標(biāo)記(例如，⑶25、IL-2受體)或炎癥分子的誘導(dǎo)、炎癥、抗膠原Ab的產(chǎn)生、和/或一種或多種T細(xì)胞依賴的Ab應(yīng)答。一些此類突變CTLA-4-1g 二聚體與hCTLA-4、二聚體hCTLA-4-1g、或二聚體LEA29Y-1g相比具有阻抑一種或多種此類免疫應(yīng)答的更大的能力。例如，實(shí)例4至9提供了以下數(shù)據(jù)，這些數(shù)據(jù)將本發(fā)明的代表性二聚體融合蛋白(包括本發(fā)明的一種突變CTLA-4ECD多肽)在體外抑制T細(xì)胞增殖的能力相對(duì)于一種二聚體hCTLA-4-1g或二聚體LEA29Y-1g這樣做的能力進(jìn)行了比較。一些此類突變CTLA_4_Ig單體與單體hCTLA-4、單體hCTLA-4-1g、或單體LEA29Y_Ig相比具有阻抑一種或多種此類免疫應(yīng)答的更大的能力。一些此類單體及二聚體可以在受試者體內(nèi)阻抑或抑制一種免疫應(yīng)答，如通過將一個(gè)治療或預(yù)防有效量的至少一種此類多肽給予需要免疫抑制療法的受試者。此類融合蛋白預(yù)期在不同的應(yīng)用中具有有益的用途，包括用于治療一種疾病、紊亂、或病況的方法，其中免疫抑制會(huì)具有益處，如，用于治療自身免疫疾病及紊亂的預(yù)防和/或治療方法，以及用于抑制器官、細(xì)胞、或組織移植體的移植的方法。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種分離或重組的蛋白二聚體(例如，突變CTLA-4-1g融合蛋白二聚體)，該蛋白二聚體包括兩個(gè)單體融合蛋白(例如，兩個(gè)單體突變CTLA-4-1g融合蛋白)，其中每個(gè)這種單體融合蛋白包括:(I) 一種突變CTLA-4細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(ECD)多肽，該多肽包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列(a)與選自下組的一個(gè)多肽序列具有不超過6個(gè)氨基酸殘基(例如，不超過1、2、3、4、5或6個(gè)氨基酸殘基)的差異，該組的構(gòu)成為:SEQ ID N0S:1至73，并且(b)包括在對(duì)應(yīng)于相對(duì)SEQ ID NO: 159多肽序列的位置50、54、55、56、64、65、70、或85的一個(gè)氨基酸位置上的至少一個(gè)氨基酸取代；以及(2) —種Ig Fe多肽，其中該融合蛋白二聚體結(jié)合⑶80和/或⑶86 (和/或⑶80-1g和/或⑶86-1g)、和/或在體外和/或體內(nèi)的測(cè)定和/或方法中抑制一種免疫應(yīng)答(例如，T細(xì)胞的活化或增殖、細(xì)胞因子的產(chǎn)生、活化標(biāo)記的誘導(dǎo)、炎癥、抗膠原抗體的產(chǎn)生、T細(xì)胞依賴的抗體反應(yīng)、等)，如以下更為詳細(xì)地說明。本發(fā)明還包括一種分離或重組的單體融合蛋白，如以上所說明，它結(jié)合⑶80和/或⑶86(和/或⑶80-1g和/或⑶86-1g)、和/或在體外或體內(nèi)誘導(dǎo)一種免疫應(yīng)答。在一些情形下，⑶80是h⑶80，并且⑶86是h⑶86。在該融合蛋白二聚體中，這兩個(gè)單體融合蛋白(例如，突變CTLA-4-1g單體)是可任選地通過經(jīng)由在每個(gè)單體中的半胱氨酸殘基的一個(gè)或多個(gè)二硫鍵而共價(jià)連接在一起，并且這兩個(gè)單體典型地是彼此相同的。該Ig Fe多肽(例如，IgG2Fc、 IgGlFc, IgG4Fc、或降低效應(yīng)子功能或Fe受體結(jié)合的一種突變IgG Fe)的N-端可直接地或間接地(經(jīng)由包括例如從I至10個(gè)氨基酸殘基的一個(gè)連接物)共價(jià)連接到或融合到該突變CTLA-4E⑶多肽的C-端上。該Ig Fe多肽可包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列具有與選自下組的一個(gè)多肽序列至少95%、96%、97%、98%、99%、或100%的序列一致性，該組的構(gòu)成為:SEQ ID N0S: 184至186以及218。一些此類融合蛋白二聚體或單體包括一種突變CTLA-4E⑶多肽，該多肽包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列具有大約等于該hCTLA-4E⑶氨基酸長(zhǎng)度的長(zhǎng)度，例如118至130、119至129、120至128、121至127、122至126、或123至125個(gè)氨基酸殘基的長(zhǎng)度。在這種融合蛋白二聚體或單體中的一些此類突變CTLA-4ECD多肽包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列長(zhǎng)度是124個(gè)氨基酸殘基。一些此類突變CTLA-4E⑶多肽包括2、3、4、5、或6個(gè)氨基酸取代，這些氨基酸取代是在相對(duì)在SEQ ID NO: 159中所示的序列的、選自下組的位置上，該組的構(gòu)成為:位置50、54、55、56、64、65、70、以及85。一些此類突變CTLA-4ECD多肽進(jìn)一步包括一個(gè)氨基酸取代，該氨基酸取代是在對(duì)應(yīng)于相對(duì)SEQ ID NO: 159的位置104和/或30的一個(gè)位置上。一些此類突變CTLA-4E⑶多肽包括相對(duì)SEQ ID NO: 159的至少一個(gè)氨基酸取代，這些氨基酸取代是在位置70 (可任選地S70F)、位置64 (可任選地S64P)、位置50 (可任選地A50M)、位置54 (可任選地M54K/V，例如M54K)、位置65 (可任選地I65S)、位置56 (可任選地N56D)、位置55 (可任選地G55E)、位置85 (可任選地M85A)、和/或位置24 (可任選地A24E/S，例如A24E)上。任何此類突變CTLA-4ECD多肽可進(jìn)一步包括相對(duì)SEQ ID NO: 159的一個(gè)氨基酸取代，該氨基酸取代是在位置104 (可任選地L104E/D，例如L104E)、位置30(可任選地T30N/D/A，例如T30N、T30D、或T30A)、和/或位置32 (可任選地V32I)。一些此類突變CTLA-4ECD多肽包括至少一個(gè)氨基酸取代，這些氨基酸取代是在相對(duì)SEQ ID NO: 159的一個(gè)氨基酸位置上，這些氨基酸取代選自下組，其構(gòu)成為:A50M、M54K、G55E、N56D、S64P、I65S、以及S70F。一些此類突變CTLA-4E⑶多肽包括2、3、4、5、或6個(gè)氨基酸取代，這些氨基酸取代是在相對(duì)SEQ ID NO: 159的多個(gè)氨基酸位置上，這些氨基酸取代選自下組，其構(gòu)成為:A50M、M54K、G55E、N56D、S64P、I65S、以及 S70F。
一些此類突變CTLA-4-1g 二聚體展示了對(duì)于⑶86(例如，h⑶86)或二聚體⑶86_Ig(例如，h⑶86-1g)的一種結(jié)合親合力，該結(jié)合親合力對(duì)應(yīng)地是大約等于或大于hCTLA-4蛋白、二聚體 hCTLA-4-1g (例如，hCTLA-4-1gGl 或 hCTLA-4-1gG2)、Orenciaw蛋白、或二聚體LEA29Y-1g對(duì)于⑶86或二聚體⑶86_Ig的結(jié)合親合力。一些此類二聚體具有對(duì)于⑶80(例如，h⑶80)或二聚體⑶80-1g (例如，h⑶80-1g)的一種結(jié)合親合力，該結(jié)合親合力對(duì)應(yīng)地大于hCTLA-4蛋白、一種二聚體hCTLA-4-1g,OrenciaR蛋白、和/或二聚體LEAY29_Ig對(duì)于⑶80或二聚體⑶80-1g的結(jié)合親合力。一些此類突變CTLA-4-1g單體展示了對(duì)于⑶86 (例如，h⑶86)或⑶86_Ig (例如，hCD86-1g)的一種結(jié)合親和力或親合力，該結(jié)合親和力或親合力對(duì)應(yīng)地是大約等于或大于單體hCTLA-4、單體hCTLA-4-1g、或單體LEA29Y_Ig對(duì)于CD86或二聚體CD86_Ig的結(jié)合親和力或親合力。一些此類單體具有對(duì)于⑶80 (例如，h⑶80)或⑶80-1g (例如，h⑶80-1g)的一種結(jié)合親和力或親合力，該結(jié)合親和力或親合力對(duì)應(yīng)地是大于單體hCTLA-4或單體hCTLA-4-1g (例如，單體 CTLA-4-1gGl 或 CTLA-4_IgG2)對(duì)于 CD80 或二聚體 CD80_Ig 的結(jié)合親和力或親合力?！┐祟愅蛔僀TLA-4-1g 二聚體以及單體在體外和/或體內(nèi)的測(cè)定和/或方法中(例如，在患有一種疾病、紊亂、或病況的一位受試者體內(nèi)，其中免疫抑制療法會(huì)具有益處，并且對(duì)該受試者給予一個(gè)治療有效量的至少一種此類突變CTLA-4-1g 二聚體)阻抑或抑制一種或多種免疫應(yīng)答的能力，包括以上以及全文中所說明的(例如，T細(xì)胞的活化或增殖、細(xì)胞因子的產(chǎn)生、活化標(biāo)記的誘導(dǎo)、炎癥、抗膠原抗體的產(chǎn)生、T細(xì)胞依賴的抗體反應(yīng))。一些此類突變 CTLA-4-1g 二聚體與 hCTLA-4、一種二聚體 hCTLA-4-1g (例如，二聚體 CTLA-4-1gGl或CTLA-4-1gG2)、Orem;iaK蛋白、和/或二聚體LEAY29-1g相比以更大的程度來(lái)抑制一種或多種此類免疫應(yīng)答。一些此類突變CTLA-4-1g單體與hCTLA-4、單體hCTLA_4_Ig、和/或單體LEAY29-1g相比以更大的程度來(lái)阻抑一種或多種此類免疫應(yīng)答。此類突變CTLA-4-1g二聚體以及單體預(yù)期在不同的應(yīng)用中具有有益的用途，包括用于治療自身免疫疾病及紊亂的方法，以及用于抑制器官、細(xì)胞、或組織移植體的移植的方法。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種分離或重組的融合蛋白二聚體(例如，突變CTLA-4-1g融合蛋白二聚體)，該融合蛋白二聚體包括兩個(gè)單體融合蛋白(例如，單體突變CTLA-4-1g融合蛋白)，其中每個(gè)這種單體融合蛋白包括:(I) 一種多肽(例如，突變CTLA-4細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域)，該多肽包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列(i)具有與選自下組的任何多肽序列至少95%、96%、97%、98%、99%、或100%的序列一致性，該組的構(gòu)成為:SEQ ID NOS:1至73，并且(ii)包括一個(gè)苯丙氨酸殘基，該苯丙氨酸殘基在對(duì)應(yīng)于所述多肽序列的位置70的一個(gè)氨基酸位置上，該多肽序列選自下組，其構(gòu)成為:SEQ ID N0:1至73，以及(2) —種IgFe多肽(例如，IgG2Fc、IgGlFc, IgG4Fc、或降低效應(yīng)子功能或Fe受體結(jié)合的一種突變IgGFe)，其中該融合蛋白二聚體結(jié)合CD80 (例如，hCD80)和/或CD86 (例如，hCD86)(和/或CD80-1g，例如hDC80-1g、和/或CD86_Ig，例如hCD86_Ig)、和/或在體外和/或體內(nèi)誘導(dǎo)一種免疫應(yīng)答的能力。本發(fā)明還包括如以上所說明的一種分離或重組的單體融合蛋白，該單體融合蛋白結(jié)合CD80 (例如，hCD80)和/或CD86 (例如，hCD86)(和/或CD80_Ig，例如hDC80-1g、和/或⑶86-1g，例如h⑶86-1g)、和/或在體外或體內(nèi)誘導(dǎo)一種免疫應(yīng)答。在一些情形下，該Ig Fe多肽包括一個(gè)序列，該序列具有與選自下組的一個(gè)多肽序列至少95%、96%、97%、98%、99%、或100%的序列一致性，該組的構(gòu)成為:SEQ ID N0S: 184至186以及218。該Ig Fe多肽的N-端可直接地或間接地(經(jīng)由包括例如從I至10個(gè)氨基酸殘基的一個(gè)連接物)共價(jià)連接到或融合到該突變CTLA-4E⑶多肽的C-端上。在一些此類突變CTL-4-1g 二聚體及單體中，該突變CTLA-4E⑶多肽包括以下的相對(duì)所述所選擇的多肽序列中的一個(gè)或多個(gè):在對(duì)應(yīng)于位置24的一個(gè)氨基酸位置上的一個(gè)谷氨酸殘基；在對(duì)應(yīng)于位置30的一個(gè)氨基酸位置上的一個(gè)天冬酰胺殘基；在對(duì)應(yīng)于位置32的一個(gè)氨基酸位置上的一個(gè)異亮氨酸殘基；在對(duì)應(yīng)于位置50的一個(gè)氨基酸位置上的一個(gè)甲硫氨酸殘基；在對(duì)應(yīng)于位置54的一個(gè)氨基酸位置上的一個(gè)賴氨酸殘基；在對(duì)應(yīng)于位置55的一個(gè)氨基酸位置上的一個(gè)谷氨酸殘基；在對(duì)應(yīng)于位置56的一個(gè)氨基酸位置上的一個(gè)天冬氨酸殘基；在對(duì)應(yīng)于位置64的一個(gè)氨基酸位置上的一個(gè)脯氨酸殘基；在對(duì)應(yīng)于位置65的氨基酸位置上的一個(gè)絲氨酸殘基；以及在對(duì)應(yīng)于位置104的氨基酸位置上的一個(gè)谷氨酸殘基。例如，在此類突變CTLA-4-1g 二聚體或單體中，一些此類突變CTLA-4E⑶多肽包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列包括(i)與SEQ ID N0:2的多肽序列至少95%、96%、97%、98%、99%、或100%的序列一致性 ，以及(ii) 一個(gè)苯丙氨酸殘基，該苯丙氨酸殘基在對(duì)應(yīng)于SEQ IDNO: 24的多肽序列的位置70的一個(gè)氨基酸位置上，其中該多肽結(jié)合h⑶80和/或h⑶86(和/或h⑶80-1g和/或h⑶86-1g)、和/或在體外和/或體內(nèi)的測(cè)定和/或方法中抑制一種免疫應(yīng)答。在此類突變CTLA-4-1g 二聚體或單體中，一些此類突變CTLA-4E⑶多肽包括以下的相對(duì)SEQ ID N0:24中的一個(gè)或多個(gè):在位置24上的一個(gè)谷氨酸殘基、在位置30上的一個(gè)天冬酰胺殘基、在位置32上的一個(gè)異亮氨酸殘基、在位置50上的一個(gè)甲硫氨酸殘基、在位置54上的一個(gè)賴氨酸殘基、在位置55上的一個(gè)谷氨酸殘基、在位置56上的一個(gè)天冬氨酸殘基、在位置64上的一個(gè)脯氨酸殘基、在位置65上的一個(gè)絲氨酸殘基、以及在位置104上的一個(gè)谷氨酸殘基。一些此類突變CTLA-4-1g 二聚體具有對(duì)于⑶86 (例如，h⑶86)或二聚體⑶86_Ig(例如，h⑶86-1g)的一種結(jié)合親合力，該結(jié)合親合力對(duì)應(yīng)地是大約等于或大于hCTLA-4、二聚體hCTLA-4-1g、Orenda#蛋白、或二聚體LEA29Y-1g對(duì)于CD86或二聚體CD86-1g的結(jié)合親合力。一些此類二聚體具有對(duì)于⑶80 (例如，h⑶80)或二聚體⑶80-1g (例如，h⑶80-1g)的一種結(jié)合親合力，該結(jié)合親合力對(duì)應(yīng)地是大于hCTLA-4、一種二聚體hCTLA-4-1g、或Orenciai^白對(duì)于CD80或二聚體CD80-1g的結(jié)合親合力。一些此類突變CTLA-4-1g單體展示了對(duì)于⑶86 (例如，h⑶86)或⑶86_Ig (例如，hCD86-1g)的一種結(jié)合親和力或親合力，該結(jié)合親和力或親合力對(duì)應(yīng)地是大約等于或大于單體hCTLA-4、單體hCTLA-4-1g、和/或單體LEA29Y_Ig對(duì)于CD86或CD86_Ig的結(jié)合親和力或親合力。一些此類單體具有對(duì)于⑶80 (例如，h⑶80)或⑶80-1g (例如，h⑶80-1g)的一種結(jié)合親和力或親合力，該結(jié)合親和力或親合力對(duì)應(yīng)地是大于單體hCTLA-4或單體hCTLA-4-1g對(duì)于⑶80或二聚體⑶80-1g的結(jié)合親和力或親合力。一些此類突變CTLA-4-1g 二聚體以及單體具有在體外和/或體內(nèi)的測(cè)定和/或方法中(例如，在患有一種疾病、紊亂、或病況的一位受試者體內(nèi)，其中免疫抑制療法將會(huì)具有益處，并且對(duì)該受試者給予一個(gè)治療有效量的至少一種此類突變CTLA-4-1g 二聚體)阻抑或抑制一種或多種免疫應(yīng)答的能力(例如，T細(xì)胞的活化或增殖、細(xì)胞因子的產(chǎn)生、活化標(biāo)記的誘導(dǎo)、炎癥、抗膠原Ab的產(chǎn)成、T細(xì)胞依賴的Ab應(yīng)答)。一些此類突變CTLA-4-1g 二聚體與 hCTLA-4、一種二聚體 hCTLA-4-1g (例如，二聚體 CTLA-4-1gGl 或 CTLA-4_IgG2)、Orencia"蛋白、和/或二聚體LEA29Y-1g相比以更大的程度來(lái)阻抑或抑制一種或多種此類免疫應(yīng)答的能力。一些此類突變CTLA-4-1g單體與單體hCTLA-4、單體hCTLA_4_Ig、和/或單體LEAY29-1g相比以更大的程度來(lái)阻抑或抑 制一種或多種此類免疫應(yīng)答的能力。此類突變CTLA-4-1g 二聚體以及單體預(yù)期在不同的治療和/或預(yù)防方法中具有有益的用途，這些方法用于治療其中免疫抑制治療將具有益處的疾病或紊亂，包括例如，用于治療自身免疫疾病的方法，以及用于抑制器官、細(xì)胞、或組織移植體的移植物的排斥的方法。在又另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種分離或重組的融合蛋白二聚體(例如，突變CTLA-4-1g融合蛋白二聚體)，該融合蛋白二聚體包括兩個(gè)單體融合蛋白(例如，單體突變CTLA-4-1g融合蛋白)，其中每個(gè)這種單體融合蛋白包括:(1) 一種多肽(例如，突變CTLA-4細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域)，該多肽包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列(a)與在SEQ ID NO: 159所述的人類CTLA-4細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域多肽的多肽序列具有不超過6個(gè)氨基酸殘基的差異，并且(b)包括至少一個(gè)氨基酸取代，其中所述至少一個(gè)氨基酸取代包括S70F，其中根據(jù)SEQ ID NO: 159對(duì)氨基酸殘基位置是進(jìn)行編號(hào)；以及(2) —種IgG Fe多肽(例如，IgG2FC、IgGlFc、IgG4Fc。或降低效應(yīng)子功能或Fe受體結(jié)合的一種突變IgG Fe)，其中所述二聚體結(jié)合hCD80和/或h⑶86(和/或h⑶86-1g和/或h⑶86-1g)、和/或在體外和/或體內(nèi)的測(cè)定和/或方法中抑制一種免疫應(yīng)答(例如，T細(xì)胞的活化或增殖、細(xì)胞因子的產(chǎn)生、活化標(biāo)記的誘導(dǎo)、炎癥、抗膠原抗體的產(chǎn)生、T細(xì)胞依賴的抗體反應(yīng)、等)，如以下詳細(xì)地討論。本發(fā)明還包括如以上所說明的一種分離或重組的單體融合蛋白，該單體融合蛋白結(jié)合CD80 (例如，hCD80)和/或CD86 (例如，hCD86)(和 / 或 CD80_Ig，例如 hCD80_Ig、和 / 或 CD86_Ig，例如 hCD86_Ig)、和/或在體外或體內(nèi)誘導(dǎo)一種免疫應(yīng)答。該Ig Fe多肽可包括一個(gè)序列，該序列具有與選自下組的一個(gè)多肽序列至少95%、96%、97%、98%、99%、或100%的序列一致性，該組的構(gòu)成為:SEQID NOS: 184至186以及218。該Ig Fe多肽的N-端可直接地或間接地(經(jīng)由包括例如從I至10個(gè)氨基酸殘基的一個(gè)連接物)共價(jià)連接到或融合到該突變CTLA-4E⑶多肽的C-端所。在一些此類突變CTLA-4-1g 二聚體或單體中，該突變CTLA-4E⑶多肽進(jìn)一步包括選自下組的至少一個(gè)氨基酸取代，該組的構(gòu)成為:A24E、T30N、V321、D41G、A50M、M54K、G55E、N56D、S64P、I65S、M85A、L104E、以及I106F。在一些此類突變CTLA_4_Ig 二聚體或單體中，該突變CTLA-4E⑶多肽進(jìn)一步包括取代L104E，和/或二、三、或四個(gè)額外的取代，這些取代選自下組，其構(gòu)成為:T30N、V321、A50M、M54K、G55E、N56D、S64P、以及 I65S。一些此類二聚體具有對(duì)于CD86 (例如，hCD86)或二聚體CD86_Ig (例如，hCD86_Ig)的一種結(jié)合親合力，該結(jié)合親合力對(duì)應(yīng)地是大約等于或大于hCTLA-4、二聚體hCTLA-4-1g、和/或Orencia 蛋白對(duì)于CD86或二聚體CD86-1g的結(jié)合親合力。一些此類二聚體具有對(duì)于⑶80 (例如，h⑶80)或二聚體⑶80-1g (例如，h⑶80-1g)的一種結(jié)合親合力，該結(jié)合親合力對(duì)應(yīng)地是大于hCTLA-4、二聚體hCTLA-4-1g、和/或(Jrenuia'‘蛋白對(duì)于⑶80或二聚體⑶80-1g的結(jié)合親合力。一些此類單體具有對(duì)于⑶86 (例如，h⑶86)或⑶86-1g (例如，hCD86-1g)的一種結(jié)合親和力或親合力，該結(jié)合親和力或親合力對(duì)應(yīng)地是大約等于或大于單體hCTLA-4、單體hCTLA-4-1g或單體LEA29Y_Ig對(duì)于⑶86或⑶86_Ig的結(jié)合親和力或親合力。一些此類單體具有對(duì)于⑶80 (例如，h⑶80)或⑶80-1g (例如，h⑶80-1g)的一種結(jié)合親和力或親合力，該結(jié)合親合力或親合力對(duì)應(yīng)地是大于單體hCTLA-4或單體hCTLA-4-1g對(duì)于⑶80或二聚體⑶80-1g的結(jié)合親和力或親合力。一些此類突變CTLA-4-1g 二聚體以及單體在體外和/或體內(nèi)的測(cè)定和/或方法中(例如，在患有一種疾病、紊亂、或病況的一個(gè)受試者體內(nèi)，其中免疫抑制療法將具有益處，并且對(duì)該受試者給予一個(gè)治療有效量的至少一種此類突變CTLA-4-1g 二聚體)阻抑或抑制一種或多種免疫應(yīng)答的能力(例如，T細(xì)胞的活化或增殖、細(xì)胞因子的產(chǎn)生、活化標(biāo)記的誘導(dǎo)、炎癥、抗膠原抗體的產(chǎn)生、T細(xì)胞依賴的抗體反應(yīng))。一些此類二聚體與hCTLA-4、一種二聚體 hCTLA-4-1g(例如，二聚體 CTLA-4-1gGl 或 CTLA-4-1gG2)、Orenciaκ 蛋白、和 I 或二聚體LEAY29-1g相比具有以更大的程度來(lái)阻抑或抑制一種或多種此類免疫應(yīng)答的能力。一些此類單體與單體hCTLA-4、單體hCTLA-4-1g、和/或單體LEAY29_Ig相比具有以更大的程度來(lái)阻抑或抑制一種或多種此類免疫應(yīng)答的能力。此類突變CTLA-4-1g 二聚體以及單體預(yù)期在不同的治療和/或預(yù)防方法中具有有益的用途，這些方法用于治療其中免疫抑制治療將具有益處的疾病或紊亂，包括例如，用于治療自身免疫疾病的方法，以及用于抑制器官或組織移植體的移植的方法 。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種分離或重組的融合蛋白二聚體(例如，突變CTLA-4-1g融合蛋白二聚體)，該融合蛋白二聚體包括兩個(gè)單體融合蛋白(例如，單體突變CTLA-4-1g融合蛋白)，其中每個(gè)這種單體融合蛋白包括:⑴一種多肽(例如，突變CTLA-4細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域)，該多肽包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列(a)與SEQ ID NO: 31的多肽序列具有不超過6個(gè)氨基酸殘基的差異，并且(b)包括以下的至少一項(xiàng):在對(duì)應(yīng)于SEQ ID N0:31的位置50的一個(gè)位置上的一個(gè)甲硫氨酸殘基、在對(duì)應(yīng)于SEQ ID NO: 31的位置54的一個(gè)位置上的一個(gè)賴氨酸殘基、在對(duì)應(yīng)于SEQ ID NO:31的位置55的一個(gè)位置上的一個(gè)谷氨酸殘基、在對(duì)應(yīng)于SEQ ID NO:31的位置64的一個(gè)位置上的一個(gè)脯氨酸殘基、在對(duì)應(yīng)于SEQ IDNO: 31的位置65的一個(gè)位置上的一個(gè)絲氨酸殘基、在對(duì)應(yīng)于SEQ ID NO: 31的位置70的一個(gè)位置上的一個(gè)苯丙氨酸殘基，其中根據(jù)SEQ ID NO: 31對(duì)氨基酸殘基位置進(jìn)行編號(hào)；以及(2) 一種Ig Fe多肽，其中所述二聚體結(jié)合hCD80和/或hCD86 (和/或hCD86_Ig和/或h⑶86-1g)、和/或抑制一種免疫應(yīng)答。本發(fā)明還包括如以上所說明的一種分離或重組的單體融合蛋白，它結(jié)合CD80 (例如，hCD80)和/或CD86 (例如，hCD86)(和/或CD80_Ig，例如h⑶80-1g、和/或⑶86-1g，例如h⑶86-1g)、和/或在體外或體內(nèi)誘導(dǎo)一種免疫應(yīng)答。該IgFe多肽可包括一種IgG2Fc、IgGlFc, IgG4Fc、或降低效應(yīng)子功能或Fe受體結(jié)合的一種突變IgG Fe。該Ig Fe多肽可包括一個(gè)序列，該序列具有與選自下組的一個(gè)多肽序列至少95%、96%、97%、98%、99%、或100%的一致性，該組的構(gòu)成為:SEQ ID NOS: 184至186以及218。該Ig Fe多肽的N-端可直接地或間接地(經(jīng)由包括例如從I至10個(gè)氨基酸殘基的一個(gè)連接物)共價(jià)連接到或融合到該突變CTLA-4E⑶多肽的C-端上。在一些此類二聚體或單體中，該突變CTLA-4E⑶多肽包括在對(duì)應(yīng)于SEQ ID NO:31的位置104的一個(gè)位置上的一個(gè)谷氨酸殘基、在對(duì)應(yīng)于位置30的一個(gè)位置上的一個(gè)天冬酰胺殘基、和/或在對(duì)應(yīng)于位置32的一個(gè)位置上的一個(gè)異亮氨酸殘基。一些此類二聚體具有對(duì)于⑶86 (例如，h⑶86 )或二聚體⑶86-1 g (例如，h⑶86-1g)的一種結(jié)合親合力，該結(jié)合親合力對(duì)應(yīng)地是大約等于或大于hCTLA-4蛋白、二聚體 hCTLA-4-1g、Oren(；ia:1 蛋白、和 I 或二聚體 LEAY29_Ig 對(duì)于 CD86 或二聚體 CD86_Ig的結(jié)合親合力。一些此類二聚體具有對(duì)于⑶80 (例如，h⑶80)或二聚體⑶80-1g (例如，h⑶80-1g)的一種結(jié)合親合力，該結(jié)合親合力對(duì)應(yīng)地是大于hCTLA-4、二聚體hCTLA-4-1g、和/或GVenda蛋白對(duì)于⑶80或二聚體⑶80-1g的結(jié)合親合力。一些此類單體展示了對(duì)于⑶86 (例如，h⑶86)或⑶86-1g (例如，h⑶86-1g)的一種結(jié)合親和力或親合力，該結(jié)合親和力或親合力對(duì)應(yīng)地是大約等于或大于單體hCTLA-4、單體hCTLA-4-1g、或單體LEA29Y_Ig對(duì)于⑶86或⑶86-1 g的結(jié)合親和力或親合力。一些此類單體具有對(duì)于⑶80 (例如，h⑶80)或⑶80-1g (例如，h⑶80-1g)的一種結(jié)合親和力或親合力，該結(jié)合親和力或親合力對(duì)應(yīng)地是大于單體hCTLA-4或單體hCTLA-4-1g對(duì)于⑶80或二聚體⑶80_Ig的結(jié)合親和力或親合力。一些此類突變CTLA-4-1g 二聚體以及單體在體外和/或體內(nèi)具有阻抑或抑制一種或多種免疫應(yīng)答的能力(例如，T細(xì)胞的活化或增殖、細(xì)胞因子的產(chǎn)生、活化標(biāo)記的誘導(dǎo)、炎癥、抗膠原抗體的產(chǎn)生、T細(xì)胞依賴的抗體反應(yīng))，如以下詳細(xì)討論。一些此類二聚體與hCTLA-4、一種二聚體hCTLA-4-1g、Orenda8蛋白、和I或二聚體LEAY29_Ig相比具有以更大的程度來(lái)阻抑一種或多種此類免疫應(yīng)答的能力。一些此類單體與單體hCTLA-4或單體hCTLA-4-1g相比具有以更大的程度來(lái)阻抑或抑制一種或多種此類免疫應(yīng)答的能力。此類突變CTLA-4-1g 二聚體以及單體預(yù)期在不同的治療和/或預(yù)防方法中具有有益的用途，這些方法用于治療其中免疫抑制治療將具有益處的疾病或紊亂，(例如，自身免疫疾病及紊亂，以及用于抑制器官或組織移植體的移植的方法)。以上所說明的任何這種二聚體以及單體突變CTLA-4-1g融合蛋白二聚體或單體可進(jìn)一步包括一種肽，這種肽協(xié)助該融合蛋白從宿主細(xì)胞中分泌。這種肽可任選地是一種信號(hào)肽。該信號(hào)肽的C-端典型地共價(jià)連接到一種融合蛋白的N-端上。該信號(hào)肽可包括一個(gè)氨基酸序列，該氨基酸序列具有與SEQ ID NO: 182或SEQ ID NO:216的氨基酸序列至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或 100% 的一致性。該信號(hào)肽可包括一個(gè)氨基酸序列，該氨基酸序列具有與包括SEQ ID NO: 160的氨基酸殘基I至35、I至36、或I至37 的一個(gè)氨基酸序列至少 90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或 100% 的一致性。此外，如以下所討論，以上所說明的任何這種二聚體及單體突變CTLA-4-1g融合蛋白可包括一個(gè)或多個(gè)經(jīng)糖基 化或聚乙二醇化的氨基酸殘基。本發(fā)明還提供了一種成熟/分泌的突變CTLA-4_IgG2融合蛋白，其長(zhǎng)度是352個(gè)氨基酸，并且包括一種突變CTLA-4E⑶多肽(包括124個(gè)氨基酸殘基)，以及一種人類IgG2Fc多肽，它包括228個(gè)氨基酸殘基。示例性的突變CTLA-4ECD多肽包括那些多肽，這些多肽包括通過SEQ ID NOS:1至73中的任何一個(gè)所識(shí)別的序列。示例性的突變CTLA-4_IgG2融合蛋白包括那些，它們包括通過SEQ ID N0S: 74至79、197至200、205至214、以及219中222中任何一個(gè)所識(shí)別的一個(gè)多肽序列。若需要，一種成熟突變CTLA-4-1gG2融合蛋白的氨基酸能夠以該突變CTLA-4-1gG2的第一個(gè)氨基酸殘基(即，該突變CTLA-4E⑶多肽的第一個(gè)殘基)起始進(jìn)行編號(hào)。在一些方面，該突變CTLA-4-1gG2融合蛋白(或突變CTLA-4E⑶)的第一個(gè)殘基是甲硫氨酸，并且因此該突變CTLA-4-1gG2融合蛋白(或突變CTLA-4E⑶)的氨基酸編號(hào)將會(huì)由甲硫氨酸起始(被指定為氨基酸殘基I)。本發(fā)明還包括一種分離或重組的多聚體融合蛋白，該多聚體融合蛋白包括二個(gè)或多個(gè)以上說明的突變CTLA-4-1g融合蛋白。在一些情形下，該多聚體是一個(gè)融合蛋白二聚體，該融合蛋白二聚體包括兩個(gè)突變CTLA-4-1g融合蛋白，它們可以是相同的融合蛋白(即，同型二聚體)或不同的融合蛋白(即，異型二聚體)。在一些情形下，該多聚體是一種四聚體融合蛋白，它包括四個(gè)本發(fā)明的突變CTLA-4-ECD多肽。該四聚體可包括四個(gè)相同的突變CTLA-4E⑶多肽(即，同型四聚體)、或本發(fā)明的四個(gè)突變CTLA-4E⑶多肽的任何組合，這樣使得所有四個(gè)突變CTLA-4E⑶多肽都不相同(即，異四聚體)。一些此類多聚體結(jié)合⑶80和/⑶86 (和/或h⑶80-1g和/或h⑶86-1g)、和/或阻抑或抑制一種免疫應(yīng)答。本發(fā)明包括以上說明的可溶形式的多肽、融合蛋白、以及多聚體中的任何一種。還包括了以下說明的可溶形式的本發(fā)明的偶聯(lián)物。本發(fā)明的可溶性分子如，本發(fā)明的可溶性的多肽、二聚體融合蛋白、單體融合蛋白、多聚體、以及偶聯(lián)物-并未連接或結(jié)合或結(jié)合到細(xì)胞上。一些此類可溶性分子可以在溶液中或可以進(jìn)行循環(huán)，例如，在一種液體中(例如，在受試者的體內(nèi))。可以典型地使用一種信號(hào)肽來(lái)協(xié)助這種分子的分泌，但該信號(hào)肽在該分子從宿主細(xì)胞中分泌的過程中被切割。因此，在大部分的情形下，一種可溶性的分子，如，一種可溶性的多肽、二聚體融合蛋白、單體融合蛋白、或多聚體，并不包括一種信號(hào)肽。如以上所討論，本發(fā)明的一個(gè)突變CTLA-4細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域多肽可以連接到一種Ig分子上，該分子包括例如，一種Ig多肽的一 部份，例如，一種Ig Fe多肽，它造成一種可溶性的融合蛋白。因此，在一個(gè)方面，本發(fā)明包括可溶性的突變CTLA-4-1g融合蛋白，該融合蛋白包括如在本文中所說明的本發(fā)明的任何突變CTLA-4ECD多肽，該多肽融合到或連接到一種Ig多肽的至少一個(gè)部分上，例如，一種野生型Ig Fe (例如，人類IgG2Fc)或突變Ig Fe多肽。此類可溶性的突變CTLA-4-1g融合蛋白可以是單體或二聚體的融合蛋白，并且包括以上以及其他地方(包括在以下實(shí)例中)詳細(xì)說明的的那些突變CTLA-4-1g融合蛋白單體以及二聚體。如以上以及本文中的其他地方所詳細(xì)說明，一些此類可溶性的單體或二聚體融合蛋白可具有結(jié)合CD80和/或CD86的能力、和/或在體外和/或體內(nèi)的應(yīng)用中阻抑或抑制一種免疫應(yīng)答的能力(例如，T細(xì)胞的活化或增殖)。本發(fā)明的此類可溶性分子預(yù)期在不同的應(yīng)用中具有具體的益處，包括例如，用于治療免疫系統(tǒng)疾病及紊亂(例如，自身免疫疾病)的治療及預(yù)防方法，以及用于抑制細(xì)胞、器官或組織移植體的移植的預(yù)防及治療方法。本發(fā)明的可溶性分子一例如，本發(fā)明的可溶性重組突變CTLA-4E⑶多肽、單體以及二聚體的突變CTLA-4-1g融合蛋白、突變CTLA-4E⑶偶聯(lián)物、突變CTLA-4-1g偶聯(lián)物、包括突變CTLA-4E⑶多肽或突變CTLA-4-1g的多聚體、包括突變CTLA-4偶聯(lián)物或突變CTLA-4-1g偶聯(lián)物的多聚體-它們結(jié)合⑶80和/或⑶86，在以一個(gè)治療或預(yù)防有效量給予一個(gè)受試者時(shí)，抑制了內(nèi)源性CD80和/或CD86與內(nèi)源性CD28之間的相互作用，由此在該受試者體內(nèi)阻抑一種免疫系統(tǒng)反應(yīng)或?qū)υ撌茉囌叩慕】档纳眢w組織、器官、和/或細(xì)胞的免疫系統(tǒng)進(jìn)行攻擊。在其中一個(gè)受試者是來(lái)自一個(gè)供方的健康的身體組織、器官、和/或細(xì)胞的受方情形下(例如，當(dāng)該受試者受方已接受了一個(gè)供方的組織移植體或細(xì)胞或器官移植物時(shí))，此類可溶性的分子抑制了內(nèi)源性CD80和/或CD86與內(nèi)源性CD28之間的相互作用，由此抑制該受試者的免疫系統(tǒng)對(duì)由該供方捐獻(xiàn)到該受試者的健康的身體組織、器官、和/或細(xì)胞的有害應(yīng)答或攻擊。經(jīng)由阻抑一種免疫系統(tǒng)應(yīng)答或?qū)】档纳眢w組織的攻擊，降低了該受試者體內(nèi)與這種免疫系統(tǒng)應(yīng)答或?qū)】档纳眢w組織、器官、或細(xì)胞的攻擊相關(guān)聯(lián)的副作用(例如，疼痛、關(guān)節(jié)炎癥、等)，并延遲或防止由這種響應(yīng)或攻擊所造成的損傷。用于測(cè)量以上說明的本發(fā)明的多肽(包括例如，突變CTLA-4E⑶多肽、二聚體以及單體的突變CTLA-4 -1g融合蛋白、以及多聚體)的結(jié)合親和力以及親合力的方法對(duì)于本領(lǐng)域中的普通技術(shù)人員而言將是已知的，并且包括例如但不限于:BiaC0re 技術(shù)(GEHealthcare)、等溫滴定微量熱法(MicroCal LLC, Northampton, MA)、ELISA、結(jié)合親合力曬菌體展示法、以及FACS法。Biacore法在以下實(shí)例4中詳細(xì)說明。FACS或其他分選方法在以上以及本文的其他地方進(jìn)行更為詳細(xì)地說明。通過噬菌體ELISA來(lái)測(cè)量本發(fā)明的多肽對(duì)hCD80和/或hCD86的結(jié)合親合力的方法說明于以下實(shí)例2中。用于檢測(cè)并測(cè)量由本發(fā)明的分子(包括例如，本發(fā)明的突變CTLA-4ECD多肽、二聚體以及單體的突變CTLA-4-1g融合蛋白、以及多聚體)所誘導(dǎo)的T細(xì)胞應(yīng)答的方法是本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員所熟知的。T細(xì)胞活化常見地特征在于生理學(xué)事件，包括例如，T細(xì)胞相關(guān)的細(xì)胞因子合成(例如，IFN-Y的產(chǎn)生)以及活化標(biāo)記(例如，⑶25、IL-2受體)的誘導(dǎo)。CD4+T細(xì)胞在MHC II型分子的背景中識(shí)別它們的免疫原肽，而CD8+T細(xì)胞則在MHC I型分子的背景中識(shí)別它們的免疫原肽。用于評(píng)估并測(cè)量以上說明的本發(fā)明的分子抑制或阻抑T細(xì)胞活化和/或T細(xì)胞增殖或阻斷通過CD86和/或CD80的信號(hào)傳導(dǎo)的能力的示例性方法說明于實(shí)例5至8以及本文的其他地方。本發(fā)明的多肽、單體以及二聚體的融合蛋白、以及多聚體(包括以上所討論的那些)可任選地進(jìn)一步包括一種額外的氨基酸(例如，甲硫氨酸)，將該氨基酸加到至N-端和/或一種肽標(biāo)簽上用于進(jìn)行純化或識(shí)別。本發(fā)明的多肽(包括以上所討論的那些)可任選地進(jìn)一步包括一個(gè)多肽純化亞序列，例如，選自一種表位標(biāo)簽、一種FLAG標(biāo)簽、一種聚組氨酸序列、以及一種GST融合物的亞序列。此外，如以下更為詳細(xì)地討論，本發(fā)明包括分離的、重組的、或合成的核酸，這些核酸編碼了以上說明的以及以下額外詳細(xì)說明的本發(fā)明的所有多肽、融合蛋白、以及多聚體。序列一致性_如以上所討論，在一個(gè)方面，本發(fā)明包括一種分離或重組的多肽，該多肽包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列具有與選自下組的一個(gè)多肽序列至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、99.5%、或 100% 的序列一致性，該組的構(gòu)成為:SEQ ID N0S:1至73，其中該多肽結(jié)合⑶80或⑶86或二者之一的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域，和/或具有阻抑或抑制一種免疫應(yīng)答的能力。在另一個(gè)方面，如以下詳細(xì)說明，本發(fā)明提供了一種分離或重組的核酸，該核酸包括一個(gè)多核苷酸序列，該多核苷酸序列編碼了包括一個(gè)多肽序列的一種多肽，該多肽序列具有與選自下組的至少一個(gè)多肽序列至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、99.5% 或 100% 的序列一致性，該組的構(gòu)成為:SEQ ID NOS:1至73，其中該多肽具有結(jié)合⑶80和/或⑶86、和/或它的一個(gè)ECD的能力，和/或具有阻抑一種免疫應(yīng)答的能力，或它的一個(gè)互補(bǔ)的多核苷酸序列。一個(gè)序列(多肽或核酸)與另一個(gè)的相似程度提供了對(duì)于這兩個(gè)序列的類似結(jié)構(gòu)以及功能特性的指示。因此，在本發(fā)明的背景中，具有與任何給定的示例性序列的一個(gè)相似序列的序列是本發(fā)明的一個(gè)特征。具有如以下所定義的序列一致性百分比的序列是本發(fā)明的一個(gè)特征?？墒褂么_定序列關(guān)系的不同方法，包括手動(dòng)比對(duì)以及計(jì)算機(jī)輔助性序列比對(duì)以及分析。用于進(jìn)行序列比對(duì)的不同的計(jì)算機(jī)程序是可獲得的，或能夠由技術(shù)人員產(chǎn)生。如以上所指出，在本發(fā)明中所采用的核酸以及多肽的序列不需要對(duì)應(yīng)地與本發(fā)明的一種核酸或本發(fā)明的多肽的對(duì)應(yīng)序列相同，但可以是實(shí)質(zhì)上相同的。例如，可使本發(fā)明的多肽經(jīng)受不同的變化，如一個(gè)或多個(gè)氨基酸的插入、缺失、和/或取代(保守性或非保守性的)，包括例如，在此類變 化可對(duì)其用途提供某些優(yōu)勢(shì)的情形下，如，在其治療及預(yù)防的用途中，或其給藥或診斷的應(yīng)用中。也可使本發(fā)明的核酸經(jīng)受不同的變化，如一個(gè)或多個(gè)氨基酸在一個(gè)或多個(gè)密碼子中的一個(gè)或多個(gè)取代，這樣使得一個(gè)特定的密碼子編碼了相同或不同的氨基酸，造成沉默變化(例如，在一個(gè)核苷酸序列中的突變?cè)斐稍摪被嵝蛄械某聊蛔?，例如，?dāng)經(jīng)編碼的氨基酸并未被該核酸突變而改變時(shí))或非沉默變化，該序列中一個(gè)或多個(gè)核酸(或密碼子)的一個(gè)或多個(gè)缺失，該序列中一個(gè)或多個(gè)核酸(或密碼子)的一個(gè)或多個(gè)添加或插入，該序列中一個(gè)或多個(gè)核酸(或密碼子)的切割或一個(gè)或多個(gè)截段。還可對(duì)這些核酸進(jìn)行修飾以包括一個(gè)或多個(gè)密碼子，這種或這些密碼子在一個(gè)表達(dá)系統(tǒng)(例如，細(xì)菌或哺乳動(dòng)物)中提供最佳表達(dá)，同時(shí)，若希望，所述一個(gè)或多個(gè)密碼子仍編碼了這種或這些相同的氨基酸。此類核酸變化可對(duì)其治療及預(yù)防性用途，或其給藥或診斷性應(yīng)用提供某些優(yōu)勢(shì)。這些核酸以及多肽能夠以多種方式進(jìn)行修飾，只要它們包括與本發(fā)明的一個(gè)對(duì)應(yīng)核酸或多肽中的一個(gè)序列實(shí)質(zhì)上相同(如以下所定義)的序列。在二個(gè)或多個(gè)核酸或多肽序列的背景中，術(shù)語(yǔ)“相同的”或“一致性”是指二個(gè)或多個(gè)序列，當(dāng)為了最大相似性而進(jìn)行比較并且比對(duì)時(shí)，這些序列是相同的或具有一個(gè)限定百分比的相同的氨基酸殘基或核苷酸，如使用以下說明的序列比較算法或通過目視檢驗(yàn)所確定。一個(gè)受試序列與一個(gè)參比(即，查詢)序列的“序列一致性百分比(“％ —致性”)”意思是該受試序列在一個(gè)比較長(zhǎng)度中與該查詢序列相同所達(dá)到的一個(gè)限定百分比(即，對(duì)于一個(gè)多肽序列而言在一個(gè)又一個(gè)氨基酸的基礎(chǔ)上，或?qū)τ谝粋€(gè)多核苷酸序列而言在一個(gè)又一個(gè)核苷酸的基礎(chǔ)上)。一個(gè)受試序列與一個(gè)查詢序列的序列一致性百分比(“％序列一致性”或“％ —致性”)可計(jì)算如下。首先，使用一種具有特定比對(duì)參數(shù)的序列比較算法來(lái)確定這兩個(gè)序列的最適比對(duì)。這種最適比對(duì)的確定可使用計(jì)算機(jī)進(jìn)行，或可以進(jìn)行手動(dòng)計(jì)算，如以下所說明。接著，在該比較長(zhǎng)度中對(duì)這兩個(gè)經(jīng)最適比對(duì)的序列進(jìn)行比較，并確定在該最適比對(duì)中在這兩序列中發(fā)生的相同殘基的位置數(shù)目，它提供了匹配位置的數(shù)目。接著將該匹配位置數(shù)目除以該比較長(zhǎng)度的總位置數(shù)目(除非另有限定，它是該查詢序列的長(zhǎng)度)，并接著再將該結(jié)果乘以100，以便得到該受試序列與該查詢序列的序列一致性百分比。
就多肽序列而言，典型地將一個(gè)序列視為一個(gè)“查詢序列”(例如，本發(fā)明的一個(gè)多肽序列)，件該序列與一個(gè)或多個(gè)其他序列(即，“一個(gè)或多個(gè)受試序列”，例如，存在于一個(gè)序列數(shù)據(jù)庫(kù)中的序列)進(jìn)行比較。這種序列比較算法使用了這些指定的比對(duì)參數(shù)來(lái)確定在該查詢序列與這個(gè)或這些受試序列之間的最適比對(duì)。當(dāng)將一個(gè)查詢序列與一個(gè)序列數(shù)據(jù)庫(kù)(例如,GENBANK 數(shù)據(jù)庫(kù)(Genetic Sequence Data Bank;U.S.Department ofHealth and Human Services)或(」」.NLSLQM:數(shù)據(jù)庫(kù)(Thomson Derwent ;也可以作為 STN上DGENE 數(shù)據(jù)庫(kù)而獲得))進(jìn)行比較時(shí)，通常僅將該查詢序列與這些比對(duì)參數(shù)輸入計(jì)算機(jī)；對(duì)于達(dá)到一個(gè)限定數(shù)目的受試序列返回了在查詢序列與每個(gè)受試序列之間的最適比對(duì)。1.確定最適比對(duì)這兩多肽序列當(dāng)使用指定的參數(shù)(即，一種定義的氨基酸替換矩陣(substitutionmatrix)、間隙存在罰分(gap existence penalty)(也被稱為間隙開放罰分(gap openpenalty))、以及間隙延伸罰分(gap extension penalty))進(jìn)行比對(duì)以達(dá)到該對(duì)序列可能的最高相似性評(píng)分時(shí)，是“最適比對(duì)”的。BL0SUM62矩陣(Henikoff and Henikoff (1992)Proc.Natl.Acad.Sc1.USA89 (22):10915-10919)經(jīng)常用作在多肽序列比對(duì)算法(如，BLASTP,以下所說明)中的一個(gè)默認(rèn)評(píng)分替換矩陣。針對(duì)在這些比對(duì)序列之一中引入的一個(gè)單一的氨基酸間隙強(qiáng)加間隙存在罰分，并且針對(duì)該間隙中的每個(gè)殘基位置強(qiáng)加間隙延伸罰分。除非另有指明，在本文中所采用的比對(duì)參數(shù)為:BL0SUM62評(píng)分矩陣，間隙存在罰分=11，并且間隙延伸罰分=1。通過比對(duì)開始以及結(jié)束處(例如，比對(duì)窗口)的每個(gè)序列的氨基酸位置來(lái)定義比對(duì)評(píng)分，并且可任選地通過將一個(gè)間隙或多個(gè)間隙插入到一個(gè)或這兩個(gè)序列中，以便達(dá)到最高可能的相似性評(píng)分。 盡管在二個(gè)或多個(gè)序列之間的最適比對(duì)可以通過手動(dòng)進(jìn)行確定(如以下所說明)，通過使用一種計(jì)算機(jī)執(zhí)行的比對(duì)算法協(xié)助T該過程，這種比對(duì)算法如，BLAST (National Library of Medicine),例如，針對(duì)多肽序列的BLASTP以及針對(duì)核酸序列的BLASTN，說明于 Altschul et al.(1997) Nucleic Acids Res.25:3389-3402 中，并且通過不同來(lái)源而使公眾可以獲得，這些來(lái)源如，國(guó)家生技信息中心(National Center forBiotechnology Information) (NCBI)網(wǎng)站。當(dāng)使用一個(gè)計(jì)算機(jī)化的BLAST界面時(shí),如果該選項(xiàng)存在使用一個(gè)“低復(fù)雜性過濾器(low complexity filter)”,應(yīng)當(dāng)將這個(gè)選項(xiàng)關(guān)閉(即，不使用過濾器)。在兩個(gè)多肽序列之間的最適比對(duì)也可以使用以上限定的相同比對(duì)參數(shù)(矩陣=BL0SUM62，間隙開放罰分=11，以及間隙延伸罰分=1)，通過BLASTP算法的手動(dòng)計(jì)算(S卩，無(wú)計(jì)算機(jī)輔助)來(lái)確定。開始時(shí)，通過目視對(duì)這兩個(gè)序列進(jìn)行初始比對(duì)。接著，按照以下方法計(jì)算了一個(gè)初始比對(duì)評(píng)分:對(duì)于該比對(duì)的每個(gè)位置(即，對(duì)于各對(duì)經(jīng)比對(duì)的殘基配對(duì))，根據(jù)BL0SUM62矩陣指定一個(gè)數(shù)字值(圖13)。對(duì)該比對(duì)中的每對(duì)殘基所指定的數(shù)值之和是比對(duì)評(píng)分。如果這兩個(gè)正在進(jìn)行比對(duì)的序列是高度相似的，通常這種初始比對(duì)提供了最高可能比對(duì)評(píng)分。具有最高可能比對(duì)評(píng)分的比對(duì)是基于所采用的比對(duì)參數(shù)的最適比對(duì)。在圖14(A至D)中提供了對(duì)于兩個(gè)序列的手動(dòng)計(jì)算比對(duì)評(píng)分的實(shí)例。圖14(A)顯示了針對(duì)一個(gè)“查詢(query)”序列(在本文中識(shí)別為人類CTLA-4E⑶序列(SEQ ID NO: 159)的殘基39-53)與一個(gè)“受試”序列(在本文中被識(shí)別為D3 (SEQ ID NO:61)的殘基40-54)的一個(gè)任意比對(duì)(比對(duì)14A)的比對(duì)評(píng)分計(jì)算。通過BL0SUM62矩陣針對(duì)每對(duì)經(jīng)比對(duì)的氨基酸所指定的數(shù)字值顯示在該比對(duì)中的各個(gè)位置之下。圖14⑶顯示了對(duì)于這相同的兩個(gè)序列的最適比對(duì)的比對(duì)評(píng)分。為了協(xié)助可視化，將該比對(duì)中的每個(gè)相同的氨基酸對(duì)用粗體顯示。以下圖14(B)中的比對(duì)(比對(duì)14B)造成這兩個(gè)序列的最高可能比對(duì)評(píng)分(每個(gè)比對(duì)位置下所示數(shù)值之和)；這兩個(gè)序列的任何其他比對(duì)(具有或沒有間隙)會(huì)造成一個(gè)較低的比對(duì)評(píng)分。在一些情形下，可通過將一個(gè)或多個(gè)間隙引入到在該比對(duì)中引入而獲得一個(gè)較高的比對(duì)評(píng)分。當(dāng)將一個(gè)間隙引入到一個(gè)比對(duì)中時(shí)，指定了一個(gè)間隙開放罰分，并且針對(duì)該間隙內(nèi)的每個(gè)殘基位置額外地評(píng)估了一個(gè)空隙延伸罰分。因此，使用以上說明的比對(duì)參數(shù)(包括間隙開放罰分=11并且間隙延伸罰分=1)，在該比對(duì)中的一個(gè)殘基長(zhǎng)度的間隙將對(duì)應(yīng)于指定到該間隙上的-(11+ (lxl))=-12數(shù)值；兩個(gè)殘基的間隙將對(duì)應(yīng)于指定到該間隙上的-(11+ (2x1)) =-13數(shù)值、等等。針對(duì)引入到該比對(duì)中的每個(gè)新間隙來(lái)重復(fù)這個(gè)計(jì)算。

以下是一個(gè)實(shí)例，它證明了將一個(gè)間隙引入到一個(gè)比對(duì)中怎樣能夠造成一個(gè)較高的比對(duì)評(píng)分，盡管在有間隙罰分的情況下。圖14(C)顯示了一個(gè)“查詢”序列(在本文中被識(shí)別為該人類CTLA-4ECD序列(SEQ ID NO: 159)的殘基39-53)與一個(gè)“受試”序列(在本文中被識(shí)別為D3 (SEQ ID N0:61)的殘基41-55)的比對(duì)(比對(duì)14C)，但在此情形下氨基酸49-50缺失。比對(duì)14C (它是最佳的可能比對(duì)，沒有引入任何間隙)產(chǎn)生比對(duì)評(píng)分34。圖14⑶中的比對(duì)(比對(duì)14D)顯示了在該下側(cè)序列中引入一個(gè)兩個(gè)殘基的間隙對(duì)該比對(duì)評(píng)分的作用。盡管總間隙罰分為13 (間隙開放罰分是11，并且2次I分的間隙延伸罰分)，這兩個(gè)序列的整體比對(duì)評(píng)分增加至43。以下的比對(duì)D產(chǎn)生了最高可能比對(duì)評(píng)分，并且因此是這兩個(gè)序列的最適比對(duì)；這兩個(gè)序列的任何其他比對(duì)(具有或沒有間隙)會(huì)造成一個(gè)較低的比對(duì)評(píng)分。應(yīng)當(dāng)理解的是，以上說明的序列比對(duì)計(jì)算的實(shí)例(它使用了相對(duì)較短的序列)僅是出于說明性目的而提供。實(shí)際上，所才用的比對(duì)參數(shù)(BL0SUM62矩陣，間隙開放罰分=11，并且間隙延伸罰分=1)總體上旨在用于長(zhǎng)度為85個(gè)氨基酸或更長(zhǎng)的多肽序列。NCBI網(wǎng)站針對(duì)其他長(zhǎng)度的序列提供了以下比對(duì)參數(shù)，這些比對(duì)參數(shù)適用于計(jì)算機(jī)輔助性連同手動(dòng)的比對(duì)計(jì)算，使用如以上所說明的相同過程進(jìn)行。對(duì)于長(zhǎng)度為50-85個(gè)氨基酸的序列，最適參數(shù)是BL0SUM80矩陣(Henikoff and Henikoff,以上說明文獻(xiàn))，間隙開放罰分=10，并且間隙延伸罰分=1。對(duì)于長(zhǎng)度為35-50個(gè)氨基酸的序列，最適參數(shù)是PAM70矩陣(Dayhoff, M.0.，Schwartz, R.M.&0rcutt, B.C.(1978) “A model of evolutionarychange in proteins，，in Atlas of Protein Sequence and Structure, vol.5, suppl.3, M.0.Dayhoff (ed.), pp.345-352，Natl.Biomed.Res.Found., Washington, DC.),間隙開放罰分=10，并且間隙延伸罰分=1。對(duì)于長(zhǎng)度為小于35個(gè)氨基酸的序列，最適參數(shù)是PAM30矩陣(Dayhoff, M.0.，以上說明文獻(xiàn))，間隙開放罰分=9，并且間隙延伸罰分=1。2.計(jì)算一致性百分比一旦對(duì)這些序列進(jìn)行最適比對(duì)，即可通過對(duì)在該最適比對(duì)中含有相同殘基對(duì)的位置數(shù)目進(jìn)行計(jì)數(shù)，將其除以在該比較長(zhǎng)度(也稱為比較窗口)中的殘基數(shù)目(除非另有限定，它是該查詢序列中的殘基數(shù)目)，再將得到的數(shù)目乘以100，來(lái)計(jì)算該受試序列相對(duì)于該查詢序列的一致性百分比。返回參照以上的比對(duì)，在每個(gè)實(shí)例中，指定為查詢(上側(cè))序列的序列長(zhǎng)度是15個(gè)氨基酸。在比對(duì)B中，在該查詢序列(上側(cè))與受試序列(下側(cè))的最適比對(duì)中，有12對(duì)的比對(duì)氨基酸殘基(以粗體字顯示)是完全相同的。因此，這個(gè)特定的受試序列具有與該15個(gè)殘基的查詢序列的完整長(zhǎng)度(12/15) X100=80%的一致性；換言之，在比對(duì)B中的受試序列具有與該查詢序列至少80%的氨基酸序列一致性。在比對(duì)D中，在該最適比對(duì)中有11對(duì)的氨基酸殘基(以粗體字顯示)是相同的；因此，這個(gè)特定的受試序列具有與該15個(gè)殘基的查詢序列的完整長(zhǎng)度(11/15) xl00=73.3%的一致性；換言之，在比對(duì)D中的受試序列具有與該查詢序列至少73%的氨基酸序列一致性。當(dāng)應(yīng)用于多肽時(shí)，術(shù)語(yǔ)“實(shí)質(zhì)的一致性”(或“實(shí)質(zhì)上相同”)典型地意思指當(dāng)使用BLASTP算法(手動(dòng)或經(jīng)由計(jì)算機(jī))使用以上說明的適當(dāng)參數(shù)來(lái)對(duì)兩個(gè)氨基酸序列(即，一個(gè)查詢序列以及一個(gè)受試序列)進(jìn)行最適比對(duì)時(shí)，該受試序列具有與該查詢序列至少70%、75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、99.5%、或100%的氨基酸序列一致性。在一些情形下，這種實(shí)質(zhì)的一致性存在于至少100個(gè)氨基酸殘基的比較長(zhǎng)度中，例如，至少 110、115、118、119、120、121、122、123、124、125、130、135、140、145、150、200、250、300、345、346、347、348、349、350、351、352、353、354、355、356、357、358、359、360、375、400、450、或 500 個(gè)氨基酸殘基。類似地，當(dāng)應(yīng)用在兩核酸序列的背景中時(shí)，術(shù)語(yǔ)實(shí)質(zhì)的一致性(或?qū)嵸|(zhì)上相同)意思指當(dāng)使用BLASTN算法(手動(dòng)或經(jīng)由計(jì)算機(jī))使用以上說明的適當(dāng)參數(shù)來(lái)對(duì)兩核酸序列(SP，一個(gè)查詢序列以及一個(gè)受試序列)進(jìn)行最適比對(duì)時(shí)，該受試序列具有與該查詢序列至少約 70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、99.5%、或 100% 的核酸序列一致性。用于核酸序列比對(duì)的參數(shù)為:配對(duì)給分(match reward) I,錯(cuò)配罰分(mismatch penalty) -3,間隙存在罰分5,間隙延伸罰分2 (在BLASTN算法中并不使用替換矩陣)。在一些情形下，實(shí)質(zhì)的一致性存在于至少300個(gè)核苷酸殘基的比較長(zhǎng)度中，例如，至少 330、345、354、357、360、363、366、369、362、365、375、390、405、420、435、450、600、750、900、1035、1038、1041、1044、1047、1050、1053、1056、1059、1062、1065、1068、1071、1074、1077、1080、1200、1350、或 1500 個(gè)核苷酸殘基?？墒褂帽绢I(lǐng)域所已知的其他序列比對(duì)程序。ALIGN程序使用了由Myers andMiller CAB10S4:11-17 (1988)所說明的一種動(dòng)態(tài)規(guī)劃算法的改進(jìn)而產(chǎn)生了這兩種所選定的蛋白或核酸序列的最適全體(整體)比對(duì)。ALIGN程序典型地(但并非必須)與加權(quán)末端間隙(weighted end-gap ) 一起使用。如果間隙開放罰分和間隙延伸罰分是可獲得的時(shí)，對(duì)于氨基酸序列比對(duì)通常將它們對(duì)應(yīng)地設(shè)定在大約-5至-15以及O至-3之間，更優(yōu)選地對(duì)應(yīng)地是大約-12以及-0.5至-2，并且對(duì)于核酸序列比對(duì)對(duì)應(yīng)地是大約-10至-20以及-3至-5，更常見地對(duì)應(yīng)地是大約-16以及-LALIGN程序進(jìn)一步說明于Pearson et al., Proc.Natl.Acad.Sc1.USA85:2444-48 (1988)，以及 Pearson et al., Meth.Enzymol.18:63-98 (1990)中?？商娲?，并且特別針對(duì)多重序列分析(B卩，超過三種序列的比較)，可使用CLUSTALW 程序(說明于例如，Thompson et al., Nucl.Acids Res.22:4673-4680 (1994))。CLUSTALW程序是一種適合于多重DNA和氨基酸序列比對(duì)的算法(Thompson et al., Nucl.Acids Res.22:4673-4680 (1994))。CLUSTALW在多個(gè)序列的組之間進(jìn)行多重的逐對(duì)比較，并基于同源性將它們組合成為一個(gè)多重比 對(duì)。在一個(gè)方面，將間隙開放和間隙延伸罰分對(duì)應(yīng)地設(shè)定為10和0.05。可替代地或額外地，CLUSTALW程序是使用“動(dòng)態(tài)”(對(duì)比“固定”)設(shè)置而運(yùn)行。典型地，用CLUSTALW進(jìn)行的核苷酸序列分析是使用BESTFIT矩陣進(jìn)行的；而氨基酸序列是使用一個(gè)不同組的BLOSUM矩陣進(jìn)行評(píng)估的，這取決于這些序列之間的一致性程度(例如，如通過經(jīng)由圣地亞哥超級(jí)計(jì)算機(jī)中心(San Diego Supercomputer Center(SDSC))獲得的CLUSTALW1.6版程序或可從歐洲生物信息中心(European BioinformaticsInstitute, Cambridge, UK)獲得的Wl.8版所使用的)。優(yōu)選地，將CLUSTALW設(shè)定成SDSC CLUSTALW系統(tǒng)默認(rèn)設(shè)置(例如，考慮到氨基酸序列分析中的特定疏水性間隙罰分)。CLUSTALW 程序進(jìn)一步說明于例如，Higgins et al.，CAB10S8 (2): 189-91 (1992)，Thompsonet al., Nucleic Acids Res.22:4673-80 (1994),以及 Jeanmougin et al., TrendsBiochem.Sc1.2:403-07 (1998)。在另一個(gè)可替代的形式中，在一個(gè)特定的比對(duì)氨基酸序列對(duì)之間的一致性或一致性百分比是指通過以下步驟所獲得的氨基酸序列一致性百分比:通過CLUSTALW分析(如Wl.8版)，對(duì)該比對(duì)中的相同配對(duì)數(shù)目進(jìn)行計(jì)數(shù)，并且將這個(gè)相同配對(duì)數(shù)目除以⑴這些比對(duì)序列的長(zhǎng)度與(ii)96中的較大的，并且使用以下的默認(rèn)ClustalW參數(shù)以達(dá)成減緩/計(jì)算逐對(duì)的比對(duì)-間隙開放罰分:10 ;間隙延伸罰分:0.10 ;蛋白重量矩陣=Gonnet系列；DNA重量矩陣:IUB ；Toggle慢速/快速逐對(duì)比對(duì)=SLOW或FULL比對(duì)。用于確定一致性百分比或類似性百分比的另一個(gè)有用的算法是FASTA算法，該算法說明于Pearson et al., Proc Natl.Acad.Sc1.USA85:2444( 1988)以及Pearson, MethodsEnzymo1.266:227-258 (1996)。將用于DNA序列的FASTA比對(duì)中以計(jì)算一致性百分比的典型參數(shù)最適化，BL50 矩陣 15:-5, k 序列(k-tuple) =2 ;結(jié)合罰分(joining penalty) =40,最適化(optimization) =28 ;間隙罰分(gap penalty) =-12,間隙長(zhǎng)度罰分(gap lengthpenalty) =-2 ;并且寬度(width) =16。其他適合的算法包括BLAST和BLAST2.0算法，它們協(xié)助至少兩個(gè)氨基酸或核苷酸序列的分析，這是通過將一種所選擇的序列與在一個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)(例如，GenSeq)中的多個(gè)序列進(jìn)行比對(duì)，或者，當(dāng)通過 一種額外的算法(如BL2SEQ)進(jìn)行修飾時(shí)，是在兩個(gè)選定的序列之間進(jìn)行。用于進(jìn)行BLAST分析的軟件可通過國(guó)家生技信息中心(NCBI)(萬(wàn)維網(wǎng)網(wǎng)址ncb1.nlm.nih.gov)而公開地獲得。BLAST算法涉及首先通過在該查詢序列中識(shí)別長(zhǎng)度為W的短字序而識(shí)別高分序列對(duì)(HSP)，它們?cè)谂c數(shù)據(jù)庫(kù)序列中具有相同長(zhǎng)度的字序進(jìn)行比對(duì)時(shí)是匹配或符合一些正值閾值的評(píng)分T。T是指鄰近字序評(píng)分閾值(neighborhood word scorethresholdXAltschul et al.,以上說明文獻(xiàn))。此類初始的鄰近字序相符結(jié)果充當(dāng)種子用于起始搜尋來(lái)發(fā)現(xiàn)含有它們的較長(zhǎng)HSP。將這些字序相符結(jié)果沿著每個(gè)序列向兩個(gè)方向延伸，只要可增加累積比對(duì)評(píng)分便繼續(xù)進(jìn)行。針對(duì)核苷酸序列，使用參數(shù)M (對(duì)一個(gè)匹配的殘基對(duì)給分；總是>0)以及N (錯(cuò)配殘基的罰分；總是〈O)來(lái)計(jì)算累積評(píng)分。針對(duì)氨基酸序列，使用一個(gè)評(píng)分矩陣來(lái)計(jì)算該累積評(píng)分。這些字序相符結(jié)果在每個(gè)方向上的延伸在下列情形下停止:該累積比對(duì)評(píng)分從其所到達(dá)的最大值下滑X的量；該累積評(píng)分由于一個(gè)或多個(gè)負(fù)分殘基比對(duì)的累積而到達(dá)O或以下；或到達(dá)任一個(gè)序列的末端。BLAST算法參數(shù)W、T、以及X確定了該比對(duì)的靈敏性和速度。BLASTN程序(對(duì)于核苷酸序列)可以與字序長(zhǎng)度(W) 11、以及期望值(E) 10、M=5、N=-4與兩股的比較一起使用。對(duì)于氨基酸序列，BLASTP程序(例如，BLASTP2.0.14; Jun-29-2000)可以與字序長(zhǎng)度3以及期望值(E)IO —起使用。BL0SUM62評(píng)分矩陣(見 Henikoff&Henikoff, (1989) Proc.Natl.Acad.Sc1.USA89:10915)使用了 比對(duì)(B) 50、期望值(E) 10、M=5、N=-4、以及兩股的比較。同樣，如同其他適合的算法，可增加比較的嚴(yán)格性，直到該程序僅識(shí)別出與在本文的序列表中的序列更為密切相關(guān)的序列(例如，包括一個(gè)多肽序列的多肽，該多肽序列具有與選自SEQ ID勵(lì)3:1至79、197至200、205至214、以及 219 至 222 的一個(gè)多肽序列至少 85、90、91、92、93、49、95、96、97、98、99%、或 100%的一致性，或包括一個(gè)核苷酸序列的核酸，該核苷酸序列具有與選自SEQ ID N0S:80至158、201至204、223、以及224中的任何的一個(gè)核苷酸序列至少85、90、91、92、93、49、95、96、97、
98、99%、或100%的一致性，或它的一個(gè)互補(bǔ)的核苷酸序列。BLAST算法還對(duì)兩序列之間的相似性或一致性進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析(見，如，Karlin&Altschul, (1993)Proc.Natl.Acad.Sc1.USA90:5873-5787)。一種由 BLAST 算法所提供的相似性或一致性的度量是最小總和機(jī)率(smallest sum probability) (P (N)),它提供了在兩個(gè)核苷酸或氨基酸序列至間隨機(jī)發(fā)生一個(gè)配對(duì)的機(jī)率的一個(gè)指示。例如，若在該試驗(yàn)核酸與一種參比核酸的比較中，該最小總和機(jī)率是小于約0.2(如，小于約0.01或小于約0.001)，則該核酸即被視為與該參比序列相似。BLAST程序分析還可以或可替代地可以由低復(fù)雜度過濾程序(如，DUST或SEG程序)進(jìn)行修飾，它們是優(yōu)選地整合到該BLAST程序的操作中(見，如，Wootton etal., Comput.Chem.17:149-63 (1993), Altschul et al., Nat.Genet.6:119-29 (1991)，Hancock et al., Comput.Appl.Biosc1.10:67-70 (1991),以及 Wootton et al., Meth.Enzymol.266:554-71 (1996))。在此類方面中，若使用λ比例(lambda ratio),該比例的可用設(shè)置是在0.75與0.95之間，包括在0.8與0.9之間。若在此類方面中使用了間隙存在代價(jià)(或間隙評(píng)分)，則將該間隙存在代價(jià)典型地設(shè)定在大約-5至-15之間，更典型地是大約-10，并且將每個(gè)殘基間隙代價(jià)典型地設(shè)定在大約O至-5之間，如在O與-3至間(例如，-0.5)。適當(dāng)時(shí)，將類似的間隙參數(shù)可以與其他程序一起使用。BLAST程序以及其下的原則進(jìn)一步說明于，例如，Altschul et al.，J.Mol.Biol.215:403-10 (1990), Karlin andAltschul, Proc.Natl.Acad.Sc1.USA87:2264-68 (199)(如由 Karlin and Altschul, Proc.Natl.Acad.Sc1.USA90:5873-77 (1993)修飾)，以及 Altschul et al., Nucl.AcidsRes.25:3389-3402 (1997)?？墒褂玫乃惴ǖ牧硪粋€(gè)實(shí)例被納入到PILEUP軟件中。PILEUP程序使用了漸進(jìn)式的逐對(duì)比對(duì)，從一組相關(guān)的序列中創(chuàng)造出一個(gè)多重序列比對(duì)，以顯示其關(guān)系以及序列一致性百分比或序列相似性百分比。PILEUP使用了 Feng&Dool ittle (1987 )J.Mol.Evol.35:351-360的漸進(jìn)式比對(duì)法的簡(jiǎn)化版本，它類似于Higgins&Sharp (1989)CAB10S5:151-153所說明的方法。該程序可以對(duì)高達(dá)300個(gè)序列進(jìn)行比對(duì)，每個(gè)的最大長(zhǎng)度為5，000個(gè)核苷酸或氨基酸。該多重比對(duì)操作始于這兩個(gè)最相似序列的逐對(duì)比對(duì)，產(chǎn)生兩個(gè)經(jīng)比對(duì)序列的群。接著將該群與下一個(gè)最為相關(guān)的序列或經(jīng)比對(duì)序列的群進(jìn)行比對(duì)。通過兩個(gè)單個(gè)序列的逐對(duì)比對(duì)的簡(jiǎn)單延伸而進(jìn)行來(lái)對(duì)兩個(gè)群的序列進(jìn)行比對(duì)。終比對(duì)是通過一系列的漸進(jìn)式逐對(duì)比對(duì)而完成。該程序是通過指定特定的序列以及它們的氨基酸或核苷酸針對(duì)序列比較區(qū)域的坐標(biāo)，并且通過指定這些程序參數(shù)而運(yùn)行。使用PILEUP，使用特定的參數(shù)將一個(gè)參比序列與其他試驗(yàn)序列進(jìn)行比較，以確定序列一致性百分比(或序列相似性百分比)關(guān)系。PILEUP程序的示例性參數(shù)為: 默認(rèn)間隙權(quán)數(shù)(3.00)，默認(rèn)間隙長(zhǎng)度權(quán)數(shù)(0.10)，以及加權(quán)的末端間隙。PILEUP是GCG序列分析軟件包的一個(gè)組件，例如，7.0版(Devereaux et al.(1984) Nucl.Acids Res.12:387-395)。用于進(jìn)行一致性分析的其他可用算法包括Smith and WatermanC 1981 )Adv.Appl.Math.2:482 的局部同源性算法，Needleman and Wunsch (1970)J.Mol.Biol.48:443 的同源性比對(duì)算法，以及 Pearson and Lipman (1988)Proc.Natl.Acad.Sc1.USA85:2444 的相似性搜尋法。這些算法的計(jì)算機(jī)化實(shí)施(例如，GAP、BESTFIT、FASTA及TFASTA)提供于WisconsinGenetics 軟件包 7.0 版(Genetics Computer Group, 575Science Dr., Madison, WI ) 序列變異如以上所討論，本發(fā)明提供了一種分離或重組的突變CTLA-4細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域多肽，該多肽包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列(a)與選自下組的一個(gè)多肽序列具有不超過6個(gè)氨基酸殘基(例如，不超過1、2、3、4、5、或6個(gè)氨基酸殘基)的差異，該組的構(gòu)成為:SEQ IDN0S:1至73，其中該突變CTLA-4E⑶多肽結(jié)合⑶80和/或⑶86，和/或二者之一的或兩者的一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域，和/或抑制一種免疫應(yīng)答。這種或這些氨基酸取代包括一種或多種保守性的氨基酸取代。作為一種非限制性的實(shí)例，本發(fā)明的一種多肽可具有一個(gè)多肽序列，該多肽序列與SEQ ID NO:1具有總共達(dá)到6個(gè)氨基酸的差異(它可以是氨基酸取代、缺失、和/或插入的組合，包括以上所說明的那些)。在一些情形下，這些取代中的無(wú)、一些、或所有是根據(jù)以下所定義的一個(gè)取代組中的取代。根據(jù)本發(fā)明的氨基酸取代可包括但不限于:一個(gè)或多個(gè)保守性氨基酸取代。一個(gè)保守性的氨基酸殘基取代典型地涉及將一種氨基酸殘基功能類型中的成員與屬于該相同功能類型的一個(gè)殘基進(jìn)行交換(相同的氨基酸殘基在計(jì)算功能同源性百分比時(shí)是認(rèn)為為功能上同源的或保守的)。提供功能類似性氨基酸的保守性取代表是本領(lǐng)域中所熟知。一個(gè)實(shí)例提供于表I，其中給 出了六種示例性的組，這些組含有彼此可被認(rèn)為為“保守性取代”的氨基酸。表1.保守的氨基酸殘基取代組
1丙氨酸(A) 甘氨酸(G) 絲氨酸(S) 蘇氨酸(T)
2天冬氨酸(D)谷氨酸(E)_3 天冬酸■胺(N)谷氨酸>驗(yàn)(Q)_
4精氨酸(R) 賴氨酸(K) 組氨酸(H)_
5異亮氨酸(I) 亮氨酸(L) 甲破氨酸(M)纈氨酸(V)
—6 苯丙氨酸(F) 齡氨酸(Y) 色氨酸(W)還考慮了氨基酸的其他取代基。例如，可以通過相似的功能或化學(xué)結(jié)構(gòu)或組成(例如，酸性的、堿性的、脂肪族的、芳香族的、含硫)對(duì)氨基酸進(jìn)行分組。例如，一個(gè)脂肪族的分組可包括:甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、纈氨酸(V)、亮氨酸(L)、異亮氨酸(I)。其他含有彼此間被認(rèn)為是保守性取代的氨基酸的組包括:芳香族的:苯丙氨酸(F)、酪氨酸(Y)、色氨酸(W)；含硫的:甲硫氨酸(M)、半胱氨酸(C);堿性的:精氨酸(R)、賴氨酸(K)、組氨酸(H);酸性的:天冬氨酸(D)、谷氨酸(E);非極性不帶電的殘基，半胱氨酸(C)、甲硫氨酸(M)、以及脯氨酸(P);親水性不帶電的殘基:絲氨酸(S)、蘇氨酸(T)、天冬酰胺(N)、以及谷氨酰胺(Q)。對(duì)于氨基酸的其他分組，還見 Creighton (1984) Proteins, W.H.Freeman and Company。在本文中的一個(gè)多肽序列列表，結(jié)合以上的取代基，提供了所有保守取代的多肽序列的表達(dá)列表。更多的保守性取代存在于以上說明的氨基酸殘基類別中，它還可以或可替代地可以是適當(dāng)?shù)?。更為保守的取代保守組包括:纈氨酸-亮氨酸-異亮氨酸、苯丙氨酸-酪氨酸、賴氨酸-精氨酸、丙氨酸-纈氨酸、以及天冬酰胺-谷氨酰胺。因此，例如，在一個(gè)特定方面中，本發(fā)明提供了一種分離或重組的多肽，該多肽包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列具有與 SEQ ID NO:1 (或 SEQ ID N0S:1 至 79、197 至 200、205 至 214、以及 219 至 222 中的任何一個(gè))至少 90、91、92、93、94、95、96、97、98、或 99% 的同一性，并且它與 SEQ ID NO:1 的序列具有相當(dāng)大(例如，至少50%、60%、70%、75%、80%、90%)的差異(如非全部)，這是由此類更為保守的氨基酸取代所造成的。也可以確定適當(dāng)?shù)念~外的氨基酸取代組，這是使用在例如，Creighton (1984)Proteins: Structure and Molecular Properties (2d Ed.1993),ff.H.Freeman andCompany中所說明的的原則進(jìn)行的。在一些方面,在一個(gè)氨基酸序列變體中至少33%、50%、60%、70%、或更多(例如，至少75%、80%、90%、95%、96%、97%或更多)的取代包括對(duì)本發(fā)明的一個(gè)多肽序列中一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基的取代，這些取代是用在與它們所取代的多肽序列的這些氨基酸殘基相同的功能同源性類別中的殘基(如通過任何適當(dāng)?shù)姆诸愊到y(tǒng)所確定的，如以上所說明的那些系統(tǒng))進(jìn)行的。本發(fā)明的一個(gè)多肽序列的保守性取代變體包括一個(gè)小百分比的(典型地小于該多肽序列的氨基酸的10%、9%、8%、7%、或6%，或更典型地小于該多肽序列的氨基酸的5%、4%、3%、2%、或1%)、用該相同保守性取代基中的一種保守選擇的氨基酸的取代。本發(fā)明包括多肽，這些多肽包括在本文中所說明的本發(fā)明的一個(gè)多肽序列的氨基酸變體。如以上所討論的，在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了分離或重組的多肽(例如，突變CTLA-4多肽，例如，突變CTLA-4EC D多肽)，這些多肽每個(gè)包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列具有與選自下組的至少一個(gè)多肽序列至少 75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、99.5%、或 100% 的序列同一性，該組的構(gòu)成為:SEQ ID N0S:1 至 73，其中該多肽結(jié)合CD80和/或CD86、或CD80和/或CD86的一個(gè)多肽片段(或二者之一的或兩者的一個(gè)E⑶)，和/或阻抑一種免疫反應(yīng)。此類多肽可通過一個(gè)或多個(gè)氨基酸缺失、添力口、或取代的差異(包括一個(gè)或多個(gè)保守性或非保守性的取代)發(fā)生變化，然而，其條件為這些多肽具有所說明的功能特性。在一個(gè)特定的方面中，本發(fā)明提供了多肽變體，這些多肽變體包括在本文中所說明的任何這種多肽(例如，包括一個(gè)多肽序列的多肽，該多肽序列選自下組:SEQ ID N0S:1至73)的保守性修飾變化。還如以上所討論，在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了分離或重組的融合蛋白(例如，突變CTLA-4-1g融合蛋白)，這些融合蛋白各自包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列具有與選自下組的至少一個(gè)多肽序列至少 75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、99.5%、或 100% 的序列同一性，該組的構(gòu)成為:SEQ ID N0S: 74 至 79,197至200,205至214、以及219至222，其中該融合蛋白結(jié)合CD80和/或CD86(和/或CD80_Ig和/或CD86-1g)，和/或阻抑一種免疫反應(yīng)。此類融合蛋白可通過一個(gè)或多個(gè)氨基酸缺失、添加、或取代(包括一個(gè)或多個(gè)保守性或非保守性的取代，)發(fā)生變化，然而，其條件為所述融合蛋白具有所說明的功能特性。在一個(gè)特定的方面，本發(fā)明提供了多肽變體，這些多肽變體包括在本文中所說明的任何這種融合蛋白(例，包括一個(gè)多肽序列的融合蛋白，該多肽序列選自下組:SEQ ID N0S:74至79、197至200、205至214、以及219至222)的保守性修飾
變化。<0}還提供了以上或本文其他地方所說明的本發(fā)明的任何分離或重組多肽的多肽變體，其中該多肽變體的氨基酸序列與該參比序列的對(duì)應(yīng)多肽序列具有一個(gè)或多個(gè)保守性氨基酸殘基取代的差異，盡管非保守性的取代有時(shí)是允許的或甚至是優(yōu)選的(此類非保守性取代的實(shí)例在本文中進(jìn)行進(jìn)一步討論)。例如，該多肽變體的序列可以與一個(gè)突變CTLA-4多肽序列通過將該突變CTLA-4ECD多肽序列中的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基取代成一個(gè)或多個(gè)具有類似重量的氨基酸殘基(即，一個(gè)殘基，該殘基具有與它替換的對(duì)應(yīng)多肽序列中的殘基的重量同源性)而發(fā)生變化。一種多肽的氨基酸殘基的重量(以及對(duì)應(yīng)的大小)可以顯著地影響該多肽的結(jié)構(gòu)。基于重量的保守性或同源性是基于一種非相同的對(duì)應(yīng)氨基酸是否與在本文中所說明的基于重量的矩陣之一(例如，BL0SUM50矩陣；PAM250矩陣)上的一個(gè)正評(píng)分相關(guān)聯(lián)。<。}與以上說明的功能性氨基酸類別相類似，可以將自然發(fā)生的氨基酸殘基分為基于重量的保守組(它們被分為“強(qiáng)”和“弱”保守組)。常用的八個(gè)基于重量的強(qiáng)保守組是SerThr Ala、Asn Glu Gln Lys> Asn His Gln Lys> Asn Asp Glu Gin、Gln His Arg Lys> MetHe Leu Val、Met He Leu Phe、His Tyr、以及Phe Tyr Trp?；谥亓康娜醣Ｊ匦园–ysSer Ala、Ala Thr Val、Ser Ala Gly、Ser Thr Asn Lys> Ser Thr Pro Ala、Ser Gly AsnAsp、Ser Asn Asp Glu Gln Lys> Asn Asp Glu Gln His Lys> Asn Glu Gln His Arg Lys>Phe Val Leu He Met、以及His Phe Tyr。一些版本的CLUSTAL W序列分析程序在比對(duì)的輸出中提供了基于重量的強(qiáng)保守性以及弱保守性組的分析，由此提供了一種用于確定基于重量的保守性的便利技術(shù)(例如，由SDSC所提供的CLUSTAL W，它典型地是與SDSC系統(tǒng)默認(rèn)設(shè)置一起使用的)。在一些方面中，在這種多肽變體中至少33%、50%、60%、70%、80%、或90%的取代包括其中在一個(gè)基于重量的保守性中的一個(gè)殘基替換了在該相同的基于重量的保守性組中的多肽序列的一個(gè)氨基酸殘基。換言之，就氨基酸殘基重量的特征而言，這個(gè)百分比的取代是保守性的。 —種多肽變體的序列可以不同于本發(fā)明的一種突變CTLA-4多肽之處在于一個(gè)或多個(gè)氨基酸的取代，其中一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基具有與該突變CTLA-4多肽的經(jīng)取代(原始)殘基相似的一種親水性分布特性(即，它們展示了相似的親水性)。一個(gè)親水性分布圖可以使用Kyte&Doolittle指數(shù)來(lái)確定，不同自然發(fā)生的氨基酸在該指數(shù)中的評(píng)分如下:I (+4.5)、V (+4.2)、L (+3.8)、F (+2.8)、C (+2.5)、Μ (+1.9) ；A (+1.8)、G (-0.4)、T (-0.7)、S (-0.8)、W (-0.9)、Y (-1.3)、P (-1.6)、H (-3.2) ；E (-3.5)、Q (-3.5)、D(-3.5)、N (-3.5)、K (-3.9)、以及 R (-4.5)(進(jìn)一步的討論見，如，美國(guó)專利號(hào) 4，554，101以及 Kyte&Doolittle、J.Molec.Biol.157:105-32 (1982))。在該變體多肽序列中的至少75%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或 100% 的氨基酸殘基(這些氨基酸殘基不同于在本文中所披露的同一性或功能性同源突變CTLA-4多肽序列(“最相關(guān)的同源物”)中的對(duì)應(yīng)殘基，該同源物可以是選自SEQ ID N0S:1至73中的任何一個(gè))，相對(duì)于在該最相關(guān)的同源物中對(duì)應(yīng)位置上的非同一性氨基酸殘基，展示了小于+/-2的親水性變化，包括小于+/-1的親水性變化以及小于+/-0.5的親水性變化。該變體多肽相對(duì)于它的選自SEQ ID NOS:1至73的組的最相關(guān)同源物，可展示了小于約150、小于約100、和/或小于約50 (例如，小于約30,20或10)的總親水性變化。
保留類似或相同親水性的典型氨基酸取代的實(shí)例包括精氨酸-賴氨酸取代、谷氨酸酯-天冬氨酸酯取代、絲氨酸-蘇氨酸取代、谷氨酰胺-天冬酰胺取代、以及纈氨酸-亮氨酸-異亮氨酸取代。算法及軟件(如，可通過SDSC獲得的GREASE程序)提供了用于快速評(píng)估一個(gè)氨基酸序列的親水性分布圖的便利方式。由于在一個(gè)多肽變體的序列中一個(gè)實(shí)質(zhì)比例(例如，至少約33%)(若非大部分)(至少50%)或?qū)⒔?例如，大約65、80、90、95、96、97、98、99%)的氨基酸取代通常將會(huì)與它們?cè)谠?參比)多肽序列中替換的氨基酸殘基具有一個(gè)相似的親水性分?jǐn)?shù)，該多肽變體的序列預(yù)期會(huì)展示出一個(gè)與該多肽序列類似的GREASE程序輸出。例如，在一個(gè)特定方面中，可預(yù)期SEQ ID NO:61的一個(gè)多肽變體會(huì)有的一個(gè)GREASE程序(或類似的程序)輸出，該輸出與通過輸入SEQ ID N0:61的多肽所獲得的GREASE輸出相似性大于與通過使用一種WT CTLA-4多肽(如，hCTLA-4)所獲得的輸出，這可通過將該試驗(yàn)變體序列與SEQ ID NO:1經(jīng)受該程序而提供的圖形(例如，圖形重迭/比對(duì))和/或數(shù)字輸出的視覺檢查或比較來(lái)確定。就功能同源性、重量同源性、以及親水性特征而言，氨基酸殘基的保守性也可應(yīng)用到由本發(fā)明所提供的其他多肽序列變體上，這些變體包括但不限于:例如，一個(gè)多肽序列的多肽序列變體，該多肽序列選自下組，其構(gòu)成為:SEQ ID勵(lì)3:1至79、197至200、205至214、以及219至222。在一個(gè)特定的方面中，本發(fā)明包括至少一個(gè)這種多肽變體，該多肽變體包括一個(gè)氨基酸序列，該氨基酸序列與選自下組的一個(gè)重組多肽序列不同，該組為:SEQ ID N0S:1至79、197至200、205至214、以及219至222，其中該變體的氨基酸序列具有至少一個(gè)這種氨基酸殘基取代，該氨基酸殘基取代是根據(jù)以上所討論的基于重量的保守性或同源性或相似的親水性分布圖而選擇的。以上說明的此類多肽變體典型地具有結(jié)合CD80和/或CD86的能力，和/或阻抑至少一種類型的免疫反應(yīng)的能力，如以上以及以下在實(shí)例中進(jìn)一步詳細(xì)說明。信號(hào)肽序列本發(fā)明的多肽也可進(jìn)一步包括任何適當(dāng)數(shù)目以及類型的額外氨基酸序列，如，一個(gè)或多個(gè)肽片段。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的這種多肽進(jìn)一步包括一種信號(hào)肽。總體上，當(dāng)該重組多肽在動(dòng)物細(xì)胞中表達(dá)時(shí)，該信號(hào)肽指導(dǎo)該重組多肽到達(dá)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)?？梢园ㄖ笇?dǎo)該多肽(當(dāng)在細(xì)胞中表達(dá)時(shí))的至少一部分的細(xì)胞器運(yùn)輸和/或分泌的信號(hào)肽序列。此類序列典型地存在于該多肽的不成熟(即，未經(jīng)完全加工)形式中，并且隨后通過細(xì)胞的蛋白酶去除/降解，以達(dá)到該蛋白的成熟形式。例如，本發(fā)明的一個(gè)突變CTLA-4多肽或融合蛋白可包括任何適當(dāng)?shù)男盘?hào)序列或多個(gè)信號(hào)序列的組合，這些序列指導(dǎo)該多肽到達(dá)細(xì)胞內(nèi)的區(qū)室中，如指導(dǎo)該多肽被運(yùn)輸(例如，移位)進(jìn)入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)或分泌途徑(例如，ER、高基氏體、以及其他分泌相關(guān)的細(xì)胞器和細(xì)胞區(qū)室)(例如，這樣使得該蛋白通過其進(jìn)行加工或從其中釋放)，細(xì)胞核，和/或它指導(dǎo)有待從該細(xì)胞中分泌的、在細(xì)胞膜中移位的、或靶向一個(gè)第二細(xì)胞(除了分泌該蛋白的細(xì)胞)。在此方面中，該多肽可包括一個(gè)細(xì)胞內(nèi)靶向序列(或“分選信號(hào)”)，它指到該多肽到達(dá)一個(gè)或多個(gè)內(nèi)涵體和/或溶酶體區(qū)室或其他富含MHC II的區(qū)室，以促進(jìn)⑶4+和/或⑶8+T細(xì)胞呈遞和響應(yīng)，如，衍生自溶酶體相關(guān)膜蛋白I的一種溶酶體/內(nèi)涵體革巴向的分選信號(hào)(例如，LAMP-1-見,如，Wu et al.Proc.Natl.Acad.Sc1.USA92:1161-75 (1995)以及 Ravipraskash et al., Virology290:74-82 (2001))、它的一個(gè)部分或同源(見，如，美國(guó)專利號(hào)5，633，234)、或其他適當(dāng)?shù)娜苊阁w、內(nèi)涵體和/或靶向ER的序列(見，如，美國(guó)專利號(hào)6，248，565 )。在一些方面中，可能希望該細(xì)胞內(nèi)靶向的序列在接近或鄰近在該多肽中的一個(gè)或多個(gè)經(jīng)證實(shí)/識(shí)別的表位序列(它們可通過本領(lǐng)域內(nèi)已知的技術(shù)進(jìn)行識(shí)別)，由此增加了包括這種或這些表位的多肽片段的T細(xì)胞呈遞的可能性。此類多肽可以從通過一個(gè)或多個(gè)核苷酸轉(zhuǎn)移載體而遞送至宿主細(xì)胞中的一個(gè)分離的、重組的、或合成的DNA或RNA進(jìn)行表達(dá)，這些載體包括例如，這些基因轉(zhuǎn)移載體中的一個(gè)或多個(gè)，如在本文中進(jìn)一步說明。該多肽可包括一種信號(hào)序列，當(dāng)該多肽表達(dá)于哺乳動(dòng)物細(xì)胞中時(shí)該序列指導(dǎo)該多肽到達(dá)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(ER)(例如，協(xié)助了該多肽的ER移位)。該多肽可包括任何適當(dāng)?shù)陌邢駿R的序列。多個(gè)靶向ER的序列是本領(lǐng)域所已知。此類信號(hào)序列的實(shí)例說明于美國(guó)專利號(hào)5，846，540。經(jīng)常采用的ER/分泌信號(hào)序列包括酵母α因子信號(hào)序列，以及哺乳動(dòng)物病毒信號(hào)序列，如，皰疫病毒gD信號(hào)序列。大腸桿菌生產(chǎn)的不例性信號(hào)肽包括大腸桿菌的STII或Ipp信號(hào)序列。信號(hào)序列的其他實(shí)例說明于例如，美國(guó)專利號(hào)4，690，898、5, 284, 768,5, 580, 758,5,652, 139、以及5，932，445。適當(dāng)?shù)男盘?hào)序列可使用本領(lǐng)域中已知的技術(shù)來(lái)識(shí)別。例如，可使用SignalP程序(說明于,例如，Nielsen et al.(1997)Protein EngineeringlO: 1-6),它可在指定為 cbs.dtu.dk/services/SignalP 的萬(wàn)維網(wǎng)網(wǎng)址通過生物序列分析中心(Center for Biological Sequence Analysis)、或通過可識(shí)別信號(hào)序列樣結(jié)構(gòu)域的類似序列分析軟件而公開地獲得。在Nielsen et al., ProteinEng.10(1):1-6 (1997)提供了用于識(shí)別適當(dāng)信號(hào)肽的相關(guān)技術(shù)?？梢葬槍?duì)常與信號(hào)序列相關(guān)聯(lián)的特征來(lái)對(duì)序列進(jìn)行手動(dòng)分析 ，如說明于，例如，歐洲專利申請(qǐng)(Appn)號(hào)0621337，Zheng and Nicchitta(1999)J.Biol.Chem.274(51):36623-30,以及 Ng et al.(1996)J.Cell Biol.134(2):269-78。其他方面本發(fā)明的任何多肽(包括本發(fā)明的任何融合蛋白)可作為一個(gè)較大多肽序列的部分而存在，如，在加入一個(gè)或多個(gè)結(jié)構(gòu)域或序列用于穩(wěn)定或檢測(cè)或純化該多肽時(shí)發(fā)生。此類結(jié)構(gòu)域或序列可共價(jià)融合到本發(fā)明的多肽上，如本領(lǐng)域中的普通技術(shù)人員將容易理解并可以建構(gòu)的。一個(gè)多肽純化序列可包括例如，一個(gè)表位標(biāo)簽、一個(gè)FLAG標(biāo)簽、一個(gè)聚組氨酸序列、一個(gè)GST融合物、或在本領(lǐng)域內(nèi)已知的任何其他檢測(cè)/純化亞序列或“標(biāo)簽”。這些額外的結(jié)構(gòu)域或亞序列對(duì)于本發(fā)明的多肽的活性具有極少或沒有作用，或者可通過合成后的加工步驟去除，如，通過用一種蛋白酶的處理、一種內(nèi)含肽的包入、或類似加工。本發(fā)明的任何多肽(包括本發(fā)明的任何融合蛋白)也可包括一個(gè)或多個(gè)經(jīng)修飾的氨基酸。該經(jīng)修飾的氨基酸可以是例如，一種糖基化的氨基酸、一種聚乙二醇化的氨基酸、一種法尼基化(farnesylated)的氨基酸、一種乙酰基化的氨基酸、一種生物素?；陌被?、一種偶聯(lián)著脂類部分的氨基酸、和/或偶聯(lián)著一種有機(jī)衍化劑的氨基酸。經(jīng)修飾氨基酸的存在在以下方面可以是有優(yōu)勢(shì)的，例如，(a)增加多肽的血清半衰期和/或功能性體內(nèi)半衰期，(b)降低多肽的抗原性或免疫原性，(C)增加多肽的貯存穩(wěn)定性，(d)增加生物利用率，(e)降低效應(yīng)子功能，和/或(f)在本發(fā)明的二個(gè)或多個(gè)分子之間(如在本發(fā)明的二個(gè)或多個(gè)的融合蛋白二聚體之間)降低或抑制的不希望的自體結(jié)合(例如，聚集體形成)。對(duì)一種或多種氨基酸進(jìn)行修飾，例如，在重組產(chǎn)生的過程中與翻譯同時(shí)進(jìn)行或在翻譯之后進(jìn)行(例如，在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中表達(dá)過程中在N-X-S/T基序上的N-連接的糖基化作用)，或通過合成手段進(jìn)行修飾。在本文中所說明的本發(fā)明的多肽(包括本發(fā)明的融合蛋白)能夠以不同的方式進(jìn)行進(jìn)一步修飾，例如，通過翻譯后的修飾和/或合成修飾或變化。例如，本發(fā)明的多肽或融合蛋白可被適當(dāng)?shù)靥腔?，典型地?jīng)由在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的表達(dá)。例如，在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了糖基化的多肽，這些多肽可結(jié)合CD86和/或CDSOJP /或具有阻抑一種免疫反應(yīng)的能力(例如，T細(xì)胞的增殖或活化)，如在本文的其他地方所說明，其中每個(gè)所述糖基化的多肽包括一個(gè)多肽序列，該多肽序列具有與選自下組的一個(gè)序列至少92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或 100% 的同一性，該組的構(gòu)成為:SEQ ID N0S:1 至 79、197 至 200、205 至214、以及 219 至 222?？梢允贡景l(fā)明的多肽經(jīng)受任何數(shù)目的額外適當(dāng)形式的翻譯后的和/或合成的修飾或變化。例如，本發(fā)明提供了本發(fā)明的多肽的蛋白模擬物。肽模擬物說明于例如，美國(guó)專利號(hào)5，668，110以及其中所引述的參考文獻(xiàn)中。在另一個(gè)方面，本發(fā)明的一種多肽或融合蛋白可通過將保護(hù)性基團(tuán)加至該多肽融合蛋白的一個(gè)或多個(gè)氨基酸的側(cè)鏈上而進(jìn)行修飾。此類保護(hù)性基團(tuán)可促建該多肽或融合蛋白運(yùn)輸通過一個(gè)或多個(gè)膜(若希望)，或通過某個(gè)或某些組織，例如，通過降低該多肽或融合蛋白的親水性或增加其親脂性。適當(dāng)?shù)谋Ｗo(hù)性基團(tuán)的實(shí)例包括酯保護(hù)性基團(tuán)、氨基保護(hù)性基團(tuán)、?；Ｗo(hù)性基團(tuán)、以及羧酸保護(hù)性基團(tuán)，它們?cè)诒绢I(lǐng)域內(nèi)是已知的(見，如，美國(guó)專利號(hào)6，121，236)。本發(fā)明的合成融合蛋白可以采用任何適當(dāng)?shù)男问?。例如，該融合蛋白能夠由其自然發(fā)生的構(gòu)型經(jīng)結(jié)構(gòu)修飾而形成一種環(huán)肽或其他經(jīng)結(jié)構(gòu)修飾的肽。本發(fā)明的多肽也可連接到一個(gè)或多個(gè)非蛋白性的聚合物上，典型地是一種親水性合成聚合物，例如，聚乙二醇(PEG)、聚丙二醇、或聚氧化烯，使用了本領(lǐng)域內(nèi)所熟知的技術(shù)，如，說明于例如，美國(guó)專利號(hào) 4，179，337,4, 301，144,4, 496，689,4, 640，835,4, 670，417、以及4，791，192中，或一種類似的聚合物，如，聚乙烯醇、或聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。本發(fā)明包括偶聯(lián)物，這些偶聯(lián)物包括本發(fā)明的至少一種多肽(例如，突變CTLA-4E⑶多肽、二聚體或單體突變CTLA-4-1g、多聚體突變CTLA-4E⑶多肽、多聚體突變CTLA-4-1g)以及一種非多肽部分。術(shù)語(yǔ)“偶聯(lián)物”(或可交換使用的“偶聯(lián)的多肽”)旨在是指一種異源(在復(fù)合物或嵌合體的意義上)分子，該分子是由一個(gè)或多個(gè)多肽與一個(gè)或多個(gè)非多肽部分的共價(jià)附連而形成。術(shù)語(yǔ)“共價(jià)附連”意思指該多肽以及該非多肽部分彼此直接地共價(jià)結(jié)合，或通過一個(gè)或多個(gè)干擾部分或(如，一個(gè)橋、間隔基、或一個(gè)或多個(gè)連接體部分)，使用存在于該多肽中的一個(gè)附連基團(tuán)而間接地共價(jià)結(jié)合。優(yōu)選地，該偶聯(lián)物在相關(guān)的濃度及條件下是可溶的，即，可溶于生理液體中，如血液。本發(fā)明的偶聯(lián)的多肽的實(shí)例包括糖基化和/或聚乙二醇化的多肽。術(shù)語(yǔ)“未偶聯(lián)的多肽”可用于說明該偶聯(lián)物的多肽部分。這種偶聯(lián)物典型地結(jié)合⑶80 (例如，h⑶80)和/或⑶86 (例如，h⑶86)、和/或二者之一的或兩者的一個(gè)細(xì)胞外結(jié) 構(gòu)域(包括h⑶80-1g和/或h⑶86-1g)，和/或具有抑制一種免疫反應(yīng)的能力。這種免疫反應(yīng)可包括但不限于，例如，T細(xì)胞的活化或增殖、細(xì)胞因子的合成/產(chǎn)生、活化標(biāo)記的誘導(dǎo)、炎癥分子的產(chǎn)生、炎癥、抗膠原Ab的產(chǎn)生和/或T細(xì)胞依賴的Ab應(yīng)答。示例性的多肽包括具有與選自下組的一個(gè)序列至少95%、96%、97%、98%、99%、或100%同一性的那些，該組的構(gòu)成為:SEQ ID NOS:1至79、197至200、205至214、以及219至222。術(shù)語(yǔ)“非多肽部分”旨在是指一個(gè)分子，該分子可與本發(fā)明的一個(gè)多肽的一個(gè)附連基團(tuán)相偶聯(lián)。這種分子的優(yōu)選的實(shí)例包括聚合物分子、糖部分、親脂性化合物、或有機(jī)衍化齊U。當(dāng)用于如在本文中所說明的一種偶聯(lián)物的背景中時(shí)，應(yīng)當(dāng)理解的是，該非多肽部分是通過該多肽的一個(gè)附連基團(tuán)而與該偶聯(lián)物的多肽部分連接的。術(shù)語(yǔ)“聚合物分子”是定義為一個(gè)分子，它是通過二個(gè)或多個(gè)單體的共價(jià)連接體所形成的，其中這些單體中沒有一個(gè)是氨基酸殘基，除了其中該聚合物是人類白蛋白或另一中大量的血漿蛋白。術(shù)語(yǔ)“聚合物”可以與術(shù)語(yǔ)“聚合物分子”交換使用。一個(gè)N-糖基化位點(diǎn)具有序列N-X-S/T/C，其中X是除脯氨酸之外的任何氨基酸殘基，N是天冬酰胺，并且S/T/C是絲氨酸、蘇氨酸、或半胱氨酸，優(yōu)選地是絲氨酸或蘇氨酸，并且最優(yōu)選地是蘇氨酸。一個(gè)“O-糖基化位點(diǎn)”包括一個(gè)絲氨酸或蘇氨酸殘基的OH-基團(tuán)。術(shù)語(yǔ)“附連基團(tuán)”旨 在是指該多肽的一個(gè)氨基酸殘基基團(tuán)，該基團(tuán)能夠偶合到該相關(guān)的非多肽部分(如，一個(gè)聚合物分子或一個(gè)糖部分)上。以下在表2中提供了有用的附連基團(tuán)的非限制性實(shí)例以及一些對(duì)應(yīng)的非多肽部分。表2.有用的附連基團(tuán)以及對(duì)應(yīng)非多肽部分的實(shí)例
權(quán)利要求
1.一種分離或重組的融合蛋白二聚體，該融合蛋白二聚體包括經(jīng)由至少一個(gè)二硫鍵連接的兩個(gè)單體融合蛋白，該二硫鍵在每個(gè)單體突變?nèi)诤系鞍字写嬖诘膬蓚€(gè)半胱氨酸殘基之間形成，其中每個(gè)單體融合蛋白包括:(a) —種多肽，該多肽包括一種多肽序列，該多肽序列與SEQ ID N0:50具有不超過6個(gè)氨基酸殘基的差異且在位置24、30、32、41、50、54、55、56、64、65、70、85、104和106上包括的殘基與在SEQ ID NO:50中對(duì)應(yīng)位置上的氨基酸殘基相同，以及(b) —種Ig Fe多肽，并且其中該融合蛋白二聚體結(jié)合人類CD80或人類CD86或二者之一的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域且與一種LEA29Y-1g融合蛋白二聚體相比具有阻抑一種免疫應(yīng)答的更大的能力，其中該LEA29Y-1g融合蛋白二聚體包括兩個(gè)單體LEA29Y-1g融合蛋白，各自包括SEQ IDNO:166的多肽序列。
2.如權(quán)利要求1所述的融合蛋白二聚體，其中所述IgFe多肽為IgG2Fc多肽。
3.如權(quán)利要求1所述的融合蛋白二聚體，其中所述多肽包括在SEQIDN0:50中所示的多肽序列。
4.如權(quán)利要求1所述的融合蛋白二聚體，其中每個(gè)單體融合蛋白包括在SEQIDNO: 199或213中所示的多肽序列。
5.—種分離或重組的核酸,該核酸包括一個(gè)多核苷酸序列，該多核苷酸序列編碼了如權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述 的融合蛋白二聚體的單體融合蛋白。
6.—種載體,該載體包括如權(quán)利要求5所述的核酸。
7.一種分離或重組的宿主細(xì)胞，該宿主細(xì)胞包括如權(quán)利要求5所述的核酸和/或如權(quán)利要求6所述的載體。
8.—種藥物組合物，包括一種藥學(xué)上可接受的賦形劑或藥學(xué)上可接受的載體，以及如權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述的融合蛋白二聚體。
9.如權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述的融合蛋白二聚體在制造藥物中的用途，該藥物用于(i)預(yù)防性或治療性治療從而在一個(gè)哺乳動(dòng)物體內(nèi)抑制或阻抑一種免疫應(yīng)答；(ii)治療一種免疫系統(tǒng)疾病或紊亂；或(iii)在一個(gè)哺乳動(dòng)物體內(nèi)治療組織或器官的移植體的排斥。
10.生產(chǎn)如權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述的融合蛋白二聚體的一種方法，包括在一種培養(yǎng)基中培養(yǎng)如權(quán)利要求7所述的宿主細(xì)胞并且回收由該細(xì)胞所表達(dá)的該融合蛋白二聚體。
全文摘要
本發(fā)明涉及免疫抑制性多肽與核酸。本發(fā)明提供了免疫抑制性多肽以及對(duì)此類多肽進(jìn)行編碼的核酸。在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了突變CTLA-4多肽以及對(duì)突變CTLA-4多肽進(jìn)行編碼的核酸。還提供了組合物以及使用此類多肽連同核酸的方法。
文檔編號(hào)C07K19/00GK103172750SQ20131005607
公開日2013年6月26日 申請(qǐng)日期2008年10月15日 優(yōu)先權(quán)日2007年11月1日
發(fā)明者埃里克.E.卡勒, 馬登.M.佩鄧加特, 史蒂文.H.巴斯, 瑪格麗特.奈格伯斯, 約哈.龐諾南, 史蒂文.J.查平, 斯里達(dá).維斯瓦納撒恩, 布倫特.R.拉森 申請(qǐng)人:珀西德治療有限責(zé)任公司