專利名稱：一種從杜仲葉快速純化桃葉珊瑚甙的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于天然產(chǎn)物加工領(lǐng)域，涉及了一種杜仲葉桃葉珊瑚甙的提取純化方法， 更具體地說(shuō)是涉及了一種從杜仲葉中提取并純化高純度桃葉珊瑚甙的方法。
背景技術(shù)：
桃葉珊瑚甙是一種環(huán)烯醚萜甙類(lèi)化合物，為白色粉末。由于C4去甲環(huán)烯醚萜甙結(jié)構(gòu)不太穩(wěn)定，桃葉珊瑚甙相對(duì)穩(wěn)定性較差。桃葉珊瑚甙吸濕性不是很強(qiáng)，在潮濕的情況下很不穩(wěn)定，容易變色，而干燥品相對(duì)較穩(wěn)定。光線對(duì)桃葉珊瑚甙的影響較小，而溫度、氧化劑的影響較大。堿性物質(zhì)對(duì)桃葉珊瑚甙的影響比酸性物質(zhì)大得多。桃葉珊瑚甙的甙元及其多聚體具有抗菌作用，是一種抗菌素，其抗炎、抗菌性能與當(dāng)藥苦甙相同。桃葉珊瑚甙本身不具抗病毒作用，但當(dāng)它與葡萄糖甙酶一起預(yù)培養(yǎng)后會(huì)產(chǎn)生明顯的抗病毒作用?？纱碳じ苯桓猩窠?jīng)中樞、加速尿酸轉(zhuǎn)移和排出，利尿作用明顯。能促進(jìn)干細(xì)胞再生，明顯抑制乙型肝炎病毒D N A的復(fù)制。另外桃葉珊瑚甙具有鎮(zhèn)痛、清濕熱、 抗腫瘤等作用。桃葉珊瑚甙是杜仲中有效活性成分之一，杜仲皮、葉和種子中均含有此成分，種子中含量可高達(dá)19% 23%，是杜仲種子的苦味素物質(zhì)之一。在杜仲皮和葉中桃葉珊瑚甙含量有較大區(qū)別，杜仲葉比杜仲皮含量高，由于環(huán)烯醚雙鍵性質(zhì)活潑，甙易被酶和酸水解，故甙在鮮品和干品中的含量差別也很大。溫度對(duì)桃葉珊瑚甙抗氧化活性的影響很大，桃葉珊瑚甙抗氧化活性保存率隨著加熱時(shí)間的延長(zhǎng)而出現(xiàn)不同程度的下降趨勢(shì)，溫度愈高保存率下降愈快。在室溫條件下4h 內(nèi)桃葉珊瑚甙是穩(wěn)定的；在高溫條件下連續(xù)加熱處理8h，桃葉珊瑚甙抗氧化活性損失高達(dá) 70%。這可能因?yàn)樘胰~珊瑚甙本身是熱敏性物質(zhì)，高溫處理會(huì)使其發(fā)生氧化分解，產(chǎn)生黑色物質(zhì)。100°C處理的桃葉珊瑚甙溶液在第I個(gè)小時(shí)內(nèi)即已顏色變深。桃葉珊瑚甙在杜仲種子含量最高，由于杜仲種子產(chǎn)量少，另外杜仲種子目前主要用于熱榨提取杜仲油，雖有文獻(xiàn)報(bào)道從杜仲籽柏中提取桃葉珊瑚甙，必須采用冷榨或超臨界CO2提取杜仲油后得到的杜仲籽柏，才能用于提取桃葉珊瑚甙，但是會(huì)影響杜仲油原有風(fēng)味。而且目前都是采用制備色譜法進(jìn)行制備高純度桃葉珊瑚甙，嚴(yán)重影響了桃葉珊瑚甙的規(guī)?；a(chǎn)。目前杜仲葉主要處理方法是采用陰干或曬干，對(duì)其桃葉珊瑚甙含量具有很大影響，在干燥過(guò)程中桃葉珊瑚甙發(fā)生氧化分解，嚴(yán)重影響了桃葉珊瑚甙的收率。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于針對(duì)目前杜仲種子資源不足，嚴(yán)重影響了桃葉珊瑚甙的規(guī)模化生產(chǎn)，而采用干燥過(guò)后杜仲葉桃葉珊瑚甙發(fā)生氧化分解造成收率低下，公開(kāi)一種利用萃取、 結(jié)晶與重結(jié)晶方法從杜仲葉中規(guī)?；a(chǎn)桃葉珊瑚甙，有效解決杜仲種子資源不足問(wèn)題， 又能提高杜仲葉中桃葉珊瑚甙收率。因此，本發(fā)明提供一種從杜仲葉中快速純化桃葉珊瑚甙的方法，其具體步驟如下(I)將新鮮杜仲葉采用茶葉滾筒殺青機(jī)進(jìn)行殺青2-3分鐘，立即進(jìn)行絞碎；(2)將杜仲葉與80%乙醇溶液進(jìn)行混合提取，加熱至40°C提取90min ；(3)過(guò)濾除渣后濾液中加入適量抗氧化劑在50°C進(jìn)行真空濃縮至原有體積的 1/10-1/15 ；(4)將濃縮液用2倍體積的石油醚進(jìn)行萃取，取水相；(5)將水相用KLFC-150大孔樹(shù)脂吸附，并用乙醇溶液進(jìn)行洗脫，得到洗脫液；(6)將洗脫液再經(jīng)濃縮至原有體積的1/3-1/8，室溫過(guò)夜結(jié)晶得到桃葉珊瑚甙粗品;(7)加入70%乙醇進(jìn)行加熱溶解，然后加入水調(diào)節(jié)乙醇終濃度為30-40%，室溫過(guò)
夜再結(jié)晶，得桃葉珊瑚甙純品。在一個(gè)實(shí)施方案中，步驟2中所述加入80%乙醇溶液的量，按體積(V)/杜仲葉重量(kg)比為 2-4 I。在一個(gè)實(shí)施方案中，步驟3中所述過(guò)濾過(guò)程是紗布過(guò)濾、陶瓷膜過(guò)濾，其中，優(yōu)選是三層紗布過(guò)濾2次、陶瓷膜過(guò)濾I次；加入適量抗氧化劑是抗壞血酸，濾液體積與加入抗壞血酸的重量比(V/g)為25-50 8。在一個(gè)實(shí)施方案中，步驟5中所述的乙醇溶液是用pH6. 5左右的水與乙醇進(jìn)行配制，其濃度為50%的乙醇溶液。在一個(gè)實(shí)施方案中，步驟7的乙醇溶液的終濃度為35%。技術(shù)效果I、本發(fā)明方法中所用的原料、設(shè)備均為常見(jiàn)的普通原料、設(shè)備，避免了工業(yè)化生產(chǎn)過(guò)程中對(duì)于昂貴原材料、儀器的依賴，大大地降低了生產(chǎn)成本。2、杜仲葉產(chǎn)量高、價(jià)格低，來(lái)源方便，后續(xù)資源有保障。使用杜仲葉作為杜仲皮、杜仲籽的替代物，既大大提高了杜仲葉的利用效率，提高杜仲葉的附加值，又?jǐn)[脫了對(duì)于杜仲籽的依賴，完全緩解了市場(chǎng)對(duì)杜仲籽的大量需求，同時(shí)又能對(duì)廢棄杜仲葉充分利用。3、本發(fā)明方法操作簡(jiǎn)單，僅使用萃取、樹(shù)脂層析過(guò)濾、結(jié)晶再結(jié)晶技術(shù)，也不需要精密儀器或自動(dòng)化設(shè)備，可在杜仲資源豐富的鄉(xiāng)鎮(zhèn)企業(yè)進(jìn)行生產(chǎn)，這極大地降低了桃葉珊瑚甙的生產(chǎn)成本，簡(jiǎn)化了生產(chǎn)過(guò)程，確保規(guī)?；a(chǎn)桃葉珊瑚甙。4、本發(fā)明所用的試劑均為無(wú)毒、廉價(jià)、量產(chǎn)的化學(xué)試劑，整個(gè)過(guò)程中可利用成熟的試劑回收的常規(guī)技術(shù)，這極大地降低了向環(huán)境排放廢棄物的風(fēng)險(xiǎn)。


圖I :從杜仲葉中提取桃葉珊瑚甙的純度HPLC曲線圖，其中縱坐標(biāo)表示峰面積，橫坐標(biāo)表示分離時(shí)間。圖2 :桃葉珊瑚甙標(biāo)準(zhǔn)品的HPLC曲線圖，其中縱坐標(biāo)表示峰面積，橫坐標(biāo)表示分離時(shí)間。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合附圖，用本發(fā)明的實(shí)施實(shí)例來(lái)進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限制本發(fā)明。實(shí)施例I將鮮杜仲葉采用茶葉滾筒殺青機(jī)(岳陽(yáng)市農(nóng)業(yè)機(jī)械化研究所生產(chǎn)茶葉滾筒殺青機(jī)6CST-80)進(jìn)行殺青并絞碎，稱取IOOkg杜仲葉加入80%乙醇溶液400L，加熱至40°C提取 90min后；三層紗布過(guò)濾2次、陶瓷膜過(guò)濾I次得濾液，加入IOOg抗壞血酸在50°C進(jìn)行真空濃縮至40L ;將濃縮液用80L石油醚進(jìn)行萃取，取水相；上KLFC-150大孔樹(shù)脂柱子吸附，并用50%乙醇溶液進(jìn)行洗脫，得到洗脫液80L ;將洗脫液再經(jīng)濃縮至15L，室溫過(guò)夜結(jié)晶得到桃葉珊瑚甙粗品I. 76kg ;加入70%乙醇溶液2. 5L進(jìn)行攪拌加熱溶解，然后加入水調(diào)節(jié)乙醇終濃度為35%，室溫過(guò)夜再結(jié)晶，得桃葉珊瑚甙純品O. 81kg。檢測(cè)設(shè)備為AgilentllOO高效液相色譜儀，色譜柱為Hypersil ODS(150mmX4. 6mm，5l·!)，檢測(cè)條件流動(dòng)相為甲醇1%醋酸水溶液(88 12，￥八)、檢測(cè)波長(zhǎng)為21011111、流速0.5111171^11、柱溫301、進(jìn)樣量為2(^1^ 檢測(cè)結(jié)晶樣品的含量為98. 82%的桃葉珊瑚甙，檢測(cè)結(jié)果如圖I所示。實(shí)施例2將鮮杜仲葉采用茶葉滾筒殺青機(jī)(岳陽(yáng)市農(nóng)業(yè)機(jī)械化研究所生產(chǎn)茶葉滾筒殺青機(jī)6CST-80)進(jìn)行殺青并絞碎，稱取200kg杜仲葉加入80%乙醇溶液800L，加熱至40°C提取90min后；三層紗布過(guò)濾2次、陶瓷膜過(guò)濾I次得濾液，加入120g抗壞血酸在50°C進(jìn)行真空濃縮至55L ;將濃縮液用IlOL石油醚進(jìn)行萃取，取水相；iKLFC-150大孔樹(shù)脂吸附，并用50%乙醇溶液進(jìn)行洗脫，得到洗脫液120L ;將洗脫液再經(jīng)濃縮至25L，室溫過(guò)夜結(jié)晶得到桃葉珊瑚甙粗品3. 27kg ;加入70%乙醇溶液5L進(jìn)行攪拌加熱溶解，然后加入水調(diào)節(jié)乙醇終濃度為35%，室溫過(guò)夜再結(jié)晶，得桃葉珊瑚甙純品I. 52kg，并按實(shí)例I進(jìn)行檢測(cè)，樣品中桃葉珊瑚甙的含量為99. 04%。實(shí)施例3將鮮杜仲葉采用茶葉滾筒殺青機(jī)(岳陽(yáng)市農(nóng)業(yè)機(jī)械化研究所生產(chǎn)茶葉滾筒殺青機(jī)6CST-80)進(jìn)行殺青并絞碎，稱取300kg杜仲葉加入80%乙醇溶液1000L，加熱至40°C提取90min后；三層紗布過(guò)濾2次、陶瓷膜過(guò)濾I次得濾液，加入120g抗壞血酸在50°C進(jìn)行真空濃縮至70L ;將濃縮液用140L石油醚進(jìn)行萃取，取水相；iKLFC-150大孔樹(shù)脂吸附，并用50%乙醇溶液進(jìn)行洗脫，得到洗脫液140L ;將洗脫液再經(jīng)濃縮至30L，室溫過(guò)夜結(jié)晶得到桃葉珊瑚甙粗品5. 38kg ;加入70%乙醇溶液6L進(jìn)行攪拌加熱溶解，然后加入水調(diào)節(jié)乙醇終濃度為35%，室溫過(guò)夜再結(jié)晶，得桃葉珊瑚甙純品2. 47kg，并按實(shí)例I進(jìn)行檢測(cè)，樣品中桃葉珊瑚甙的含量為98. 79%。
權(quán)利要求
1.本發(fā)明提供一種從杜仲葉中快速純化桃葉珊瑚甙的方法，步驟包括(1)將新鮮杜仲葉采用茶葉滾筒殺青機(jī)進(jìn)行殺青2—3分鐘，立即進(jìn)行絞碎；(2)將杜仲葉與80%乙醇溶液進(jìn)行混合提取，加熱至40°C提取90min；(3)過(guò)濾除渣后濾液中加入適量抗氧化劑在50°C進(jìn)行真空濃縮至原有體積的 1/10-1/15 ；(4)將濃縮液用2倍體積的石油醚進(jìn)行萃取，取水相；(5)將水相用KLFC- 150大孔樹(shù)脂吸附，并用乙醇溶液進(jìn)行洗脫，得到洗脫液；(6)將洗脫液再經(jīng)濃縮至原有體積的1/3-1/8，室溫過(guò)夜結(jié)晶得到桃葉珊瑚甙粗品；(7)加入70%乙醇進(jìn)行加熱溶解，然后加入水調(diào)節(jié)乙醇終濃度為30-40%，室溫過(guò)夜再結(jié)晶，得桃葉珊瑚甙純品。
2.根據(jù)權(quán)利要求I的方法，其中步驟2中所述加入80%乙醇溶液的量，按體積(V)/杜仲葉重量(kg)比為2-4:1。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的方法，其中步驟3中所述過(guò)濾過(guò)程是紗布過(guò)濾、陶瓷膜過(guò)濾，其中， 優(yōu)選是三層紗布過(guò)濾2次、陶瓷膜過(guò)濾I次；加入適量抗氧化劑是抗壞血酸，濾液體積與加入抗壞血酸的重量比(V/g)為25— 50 :8。
4.根據(jù)權(quán)利要求3的方法，其中步驟5中乙醇溶液是用pH6.5左右的水與乙醇進(jìn)行配制，其濃度為50%的乙醇溶液。
5.根據(jù)權(quán)利要求3的方法，其中步驟7中乙醇溶液的終濃度為35%。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種從中提取高純度桃葉珊瑚甙的方法，大大地提高桃葉珊瑚甙得率和純度。提出了一整套從杜仲葉分離提取得到高純度的桃葉珊瑚甙，采用殺青處理新鮮杜仲葉，萃取，大孔吸附樹(shù)脂層析，濃縮，結(jié)晶，得到桃葉珊瑚甙純品。整個(gè)分離過(guò)程中對(duì)環(huán)境條件要求不高，分離時(shí)間較短，純度高。分離材料易得便宜，分離操作過(guò)程簡(jiǎn)單，易控制，采用結(jié)晶和重結(jié)晶，純化效率高，降低對(duì)環(huán)境污染的風(fēng)險(xiǎn)，同時(shí)又節(jié)約了資源。
文檔編號(hào)C07H1/08GK102603829SQ20121004103
公開(kāi)日2012年7月25日 申請(qǐng)日期2012年2月22日 優(yōu)先權(quán)日2012年2月22日
發(fā)明者向華, 唐忠海 申請(qǐng)人:向華