專利名稱：一種山麥冬皂苷b的分離純化方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥活性成分的分離純化方法，具體涉及從湖北山麥冬地下部位提取分離一種留體皂苷即山麥冬皂苷B的方法，屬于中藥分離純化技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
湖北山麥冬spicaia (Thunb.) Lour. var. prolifera Y. Τ. Ma 為百合科山麥冬屬植物，為《中華人民共和國(guó)藥典》(1995年版)新增品種山麥冬的基原植物之一，在湖北省廣泛栽培，并作為主流商品。藥理研究表明，湖北山麥冬具有明顯的延長(zhǎng)小鼠存活時(shí)間、極顯著增加小鼠的脾臟重量、顯著增強(qiáng)小鼠的碳粒廓清作用。湖北山麥冬中主要含有留體皂苷類、萜類、酰胺、生物堿類、脂肪酸類等化合物，其中皂苷類化合物為該植物主要活性成分。[余伯陽(yáng)，徐國(guó)鈞，平井康昭等.湖北麥冬和短草山麥冬的化學(xué)成分研究(II).中國(guó)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，1988，19 ) :209-12; ffatanabe, Yoshiaki; Sanada, Shuichi； Comparative studies on the constituents of ophiopogonis tuber and its congeners. I. Studies of the constituents of the subterranean part of Liriope platyphylla Wang et Tang. (1). Chemical & Pharmaceutical Bulletin,1983 ,31 (6) 1980-90. ； Yu, Boyang; Hirai, Yasuaki； Shoji, Junzo； Xu, Guojun. Comparative studies on the constituents of ophiopogonis tuber and its congeners. VI. Studies on the constituents of the subterranean part of Liriope spicatavar. prolifera and L. muscari. (1). Chemical & Pharmaceutical Bulletin,1990 , 38(7) :1931-5; Branke, Jueren Thomas； Haslinger, Ernst. Spirostanol glycoside from the tuber of Ophiopogon japonicus. Liebigs Annalen, 1995，(3) :587-9.]。山麥冬皂苷B 的結(jié)構(gòu)式如下
山麥冬皂苷B為一種留體皂苷類化合物，下述文獻(xiàn)報(bào)道的制備方法為山麥冬原料用 95%乙醇回流提取，提取液減壓濃縮后，濃縮液分別用石油醚、氯仿和正丁醇萃取。正丁醇萃取液回收溶劑后，殘留物再進(jìn)行硅膠柱層析和C18反相制備柱層析等層析過程才得到純的化合物。Boyang; Hiraij Yasuaki ； Shojij Junzo ； Xuj Guojun. Comparative studies on the constituents of ophiopogonis tuber and its congeners. VI. Studies on the constituents of the subterranean part of Liriope spicatavar. prolifera and L. muscari. (1). Chemical & Pharmaceutical Bulletin (1990)，38 (7)，1931-5。該方法工藝復(fù)雜，制備成本高，周期長(zhǎng)，無法工業(yè)化生產(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明旨在克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供一種快速簡(jiǎn)便、成本低廉、可適用于大量制備或工業(yè)化生產(chǎn)的山麥冬皂苷B的制備方法。其具體工藝步驟如下
A.乙醇提取取湖北山麥冬地下部位1kg，一次加入50%-70%的乙醇溶液8-12L，回流提取3-5次，每次1. 5-3小時(shí)，保持微沸，過濾藥渣后，合并提取液；
B.大孔樹脂富集除雜將步驟A的提取液減壓濃縮至密度1.20-1. 40后上大孔樹脂柱層析，先后用水5-8 BV、20%-30%乙醇8-10 BV淋洗除雜，淋洗至流出液變清后，改用 60%-70%乙醇4-8 BV洗脫，然后薄層層析在線檢測(cè)流出液，并收集該60%-70%的乙醇洗脫液流份，共收集6個(gè)柱體積；
所述薄層層析展開劑為氯仿甲醇水=100 35 5。所述大孔樹脂為DlOl型或AB-8型。C.硅膠柱層析色譜分離將步驟B收集到的乙醇洗脫液減壓濃縮后，進(jìn)行硅膠柱層析分離，洗脫時(shí)先用氯仿-甲醇-水，其體積比為10:1:0. 05的混合溶劑8-10BV除雜，再用氯仿-甲醇-水的混合溶劑洗脫，收集10-15BV的洗脫液；減壓濃縮得到山麥冬皂苷初
P
ΡΠ O所述混合溶劑是按體積比，氯仿-甲醇-水為10:1:0. 05。D.重結(jié)晶將步驟C收集到的洗脫液用50%_80%的甲醇溶解后進(jìn)行重結(jié)晶，培養(yǎng)晶體時(shí)間為5-10小時(shí)；然后抽濾，濾餅用70%_90%甲醇洗滌后，真空干燥，得到山麥冬皂苷 B含量達(dá)98%以上的白色固體產(chǎn)品。本發(fā)明技術(shù)方案中所涉及的百分比均為體積百分比。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明所具有的技術(shù)效果主要表現(xiàn)在
本發(fā)明革除了現(xiàn)有技術(shù)中通過葡聚糖凝膠和C18反相柱層析反復(fù)純化的過程，整個(gè)工藝過程操作簡(jiǎn)便，工藝穩(wěn)定，分離過程中主要用到水和乙醇，成本低廉，且液相檢測(cè)產(chǎn)品純度高達(dá)98%以上，可實(shí)現(xiàn)山麥冬皂苷B的大量制備或工業(yè)化生產(chǎn)。


圖1是本發(fā)明實(shí)施例1山麥冬皂苷B單體產(chǎn)品的HPLC圖譜。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施方式
對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)描述。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于下述實(shí)施例。下述各實(shí)施例中，終產(chǎn)品山麥冬皂苷B單體的純度復(fù)檢均采用反相高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)器(RP-HPLC-ELSD)法，色譜條件如下
以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈水(45:55)為流動(dòng)相；柱溫30°C ；流速 1. Oml/min ；氣化溫度 105°C ；氣體流速(N2) 3. OL/min。實(shí)施例1
取湖北山麥冬地下部位1kg，一次加入50%的乙醇溶液8L，回流提取3次，第一、第二次每次2小時(shí)，第三次1. 5小時(shí)，保持微沸，過濾藥渣，合并提取液；提取液濃縮至2L后上DlOl型大孔樹脂進(jìn)行分離，先后用水5 BV、30%乙醇8BV除雜，淋洗至流出液變清后， 改用70%乙醇洗脫，薄層層析檢測(cè)流出液，薄層層析展開劑為氯仿甲醇水(100:35:5)， 收集含有山麥冬皂苷B的部分；減壓濃縮后用硅膠柱進(jìn)行分離，洗脫體系為氯仿甲醇水 (10:1:0. 05)，薄層層析進(jìn)行在線檢測(cè)，有樣品流出后開始收集，共收15個(gè)柱體積；減壓濃縮該部分，得到山麥冬皂苷B的粗品。將粗品用50%的甲醇溶解后進(jìn)行重結(jié)晶，培養(yǎng)晶體時(shí)間為5小時(shí)，抽濾，濾餅用90%甲醇洗滌后，真空干燥，得山麥冬皂苷B的白色固體。該山麥冬皂苷B的收率為58. 9%，純度為98. 6%。實(shí)施例2
取湖北山麥冬地下部位lKg，一次加入70%的乙醇溶液10L，回流提取4次，第一、二次每次2小時(shí)，第三、四次每次1. 5小時(shí)，保持微沸，過濾藥渣，合并提取液；提取液濃縮至2L 后上DlOl型大孔樹脂進(jìn)行分離，先后用水6 BV、25%乙醇8 BV除雜，淋洗至流出液變清后， 改用60%乙醇洗脫，薄層層析檢測(cè)流出液，薄層層析展開劑為氯仿甲醇水(100:35:5)， 收集含有山麥冬皂苷B的部分；減壓濃縮后用硅膠柱進(jìn)行分離，洗脫體系為氯仿甲醇水 (20:1:0. 05)，薄層層析進(jìn)行在線檢測(cè)，有樣品流出后開始收集，共收12個(gè)柱體積；減壓濃縮該部分，得到山麥冬皂苷B的粗品。將粗品用70%的甲醇溶解后進(jìn)行重結(jié)晶，培養(yǎng)晶體時(shí)間為7小時(shí)，抽濾，濾餅用70%甲醇洗滌后，真空干燥，得山麥冬皂苷B的白色固體。該山麥冬皂苷B的收率為55. 3%，純度為98. 8%。實(shí)施例3
取湖北山麥冬地下部位lKg，一次加入70%的乙醇溶液12L，回流提取5次，第一、二次每次3小時(shí)，第三、四次每次2小時(shí)，第五次1. 5小時(shí)保持微沸，過濾藥渣，合并提取液，提取液濃縮至2L后上AB-8型大孔樹脂進(jìn)行分離，先后用水8BV、20%乙醇8BV除雜，淋洗至流出液變清后，改用65%乙醇洗脫，薄層層析檢測(cè)流出液，薄層層析展開劑為氯仿甲醇水 (150 35 5)，收集含有山麥冬皂苷B的部分；減壓濃縮后用硅膠柱進(jìn)行分離，洗脫體系為氯仿甲醇水(10:1:0. 05)，薄層層析進(jìn)行在線檢測(cè)，有樣品流出后開始收集，共收10個(gè)柱體積；減壓濃縮該部分，得到山麥冬皂苷B的粗品。將粗品用80%的甲醇溶解后進(jìn)行重結(jié)晶， 培養(yǎng)晶體時(shí)間為10小時(shí)，抽濾，濾餅用90%甲醇洗滌后，真空干燥，得山麥冬皂苷B的白色固體。該山麥冬皂苷B的收率為53. 7%，純度為99. 0%。
權(quán)利要求
1.一種山麥冬皂苷B的分離純化方法，其特征在于具體工藝步驟如下A.乙醇提取取湖北山麥冬地下部位1kg，一次加入50%-70%的乙醇溶液8-12L，回流提取3-5次，每次1. 5-3小時(shí)，保持微沸，過濾藥渣后，合并提取液；B.大孔樹脂富集除雜將步驟A的提取液減壓濃縮至密度1.20-1. 40后上大孔樹脂柱層析，先后用水5-8 BV、20%-30%乙醇8-10 BV淋洗除雜，淋洗至流出液變清后，改用 60%-70%乙醇4-8 BV洗脫，然后薄層層析在線檢測(cè)流出液，并收集該60%-70%的乙醇洗脫液流份，共收集6個(gè)柱體積；C.硅膠柱層析色譜分離將步驟B收集到的乙醇洗脫液減壓后，進(jìn)行硅膠柱層析分離， 洗脫時(shí)先用氯仿-甲醇-水體積比為10 1 0. 05的混合溶劑8-10BV除雜，用同一溶劑繼續(xù)洗脫，收集10-15BV的洗脫液；D.重結(jié)晶將步驟C收集到的洗脫液用50%-80%的甲醇溶解后進(jìn)行重結(jié)晶，培養(yǎng)晶體時(shí)間為5-10小時(shí)；然后抽濾，濾餅用70%-90%甲醇洗滌后，真空干燥，得到山麥冬皂苷B含量達(dá)98%以上的白色固體產(chǎn)品。
2.如權(quán)利要求1所述山麥冬皂苷B的分離純化方法，其特征在于步驟B所述薄層層析的展開劑為氯仿甲醇水=100:35:5。
3 如權(quán)利要求1所述山麥冬皂苷B的分離純化方法，其特征在于步驟B所述大孔樹脂為DlOl型或AB-8型。
4.如權(quán)利要求1所述山麥冬皂苷B的分離純化方法，其特征在于步驟C所述混合溶劑是按體積比為氯仿-甲醇-水為10:1:0. 05。
5.如權(quán)利要求1所述山麥冬皂苷B的分離純化方法，其特征在于步驟D所述重結(jié)晶的溶劑還可以用乙醇、乙酸乙酯或正丁醇中的任意一種替代。
全文摘要
本發(fā)明涉及從湖北山麥冬地下部位提取山麥冬皂苷B的方法，屬于中藥分離純化技術(shù)領(lǐng)域，其具體工藝步驟如下A.乙醇提取乙醇回流提取后合并提取液；B.大孔樹脂富集除雜將提取液濃縮后上大孔樹脂柱層析，然后薄層層析在線檢測(cè)流出液；C.硅膠柱層析色譜分離洗脫劑為氯仿-甲醇-水，收集10-15BV的洗脫液；D.重結(jié)晶洗脫液用甲醇溶解后進(jìn)行重結(jié)晶。本發(fā)明革除了現(xiàn)有技術(shù)中通過葡聚糖凝膠和C18反相柱層析反復(fù)純化的過程，整個(gè)工藝過程操作簡(jiǎn)便，工藝穩(wěn)定，分離過程中主要用到水和乙醇，成本低廉，且液相檢測(cè)產(chǎn)品純度高達(dá)98%以上，可實(shí)現(xiàn)山麥冬皂苷B的大量制備或工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號(hào)C07J71/00GK102399259SQ201110420119
公開日2012年4月4日 申請(qǐng)日期2011年12月15日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月15日
發(fā)明者劉丁, 夏柯, 文煥松, 李啟發(fā), 郭建華 申請(qǐng)人:成都普思生物科技有限公司