專利名稱：一種4-氨基偶氮苯完全抗原及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于小分子有機(jī)物的免疫化學(xué)生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種4-氨基偶氮苯完全抗原及其制備方法。
背景技術(shù)：
偶氮染料是指染料分子結(jié)構(gòu)中含有偶氮基(-N=N-)的染料，這類染料具有色譜齊全、顏色鮮艷、色牢度較高、成本低等優(yōu)點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用在紡織品印染行業(yè)。但相關(guān)研究表明，部分偶氮染料與人體作用后能夠產(chǎn)生多種芳香胺類物質(zhì)，經(jīng)人體的活化作用后會(huì)使細(xì)胞的DNA結(jié)構(gòu)和功能發(fā)生改變，從而誘發(fā)細(xì)胞癌變或畸變等病變，對(duì)人體具有致癌性。因此，歐盟在2003年9月11日公布的第2002 /61號(hào)令中規(guī)定凡是在還原條件下釋放出致癌芳香胺的偶氮染料都禁止使用。4-氨基偶氮苯(4-Aminoazobenzene，簡(jiǎn)稱4-AAB)是目前國(guó)際上明令禁止使用的 24種芳香胺中的一種。2009年，我國(guó)頒布了 GB/T23344-2009《紡織品4-氨基偶氮苯的測(cè)定》標(biāo)準(zhǔn)。標(biāo)準(zhǔn)大部分內(nèi)容參考了國(guó)外的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)。盡管新標(biāo)準(zhǔn)的頒布彌補(bǔ)了 4-氨基偶氮苯檢測(cè)方法的空白，但仍有一些不足，如標(biāo)準(zhǔn)中先還原后萃取的方法回收率低，依靠叔丁基甲醚的萃取效果不夠理想。另外，常用的檢測(cè)方法多是采用GC-MS、HPLC等色譜法分離檢測(cè)。此類方法過(guò)程復(fù)雜、效率低，對(duì)色譜柱污染嚴(yán)重。所以建立簡(jiǎn)單、快速的4-氨基偶氮苯檢測(cè)方法，具有重要的意義。免疫分析是利用抗原和抗體的特異性結(jié)合作用來(lái)選擇性識(shí)別和測(cè)定可以作為抗體或抗原的待測(cè)物。免疫分析法具備有效的靈敏度、特異性、快速和低成本的優(yōu)點(diǎn)；可對(duì)大量的樣品進(jìn)行常規(guī)分析；能夠用于樣品的定性篩選，也能夠?qū)悠愤M(jìn)行定量測(cè)定以確定樣品中待測(cè)組分的含量。近年來(lái)免疫分析得到了環(huán)境科學(xué)、食品科學(xué)界得極大關(guān)注。因此研究建立4-氨基偶氮苯的免疫分析方法，將會(huì)提供其更為簡(jiǎn)單、有效的檢測(cè)手段。4-氨基偶氮苯的相對(duì)分子質(zhì)量較小，為不能直接引發(fā)免疫反應(yīng)的半抗原，必須和大分子的載體蛋白，如牛血清白蛋白(bovine serum albumin, BSA)、卵清白蛋白 (ovalbumin, OVA)等偶聯(lián)之后構(gòu)成完全人工抗原，才能應(yīng)用于免疫操作。因此，有必要制備 4-氨基偶氮苯人工抗原，用于免疫檢測(cè)。申請(qǐng)公布號(hào)CN 101899109 A (申請(qǐng)?zhí)?01010215515. 5)的中國(guó)專利文獻(xiàn)提供了一
種4-氨基偶氮苯人工抗原的合成方法，是以4-氨基偶氮苯為半抗原，用重氮化法將其與載體蛋白BSA偶聯(lián)。其缺點(diǎn)是反應(yīng)條件較為苛刻，要求在冰水浴中反應(yīng)并且沒(méi)有引入連接臂。

發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的是提供一種4-氨基偶氮苯完全抗原及其制備方法。該方法具有重復(fù)性好，步驟少和反應(yīng)條件溫和的特點(diǎn)，此外還引入了連接臂，為進(jìn)一步提取免疫分析所需要的抗4-氨基偶氮苯抗體奠定了良好的基礎(chǔ)。本發(fā)明的方案是一種4-氨基偶氮苯完全抗原，結(jié)構(gòu)式如下
權(quán)利要求
1. 一種4-氨基偶氮苯完全抗原，其特征是，結(jié)構(gòu)式如下:
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述4-氨基偶氮苯完全抗原的制備方法，其特征是，步驟如下(1)將磷酸鹽緩沖溶液和1，4-二氧六環(huán)按比例混合，得混合液備用；(2)取1/5的混合液溶解4-氨基偶氮苯；(3)取3/10的混合液稀釋戊二醛溶液；(4)將步驟(2)所述4-氨基偶氮苯溶液逐滴滴加到步驟(3)所述戊二醛溶液中，室溫下攪拌反應(yīng)一定的時(shí)間，得到中間產(chǎn)物
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征是，所述緩沖溶液具體為pH=6.0-8. 5的磷酸鹽緩沖溶液(PBS)，優(yōu)選pH=7. 4的PBS。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征是，磷酸鹽緩沖溶液與1，4-二氧六環(huán)的體積比為3-1:1，優(yōu)選2:1。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征是，4-氨基偶氮苯的用量與BSA的質(zhì)量比優(yōu)選 0. 39-0. 79:1,更優(yōu)選 0. 59 1。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征是，每克BSA所需25%的戊二醛溶液的用量 0. 6mL-l. 4mL,優(yōu)選 ImL0
7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征是，4-氨基偶氮苯與戊二醛攪拌反應(yīng)的時(shí)間為 10min_35min,優(yōu)選 30min。
8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征是，BSA與中間產(chǎn)物的反應(yīng)時(shí)間為1.5h-4h, 優(yōu)選2h。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了以戊二醛作為連接臂合成的一種4-氨基偶氮苯完全抗原及制備方法。該方法具有重復(fù)性好，步驟少和反應(yīng)條件溫和的特點(diǎn)，為進(jìn)一步建立4-氨基偶氮苯的免疫分析奠定了基礎(chǔ)。
文檔編號(hào)C07K14/765GK102391373SQ20111038117
公開(kāi)日2012年3月28日 申請(qǐng)日期2011年11月26日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月26日
發(fā)明者宋于燕, 龐玉波, 張霞, 王術(shù)皓 申請(qǐng)人:聊城大學(xué)