專利名稱：一種土壤胞內(nèi)蛋白質(zhì)的提取分離方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種土壤胞內(nèi)蛋白質(zhì)的提取分離方法，屬于生物技術領域。
背景技術：
土壤微生物群落作為生態(tài)系統(tǒng)中極重要的一環(huán)，對植物的生長、生態(tài)系統(tǒng)中能量 流動、物質(zhì)循環(huán)、環(huán)境污染物降解與解毒等方面都起著重要作用。近年來，出現(xiàn)了一些研究 微生物群落多樣性及其互作的新技術，環(huán)境宏蛋白質(zhì)組學技術便是其中一個。該方法除可 對環(huán)境中的微生物種群進行研究，還可對微生物群落的功能進行深入分析。雖然現(xiàn)在已經(jīng) 開展的宏蛋白質(zhì)組學研究很少，但該技術已經(jīng)初步展示了其強大的功能通過宏蛋白質(zhì)組 學研究能夠把微生物群落組成與其功能聯(lián)系起來，從而更好的了解土壤微生物群落的生態(tài) 功能。土壤胞內(nèi)蛋白質(zhì)主要來源于土壤中微生物，因此高效提取土壤胞內(nèi)蛋白質(zhì)能夠有 效地分析土壤中微生物的種群變化及微生物體內(nèi)代謝變化。然而，土壤是一個極其復雜的 “黑箱”，存在眾多的干擾物質(zhì)，嚴重干擾了土壤胞內(nèi)蛋白質(zhì)的提取，至今還未有關于土壤胞 內(nèi)蛋白質(zhì)提取的有效方法，因此開發(fā)一種快速、高效的土壤胞內(nèi)蛋白質(zhì)提取的方法對于環(huán) 境宏蛋白質(zhì)組學研究的研究具有極其重要的作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種土壤胞內(nèi)蛋白質(zhì)的提取分離方法。本發(fā)明的的土壤胞內(nèi)蛋白質(zhì)的提取方法，具體步驟如下
(1)土壤胞內(nèi)蛋白質(zhì)提取
取0. 8-1. 5g土壤，加入0. 05mol/L,pH8. 0的檸檬酸鈉緩沖液4_6mL，于漩渦振蕩器中振 蕩2. 5-4小時，15000rpm離心25min，棄上清液；取沉淀，加入0. 05mol/L, pH8. 0檸檬酸鈉緩 沖液4-6mL并于漩渦振蕩器中振蕩10-20min，然后15000rpm離心25min，棄上清液，重復2 次；取沉淀，加入SDS緩沖液4-6mL，于漩渦振蕩器中振蕩50-80min ；振蕩結束后，15000rpm 離心25min，收集上清液，并過0. 45 μ m的微孔濾膜，取濾液添加pH為8. 0的Tris-飽和酚 2-3mL,置于漩渦振蕩器中振蕩25-40min，靜置20_50min，然后15000rpm離心25min，取下 層酚相，加入5倍體積預冷至4°C的0. lmol/L甲醇-醋酸銨溶液，置于_20°C條件下沉淀、 過夜，然后15000rpm離心25min ；棄上清液，沉淀中加入2_5mL甲醇洗滌，15000rpm離心 25min，去除甲醇上清液，用2-5mL丙酮洗滌沉淀，15000rpm離心25min，去上清液，重復1 2次；取沉淀，將沉淀于超凈臺中吹干，獲得蛋白質(zhì)干粉；
(2)土壤胞內(nèi)蛋白質(zhì)分離
取1. 2mg蛋白質(zhì)干粉，加入300 μ L蛋白質(zhì)裂解液，制成蛋白質(zhì)樣品，進行雙向電泳分
1 O所述雙向電泳的具體步驟為選取Mcm IPG膠條，加入蛋白質(zhì)樣品后置于水化盤 上水化12-M小時，然后放入IPGphor等電聚焦儀中，等電聚焦儀電泳參數(shù)為500V，1小時、CN 102093466 A 1000V，6小時、8000V，7小時、3000V，10-30小時；等電聚焦結束后，將膠條分別置于平衡緩 沖液I和平衡緩沖液II中，各平衡15分鐘后進行SDS-PAGE電泳；SDS-PAGE電泳凝膠底層 為1 分離膠，用0. 8-1%的瓊脂糖溶液封住膠條表面，以15mA恒定電流進行電泳，電泳溫 度保持在15-20°C，電泳時間為7-9小時；電泳結束后，卸下膠片，膠片經(jīng)固定、水洗、染色、 脫色，最后用掃描儀掃描。其中所用試劑配制如下
0.05mol/L, pH8. 0的檸檬酸鈉緩沖液的配置方法稱取1. 4705g 2水合檸檬酸鈉采用 雙蒸水溶解并定溶至IOOmL,并用0. lmol/L的NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值為8. 0 ；
SDS凝膠緩沖液的配置方法首先稱取0. 121g Tris定容到lmL，加入濃HCL調(diào)pH值 到6. 8，其次加入0. 25g SDS，0. 31g 二硫蘇糖醇(DTT)，2mL甘油，0. 02g溴酚藍加水定容至 10ml。本發(fā)明采用檸檬酸鈉提取液提取，去除土壤胞外蛋白質(zhì)，采用SDS提取液提取、溶 解土壤胞內(nèi)蛋白質(zhì)，經(jīng)Tris-飽和酚、甲醇-醋酸銨等進一步進行胞內(nèi)蛋白質(zhì)的提取，然后 通過雙向電泳分離。本發(fā)明的顯著優(yōu)點
1、國際上首次提出土壤胞內(nèi)蛋白質(zhì)提取方法。2、提取的土壤胞內(nèi)蛋白質(zhì)經(jīng)SDS-PAGE檢測后條帶清晰。3、提取的土壤胞內(nèi)蛋白質(zhì)經(jīng)雙向電泳分離后蛋白質(zhì)點清晰。


圖1為采用本發(fā)明方法提取的土壤胞內(nèi)蛋白質(zhì)的SDS-PAGE圖，其中1表示水稻土 壤，2表示甘蔗土壤，3表示煙草土壤；
圖2為采用本發(fā)明方法分離的水稻土壤胞內(nèi)蛋白質(zhì)的雙向電泳圖。
具體實施例方式
本發(fā)明的的土壤胞內(nèi)蛋白質(zhì)的提取方法，具體步驟如下 (1) 土壤蛋白質(zhì)提取劑的配置
IOOmL的0. lmol/L的NaOH溶液配制方法稱取0. 4g NaOH，采用雙蒸水溶解并定溶至 100mL。IOOmL的0. 05mol/L的檸檬酸鈉緩沖液配置方法稱取1. 4705g 2水合檸檬酸鈉 采用雙蒸水溶解并定溶至IOOmL,并用0. lmol/L的NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值為8. 0。IOOmL的SDS緩沖液配置方法稱取1. 2114g Tris，加入40mL的蒸餾水溶解，再加 入1. 25g SDS溶解，再加入0. 3086g的二硫基蘇糖醇溶解，定容至IOOmL左右，同時HCl調(diào) 節(jié)pH至6. 8。IOOmL的0. lmol/L甲醇-醋酸銨溶液配置方法稱取0. 771g醋酸銨，加入40mL的 甲醇溶解，再用甲醇定溶至100mL。IOmL的SDS凝膠緩沖液配置方法首先稱取0. 121g Tris定容到lmL，加入濃HCL 調(diào)PH值到6. 8，其次加入0. 25g SDS，0. 31g 二硫蘇糖醇(DTT)，2mL甘油，0. 02g溴酚藍加水 定容至10ml。5mL的土壤蛋白質(zhì)裂解液配置方法稱取0. 76g硫脲、2. Ig尿素、0. 05g 二硫蘇糖醇、0.2g 3-[(3_膽固醇氨丙基)二甲基氨基]-1-丙磺酸(CHAPS)于IOmL離心管中，加雙 蒸水溶解并定容至5mL。IOmL的平衡液I配置方法稱取0. 12g的Tris溶于670 μ L的雙蒸水，HCl調(diào)節(jié) ρΗ值至8. 8，加入7. 21g的尿素，6. 9mL的甘油，0. 4g的SDS，0. Ig 二硫蘇糖醇(DTT)，加入 0. 001 g的溴酚藍，雙蒸水定容至10mL。IOmL的平衡液II配置方法稱取0. 12g的Tris溶于670 μ L的雙蒸水，HCl調(diào)節(jié) ρΗ值至8. 8，加入7. 21g的尿素，6. 9mL的甘油，0. 4g的SDS, 0. 4g碘乙酰銨，加入0. 001 g 的溴酚藍，雙蒸水定容至10mL。IOOOmL的固定液配置方法量取500 mL甲醇、500mL乙酸充分混勻后即可配得 IOOOmL固定液。500mL的染色液配置方法稱取0. 6g的G-250，加入50mL的磷酸，50mL的硫酸銨、 IOOmL的甲醇，蒸餾水定容至500mL。(2 ) 土壤胞內(nèi)蛋白質(zhì)提取
稱取0. 8-1. 5g 土壤樣品于IOmL的離心管中，加入4-6mL檸檬酸鈉緩沖液(0. 05mol/L, pH8. 0)于漩渦振蕩器中振蕩2. 5-4小時；振蕩結束后，將樣品置于預冷至4°C的離心機中 15000rpm離心25min，棄上清液；取沉淀，加入4_6mL檸檬酸鈉緩沖液(0. 05mol/L, pH8. 0) 并于漩渦振蕩器中振蕩10-20min，然后于預冷至4°C的離心機中15000rpm離心25min，棄 上清液，重復2次；取沉淀，加入4-6mLSDS緩沖液，于漩渦振蕩器中振蕩50-80min ；振蕩 結束后，于預冷至4°C的離心機中15000rpm離心25min，收集上清液，并過0. 45 μ m的微 孔濾膜，取濾液添加2-3mL Tris-飽和酚(pH8. 0)，置于漩渦振蕩器中振蕩25-40min，靜置 20-50min，然后置于預冷至4°C的離心機中15000rpm離心25min，取下層酚相于新的IOmL 離心管中，并加入5倍體積預冷至4°C的甲醇-醋酸銨溶液(0. lmol/L)，置于_20°C條件下 沉淀、過夜；將沉淀后的溶液于預冷至4°C的離心機中15000rpm離心25min ；棄上清液，沉淀 中加入甲醇2-5mL洗滌，再將其置于預冷至4°C的離心機中15000rpm離心25min，去除甲醇 上清液，用2-5mL丙酮洗滌沉淀2次，每次洗滌后于4°C的離心機中15000rpm離心25min ； 取沉淀，將沉淀于超凈臺中吹干，獲得蛋白質(zhì)干粉。稱取0. 5mg蛋白質(zhì)干粉加入100μ 1 SDS 凝膠緩沖液溶解，取10 μ 1用于SDS-PAGE檢測土壤胞內(nèi)蛋白質(zhì)提取效果。(3) 土壤胞內(nèi)蛋白質(zhì)分離
取1.2mg蛋白質(zhì)干粉，加入300 μ L蛋白質(zhì)裂解液，用于蛋白質(zhì)雙向電泳分離。雙向 電泳具體步驟選取Mcm IPG膠條(等電點4-7)，加入蛋白質(zhì)樣品后置于水化盤上水化 12- 小時，放入IPGphor等電聚焦儀中，等電聚焦儀電泳參數(shù)為500V，1小時、1000V，6小 時、8000V，7小時、3000V，10-30小時；等電聚焦結束后，將每根膠條分別置于平衡緩沖液I 和平衡緩沖液II中平衡15分鐘后進行SDS-PAGE電泳。SDS-PAGE電泳凝膠底層為12%分 離膠，用0. 8-1%的瓊脂糖溶液封住膠條表面，以15mA恒定電流進行電泳，電泳溫度保持在 15-20°C,電泳時間為7-9小時。電泳結束后，卸下膠片，先用固定液固定1小時，水洗3次， 每次5分鐘，然后用300mL的考馬斯亮藍G-250染色液染色過夜。染色完成，水洗脫色2天， 最后用掃描儀掃描檢測蛋白質(zhì)提取與分離效果。為充分公開本發(fā)明的一種有效的土壤胞內(nèi)蛋白質(zhì)提取方法，以下結合方法驗證和 實施實例加以說明。
實施例1
(1) 土壤蛋白質(zhì)提取與檢測步驟
稱取Ig水稻土壤于IOmL的離心管中加入0. 05mol/L檸檬酸鈉緩沖液5mL。于漩渦振 蕩器中充分振蕩3小時。振蕩結束后，將離心管置于預冷至4°C的離心機中15000rpm離心 25min,棄上清液。于離心管中加入5mL檸檬酸鈉緩沖液并于漩渦振蕩器中振蕩lOmin，于 預冷至4°C的離心機中15000rpm離心25min，棄上清液，重復2次。于離心管中加入SDS緩 沖液5mL，并將其置于漩渦振蕩器中振蕩1小時。振蕩結束后，取上清液過0.45 μ m的濾膜 并轉(zhuǎn)移至一新的IOmL離心管中，添加2mL Tris-飽和酚(pH8. 0)，置于漩渦振蕩器中振蕩 30min,靜置30min。然后將離心管置于預冷至4°C的離心機中15000rpm離心25min，取下層 苯酚液體于一新的IOmL離心管中，并加入5倍體積預冷至4°C的0. lmol/L甲醇-醋酸銨溶 液，置于_20°C條件下沉淀過夜。將沉淀后的溶液于預冷至4°C的離心機中15000rpm離心 25min。倒掉上清液，用5ml甲醇洗滌沉淀后，4°C的離心機中15000rpm離心25min，去除甲 醇溶液，5ml丙酮洗滌沉淀2次，每次洗滌后于4°C的離心機中15000rpm離心25min。將沉 淀于超凈臺中吹干。吹干后的沉淀用蛋白裂解液溶解，采用SDS-PAGE檢測土壤胞內(nèi)蛋白質(zhì) 提取效果。SDS-PAGE電泳條件凝膠規(guī)格為102X84X2. 4mm,分離膠為10%聚丙烯酰胺凝 膠，用1%瓊脂糖(電泳緩沖液配置)封閉；電泳槽加入電極緩沖液；15mA恒流進行電泳，室 溫，待溴酚藍離底部0. 5cm即可停止電泳，電泳2小時；電泳槽電極緩沖液配比25mmol/L Tris, 192mmol/L 甘氨酸，0. 1%SDS。如圖1所示，采用本發(fā)明方法提取不同作物土壤胞內(nèi)蛋白質(zhì)結果表明，提取土壤 胞內(nèi)蛋白質(zhì)經(jīng)SDS-PAGE檢測后條帶清晰，電泳條帶多。(2) 土壤蛋白質(zhì)分離步驟
取1.2mg水稻土壤蛋白質(zhì)干粉，加入300μ 1蛋白質(zhì)裂解液，用于蛋白質(zhì)雙向電泳分離。 雙向電泳具體步驟選取Mcm IPG膠條(等電點4-7)，加入蛋白質(zhì)樣品后置于水化盤上水 化12小時，放入IPGphor等電聚焦儀中，等電聚焦儀電泳參數(shù)為500V，1小時、1000V，6小 時、8000V，7小時、3000V，10小時；等電聚焦結束后，將每根膠條分別置于平衡緩沖液I和 平衡緩沖液II中平衡15分鐘后進行SDS-PAGE電泳。SDS-PAGE電泳凝膠底層為1 分離 膠，用1%的瓊脂糖溶液封住膠條表面，以15mA恒定電流進行電泳，電泳溫度保持在15°C，電 泳時間為9小時。電泳結束后，卸下膠片，先用固定液固定1小時，水洗3次，每次5min，然 后用300mL的考馬斯亮藍G-250染色液染色過夜。染色完成，水洗脫色2天，最后用掃描儀 掃描。如圖2所示，采用本發(fā)明方法提取分離的水稻土壤胞內(nèi)蛋白質(zhì)雙向電泳結果表明，提 取的土壤胞內(nèi)蛋白質(zhì)分離效果良好，土壤蛋白質(zhì)點清晰，分離的蛋白質(zhì)點多。實施例2
(1) 土壤胞內(nèi)蛋白質(zhì)提取
取0. Sg甘蔗土壤，加入0. 05mol/L, pH8. 0的檸檬酸鈉緩沖液4mL，于漩渦振蕩器中振 蕩2. 5小時，15000rpm離心25min，棄上清液；取沉淀，加入0. 05mol/L，pH8. 0檸檬酸鈉緩沖 液4mL并于漩渦振蕩器中振蕩lOmin，然后15000rpm離心25min，棄上清液，重復2次；取沉 淀，加入SDS緩沖液4mL，于漩渦振蕩器中振蕩50min ；振蕩結束后，15000rpm離心25min，收 集上清液，并過0. 45 μ m的微孔濾膜，取濾液添加pH為8. 0的Tris-飽和酚2mL，置于漩渦振蕩器中振蕩25min，靜置20min，然后15000rpm離心25min，取下層酚相，加入5倍體積預 冷至4°C的0. lmol/L甲醇-醋酸銨溶液，置于_20°C條件下沉淀、過夜，然后15000rpm離心 25min ；棄上清液，沉淀中加入2mL甲醇洗滌，15000rpm離心25min，去除甲醇上清液，用2mL 丙酮洗滌沉淀，15000rpm離心25min，去上清液，重復1 2次；取沉淀，將沉淀于超凈臺中 吹干，獲得蛋白質(zhì)干粉；
(2) 土壤胞內(nèi)蛋白質(zhì)分離
取1. 2mg蛋白質(zhì)干粉，加入300 μ L蛋白質(zhì)裂解液，制成蛋白質(zhì)樣品，進行雙向電泳分
1 O所述雙向電泳的具體步驟為選取Mcm IPG膠條，加入蛋白質(zhì)樣品后置于水化 盤上水化12小時，然后放入IPGphor等電聚焦儀中，等電聚焦儀電泳參數(shù)為500V，1小時、 1000V，6小時、8000V，7小時、3000V，10小時；等電聚焦結束后，將膠條分別置于平衡緩沖液 I和平衡緩沖液II中，各平衡15分鐘后進行SDS-PAGE電泳；SDS-PAGE電泳凝膠底層為1 分離膠，用0. 8%的瓊脂糖溶液封住膠條表面，以15mA恒定電流進行電泳，電泳溫度保持在 15-20°C,電泳時間為7小時；電泳結束后，卸下膠片，膠片經(jīng)固定、水洗、染色、脫色，最后用 掃描儀掃描。如圖2所示，結果表明，提取的土壤胞內(nèi)外蛋白質(zhì)分離效果良好，土壤蛋白質(zhì) 點清晰，分離的蛋白質(zhì)點多。實施例3
(1)土壤胞內(nèi)蛋白質(zhì)提取
取1. 5g煙草土壤，加入0. 05mol/L, pH8. 0的檸檬酸鈉緩沖液6mL，于漩渦振蕩器中振 蕩4小時，15000rpm離心25min，棄上清液；取沉淀，加入0. 05mol/L，pH8. 0檸檬酸鈉緩沖液 4-6mL并于漩渦振蕩器中振蕩10-20min，然后15000rpm離心25min，棄上清液，重復2次；取 沉淀，加入SDS緩沖液6mL，于漩渦振蕩器中振蕩80min ；振蕩結束后，15000rpm離心25min， 收集上清液，并過0. 45 μ m的微孔濾膜，取濾液添加pH為8. 0的Tris-飽和酚3mL，置于漩 渦振蕩器中振蕩40min，靜置50min，然后15000rpm離心25min，取下層酚相，加入5倍體積 預冷至4°C的0. lmol/L甲醇-醋酸銨溶液，置于_20°C條件下沉淀、過夜，然后15000rpm離 心25min ；棄上清液，沉淀中加入5mL甲醇洗滌，15000rpm離心25min，去除甲醇上清液，用 5mL丙酮洗滌沉淀，15000rpm離心25min，去上清液，重復1 2次；取沉淀，將沉淀于超凈 臺中吹干，獲得蛋白質(zhì)干粉；
(2)土壤胞內(nèi)蛋白質(zhì)分離
取1.2mg蛋白質(zhì)干粉，加入300 μ L蛋白質(zhì)裂解液，制成蛋白質(zhì)樣品，進行雙向電泳分
1 O所述雙向電泳的具體步驟為選取Mcm IPG膠條，加入蛋白質(zhì)樣品后置于水化 盤上水化M小時，然后放入IPGphor等電聚焦儀中，等電聚焦儀電泳參數(shù)為500V，1小時、 1000V，6小時、8000V，7小時、3000V，30小時；等電聚焦結束后，將膠條分別置于平衡緩沖 液I和平衡緩沖液II中，各平衡15分鐘后進行SDS-PAGE電泳；SDS-PAGE電泳凝膠底層為 1 分離膠，用1%的瓊脂糖溶液封住膠條表面，以15mA恒定電流進行電泳，電泳溫度保持 在15-20°C，電泳時間為9小時；電泳結束后，卸下膠片，膠片經(jīng)固定、水洗、染色、脫色，最后 用掃描儀掃描。如圖2所示，結果表明，提取的土壤胞內(nèi)蛋白質(zhì)分離效果良好，土壤蛋白質(zhì) 點清晰，分離的蛋白質(zhì)點多。
權利要求
1.一種土壤胞內(nèi)蛋白質(zhì)的提取分離方法，其特征在于所述方法的具體步驟如下(1)土壤胞內(nèi)蛋白質(zhì)提取取0. 8-1. 5g土壤，加入0. 05mol/L,pH8. 0的檸檬酸鈉緩沖液4_6mL，于漩渦振蕩器中振 蕩2. 5-4小時，15000rpm離心25min，棄上清液；取沉淀，加入0. 05mol/L, pH8. 0檸檬酸鈉緩 沖液4-6mL并于漩渦振蕩器中振蕩10-20min，然后15000rpm離心25min，棄上清液，重復2 次；取沉淀，加入SDS緩沖液4-6mL，于漩渦振蕩器中振蕩50-80min ；振蕩結束后，15000rpm 離心25min，收集上清液，并過0. 45 μ m的微孔濾膜，取濾液添加pH為8. 0的Tris-飽和酚 2-3mL,置于漩渦振蕩器中振蕩25-40min，靜置20_50min，然后15000rpm離心25min，取下層 酚相，加入5倍體積預冷至4°C的0. lmol/L甲醇-醋酸銨溶液，置于_20°C條件下沉淀、過 夜，然后15000rpm離心25min ；棄上清液，沉淀中加入甲醇洗滌，15000rpm離心25min，去除 甲醇上清液，用丙酮洗滌沉淀，15000rpm離心25min，去上清液，重復1 2次；取沉淀，將沉 淀于超凈臺中吹干，獲得蛋白質(zhì)干粉；(2)土壤胞內(nèi)蛋白質(zhì)分離取1. 2mg蛋白質(zhì)干粉，加入300 μ L蛋白質(zhì)裂解液，制成蛋白質(zhì)樣品，進行雙向電泳分1 O
2.根據(jù)權利要求1所述的一種土壤胞內(nèi)蛋白質(zhì)的提取分離方法，其特征在于步驟(2) 所述雙向電泳的具體步驟為選取Mcm IPG膠條，加入蛋白質(zhì)樣品后置于水化盤上水化 12-24小時，然后放入IPGphor等電聚焦儀中，等電聚焦儀電泳參數(shù)為500V，1小時、1000V，6 小時、8000V，7小時、3000V，10-30小時；等電聚焦結束后，將膠條分別置于平衡緩沖液I和 平衡緩沖液II中，各平衡15分鐘后進行SDS-PAGE電泳；SDS-PAGE電泳凝膠底層為1 分 離膠，用0. 8-1%的瓊脂糖溶液封住膠條表面，以15mA恒定電流進行電泳，電泳溫度保持在 15-20°C,電泳時間為7-9小時；電泳結束后，卸下膠片，膠片經(jīng)固定、水洗、染色、脫色，最后 用掃描儀掃描。
3.根據(jù)權利要求1所述的一種土壤胞內(nèi)蛋白質(zhì)的提取分離方法，其特征在于 檸檬酸鈉緩沖液的配置方法稱取1. 4705g 2水合檸檬酸鈉采用雙蒸水溶解并定溶至IOOmL,并用0. lmol/L的NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值為8. 0 ；SDS凝膠緩沖液的配置方法首先稱取0. 121g Tris定容到lmL，加入濃HCL調(diào)pH值到 6. 8，其次加入0. 25g SDS, 0. 31g 二硫蘇糖醇，2mL甘油，0. 02g溴酚藍加水定容至10ml。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種土壤胞內(nèi)蛋白質(zhì)的提取分離方法，該方法采用檸檬酸鈉提取液提取去除土壤胞外蛋白質(zhì)，采用SDS提取液提取、溶解土壤胞內(nèi)蛋白質(zhì)，經(jīng)Tris-飽和酚、甲醇-醋酸銨等進一步進行胞內(nèi)蛋白質(zhì)的提取，然后通過雙向電泳分離。提取的土壤胞內(nèi)蛋白質(zhì)經(jīng)SDS-PAGE檢測后條帶、蛋白質(zhì)點清晰，是國際上首次提出的土壤胞內(nèi)蛋白質(zhì)的提取分離方法。
文檔編號C07K1/36GK102093466SQ20101058516
公開日2011年6月15日 申請日期2010年12月13日 優(yōu)先權日2010年12月13日
發(fā)明者何海斌, 俞振明, 吳林坤, 張志興, 林文雄, 王海斌 申請人:福建農(nóng)林大學