專利名稱：一種植物rna的提取工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于化工技術(shù)領(lǐng)域，更具體地說，是涉及一種植物RNA的提取工藝。
背景技術(shù)：
由于植物細(xì)胞壁厚實且成分復(fù)雜，細(xì)胞內(nèi)富含單寧、萜烯、色素和酚等次生代謝物及蛋白質(zhì)和多糖等大分子，這些不但影響RNA提取效率，而且干擾其后的逆轉(zhuǎn)錄和酶切。另夕卜，RNA極易受到內(nèi)源或外源RNA酶的影響而降解以及受到蛋白質(zhì)和DNA等的污染而降低 RNA的質(zhì)量，因此從植物中提取RNA較難。生長在干旱荒漠區(qū)的強(qiáng)旱生植物霸王，其體內(nèi)次生代謝物含量高，然而，現(xiàn)階段， 還未有廠家從霸王中進(jìn)行RNA的提取。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明就是針對上述問題，提供了一種操作簡單、反應(yīng)條件溫和的植物RNA的提取工藝。為了實現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案，工藝步驟為RNA提取緩沖液的成分有異硫氰酸胍2 4mol/L、檸檬酸鈉(pH 7. 0) 25 ;35mm0l/L、十二烷基肌氨酸鈉0. 5 1. 0% (W/V)、β -巰基乙醇2 4% (V/V)；取預(yù)冷的提取緩沖液加入到離心管中，置于冰上；取霸王葉片、根系在裝有過量液氮的研缽中充分研磨，用預(yù)冷的藥匙將霸王葉片、根系粉末轉(zhuǎn)入離心管中，劇烈震蕩lOmin， 冰上靜置5min ；加入醋酸鈉、水飽和酚、體積比為20 1 M 1的氯仿和異戊醇混合溶液，搖勻，離心20min ；吸取上清液轉(zhuǎn)入另一個離心管中，加入預(yù)冷的異丙醇，在-10 -20°C 下沉淀1. 5h ；離心，棄上清液，倒置空干，加入70 80%的乙醇，懸浮沉淀；離心，棄上清液，加入70 80%的乙醇，洗滌RNA沉淀，室溫下干燥lOmin，即得成品。本發(fā)明的有益效果1.本發(fā)明操作簡單、耗時短；2.本發(fā)明提取的RNA受多糖、多酚和蛋白質(zhì)等污染的程度小，純度高；3.本發(fā)明提取的RNA完整、純凈，無降解；4.本發(fā)明的產(chǎn)量為257. 6 μ g/g。
具體實施例方式本發(fā)明的工藝步驟為RNA提取緩沖液的成分有異硫氰酸胍2 4mol/L、檸檬酸鈉(pH 7. 0) 25 ;35mm0l/L、十二烷基肌氨酸鈉0. 5 1. 0% (W/V)、β -巰基乙醇2 4% (V/V)；取預(yù)冷的提取緩沖液加入到離心管中，置于冰上；取霸王葉片、根系在裝有過量液氮的研缽中充分研磨，用預(yù)冷的藥匙將霸王葉片、根系粉末轉(zhuǎn)入離心管中，劇烈震蕩lOmin， 冰上靜置5min ；加入醋酸鈉、水飽和酚、體積比為20 1 M 1的氯仿和異戊醇混合溶液，搖勻，離心20min ；吸取上清液轉(zhuǎn)入另一個離心管中，加入預(yù)冷的異丙醇，在-10 -20°C 下沉淀1. 5h ；離心，棄上清液，倒置空干，加入70 80%的乙醇，懸浮沉淀；離心，棄上清液，加入70 80%的乙醇，洗滌RNA沉淀，室溫下干燥lOmin，即得成品。實施例1 RNA提取緩沖液的成分有異硫氰酸胍4mol/L、檸檬酸鈉(pH 7. 0) 35mmol/L、十二烷基肌氨酸鈉0.5% (W/V)、β-巰基乙醇2% (V/V)；取預(yù)冷的提取緩沖液加入到離心管中，置于冰上；取霸王葉片、根系在裝有過量液氮的研缽中充分研磨，用預(yù)冷的藥匙將霸王葉片、根系粉末轉(zhuǎn)入離心管中，劇烈震蕩lOmin， 冰上靜置5min ；加入醋酸鈉、水飽和酚、體積比為20 1 M 1的氯仿和異戊醇混合溶液，搖勻，離心20min ；吸取上清液轉(zhuǎn)入另一個離心管中，加入預(yù)冷的異丙醇，在-10 -20°C 下沉淀1. 5h ；離心，棄上清液，倒置空干，加入70 80%的乙醇，懸浮沉淀；離心，棄上清液，加入70 80%的乙醇，洗滌RNA沉淀，室溫下干燥lOmin，即得成品。實施例2:RNA提取緩沖液的成分有異硫氰酸胍2mol/L、檸檬酸鈉(pH 7. 0) 25mmol/L、十二烷基肌氨酸鈉1.0% (W/V)、β -巰基乙醇4% (V/V)；取預(yù)冷的提取緩沖液加入到離心管中，置于冰上；取霸王葉片、根系在裝有過量液氮的研缽中充分研磨，用預(yù)冷的藥匙將霸王葉片、根系粉末轉(zhuǎn)入離心管中，劇烈震蕩lOmin， 冰上靜置5min ；加入醋酸鈉、水飽和酚、體積比為20 1 M 1的氯仿和異戊醇混合溶液，搖勻，離心20min ；吸取上清液轉(zhuǎn)入另一個離心管中，加入預(yù)冷的異丙醇，在-10 -20°C 下沉淀1. 5h ；離心，棄上清液，倒置空干，加入70 80%的乙醇，懸浮沉淀；離心，棄上清液，加入70 80%的乙醇，洗滌RNA沉淀，室溫下干燥lOmin，即得成品。實施例3 RNA提取緩沖液的成分有異硫氰酸胍3mol/L、檸檬酸鈉(pH 7. 0) 25mmol/L、十二烷基肌氨酸鈉0.75% (W/V)、β-巰基乙醇2% (V/V)；取預(yù)冷的提取緩沖液加入到離心管中，置于冰上；取霸王葉片、根系在裝有過量液氮的研缽中充分研磨，用預(yù)冷的藥匙將霸王葉片、根系粉末轉(zhuǎn)入離心管中，劇烈震蕩lOmin， 冰上靜置5min ；加入醋酸鈉、水飽和酚、體積比為20 1 M 1的氯仿和異戊醇混合溶液，搖勻，離心20min ；吸取上清液轉(zhuǎn)入另一個離心管中，加入預(yù)冷的異丙醇，在-10 -20°C 下沉淀1. 5h ；離心，棄上清液，倒置空干，加入70 80%的乙醇，懸浮沉淀；離心，棄上清液，加入70 80%的乙醇，洗滌RNA沉淀，室溫下干燥lOmin，即得成品。
權(quán)利要求
1.一種植物RNA的提取工藝，其特征在于，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案，工藝步驟為RNA提取緩沖液的成分有異硫氰酸胍2 4mol/L、檸檬酸鈉(pH 7. 0) 25 35mmol/L、十二烷基肌氨酸鈉0. 5 1. 0% (W/V)、β -巰基乙醇2 4% (V/V)；取預(yù)冷的提取緩沖液加入到離心管中，置于冰上；取霸王葉片、根系在裝有過量液氮的研缽中充分研磨，用預(yù)冷的藥匙將霸王葉片、根系粉末轉(zhuǎn)入離心管中，劇烈震蕩lOmin，冰上靜置5min;加入醋酸鈉、水飽和酚、體積比為20 1 M 1的氯仿和異戊醇混合溶液， 搖勻，離心20min ；吸取上清液轉(zhuǎn)入另一個離心管中，加入預(yù)冷的異丙醇，在-10 -20°C下沉淀1. 5h ；離心，棄上清液，倒置空干，加入70 80%的乙醇，懸浮沉淀；離心，棄上清液， 加入70 80%的乙醇，洗滌RNA沉淀，室溫下干燥lOmin，即得成品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種植物RNA的提取工藝，其特征在于，工藝步驟為RNA提取緩沖液的成分有異硫氰酸胍4mol/L、檸檬酸鈉(pH 7. 0) 35mmol/L、十二烷基肌氨酸鈉0. 5% (W/V)、β -巰基乙醇2% (V/V)；取預(yù)冷的提取緩沖液加入到離心管中，置于冰上；取霸王葉片、根系在裝有過量液氮的研缽中充分研磨，用預(yù)冷的藥匙將霸王葉片、根系粉末轉(zhuǎn)入離心管中，劇烈震蕩lOmin，冰上靜置5min;加入醋酸鈉、水飽和酚、體積比為20 1 M 1的氯仿和異戊醇混合溶液， 搖勻，離心20min ；吸取上清液轉(zhuǎn)入另一個離心管中，加入預(yù)冷的異丙醇，在-10 -20°C下沉淀1. 5h ；離心，棄上清液，倒置空干，加入70 80%的乙醇，懸浮沉淀；離心，棄上清液， 加入70 80%的乙醇，洗滌RNA沉淀，室溫下干燥lOmin，即得成品。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種植物RNA的提取工藝，其特征在于，工藝步驟為RNA提取緩沖液的成分有異硫氰酸胍2mol/L、檸檬酸鈉(pH 7. 0) 25mmol/L、十二烷基肌氨酸鈉1.0% (W/V)、β -巰基乙醇4% (V/V)；取預(yù)冷的提取緩沖液加入到離心管中，置于冰上；取霸王葉片、根系在裝有過量液氮的研缽中充分研磨，用預(yù)冷的藥匙將霸王葉片、根系粉末轉(zhuǎn)入離心管中，劇烈震蕩lOmin，冰上靜置5min;加入醋酸鈉、水飽和酚、體積比為20 1 M 1的氯仿和異戊醇混合溶液， 搖勻，離心20min ；吸取上清液轉(zhuǎn)入另一個離心管中，加入預(yù)冷的異丙醇，在-10 -20°C下沉淀1. 5h ；離心，棄上清液，倒置空干，加入70 80%的乙醇，懸浮沉淀；離心，棄上清液， 加入70 80%的乙醇，洗滌RNA沉淀，室溫下干燥lOmin，即得成品。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種植物RNA的提取工藝，其特征在于，工藝步驟為RNA提取緩沖液的成分有異硫氰酸胍3mol/L、檸檬酸鈉(pH 7. 0) 25mmol/L、十二烷基肌氨酸鈉0.75% (W/V)、β-巰基乙醇2% (V/V)；取預(yù)冷的提取緩沖液加入到離心管中，置于冰上；取霸王葉片、根系在裝有過量液氮的研缽中充分研磨，用預(yù)冷的藥匙將霸王葉片、根系粉末轉(zhuǎn)入離心管中，劇烈震蕩lOmin，冰上靜置5min;加入醋酸鈉、水飽和酚、體積比為20 1 M 1的氯仿和異戊醇混合溶液， 搖勻，離心20min ；吸取上清液轉(zhuǎn)入另一個離心管中，加入預(yù)冷的異丙醇，在-10 _20°C下沉淀1. 5h ；離心，棄上清液，倒置空干，加入70 80%的乙醇，懸浮沉淀。
全文摘要
一種植物RNA的提取工藝屬于化工技術(shù)領(lǐng)域，更具體地說，是涉及一種植物RNA的提取工藝。本發(fā)明提供了一種操作簡單、反應(yīng)條件溫和的植物RNA的提取工藝。本發(fā)明采用如下技術(shù)方案，工藝步驟為RNA提取緩沖液的成分有異硫氰酸胍2～4mol/L、檸檬酸鈉(pH 7.0)25～35mmol/L、十二烷基肌氨酸鈉0.5～1.0％(W/V)、β-巰基乙醇2～4％(V/V)；取預(yù)冷的提取緩沖液加入到離心管中，置于冰上；取霸王葉片、根系在裝有過量液氮的研缽中充分研磨，用預(yù)冷的藥匙將霸王葉片、根系粉末轉(zhuǎn)入離心管中，劇烈震蕩10min，冰上靜置5min；加入醋酸鈉、水飽和酚、體積比為20∶1～24∶1的氯仿和異戊醇混合溶液，搖勻，離心20min；加入70～80％的乙醇，洗滌RNA沉淀，室溫下干燥10min，即得成品。
文檔編號C07H21/02GK102453709SQ20101051058
公開日2012年5月16日 申請日期2010年10月19日 優(yōu)先權(quán)日2010年10月19日
發(fā)明者于婷婷 申請人:于婷婷