專利名稱：水楊酰苯胺類衍生物及其制法與用途的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及水楊酰苯胺類衍生物及其制備方法與用途。
背景技術：
水楊酰苯胺類衍生物是一類用途廣泛的化合物，它以水楊酸為母體，與帶有芳環(huán) 的苯胺類衍生物通過酰胺鍵結合。由于結構中含有不同取代的酰胺鍵，且非對稱單元是許 多酶抑制劑和生物模擬肽的常見結構特征，故多數(shù)具有生物活性。在農藥上應用廣泛，其中 許多可用作除草劑、殺蟲劑、殺菌劑和植物生長調節(jié)劑等，在醫(yī)藥、生物領域中也具有舉足 輕重的地位，有些是重要中間體，有些非對稱取代化合物還可以在手性拆分色譜柱中用作 CSP(手性固定相)。特別是2004年有科學家報道了從中國的一種傳統(tǒng)藥用植物——石竹 中分離到的幾種水楊酰苯胺衍生物分子，對人肝癌細胞H印-G2具有非常好的抑制活性(參 見Hsieh，P.W. ，J. Nat. Prod. 2004,67,1522-1527)。這種優(yōu)良的活性越來越引起廣大化學 家的重視。因此，水楊酰苯胺類化合物具有廣泛的應用前景。 肝癌是當今世界威脅人類健康的三大癌癥之一。據(jù)國際癌癥研究署的一項最新研 究表明，肝癌在全世界每年至少造成62萬人死亡。目前臨床上治療肝癌的藥物有5-氟尿 嘧啶、順鉑和a干擾素等，但是由于這些藥物具有很強的副作用，限制了它們在臨床上的 應用。因此開發(fā)低毒、有效的抗肝癌藥物具有非常重要的研究意義，水楊酰苯胺類衍生物具 有相當大的潛力。 在人體肝癌細胞中，存在一種表皮生長因子受體(Epidermal Growth Factor Rec印tor簡稱EGFR)，它在細胞的信號轉導以及癌細胞的分裂分化過程中扮演著非常重要 的角色。癌細胞的生長需要細胞內生長因子與這些受體的結合。本專利研究發(fā)現(xiàn)，水楊酰 苯胺類衍生物可以競爭性地與EGFR的活性部位結合，從而抑制了肝癌細胞中生長因子與 其受體的結合，進而能夠有效的抑制癌細胞的生長、分裂與分化，而達到治療肝癌的目的。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的在于提供一類新型水楊酰苯胺類衍生物以及它們的制備方法與用 途。 本發(fā)明的技術方案如下 —類水楊酰苯胺類衍生物，其特征是它有如下通式
<formula>formula see original document page 4</formula> 式中當& = R2 = H， R3 = CH3時，R4 = R5 = R6 = H ;或R4 = R5 = H，則R6 = F、 Cl、 CH3或CH(CH3)2 ;或R5 = R6 = H， R4 = Br ;R5 = H， F，或R5 = H， R4 = R6 = CI ;
當R2 = R3 = H， & = Br時，R5 = R6 = H，則R4 = Cl或F ;或R4 = R5 = H， R6 = F、 CH3或0CH3 ;或R4 = R6 = H， R5 = Cl或Br ;或R5 = H， R4 = R6 = Cl ; 當R2 = H， & = R3 = Br時，R4 = R6 = H， R5 = F或I ;或R5 = R6 = H， R4 = I或 0CH3。 —種制備上述的水楊酰苯胺類衍生物的方法，它由下列步驟組成 步驟1.將相應的取代水楊酸與等物質的量的相應的取代苯胺，溶于無水(^(:12
中，并且加入催化量的1_(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC HC1)作為催 化劑，加熱，攪拌，于4(TC下回流反應8h，得到澄清反應液； 步驟2.在反應液中加入200-300目的柱層析硅膠，攪拌下減壓蒸餾，以除去多余
的溶劑并使之充分混勻，將所得的硅膠奘柱進行柱層析，以乙酸乙酯石油醚=1 : 3的混
合溶劑作為洗脫液分離出目標產物； 步驟3.將得到的洗脫液減壓蒸餾出除去溶劑，純化即得到本發(fā)明的水楊酰苯胺 類衍生物。 上述的水楊酰苯胺類衍生物的制法，步驟1所述的無水CH2C12的用量可以是每毫 摩爾取代水楊酸加溶劑5ml。 上述的水楊酰苯胺類衍生物的制法，步驟1所述的1_(3-二甲氨基丙基)-3-乙基 碳二亞胺鹽酸鹽的用量可以是每毫摩爾取代水楊酸加1_(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二 亞胺鹽酸鹽100mg。 上述的水楊酰苯胺類衍生物的制法，步驟2所述的柱層析硅膠的用量可以是每毫 摩爾取代水楊酸用硅膠40ml。 研究發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的水楊酰苯胺類衍生物，與EGFR有很強的特異性結合能力，通過 與EGFR的結合從而阻斷肝癌細胞中生長因子與EGFR的結合，從而從根本上抑制癌細胞的 信號轉導和生長分裂，達到抗肝癌細胞生長的效果。因此本發(fā)明的水楊酰苯胺類衍生物可 以應用于制備抗肝癌藥物。
具體實施例方式
實施例一 2-羥基-6-甲基-N-苯基苯甲酰胺(化合物1)的制備
于50ml單口圓底燒瓶中加入lmmol 6_甲基水楊酸和lmmol苯胺，lOOmg的 1-(3-二甲氨基丙基)_3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDOHC1)作為催化劑，并加入5ml無水 CH2C12作為反應溶劑。用磁力攪拌器攪拌，并在油浴鍋中以4(TC加熱回流，反應8小時后， 得到澄清反應液。將40ml 200-300目的柱層析硅膠加入到反應液中，用旋轉蒸發(fā)儀減壓旋 轉，以除去多余的溶劑并使之充分混勻。用柱層析法分離目標產物，以乙酸乙酯石油醚= 1 : 3的混合溶劑進行洗脫。將得到的洗脫液再次用旋轉蒸發(fā)儀減壓蒸餾，除去溶劑，即得 到白色粉末狀目標化合物。產率77%。 Mpl93-195。C 'H NMR(300MHz， d6_DMS0) :2.31(s， 3H) ;6. 79(d， J = 4. 9Hz，2H) ;7. 14 (t， J = 7. 5Hz， 1H) ;7. 37 (t， J = 8. 0Hz， 2H) ;7.69(d，J = 7.5Hz，2H) ;7. 91(d，J = 8. 4Hz，lH) ;10.31(s，lH) ; 11. 93 (s， 1H) MS (ESI) :228. 3 (C14H14N02， [M+H]+). Anal. Calcdfor C14H13N02 :C， 73. 99 ;H， 5. 77 ;N， 6. 16 % ;Found :C， 73. 87 ;H， 5. 81 ; N，6. 19% . 實施例二 N- (2-溴苯基)-2-羥基-6-甲基苯甲酰胺(化合物2)的制備
制備方法同實施例一。2-Br苯胺代替苯胺，得到白色粉末狀目標化合物。產 率83 %。 Mpl65-167 °C .'H NMR(500MHz， d6_DMS0) :2.31(s，3H) ;6. 81-6. 84 (m， 2H); 7. 10-7. 13 (m， 1H) ;7. 40-7. 43 (m， 1H) ;7. 70 (dd，衛(wèi)=1. 5Hz， J2 = 8. 3Hz， 1H) ;7. 93 (dd， J！ =1. 5Hz， J2 = 8. 0Hz， 1H) ;8. 29(dd，衛(wèi)=1. 5Hz， J2 = 8. 3Hz， 1H) ;10. 68(s， 1H) ;11. 83(s， 1H).MS(ESI) :307. 2(C14H13BrN02， [M+H]+) Anal. Calcd for C14H12BrN02 :C， 54. 92 ;H， 3. 95 ; Br，26. 10 ;N，4. 58% ;Found :C，55. 01 ;H，3. 94 ;Br，26. 07 ;N，4. 59%
實施例三N_(4-氟苯基)-2-羥基-6-甲基苯甲酰胺(化合物3)的制備
<formula>formula see original document page 6</formula> 制備方法同實施例一。4-氟苯胺代替苯胺，得到白色粉末狀目標化合物。產
率81 %。 Mp 135-137 °C H NMR(300MHz， d6_DMS0) :2.30(s，3H) ;6.79(d， J = 4. 4Hz，
2H) ;7.21(t， J = 9.0Hz，2H) ;7. 69-7. 73 (m， 2H) ;7.89(d， J = 8.2Hz，lH) ;10.34(s，lH);
11.90(s，lH).MS(ESI) :246. 3(C14H13FN02， [M+H]+) Anal. Calcd for C14H12FN02 :C， 68. 56 ;H，
4. 93 ;F，7. 75 ;N， 5. 71% ;Found :C，68. 69 ;H，4. 89 ;F，7. 72 ;N，5. 69% 實施例四N_(4-氯苯基)-2-羥基-6-甲基苯甲酰胺(化合物4)的制備<formula>formula see original document page 6</formula> 制備方法同實施例一。以4-氯苯胺代替苯胺，得到白色粉末狀目標化合物。產 率80%。 Mp 158-160°C。
NMR(300MHz， d6_DMS0) :2.30(s，3H) ;6. 79 (d， J = 6. 4Hz， 2H);
7. 43 (dd， J! = 2. OHz， J2 = 6. 8Hz， 2H) ;7. 75 (dd，衛(wèi)=2. OHz， J2 = 6. 8Hz， 2H) ;7. 87 (d， J =
8. 4Hz) ;10.40(s，lH) ;11. 79 (s， 1H) MS (ESI) :262. 7 (C14H13C1N02， [M+H]+) Anal. Calcdfor C14H12C1N02 :C，64. 25 ;H，4. 62 ;Cl， 13. 55 ;N，5. 35 % ;Found :C，64. 31 ;H，4. 64 ;Cl， 13. 49 ;N， 5. 37% . 實施例五N_(2，4- 二氟苯基)-2-羥基_6_甲基苯甲酰胺(化合物5)的制備
<formula>formula see original document page 6</formula> 制備方法同實施例一。以2，4-二氟苯胺代替苯胺，得到黃色粉末狀目標化合物。 產率71%。 Mp 196-198°C。 'H NMR(300MHz， d6_DMS0) :2.30(s，3H) ;6. 81 (d， J = 5. OHz， 2H) ;7. 13 (t， J = 8. 6Hz， 1H) ;7. 35-7. 43 (m， 1H) ;7. 91 (d， J = 8. 4Hz， 1H) ;8. 05-8. 13 (m， 1H) ;10. 52(s，lH) ;11. 87(s， 1H). MS(ESI) :264. 2 (C14H12F2N02， [M+H]+). Anal. Calcd forC14HuF2N02 :C，63. 88 ;H，4. 21 ;F， 14. 43 ;N， 5. 32% ;Found :C，63. 97 ;H，4. 18 ;F， 14. 38 ;N，5. 29% 實施例六N_(2，4- 二氯苯基)-2-羥基_6_甲基苯甲酰胺(化合物6)的制備
制備方法同實施例一。以2，4-二氯苯胺代替苯胺，得到灰白色粉末狀目標化合
物。產率76%。 Mp 171-173°C。 NMR(500MHz， d6_DMS0) :2.31(s，3H) ;6. 85-6. 87 (m， 2H);
7.20(s，lH) ;7.26(d， J = 8.0Hz，lH) ;7. 88—7. 90 (m， 2H) ;10.10(s，lH) ;12.88(br s，lH).
MS(ESI) :297. 2(C14H12C12N02， [M+H]+) Anal. Calcd for C14HnCl2N02 :C， 56. 78 ;H， 3. 74 ;C1，
23. 94 ;N，4. 73% ;Found :C，56. 70 ;H，3. 78 ;C1，23. 99 ;N，4. 75% 實施例七2-羥基-6-甲基-N-對甲苯基苯甲酰胺(化合物7)的制備 制備方法同實施例一。以4-甲基苯胺代替苯胺，得到白色粉末狀目標化合物。產 率73%。 Mp 154-156 °C .'H NMR(300MHz, d6_DMS0) :2.29(s，3H) ;2.30(s，3H) ;6.78(d， J =4. 8Hz， 2H) ;7. 18 (d， J = 8. 3Hz， 2H) ;7. 57 (d， J = 8. 4Hz， 2H) ;7. 91 (d， J = 8. 4Hz， 1H); 10.24(s，lH) ;12. 02(s， 1H) ， MS(ESI) :242. 3 (C15H16N02， [M+H]+) Anal. Calcd for C15H15N02 : C，74. 67 ;H，6. 27 ;N， 5. 81% ;Found :C，74. 80 ;H，6. 22 ;N，5. 78% 實施例八2-羥基_N-(4-異丙基苯基)-6-甲基苯甲酰胺(化合物8)的制備
<formula>formula see original document page 7</formula>
制備方法同實施例一。以4-異丙基苯胺代替苯胺，得到灰白色粉末狀目標化合物。產率82%。 Mp 173-175 °C 'H NMR(300MHz， d6_DMS0) :1.21(d， J = 7.0Hz，6H); 2.30(s，3H) ;2. 86-2. 90(m， 1H) ;6. 77-6. 79 (m， 2H) ;7.24(d， J = 8.4Hz，2H) ;7.60(d， J = 8.6Hz，2H) ;7. 91(d，J = 8. 4Hz，lH) ;10.28(s，lH) ; 12. 04 (s， 1H) MS (ESI) :270. 3 (C17H2。N02， [M+H]+). Anal. Calcd for C17H19N02 :C，75. 81 ;H，7. 11 ;N， 5. 20% ;Found :C，75. 70 ;H，7. 16 ; N，5. 23% . 實施例九3-溴-N- (2-氯苯基)-2-羥基苯甲酰胺(化合物9)的制備
<formula>formula see original document page 8</formula>
制備方法同實施例一。以3-溴水楊酸代替6-甲基水楊酸，2_氯苯胺代替苯胺， 得到淺灰色粉末狀目標化合物。產率85%。 Mp 194-195。C.1！1 NMR(500MHz， d6_DMS0):
7. 02 (d， J = 8. 5Hz， 1H) ;7. 20 (t， J = 7. 7Hz， 1H) ;7. 40 (t， J = 7. 7Hz， 1H) ;7. 57 (d， J =
8. OHz， 1H) ;7. 62 (dd，衛(wèi)=2. 5Hz， J2 = 8. 5Hz， 1H) ;8. 13 (d， J = 2. 5Hz， 1H) ;8. 38 (d， J =8.2Hz，lH) ;10.85(s，lH) ; 12. 25 (s， 1H) MS (ESI) :327. 6 (C13H10BrClN02， [M+H]+). Anal. Calcd forC13H9BrClN02 :C，47. 81 ;H，2. 78 ;Br，24. 47 ;Cl， 10. 86 ;N，4. 29%;Found :C，47. 87 ; H，2. 76 ;Br，24. 49 ;Cl， 10. 83 ;N，4. 30% 實施例十3-溴_N-(2-氟苯基)-2-羥基苯甲酰胺(化合物10)的制備
<formula>formula see original document page 8</formula>
制備方法同實施例一。3-溴水楊酸代替6_甲基水楊酸，2-氟苯胺代替苯胺， 得到白色粉末狀目標化合物。產率70%。 Mp 181-182。C H NMR (500MHz ， d6_DMS0): 7. 02 (d， J = 8. 8Hz， 1H) ;7. 15 (t， J = 7. 7Hz， 1H) ;7. 44 (t， J = 7. 7Hz， 1H) ;7. 62(dd， J丄= 2. 5Hz， J2 = 8. 8Hz， 1H) ;7. 72 (d， J = 8. OHz， 1H) ;8. 13 (d， J = 2. 7Hz， 1H) ;8. 29 (d， J = 8.2Hz，lH) ;10.74(s，lH) ;12. 24 (s， 1H) MS (ESI) :311. 1 (C13H10BrFN02， [M+H]+) Anal. Calcd forC13H9BrFN02 :C， 50. 35 ;H， 2. 93 ;Br， 25. 77 ;F， 6. 13 ;N， 4. 52 % ;Found :C， 50. 39 ;H， 2. 92 ; Br，25. 75 ;F，6. 14 ;N，4. 54%
實施例十一 3-溴_N-(4-氟苯基)-2-羥基苯甲酰胺(化合物11)的制備
制備方法同實施例一。以3-溴水楊酸代替6_甲基水楊酸，4-氟苯胺代替苯 胺，得到白色粉末狀目標化合物。產率81%。 Mp 230-232。C H NMR(500MHz， d6_DMS0): 6.96(d， J = 8.8Hz，lH) ;7.22(t， J = 8.8Hz，2H) ;7.58(dd， ^ = 2. 5Hz， J2 = 8. 8Hz， 1H) ;7. 70-7. 73(m，2H) ;8.07(d， J = 2.5Hz，lH) ;10.42(s，lH) ; 11. 81 (s， 1H) MS (ESI): 311. l(C13H10BrFN02， [M+H]+). Anal. Calcd for C13H9BrFN02 :C，50. 35 ;H，2. 93 ;Br，25. 77 ;F， 6. 13 ;N，4. 52% ;Found :C，50. 32 ;H，2. 91 ;Br，25. 80 ;F，6. 12 ;N，4. 52%
實施例十二 3-溴_N-(3-氯苯基)-2-羥基苯甲酰胺(化合物12)的制備
制備方法同實施例一。以3-溴水楊酸代替6_甲基水楊酸，3-氯苯胺代替苯 胺，得到白色粉末狀目標化合物。產率77%。 Mp 238-240。C.1！1 NMR(500MHz， d6_DMS0): 6. 96 (d， J = 8. 8Hz， 1H) ;7. 43 (d， J = 8. 8Hz， 2H) ;7. 58 (dd，衛(wèi)=2. 5Hz， J2 = 8. 8Hz， 1H); 7.74(d， J = 8.8Hz，2H) ;8.03(d， J = 2.5Hz，lH) ;10.46(s，lH) ; 11. 70 (s， 1H) MS (ESI): 327. 6(C13H10BrClN02， [M+H]+). Anal. Calcd for C13H9BrClN02 :C，47. 81 ;H，2. 78 ;Br，24. 47 ; Cl， 10. 86 ;N，4. 29% ;Found :C，47. 76 ;H，2. 79 ;Br，24. 50 ;Cl， 10. 82 ;N，4. 30%
實施例十三3-溴_N-(3-溴苯基)-2-羥基苯甲酰胺(化合物13)的制備
<formula>formula see original document page 10</formula>
制備方法同實施例一。以3-溴水楊酸代替6-甲基水楊酸，3_溴苯胺代替苯胺， 得到淺灰色粉末狀目標化合物。產率74%。 Mp 236-237。C.1！1 NMR(500MHz， d6_DMS0): 6. 97 (d， J = 8. 5Hz， 1H) ;7. 55-7. 59 (m， 3H) ;7. 69 (d， J = 8. 8Hz， 2H) ;8. 03 (d， J = 2. 5Hz， 1H) ;10. 45(s，lH) ;11. 70(s， 1H). MS(ESI) :372. 0 (C13H10Br2N02， [M+H]+). Anal. Calcd forC13H9Br2N02 :C， 42. 08 ;H， 2. 44 ;Br， 43. 07 ;N， 3. 78 % ;Found :C， 42. 11 ;H， 2. 42 ;Br， 43. 05 ; N，3. 79% . 實施例十四3-溴_N-(2，4- 二氯苯基)_2_羥基苯甲酰胺(化合物14)的制備
<formula>formula see original document page 10</formula> 制備方法同實施例一。以3-溴水楊酸代替6_甲基水楊酸，2，4-二氯苯胺代替苯 胺，得到淺灰色粉末狀目標化合物。產率86%。 Mp 209-2irC H NMR(300MHz， d6_DMS0): 7.3(d， J = 8.8Hz，lH) ;7.49(dd，衛(wèi)=2. 4Hz， J2 = 8.8Hz，lH) ;7.63(dd，衛(wèi)=2. 7Hz， J2 = 8.6Hz，lH) ;7.75(d， J = 2.4Hz，lH) ;8. ll(d， J = 2.6Hz，lH) ;8.43(d， J = 8. 8Hz， 1H) ;10. 91(s，lH) ;12. 30(s， 1H). MS(ESI) :362. 0 (C13H9BrCl2N02， [M+H]+). Anal. Calcd forC13H8BrCl2N02 :C， 43. 25 ;H， 2. 23 ;Br， 22. 13 ;C1 ， 19. 64 ;N， 3. 88 % ;Found :C， 43. 27 ;H， 2. 25 ;Br， 22. 10 ;C1， 19. 62 ;N， 3. 86% . 實施例十五3-溴-2-羥基-N-對甲苯基苯甲酰胺(化合物15)的制備
制備方法同實施例一。以3-溴水楊酸代替6_甲基水楊酸，4_甲基苯胺代替苯胺， 得到白色粉末狀目標化合物。產率79%。 Mp 241-243°C 力NMR(300MHz， d6_DMS0) :2. 29(s， 3H) ;6. 96 (d， J = 8. 8Hz， 1H) ;7. 18 (d， J = 8. 2Hz， 2H) ;7. 58 (dd，衛(wèi)=2. 2Hz， J2 = 8. 8Hz， 3H) ;8.10(d， J = 2.他，1H) ;10.34(s，lH) ; 11. 95 (s， 1H) MS (ESI) :307. 2 (C14H13BrN02， [M+H] +). Anal. Calcd for C14H12BrN02 :C， 54. 92 ;H， 3. 95 ;Br， 26. 10 ;N， 4. 58 % ;Found :C， 54. 87 ;H，3. 96 ;Br，26. 13 ;N，4. 59% 實施例十六3-溴-2-羥基_N-(4-甲氧基苯基)苯甲酰胺(化合物16)的制備
制備方法同實施例一。以3-溴水楊酸代替6-甲基水楊酸，4_甲氧基苯胺代替苯 胺，得到淺灰色粉末狀目標化合物。產率75%。 Mp 232-234t: H NMR (300MHz ， d6_DMS0): 3.76(s，3H) ;6. 95(d， J = 9. 0Hz，3H) ;7. 56-7. 61 (m， 3H) ;8. 12 (d， J = 2. 6Hz， 1H) ;10.31(s， 1H) ;12. 04(s， IH).MS(ESI) :323. 2 (C14H13BrN03， [M+H]+) Anal. Calcd for C14H12BrN03 :C， 52. 20 ;H，3. 75 ;Br，24. 80 ;N，4. 35% ;Found :C，52. 16 ;H，3. 77 ;Br，24. 84 ;N，4. 37%
實施例十七3，5-二溴-N-(3-氟苯基)-2-羥基苯甲酰胺(化合物17)的制備
<formula>formula see original document page 11</formula>
制備方法同實施例一。以3，5-二溴水楊酸代替6_甲基水楊酸，3-氟苯胺代替苯 胺，得到棕色色粉末狀目標化合物。產率85%。 Mp 204-205t: H NMR(500MHz， d6_DMS0): 7.25(t， J = 7.9Hz，2H) ;7.68(dd， ^ = 5. 2Hz， J2 = 7.9Hz，2H) ;8.23(s，lH) ;8.39(s， 1H) ;10.66(s，lH) ;13.16(br s， 1H). MS (ESI) :390. 0 (C13H9Br2FN02， [M+H]+). Anal. Calcd forC13H8Br2FN02 :C， 40. 14 ;H， 2. 07 ;Br， 41. 08 ;F， 4. 88 ;N， 3. 60 % ;Found :C， 40. 22 ;H， 2. 06 ; Br，41. 01 ;F，4. 86 ;N， 3. 59% . 實施例十八3，5-二溴-2-羥基-N-(3-碘苯基)苯甲酰胺(化合物18)的制備
Br.
Br 制備方法同實施例一。以3，5-二溴水楊酸代替6_甲基水楊酸，3-碘苯胺代 替苯胺，得到棕色色粉末狀目標化合物。產率73%。 Mp 200-202。C H NMR(500MHz， d6-DMS0) :7. 47(dd， ^ = 2. 1Hz， J2 = 6. 8Hz，2H) ;7. 72(dd， ^ = 2. 2Hz， J2 = 6. 7Hz，2H); 8. 02(d， J = 2. 4Hz， 1H) ;8.26(d，J = 2. 1Hz，lH) ;10.72(s，lH) ;12.72(br s， 1H). MS (ESI): 497. 9(C13H9Br2IN02， [M+H]+) Anal. Calcd for C13H8Br2IN02 :C，31.42 ;H， 1. 62 ;Br，32. 16 ;1， 25. 54 ;N，2. 82% ;Found :C，31. 38 ;H， 1. 62 ;Br，32. 19 ;I，25. 56 ;N，2. 81%
實施例十九3，5-二溴-2-羥基-N-(2-碘苯基)苯甲酰胺(化合物19)的制備
<formula>formula see original document page 12</formula> 制備方法同實施例一。以3，5-二溴水楊酸代替6_甲基水楊酸，2-碘苯胺代替苯 胺，得到棕色色粉末狀目標化合物。產率71%。 Mp 166-168t: H NMR (500MHz ， d6_DMS0): 7.46(d， J = 8.9Hz，2H) ;7.71(d， J = 8.6Hz，2H) ;8.24(d， J = 1.8Hz，lH) ;8.37(d， J = 1.8Hz，lH) ;10.71(s，lH) ;13.00(br s， 1H) MS (ESI) :497. 9 (C13H9Br2IN02， [M+H]+) Anal. Calcdfor C13H8Br2IN02 :C，31. 42 ;H， 1. 62 ;Br，32. 16 ;I，25. 54 ;N， 2. 82 % ;Found :C，31. 46 ; H， 1. 63 ;Br， 32. 13 ;1， 25. 52 ;N， 2. 82% . 實施例二十3，5-二溴-2-羥基^-(2-甲氧基苯基)苯甲酰胺(化合物20)的制備
<formula>formula see original document page 13</formula>
Br 制備方法同實施例一。以3，5-二溴水楊酸代替6_甲基水楊酸，2_甲氧基苯胺代替 苯胺，得到棕色色粉末狀目標化合物。產率82X。Mp 153-155CH NMR (500MHz ， d6_DMS0): 3. 77(s，3H) ;6. 98(dd， J! = 2. 2Hz， J2 = 6. 8Hz，2H) ;7. 57(dd， ^ = 2. 2Hz， J2 = 6. 8Hz，2H); 8. 01(d，J = 2. 5Hz，lH) ;8. 31 (d， J = 2. 5Hz， 1H) ;10.56(s，lH) ;13.25(br s， 1H). MS (ESI): 402. 1 (C14H12Br2N03， [M+H]+). Anal. Calcd for C14HuBr2N03 :C，41. 93 ;H，2. 76 ;Br，39. 85 ;N， 3. 49% ;Found :C，42. 01 ;H，2. 75 ;Br，39. 81 ;N，3. 47% 實施例二十一 水楊酰苯胺類衍生物體外抗人體肝癌細胞H印-G2活性研究
采用MTT[3-(4，5)-雙甲基-2-噻唑-(2，5)-苯基溴化四氮唑藍]法來測定水楊 酰苯胺類衍生物對人體肝癌細胞株H印-G2的半數(shù)抑制濃度(ICs。，定義為當抑制率為50% 時的藥物濃度)。 (1)培養(yǎng)液(每升)的配制:RPMI-1640培養(yǎng)粉 一 袋(10. 4g) ， NaHC03 2. OOg， HEPES2. 38g，新生牛血清100ml，青霉素溶液(20萬U/m1)0. 5ml，鏈霉素溶液(20萬U/ ml)O. 5ml，加三蒸水溶解后，用5. 6X的NaHC03溶液調ra值至7. 2-7. 4，最后定容至1000ml。 過濾滅菌。 (2)D-Hanks緩沖液(每升)的配制NaCl 8. OOg， KC1 0. 40g， Na2HP04 12H20 0. 06g， KH2P04 0 . 06g， NaHC03 0. 35g。高壓滅菌。 (3)胰蛋白酶液的配制利用D-Hanks緩沖液配成濃度為0. 5%胰蛋白酶液。過濾 除菌。 (4)實驗藥液的配制將測試樣品用少量的三蒸水溶解配成儲備液，一般按實驗 最高濃度的IO倍配制儲備液。根據(jù)化合物溶解性不同，可用三蒸水直接溶解，或用少量 匿SO助溶，再加三蒸水溶解。匿SO在培養(yǎng)液中的濃度不宜過大，加藥后的每孔細胞懸液中 匿SO的終濃度一般不超過0. 05% -0. 1 % 。儲備液保存于_201:冰箱中備用。
(5)人體肝癌細胞H印-G2的培養(yǎng)為貼壁生長細胞，常規(guī)培養(yǎng)于RPMI-1640培養(yǎng) 液內(含10X小牛血清、100U/ml鏈霉素)，置37t:、5X C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每隔3_4天傳 代一次。傳代時先棄去原培養(yǎng)液，再用D-Hanks緩沖液洗滌；然后用0. 5%胰蛋白酶消化30 秒左右，加入少量新鮮培養(yǎng)液終止消化；吹打，使貼壁細胞從培養(yǎng)瓶壁上脫落下來；移取適 量至新鮮培養(yǎng)瓶中，再補充新鮮培養(yǎng)液至原體積(培養(yǎng)液體積約為培養(yǎng)瓶容量的1/10)。
(6)細胞孵育取對數(shù)生長期的2種腫瘤細胞，調細胞懸液濃度為1-1. 5X1()5個 m1—1。在96孔培養(yǎng)板中每孔加細胞懸液lOOiU，置37°C，5% C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。培養(yǎng)24h后，分別按設計加入藥液。 (7)加藥將測試藥液按照最終濃度的濃度梯度分別加入到各個孔中，每個濃度 設6個平行孔。實驗分為藥物試驗組(分別加入不同濃度的測試藥)、對照組(只加培養(yǎng)液 和細胞，不加測試藥)和空白組(只加培養(yǎng)液，不加細胞和測試藥)。將加藥后的96孔板置 于371:，5% C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h。陽性對照藥物的活性按照測試樣品的方法測定。
(8)存活細胞的測定在培養(yǎng)了48h后的96孔板中，每孔加MTT 40 iU (用D-Hanks 緩沖液配成4mg/ml)。在37。C放置4h后，移去上清液。每孔加150 y 1 DMSO，振蕩5min，使 formazan結晶溶解。最后，利用自動酶標儀在570nm波長處檢測各孔的光密度(OD值)。
抑制率的計算細胞生長的抑制率按照下列公式計算 生長抑制率=(l-存活率)X100%= [l-(OD實驗-OD空白)/(OD對照-OD空白)]X100% (OD實驗表示測試藥物組的平均光密度，OD對gg表示對照組的平均光密度，OD空自表示對照組的 平均光密度)。 半數(shù)抑制濃度(IC5。)定義為當50%的腫瘤細胞存活時的藥物濃度。根據(jù)測定的光 密度(OD值)，制作細胞生長抑制率的標準曲線，在標準曲線上求得其對應的藥物濃度。測 得的ICs。見表l所示 表1本發(fā)明所列水楊酰苯胺類化合物對H印-G2細胞的抑制IC5。值(y M)
ipoundIC50闊CompoundICsoOiM)
14.2 ±0.12119.5 ± 0.25
24.5 ±0.131210.0 ±0.21
320.2 ± 0.421322.9 ±0.86
420.9 ±0.111420.0 ±0.18
25.2 ± 0.271529.2 ± 0.37
622.1 ±0.821617.0 ±0.21
718.2 ±0.211715.5±0.15
829.8 ±0.511826.5 ± 0.23
919.1 ±0.761920.5 ±0.12
1018.7 ±0.552015.6 ±0.33
陽性對照五氟尿嘧啶IC5oOiM)/H印-G2: 16.2 土 0.08 實施例二十二 水楊酰苯胺類衍生物體外抑制表皮生長因子受體EGFR活性研究
抑制表皮生長因子受體(EGFR)活性實驗EGFR購自Sigma-Aldrich公司(St. Louis， Mo， USA)，用DMSO和水(v/v，l : 1)的混合溶劑配制各種濃度的待測化合物。，將 含有EGFR(25 ii L， 10kU L—1)和各種濃度的待測化合物(25 y L)的混合溶液放置在化驗 盤(96-well)中，37。C下預培養(yǎng)lh。再加入含有EGFR(500mM)的H印es緩沖溶液(0. 2ml，lOOmM ;pH = 6. 8)和濃度為0. 002%的酚紅指示劑，并在37。C下進行培養(yǎng)。反應時間通過微 盤讀卡器(570nm)來測量，這需要形成充足的碳酸銨，使H印es緩沖溶液的pH值從6. 8提 高到7. 7，測試終點依據(jù)酚紅指示劑的顏色變化。
測得的IC5。見表2所示 表2本發(fā)明所列水楊酰苯胺類化合物對EGFR的抑制IC5。值(y M)
CompoundIC50闊CompoundIC50 (nM)
10.63112.68
20.921213.04
340.171313.70
4>50149.66
>5015>50
631,0916>50
734.6717〉50
8>501812.19
94.371928.53
1022.192022.39
陽性對照erlotinibIC50 (nM) / EGFR: 0.3權利要求
一類新型水楊酰苯胺類衍生物，其特征是它有如下通式式中當R1＝R2＝H，R3＝CH3時，R4＝R5＝R6＝H；或R4＝R5＝H，則R6＝F、Cl、CH3或CH(CH3)2；或R5＝R6＝H，R4＝Br；R5＝H，F(xiàn)，或R5＝H，R4＝R6＝Cl；當R2＝R3＝H，R1＝Br時，R5＝R6＝H，則R4＝Cl或F；或R4＝R5＝H，R6＝F、CH3或OCH3；或R4＝R6＝H，R5＝Cl或Br；或R5＝H，R4＝R6＝Cl；當R2＝H，R1＝R3＝Br時，R4＝R6＝H，R5＝F或I；或R5＝R6＝H，R4＝I或OCH3。F200910233731XC0000011.tif
2. —種制備權利要求1所述的水楊酰苯胺類衍生物的方法，其特征是它由下列步驟組成步驟1.將相應的取代水楊酸與等物質的量的相應的取代苯胺，溶于無水CH2C12中，并 且加入催化量的1_(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC HC1)作為催化劑， 加熱，攪拌，于4(TC下回流反應8h，得到澄清反應液；步驟2.在反應液中加入200-300目的柱層析硅膠，攪拌下減壓蒸餾，以除去多余的溶 劑并使之充分混勻，將所得的硅膠奘柱進行柱層析，以乙酸乙酯石油醚=1 : 3的混合溶 劑作為洗脫液分離出目標產物；步驟3.將得到的洗脫液減壓蒸餾出除去溶劑，純化即得到本發(fā)明的水楊酰苯胺類衍 生物。
3. 根據(jù)權利要求2所述的水楊酰苯胺類衍生物的制法，其特征是步驟1所述的無水 CH2C12的用量可以是每毫摩爾取代水楊酸加溶劑5ml。
4. 根據(jù)權利要求2所述的水楊酰苯胺類衍生物的制法，其特征是步驟l所述的 1_(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽的用量可以是每毫摩爾取代水楊酸加 1- (3- 二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽100mg。
5. 根據(jù)權利要求2所述的水楊酰苯胺類衍生物的制法，其特征是步驟2所述的柱層 析硅膠的用量可以是每毫摩爾取代水楊酸用硅膠40ml。
6. 權利要求1所述的水楊酰苯胺類衍生物在制備抗肝癌藥物中的應用。
全文摘要
一類水楊酰苯胺類衍生物，它有如下通式式中R1＝H或Br；R2＝H或Br；R3＝H或CH3；R4＝F，Cl，Br或I；R5＝F，Cl，Br或I；R6＝CH3，OCH3，CH(CH3)2或鹵素。本發(fā)明的水楊酰苯胺類衍生物對人體肝癌細胞株(HEP-G2)和肝癌細胞中表皮生長因子(EGFR)有明顯的抑制作用，因此本發(fā)明的水楊酰苯胺類衍生物可以在制備抗肝癌藥物中應用。本發(fā)明公開了其制法。
文檔編號C07C235/64GK101698651SQ20091023373
公開日2010年4月28日 申請日期2009年10月23日 優(yōu)先權日2009年10月23日
發(fā)明者朱海亮, 楊瑩, 石磊, 祝禎偉 申請人:南京大學中國醫(yī)藥城研發(fā)中心