專利名稱：：嘧啶-2，4-二胺衍生物及其作為jak2激酶抑制劑的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明一般地涉及抑制蛋白激酶活性的化合物和組合物及其相關(guān)的方法。相關(guān)領(lǐng)域的描述Janus激酶(JAKs)屬于激酶家族，在它們中有4種存在于哺乳動物中(JAKl,JAK2，JAK3和TYK2)，它們在來自胞外細胞因子，包括白細胞介素，干擾素以及大量激素的信號傳導中整合(Aringer,M.等，LifeSci,1999.64(24):p.2173-86;Briscoe,J.等，PhilosTransRSocLondBBiolSci,1996.351(1336):p.167—71;Ihle，J.N.,SeminImmunol,1995.7(4):p.247-54;Ihle，J.N.，PhilosTransRSocLondBBiolSci，1996.351(1336):p.159-66;Finnbach-Kraft，I.等，Oncogene,1990.5(9):p.1329-36;Harpur，A.G.等，Oncogene,1992.7(7):p.1347-53;Rane，S.G.和E.P.Reddy，Oncogene,1994.9(8):p.2415-23;Wilks,A.F,，MethodsEnzymol,1991.200:p.533-46)。這些非-受體酪氨酸激酶與各種細胞因子受體結(jié)合并且通過使STAT(信號轉(zhuǎn)導物和轉(zhuǎn)錄激活子)分子磷酸化起將來自胞外配體-受體結(jié)合的信號轉(zhuǎn)導入胞質(zhì)的作用，然后進入核并且直接轉(zhuǎn)錄涉及生長和增殖的各種耙基因(Briscoe,J.等；Ihle，J.N.(1995);Ihle，J.N.(1996);Rawlings，J.S.，K.M.Rosler和D.A.Harrison,JCellSci，2004.117(Pt8):p.1281-3)。這些激酶在細胞存活中的重要性由動物模型中JAKs缺失通常伴隨免疫缺乏和不能生活這一事實而顯而易見(Aringer，M.等)。JAK家族酶的特征在于大量JAK同源性(JH)結(jié)構(gòu)域，包括羧基-末端蛋白酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域(JH1)和相鄰激酶-樣結(jié)構(gòu)域(JH2)，認為它們調(diào)節(jié)JH1結(jié)構(gòu)域的活性(Harpur，A.G.等)。4種JAK同種型通過特異性結(jié)合某些細胞因子受體并且活化下游基因亞組轉(zhuǎn)導不同的信號。例如，JAK2結(jié)合對白細胞介素-3(Silvennoinen，0.等，ProcNatlAcadSciUSA,1993.90(18):p.8429-33)，紅細胞生成素(Witthuhn,B.A.等，Cell,1993.74(2):p.227-36),粒細胞集落刺激因子(Nicholson，S.E.等，ProcNatlAcadSciUSA,1994.91(8):p.2985-8)和生長激素(Argetsinger,L.S.等，Cell,1993.74(2):p.237-44)具有特異性的細胞因子受體。JAK家族酶已經(jīng)成為各種血液和免疫病癥的令人關(guān)注的一組耙標；JAK2目前作為瘤形成疾病，尤其是白血病和淋巴瘤(Benekli，M.等，Blood,2003.101(8):p.2940-54;Peeters，P.等，Blood,1997.90(7):p.2535-40;Reiter，A.等，CancerRes，2005.65(7):p.2662-7;Takemoto，S.等，ProcNatlAcadSciUSA，1997.94(25):p.13897-902)和實體瘤(Walz，C.等,JBiolChem，2006.281(26):p.18177-83)和其它骨髓增殖性疾病，諸如真性紅細胞增多癥(Baxter，E.J.等，Lancet,2005.365(9464):p.1054-61;James，C.等，Nature,2005.434(7037):p.1144-8;Levine，R.L.等，CancerCell，2005.7(4):p.387-97;Shannon,K.和R.A.VanEtten，CancerCell,2005.7(4):p.291-3)的有活力的耙標特別處于研究中，這是因為其下游效應(yīng)基因活化涉及增殖。還已知JAK2在血液惡性胂瘤中突變，使得它不再需要結(jié)合細胞因子受體的配體，而是處于組成型活化狀態(tài)。這種情況可以通過JAK2基因與編碼ETV6，BCR或PCM1蛋白的基因(Peeters，P.等;Reiter，A.等;Griesinger,F.等，GenesChromosomesCancer,2005.44(3):p.329-33;LacroniqueV.等，Science,1997.278(5341):p.1309-12)之間的易位發(fā)生，從而生成與在慢性髓性白血病中觀察到的BCR-ABL蛋白類似的致瘤融合蛋白。JAK2的過度活化還可以通過JAK2序列自身的突變而發(fā)生；例如，骨髄增生性疾病真性紅細胞增多癥涉及導致617位氨基酸上(JAK2V617F)發(fā)生纈氨酸-苯丙氨酸取代的點突變(Walz，C.等)。治療人體惡性腫瘤的小分子JAK2抑制劑因其與瘤形成疾病和骨髓增生病相關(guān)并且在其中失調(diào)而具有重要意義。基于涉及大量人體惡性腫瘤，所以對設(shè)計治療癌癥和其它JAK2激酶蛋白介導和/或相關(guān)疾患的特異性和選擇性抑制劑存在需求。本發(fā)明滿足了這些需求并且提供了額外的相關(guān)優(yōu)點。簡述本發(fā)明一般地涉及化合物(在本文中也稱作嘧啶-2，4-二胺衍生物)和包含所述化合物的藥物組合物，其中該化合物具有如下一般結(jié)構(gòu)(I)或(II):包括其立體異構(gòu)體和藥學上可接受的鹽，其中R1，W1，W2，X1，x2，y1，y2和z如下文所定義。這些化合物具有超過廣泛治療應(yīng)用的用途，并可以用于治療JAK2蛋白激酶介導和/或相關(guān)(至少是部分)的疾病，諸如癌癥。因此，在本發(fā)明在一個方面中，將本文所述的化合物配制成用于對有此需要的對象給藥的藥學上可接受的組合物。8本發(fā)明在另一個方面中提供了治療或預防JAK2蛋白激酶-介導的疾病，諸如癌癥的方法，該方法包括對有此需要的患者給予治療有效量的本文所述的化合物或包含該化合物的藥學上可接受的組合物。另一個方面涉及抑制生物樣品中的JAK2蛋白激酶活性，該方法包括使所述的生物樣品接觸本文所述的化合物或包含該化合物的藥學上可接受的組合物。另一個方面涉及抑制患者JAK2蛋白激酶活性的方法，該方法包括對患者給予本文所述的化合物或包含該化合物的藥學上可接受的組合物。本發(fā)明的這些和其它方面在參照下文的詳細描述時顯而易見。為了達到這一目的，本文引述了更具體地在本發(fā)明各方面中列出的某些專利和其它對比文件。將這些對比文件各自完整地引入本文作為參考。詳細描述本發(fā)明的一般方面提供了用作JAK2蛋白激酶抑制劑的化合物及其組合物和方法。本發(fā)明的化合物具有式(I)或(II)中所示的結(jié)構(gòu)包括其立體異構(gòu)體和藥學上可接受的鹽，其中Z為CH或N;W1和W2獨立地為直接鍵，-C(=0)-或-O(CH2)n-;f為-H，-CF3，-0CF3，-0CHF2,-0CH3,-CH3，-0H，-N02，-NH2或鹵素；X'和X2獨立地為-H，-CF3，-0CF3,-0CHF2，-0CH3，-CH3，-OH,-N02，-NH2，卣素或<formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula>其中Q為0或N且R不存在或R為-d—6烷基，條件是X'或f之一為<formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula>丫1和丫2獨立地為-H，-CN，囟素或被-CN取代的Cw烷基，條件是yi和Y'不均為-H;且n為1,2或3。除非另作陳述，否則本說明書和權(quán)利要求中使用的下列術(shù)語具有如下所述的含義"囟素"意旨氟，氯，溴或碘且一般為氟或氯。"d-6烷基"意旨1-6個碳原子的飽和直鏈或支鏈飽和或不飽和環(huán)狀或無環(huán)烴基，而"CH烷基"具有相同含義，但包含1-4個碳原子。飽和直鏈或支鏈d-4烷基和d-6烷基的有代表性的實例包括甲基，乙基，正-丙基，異丙基，正-丁基，異丁基，仲-丁基和叔-丁基，且就Cw烷基而言進一步包括正-戊基，正-己基和相應(yīng)的支化的鏈。有代表性的飽和環(huán)狀烷基包括環(huán)丙基，環(huán)丁基，環(huán)戊基，-(^環(huán)戊基，環(huán)己基等；而不飽和環(huán)狀烷基包括環(huán)戊烯基，環(huán)己烯基等。不飽和烷基在相鄰碳原子之間包含至少一個雙鍵或三鍵(分別稱作"烯基"或"炔基")。有代表性的直鏈和支鏈烯基包括乙烯基，丙烯基，1-丁烯基，2-丁烯基，異丁烯基，l-戊烯基，2-戊烯基，3-甲基-l-丁烯基，2_甲基-2-丁烯基，2，3-二甲基-2-丁烯基等；而有代表性的直鏈和支鏈炔基包括乙炔基，丙炔基，l-丁炔基，2-丁炔基，l-戊炔基，2-戊炔基，3-甲基-l-丁炔基等。在上述結(jié)構(gòu)(I)和(II)的更具體的方面中，Z為CH且所述的化合物由如下結(jié)構(gòu)(III)或(IV)表示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>(川)(iv)包括其立體異構(gòu)體和藥學上可接受的鹽。在上述結(jié)構(gòu)(i)和(n)的其它方面中，z為n且所述的化合物由如下結(jié)構(gòu)(V)或(VI)表示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>(vi)包括其立體異構(gòu)體和藥學上可接受的鹽。在上述結(jié)構(gòu)(III)和(V)的更具體的方面中，t為哌溱基，R為甲基且w1和w2均為直接鍵并且所述的化合物分別由結(jié)構(gòu)(vii)和(vin)表示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>(vii)(vm)在結(jié)構(gòu)(VII)和(VIII)的更具體的實施方案中，t為-F且所述的、(IX)(X)在結(jié)構(gòu)(vii)和(vni)的其它具體的實施方案中，x2為-h且所述的化合物分別由結(jié)構(gòu)(xi)和(xii)表示(XI)(XII)在結(jié)構(gòu)(ni)的其它具體的實施方案中，x2為哌溱基，R為甲基,w2為-0(ch2)「且w1為直接鍵，并且所述的化合物由結(jié)構(gòu)(xiii)表示:(x川)在結(jié)構(gòu)(xni)的額外具體實施方案中，xi為-ocH3。在結(jié)構(gòu)(in)的其它具體的實施方案中，t為哌溱基，w1為-C(-0)-且W2為直接鍵，并且所述的化合物由結(jié)構(gòu)(XIV)表示在結(jié)構(gòu)的額外具體實施方案中(XIV)，f為-H且R為甲基或R為環(huán)己基。在結(jié)構(gòu)(I)，(II),(III)，(IV)，(V)，(VI),(VII)，(VIII)，(IX)，(X)，(XI)，(XII),(XIII)和(XIV)的具體實施方案中,Y'和yz為卣素，且更具體地說，f為氯且Y'為氟。在結(jié)構(gòu)(I)，(III),(V)，(VII),(VIII)，(IX)，(X),(XI)，(XII)的具體實施方案中，W和Y'為-CN和卣素，且更具體地說，Y1為-CN和f為氟。在結(jié)構(gòu)(i),(in)，(iv)，(v)，(vi)，(vn),(vin)，(ix)，(x)，(xi)，(xn)，(xni)和(xiv)的具體實施方案中，y'和Y卩為-H和被-CN取代的d—4烷基，且更具體地說，Yi為-CH2CN和Y殳為-H。在結(jié)構(gòu)(II)，(IV)和(VI)的具體實施方案中，r為-F或W為-CF3。具有相同分子式，但在性質(zhì)或其原子鍵合順序或其原子空間排列方面不同的化合物稱作"異構(gòu)體"。在其原子空間排列方面不同的異構(gòu)體稱作"立體異構(gòu)體"。彼此為非鏡像的立體異構(gòu)體稱作"非對映異構(gòu)體"，且彼此為不能重疊的鏡像的那些稱作"對映異構(gòu)體"。當化合物帶有不對稱中心時，例如它與4個不同的基團鍵合，對映異構(gòu)體對是可能的。對映異構(gòu)體的特征在于其不對稱中心的絕對構(gòu)型并且描述為Cahn和Prelog的R-和S-順位規(guī)則(Cahn，R.,Ingold，C.和Prelog,V.Angew.Chem.78:413-47，1966;Angew.Chem.Internat.Ed.Eng.5:385-415，511，1966)或分子沿偏振光平面旋轉(zhuǎn)并且命名為右旋或左旋(即分別為(+)或(-)-異構(gòu)體)的方式。手性化合物可以作為各對映異構(gòu)體或其混合物存在。包含等比例對映異構(gòu)體的混合物稱作"外消旋混合物"。本發(fā)明的化合物可以具有一個或多個不對稱中心；這類化合物由此可以作為各(R)-或(S)-立體異構(gòu)體或其混合物產(chǎn)生。除非另作陳述，否則本說明書和權(quán)利要求中描述或命名的具體化合物用以包括各對映異構(gòu)體及其混合物，否則就是外消旋混合物。用于測定立體異構(gòu)體立體化學并且分離它們的方法為本領(lǐng)域眾所周知的(參見AdvancedOrganicChemistry的Ch.4中的討論，第4版，March,J.，JohnWileyandSons,NewYorkCity,1992)。本發(fā)明的化合物可以表現(xiàn)出互變異構(gòu)和結(jié)構(gòu)異構(gòu)現(xiàn)象。本發(fā)明包括具有能夠調(diào)節(jié)MK2-2激酶活性的任意互變體或結(jié)構(gòu)異構(gòu)體形式及其混合物，并且不限于任意一種互變體或結(jié)構(gòu)異構(gòu)體形式。關(guān)注本發(fā)明的化合物可以被生物體，諸如人體內(nèi)的酶代謝成可以調(diào)節(jié)蛋白激酶活性的代謝物。這類代謝物屬于本發(fā)明的范圍。照此可以將本發(fā)明的化合物或其藥學上可接受的鹽對患者，包括人給藥或可以以藥物組合物的形式給予，其中將上述物質(zhì)與合適的載體或賦形劑混合。例如，可以按照最新版Remington'sPharmacologicalSciences,MackPublishingCo.,Easton，PA確定用于配制和給予藥物的技術(shù)。"藥物組合物"意旨本文所述的化合物中的一種或多種或其藥學上可接受的鹽與其它化學成分，諸如藥學上可接受的賦形劑的混合物。藥物組合物的目的在于有利于對生物體給予化合物。"藥學上可接受的賦形劑"意旨加入到藥物組合物中以便進一步有利于化合物給藥的惰性物質(zhì)。賦形劑的實例包括碳酸鉤，磷酸釣，各種糖和各種類型的淀粉，纖維素衍生物，明膠，植物油和聚乙二醇類，但不限于它們。"藥學上可接受的鹽"意旨保持母體化合物生物有效性和特性的那些鹽。這類鹽可以包括(l)通過使母體化合物的游離堿與無機酸或與有機酸反應(yīng)獲得的酸加成的鹽，所述的無機酸諸如鹽酸，氫溴酸，硝酸，磷酸，硫酸和高氯酸等，所述的有機酸諸如乙酸，草酸，(D)-或(L)-蘋果酸，馬來酸，曱磺酸，乙磺酸，對甲苯磺酸，水楊酸，酒石酸，檸檬酸，琥珀酸或丙二酸等，優(yōu)選鹽酸或(L)-蘋果酸；或(2)當母體化合物中存在的酸性質(zhì)子被金屬離子，例如堿金屬離子，堿土金屬離子或鋁離子取代時形成的鹽；或與有機堿，諸如乙醇胺，二乙醇胺，三乙醇胺，氨丁三醇，N-甲基葡糖胺等形成的配位化合物。"治療有效量"意旨將所治療病癥的一種或多種癥狀緩解至一定程度給予的化合物用量。就治療癌癥而言，治療有效量意旨具有如下作用的用量(l)減小腫瘤尺寸；(2)抑制瘤轉(zhuǎn)移；(3)抑制腫瘤生長；和/或(4)緩解與癌癥相關(guān)的一種或多種癥狀。本文所用的術(shù)語"JAK2蛋白激酶-介導的疾患"或"疾病"意旨已知JAK2蛋白激酶起作用的任意疾病或其它有害情況。術(shù)語"JAK2蛋白激酶-介導的疾患"或"疾病"還意旨通過使用JAK2蛋白激酶抑制劑治療緩解的那些疾病或疾患，包括在下文中更詳細討論的癌癥。本文所用的"給予"或"給藥"意旨為預防或治療蛋白激酶相關(guān)病癥對生物體遞送本發(fā)明的化合物或其藥學上可接受的鹽或包含本發(fā)明化合物或本發(fā)明其藥學上可接受的鹽的藥物組合物。合適的給藥途徑包括，但不限于口服，直腸，跨粘膜或腸給藥或肌內(nèi)，皮下，髓內(nèi)，鞘內(nèi)，直接心室內(nèi)，靜脈內(nèi)，玻璃體內(nèi)，腹膜內(nèi)，鼻內(nèi)或眼內(nèi)注射。在某些實施方案中，給藥途徑為口服和靜脈內(nèi)?？蛇x擇地，可以以非全身方式的局部方式給予所述的化合物，例如通過將化合物通常以長效或緩釋制劑的形式直接注入實體瘤。此外，可以以靶向遞送系統(tǒng)，例如以包被了腫瘤特異性抗體的脂質(zhì)體形式給予所述的化合物。在這種方式中，所述的脂質(zhì)體可以靶向至腫瘤并且選擇性地被胂瘤吸收。可以通過本領(lǐng)域眾所周知的方法，例如通過常規(guī)的混合，溶解，制粒，制錠，磨細，乳化，包嚢，截留或凍干方法制備本發(fā)明的藥物組合物。可以按照任意常規(guī)方式，使用包含有利于將活性化合物加工成可以在藥學上使用的制劑的一種或多種生理學可接受的載體配制本發(fā)明使用的藥物組合物。適當?shù)闹苿┮蕾囉谶x擇的給藥途徑。就注射劑而言，可以將本發(fā)明的化合物配制成水溶液，優(yōu)選在生理相容性緩沖液，諸如Hanks溶液，林格液或生理鹽水緩沖液中。就跨粘膜給藥而言，適合于透過屏障的穿透劑用于制劑。這類穿透劑為本領(lǐng)域一般公知的。就口服給藥而言，可以通過將活性化合物與本領(lǐng)域眾所周知的藥學上可接受的載體合并配制化合物。這類載體能夠?qū)⒈景l(fā)明的化合物配制成片劑，丸劑，錠劑，糖錠，膠嚢，液體，凝膠，糖漿劑，淤漿，混懸液等，以便由患者口服攝入?？梢允褂霉腆w賦形劑，任選如果需要研磨所得混合物并且在加入其它合適的助劑后加工顆?；旌衔镏苽溆糜诳诜?yīng)用的藥物制劑，從而得到片劑或錠鋅。有用的賦形劑特別為填充劑，諸如糖類，包括乳糖，蔗糖，甘露糖醇或山梨醇；纖維素制品，諸如，例如玉米淀粉，小麥淀粉，稻米淀粉和馬鈴薯淀粉；和其它材料，諸如明膠，黃蓍樹膠，甲基纖維素，羥丙基甲基-纖維素，羧甲基纖維素鈉和/或聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。如果需要，可以加入崩解劑，諸如交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮，瓊脂或藻酸。還可以使用諸如藻酸鈉這類鹽。可以給錠芯提供合適的包衣層。為了這一目的，可以使用濃糖溶液，其可以任選包含阿拉伯樹膠，滑石粉，聚乙烯吡咯烷酮，卡波普凝膠，聚乙二醇，和/或二氧化鈦，漆溶液和合適的有機溶劑或溶劑混合物?？梢詫⑷玖匣蛏丶尤氲狡瑒┗蝈V劑包衣層中以便鑒別或表征活性化合物劑量的組合。可以口服使用的藥物組合物包括由明膠構(gòu)成的推入配合式膠嚢和由明膠和增塑劑，諸如甘油或山梨醇構(gòu)成的軟密封膠嚢。推入配合式膠嚢可以包含活性組分與填充劑，諸如乳糖，粘合劑，諸如淀粉和/或潤滑劑，諸如滑石粉或硬脂酸鎂和任選的穩(wěn)定劑的混合物。在軟膠嚢中，可以將活性化合物溶于和懸浮于合適的液體中，諸如脂肪油，液體石蠟或液體聚乙二醇。在這些制劑中還可以加入穩(wěn)定劑。還可以使用的藥物組合物包括硬膠嚢?？梢詫⒛z嚢或丸劑包裝入棕色玻璃或塑料瓶以使活性化合物避光。優(yōu)選將包含活性化合物膠嚢制劑的容器儲存在受控的室溫下(15-30°C)。為了通過吸入給藥，可以便利地通過任意數(shù)量的現(xiàn)存技術(shù)將本發(fā)明使用的化合物以噴霧劑形式遞送。另外，噴霧劑可以使用加壓藥包或噴霧器和合適的拋射劑，例如，但不限于二氯二氟甲烷，三氯氟曱烷，二氯四-氟乙烷或二氧化碳。就加壓氣溶膠而言，可以通過安裝用于遞送計量用量的閥門控制劑量單位。例如，可以配制包含化合物與適當粉末基質(zhì)，諸如乳糖或淀粉的粉末混合物的用于吸入器或吹入器的明膠膠嚢和藥筒?？蛇x擇地，可以以不使用拋射劑的氣溶膠形式遞送化合物。還可以為非腸道給藥，例如通過快速濃注或連續(xù)輸注配制化合物。用于注射的制劑可以以例如在安瓿或多劑量容器中的添加了防腐劑的單位劑型存在。這些組合物可以采用諸如栓劑，在油或水媒介物中的溶液或乳劑這類形式并且可以包含配制物質(zhì)，諸如懸浮劑，穩(wěn)定劑和/或分散劑。用于非腸道給藥的藥物組合物包括水溶性形式，諸如，但不限于活性化合物的鹽的水溶液。另外，可以制備在親脂性媒介物中的活性化合物的混懸液。合適的親脂性媒介物包括脂肪油，諸如芝麻油，合成脂肪酸酯類，諸如油酸乙酯和甘油三酯類或諸如脂質(zhì)體這類材料。含水的注射混懸液可以包含增加該混懸液粘度的物質(zhì)，諸如羧甲基纖維素鈉，山梨醇或葡聚糖。該混懸液可以任選還包含合適的穩(wěn)定劑和/或增加化合物溶解度的試劑，以便能夠制備高濃縮溶液。可選擇地，活性組分可以為在使用前用合適的媒介物，例如無菌無熱原水溶解的粉末形式。17還可以使用例如常規(guī)栓劑基質(zhì)，諸如可可脂或其它甘油酯類的將化合物配制成直腸用組合物，諸如栓劑或保留灌腸劑。除上述制劑外，還可以將化合物配制成長效制劑?？梢酝ㄟ^植入(例如皮下或肌內(nèi))或通過肌注給藥這類長效制劑?？梢允褂煤线m的聚合物或疏水性材料(例如含藥理學可接受的油的乳劑)，離子交換樹脂或作為微溶性衍生物，諸如，但不限于微溶性鹽微這種給藥途徑配制本發(fā)明的化合物。用于本發(fā)明化合物的藥用載體的非限制性實例為包含千醇，非極性表面活性劑，與水易溶混的有機聚合物的共溶劑系統(tǒng)和水相，諸如VPD共溶劑系統(tǒng)。VPD為由在無水乙醇中的體積構(gòu)成的3。/。w/v節(jié)醇，8%w/v非極性表面活性劑聚山梨醇酯80和65。/。w/v聚乙二醇300的溶液。VPD共溶劑系統(tǒng)(VPD:D5W)由用5%在水溶液中的葡萄糖按照1:1稀釋的VPD組成。該共溶劑系統(tǒng)充分溶解化合物并且其自身在全身給藥時產(chǎn)生低毒性。這類共溶劑系統(tǒng)的比例可以自然明顯地改變，而不會破壞其溶解度和毒性特性。此外，可以改變共溶劑系統(tǒng)的組成例如，可以使用其它低毒性非表面活性劑，而不是聚山梨醇酯80，可以改變聚乙二醇的部分大小，其它生物相容性聚合物可以替代聚乙二醇，例如聚乙烯吡咯烷酮和其它糖類或多糖類可以取代葡萄糖?？蛇x擇地，可以使用用于藥物化合物的其它遞送系統(tǒng)。脂質(zhì)體和乳劑為疏水性藥物遞送媒介物或載體的眾所周知的實例。此外，還可以使用某些有機溶劑，諸如二甲亞砜，盡管通常要負擔較大的毒性。另外，可以使用緩釋系統(tǒng)，諸如包含治療劑的固體疏水性聚合物的半透性基質(zhì)遞送化合物。已經(jīng)確立了各種緩釋材料并且為本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知。緩釋膠嚢根據(jù)其化學性質(zhì)的不同可以釋放化合物幾周到IOO天以上。本文的藥物組合物還可以包含合適的固體或凝膠相載體或賦形劑。這類載體或賦形劑的實例包括，但不限于碳酸鈣，磷酸鈣，各種糖類，淀粉，纖維素衍生物，明膠和聚合物，諸如聚乙二醇類?？梢詫⒈景l(fā)明調(diào)節(jié)JAK2蛋白激酶的化合物中的許多作為生理學18可接受的鹽提供，其中該化合物可以形成帶負電荷或正電荷的種類?；衔镄纬蓭д姾傻牟糠值柠}的實例包括，但不限于諸如鹽酸鹽，硫酸鹽，碳酸鹽，乳酸鹽，酒石酸鹽，蘋果酸鹽，馬來酸鹽和琥珀酸鹽這類鹽。本發(fā)明的化合物形成帶負電荷的種類的鹽包括，但不限于鈉，鉀，鈣和鎂的鹽。適用于本發(fā)明的藥物組合物包括組合物，其中包含足以實現(xiàn)指定目的，例如調(diào)節(jié)JAK2蛋白激酶活性和/或治療或預防JAK2蛋白激酶-相關(guān)病癥的用量的活性組分。更具體地說，治療有效量意旨有效預防，緩解或改善疾病癥狀或延長所治療對象存活的化合物用量。測定治療有效量為本領(lǐng)域技術(shù)人員的充分能力，尤其是根據(jù)本文提供的詳細披露的內(nèi)容而言。就本發(fā)明方法中使用的任意化合物而言，最初可以根據(jù)細胞培養(yǎng)試驗評估治療有效量或劑量。然后可以在動物模型中配制使用劑量以便實現(xiàn)包括如在細胞培養(yǎng)物中測定的IC5。的循環(huán)濃度范圍(即實現(xiàn)蛋白激酶活性半數(shù)最大抑制的測試化合物濃度)。然后可以將這類信息用于更精確地確定在人體中的有用劑量?？梢酝ㄟ^在細胞培養(yǎng)物或?qū)嶒瀯游镏械臉藴仕幬锊僮?，例如通過測定主題化合物的ICs。和LD5。測定本文所述化合物的毒性和治療效率。獲自這些細胞培養(yǎng)試驗和動物研究的數(shù)據(jù)可以用于配制應(yīng)用于人體的劑量范圍。該劑量可以根據(jù)使用的劑型和所用的給藥途徑的不同而改變。確切的制劑，給藥途徑和劑量可以由各臨床醫(yī)師根據(jù)患者病'清選擇(例i口，參見Goodman&Gilman,sThePharmacologicalBasisofTherapeutics,Ch.3，9thed.，Ed.byHardman,J.和Limbard，L.,McGraw-Hill,NewYorkCity,1996，p.46)?？梢愿髯哉{(diào)整劑量和間隔以便提供足以維持JAK2激酶調(diào)節(jié)作用的活性種類的血漿水平。這些血漿水平稱作最低有效濃度(MEC)。MEC對每種化合物而言可變，但可以根據(jù)體外數(shù)據(jù)評估，例如可以使用本文所述的試驗確定實現(xiàn)激酶50-90%抑制所必須的濃度。實現(xiàn)MEC所必須的劑量取決于個體特征和給藥途徑。HPLC測定法或生物測定法可以用于測定血漿濃度。還可以使用MEC值測定劑量間隔。應(yīng)使用將血漿水平維持高于MEC10-90%的時間，優(yōu)選30-90%且最優(yōu)選50-90%的方案給予化合物。目前，本發(fā)明化合物的治療有效量可以在約2.5mg/m2-1500mg/mV天的范圍。額外的例證性用量范圍在0.2-1000mg/qid，2-500mg/qid和20-250mg/qid。就局部給藥或選擇性吸收而言，藥物的有效局部濃度與血漿濃度無關(guān)并且本領(lǐng)域中公知的其它操作可以用于測定正確的劑量和間隔。當然，給予的組合物的用量取決于所治療的對象，疾病的嚴重性，給藥方式，開據(jù)處方的臨床醫(yī)師的判斷等。如果需要，可以將組合物制成藥包或分配器裝置，諸如FDA批準的試劑盒，其可以包含一個或多個包含和小組的的單位劑型。例如，藥包可以包含金屬或塑料箔，諸如泡罩包。藥包或分配器裝置可以附帶給藥說明書。藥包或分配器裝置還可以附帶與管理藥物生產(chǎn)，應(yīng)用或銷售的政府管理部門規(guī)定形式的容器相關(guān)的注意事項，該注意事項反映出得到管理部門批準的組合物或人或獸醫(yī)給藥形式。例如，這類注意事項可以為美國食品與藥品監(jiān)督管理局批準的處方藥或批準的標簽或產(chǎn)品插頁。還可以制備包含使用相容性藥用載體配制的本發(fā)明化合物的組合物，將其放入適當容器并且標記可治療所示疾患。如上所述，本發(fā)明的化合物和組合物可以應(yīng)用于HK2蛋白激酶介導的廣泛疾病和疾患。作為實例，這類疾病可以包括癌癥，諸如血癌(例如急性髓性白血病(AML)和慢性髓性白血病(CML))，肺癌，NSCLC(非小細胞肺癌)，燕麥細胞癌，骨癌，胰腺癌，皮膚癌，隆突性皮膚纖維肉瘤，頭頸癌，皮膚或眼內(nèi)黑素瘤，子宮癌，卵巢癌，結(jié)腸直腸癌，肛門區(qū)癌，胃癌，結(jié)腸癌，乳腺癌，婦科腫瘤(例如子宮肉瘤，輸卵管癌，子宮內(nèi)膜癌，宮頸癌，陰道癌或外陰癌)，何杰金病，肝細胞癌，食道癌，小腸癌，內(nèi)分泌系統(tǒng)癌(例如甲狀腺，胰腺，甲狀旁腺或腎上腺癌)，軟組織肉瘤，尿道癌，陰莖癌，睪丸癌，前列腺癌(特別是激素-頑固性)，慢性或急性白血病，兒童實體瘤，嗜伊紅細胞增多癥，淋巴細胞淋巴瘤，膀胱癌，腎或輸尿管癌(例如腎細胞癌，腎盂癌)，兒科惡性腫瘤，中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤(例如原發(fā)性CNS淋巴瘤，脊柱軸瘤，髓母細胞瘤，腦干神經(jīng)膠質(zhì)瘤或垂體腺瘤)，巴雷特(Barrett)食管(惡性前期綜合征)，瘤形成皮膚病，銀屑病，蕈樣真菌病和良性前列腺肥大，糖尿病相關(guān)疾病，諸如糖尿病性視網(wǎng)膜病，視網(wǎng)膜缺血和視網(wǎng)膜新生血管形成，肝硬化，血管發(fā)生，心血管病，諸如動脈粥樣硬化，免疫性疾病，諸如自身免疫病和腎臟??；但不限于它們。本發(fā)明的化合物可以與一種或多種其它化療劑聯(lián)用。可以為任何藥物-藥物反應(yīng)調(diào)整本發(fā)明化合物的劑量。在一個實施方案中，所述的化療劑選自有絲分裂抑制劑，烷化劑，抗代謝藥，細胞周期抑制劑，酶，拓樸易構(gòu)酶抑制劑，諸如CAMPTOSAR(伊立替康)，生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑，抗激素，抗血管生成因子，諸如MMP-2，畫P-9和C0X-2抑制劑，抗雄激素藥，鉑配位絡(luò)合物(順鉑等)，取代的脲類，諸如羥基脲；甲基肼衍生物，例如丙卡巴肼；腎上腺皮質(zhì)抑制劑，例如米托坦，氨基魯米特，激素和激素拮抗劑，諸如腎上腺皮質(zhì)類固醇(例如潑尼松)，孕激素類(例如羥基己酸孕酮)，雌激素類(例如己烯雌酚)，抗雌激素藥，諸如他莫昔芬，雄激素類，例如丙酸睪酮和芳香酶抑制劑，諸如阿那曲唑和AROMASIN(依西美坦)。可以用于上述聯(lián)合方法的烷化劑的實例包括，但不限于單獨的氟尿嘧啶(5-FU)或其進一步與亞葉酸的組合；其它嗜^類似物，諸如UFT，卡培他濱，吉西他濱和阿糖胞苷，磺酸烷基酯類，例如白消安(用于治療慢性粒細胞白血病)，英丙舒凡和哌泊舒凡；氮丙咬類，例如苯佐替派，卡巴醌，美妥替哌和烏瑞替派；乙烯亞胺類和甲基蜜胺類，例如六甲蜜胺，三乙烯三聚氰胺，三亞乙基磷酰胺，三亞乙基;P克代磷酰胺和三羥甲蜜胺；和氮芥，例如苯丁酸氮芥(用于治療慢性淋巴細胞白血病，原發(fā)性巨球蛋白血癥和非何杰金淋巴瘤)，環(huán)磷酰胺(用于治療何杰金病，多發(fā)性骨髓瘤，神經(jīng)母細胞瘤，乳腺癌，卵巢癌，肺癌，維爾姆斯瘤和沖黃紋肌肉瘤)，雌氮芥，異環(huán)磷酰胺，novembrichin，潑尼莫司汀和烏拉莫司汀(用于治療原發(fā)性血小板增多，非何杰金淋巴瘤，何杰金病和卵巢癌)；和三"秦類，例如達卡巴溱(用于治療軟組織肉瘤)?？梢杂糜谏鲜雎?lián)合方法的抗代謝物化療劑的實例包括，但不限于葉酸類似物，例如曱氨蝶呤(用于治療急性淋巴細胞白血病，絨毛膜癌，苯樣真菌病，乳腺癌，頭頸癌和成骨性肉瘤)和蝶羅呤；和噤呤類似物，諸如巰噪呤和硫鳥嘌呤，它們用于治療急性粒細胞性白血病，急性淋巴細胞白血病和慢性粒細胞性白血病。可以用于上述聯(lián)合方法的基于天然產(chǎn)物的化療劑的實例包括，但不限于長春花生物堿類，例如長春堿(用于治療乳腺和睪丸癌)，長春新堿和長春地辛；表鬼臼毒素，例如依托泊苷和替尼泊苷，它們兩者均用于治療睪丸癌和卡波西肉瘤；抗生素化療劑，例如柔紅霉素，多柔比星，表柔比星，絲裂霉素(用于治療胃，宮頸，結(jié)腸，乳腺，膀胱和胰腺癌)，放線菌素D，替莫唑胺，普利霉素，博來霉素(用于治療皮膚，食道和泌尿生殖道癌)；和酶化療劑，諸如L-天冬酰胺酶。有用的COX-II抑制劑的實例包括Vioxx，CELEBREX(塞來考昔)，伐地考昔，帕雷考昔(paracoxib)，羅非昔布和Cox189。有用的基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑的實例描述在如下文獻中W096/33172(1996年10月24日公布)，W096/27583(1996年5月7日公布)，歐洲專利申請?zhí)朎P97304971.1(1997年7月8日提交)，歐洲專利申請?zhí)朎P99308617.2(1999年10月29日提交)，W098/07697(1998年2月26日公布)，W098/03516(1998年1月29日公布)，W098/34918(1998年8月13日7〉布)，W098/34915(1998年8月13日公布)，W098/33768(1998年8月6日公布)，W098/30566(1998年7月16日公布)，歐洲專利申請公開號EP606,046(1994年7月13日公布)，歐洲專利申請公開號EP931，788(1999年7月28日公布)，W090/05719(1990年5月31日公布)，W099/52910(1999年10月21日公布)，WO99/52889(1999年10月21日公布)，W099/29667(199922年6月17曰公布)，PCT國際申請乂^開號PCT/IB98/01113(1998年7月21日提交)，歐洲專利申請?zhí)朎P99302232.1(1999年3月25日提交)，英國專利申請?zhí)朑B9912961.1(1999年6月3日提交)，美國專利US5,863,949(1999年1月26日授權(quán))，美國專利US5，861，510(1999年1月19日授權(quán))和歐洲專利申請公開號EP780，386(1997年6月25日公布)，將所有這些文獻完整地引入本文作為參考。優(yōu)選的MMP-2和腦P-9抑制劑為幾乎沒有或無抑制固P-1的活性的那些。更優(yōu)選相對于其它基質(zhì)金屬蛋白酶(即MMP-1，MMP-3，畫P-4，羅P-5，MMP-6，MMP-7，MMP-8,醒P-IO，醒P-ll，MMP-12和MMP-13)而言選擇性抑制醒P-2和/或醒P-9的那些。用于本發(fā)明的畫P抑制劑的某些具體實例為AG-3340,R032-3555，RS13-0830和選自如下的化合物3-[[4-(4-氟-苯氧基)-苯磺?；鵠-(l-羥基氨基甲?；?環(huán)戊基)-氨基]-丙酸；3-外向-3-[4-(4-氟-苯氧基)-苯磺?；被鵠-8-氧雜-雙環(huán)[3.2.1]辛烷-3-甲酸羥基酰胺；(2R，3RM-[4-(2-氯-4-氟-節(jié)氧基)-苯磺?；鵠-3-羥基-3-甲基-哌啶-2-甲酸羥基酰胺；4-[4-(4-氟-苯氧基)-苯磺?；被鵠-四氫-吡喃-4-甲酸羥基酰胺；3-[[4-(4-氟-苯氧基)-苯磺?；鵠_(l-羥基氨基甲酰基-環(huán)丁基)-氨基]-丙酸；4-[4-(4-氯-苯氧基)-苯磺?；被鵠-四氫-吡喃-4-甲酸羥基酰胺；(R)3-[4-(4-氯-苯氧基)-苯磺?；被鵠-四氫-吡喃-3-甲酸羥基酰胺；(2R，3R)l-[4-(4-氟-2-甲基節(jié)氧基)-苯磺?；鵠-3-羥基-3-甲基-哌啶-2-曱酸羥基酰胺；3-[[(4-(4-氟-苯氧基)-苯磺?；鵠-(l-羥基氨基甲?；?l-甲基-乙基)-氨基]-丙酸；3-[[4-(4-氟-苯氧基)-苯磺?；鵠-(4-羥基氨基曱酰基-四氫-吡喃-4-基)-氨基]-丙酸；3-外向-3-[4-(4-氯-苯氧基)-苯磺?；被鵠-8-氧雜-雙環(huán)[3.2.1]辛烷-3-甲酸羥基酰胺；3-內(nèi)向-3-[4-(4-氟-苯氧基)-苯磺?；被鵠-8-氧雜-雙環(huán)[3.2.1]辛烷-3-甲酸羥基酰胺；和(R)3-[4-(4-氟-苯氧基)-苯磺?；被鵠-四氫-呋喃-3-甲酸羥基酰胺；和這些化合物的藥學上可接受的鹽和溶劑合物。23其它抗血管發(fā)生藥，其它COX-II抑制劑和其它匪P抑制劑也可以用于本發(fā)明。本發(fā)明的化合物還可以與其它信號轉(zhuǎn)導抑制劑聯(lián)用，諸如可以抑制EGFR(表皮生長因子受體)應(yīng)答的活性劑，諸如EGFR抗體，EGF抗體和為EGFR抑制劑的分子；VEGF(表皮生長因子受體)抑制劑；和erbB2受體抑制劑，諸如有機分子或結(jié)合erbB2受體的抗體，諸如腿CEPTIN(Genentech，Inc.,SouthSanFrancisco,CA)。在WO95/19970(1995年7月27日公布)，WO98/14451(1998年4月9日7>布)，WO98/02434(1998年1月22日公布)和美國專利US5，747，498(1998年5月5日授權(quán))中描述了EGFR抑制劑，并且這類物質(zhì)可以如本文所述用于本發(fā)明。EGFR-抑制劑包括，但不限于單克隆抗體C225和抗-EGFR22Mab(ImCloneSystems，Inc.，NewYork，NY)，化合物ZD-1839(AstraZeneca)，BIBX-1382(BoehringerIngelheim)，MDX-447(MedarexInc.,Annandale,NJ)和OLX-103(Merck&Co.，WhitehouseStation,NJ)和EGF融合毒素(SeragenInc.，Hopkinton,MA)。這些和其它EGFR-抑制劑可以用于本發(fā)明。VEGF抑制劑，例如SU-5416和SU-6668(SugenInc.,SouthSanFrancisco,CA)還可以與本發(fā)明的化合物聯(lián)用。VEGF抑制劑描述在例如下列文獻中W001/60814A3(2001年8月23日7>布)，W099/24440(1999年5月20日公布)，PCT國際申請PCT/IB99/00797(1999年5月3日提交)，W095/21613(1995年8月17日公布)，W099/61422(1999年12月2日公布)，美國專利US5,834,504(1998年11月10日授權(quán))，WO01/60814，WO98/50356(1998年11月12日授權(quán))，美國專利US5,883,113(1999年3月16日授權(quán))，美國專利US5,886,020(1999年3月23日授權(quán))，美國專利US5，792，783(1998年8月11日授權(quán))，WO99/10349(1999年3月4日公布)，WO97/32856(1997年9月12日公布)，WO97/22596(1997年6月26日公布)，WO98/54093(1998年12月3日公布)，WO98/02438(1998年1月22日公布)，WO99/16755(1999年4月8日公布)和WO98/02437(1998年1月22日公布)，將所有這些文獻完整地引入本文作為參考。用于本發(fā)明的某些特異性VEGF抑制劑的其它實例為IM862(CytranInc.，Kirkland，WA);Genentech，Inc.的抗-VEGF單克隆抗體；和抗VEGFR2核酶(angiozyme)，即一種來自核酶(Boulder,CO)和手性子(Emeryvi1le,CA)的合成核酶。這些和其它VEGF抑制劑可以如本文所述用于本發(fā)明。pErbB2受體抑制劑，諸如GW-282974(GlaxoWell國eplc)和單克隆抗體AR-209(AronexPharmaceuticalsInc.，TheWoodlands,TX)和2B-l(Chiron)也可以與本發(fā)明化合物聯(lián)用，例如如下文獻中所示的那些W098/02434(1998年1月22日公布)，W099/35146(1999年7月15日公布)，W099/35132(1999年7月15日公布)，W098/02437(1998年1月22日公布)，W097/13760(1997年4月17日公布)，WO95/19970(1995年7月27日公布)，美國專利US5，587，458(1996年12月24日授權(quán))和美國專利US5，877,305(1999年3月2日授權(quán))，將所有這些文獻完整地引入本文作為參考。用于本發(fā)明的ErbB2受體抑制劑還描述在美國專利US6,284,764(2001年9月4日授權(quán))中，將該文獻完整地引入本文作為參考。erbB2受體抑制劑化合物和描述在上述PCT申請，美國專利和美國臨時申請中的物質(zhì)和其它抑制erbB2受體的化合物和物質(zhì)可以按照本發(fā)明與本發(fā)明化合物聯(lián)用。本發(fā)明的化合物還可以與用于治療癌癥的其它活性劑聯(lián)用，包括，但不限于能夠增強抗腫瘤免疫應(yīng)答的活性劑，諸如CTLA4(細胞毒性淋巴細胞抗原4)抗體和其它能夠阻斷CTLA4的活性劑；和抗增殖劑，諸如其它法尼基蛋白轉(zhuǎn)移酶抑制劑，例如描述在美國專利US6,258,824Bl的"背景"部分中引述的參考文獻中的法尼基蛋白轉(zhuǎn)移酶抑制劑。上述方法還可以與放療聯(lián)合進行，其中與放療聯(lián)用的本發(fā)明化合物的量可有效治療上述疾病。的療法聯(lián)用?？梢匀绫疚乃龃_定在該聯(lián)合療法中給予的本發(fā)明的化合物。在考慮下列非限制性實施例時進一步理解本發(fā)明。實施例實施例1基于計算機的前導鑒定實際的篩選計算基于JAK2激酶與Pan-Janus激酶抑制劑的復合物的晶體結(jié)構(gòu)作為模板進行(PDBID:2B7A)。從虛擬庫中對內(nèi)部~200和~230萬個集中和/或不同的藥物類化合物進行計算機篩選產(chǎn)生了對購自0tavaChemicals(www.Otavachemicals.com)的庫中的候選化合物的選擇。將內(nèi)部3種化合物測定為在低微摩爾范圍內(nèi)具有活性(<42nM-1.25pM),并且將0tava化合物之一測定為在直接JAK2激酶結(jié)合試驗中在〈10nM下具有活性。將對特異性JAK2激酶活性重要的分子區(qū)鑒定的最具活性的化合物確定為屬于嘧啶-2，4-二胺衍生物。正如下表l中所示，基于結(jié)合方式，QikProp(溶解度，滲透性)Lipinski-類標準和存在的所需藥效基團過濾選自這類篩選的化合物。表1有代表性的嘧啶-2，4-二胺衍生物化合物序號結(jié)構(gòu)卜lH"~<\》/=K/=\F3CCI化學式CH12C1F3N4分子量364，7526<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table><formula>formulaseeoriginaldocumentpage30</formula>實施例2嘧咬-2，4-二胺衍生物的一般合成可以由化學領(lǐng)域普通技術(shù)人員使用常規(guī)的合成操作以及通過下列一般反應(yīng)方案制備本發(fā)明的化合物。簡言之，使2，4-二氯嘧啶(l)與適當取代的苯胺(2)反應(yīng)生成中間體(3)。然后使該中間體(3)與另一適當取代的胺(4)反應(yīng)生成結(jié)構(gòu)(I)的化合物?？蛇x擇地，使中間體(3)進一步與適當取代的胺(5)反應(yīng)而生成結(jié)構(gòu)(II)的化合物。如無任何具體聲明，則所有的溶劑和試劑均購自Aldrich或WR的化學品并且可以根據(jù)需要通過標準實驗室方法提供或純化使用。實施例3嗜咬-2，4-二胺衍生物的合成A.制備2-氯-4-取代的嗜啶(3)的一般操作<formula>formulaseeoriginaldocumentpage32</formula>將包含2，4-二氯嘧啶(1)(10mmol)，苯胺(2)(10mmol)和二異丙基乙胺(DIPEA)(1.5mmol)在30mL異丙醇(IPA)中的反應(yīng)混合物回流過夜。除去溶劑并JU吏用CombiflashCompanion系統(tǒng)純化殘余物(10%-70。/。己烷/EtOAc)而得到所需的2-氯-4-取代的嘧咬(3)。2-氯-N-(3-氯-4-氟苯基)嘧啶-4-胺(7)將2，4-二氯嘧咬(1)(1g，6.71mmol，Sigma-Aldrich)，3-氯-4-氟苯胺(6)(0.977g，6.71mmol，Sigma-Aldrich)和二異丙基乙胺(DIPEA)(3.47g，26.8咖ol)在2-丙醇(20mL)中的反應(yīng)混合物回流18h。蒸發(fā)溶劑并且通過使用70%己烷與純二氯甲烷(DCM)和20%乙酸乙酯(EtOAc)的溶劑系統(tǒng)(40g正相RediSep快速柱，運行時間50min)的CombiflashCompanion純化而得到化合物(7)(0.8g)。(TLC，Rf-O.6，EtOAc)。白色固體，產(chǎn)率46.2%。力-NMR(400MHz，DMS0-d》10.18(s，1H),8.20(d，J=6.2Hz，1H)，7.90(m，lH)，7.50(m，1H)，7.43(t,J-8.9Hz，1H)，6.74(d，J-5.8Hz，1H)。ESI/MSm/z258.0(100%)，259.9(78%)，261.9(18%)。5-(2-氯嘧啶-4-基氨基)-2-氟芐腈(9)DIPEA,2-丙醇回流12hDIPEA/2-丙醇將2，4-二氯嘧啶(1)(1g，6.71mmol)，5-氨基-2-氟芐腈(8)(0.914g，6.71mmol)在2-丙醇(50mL)和1mLDIPEA中的反應(yīng)混合物回流過夜。蒸發(fā)溶劑并且通過Combiflash(12g,DCM-10%MeOH/DCM)純化粗物質(zhì)而得到318mg化合物(9)(TLC，Rf=0.1,6%MeOH/DCM)。白色固體，產(chǎn)率19%。力NMR(400MHz，CD30D)8.15(m,2H),7.89(m，1H),7.35(t，J=9.23Hz，1H)，6.70(d,J-5.6Hz，1H)。ESI/MSm/z248.9(100%)，250.9(33%)。2-(3-氨基苯基)乙腈(ll)將3-硝基苯基乙腈(10)溶于濃HC1(15ml)和乙醇(15ml)的混合物。在冰冷卻下逐步滴加SnCl2二水合物在乙醇(25ml)中的溶液并且將該混合物在室溫下攪拌5小時。TLC(EtOAc/己烷1:1)Rf=0.1顯示80%完成。在蒸發(fā)溶劑后，用NaOH將殘余物處理至pH9。用Et0Ac萃取并且進行combiflash(12g,己烷/EtOAc10%-50%,70min)而得到1.182g化合物(ll)，為黃色油狀物。力-NMR(400MHz,CDCU7.12(t，J-7.5Hz,1H),6.65(m,3H)，3.72(br-s，1H),3.64(s,2H)。2-(3-(2-氯嘧啶-4-基氨基)苯基)乙腈(12)33<formula>formulaseeoriginaldocumentpage34</formula>將2，4-二氯嗜咬(1)(1.127g，7.57mmol)2-(3-氨基苯基乙腈(11)(1g，7.57mmol)在2-丙醇(40mL)和15mmol三乙胺(TEA)中的反應(yīng)混合物回流2天。蒸發(fā)溶劑并且通過Combiflash純化(12g，兩次，CHCh)而得到932mg化合物(12)，為淡綠色結(jié)晶。產(chǎn)率50%。^-NMR(400MHz,CDC13)8.16(d，J-6.15Hz，1H)，7.41(m，1H)，7.33(m,2H)，7.18(d，J=7.5Hz，1H)，6.96(br-s，1H),6.58(d，J=5.8Hz，1H)，3.77(s，2H)。B.制備2，4-二取代的嘧啶(I)的一般操作<formula>formulaseeoriginaldocumentpage34</formula>將包含在7mL異丙醇中的2-氯-4-取代的嘧啶(3)(0.25mmol)，胺(4)或胺(5)(ApolloScientificandBionetBuildingBlocks,UK)(0.25mmol)和TFA(O.5mmol)的反應(yīng)混合物回流過夜。在將該反應(yīng)混合物冷卻至室溫后加入NaOH(O.6mmol)。除去溶劑并且通過Combiflash純化殘余物(4g,DCM-20%MeOH/DCM)而得到如下所述的結(jié)構(gòu)(I)或(II)的化合物。N4-(3-氯苯基)-N2-(4-(三氟甲基)苯基)嘧啶-2，4-二胺(化合物1-1)向2-氯-N-(3-氯苯基)嘧啶-4-胺(13)(100mg，0.417mmol)在2-丙醇(10mL)中的溶液中加入4-(三氟甲基)苯胺(14)(67.1mg，0.417mmol)，隨后添加催化劑三氟乙酸并且在回流溫度下攪拌過夜。蒸發(fā)溶劑并且通過使用DCM和5%MeOH溶劑系統(tǒng)的CombiflashCompanion純化殘余物(4g正相RediSep快速柱，運行時間50min,流量18ml/min)而得到化合物1-1。(TLC，Rf=0.4，10%MeOH/DCM)。^NMR(400MHz，DMS0-d6)8.08(d，J-6.15Hz，1H),7.8(s,2H),3.39(m,1H)，7.82(d，J=8.2Hz，2H)，7.66(d，J-8.2Hz，2H)，7.46(d,J-6,84Hz,1H)，7.36(t,J=8.2Hz,1H)，7.15(d，J-8.18Hz，1H)，6.42(d，J-6.15Hz，1H)ESI/MSm/z365.0(M+H)+。N4-(3-氯-4-氟苯基)-N2-(4-氟苯基)嘧啶-2，4-二胺(化合物1-2)向2-氯-N-(3-氯-4-氟苯基)嘧啶-4-胺(7)(60mg，0.232mmol)在2-丙醇(10mL)中的溶液中加入4-氟苯胺(15)(25.8mg，0.23235minol)，隨后添加催化劑三氟乙酸并且在回流溫度下攪拌過夜。向該反應(yīng)混合物中加入三乙胺，隨后攪拌lh，此后TLC顯示反應(yīng)完成。蒸發(fā)溶劑并且通過使用己烷70°/。和DCM溶劑系統(tǒng)的CombiflashCompanion純化殘余物(4g正相RediSep快速柱，運4亍時間50min，流量18ml/min)而得到化合物l-2(TLC，Rf=0.35，5%Me0H/DCM)。^腿(楊MHz，而0-d》8.Ol(m，2H)，7.64(m，2H)，3.39(m，2H)，7.49(m,1H)，7.35(t,J=8.23Hz，1H)，7.ll(m，2H)，6.22(m，1H)，ESI/MSm/z333.0(M+H)+。N4-(3-氯-4-氟苯基)-N2-(4-嗎啉代苯基)嘧啶-2，4-二胺(化合鮑<formula>formulaseeoriginaldocumentpage36</formula>1-3)向2-氯-N-(3-氯-4-氟苯基)嘧啶-4-胺(7)(60mg,0.232mmol)在2-丙醇(10mL)中的溶液中加入4-嗎啉代苯胺(16)(41.4mg，0.232咖ol)，隨后添加催化劑三氟乙酸并且在回流溫度下攪拌過夜。通過使用10%在DCM中的MeOH的溶劑系統(tǒng)的CombiFlashCompanion純化粗殘余物(4g正相RediSep快速柱，運行時間50min，流量26ml/min)而得到化合物1-3。(TLC,Rf=0.45，10%MeOH/DCM)HPLC-94%。^畫R(400MHz,DMS0-d6)8.03(m,1H)，7，90(m，1H)，3.39(m，2H)，7.31(d，J=8.54Hz，2H)，6.98(d，J=8.55Hz，2H),6.33(d，J-6.83Hz，IH)，3.74(m，4H),3.10(s，4H)ESI/MSm/z400.1(M+H)+。N4-(3-氯-4-氟苯基)-N2-(4-(4-甲基哌溱-l-基)苯基)嘧啶-2，4-二胺(化合物l-4)將在1-丁醇中的2-氯-N-(3-氯-4-氟苯基)嘧啶-4-胺(7)(100mg，0.387nrniol)，4-(4-甲基哌溱-1-基)苯胺(17)(74.1mg，0.387畫l，購自ApolloScientific,UK)，DIPEA(2mL，11.48mmol)和二甲氨基吡啶(DMAP)回流過夜。TLC(6。/。Me0H/DCM)顯示反應(yīng)完成。濃縮并且進行CombiFlash純化(4g，DCM-100%EtOAc)而得到7mg化合物l-4，其在磷鉬酸染色下為紫色。產(chǎn)率48%。^-NMR(400MHz，DMS0-d》9.45(s,1H),8.98(s，1H)，8.08(m，1H)，7.98(d，J-4.5Hz，1H)，7.45(m,3H)，7.30(t，J=9.2Hz,1H),6.86(d,J-8.9Hz，2H),6.10(d，J-5.8Hz,1H)，3.04(m，4H)，2.43(m，4H),2.20(s，3H)。ESI/MSm/z413.3(100%)，415.2(33%)。N4-(3-氯-4-氟笨基)-N2-(4-曱氧基-3-(3-(4-曱基哌嗪-l-基)丙氧基)苯基)嘧啶-2，4-二胺(化合物1-5)H3caH3CO、TEA2-丙醇1-5向2-曱氧基-5-硝基苯酚(18)(2g，11.82mmol)，3-氯丙基溴(2.234g，23.65mmol)在二甲基甲酰胺(DMF)(20mL)中的混合物中加入K2C03(3.27g)并且將所得反應(yīng)混合物加熱至80。C下3h。TLC(EtOAc)顯示反應(yīng)完成。然后使該反應(yīng)混合物分配在水(IOOmL)與乙酸乙酯(150mL)之間。用飽和NaHC03和水洗滌有機層，然后用MgS04干燥并且過濾。濃縮該溶液而得到19,為淡黃色固體(3.9g)。向19(1.5g，6.11mmol)中加入在20mL1，4-二噁烷中的N-曱基哌嗪和碘化鈉(l.373g，9.16mmol)并且將所得反應(yīng)混合物加熱至IO(TC下30h。濃縮橙色混合物以便除去1，4-二噁烷，且然后用50mL乙酸乙酯稀釋。在攪拌0.5h后，將其過濾以便除去鹽。用NaOH溶液(20mL)和水(3x20mL)洗滌有機層。用MgS04千燥并且濃縮至得到化合物20，為橙色油狀物(l.00g)。力-NMR(40隨z，CDC13)7.90(dd，Jl=2.3Hz，J2-8.9Hz，1H)，7.75(d，J=2.3Hz，1H)，6.88(d，J=8.8Hz，1H)，4.14(m，2H)，3.94(s,3H)，2.58(m，IOH)，2.43(br-s，3H),2.03(m，2H)。在Parr搖瓶中有在異丙醇中的10%Pd/C存在下使化合物20進行氫化5h。TLC(15。/aMeOH/DCM)顯示反應(yīng)完成。通過C鹽過濾并且濃縮得到化合物21(1g)，為棕色油狀物。^-NMR(400MHz，CDCU6.68(d，J-8.2Hz,1H)，6.30(d，J=2.4Hz,1H)，6.20(dd，J1-2.4Hz，J2=8.2Hz，1H),3.99(t,J-6.5Hz，2H),3.75(s，3H)，3.46(s，3H),2.55(br-m，IOH)，2.32(s，3H)，2.01(m，2H)。將包含在TFA(lmL)和2-丙醇(10mL)中的21(100mg，0.387mmol)和7(108mg，0.387mmol)的反應(yīng)混合物回流過夜。TLC(6%DCM/MeOH)顯示7完全消耗。濃縮該反應(yīng)混合物并且再溶于MeOH。通過添加NaOH使TFA猝滅。濃縮并且進行CombiFlash純化(4g，DCM-15。/。MeOH/DCM)得到219mg化合物1-5，為棕色泡沫。力-NMR(40幅Hz，DMSO-d6)9.49(s，1H)，9.Ol(s,1H)，8.04(m，1H)，8.OO(d，卜5.8Hz，1H)，7.4(br-s，1H),7.29(t，J=9.3Hz，1H)，7.20(m，2H)，6.85(d,J=8.8Hz,1H)，6.13(d，J=5.8Hz，1H)，3.86(t，J-6.15Hz，2H)，3.88(s，3H)，2.48(s，8H)，2.35(s，3H),1.83(m，2H)。ESI/MSin/z，501.2(100%),503.3(33%)。N4-(3-氯-4-氟苯基)-N2-(6-(三氟曱基)吡啶-3-基)嘧啶-2,4-二胺(化合物1-6)向7(100mg，0.387mmol)和5-氨基-2-(三氟曱基)吡啶(22)(62.8fflg，0.387mmol)在2-丙醇(IOmL)中的混合物中加入TEA并且將該反應(yīng)混合物回流24h。TLC(EtOAc,Rf=0.3)顯示反應(yīng)完成。濃縮該混合物以便除去異丙醇并且再溶于甲醇。加入NaOH以中和TFA。進一步濃縮并且進行CombiFlash純化(4g,己烷/EtOAc150/0-90%,50min)而得到106mg化合物1-6，為固體。力-NMR(400MHz，CDCh)8.69(s,1H)，8.42(d，J-8.5Hz，1H)，8.11(d，J=5.4Hz，1H)，7.59(m，1H)，7.53(m，1H),7.15(m，3H)，6.49(s，1H)，6.19(d，J=5.5Hz，1H)。ESI/MSm/z，384.0(100%),386.0(33%)。2-(3-(2-(4-(4-曱基哌喚-l-基)苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)笨基)將化合物12(100mg，0.409mmol)和17(78mg，0.409mmol,ApolloScientific,UK)、溶于10mL2-丙醇并且加入TEA(1mL)。將所得混合物回流過夜。TLC(20%MeOH/DCM，Rf=0.2)顯示反應(yīng)完成。加入NaOH并且形成一些白色沉淀。濃縮并且進行CombiFlash純化(0-25。/oMeOH/DCM)得到化合物l-7(186mg),為白色固體。^NMR顯示乙腈(化合物1-7)39內(nèi)部可能存在某些苯胺。產(chǎn)率114%。'H-NMR(400MHz，CD30D)7.88(d，J-6.lHz，1H)，7.79(s，1H)，7.44(m,3H)，7.27(t，J-7.86Hz,1H)，7.OO(m，3H)，6.15(d，J=6.lHz，1H)，3.75(s，2H)，3.27(m，4H)，2.96(ra,4H)，2.59(s，3H)。ESI/MSm/z,400.1(100%)。2-(3-(2-(4-甲氧基-3-(3-(4-曱基哌嗪-l-基)丙氧基)苯基氨基)嗜啶-4-基氨基)苯基)乙腈(化合物1-8)向12(100mg，0.409mmol)和21(114mg，0.409mmol)在2-丙醇(IOmL)中的混合物中加入TFA并且將其回流過夜。TLC(20%MeOH/DCM,Rf=0.1)顯示反應(yīng)完成。添加NaOH產(chǎn)生白色沉淀。濃縮并且進行CombiFlash純化(0-25%MeOH:DCM)得到化合物1-8(236mg),為固體泡沫。力-腿(400MHz,CD30D):7.90(d,J-5.8Hz，1H),7.78(s,1H)，7.45(d,J=8.2Hz,1H)，7.26(m,2H),6.98(m，3H),6.16(d，J=6.2Hz，1H)，3.91(t，J-5.8Hz，2H)，3.84(s，3H)，3.74(s，2H)，3.34(s，2H),2.71(br-m，2H)，2.56(s，3H)，1.96(m，2H)。ESI/MSm/z，488.2(100%)。N4-(3-氯-4-氟苯基)-N2-(4-(三氟曱基)苯基)嘧啶-2，4-二胺(化合物l-9)向7(60mg，0.232mmol)和14(37.5mg,0.232mmol)在2-丙40醇(7mL)中的混合物中加入TFA并且將其回流過夜。TLC(6%MeOH/DCM，Rf-O.15)顯示反應(yīng)完成。添加NaOH以中和TFA。濃縮粗產(chǎn)物并且進行CombiFlash純化(4g，0-10%MeOH/DCM，50min)得到化合物1-9(70mg)，為白色固體。'H麗R(400MHz，CD30D)7.99(d，J=5.8Hz，1H)，7.95(dd，J產(chǎn)2.7Hz,J2=6.8Hz，1H)，7.79(d，J=8.5Hz，2H)，7.53(d，J=8.5Hz,2H)，7.44(m,1H),7.17(t,J=8.9Hz,1H),6.23(d，J=5.8Hz，1H)。ESI/MSm/z,383.1(100%)，385.1(33%)。2-氟-5-(2-(4-(4-曱基哌喚-l-基)苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)芐腈(化合物1-10)將9(60mg,0.241mmol)和17(46.2mg，0.241mmol),ApolloScientific,UK)的混合物溶于10mL2-丙醇并且加入催化劑TFA。將所得混合物回流過夜。TLC(20%MeOH/DCM，Rf-0.l)顯示反應(yīng)完成。添加NaOH以中和TFA。濃縮并且進行CombiFlash純化(4g正相RediSep快速柱，運行時間，40min，流量26mL/min，0-20%MeOH/DCM)得到化合物l-10(82mg，84%)，為白色固體。^畫R(400MHz,CD卿8.35(m,1H)，7.92(d，J=5.8Hz，1H)，7.70(m，1H)，7.40(d，J-8.9Hz，2H)，7.23(t，J-9.8Hz，1H)，7.01(d，J=9.2Hz，2H)，6.12(d，J=5.8Hz，1H)，3.23(m，4H)，2.70(br-s,4H)，2.40(s,3H)。ESI/MSm/z404.1(M+H)。2-(3-(2-(3-氟-4-(4-曱基哌嗪-l-基)苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)苯基)乙腈(化合物1-11)41將12(60mg，0.245mmol)和3-氟-4-(4-甲基哌嗓-l-基)苯胺(23)(51.3mg，0.245mmol，購自ApolloScientific,UK)在2-丙醇(7mL)中的混合物和催化劑TFA回流過夜。TLC(20%MeOH/DCM，Rf=0.2)顯示反應(yīng)完成。添加NaOH產(chǎn)生白色沉淀。濃縮并且進行CombiFlash純化(4g,0-20。/。Me0H/DCM)得到化合物1-11(115mg)，為白色固體。'HNMR(400MHz，CD3OD)7.93(d，J=6.1Hz，1H)，7.73(s，1H),7.61(dd,J產(chǎn)2.4Hz，J產(chǎn)4.7Hz，1H)，7.53(d，J=7.8Hz，1H)，7.32(t，J-8.2Hz,1H)，7.20(d，J=8.9Hz，1H)，7.OO(m,2H)，6.20(d,J-5.8Hz，1H),3.84(s，2H)，3.16(br-s，4H)，2.92(br-s，4H)，2.56(s，3H)。ESI/MSm/z418.1(M+H)。2-(3-(2-(6-(4-曱基哌喚-l-基)吡啶-3-基氨基)嘧啶-4-基氨基)苯基)乙腈(化合物1-12)將12(60mg，0.245畫l)和6-(4-甲基哌溱-l-基)吡啶-3-胺(24)(47.1mg，0.245,1，購自BionetBuildingblocksUK)在2-丙醇(7mL)中的混合物和催化劑TFA回流24h。TLCU0%MeOH/DCM，Rf-0.l)顯示反應(yīng)完成。添加NaOH以中和TFA。濃縮并且進行ComMFlash純化(4g,0-20%Me0H/DCM)得到化合物1-12(97mg)，TEA2-丙醇TEA2-丙醇CN為固體。產(chǎn)率99%。H醒R(400MHz，CD3OD)8.35(d，J=2.7Hz,1H)，7.88(d，J=6.2Hz，1H)，7.83(s，1H)，7.76(dd，J產(chǎn)2.7Hz，J2-9.2Hz，1H),7.37(d，J-8.5Hz，1H)，7.27(t,J=7.9Hz,1H),7.01(d,J-7.5HZ，1H),6.88(d,J-9.2Hz,1H)，6.16(d，J=5.8Hz，1H),3.81(s，2H)，3.6Ubr-s，410，2.87(br-s，4H)，2.56(s，3H)。N4-(3-氯-4-氟苯基)-N2-(6-(4-甲基哌嗪-l-基)吡啶-3-基)嘧啶-2，4-二胺(化合物1-13)TEA242-丙醇將7(60mg，0.232mmol)和24(44.7mg，0.232畫l)在2-丙醇(7mL)中的混合物和催化劑TFA回流24h。TLC(20%MeOH/DCM)顯示反應(yīng)完成。添加NaOH，濃縮該混合物并且進行CombiFlash純化(4g，100n/。DCM-25。/。MeOH/DCM)而得到化合物1-13(86.7mg),為白色固體。90%產(chǎn)率。屮NMR(400MHz，CD30D)8.23(d，J=2.4Hz，1H)，7.92(m，1H)，7,90(d，J-5.8Hz，1H)，7.82(dd，J1-9.2Hz,J2=2.7Hz，1H)，7.35(m，1H)，7.12(t，J=8.9Hz，1H)，6.88(d，J=9.2Hz,1H),3.61(br-s，4H)，2.90(m，4H)，2.59(s，3H)ESI/MSm/z414.1(M+H)。N4-(3-氯-4-氟苯基)-N2-(3-氟-4-(4-曱基哌嗪-基)苯基)嘧啶-2，4-二胺(化合物1-14)將7(60mg，0.232mmol)和23(48.7mg，0.232畫1)在2-丙醇(7mL)中的混合物和催化劑TFA回流24h。此后TLC(20%MeOH/DCM,Rf-O.1)顯示反應(yīng)完成。在室溫下3天后，形成一些白色固體(103mg)。過濾且NMR顯示產(chǎn)物為TFA鹽。加入NaOH并且濃縮該混合物且通過CombiFlashcompanion純化(4g，DCM-25%MeOH)而得到化合物1-14(88.8mg)，為白色固體。產(chǎn)率為89%。^NMR(400MHz，CD30D)7.90(m，2H)，7.47(m，2H)，7，27(dd，Jl=9.6Hz，J2=2.4Hz，1H)，7.14(t，J=6.4Hz，1H)，6.99(t，J-9.6Hz，1H)，6.15(d，J=5.8Hz,1H),3.10(br-s，4H),2.75(br-s,4H)，2.43(s，3H)。ESI/MSm/z431.0(M+H)。(4-(4-(3-氯-4-氟苯基氨基)嘧啶-2-基氨基)苯基)(4-甲基哌嗪-l-基)甲酮(化合物1-15)^1-152-丙醇在l(TC下和10min內(nèi)用l-甲基哌溱(26)處理4-硝基苯甲酰氯(25)(lg，5.39fflol)在CH3CN(50mL)中的溶液。將該反應(yīng)混合物再攪拌lh，隨后添加TEA(1.49mL，2eq)并且再攪拌半小時。用冰冷水(150mL)稀釋該反應(yīng)混合物并且用EtOAc(4x150邁L)萃取。用MgS04干燥有機層并且濃縮至得到1.lg(82。/。產(chǎn)率)(4-甲基哌嗪-1-基)(4-硝基苯基)甲酮27，為黃色固體。TLC:10%MeOH/DCM，Rf=0.6。屮MR(400MHz，CDC13)8.28(d，J-8.5Hz，2H)，7.56(d，J=8.5Hz，2H),3.88(br-s，4H),3.46(br-s,4H),2.40(s,3H)ESI/MSm/z250.0(M+H)在H2(60psi)壓力下將包含在20mL乙醇中的(4-甲基哌溱-l-44基)(4-硝基苯基)曱酮(27)(200mg，0.802mmol)和10%Pd/C(60mg)混合物振搖4h。反應(yīng)完成并且過濾后，濃縮得到28(83.8mg,產(chǎn)率48。/。)，為淡黃色油狀物。'H-NMR(400MHz，CD3OD)7.19(dd，J1-2.OHz,J2-6.5Hz，2H)，6.68(dd,J1-2.7Hz，J2-6.5Hz,2H),3.64(br-s，4H)，2.44(br-s，4H)，2.31(s，3H)ESI/MSm/z220.0(M+H)。將7(50mg，0.194ramol)和28(33mg，0.150mmol)在2-丙醇(5mL)中的混合物和催化劑TFA在150。C下微波處理1h。TLC顯示反應(yīng)完成。HPLC顯示可能的主要新的斑點。CombiFlash純化(4g，DCM-15。/。MeOH/DCM)得到32mg化合物1-15，為半固體？H-NMR(400MHz，CD3OD)7.98(d,J-6.15Hz，1H)，7.94(m,1H)，7.72(d,J-8.54,2H)，7.36(dd，J1-2.0Hz，J2-6.8Hz，2H)，7.19(dd，Jl=2.OHz，J2-8.8Hz，2H)，6.21(d，J-6.lHz，1H)，3.65(br-s,4H)，2.48(br-s，4H)，2.34(s,3H)ESI/MSm/z441.2(M+H)。2-(3-(2-(4-(4-環(huán)己基哌嗪-l-羰基)苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)苯基)乙腈(化合物1-16)將12(50mg,0.204mmol)，(4-氨基苯基)(4-環(huán)己基哌溱甲酮(29)(58.7mg，0.204mmol)在2-丙醇(5mL)和催化劑TFA中的混合物回流24h。加入NaOH并且TLC(10%MeOH/DCM)顯示存在一些原料物質(zhì)和額外的新的斑點。濃縮并且進行CombiFlash純化(4g，DCM-15。/oMeOH/DCM)得到化合物1-16(95mg)，為棕色固體。卞MR(400MHz，CD3OD)7.99(d，J=5.8Hz,1H)，7.73(m，3H)，7.55(d，J-8.2Hz,1H)，7.35(m，3H)，7.05(d，J=7.9Hz，1H)，6.24(d，J-6.2Hz，1H)，3.80(s，2H)，3.699br-s,4H)，2.75(br-s，4H)，2.48(br-s,1H)，451.95(br-s，2H)，1.83(br-s，2H)，1.65(d，J=13.0Hz,1H),1.29(br-s,4H)ESI/MSm/z496.l(M屮H)。2-(3-(2-(4-(4-甲基哌嗪-l-羰基)苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)苯基)乙腈(化合物1-17)將12(50mg，0.204mfflol)和28(44.8mg，0.204隱ol)在2-丙醇(5mL)和催化劑TFA中的混合物回流24h。加入NaOH并且TLC(10。/oMeOH/DCM)顯示存在一些原料物質(zhì)和額外的新的斑點。濃縮并且進行CombiFlash純化(4g,DCM-15%MeOH/DCM)得到化合物1-17(52mg)，為黃色固體。力纖(400MHz,DMS0-d6)9.53(s,1H),9.40(s,IH)，8.06(d，J-5.8Hz,1H)，7.78(m，3H)，7.58(s,1H)，7.31(m，3H)，6.98(d，J=7.lHz，1H)，6.27(d，J-5.5Hz，1H)，4.02(s，2H)，3.48(br-m，4H)，2.42(br-m，4H)，2.28(br-s，3H)ESI/MSm/z428.2(M+H)。2-(3-(2-(4-(4-甲基哌嗪-l-基)-3-(三氟甲基)苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)苯基)乙腈(化合物1-18)11-18將12(50mg,0.204咖ol)和4-(4-甲基哌溱-l-基)-3-(三氟甲基)苯胺(29)(46.6mg，0.409mmol)在2-丙醇(5mL)和催化劑TFA中的混合物在130。C下接觸微波條件2.5h。TLC證實存在新的斑點。通過添加NaOH使該反應(yīng)混合物猝滅，濃縮并且通過CombiFlash純化進行純化(4gC-18，5%-100°/WK/CH3CN)，且通過HPLC檢查級分。合并純的級分并且濃縮至得到4.5mg化合物l-18，為淡黃色固體。^-NMR(300MHz,CDC13-CD30D)7.62(d,J=6.OHz,1H)，7.50(s，1H)，7.46(d，J-9Hz,1H)，7.24(s，2H)，7.02(m，2H),6.70(d，J=7.2Hz,1H)，5.89(d,J=5.8Hz，1H)，3.45(s，1H),3.35(s,1H),3.03(s，2H),2.61(s，4H)，2.29(s，4H),2.05(s,3H)。ESI/MSm/z468.36(M+H)。實施例4有代表性的化合物的鹽形式按照下列操作制備化合物1-11和1-18的有代表性的鹽形式(即HC1，硫酸鹽，曱磺酸鹽和苯磺酸鹽形式)并且列在下表2中。2-(3-(2-(3-氟-4-(4-曱基哌嗪-l-基)苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)苯基)乙腈二鹽酸鹽(化合物1-112HC1)將化合物1-11(2.06g)懸浮于125mL2-丙醇中。加入濃HC1(2.47mL,6eq)。加熱該混合物，直到獲得澄清溶液。在室溫下冷卻該溶液，此后將其放入-20。C冰箱。3天后，在氬氣環(huán)境中過濾并且用乙醚洗滌而得到化合物1-11的雙-HCl鹽，為1.823g黃色粉末，產(chǎn)率70%。2-(3-(2-(3-氟-4-(4-甲基哌嗪-l-基)苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)苯基)乙腈硫酸鹽(化合物1-11硫酸鹽)將350mg化合物1-11溶于35mL丙酮并且加入0,122mL(2.5eq)H2S04。沉淀快速形成。將該混合物儲存在室溫下過夜。過濾得到394mg黃色吸濕性粉末。將該固體懸浮于乙醇中1小時并且過濾得到350mg白色粉末，產(chǎn)率68%(不吸濕)。力-NMR300MHz，CD力D)7.94(d，J=7.33Hz，1H),7.76(s，1H)，7.65(d，J=8.3Hz，1H)，7.49(m，2H)，7.29(m，3H)，6.57(d，J=7.33Hz，1H)，3.96(s，2H)，3.74(t，J-12.45Hz，4H)，3.42(m，4H)，3.12(s，3H)，"F-NMR(300MHz，CD3OD)-186.99Hz。47元素分析理論值C，45.02;H,4.60;N，15.98;S,10.45，測定值C,45.68;H，4.30;N,15.96;S,9.39。2-(3-(2-(3-氟-4-(4-曱基哌嗪-l-基)苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)苯基)乙腈曱磺酸鹽(化合物1-11曱磺酸鹽)向化合物1-11(400mg)在40mLIPA中的溫熱溶液中加入甲磺酸(0.186niL,3eq)。澄清溶液逐步變混濁并且將該混合物儲存在-20。C下過夜。在N2中過濾殘余物并且在真空中干燥而得到400mg白色粉末，產(chǎn)率68%。4-NMR(300MHz，CD3OD)7.83(d，J=7.08Hz,1H)，7.67(s，1H)，7.55(d，J=8.55Hz，1H)，7.42(m，2H),7.19(m，3H)，6.43(d，J=7.33Hz,1H),3.85(s，2H)，3.62(d，J=11.23Hz，4H)，3.37(m,4H)，3.歸,J-ll.OHz，2H),3.04(s,3H)，2.71(s,6H)。元素分析理論值C49.25，H5.29,N16.08,S10.52，測定值C48.75，H5.50，N15.13，S10.51。2-(3-(2-(3-氟-4-(4-甲基哌嗪-l-基)苯基氡基)嘧啶-4-基氨基)苯基)乙腈苯磺酸鹽(化合物1-11苯磺酸鹽)向化合物1-11(400mg)在30mL乙醇中的溶液中加入苯磺酸(455mg，3eq)。澄清溶液形成，此后快速出現(xiàn)白色沉淀。在&中過濾殘余物過夜，在真空中干燥而得到520mg白色固體，產(chǎn)率74%。^-NMR(300MHz,CD30D-CDC13)7.93(m，3H),7.82(d，J=7.08Hz,1H)，7.66(s，1H)，7.49M,5H)，7.27(d,J-7.33Hz，1H),7'21(d，J-9.04Hz，1H),7，04(t，J=7.3Hz，1H)，6.49(d,J=7.32Hz,1H)，3.85(s,2H)，3.67(d，J=10.2Hz，2H),3.63(d，J=ll.7Hz，2H),3.39(s，4H)，3.03(s，3H)。元素分析理論值C57.28，H4.94,N13.36，S8.74，測定值C57.06，H4.86，N13.20，S8.66。2-(3-(2-(4-(4-甲基哌嗪-l-基)-3-(三氟曱基)苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)苯基)乙腈鹽酸鹽(化合物1-18HC1)化合物1-18(500mg)難以完全溶于40mLIPA。然而，在添加HC1(0.446mL，5eq)并且加熱后，獲得澄清黃色溶液。將該溶液冷卻至室溫并且放入-20。C水箱內(nèi)2天。過濾并且在真空至干燥后得到570rag粉末,產(chǎn)率84%。力-賺(300MHz,CD卿7.87(d,J-7.32Hz，1H)，7.81(s,2H)，7.60(m，3H),7.36(m，1H)，7.22(d,J-7.82Hz，1H)，6.48(d，J-7.33Hz，1H),3.89(m，3H)，3.60(d，J=7.57Hz，2H)，3.25(m，4H)，2,99(s，3H)，1.14(d,J=6.35Hz，6H，IPA)。元素分析理論值C，53.17;H，6.06;N，15.50;Ci，11.21，測定值C，53.27;H,6.37;N，14.84;Cl，10.81。2-(3-(2-(4-(4-甲基哌嗪-l-基)-3-(三氟甲基)苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)苯基)乙腈疏酸鹽(化合物1-18硫酸鹽)向化合物l-18(400mL)在50mLIPA中的溶液中加入H2S04(0.137mL，3eq)。沉淀快速形成。在&中經(jīng)周末過濾得到407mg黃色粉末，產(chǎn)率68%。!H-醒(300MHz,CD3OD)7.89(d,J=7.32Hz，1H),7.78(m,2H),7.60(m，3H)，7.36(t,J-7.32Hz，1H)，7.22(d，J-7.08Hz,1H)，6.48(d，J=7.33Hz，1H)，3.87(s,2H),3.60(d,J=7.1Hz，2H),3.27(m，4H)，3，21(s,3H)。元素分析理論值C，44.15;H，4.65;N，14.13;S,9.24，測定值C，44.20;H,4.65;N，13.98;S，9.16。2-(3-(2-(4-(4-曱基哌溱-l-基)-3-(三氟曱基)苯基氨基)嗜咬-4-基氨基)苯基)乙腈曱磺酸鹽(化合物1-18甲磺酸鹽)向化合物l-18H00mg)在20mL丙酮中的溶液(幾乎澄清)中加入甲磺酸(0.139mL,2.5eq)。該溶液變混濁。將該混合物經(jīng)周末儲存在-20。C下。傾倒出丙酮。洗滌固體并且在真空中干燥而得到429mg黃色粉末，產(chǎn)率74%。lH-腿(300MHz，CD力D)7.88(d，J=7.33Hz，1H)，7.78(m，2H)，7.59(m，3H),7.35(t，J=7.32Hz,1H)，7.22(d，J-7.08Hz,1H)，6.48(d,J=7.33Hz，1H)，3.86(s，2H)，3.60(d，J=7.57Hz，2H)，3.27(m，4H)，2.99(s，3H),2.72(s,6H)。元素分析理論值C，46.08;H,5.06;N，14.47;S，9.46，測定值C,46.08;H，4.93;N,14.16;S，10.25。2-(3-(2-(4-(4-曱基哌嗪-l-基)-3-(三氟甲基)苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)苯基)乙腈苯磺酸鹽(化合物1-18苯磺酸鹽)向化合物1-18(400mg)在IPA(30mL)中的熱懸浮液中加入苯磺酸(406mg，3eq)。將其在室溫下冷卻并且儲存在-20。C下過夜。在N2中過濾得到516mg黃色粉末，產(chǎn)率72%。^-NMR(300MHz，CD30D)7.81(m，7H)，7.58(m,3H)，7.43(m,7H),7.19(d，J=7.57Hz，1H)，6.47(d，J=7.33Hz，1H)，3.84(s，2H)，3.58(d，2H)，3.23(m，5H)，2.97(s，3H),19F-NMR(300Mz，CD30D)-126.58。元素分析理論值C，51.60;H，5.05;N，11.70;S，7.65，測定值C，51.57;H,4.96;N，10.98;S，7.61。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage50</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage51</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage52</column></row><table>實施例5有代表性的化合物的活性A.JAK2激酶抑制試驗可以測定JAK2激酶活性的一種例證性方式通過在體外JAK2激酶反應(yīng)后保留在溶液中的ATP量進行定量，諸如激酶-Glo測定試劑盒(Promega，Inc.，Madison,WI)來進行。在激酶反應(yīng)后保留在溶液中的ATP的量用作催化熒光素得到氧熒光素+1個光子的熒光素酶的底物。因此，LuminoskanAscentInstrument(ThermoElectronCorp.，Milford，MA)讀取的發(fā)光信號與激酶反應(yīng)后存在的ATP量相關(guān)，并且與激酶活性的量成反比。本試驗可有效測定激酶抑制射針對JAK2激酶的ICs。值。將這些試驗設(shè)定在白色平底96孔平板中的50ul體積中一式兩份進行。將抑制劑加入到IX激酶緩沖液，6uMATP，62.5uMJAK2-特異性底物，30ng活性JAK2酶和水的從微摩爾到納摩爾濃度范圍順序稀釋的溶液中。將該溶液在301C下以360rpm孵育2小時。52孵育后，向各孔中加入50ul激酶-Glo試劑，包括所有陽性對照和陰性對照孔并且在室溫下孵育15分鐘。然后通過LuminoskanAscent儀器讀取平板并且使用AscentSoftware2.6版展示結(jié)果。然后對每種測試的抑制劑計算ICs。值。還通過放射性測定法；即激酶Profiler和IC50Profiler測定服務(wù)系統(tǒng)(Millipore-Upstate，Dundee,UK)測試化合物。簡言之，在有放射性標記的ATP存在下對重組JAK2酶測試單一濃度(用于單點篩選)或許多濃度(用于ICs。測定)的化合物。JAK2V617F突變體同種型近期已經(jīng)在集中于其在致瘤性轉(zhuǎn)化方面取得了進展。因此，還使用SelectScreen測定服務(wù)系統(tǒng)(InvitrogenCorporation,Carlsbad,CA)，包括JAK2的野生型和V617F突變體同種型測試了化合物。這些酶包括蛋白質(zhì)的JH1和JH2同源區(qū)并且僅在617位氨基酸上不同。B.基于細胞的JAK2激酶抑制劑試驗將基于細胞培養(yǎng)物的試驗用于評價本發(fā)明化合物抑制一種或多種細胞活性，諸如癌細胞生長和/或存活的能力。大量癌細胞系可以獲自美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)和其它來源。簡言之，將細胞接種入96-孔組織培養(yǎng)物處理的不透明白色平板(ThermoElectron,Vantaa，F(xiàn)inland),根據(jù)細胞增殖速度的不同，在lOOul合適的生長培養(yǎng)基中600—14000個細胞/孔(由ATCC測定)。然后使細胞接觸適當濃度的藥物并且使其生長存在96小時。此后，向各孔中加入100ulCell-Titer-Glo試劑(Promega，Inc.,Madison,WI)。然后在室溫下將平板振搖2分鐘以使細胞裂解并且在室溫下孵育10分鐘以使發(fā)光信號穩(wěn)定。與來自Promega的激酶-Glo試驗試劑類似，該試劑包含熒光素酶及其底物熒光素。被細胞裂解物中ATP活化的熒光素酶將熒光素催化轉(zhuǎn)化成氧熒光素，即發(fā)光的反應(yīng)。產(chǎn)生的光的量與細胞裂解物中ATP的量成正比，ATP的量自身與細胞數(shù)量成正比并且得到細胞增殖指數(shù)。為了檢測細胞培養(yǎng)物中JAK2酶的特異性抑制，還可以進行蛋白53質(zhì)印跡試驗。為了這一目的，用對分離和保存蛋白質(zhì)具有特異性的緩沖液(l。/。NonidetP-40，120mMNaCl,3隨TrispH7.4，1:100蛋白酶抑制劑混合物in[Calbiochem/EMDBiosciences],1:100磷酸酶抑制劑混合物l[Sigma-Aldrich，SaintLouis,MO]，1:100磷酸酶抑制劑混合物2[Sigma-Aldrich，SaintLouis,MO])裂解用可能的JAK2抑制劑處理的細胞。然后使用BCA蛋白質(zhì)測定試劑盒(Pierce)對這些裂解物中的蛋白質(zhì)濃度進行定量。使已知量的蛋白質(zhì)，例如50ug上10。/。SDS-聚丙烯酰胺凝膠并且進行還原，變性SDS-PAGE。將電泳的蛋白轉(zhuǎn)至硝化纖維膜，然后用針對STAT5，pSTAT5(Tyr694),STAT3和pSTAT3(Tyr705)的抗體探測。因為分別在694位酪氨酸和705位酪氨酸上的STAT5和STAT3為JAK2的底物，所以測定在處理細胞中這些位點上的磷酸化的量可以提供評價JAK2抑制劑功效的方式。C.JAK2激酶特異性活性數(shù)據(jù)在300nM-10nM稀釋范圍篩選作為JAK2抑制劑的化合物序號1-4,1-7，1-11和1-17，其中使用Cell-Titer-Glo試驗測定存活百分比。這些化合物各自產(chǎn)生相對于來自計算ic5。值的抑制劑濃度的。/。存活值。這些化合物在不同癌細胞系中產(chǎn)生的ICs。值低于10nM。對化合物序號卜4,1-7,1-11和1-17測定了針對JAK2激酶的ICs。值(使用Promega激酶-Glo試驗)。經(jīng)測定這些化合物各自具有低于1uM的ICs。值。IC5eProfileTM數(shù)據(jù)顯示化合物序號1-4，1-7，1-11和1-17的ICs。值低于1uM，而來自使用針對野生型(JAK2WT)和突變體JAK2激酶(JAK2V617F)的InvitrogenSelectScreenprofiling篩選的化合物的數(shù)據(jù)顯示這4種化合物的ICs。值低于1jjM。實施例6有代表性的化合物調(diào)節(jié)STAT3和STAT5A.化合物1-4抑制STAT3和STAT5磷酸化在本實施例中，證實化合物1-4減少AGS胃癌細胞系中STAT3和STAT5的"K2-依賴性磷酸化。簡言之，將AGS細胞在25cm2組織培養(yǎng)燒瓶中鋪板并且在有不同濃度化合物1-4存在下孵育24小時。孵育后，裂解細胞并且分離總蛋白且定量。對50jig總蛋白進行電泳并且轉(zhuǎn)至硝化纖維膜，此時使用針對STAT3-磷酸-Y705和STAT5-磷酸-Y694的抗體進行蛋白質(zhì)印跡分析。還與STAT3和STAT5總進行比較。進行光密度測定分析以便對這些處理的細胞中STAT3和STAT5磷酸化的量進行定量。將磷酸-STAT3和磷酸-STAT5與總STAT3和STAT5進行比較并且測定STAT磷酸化相對于未處理的對照組的比例。用1號化合物處理的細胞在低微摩爾濃度(5-10uM)下展示出下降的STAT3和STAT5磷酸化水平。B.化合物1-4減少STAT3活化當STAT3被JAK2磷酸化時，它形成同型二聚體并且易位至核以便影響涉及細胞增殖的大量靶基因的轉(zhuǎn)錄。在96孔平板上孵育AGS胃癌細胞并且在有5jaM化合物l-4存在下孵育1，5或24小時。孵育后，使用STAT3HitKU(Thermo—Fisher)染色細胞并且在ArrayScanVTi高含量篩選儀(Thermo-Fisher)上使用MolecularTranslocationBioApplication檢測。核被假擬染色成藍色(Hoechst)且STAT3被假擬染色成綠色(FITC)。在未處理的細胞中，在核中發(fā)現(xiàn)了大量的STAT3，表明STAT3被磷酸化，具有活性并且誘導轉(zhuǎn)錄。然而，在使用化合物l-4處理的細胞中，STAT3染色限于核外部，這表明它未磷酸化并且無活性，即預期的JAK2抑制劑的作用。在與未處理的樣品這核STAT3水平比較時，在用化合物1-4處理后24h，核STAT3減少了50%以上。C,化合物l-4和l-7減少表達Jak2(V617F)的細胞中STAT5磷酸化在本實施例中，證實化合物1-4，1-7，1-11和1-17減少表達JAK2的V^F突變體的細胞中STAT5的JAK2-依賴性磷酸化。簡言之，將HEL細胞在25cm2組織培養(yǎng)瓶中鋪板并且在有不同濃度化合物序號1或2存在下孵育24小時。孵育后，裂解細胞并且分離和定量總蛋白。電泳50jJg總蛋白并且轉(zhuǎn)至硝化纖維膜上，此時使用針對STAT5-磷酸-Y694的抗體進行蛋白質(zhì)印跡分析。與總STAT5進行比較。進行光密度測定分析以便定量這些測試細胞中STAT5磷酸化的量。從本試驗中測定ECs。值就化合物1-4而言為299nM,就化合物1-7而言為4nM,就化合物1-11而言為65.8nM且就化合物1-17而言為266nM。將本說明書中涉及和/或申請數(shù)據(jù)單上所列的所有上述美國專利，美國專利申請公開文獻，美國專利申請，外國專利，外國專利申請和非專利公開文地引入本文作為參考。從上述中可以理解，盡管描述本發(fā)明的具體實施方案是為了例證目的，但是可以在不脫離本發(fā)明精神和范圍的情況下進行各種變型。因此，本發(fā)明不受限制，而由待批權(quán)利要求限定。權(quán)利要求1.具有如下結(jié)構(gòu)(I)的化合物包括其立體異構(gòu)體和藥學上可接受的鹽，其中Z為CH或N；W1和W2獨立地為直接鍵，-C(＝O)-或-O(CH2)n-；X1和X2獨立地為-H，-CF3，-OCF3，-OCHF2，-OCH3，-CH3，-OH，-NO2，-NH2，鹵素或其中Q為O或N且R不存在或R為-C1-6烷基，條件是X1或X2之一為Y1和Y2獨立地為-H，-CN，鹵素或被-CN取代的C1-4烷基，條件是Y1和Y2不均為-H；且n為1，2或3。2.權(quán)利要求1所述的化合物或其立體異構(gòu)體或藥學上可接受的鹽，其中z為CH。3.權(quán)利要求2所述的化合物或其立體異構(gòu)體或藥學上可接受的鹽，其中f為卣素。4.權(quán)利要求3所述的化合物或其立體異構(gòu)體或藥學上可接受的鹽，其中YZ為-CN，面素或被-CN取代的Cw烷基。5.權(quán)利要求3所述的化合物或其立體異構(gòu)體或藥學上可接受的鹽，其中Y工為-CN，囟素或被-CN取代的Cw烷基。6.權(quán)利要求2所述的化合物或其立體異構(gòu)體或藥學上可接受的鹽，其中f為-H。7.權(quán)利要求6所述的化合物或其立體異構(gòu)體或藥學上可接受的鹽，其中^為-CN，卣素或被-CN取代的Cw烷基。8.權(quán)利要求6所述的化合物或其立體異構(gòu)體或藥學上可接受的鹽，其中yz為-CN，鹵素或被-CN取代的Cw烷基。9.權(quán)利要求2所述的化合物，選自或其立體異構(gòu)體或?qū)W上可接受的鹽。10.權(quán)利要求2所述的化合物，選自<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>或其立體異構(gòu)體或藥學上可接受的鹽。11.權(quán)利要求1所述的化合物或其立體異構(gòu)體或藥學上可接受的鹽，其中Z為N。12.權(quán)利要求11所述的化合物或其立體異構(gòu)體或藥學上可接受的鹽，其中X2為-H。13.權(quán)利要求12所述的化合物或其立體異構(gòu)體或藥學上可接受的鹽，其中y2為-CN，鹵素或被-CN取代的Cw烷基。14.權(quán)利要求12所述的化合物或其立體異構(gòu)體或藥學上可接受的鹽，其中r為-CN，面素或被-CN取代的d"烷基。15.權(quán)利要求11所述的化合物，選自或其立體異構(gòu)體或藥學上可接受的鹽。16.組合物，包含權(quán)利要求1所述的化合物與藥學上可接受的賦形劑。17.治療JAK2蛋白激酶-介導的疾病的方法，所述方法包括對有此需要的對象給予治療有效量的權(quán)利要求16所述的組合物。18.權(quán)利要求17所述的方法，其中JAK2蛋白激酶-介導的疾病為癌癥。19.權(quán)利要求17所述的方法，其中所述的癌癥為結(jié)腸癌，前列腺癌，睪丸癌，肺癌，子宮癌，卵巢癌，胃癌，乳腺癌，胰腺癌，白血病或淋巴瘤。全文摘要披露了具有作為JAK2激酶抑制劑活性的嘧啶-2，4-二胺類衍生物和組合物以及使用它們治療癌癥和其它JAK2激酶-相關(guān)疾患的方法。文檔編號C07D239/48GK101657431SQ200880010977公開日2010年2月24日申請日期2008年2月29日優(yōu)先權(quán)日2007年3月1日發(fā)明者D·J·拜爾斯,H·范卡亞拉帕蒂,劉曉輝申請人:休普基因公司