專利名稱：作為細胞增殖抑制劑的2-碳環(huán)氨基-4-咪唑基嘧啶的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及具有CDK抑制活性的式(I)的化合物的任何和全部互變異構(gòu)形式。
同樣要理解的是，式(I)的某些化合物可以以溶劑化形式及非溶劑化物形式存在，如水合形式。要理解的是，本發(fā)明包括具有CDK抑制活性的所有這類溶劑化形式。
可變基團的具體值如下。此類值可以在適當(dāng)時與上文或下文中所限定的任何定義、權(quán)利要求和實施方案一起使用。
環(huán)A是5-7元飽和碳環(huán)。
環(huán)A是5或6元飽和碳環(huán)。
環(huán)A是環(huán)己基。
環(huán)A是環(huán)戊基 環(huán)A是環(huán)戊基或環(huán)己基。
R1選自氨基、氨磺酰基氨基或基團-R6-R7；其中 R6選自-N(R15)-、-N(R16)C(O)-、-N(R18)C(O)O-或-N(R25)SO2-；其中R15、R16、R18和R25獨立地為氫或C1-6烷基； R7選自C1-6烷基或雜環(huán)基；其中R7可以任選在碳上被一個或多個R27取代；且其中如果所述雜環(huán)基含有-NH-部分，該氮可以任選被選自R28的基團取代； R27選自C1-6烷基或雜環(huán)基-R30-；其中如果所述雜環(huán)基含有-NH-部分，該氮可以任選被選自R32的基團取代； R28和R32是C1-6烷氧基羰基；且 R30是直接鍵。
R1選自羧基、氨基、氨磺?；被蚧鶊F-R6-R7；其中 R6選自-N(R15)-、-C(O)-、-C(O)O-、-N(R16)C(O)-、-C(O)N(R17)-、-N(R18)C(O)O-、-N(R22)SO2N(R23)-或-N(R25)SO2-；其中R15、R16、R17、R18、R22、R23和R25獨立地為氫或C1-6烷基； R7選自C1-6烷基或雜環(huán)基；其中R7可任選在碳上被一個或多個R27取代；且其中如果所述雜環(huán)基含有-NH-部分，該氮可以任選被選自R28的基團取代； R27選自C1-6烷基、N，N-(C1-6烷基)2氨基或雜環(huán)基-R30-；且其中如果所述雜環(huán)基含有-NH-部分，該氮可以任選被選自R32的基團取代； R28和R32獨立地選自C1-6烷基和C1-6烷氧基羰基；和 R30是直接鍵。
R1選自氨基、氨磺酰基氨基或基團-R6-R7；其中 R6選自-N(R15)-、-N(R16)C(O)-、-N(R18)C(O)O-或-N(R25)SO2-；其中R15、R16、R18和R25獨立地為氫或甲基； R7選自甲基、乙基、丙基、叔丁基或哌啶基；其中R7可任選在碳上被一個或多個R27取代；且其中所述哌啶基可任選在氮上被選自R28的基團取代； R27選自甲基、哌啶基-R30-、哌嗪基-R30-或嗎啉代-R30-；其中所述哌啶基或哌嗪基可以任選在氮上被選自R32的基團取代； R28和R32是叔丁氧基羰基；且 R30是直接鍵。
R1選自羧基、氨基、氨磺?；被蚧鶊F-R6-R7；其中 R6選自-N(R15)-、-C(O)-、-C(O)O-、-N(R16)C(O)-、-C(O)N(R17)-、-N(R18)C(O)O-、-N(R22)SO2N(R23)-或-N(R25)SO2-；其中R15、R16、R17、R18、R22、R23和R25獨立地為氫或甲基； R7選自甲基、乙基、丙基、叔丁基、高哌嗪基或哌啶基；其中R7可以任選在碳上被一個或多個R27取代；且其中如果所述雜環(huán)基含有-NH-部分，該氮可以任選被選自R28的基團取代； R27選自甲基、N，N-二甲基氨基、吡咯烷基-R30-、哌嗪基-R30-、哌啶基-R30-或嗎啉代-R30-；且其中如果所述雜環(huán)基含有-NH-部分，該氮可以任選被選自R32的基團取代； R28和R32獨立地選自甲基和叔丁氧基羰基；且 R30是直接鍵。
R1選自氨基、氨磺?；被?、叔丁氧基羰基氨基、甲磺?；被⒍谆被?、(4-嗎啉代丁?；?氨基、2-(哌啶-4-基)乙酰基氨基、2-(N-叔丁氧基羰基哌啶-4-基)乙酰基氨基、3-(哌嗪-4-基)丙?；被?-(1-叔丁氧基羰基哌嗪-4-基)丙?；被?、3-(哌啶-4-基)丙?；被?、3-(N-叔丁氧基羰基哌啶-4-基)丙?；被?-甲基-哌啶-4-基羰基氨基N-叔丁氧基羰基-4-甲基-哌啶-4-基羰基氨基、2-(哌啶-3-基)乙?；被?-(N-叔丁氧基羰基哌啶-3-基)乙?；被?。
R1選自氨基、羧基、甲氧基羰基、氨磺酰基氨基、N-甲基氨基甲酰基、N-(2-二甲基氨基乙基)氨基甲?；-(2-吡咯烷-1-基乙基)氨基甲?；?、N，N-二甲基氨磺酰基氨基、叔丁氧基羰基氨基、甲磺?；被⒍谆被?、(4-嗎啉代丁酰基)氨基、2-(哌啶-4-基)乙酰基氨基、2-(N-叔丁氧基羰基哌啶-4-基)乙?；被?、3-(哌嗪-4-基)丙酰基氨基、3-(1-叔丁氧基羰基哌嗪-4-基)丙酰基氨基、3-(哌啶-4-基)丙酰基氨基、3-(N-叔丁氧基羰基哌啶-4-基)丙?；被?-甲基-哌啶-4-基羰基氨基、N-叔丁氧基羰基-4-甲基-哌啶-4-基羰基氨基、2-(吡咯烷-1-基)乙基磺酰基氨基、2-(二甲基氨基)乙基磺?；被?-(吡咯烷-1-基)丙基磺?；被?、3-(吡咯烷-1-基)丙酰基氨基、1-甲基高哌嗪-4-基羰基、2-(哌啶-3-基)乙?；被?-(二甲基氨基)丙?；被?-甲基哌啶-4-基羰基氨基、2-(N-叔丁氧基羰基哌啶-3-基)乙?；被?。
q是0。
R1、(R2)q和環(huán)A一起形成3-(2-二甲基氨基乙基氨基甲酰基)環(huán)戊基、3-(2-吡咯烷-1-基乙基氨基甲酰基)環(huán)戊基、3-(4-甲基1，4-二氮雜環(huán)庚烷-1-羰基)環(huán)戊基、3-(甲基氨基甲?；?環(huán)戊基、3-羧基環(huán)戊基、3-(2-二甲基氨基乙基磺?；被?環(huán)戊基、3-(2-吡咯烷-1-基乙基磺?；被?環(huán)戊基、3-(3-二甲基氨基丙?；被?環(huán)戊基、3-[(1-甲基哌啶-4-羰基)氨基]環(huán)戊基、3-氨基環(huán)戊基、3-甲磺酰氨基環(huán)戊基、3-(2-二甲基氨基乙基氨基甲酰基)環(huán)己基、3-(2-吡咯烷-1-基乙基氨基甲?；?環(huán)己基、3-(2-吡咯烷-1-基乙基磺?；被?環(huán)己基、3-(3-二甲基氨基丙?；被?環(huán)己基、3-(3-吡咯烷-1-基丙?；被?環(huán)己基、3-(3-吡咯烷-1-基丙基磺?；被?環(huán)己基、3-(4-甲基1，4-二氮雜環(huán)庚烷-1-羰基)環(huán)己基、3-(甲基氨基甲?；?環(huán)己基、3-[(1-甲基哌啶-4-羰基)氨基]環(huán)己基、3-氨基環(huán)己基、3-羧基環(huán)己基、3-甲磺酰氨基環(huán)己基、3-甲氧基羰基環(huán)己基、4-(2-二甲基氨基乙基氨基甲?；?環(huán)己基、4-(2-吡咯烷-1-基乙基氨基甲?；?環(huán)己基、4-(2-吡咯烷-1-基乙基磺?；被?環(huán)己基、4-(3-二甲基氨基丙?；被?環(huán)己基、4-(3-哌嗪-1-基丙酰基氨基)環(huán)己基、4-(3-吡咯烷-1-基丙?；被?環(huán)己基、4-(3-吡咯烷-1-基丙基磺?；被?環(huán)己基、4-(4-甲基1，4-二氮雜環(huán)庚烷-1-羰基)環(huán)己基、4-(4-嗎啉代丁?；被?環(huán)己基、4-(二甲基氨磺?；被?環(huán)己基、4-(甲基氨基甲酰基)環(huán)己基、4-(氨磺?；被?環(huán)己基、4-(叔丁氧基羰基氨基)環(huán)己基、4-[(1-甲基哌啶-4-羰基)氨基]環(huán)己基、4-[(4-甲基-1-叔丁氧基羰基-哌啶-4-羰基)氨基]環(huán)己基、4-[(4-甲基哌啶-4-羰基)氨基]環(huán)己基、4-[[2-(1-叔丁氧基羰基-4-哌啶基)乙?；鵠氨基]環(huán)己基、4-[[2-(4-哌啶基)乙?；鵠氨基]環(huán)己基、4-[[2-[1-叔丁氧基羰基-3-哌啶基]乙?；鵠氨基]環(huán)己基、4-[[2-[3-哌啶基]乙酰基]氨基]環(huán)己基、4-[[2-[1-叔丁氧基羰基-3-哌啶基]乙?；鵠氨基]環(huán)己基、4-[[2-[3-哌啶基]乙?；鵠氨基]環(huán)己基、4-[3-(1-叔丁氧基羰基-4-哌啶基)丙?；被鵠環(huán)己基、4-[3-(4-哌啶基)丙?；被鵠環(huán)己基、4-[3-(4-叔丁氧基羰基哌嗪-1-基)丙酰基氨基]環(huán)己基、4-氨基環(huán)己基、4-羧基環(huán)己基、4-二甲基氨基環(huán)己基和4-甲磺酰氨基環(huán)己基。
R3是鹵素。
R3是氟。
R3是氯。
R3是溴。
R3是氰基。
R3是氨基。
n是0。
n是1。
n是0或1。
R4是異丙基。
R5是甲基。
因此在本發(fā)明的進一步方面中，提供了式(I)的化合物(如上所述)或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解酯，其中 環(huán)A是5-7元飽和碳環(huán)； R1選自氨基、氨磺?；被蚧鶊F-R6-R7； q是0； n是0； R4是異丙基； R5是甲基； R6選自-N(R15)-、-N(R16)C(O)-、-N(R18)C(O)O-或-N(R25)SO2-；其中R15、R16、R18和R25獨立地為氫或C1-6烷基； R7選自C1-6烷基或雜環(huán)基；其中R7可以任選在碳上被一個或多個R27取代；且其中如果所述雜環(huán)基含有-NH-部分，該氮可以任選被選自R28的基團取代； R27選自C1-6烷基或雜環(huán)基-R30-；其中如果所述雜環(huán)基含有-NH-部分，該氮可以任選被選自R32的基團取代； R28和R32是C1-6烷氧基羰基；且 R30是直接鍵。
因此在本發(fā)明的進一步方面中，提供了式(I)的化合物(如上所述)或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解酯，其中 環(huán)A是5或6元飽和碳環(huán)； R1選自羧基、氨基、氨磺酰基氨基或基團-R6-R7； q是0； R3是鹵素； n是0或1； R4是異丙基； R5是甲基； R6選自-N(R15)-、-C(O)-、-C(O)O-、-N(R16)C(O)-、-C(O)N(R17)-、-N(R18)C(O)O-、-N(R22)SO2N(R23)-或-N(R25)SO2-；其中R15、R16、R17、R18、R22、R23和R25獨立地為氫或C1-6烷基； R7選自C1-6烷基或雜環(huán)基；其中R7可以任選在碳上被一個或多個R27取代；且其中如果所述雜環(huán)基含有-NH-部分，該氮可以任選被選自R28的基團取代； R27選自C1-6烷基、N，N-(C1-6烷基)2氨基或雜環(huán)基-R30-；且其中如果所述雜環(huán)基含有-NH-部分，該氮可以任選被選自R32的基團取代； R28和R32獨立地選自C1-6烷基和C1-6烷氧基羰基；且 R30是直接鍵。
因此在本發(fā)明的進一步方面中，提供了式(I)的化合物(如上所述)或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解酯，其中 環(huán)A是環(huán)戊基或環(huán)己基； R1選自氨基、羧基、甲氧基羰基、氨磺?；被-甲基氨基甲?；?、N-(2-二甲基氨基乙基)氨基甲?；?、N-(2-吡咯烷-1-基乙基)氨基甲酰基、N，N-二甲基氨磺?；被?、叔丁氧基羰基氨基、甲磺?；被?、二甲基氨基、(4-嗎啉代丁酰基)氨基、2-(哌啶-4-基)乙?；被?-(N-叔丁氧基羰基哌啶-4-基)乙?；被?、3-(哌嗪-4-基)丙酰基氨基、3-(1-叔丁氧基羰基哌嗪-4-基)丙酰基氨基、3-(哌啶-4-基)丙?；被?-(N-叔丁氧基羰基哌啶-4-基)丙?；被?-甲基-哌啶-4-基羰基氨基、N-叔丁氧基羰基-4-甲基-哌啶-4-基羰基氨基、2-(吡咯烷-1-基)乙基磺?；被?、2-(二甲基氨基)乙基磺酰基氨基、3-(吡咯烷-1-基)丙基磺酰基氨基、3-(吡咯烷-1-基)丙酰基氨基、1-甲基高哌嗪-4-基羰基、2-(哌啶-3-基)乙?；被?-(二甲基氨基)丙?；被?-甲基哌啶-4-基羰基氨基、2-(N-叔丁氧基羰基哌啶-3-基)乙?；被?； q是0； R3是鹵素； n是0或1； R4是異丙基； R5是甲基。
在本發(fā)明的另一方面中，本發(fā)明的優(yōu)選化合物是實施例的任一種或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解酯。
在本發(fā)明的另一方面中，本發(fā)明的特定化合物是實施例2、3、6、45、46、47、54、56、57和58的任一種或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解酯。
本發(fā)明的優(yōu)選方面是與式(I)的化合物或其可藥用鹽相關(guān)的那些。
本發(fā)明的另一方面提供了制備式(I)的化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解酯的方法，該方法(其中可變基團除非另行指明如式(I)中所定義)包含 方法a)式(II)的嘧啶
其中L是可置換基團；與式(III)的胺的反應(yīng)
或 方法b)使式(IV)的化合物
與式(V)的化合物反應(yīng)
其中T是O或S；Rx可以相同或不同并選自C1-6烷基；或 方法c)使式(VI)的嘧啶
與式(VII)的化合物反應(yīng)
其中Y是可置換基團； 且此后如果必要 i)將式(I)的化合物轉(zhuǎn)化成式(I)的另一化合物； ii)除去任何保護基； iii)形成可藥用鹽或體內(nèi)可水解酯。
L是可置換基團，L的合適的值是例如鹵素或磺酰氧基，例如氯、溴、甲烷磺酰氧基或甲苯-4-磺酰氧基。
Y是可置換基團，L的合適的值是例如鹵素或磺酰氧基，例如溴、碘或三氟甲烷磺酰氧基。優(yōu)選地，Y是碘基。
上述反應(yīng)的具體反應(yīng)條件如下。
方法a)式(II)的嘧啶和式(III)的胺可以在25-200℃，特別是60-160℃的溫度下在合適的溶劑，如四氫呋喃、N-甲基吡咯烷酮或異丙基醇中一起反應(yīng)，或可以無摻雜地一起反應(yīng)。該反應(yīng)可以在合適的堿，如N，N-二異丙基乙基胺、氫化鈉或碳酸鉀存在下進行。
式(II)的嘧啶，其中L是氯，可以根據(jù)方案1制備
方案1 式(III)的胺是市售化合物，或它們是文獻中已知的，或它們通過本領(lǐng)域已知的標(biāo)準(zhǔn)方法制備。
方法b)式(IV)的化合物和式(V)的化合物在合適的溶劑如N-甲基吡咯烷酮或丁醇中在100-200℃，優(yōu)選150-170℃的溫度下一起反應(yīng)。該反應(yīng)優(yōu)選在合適的堿，如氫化鈉、甲醇鈉或碳酸鉀存在下進行。
式(V)的化合物可以根據(jù)方案2制備
方案2 式(IV)和(Va)的化合物是市售化合物，或它們是文獻中已知的，或它們通過本領(lǐng)域中已知的標(biāo)準(zhǔn)方法制備。
方法c)式(VI)的化合物和式(VII)的胺可以在方法a中所述的條件下一起反應(yīng)。
式(VI)的化合物的合成描述在方案1中。
式(VII)的化合物是市售化合物，或它們是文獻中已知的，或它們通過本領(lǐng)域中已知的標(biāo)準(zhǔn)方法制成。
要認(rèn)識到，本發(fā)明的化合物中各種環(huán)取代基的一些可以在上述方法之前或在上述方法后立即通過標(biāo)準(zhǔn)芳族取代反應(yīng)引入或通過傳統(tǒng)的官能團改性產(chǎn)生，并且就這樣包含在本發(fā)明的方法方面中。這類反應(yīng)和改性包括，例如，通過芳族取代反應(yīng)、取代基的還原、取代基的烷基化和取代基的氧化來引入取代基。這類程序的試劑和反應(yīng)條件是化學(xué)工藝中公知的。芳族取代反應(yīng)的具體實例包括使用濃硝酸引入硝基；使用例如?；u和路易斯酸(如三氯化鋁)在Friedel Crafts條件下引入?；?；使用烷基鹵和路易斯酸(如三氯化鋁)在Friedel Crafts條件下引入烷基；和引入鹵代基團。改性的具體實例包括通過例如在加熱下在鹽酸存在下用鎳催化劑催化氫化或用鐵處理來將硝基還原成氨基；將烷基硫基氧化成烷基亞磺?；蛲榛酋；?。
也要認(rèn)識到，在本文提到的一些反應(yīng)中，可能必須/最好保護化合物中的任何敏感基團。必須或最好保護的情況和合適的保護方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的?？梢愿鶕?jù)標(biāo)準(zhǔn)實踐使用傳統(tǒng)保護基(例如參見T.W.Green，Protective Groups in Organic Synthesis，John Wiley and Sons，1991)。因此，如果反應(yīng)物包括如氨基、羧基或羥基的基團，可能最好保護本文提到的一些反應(yīng)中的基團。
對氨基或烷基氨基合適的保護基是，例如，酰基，例如烷酰基，如乙酰基，烷氧基羰基，例如甲氧基羰基、乙氧基羰基或叔丁氧基羰基，芳基甲氧基羰基，例如芐氧基羰基，或芳?；?，例如苯甲酰基。上述保護基的脫保護條件必須隨保護基的選擇而變。由此，可以例如通過用合適的堿如堿金屬氫氧化物，如氫氧化鋰或氫氧化鈉水解來除去例如?；缤轷；蛲檠趸驶蚍减；??；蛘?，可以例如通過用合適的酸，如鹽酸、硫酸或磷酸或三氟乙酸處理來除去酰基，如叔丁氧基羰基，并可以例如通過在催化劑如碳載鈀上氫化或通過用路易斯酸例如三(三氟乙酸)硼處理來除去芳基甲氧基羰基，如芐氧基羰基。對伯氨基合適的另一保護基是例如，可以通過用烷基胺，例如二甲基氨基丙基胺，或用肼處理來除去的鄰苯二甲?；?。
對羥基合適的保護基是例如，?；?，例如烷酰基，如乙酰基，芳?；?，例如苯甲?；蚍蓟谆?，例如芐基。上述保護基的脫保護條件必須隨保護基的選擇而變。因此，例如，可以例如通過用合適的堿如堿金屬氫氧化物，如氫氧化鋰或氫氧化鈉水解來除去例如酰基，如烷?；蚍减；?。或者，可以例如通過在催化劑如碳載鈀上氫化來除去芳基甲基，如芐基。
對羧基合適的保護基是例如，可以例如通過與堿如氫氧化鈉水解來除去的酯化基團，如甲基或乙基，或可以例如通過用酸，例如有機酸如三氟乙酸處理來除去的叔丁基，或可以例如通過在催化劑如碳載鈀上氫化來除去的芐基。
保護基可以在合成中的任何方便的階段使用化學(xué)工藝中公知的傳統(tǒng)技術(shù)除去。
如上所述，本發(fā)明中定義的化合物具有被認(rèn)為由化合物的CDK抑制活性產(chǎn)生的抗細胞增殖活性，如抗癌活性。這些性質(zhì)可以例如使用下列程序評估 檢驗法 使用下列縮寫- HEPES是N-[2-羥基乙基]哌嗪-N′-[2-乙烷磺酸] DTT是二硫蘇糖醇 PMSF是苯基甲基磺?；? 該化合物在體外激酶檢驗法中在96孔格式中使用親近閃爍檢驗法(SPA-獲自Amersham)測試以測量[γ-33-P]-三磷酸腺苷并入試驗底物(GST-視網(wǎng)膜母細胞瘤蛋白質(zhì)；GST-Rb)的情況。在各孔中裝入要測試的化合物(在DMSO和水中稀釋以校正濃度)并在對比孔中裝入作為抑制劑對照物的roscovitine或作為正對照物的DMSO。
在各孔中加入在25微升培養(yǎng)緩沖劑中稀釋的大約0.2微升CDK2/細胞周期蛋白E部分純化酶(其量取決于酶活性)，然后加入20微升GST-Rb/ATP/ATP33混合物(含有在培養(yǎng)緩沖劑中的0.5微克GST-Rb和0.2μM ATP和0.14μCi[γ-33-P]-三磷酸腺苷)，并將所得混合物溫和搖振，然后在室溫下培養(yǎng)60分鐘。
然后在各孔中加入150微升含有(0.8毫克/孔的蛋白質(zhì)A-PVT SPA珠(Amersham))、20pM/孔的抗谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶，Rabbit IgG(獲自Molecular Probes)、61mM EDTA和50mM含0.05％疊氮化鈉的HEPESpH7.5的停止液。
將板用Topseal-S板密封劑密封，放置2小時，然后在2500rpm，1124xg.下旋轉(zhuǎn)5分鐘。在Topcount上讀取該板，每孔讀取30秒。
用于稀釋酶和底物混合物的培養(yǎng)緩沖劑含有50mM HEPES pH7.5、10mM MnCl2、1mM DTT、100μM釩酸鈉、100μM NaF、10mM甘油磷酸鈉，BSA(1mg/ml最終量)。
試驗底物 在該檢驗法中，僅使用一部分視網(wǎng)膜母細胞瘤蛋白質(zhì)(Science 1987Mar13；235(4794)1394-1399；Lee W.H.，Bookstein R.，Hong F.，Young L.J.，Shew J.Y.，Lee E.Y.)，融合到GST標(biāo)簽上。進行視網(wǎng)膜母細胞瘤基因編碼氨基酸379-928(獲自視網(wǎng)膜母細胞瘤質(zhì)粒ATCC pLRbRNL)的PCR，并將該序列克隆到pGEx2T融合載體上(Smith D.B.和Johnson，K.S.Gene 67，31(1988)；其含有用于可誘導(dǎo)表達的tac促進劑、用在任何大腸埃希氏菌宿主中的內(nèi)部1ac Iq基因、和用于凝血酶裂解的編碼區(qū)(獲自Pharmacia Biotech，其用于擴增氨基酸792-928)。將這一序列再克隆到pGEx2T上。
使用標(biāo)準(zhǔn)可誘導(dǎo)表達技術(shù)在大腸埃希氏菌(BL21(DE3)pLysS細胞)中表達由此獲得的視網(wǎng)膜母細胞瘤792-928序列，并如下提純。
大腸埃希氏菌糊再懸浮在10毫升/克NETN緩沖劑(50mM Tris pH7.5，120mM NaCl，1mM EDTA，0.5％v/v NP-40，1mM PMSF，1微克/毫升亮抑酶肽，1微克/毫升抑肽酶和1微克/毫升抑胃肽)中并且每100毫升勻漿超聲處理2 x 45秒。在離心后，將上清液加載到10毫升谷胱甘肽瓊脂糖柱(Pharmacia Biotech，Herts，UK)上并用NETN緩沖劑洗滌。在用激酶緩沖劑(50mM HEPES pH 7.5，10mM MgCl2，1mM DTT，1mMPMSF，1微克/毫升亮抑酶肽，1微克/毫升抑肽酶和1微克/毫升抑胃肽)洗滌后，將該蛋白質(zhì)用在激酶緩沖劑中的50mM還原谷胱甘肽洗脫。匯集含有GST-Rb(792-927)的餾分，并對著激酶緩沖劑滲析過夜。使用8-16％Tris-Glycine凝膠(Novex，San Diego，USA)通過十二烷基硫酸鈉(SDS)PAGE(聚丙烯酰胺凝膠)分析最終產(chǎn)物。
CDK2和細胞周期蛋白E 通過使用HeLa細胞和活化T細胞mRNA作為模板的逆轉(zhuǎn)錄酶-PCR分離CDK2和細胞周期蛋白E的開放閱讀框，并克隆到昆蟲表達載體pVL1393(獲自Invitrogen 1995目錄號V1392-20)中。然后在昆蟲SF21細胞系統(tǒng)(Spodoptera Frugiperda細胞，來自Fall Army Worm的卵巢組織-可購得)中雙表達CDK2和細胞周期蛋白E[使用標(biāo)準(zhǔn)病毒Baculogold同時感染技術(shù)]。
細胞周期蛋白E/CDK2的實例制造 下列實例提供了在SF21細胞中制造細胞周期蛋白E/CDK2的細節(jié)(在TC100+10％FBS(TCS)+0.2％Pluronic中)，對于細胞周期蛋白E& CDK2的各病毒，具有雙感染MOI3。
使用在滾瓶培養(yǎng)中生長至2.33 x 106個細胞/毫升的SF21細胞以0.2x 10E6個細胞/毫升培養(yǎng)10 x 500毫升滾瓶。將該滾瓶在roller rig上在28℃下培養(yǎng)。
在3天(72小時)后，計數(shù)細胞，且發(fā)現(xiàn)2個瓶子的平均值為1.86x 10E6個細胞/毫升(99％存活)。然后將該培養(yǎng)物用雙病毒在對各病毒而言MOI 3下感染。
將病毒在添加到培養(yǎng)物中之前混合在一起，并將培養(yǎng)物送回rollerrig 28℃。
在感染后2天(48小時)后，收取5升培養(yǎng)物。收取時的總細胞數(shù)為1.58 x 10E6個細胞/毫升(99％存活)。將該細胞在250毫升份額(lots)中在Heraeus Omnifuge 2.0RS中在2500rpm，4℃下旋轉(zhuǎn)30分鐘。棄置上清液。
CDK2和細胞周期蛋白E的部分共提純 將Sf21細胞再懸浮在溶胞緩沖劑(50mM Tris pH 8.2，10mM MgCl2，1mM DTT，10mM甘油磷酸酯，0.1mM原釩酸鈉，0.1mM NaF，1mMPMSF，1微克/毫升亮抑酶肽和1微克/毫升抑肽酶)中并在10毫升Dounce勻漿器中勻漿2分鐘。在離心后，將上清液加載到Poros HQ/M1.4/100陰離子交換柱(PE Biosystems，Hertford，UK)上。在0-1M NaCl梯度(在溶胞緩沖劑減去蛋白酶抑制劑中操作)開始時共洗脫CDK2和細胞周期蛋白E超過20倍柱體積。使用抗-CDK2和抗-細胞周期蛋白E抗體(Santa Cruz Biotechnology，California，US)通過蛋白質(zhì)印跡法檢測共洗脫。
以類似方式，可以構(gòu)造用于評估CDK1和CDK4的抑制的檢驗法。CDK2(EMBL Accession No.X62071)可以與細胞周期蛋白A或細胞周期蛋白E(見EMBL Accession No.M73812)一起使用，且這種檢驗法的進一步細節(jié)包含在PCT國際公開No.WO99/21845中，其相關(guān)Biochemical & Biological Evaluation部分經(jīng)此引用并入本文。
盡管式(I)的化合物的藥理學(xué)性質(zhì)隨結(jié)構(gòu)變化而變，但通常可以在IC50濃度或在250μM至1nM劑量下驗證式(I)的化合物具有的活性。
在上述體外檢測法中測試時，實施例4的CDK2抑制活性測得為IC50＝159nM。
根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了包含如上文定義的式(I)的嘧啶衍生物或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解酯以及可藥用稀釋劑或載體的藥學(xué)組合物。
該組合物可以是適用于口服(如片劑或膠囊劑形式)、適用于作為無菌溶液、懸浮液或乳狀液腸胃外注射(包括靜脈內(nèi)、皮下、肌肉內(nèi)、血管內(nèi)或輸液)、適用于作為油膏或乳霜局部給藥、或適用于作為栓劑直腸給藥的形式。
一般而言，上述組合物可以使用傳統(tǒng)賦形劑以傳統(tǒng)方式制備。
式(I)的化合物通常以在5-5000毫克/平米動物身體面積，即大約0.1-100毫克/公斤范圍內(nèi)的單位劑量施用于溫血動物，這通常提供了治療有效劑量。單位劑型，如片劑或膠囊劑通常含有例如1-250毫克活性成分。優(yōu)選地，使用在1-50毫克/公斤范圍內(nèi)的日劑量。但是，日劑量必須隨所治療的主體、具體給藥途徑和要治療的疾病嚴(yán)重程度而變。相應(yīng)地，最佳劑量可以由治療任何特定患者的醫(yī)師決定。
根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了如上定義的式(I)的化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解酯在人體或動物體治療方法中的用途。
我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明中定義的化合物、或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解酯是有效的細胞周期抑制劑(抗細胞增殖劑)，該性能被認(rèn)為來自其CDK抑制性。相應(yīng)地，本發(fā)明的化合物預(yù)計可用于治療完全或部分由CDK酶介導(dǎo)的疾病或病狀，即該化合物可用于在需要這類治療的溫血動物中產(chǎn)生CDK抑制作用。因此，本發(fā)明的化合物提供了治療惡性細胞增殖的方法，其以CDK酶的抑制為特征，即該化合物可用于產(chǎn)生完全或部分由CDK的抑制介導(dǎo)的抗增殖和潛在的細胞凋亡作用。特別地，通過抑制CDK2、CDK4和/或CDK6，尤其是CDK2來防止進入或通過S期，和通過抑制CDK1來防止進入或通過M期，由此產(chǎn)生抑制作用。還預(yù)計通過抑制CDK1、CDK7、CDK8，特別是CDK9來下調(diào)RNA聚合酶II活性從而產(chǎn)生細胞凋亡作用。本發(fā)明的這種化合物預(yù)計具有寬范圍的抗癌性能，因為CDK牽涉在許多常見的人癌癥中，如白血病和乳癌、肺癌、結(jié)腸癌、直腸癌、胃癌、前列腺癌、膀胱癌、胰腺癌和卵巢癌。因此，本發(fā)明的化合物預(yù)計對這些癌癥具有抗癌活性。另外預(yù)計本發(fā)明的化合物對一系列白血病、淋巴惡性腫瘤和在如肝、腎、前列腺和胰腺的組織中的實體瘤，如癌和肉瘤具有活性。特別地，本發(fā)明的這類化合物預(yù)計有利地減緩如結(jié)腸、乳腺、前列腺、肺和皮膚的原生和再發(fā)實體瘤的生長。更特別地，本發(fā)明的這類化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解酯預(yù)計抑制與CDK相關(guān)的那些原生和再發(fā)實體瘤的生長，尤其是在其生長和擴散方面顯著依賴于CDK的那些腫瘤，包括例如結(jié)腸、乳腺、前列腺、肺、外陰和皮膚的某些腫瘤。
進一步預(yù)計到，本發(fā)明的化合物對多種其它病狀中的其它細胞增殖疾病具有活性，包括白血病、纖維增生性和分化性失調(diào)癥、牛皮癬、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、卡波濟氏肉瘤、血管瘤、急性和慢性腎病、粉瘤、動脈粥樣硬化、動脈再狹窄、自身免疫性疾病、急性和慢性炎癥、骨病和伴有視網(wǎng)膜血管增生的眼病。
因此，根據(jù)本發(fā)明的這一方面，提供了用作藥物的如上定義的式(I)的化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解酯。
在本發(fā)明的另一方面中，提供了如上定義的式(I)的化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解酯在用于產(chǎn)生細胞周期抑制作用的藥物制造中的用途。
在本發(fā)明的一個方面中，在提到細胞周期抑制作用時，這是指CDK1的抑制。在本發(fā)明的另一方面中，這是指CDK2的抑制。在本發(fā)明的另一方面中，這是指CDK4的抑制。在本發(fā)明的另一方面中，這是指CDK5的抑制。在本發(fā)明的另一方面中，這是指CDK6的抑制。在本發(fā)明的另一方面中，這是指CDK7的抑制。在本發(fā)明的另一方面中，這是指CDK8的抑制。在本發(fā)明的另一方面中，這是指CDK9的抑制。
在本發(fā)明的另一方面中，提供了如上定義的式(I)的化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解酯在用于產(chǎn)生抗細胞增殖作用的藥物制造中的用途。
在本發(fā)明的另一方面中，提供了如上定義的式(I)的化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解酯在用于產(chǎn)生CDK2抑制作用的藥物制造中的用途。
在本發(fā)明的另一方面中，提供了如上定義的式(I)的化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解酯在癌癥治療藥物的制造中的用途。
在本發(fā)明的另一方面中，提供了如上定義的式(I)的化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解酯在白血病或淋巴惡性腫瘤或乳癌、肺癌、結(jié)腸癌、直腸癌、胃癌、肝癌、腎癌、前列腺癌、膀胱癌、胰腺癌、外陰癌、皮膚癌或卵巢癌的治療藥物的制造中的用途。
根據(jù)本發(fā)明的另一特征，提供了如上定義的式(I)的化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解酯在癌癥、纖維增生性和分化性失調(diào)癥、牛皮癬、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、卡波濟氏肉瘤、血管瘤、急性和慢性腎病、粉瘤、動脈粥樣硬化、動脈再狹窄、自身免疫性疾病、急性和慢性炎癥、骨病和伴有視網(wǎng)膜血管增生的眼病的治療藥物的制造中的用途。
在本發(fā)明的另一方面中，提供了在需要這種治療的溫血動物中產(chǎn)生細胞周期抑制作用的方法，其包括對所述動物施用有效量的如上定義的式(I)的化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解酯。
在本發(fā)明的另一方面中，提供了在需要這種治療的溫血動物中產(chǎn)生抗細胞增殖作用的方法，其包括對所述動物施用有效量的如上定義的式(I)的化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解酯。
在本發(fā)明的另一方面中，提供了在需要這種治療的溫血動物中產(chǎn)生CDK2抑制作用的方法，其包括對所述動物施用有效量的如上定義的式(I)的化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解酯。
在本發(fā)明的另一方面中，提供了在需要這種治療的溫血動物中治療癌癥的方法，其包括對所述動物施用有效量的如上定義的式(I)的化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解酯。
在本發(fā)明的另一方面中，提供了在需要這種治療的溫血動物中治療白血病或淋巴惡性腫瘤或乳癌、肺癌、結(jié)腸癌、直腸癌、胃癌、肝癌、腎癌、前列腺癌、膀胱癌、胰腺癌、外陰癌、皮膚癌或卵巢癌的方法，其包括對所述動物施用有效量的如上定義的式(I)的化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解酯。
在本發(fā)明的另一方面中，提供了在需要這種治療的溫血動物中治療癌癥、纖維增生性和分化性失調(diào)癥、牛皮癬、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、卡波濟氏肉瘤、血管瘤、急性和慢性腎病、粉瘤、動脈粥樣硬化、動脈再狹窄、自身免疫性疾病、急性和慢性炎癥、骨病和伴有視網(wǎng)膜血管增生的眼病的方法，其包括對所述動物施用有效量的如上定義的式(I)的化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解酯。
在本發(fā)明的另一方面中，提供了包含如上定義的式(I)的化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解酯和可藥用稀釋劑或載體的藥學(xué)組合物。
在本發(fā)明的另一方面中，提供了用作藥物的包含如上定義的式(I)的化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解酯和可藥用稀釋劑或載體的藥學(xué)組合物。
在本發(fā)明的另一方面中，提供了用于產(chǎn)生細胞周期抑制作用的包含如上定義的式(I)的化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解酯和可藥用稀釋劑或載體的藥學(xué)組合物。
在本發(fā)明的另一方面中，提供了用于產(chǎn)生抗細胞增殖作用的包含如上定義的式(I)的化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解酯和可藥用稀釋劑或載體的藥學(xué)組合物。
在本發(fā)明的另一方面中，提供了用于產(chǎn)生CDK2抑制作用的包含如上定義的式(I)的化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解酯和可藥用稀釋劑或載體的藥學(xué)組合物。
在本發(fā)明的另一方面中，提供了用于治療癌癥的包含如上定義的式(I)的化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解酯和可藥用稀釋劑或載體的藥學(xué)組合物。
在本發(fā)明的另一方面中，提供了用于治療白血病或淋巴惡性腫瘤或乳癌、肺癌、結(jié)腸癌、直腸癌、胃癌、肝癌、腎癌、前列腺癌、膀胱癌、胰腺癌、外陰癌、皮膚癌或卵巢癌的包含如上定義的式(I)的化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解酯和可藥用稀釋劑或載體的藥學(xué)組合物。
在本發(fā)明的另一方面中，提供了用于治療癌癥、纖維增生性和分化性失調(diào)癥、牛皮癬、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、卡波濟氏肉瘤、血管瘤、急性和慢性腎病、粉瘤、動脈粥樣硬化、動脈再狹窄、自身免疫性疾病、急性和慢性炎癥、骨病和伴有視網(wǎng)膜血管增生的眼病的包含如上定義的式(I)的化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解酯和可藥用稀釋劑或載體的藥學(xué)組合物。
在本發(fā)明的另一方面中，提供了如上定義的式(I)的化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解酯在產(chǎn)生細胞周期抑制作用中的用途。
在本發(fā)明的另一方面中，提供了如上定義的式(I)的化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解酯在產(chǎn)生抗細胞增殖作用中的用途。
在本發(fā)明的另一方面中，提供了如上定義的式(I)的化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解酯在產(chǎn)生CDK2抑制作用中的用途。
在本發(fā)明的另一方面中，提供了如上定義的式(I)的化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解酯在癌癥治療中的用途。
在本發(fā)明的另一方面中，提供了如上定義的式(I)的化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解酯在白血病或淋巴惡性腫瘤或乳癌、肺癌、結(jié)腸癌、直腸癌、胃癌、肝癌、腎癌、前列腺癌、膀胱癌、胰腺癌、外陰癌、皮膚癌或卵巢癌的治療中的用途。
根據(jù)本發(fā)明的另一特征，提供了如上定義的式(I)的化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解酯在癌癥、纖維增生性和分化性失調(diào)癥、牛皮癬、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、卡波濟氏肉瘤、血管瘤、急性和慢性腎病、粉瘤、動脈粥樣硬化、動脈再狹窄、自身免疫性疾病、急性和慢性炎癥、骨病和伴有視網(wǎng)膜血管增生的眼病的治療中的用途。
通過抑制基本S-期引發(fā)活性(如CDK2引發(fā))來防止細胞進入DNA合成也可用于保護身體的正常細胞免受周期特異性藥劑的毒性。CDK2或4的抑制在正常細胞中防止進展到該細胞周期，這可以限制在S-期、G2或有絲分裂中發(fā)揮作用的周期特異性藥劑的毒性。這種保護可以防止通常與這些藥劑相關(guān)的脫發(fā)。
因此，在本發(fā)明的另一方面中，提供了用作細胞保護劑的如上定義的式(I)的化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解酯。
因此，在本發(fā)明的另一方面中，提供了用于防止由用藥劑治療惡性病癥引起的脫發(fā)的如上定義的式(I)的化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解酯。
已知造成脫發(fā)的治療惡性病癥的藥劑的實例包括烷基化劑，如異環(huán)磷酰胺和環(huán)磷酰胺；抗代謝物，如氨甲喋呤、5-氟脲嘧啶、吉西他濱和阿糖胞苷；長春花生物堿和類似物，如長春新堿、長春滅瘟堿、長春地辛、長春瑞濱；紫杉烷類藥物，如紫杉醇和多西紫杉醇；拓?fù)洚悩?gòu)酶I抑制劑，如irintotecan和托泊替康；細胞毒素抗生素，如阿霉素、柔紅霉素、米托蒽醌、放線菌素-D和絲裂霉素；和其它，如依托撲沙和維甲酸。
在本發(fā)明的另一方面中，式(I)的化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解酯可以與一種或多種上述藥劑聯(lián)合給藥。在這種情況下，式(I)的化合物可以通過系統(tǒng)或非系統(tǒng)方式給藥。特別地，式(I)的化合物可以通過非系統(tǒng)方式給藥，例如局部給藥。
因此，在本發(fā)明的另一特征中，提供了預(yù)防在溫血動物如人中用藥劑治療一種或多種惡性病癥過程中的脫發(fā)的方法，其包括對所述動物施用有效量的式(I)的化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解酯。
在本發(fā)明的另一特征中，提供了預(yù)防在溫血動物如人中用藥劑治療一種或多種惡性病癥過程中的脫發(fā)的方法，其包括與有效量的所述藥劑同時、相繼或單獨地對所述動物施用有效量的式(I)的化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解酯。
根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了用于防止由用藥劑治療惡性病癥引起的脫發(fā)的藥學(xué)組合物，其包含式(I)的化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解酯，和所述藥劑，以及可藥用稀釋劑或載體。
根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了包含式(I)的化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解酯，和已知引起脫發(fā)的用于治療惡性病癥的藥劑的試劑盒。
根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了一種試劑盒，其包含 a)第一單位劑型的式(I)的化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解酯； b)第二單位劑型的已知引起脫發(fā)的用于治療惡性病癥的藥劑；和 c)含有所述第一和第二劑型的容器裝置。
根據(jù)本發(fā)明的另一特征，提供了式(I)的化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解酯在制造用于防止在用藥劑治療惡性病癥過程中的脫發(fā)的藥物中的用途。
根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了用于防止脫發(fā)的聯(lián)合治療，包括任選與可藥用稀釋劑或載體一起對溫血動物如人施用有效量的式(I)的化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解酯，并同時、相繼或單獨施用有效量的治療惡性病癥的藥劑。
如上所述，特定細胞增殖疾病的治療性或預(yù)防性治療所需的劑量大小必須隨所治療的主體、給藥途徑和要治療的疾病嚴(yán)重程度而變?？紤]在例如1-100毫克/千克，優(yōu)選1-50毫克/千克范圍內(nèi)的單位劑量。
上文定義的CDK抑制活性可以作為單一療法使用或除了本發(fā)明的化合物外還可以包括一種或多種其它物質(zhì)和/或治療。這種聯(lián)合治療可以通過該治療的各組成部分的同時、相繼或單獨施用來實現(xiàn)。在醫(yī)藥腫瘤學(xué)領(lǐng)域中，常見實踐是使用不同形式的治療的組合來治療各癌癥患者。在醫(yī)藥腫瘤學(xué)中，除了上文定義的細胞周期抑制治療外，這種聯(lián)合治療的其它組成部分可以是外科手術(shù)、放射療法或化學(xué)療法。這類化學(xué)療法可以包括三種主要類型的治療劑 (i)通過與上文定義的那些相同或不同的機制發(fā)揮作用的其它細胞周期抑制劑； (ii)細胞生長抑制劑，如抗雌激素藥(例如它莫西芬、托瑞米芬、雷洛昔芬、屈洛昔芬、iodoxyfene)、孕激素(例如醋酸甲地孕酮)、芳香酶抑制藥(例如阿那曲唑、來曲唑、vorazole、依西美坦)、抗孕激素藥、抗雄激素藥(例如氟他米特、尼魯米特、比卡魯胺、醋酸環(huán)丙氯地孕酮)、LHRH激動劑和拮抗劑(例如醋酸性瑞林、luprolide)、睪丸激素5α-二氫還原酶的抑制劑(例如非那雄胺)、抗侵襲藥(例如，類似馬立馬司他的金屬蛋白酶抑制劑和尿激酶纖溶酶原激活藥受體功能的抑制劑)和生長因子功能的抑制劑(此類生長因子包括例如血小板源生長因子和肝細胞生長因子，此類抑制劑包括生長因子抗體、生長因子受體抗體、酪氨酸激酶抑制劑和絲氨酸/蘇氨酸激酶抑制劑)；和 (iii)如醫(yī)藥腫瘤學(xué)中所用的抗增殖/抗腫瘤藥及其組合，如抗代謝物(例如類似氨甲蝶呤的抗葉酸物、類似5-氟脲嘧啶的氟嘧啶類藥、嘌呤和腺苷類似物、阿糖胞苷)；抗腫瘤抗生素(例如蒽環(huán)類藥，如阿霉素、道諾霉素、表柔比星和伊達比星、絲裂霉素-C、放線菌素、光神霉素)；鉑衍生物(例如順鉑、卡波鉑)；烷基化劑(例如氮芥、美法侖、瘤可寧、白血福恩、環(huán)磷酰胺、異環(huán)磷酰胺、亞硝基脲、噻替哌)；抗有絲分裂劑(例如長春花生物堿，如長春新堿，和紫杉類藥物，如紫杉醇、多西紫杉醇)；拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑(例如表鬼臼毒素，如足葉乙甙和替尼泊甙、安吖啶、托泊替康)。根據(jù)本發(fā)明的這一方面，提供了包含如上定義的式(I)的化合物和如上定義的用于聯(lián)合治療癌癥的另外抗腫瘤物質(zhì)的藥學(xué)產(chǎn)品。
除了它們在治療藥物中的用途外，式(I)的化合物及其可藥用鹽也可用作作為新治療劑研發(fā)的一部分在實驗室動物如貓、狗、兔子、猴子、大鼠和小鼠中的用于評測細胞周期活性抑制劑的影響的體外和體內(nèi)試驗系統(tǒng)的開發(fā)和標(biāo)準(zhǔn)化中的藥理學(xué)工具。
在上述其它藥學(xué)組合物、過程、方法、用途和藥物制造特征中，本文所述的本發(fā)明的化合物的替代性和優(yōu)選實施方案也適用。
實施例 現(xiàn)在通過下列非限制性實施例闡述本發(fā)明，其中，除非另行指明 (i)溫度以攝氏度(℃)給出；操作在環(huán)境溫度下，即18-25℃的溫度下進行； (ii)有機溶液在無水硫酸鎂上干燥；使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器在減壓(600-4000帕斯卡；4.5-30mmHg)以及最多60℃的浴溫下進行溶劑蒸發(fā)； (iii)色譜法是指在硅膠上的快速色譜法；薄層色譜法(TLC)在硅膠板上進行； (iv)一般而言，通過TLC監(jiān)測反應(yīng)過程，且反應(yīng)時間僅舉例給出； (v)最終產(chǎn)物具有令人滿意的質(zhì)子核磁共振(NMR)譜和/或質(zhì)譜數(shù)據(jù)； (vi)收率僅舉例給出，且不一定是通過努力的工藝開發(fā)可獲得的那些；如果需要更多材料，重復(fù)制備； (vii)當(dāng)給出NMR數(shù)據(jù)時，除非另行指明，其對主要診斷質(zhì)子而言是δ值形式，相對于內(nèi)標(biāo)四甲基硅烷(TMS)以百萬分之份數(shù)(ppm)表示，使用全氘二甲亞砜(DMSO-d6)作為溶劑在300MHz下測定； (viii)化學(xué)符號具有它們的常見含義；使用SI單位和符號； (ix)溶劑比率以體積:體積(v/v)項給出；且 (x)質(zhì)譜使用直接曝光探針以化學(xué)電離(CI)模式用70電子伏特的電子能量運行；其中所示電離通過電子沖擊(EI)、快速原子轟擊(FAB)或電噴霧(ESP)實現(xiàn)；給出m/z的值；通常，只報道顯示母體質(zhì)量的離子； (xi)除非另行指明，沒有拆分含有不對稱取代碳和/或硫原子的化合物； (xii)當(dāng)一種合成被描述為與之前的實施例中所述的類似時，所用的量是之前的實施例中所用的那些的毫摩爾比率當(dāng)量。
(xvi)已經(jīng)使用下列縮寫 BOC叔丁氧基羰基； IPA異丙醇； THF四氫呋喃； DIPEA N，N-二異丙基乙胺； DMFN，N-二甲基甲酰胺； EtOAc 乙酸乙酯； MeOH 甲醇； 醚(ether) 二乙醚； HATU O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-1，1-3，3-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽； DCM二氯甲烷； DMSO 二甲基亞砜；和 TFA三氟乙酸； (xvii)過濾用的PTFE過濾器由

制造并由0.45μM膜過濾杯構(gòu)成。這些可獲自Fisher-Scientific UK(Part Code 09730155)；和 (xviii)當(dāng)提到SCX-2柱時，這是指用于吸附堿性化合物的“離子交換”萃取筒，即含有苯磺酸基強陽離子交換吸附劑的聚丙烯管，其根據(jù)制造商指示使用，獲自International Sorbent Technologies Limited，Dyffryn Business Park，Hengeod，Mid Glamorgan，UK，CF82 7RJ。
實施例1 反式-N-[4-[[4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]氨基]環(huán)己基]氨基甲酸叔丁酯 合并2-氯-4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶(方法2，1.9克，8毫摩爾)、反式-N-(4-氨基環(huán)己基)氨基甲酸叔丁酯(2.58克，12毫摩爾)、三乙胺(3.35毫升，24毫摩爾)和IPA(20毫升)并在回流(85℃)下加熱5天。冷卻至環(huán)境溫度后，該混合物凝固。將反應(yīng)混合物用IPA稀釋并將所得沉淀物過濾并用IPA洗滌。蒸發(fā)濾液并用IPA研制，過濾收集第二批材料。將這兩個沉淀物合并，溶解在DCM/MeOH中，濾出不溶材料，并使溶液通過短二氧化硅墊，用0-10％MeOH/DCM梯度洗脫。合并含產(chǎn)物的餾分并蒸發(fā)產(chǎn)生白色固體狀的標(biāo)題化合物(1.68克，50％)。NMR(400.132MHz，CDCl3)1.22(m，4H)，1.38(s，9H)，1.48(d，6H)，2.05(m，4H)，2.50(s，3H)，3.40(m，1H)，3.69(m，1H)，4.32(m，1H)，4.83(m，1H)，5.54(m，1H)，6.64(d，1H)，7.23(s，1H)，8.12(d，1H)；MH+415。
實施例2 N-[反式-4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]環(huán)己烷-1，4-二胺 將反式-N-[4-[[4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]氨基]環(huán)己基]氨基甲酸叔丁酯(實施例1，1.68克，4毫摩爾)懸浮在二氧雜環(huán)己烷(20毫升)中，加入在二氧雜環(huán)己烷中的4M HCl(20毫升)，并將反應(yīng)混合物在環(huán)境溫度下攪拌3天。濾出所得沉淀物并溶解在水中，用2M NaOH水溶液中和至pH9，并用DCM(2 x 75毫升)萃取。將有機相通過PTFE杯重力過濾并蒸發(fā)溶劑。將含水相用2M HCl水溶液酸化至pH4，然后添加到用MeOH預(yù)處理的50克SCX-2柱中。將該柱用水(2倍柱體積)、MeOH(1倍柱體積)沖洗，產(chǎn)物用MeOH中的2M氨洗脫。將洗脫液與之前的有機相合并，并蒸發(fā)溶劑以產(chǎn)生透明樹膠。在殘留物中加入醚并再蒸發(fā)溶劑，對所得材料施以高真空以產(chǎn)生白色泡沫狀的標(biāo)題化合物(1.26克，99％)。1H NMR(400.132MHz，CDCl3)1.17(m，6H)，1.49(d，6H)，1.85(m，2H)，2.07(m，2H)，2.50(s，3H)，2.68(m，1H)，3.69(m，1H)，4.82(m，1H)，5.58(m，1H)，6.64(d，1H)，7.24(s，1H)，8.11(d，1H).MH+315。
實施例3 N-[反式-4-[[4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]氨基]環(huán)己基]甲磺酰胺 向N-[反式-4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]環(huán)己烷-1，4-二胺(實施例2，60毫克，0.2毫摩爾)在DCM(2毫升)中的溶液中加入三乙胺(0.08毫升，0.57毫摩爾)，然后加入甲基磺酰氯(0.019毫升，0.25毫摩爾)在DCM(1毫升)中的溶液。將所得溶液在環(huán)境溫度下攪拌2小時，用水洗滌，并通過PTFE杯重力過濾。蒸發(fā)溶劑并將殘留物溶解在DCM中，在二氧化硅上提純，用淺梯度0-5％MeOH/DCM然后5％MeOH/DCM洗脫。合并含產(chǎn)物的餾分并蒸發(fā)產(chǎn)生白色固體狀的標(biāo)題化合物(20毫克，26％)。NMR(400.132MHz，CDCl3)1.31(m，4H)，1.49(d，6H)，2.11(m，4H)，2.50(s，3H)，2.92(s，3H)，3.29(m，1H)，3.71(m，1H)，4.07(d，1H)，4.82(m，1H)，5.50(m，1H)，6.66(d，1H)，7.24(s，1H)，8.12(d，1H)；MH+393。
實施例4 反式-N′，N′-二甲基-N-[4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]環(huán)己烷-1，4-二胺 向N-[反式-4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]環(huán)己烷-1，4-二胺(實施例2，60毫克，0.2毫摩爾)在THF(2毫升)中的溶液中加入乙酸(0.011毫升，0.2毫摩爾)，然后加入37％甲醛水溶液(1毫升)。將反應(yīng)混合物在環(huán)境溫度下攪拌30分鐘。加入三乙酰氧基硼氫化鈉(121毫克，0.6毫摩爾)并將反應(yīng)攪拌2小時。蒸發(fā)溶劑并將殘留物用飽和碳酸氫鈉水溶液中和，用DCM萃取，通過PTFE杯重力過濾并蒸發(fā)有機萃取物。將所得材料溶解在DCM中，并在二氧化硅上提純，用10％在MeOH/DCM中的2M氨洗脫。合并含產(chǎn)物的餾分并蒸發(fā)成透明樹膠。加入醚并再蒸發(fā)以產(chǎn)生玻璃狀的白色固體狀的標(biāo)題化合物(28毫克，41％)。NMR(400.132MHz，CDCl3)1.23(m，4H)，1.49(d，6H)，1.93(m，2H)，2.13(m，3H)，2.24(s，6H)，2.50(s，3H)，3.67(m，1H)，4.83(m，1H)，5.58(m，1H)，6.64(d，1H)，7.24(s，1H)，8.11(d，1H)；MH+343。
實施例5 N-[反式-4-[[4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]氨基]環(huán)己基]-4-嗎啉-4-基-丁酰胺 合并N-[反式-4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]環(huán)己烷-1，4-二胺(實施例2，60毫克，0.2毫摩爾)、4-嗎啉-4-基丁酸鹽酸鹽(方法3，38毫克，0.23毫摩爾)、HATU(87毫克，0.23毫摩爾)、DIPEA(0.13毫升，0.76毫摩爾)和DMF(2毫升)并在環(huán)境溫度下攪拌過夜。蒸發(fā)溶劑且殘留物在DCM(2毫升)和飽和碳酸氫鈉水溶液(2毫升)之間分配，通過PTFE杯重力過濾并蒸發(fā)DCM。將所得材料溶解在DCM中并在二氧化硅上提純，用MeOH中的梯度0-5％2M氨洗脫。合并含產(chǎn)物的餾分并蒸發(fā)產(chǎn)生白色固體狀的標(biāo)題化合物。(61毫克，68％)。NMR(400.132MHz，CDCl3)1.25(m，4H)，1.49(d，6H)，1.77(m，2H)，1.97(m，3H)，2.10(m，2H)，2.19(m，2H)，2.37(m，2H)，2.43(m，2H)，2.50(s，3H)，2.96(m，2H)，3.71(m，5H)，4.83(m，1H)，5.52(m，1H)，5.73(m，1H)，6.65(d，1H)，7.23(s，1H)，8.12(d，1H)；MH+470。
實施例6 4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)-2-[[反式-4-(氨磺?；被?環(huán)己基]氨基]嘧啶 合并N-[反式-4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]環(huán)己烷-1，4-二胺(實施例2，70毫克，0.22毫摩爾)、磺酰胺(214毫克，2.23毫摩爾)和二氧雜環(huán)己烷(2毫升)并在回流下加熱16小時。使反應(yīng)冷卻至環(huán)境溫度并用水(50毫升)、飽和碳酸氫鈉水溶液(50毫升)和DCM(100毫升)稀釋。過濾不溶材料并用水洗滌，將有機相進一步用水洗滌，然后蒸發(fā)并與濾出的不溶材料合并。將合并的材料用醚研制，并過濾所得固體以產(chǎn)生米色固體狀的標(biāo)題化合物(64毫克，73％)。NMR(400.132MHz)1.31(m，4H)，1.50(d，6H)，1.97(m，4H)，2.50(s，3H)，3.05(m，1H)，3.62(m，1H)，5.72(m，1H)，6.45(m，3H)，6.78(d，1H)，7.00(m，1H)，7.35(s，1H)，8.18(d，1H)；MH+394。
實施例7 2-[[反式-4-(二甲基氨磺?；被?環(huán)己基]氨基]-4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶 將三乙胺(0.08毫升，0.6毫摩爾)添加到溶解在DCM(1毫升)中的N-[反式-4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]環(huán)己烷-1，4-二胺(實施例2；63毫克，0.2毫摩爾)溶液中。逐滴添加二甲基氨磺酰氯(0.03毫升，0.24毫摩爾)在DCM(1毫升)中的溶液，并將該溶液在環(huán)境溫度下攪拌16小時。追加二甲基氨磺酰氯(0.03毫升，0.24毫摩爾)并將反應(yīng)再攪拌3小時。然后加入水(2毫升)，將反應(yīng)混合物搖振并通過PTFE杯重力過濾。將所得溶液在二氧化硅上提純，用梯度0-5％MeOH/DCM洗脫，以產(chǎn)生無色固體狀的標(biāo)題化合物(19毫克，23％)。NMR(400.132MHz，CDCl3)1.27(m，4H)，1.48(d，6H)，2.10(m，4H)，2.50(s，3H)，2.73(s，6H)，3.17(m，1H)，3.69(m，1H)，4.15(m，1H)，4.92(m，1H)，5.51(m，1H)，6.65(d，1H)，7.23(s，1H)，8.11(d，1H)；MH+422。
實施例8 4-[[反式-4-[[4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]氨基]環(huán)己基]氨基甲?；谆鵠哌啶-1-羧酸叔丁酯 合并N-[反式-4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]環(huán)己烷-1，4-二胺(實施例2,100毫克，0.32毫摩爾)、1-((1，1-二甲基乙氧基)羰基)-4-哌啶乙酸(93毫克，0.38毫摩爾)、HATU(145毫克，0.38毫摩爾)、DIPEA(0.22毫升，1.27毫摩爾)和DMF(4毫升)并在環(huán)境溫度下攪拌過夜。蒸發(fā)溶劑并使所得材料在DCM(2毫升)和飽和碳酸氫鈉水溶液(2毫升)之間分配，通過PTFE杯重力過濾并蒸發(fā)。將所得材料溶解在DCM中并在二氧化硅上提純，用淺梯度0-5％MeOH/DCM洗脫。合并含純凈產(chǎn)物的餾分，并蒸發(fā)。NMR(400.132MHz，CDCl3)1.05(m，2H)，1.23(m，4H)，1.38(s，9H)，1.49(d，6H)，1.63(m，2H)，1.91(m，1H)，1.99(m，4H)，2.10(m，2H)，2.50(s，3H)，2.65(m，2H)，3.73(m，2H)，4.01(m，2H)，4.83(m，1H)，5.17(m，1H)，5.50(m，1H)，6.65(d，1H)，7.24(s，1H)，8.13(d，1H)；MH+540。
實施例9-13 通過實施例8的程序并在相同規(guī)模下，使用適當(dāng)?shù)乃嵩牧现苽湎铝谢衔铩?br> 實施例14 N-[反式-4-[[4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]氨基]環(huán)己基]-2-(4-哌啶基)乙酰胺 將4-[[反式-4-[[4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]氨基]環(huán)己基]氨基甲?；谆鵠哌啶-1-羧酸叔丁酯(實施例8，～200毫克，～0.38毫摩爾)溶解在DCM(3毫升)中并加入等體積的TFA。將反應(yīng)混合物在環(huán)境溫度下攪拌3小時，然后添加到用MeOH(2倍柱體積)預(yù)濕的5g SCX-2柱中。該柱含有MeOH(2倍柱體積)，然后將產(chǎn)物用MeOH中的2M氨洗脫，并將堿性洗脫液蒸發(fā)產(chǎn)生玻璃狀的標(biāo)題化合物(52毫克，31％)。NMR(500.133MHz)1.29(m，2H)，1.39(m，4H)，1.51(d，6H)，1.80(m，2H)，1.98(m，3H)，2.06(m，2H)，2.48(s，3H)，2.86(m，2H)，3.23(m，2H)，3.57(m，1H)，3.71(m，1H)，5.60(m，1H)，6.73(d，1H)，7.28(s，1H)，8.16(d，1H)；MH+440。
實施例15-19 通過實施例14的程序并在相同規(guī)模下，使用所示原材料制備下列化合物。
實施例20 N-[4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]環(huán)己烷-1，4-二胺 將2-氯-4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶(方法2；1.19克)與1，4-二氨基環(huán)己烷(順式/反式異構(gòu)體混合物；1.14克)和三乙胺(0.5克)一起在DMA(3.0毫升)中在95℃下加熱3小時。將混合物冷卻，然后用2M碳酸鈉水溶液(20毫升)稀釋，并用DCM(200毫升)萃取。將有機層干燥，過濾，然后在真空中濃縮。將殘留物在二氧化硅上提純，用DCM中的0-20％MeOH然后用0.5％三乙胺/20％MeOH/DCM洗脫以產(chǎn)生無色固體狀的標(biāo)題化合物(順式/反式異構(gòu)體的8:1混合物)(0.94克，54％)。NMR(400.13MHz，CDCl3)1.20-2.20(m，16H)，2.57(s，3H)，2.75-2.95(m，1H)，3.75-4.00(m，1H)，4.95-5.20(m，1H)，5.65(m，1H)，6.71(d，1H)，7.31(s，1H)，8.19(d，1H).MH+315。
實施例21 N-[4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]環(huán)己烷-1，3-二胺 以與實施例20類似的方式并在類似規(guī)模下，使用1，3-二氨基環(huán)己烷(順式/反式異構(gòu)體混合物)代替1，4-二氨基環(huán)己烷(順式/反式異構(gòu)體混合物)，與2-氯-4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶(方法2)一起，制備標(biāo)題化合物(以順式/反式異構(gòu)體的2:1或1:2混合物形式)。NMR(400.13MHz，CDCl3)1.03-1.43(m，2H)，1.55(m，6H)，1.60-2.30(m，8H)，2.56(s，3H)，2.84-3.10(m，1H)，3.88-4，29(m，1H)，5.15(m，1H)，5.63(m，1H)，6.71(m，1H)，7.30(s，1H)，8.18(d，1H)；MH+315. 實施例22 3-二甲基氨基-N-[4-[[4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]氨基]環(huán)己基]丙酰胺 將N-[4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]環(huán)己烷-1，4-二胺(實施例20；95毫克)與3-(二甲基氨基)丙酸鹽酸鹽(70毫克)和DIPEA(97毫克)一起在DMF(1.0毫升)中在環(huán)境溫度下攪拌。然后加入HBTU(171毫克)并將該溶液攪拌16小時。將混合物通過RPHPLC提純以產(chǎn)生無色固體狀的標(biāo)題化合物(41毫克，33％)。NMR(400.13MHz，CDCl3+D2O)1.55(m，8H)，1.70(m，4H)，1.95(m，2H)，2.35(m，8H)，2.60(m，5H)，4.00(m，2H)，5.65(m，1H)，6.75(m，1H)，7.30(m，1H)，8.20(m，1H)；MH+414。
實施例23-24 通過實施例22的程序并在相同規(guī)模下，使用適當(dāng)?shù)陌分苽湎铝谢衔铩?br> 實施例25-27 通過實施例22的程序并在相同規(guī)模下，使用N-[4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]環(huán)己烷-1，3-二胺(實施例21)和適當(dāng)?shù)乃嶂苽湎铝谢衔铩?br> 實施例28 N-[4-[[4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]氨基]環(huán)己基]甲磺酰胺 將在DCM(1毫升)中的甲基磺酰氯(35毫克)在環(huán)境溫度下逐滴添加到N-[4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]環(huán)己烷-1，4-二胺(實施例20；95毫克)和三乙胺(46毫克)在DCM(3.0毫升)中的攪拌溶液中。在1小時后，加入氨水(25％，0.5毫升)并將該混合物在真空中濃縮，然后溶解在溫DMSO(1毫升)中并用水(15毫升)稀釋。過濾所形成的固體，用水洗滌，并在真空中干燥產(chǎn)生無色固體狀的標(biāo)題化合物(21毫克，17％)。MH+393。
實施例29 N-[4-[[4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]氨基]環(huán)己基]-2-吡咯烷-1-基-乙磺酰胺 將N-[4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]環(huán)己烷-1，4-二胺(實施例20；95毫克)和DIPEA(117毫克)溶解在DCM(3毫升)中并冷卻至-10℃。逐滴添加在DCM(2毫升)中的2-氯乙烷磺酰氯(54毫克)并將反應(yīng)升溫至環(huán)境溫度并攪拌30分鐘。加入吡咯烷(86毫克)并將反應(yīng)攪拌16小時，然后在真空中濃縮。將殘留物溶解在DMF(1毫升)中并通過RPHPLC提純產(chǎn)生無色固體狀的標(biāo)題化合物(43毫克，30％)。NMR(400.13MHz，CDCl3)1.55(d，6H)，1.55-1.95(m，12H)，2.60(m，7H)，3.00(t，2H)，3.19(t，2H)，3.64(m，1H)，3.94(m，1H)，5.05(d，1H)，5.60(m，2H)，6.74(d，1H)，7.32(s，1H)，8.20(d，1H)；MH+476。
實施例30 N-[4-[[4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]氨基]環(huán)己基]-3-吡咯烷-1-基-丙烷-1-磺酰胺 將N-[4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]環(huán)己烷-1，4-二胺(實施例20；95毫克)和DIPEA(117毫克)溶解在DCM(3毫升)中并冷卻至-10℃。逐滴加入在DCM(2毫升)中的3-氯丙烷磺酰氯(59毫克)并將反應(yīng)升溫至環(huán)境溫度并攪拌30分鐘。將反應(yīng)在真空中蒸發(fā)，然后加入吡咯烷(0.5毫升)并將反應(yīng)在環(huán)境溫度下攪拌3天。將反應(yīng)在真空中濃縮并通過RPHPLC提純產(chǎn)生無色膠狀的標(biāo)題化合物(104毫克，70％)。NMR(400.13MHz，CDCl3)1.30-2.25(m，20H)，2.55(m，9H)，3.12(t，2H)，3.30-3.60(m，1H)，3.70-4.05(m，1H)，4.85-5.40(m，2H)，5.60(m，1H)，6.73(m，1H)，7.30(m，1H)，8.20(m，1H)；MH+490。
實施例31 N-[3-[[4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]氨基]環(huán)己基]甲磺酰胺 將N-[4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]環(huán)己烷-1，3-二胺(實施例21；95毫克)與三乙胺(46毫克)一起在DCM(3毫升)中在環(huán)境溫度下攪拌。逐滴加入在DCM(1.0毫升)中甲烷磺酰氯(35毫克)并將該混合物攪拌1小時。加入氨水(25％，0.5毫升)并將該混合物用DCM稀釋。將有機層用水洗滌兩次，干燥，過濾并濃縮產(chǎn)生樹膠。用醚研制產(chǎn)生無色固體狀的標(biāo)題化合物(47毫克，39％)。NMR(400.13MHz，CDCl3)1.05-2.50(m，8H)，1.57(m，6H)，2.58(s，3H)，2.98(m，3H)，3.37-3.83(m，1H)，3.85-4.27(m，1H)，4.63(m，1H)，5.00-5.20(m，1H)，5.55(m，1H)，6.73(d，1H)，7.33(m，1H)，8.20(d，1H)；MH+393。
實施例32 N-[3-[[4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]氨基]環(huán)己基]-2-吡咯烷-1-基-乙磺酰胺 通過29的程序并在相同規(guī)模下，使用N-[4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]環(huán)己烷-1，3-二胺(實施例21)制備標(biāo)題化合物。NMR(400.13MHz，CDCl3)1.05-1.15(m，2H)，1.35-2.15(m，16H)，2.50(m，7H)，2.95(t，2H)，3.15(t，2H)，3.40-3.80(m，1H)，3.85-4.25(m，1H)，4.90-5.70(m，3H)，6.74(m，1H)，7.31(2s，1H)，8.20(m，1H)；MH+476。
實施例33 N-[3-[[4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]氨基]環(huán)己基]-3-吡咯烷-1-基-丙烷-1-磺酰胺 通過實施例30的程序并在相同規(guī)模下，使用N-[4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]環(huán)己烷-1，3-二胺(實施例21)制備標(biāo)題化合物。NMR(400.13MHz，CDCl3)1.05-1.25(m，2H)，1.40-2.20(m，18H)，2.50(m，9H)，3.10(m，2H)，3.35-3.80(2m，1H)，3.80-4.30(2m，1H)，4.90-5.70(m，3H)，6.73(m，1H)，7.30(2s，1H)，8.20(m，1H)；MH+490。
實施例34 4-[[4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]氨基]環(huán)己烷-1-羧酸鋰鹽 將(E)-3-二甲基氨基-1-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)丙-2-烯-1-酮(方法24，WO 03/076436；1.55克)與順式-4-carbamimidamido環(huán)己烷-1-羧酸芐酯(方法8；1.93克)一起在2-甲氧基乙醇(10毫升)中回流16小時。將反應(yīng)混合物冷卻，然后用EtOAc稀釋并過濾。將濾液用飽和NaHCO3水溶液、鹽水洗滌兩次，然后干燥，過濾并濃縮產(chǎn)生油。將該油溶解在MeOH(20毫升)中，然后與LiOH一起在水(10毫升)中在環(huán)境溫度下攪拌16小時。將該混合物濃縮，然后在水和EtOAc之間分配。濃縮含水相，然后施加到Amberlite XAD2樹脂(未官能化聚苯乙烯)柱中。用水中的梯度0-10％乙腈洗脫，并蒸發(fā)餾分，產(chǎn)生黃色泡沫狀的標(biāo)題化合物(順式/反式異構(gòu)體的2:1或1:2混合物)(1.2克，49％)。MH+344。
注意，這些條件和LiOH水解造成緊鄰酸的手性中心的差向異構(gòu)化。
實施例35 N-甲基-4-[[4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]氨基]環(huán)己烷-1-羧酰胺 將4-[[4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]氨基]環(huán)己烷-1-羧酸鋰鹽(實施例34；175毫克)與甲胺(2M在THF中，0.75毫升)和DIPEA(129毫克)一起在DMF(1.5毫升)中在環(huán)境溫度下攪拌。加入HBTU(285毫克)并將該溶液攪拌16小時。將該混合物通過RPHPLC提純產(chǎn)生固體標(biāo)題化合物(73毫克，41％)。NMR(400.13MHz，CDCl3+D2O)1.20-2.30(m，9H)，1.50(m，6H)，2.55(m，3H)，2.82(m，3H)，3.70-4.10(m，1H)，5.60(m，2H)，6.71(m，1H)，7.30(m，1H)，8.18(m，1H)；MH+357。
實施例36-38 通過實施例35的程序并在相同規(guī)模下，使用適當(dāng)?shù)陌分苽湎铝谢衔铩?br> 實施例39 3-[[4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]氨基]環(huán)己烷-1-羧酸甲酯 將2-氯-4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶(方法2；1.42克)與3-氨基環(huán)己烷-1-羧酸甲酯鹽酸鹽(順式/反式混合物；2.09克)和三乙胺(2.2克)一起在DMA(5毫升)中在95℃下加熱24小時。將反應(yīng)冷卻，加入飽和NaHCO3水溶液(50毫升)，并將含水層用EtOAc(150毫升)萃取。將有機層用水、鹽水洗滌，干燥，過濾并濃縮。將殘留物用醚-異己烷(1:1)研制以產(chǎn)生固體，將其濾出并干燥以產(chǎn)生無色固體狀的標(biāo)題化合物(順式/反式異構(gòu)體的～1:1混合物)(1.44克，67％)。NMR(400.13MHz，CDCl3)1.20(m，1H)，1.40(m，3H)，1.55(2d，6H)，1.95(m，2H)，2.10(d，1H)，2.40(m，2H)，2.57(s，3H)，3.67(s，3H)，3.85(m，1H)，5.00(s，1H)，5.63(s，1H)，6.72(d，1H)，7.31(s，1H)，8.19(d，1H)；MH+358。
實施例40 3-[[4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]氨基]環(huán)己烷-1-羧酸鋰鹽 將3-[[4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]氨基]環(huán)己烷-1-羧酸甲酯(實施例39；1.43克)溶解在MeOH(10毫升)中并與LiOH(0.11克)一起在水(5毫升)中在環(huán)境溫度下攪拌16小時。將該混合物用固體二氧化碳丸粒中和，然后蒸發(fā)至干以產(chǎn)生固體標(biāo)題化合物(1.4克)。MH+344。
實施例41-44 通過實施例35的程序并在相同規(guī)模下，使用3-[[4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]氨基]環(huán)己烷-1-羧酸鋰鹽(實施例40)和適當(dāng)?shù)陌分苽湎铝谢衔铩?br> 實施例45 反式-N-[5-氟-4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]環(huán)己烷-1，4-二胺 將2-氯-5-氟-4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶(方法5；100毫克，0.39毫摩爾)和反式-1，4-二氨基環(huán)己烷(2毫升體積的固體)通過微波輻射在200℃下加熱(熔體反應(yīng))30分鐘。在相同規(guī)模下重復(fù)反應(yīng)，然后將反應(yīng)物合并在二氧化硅上提純，用梯度0-20％MeOH/DCM洗脫。再在二氧化硅上提純，用梯度0-10％(MeOH中的2M氨)/DCM洗脫，產(chǎn)生無色泡沫狀的標(biāo)題化合物(245毫克，94％)。NMR(400.132MHz，CDCl3)1.18(m，4H)，1.36(m，2H)，1.49(d，6H)，1.85(m，2H)，2.05(m，2H)，2.53(s，3H)，2.67(m，1H)，3.60(m，1H)，4.75(m，1H)，5.56(m，1H)，7.46(d，1H)，8.06(d，1H)；MH+333。
實施例46 5-氟-4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)-2-[[反式-4-(氨磺?；被?環(huán)己基]氨基]嘧啶 合并反式-N-[5-氟-4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]環(huán)己烷-1，4-二胺(實施例45；126毫克，0.38毫摩爾)、磺酰胺(546毫克，5.68毫摩爾)和二氧雜環(huán)己烷(3毫升)并加熱至回流過夜。將反應(yīng)混合物冷卻至環(huán)境溫度，并將沉淀的固體過濾，用MeOH(2×5毫升)、水(2×5毫升)洗滌，并干燥產(chǎn)生乳霜固體狀的標(biāo)題化合物(77毫克，49％)。NMR(400.132MHz)1.29(m，4H)，1.50(d，6H)，1.92(m，2H)，2.00(m，2H)，2.50(s，3H)，3.05(m，1H)，3.55(m，1H)，5.54(m，1H)，6.46(m，3H)，7.04(m，1H)，7.32(d，1H)，8.32(d，1H)；MH+412。
實施例47 反式-N-[5-氟-4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]-N′，N′-二甲基-環(huán)己烷-1，4-二胺 通過實施例4的程序并在相同規(guī)模下，使用反式-N-[5-氟-4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]環(huán)己烷-1，4-二胺(實施例45)，制備標(biāo)題化合物。NMR(400.132MHz，CDCl3)1.22(m，4H)，1.49(d，6H)，1.92(m，2H)，2.11(m，3H)，2.23(s，6H)，2.53(s，3H)，3.58(m，1H)，4.75(d，1H)，5.56(m，1H)，7.46(d，1H)，8.06(d，1H)；MH+361。
實施例48 (3R)-3-[[4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]氨基]環(huán)戊烷-1-羧酸 將(1S，3R)-3-carbamimidamido環(huán)戊烷-1-羧酸甲酯(方法7；1.33克，7.18毫摩爾)和(E)-3-二甲基氨基-1-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)丙-2-烯-1-酮(方法24，WO 03/076436；1.32克，5.96毫摩爾)在2-甲氧基乙醇(20毫升)中在回流下加熱6小時。將反應(yīng)混合物冷卻，蒸發(fā)，然后在DCM(100毫升)和水(100毫升)之間分配。將有機相分離，用鹽水洗滌，干燥，過濾并蒸發(fā)產(chǎn)生黃色油，將其溶解在THF(10毫升)、MeOH(10毫升)和水(5毫升)中。加入氫氧化鋰(284毫克，11.86毫摩爾)并在攪拌16小時后，蒸發(fā)溶劑，并使殘留物在EtOAc(50毫升)和水(50毫升)之間分配。向含水相中加入2M HCl以調(diào)節(jié)至pH4。將含水層用EtOAc(2×50毫升)萃取并將合并的有機萃取物用鹽水洗滌，干燥，過濾并蒸發(fā)產(chǎn)生黃色固體。也蒸發(fā)含水層以產(chǎn)生黃色樹膠。合并這兩種產(chǎn)物并在二氧化硅上提純，用DCM中的梯度0-15％MeOH洗脫，以產(chǎn)生淺黃色固體狀的標(biāo)題化合物(順式/反式異構(gòu)體的～1:1混合物)(563毫克，29％)。NMR(500.133MHz，373K)1.49(m，6H)，1.55-1.68(m，1H)，1.73-2.24(m，5H)，2.46(s，3H)，2.71-2.93(m，1H)，4.22-4.36(m，1H)，5.62(m，1H)，6.59-6.68(m，1H)，6.74(m，1H)，7.27(m，1H)，8.17(d，1H)；MH+330。
注意緊鄰酸的位置在反應(yīng)過程中外消旋。
實施例49-52 通過實施例35的程序并在相同規(guī)模下，使用(3R)-3-[[4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]氨基]環(huán)戊烷-1-羧酸(實施例48)和適當(dāng)?shù)陌分苽湎铝谢衔铩?br> 實施例53 順式-N-[5-氟-4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]環(huán)戊烷-1，3-二胺 將順式-1，3-二氨基環(huán)戊烷二鹽酸鹽(方法9；2.06克)溶解在MeOH(250毫升)中，然后加入KOH(1.34克)在MeOH(50毫升)中的溶液。將該懸浮液過濾并蒸發(fā)濾液以產(chǎn)生油狀的順式-1，3-二氨基環(huán)戊烷(1.2克；游離堿)。將2-氯-5-氟-4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶(方法5；2.04克)與順式-1，3-二氨基環(huán)戊烷(1.2克)和DIPEA(2.06克)一起在DMA(14毫升)中在125℃下攪拌和加熱2小時。此后濃縮該混合物，然后用2M碳酸鈉水溶液稀釋，并用DCM萃取。將有機層干燥，過濾并在二氧化硅上提純，用DCM中的0-10％MeOH然后2％三乙胺/15％MeOH/DCM洗脫，產(chǎn)生無色膠狀的標(biāo)題化合物(1.62克，63％產(chǎn)率)。NMR(400.13MHz，CDCl3)1.40(m，1H)，1.57(m，7H)，1.79(m，1H)，1.99(m，2H)，2.21(m，1H)，2.59(s，3H)，3.54(m，1H)，4.30(m，1H)，5.61(m，1H)，5.82(d，1H)，7.52(d，1H)，8.13(d，1H)；MH+319。
實施例54至55 通過實施例22的程序并在相同規(guī)模下，使用順式-N-[5-氟-4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]環(huán)戊烷-1，3-二胺(實施例53)和適當(dāng)?shù)乃嶂苽錁?biāo)題化合物。
實施例56 N-[順式-3-[[5-氟-4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]氨基]環(huán)戊基]甲磺酰胺 將順式-N-[5-氟-4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]環(huán)戊烷-1，3-二胺(實施例53；128毫克)與三乙胺(61毫克)一起在DCM(4毫升)中在環(huán)境溫度下攪拌。逐滴加入在DCM(1毫升)中的甲烷磺酰氯(46毫克)并將該混合物攪拌1小時。加入氨水(25％，0.5毫升)，然后將該混合物蒸發(fā)至干，并將殘留物通過RPHPLC提純產(chǎn)生固體標(biāo)題化合物(94毫克，60％)。NMR(400.13MHz，CDCl3)1.55(d，6H)，1.60(m，1H)，1.82(m，2H)，2.10(m，2H)，2.52(m，1H)，2.60(s，3H)，2.97(s，3H)，3.90(m，1H)，4.18(m，1H)，5.05(d，1H)，5.18(d，1H)，5.55(m，1H)，7.53(d，1H)，8.14(d，1H)；MH+397。
實施例57至58 通過實施例29的程序并在相同規(guī)模下，使用順式-N-[5-氟-4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]環(huán)戊烷-1，3-二胺(實施例53)和適當(dāng)?shù)陌分苽錁?biāo)題化合物。
原材料制備 方法1 4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-醇 將4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-胺(方法39，WO2003/076436，5克，23毫摩爾)在惰性氣氛下溶解在70％AcOH-水(145毫升)中。在環(huán)境溫度下經(jīng)過5分鐘逐滴添加在水(10毫升)中的亞硝酸鈉(5.52克，80毫摩爾)，產(chǎn)生溫和放熱。將反應(yīng)混合物緩慢加熱至60℃，并在此溫度下保持3小時。將反應(yīng)混合物冷卻至環(huán)境溫度并用40％NaOH水溶液中和至pH7，用EtOAc(250毫升×5)萃取并將合并的萃取物干燥并蒸發(fā)產(chǎn)生灰白色固體狀的標(biāo)題化合物(8.2克，43％)。NMR(400.132MHz，CDCl3)1.51(d，6H)，2.03(s，3H)，2.54(s，3H)，5.93(m，1H)，6.60(d，1H)，7.57(m，2H)；MH+219。
方法2 2-氯-4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶 合并4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-醇(方法1，8.2克，29.4毫摩爾)、氧氯化磷(120毫升)和五氯化磷(6.6克)并在回流下加熱18小時。蒸發(fā)過量氧氯化磷，將殘留物溶解在DCM中，并在冰和水中攪拌。通過添40％氫氧化鈉水溶液來使該混合物達到pH11。分離有機和含水相并將有機相用鹽水洗滌，干燥和蒸發(fā)。將所得材料溶解在DCM中并在用淺梯度0-5％MeOH/DCM洗脫的二氧化硅上色譜分離。合并含產(chǎn)物的餾分并蒸發(fā)產(chǎn)生淺棕色膠狀標(biāo)題化合物(5.8克，84％)。NMR(400.132MHz)1.53(d，6H)，2.50(s，3H)，5.27(m，1H)，7.72(s，1H)，7.79(d，1H)，8.62(d，1H)；MH+237。
方法3 4-嗎啉-4-基丁酸鹽酸鹽 將4-溴丁酸乙酯(67毫升，0.5M)逐滴添加到嗎啉(175毫升，2M)在無水甲苯(1升)中的溶液中。將反應(yīng)混合物在60℃下攪拌4小時，然后在環(huán)境溫度下攪拌過夜。將反應(yīng)混合物在0℃下過濾，并蒸發(fā)濾液。將所得材料用60-80汽油研制并蒸發(fā)產(chǎn)生橙色油(91.4克)，將其減壓蒸餾以產(chǎn)生清澈油(73.2克)b.p.90.2℃/3-4mm Hg。將所得油在18％HCl(aq)(1升)中在回流下加熱16小時。蒸發(fā)酸，留下粘稠的固體，其在用醚研制后產(chǎn)生白色固體(75.25克)，其從冰乙酸/丙酮中重結(jié)晶以產(chǎn)生白色結(jié)晶固體狀的標(biāo)題化合物(56.43克，53％)m.p.181-3℃。
方法4 5-氟-4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-醇乙酸酯 將5-氟-4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-胺(方法17，WO2006/064251中；4克，17毫摩爾)在惰性氣氛下溶解在70％AcOH-水(108毫升)中。在環(huán)境溫度下經(jīng)5分鐘逐滴加入在水(8毫升)中的亞硝酸鈉(4.08克，59.2毫摩爾)。使反應(yīng)混合物緩慢升溫至60℃。在3小時后，將反應(yīng)混合物冷卻，然后用40％NaOH水溶液中和至pH7。將含水層用EtOAc(6×300毫升)萃取，將合并的有機物干燥，過濾并蒸發(fā)產(chǎn)生黃色固體狀的標(biāo)題化合物(4.07克，81％)。NMR(400.132MHz)1.48(d，6H)，1.91(s，3H)，2.50(s，3H)，5.44(m，1H)，7.47(d，1H)，8.29(d，1H)；MH+237。
方法5 2-氯-5-氟-4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶 將5-氟-4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-醇乙酸酯(方法4；4克，13.5毫摩爾)懸浮在氧氯化磷(25毫升)中并加熱至90℃3.5小時。將反應(yīng)混合物在真空中濃縮，然后將殘留物溶解在DCM(25毫升)中并與冰/水(50毫升)一起攪拌。將該混合物在冰水浴中冷卻，用40％NaOH水溶液中和至pH 8，然后加入水和DCM(50毫升)并分離有機層。將含水層用DCM(75毫升)萃取，然后將合并的有機物用鹽水洗滌，干燥，過濾并蒸發(fā)產(chǎn)生棕色油。通過二氧化硅上的用50％EtOAc/異己烷洗脫的快速色譜法提純，產(chǎn)生黃色油狀的標(biāo)題化合物，其靜置時結(jié)晶(2.84克，83％)。NMR(400.132MHz，CDCl3)1.54(d，6H)，2.54(s，3H)，5.34(m，1H)，7.69(m，1H)，8.32(m，1H)；MH+255。
方法6 (1S，3R)-3-氨基環(huán)戊烷-1-羧酸甲酯鹽酸鹽 將亞硫酰氯(0.062毫升，8.57毫摩爾)在惰性氣氛下經(jīng)2-3分鐘逐滴添加到冷卻的(鹽/冰浴)無水MeOH(10毫升)中。攪拌2-3分鐘后，一次性加入固體形式的(1S，3R)-3-氨基環(huán)戊烷-1-羧酸(997毫克，7.72毫摩爾)。將反應(yīng)混合物在冷卻下攪拌1小時，然后在環(huán)境溫度下攪拌3小時。蒸發(fā)溶劑，將殘留物用醚/EtOAc研制。過濾收集所得固體，干燥產(chǎn)生白色固體狀的標(biāo)題產(chǎn)物(1.3克，94％)。NMR(400.132MHz)1.62-1.80(m，2H)，1.86-1.98(m，3H)，2.26(m，1H)，2.86(m，1H)，3.47(m，1H)，3.63(s，3H)，8.22(br s，3H)。
方法7 (1S，3R)-3-carbamimidamido環(huán)戊烷-1-羧酸甲酯 將(1S，3R)-3-氨基環(huán)戊烷-1-羧酸甲酯鹽酸鹽(方法6；1.29克，7.18毫摩爾)溶解在乙腈(35毫升)中并用三乙胺(3.0毫升，21.52毫摩爾)處理。加入1H-吡唑-1-甲脒鹽酸鹽(2.1克，14.33毫摩爾)并將反應(yīng)混合物在70℃(內(nèi)部溫度)下加熱4小時。使反應(yīng)混合物冷卻過夜，然后蒸發(fā)成黃色粘稠油，將其用飽和NaHCO3水溶液(～50毫升)處理。將混合物在靜置前搖振30-40分鐘。生成的所得沉淀物通過抽吸過濾收集，用水洗滌并在抽吸下干燥2小時，然后轉(zhuǎn)移到真空爐中并在真空下，在55℃下干燥3小時以產(chǎn)生白色固體狀的標(biāo)題化合物(1.61克，100％)。NMR(400.132MHz，)1.44-1.62(m，2H)，1.81-1.98(m，3H)，2.26(m，1H)，2.80(m，1H)，3.61(s，3H)，3.82(m，1H)。
方法8 順式-4-carbamimidamido環(huán)己烷-1-羧酸芐酯 通過方法7的程序并在相同規(guī)模下，使用順式-4-氨基環(huán)己烷-1-羧酸芐酯(步驟A，WO 06/073589中的實施例2)代替(1S，3R)-3-氨基環(huán)戊烷-1-羧酸甲酯鹽酸鹽(方法6)，制備標(biāo)題化合物。NMR(400.132MHz)1.51(m，2H)，1.63-1.80(m，6H)，2.58(m，1H)，3.61(m，1H)，5.12(s，2H)，7.36(m，5H)，7.80(br.s，4H)。
方法9 順式-環(huán)戊烷-1，3-二胺二鹽酸鹽 將2，3-二氮雜雙環(huán)[2.2.1]庚烷二鹽酸鹽(Tetrahedron Lett.，2002，43，5551；4.06克)在EtOH-水(1:1；80毫升)中在10％活性碳上的鈀(2克)存在下在40℃下氫化7小時。通過硅藻土過濾催化劑，并將濾液蒸發(fā)至干以產(chǎn)生固體標(biāo)題化合物(4.1克，100％)。NMR(400.13MHz，DMSO+D2O)1.60(1H，m)，1.78(2H，m)，2.02(2H，m)，2.47(1H，m)，3.53(2H，m)。
實施例59 下面例示在人體內(nèi)發(fā)揮治療性或與預(yù)防性作用的含有式(I)的化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解酯(下文化合物X)的代表性藥物劑型 注意 上述制劑可以通過制藥領(lǐng)域公知的傳統(tǒng)程序獲得。片劑(a)-(c)可以通過傳統(tǒng)方式進行腸溶包衣，例如以提供乙酸鄰苯二甲酸纖維素包衣。
權(quán)利要求
1.式(I)的化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解酯
其中
環(huán)A是5-7元飽和碳環(huán)，其中環(huán)A的兩個原子可任選通過橋相連；
R1選自羧基、氨基、氨磺?；?、氨磺?；被?、氨基甲?；⒒鶊F-R6-R7或任選含有附加的氮、氧或硫原子的氮連接的4-7元飽和環(huán)；其中所述環(huán)可任選在碳上被一個或多個R8取代；且其中如果所述環(huán)含有附加的氮原子，該氮可以任選被R9取代；
R2選自鹵素、硝基、氰基、羥基、氨基、羧基、氨基甲?；€基、氨磺?；1-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、C1-6烷?；1-6烷酰氧基、N-(C1-6烷基)氨基、N，N-(C1-6烷基)2氨基、C1-6烷?；被?、N-(C1-6烷基)氨基甲?；?、N，N-(C1-6烷基)2氨基甲?；?、其中a是0至2的C1-6烷基S(O)a、C1-6烷氧基羰基、N-(C1-6烷基)氨磺酰基、N，N-(C1-6烷基)2氨磺酰基、C1-6烷基磺?；被⑻辑h(huán)基-R10-或雜環(huán)基-R11-；其中R2可任選在碳上被一個或多個R12取代；且其中如果所述雜環(huán)基含有-NH-部分，該氮可以任選被選自R13的基團取代；
q是0-4；其中R2的值可以相同或不同；
R3選自鹵素、氰基或氨基；
n是0至2，其中R3的值可以相同或不同；
R4選自乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、環(huán)丙基、環(huán)丙基甲基、1-環(huán)丙基乙基、環(huán)丁基甲基、環(huán)戊基或環(huán)丁基；其中R4可以任選在碳上被一個或多個R14取代；
R5選自甲基、乙基、異丙基、氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、甲氧基甲基、環(huán)丙基甲基或環(huán)丙基；
R6選自-O-、-N(R15)-、-C(O)-、-C(O)O-、-N(R16)C(O)-、
-C(O)N(R17)-、-N(R18)C(O)O-、-N(R19)C(O)N(R20)-、-S(O)r-、-OC(O)N(R21)SO2-、-N(R22)SO2N(R23)-、-SO2N(R24)-、-N(R25)SO2-、-C(O)N(R39)SO2-或-SO2N(R40)C(O)-；其中R15、R16、R17、R18、R19、R20、R21、R22、R23、R24、R25、R39和R40獨立地為氫或任選被一個或多個R26取代的C1-6烷基，且r為0-2；
R7選自C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基、碳環(huán)基或雜環(huán)基；其中R7可以任選在碳上被一個或多個R27取代；且其中如果所述雜環(huán)基含有-NH-部分，該氮可以任選被選自R28的基團取代；
R8、R12、R26和R27獨立地選自鹵素、硝基、氰基、羥基、氨基、羧基、氨基甲酰基、巰基、氨磺?；?、C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、C1-6烷酰基、C1-6烷酰氧基、N-(C1-6烷基)氨基、N，N-(C1-6烷基)2氨基、C1-6烷?；被-(C1-6烷基)氨基甲?；，N-(C1-6烷基)2氨基甲酰基、其中a為0至2的C1-6烷基S(O)a、C1-6烷氧基羰基、N-(C1-6烷基)氨磺酰基、N，N-(C1-6烷基)2氨磺酰基、C1-6烷基磺?；被?、碳環(huán)基-R29-或雜環(huán)基-R30-；其中R8、R12、R26和R27彼此獨立地可任選在碳上被一個或多個R31取代；且其中如果所述雜環(huán)基含有-NH-部分，該氮可以任選被選自R32的基團取代；
R9、R13、R28和R32獨立地選自C1-6烷基、C1-6烷?；?、C1-6烷基磺?；?、C1-6烷氧基羰基、氨基甲?；-(C1-6烷基)氨基甲?；，N-(C1-6烷基)氨基甲酰基、芐基、芐氧基羰基、苯甲?；捅交酋；?；其中R9、R13、R28和R32彼此獨立地可任選在碳上被一個或多個R33取代；且
R10、R11、R29和R30獨立地選自直接鍵、-O-、-N(R34)-、-C(O)-、-N(R35)C(O)-、-C(O)N(R36)-、-S(O)s-、-SO2N(R37)-或-N(R38)SO2-；其中R34、R35、R36、R37和R38獨立地選自氫或C1-6烷基，且s為0-2；
R14選自鹵素、硝基、氰基、羥基、氨基、羧基、氨基甲酰基、巰基、氨磺?；?、C1-6烷氧基、C1-6烷?；?、C1-6烷酰氧基、N-(C1-6烷基)氨基、N，N-(C1-6烷基)2氨基、C1-6烷?；被-(C1-6烷基)氨基甲?；?、N，N-(C1-6烷基)2氨基甲?；⑵渲衋為0至2的C1-6烷基S(O)a、C1-6烷氧基羰基、N-(C1-6烷基)氨磺?；?、N，N-(C1-6烷基)2氨磺?；虲1-6烷基磺酰基氨基；
R31和R33獨立地選自鹵素、硝基、氰基、羥基、三氟甲氧基、三氟甲基、氨基、羧基、氨基甲酰基、巰基、氨磺?；?、甲基、乙基、環(huán)丙基、環(huán)丁基、甲氧基、乙氧基、乙?；?、乙酰氧基、甲基氨基、乙基氨基、二甲基氨基、二乙基氨基、N-甲基-N-乙基氨基、乙?；被?、N-甲基氨基甲酰基、N-乙基氨基甲?；?、N，N-二甲基氨基甲?；，N-二乙基氨基甲?；?、N-甲基-N-乙基氨基甲酰基、甲硫基、乙硫基、甲基亞磺酰基、乙基亞磺?；?、甲磺酰基、乙基磺?；?、甲氧基羰基、乙氧基羰基、N-甲基氨磺?；-乙基氨磺?；?、N，N-二甲基氨磺?；?、N，N-二乙基氨磺?；騈-甲基-N-乙基氨磺?；?。
2.如權(quán)利要求1所述的式(I)的化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解酯，其中環(huán)A是環(huán)戊基或環(huán)己基。
3.如權(quán)利要求1或2所述的式(I)的化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解酯，其中R1選自羧基、氨基、氨磺?；被蚧鶊F-R6-R7；其中
R6選自-N(R15)-、-C(O)-、-C(O)O-、-N(R16)C(O)-、-C(O)N(R17)-、
-N(R18)C(O)O-、-N(R22)SO2N(R23)-或-N(R25)SO2-；其中R15、R16、R17、R18、R22、R23和R25獨立地為氫或C1-6烷基；
R7選自C1-6烷基或雜環(huán)基；其中R7可以任選在碳上被一個或多個R27取代；且其中如果所述雜環(huán)基含有-NH-部分，該氮可以任選被選自R28的基團取代；
R27選自C1-6烷基、N，N-(C1-6烷基)2氨基或雜環(huán)基-R30-；其中如果所述雜環(huán)基含有-NH-部分，該氮可以任選被選自R32的基團取代；
R28和R32獨立地選自C1-6烷基和C1-6烷氧基羰基；和
R30是直接鍵。
4.如權(quán)利要求1-3任一項所述的式(I)的化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解酯，其中q為0。
5.如權(quán)利要求1-4任一項所述的式(I)的化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解酯，其中R3是鹵素。
6.如權(quán)利要求1-5任一項所述的式(I)的化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解酯，其中n是0或1。
7.如權(quán)利要求1-6任一項所述的式(I)的化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解酯，其中R4是異丙基。
8.如權(quán)利要求1-7任一項所述的式(I)的化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解酯，其中R5是甲基。
9.式(I)的化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解酯
其中
環(huán)A是環(huán)戊基或環(huán)己基；
R1選自氨基、羧基、甲氧基羰基、氨磺?；被?、N-甲基氨基甲酰基、N-(2-二甲基氨基乙基)氨基甲酰基、N-(2-吡咯烷-1-基乙基)氨基甲?；，N-二甲基氨磺酰基氨基、叔丁氧基羰基氨基、甲磺?；被?、二甲基氨基、(4-嗎啉代丁酰基)氨基、2-(哌啶-4-基)乙酰基氨基、2-(N-叔丁氧基羰基哌啶-4-基)乙?；被?、3-(哌嗪-4-基)丙?；被?、3-(1-叔丁氧基羰基哌嗪-4-基)丙?；被?-(哌啶-4-基)丙?；被?、3-(N-叔丁氧基羰基哌啶-4-基)丙?；被?、4-甲基-哌啶-4-基羰基氨基、N-叔丁氧基羰基-4-甲基-哌啶-4-基羰基氨基、2-(吡咯烷-1-基)乙基磺?；被?-(二甲基氨基)乙基磺?；被?、3-(吡咯烷-1-基)丙基磺?；被?、3-(吡咯烷-1-基)丙?；被?、1-甲基高哌嗪-4-基羰基、2-(哌啶-3-基)乙?；被?、3-(二甲基氨基)丙酰基氨基和1-甲基哌啶-4-基羰基氨基、2-(N-叔丁氧基羰基哌啶-3-基)乙酰基氨基；
q是0；
R3是鹵素；
n是0或1；
R4是異丙基；
R5是甲基。
10.式(I)的化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解酯
選自
5-氟-4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)-2-[[反式-4-(氨磺?；被?環(huán)己基]氨基]嘧啶；
N-[順式-3-[[5-氟-4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]氨基]環(huán)戊基]甲磺酰胺；
N-[順式-3-[[5-氟-4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]氨基]環(huán)戊基]-2-吡咯烷-1-基-乙磺酰胺；
4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)-2-[[反式-4-(氨磺?；被?環(huán)己基]氨基]嘧啶；
反式-N-[5-氟-4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]環(huán)己烷-1，4-二胺；
2-(二甲基氨基)-N-(順式-3-{[5-氟-4-(1-異丙基-2-甲基-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-基]氨基}環(huán)戊基)乙磺酰胺；
N-[反式-4-[[4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]氨基]環(huán)己基]甲磺酰胺；
反式-N-[5-氟-4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]-N′，N′-二甲基-環(huán)己烷-1，4-二胺；
N-[(順式)-3-[[5-氟-4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]氨基]環(huán)戊基]-1-甲基-哌啶-4-羧酰胺；和
N-[反式-4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]環(huán)己烷-1，4-二胺。
11.制備如權(quán)利要求1所述的式(I)的化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解酯的方法，該方法包含
方法a)式(II)的嘧啶
其中L是可置換基團；與式(III)的胺的反應(yīng)
或
方法b)使式(IV)的化合物
與式(V)的化合物反應(yīng)
其中T是O或S；Rx可以相同或不同并選自C1-6烷基；或方法c)使式(VI)的嘧啶
與式(VII)的化合物反應(yīng)
其中Y是可置換基團；
且此后如果必要
i)將式(I)的化合物轉(zhuǎn)化成式(I)的另一化合物；
ii)除去任何保護基；
iii)形成可藥用鹽或體內(nèi)可水解酯。
12.藥學(xué)組合物，其包含如權(quán)利要求1-10任一項所述的式(I)的化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解酯，和可藥用稀釋劑或載體。
13.如權(quán)利要求1-10任一項所述的式(I)的化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解酯，用作藥物。
14.如權(quán)利要求1-10任一項所述的式(I)的化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解酯在用于產(chǎn)生抗細胞增殖作用的藥物制造中的用途。
15.如權(quán)利要求1-10任一項所述的式(I)的化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解酯在用于產(chǎn)生CDK2抑制作用的藥物制造中的用途。
16.如權(quán)利要求1-10任一項所述的式(I)的化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解酯在癌癥治療藥物的制造中的用途。
17.如權(quán)利要求1-10任一項所述的式(I)的化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解酯在白血病或淋巴惡性腫瘤或乳癌、肺癌、結(jié)腸癌、直腸癌、胃癌、肝癌、腎癌、前列腺癌、膀胱癌、胰腺癌、外陰癌、皮膚癌或卵巢癌的治療藥物的制造中的用途。
18.如權(quán)利要求1-10任一項所述的式(I)的化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解酯在癌癥、纖維增生性和分化性失調(diào)癥、牛皮癬、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、卡波濟氏肉瘤、血管瘤、急性和慢性腎病、粉瘤、動脈粥樣硬化、動脈再狹窄、自身免疫性疾病、急性和慢性炎癥、骨病和伴有視網(wǎng)膜血管增生的眼病的治療藥物的制造中的用途。
19.在需要這種治療的溫血動物中產(chǎn)生抗細胞增殖作用的方法，其包括對所述動物施用有效量的如權(quán)利要求1-10任一項所述的式(I)的化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解酯。
20.在需要這種治療的溫血動物中產(chǎn)生CDK2抑制作用的方法，其包括對所述動物施用有效量的如權(quán)利要求1-10任一項所述的式(I)的化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解酯。
21.在需要這種治療的溫血動物中治療癌癥的方法，其包括對所述動物施用有效量的如權(quán)利要求1-10任一項所述的式(I)的化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解酯。
22.在需要這種治療的溫血動物中治療白血病或淋巴惡性腫瘤或乳癌、肺癌、結(jié)腸癌、直腸癌、胃癌、肝癌、腎癌、前列腺癌、膀胱癌、胰腺癌、外陰癌、皮膚癌或卵巢癌的方法，其包括對所述動物施用有效量的如權(quán)利要求1-10任一項所述的式(I)的化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解酯。
23.在需要這種治療的溫血動物中治療癌癥、纖維增生性和分化性失調(diào)癥、牛皮癬、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、卡波濟氏肉瘤、血管瘤、急性和慢性腎病、粉瘤、動脈粥樣硬化、動脈再狹窄、自身免疫性疾病、急性和慢性炎癥、骨病和伴有視網(wǎng)膜血管增生的眼病的方法，其包括對所述動物施用有效量的如權(quán)利要求1-10任一項所述的式(I)的化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解酯。
全文摘要
描述了式(I)的化合物，其具有細胞周期抑制活性。
文檔編號C07D403/00GK101454312SQ200780019158
公開日2009年6月10日 申請日期2007年5月24日 優(yōu)先權(quán)日2006年5月26日
發(fā)明者C·瓊斯, M·帕斯, D·拉奇 申請人:阿斯利康(瑞典)有限公司