專利名稱：：Mdm2和p53相互作用的抑制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及作為MDM2和p53相互作用的抑制劑的化合物和含有該化合物的組合物。另外，本發(fā)明還提供了制備所公開的抑制劑的方法，含有該抑制劑的組合物，和將其作為例如藥物使用的方法。p53是一種腫瘤抑制蛋白，它在細(xì)胞增殖和細(xì)胞生長(zhǎng)停頓/凋亡之間的平衡調(diào)節(jié)中起關(guān)鍵作用。在正常條件下，p53的半壽期;f艮短，因此細(xì)胞中p53的濃度很低。然而，由于細(xì)胞DNA受損或細(xì)胞應(yīng)激(例如，癌基因激活，端粒侵蝕，缺氧)，p53的濃度增加。p53濃度的這一增加導(dǎo)致驅(qū)動(dòng)細(xì)胞進(jìn)入生長(zhǎng)停頓或凋亡過(guò)程的許多基因的轉(zhuǎn)錄被激活。因此，p53的一個(gè)重要功能是防止受損細(xì)胞的不受控制的增殖，從而保護(hù)有機(jī)體防止癌癥發(fā)展。MDM2是一種關(guān)鍵的p53功能負(fù)調(diào)節(jié)物。它通過(guò)與p53的氨基末端反式激活域結(jié)合，形成一個(gè)負(fù)的自調(diào)節(jié)環(huán)^各，因此MDM2既抑制p53激活轉(zhuǎn)錄的能力，又將p53導(dǎo)向蛋白酶解降解。在正常條件下，這一調(diào)節(jié)環(huán)是保持p53低濃度的主要原因。然而，在帶有野生型p53的腫瘤中，由于MDM2和p53之間的相互作用受到拮抗，活性p53的平tf濃度會(huì)增加。這會(huì)造成在這些肺瘤細(xì)月包中p53介導(dǎo)的促凋亡作用和抗增殖作用的恢復(fù)。MDM2是一種細(xì)胞原癌基因。在一些癌癥中已觀察到MDM2的超量表達(dá)。MDM2在很多肺瘤中由于基因擴(kuò)增或者轉(zhuǎn)錄或翻譯增加而被超量表達(dá)。MDM2擴(kuò)增促進(jìn)肺瘤發(fā)生的才幾制至少部分地與它和p53的相互作用有關(guān)。在超量表達(dá)MDM2的細(xì)胞中，p53的保護(hù)功能,皮阻斷，因此細(xì)胞不能通過(guò)增加p53濃度響應(yīng)DNA損傷或細(xì)胞應(yīng)激，導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)停頓和/或凋亡。因此，在DNA損傷和/或細(xì)胞應(yīng)激之后，超量表達(dá)MDM2的細(xì)胞自由地增殖并采取致癌表型。在這些條件下，p53和MDM2的相互作用的破壞會(huì)釋放出p53,從而使正常的生長(zhǎng)停頓和/或凋亡信號(hào)能夠起作用。除了抑制p53之夕卜，MDM2還有另外的功能。例如，已經(jīng)表明MDM2直接與調(diào)節(jié)pRb的轉(zhuǎn)錄因子E2F1/DP1相互作用。這一相互作用對(duì)于和p53無(wú)關(guān)的MDM2的致癌活性可以是關(guān)4建的。E2F1的一個(gè)域顯示出與p53的MDM2結(jié)合域驚人的相似性。因?yàn)镸DM2與p53和E2F1的相互作用都處在MDM2上的相同的結(jié)合位，可以預(yù)期，MDM2/p53拮抗劑將不僅激活細(xì)胞p53,而且還調(diào)節(jié)E2F1活性，而這種活性在肺瘤細(xì)胞中通常是失控的。目前使用的DNA損傷劑(化療和放療)的療效會(huì)由于MDM2對(duì)p53的負(fù)調(diào)節(jié)而受到限制。因此，如果MDM2對(duì)p53的反饋抑制被中斷，則功能性p53濃度的增加會(huì)由于恢復(fù)野生型p53功能而提高這種藥物的療效，這種功能導(dǎo)致凋亡和/或逆轉(zhuǎn)與p53有關(guān)的藥物抗性。已經(jīng)證實(shí)，體內(nèi)的MDM2抑制和DNA損傷治療相結(jié)合導(dǎo)致協(xié)同的抗肺瘤作用(VousdenK.H.,Cell,Vol.103,691-694,2000)。于是，破壞MDM2和p53的相互作用提供了一種治療性介入帶有野生型p53的腫瘤的方法，它甚至可以在缺乏功能性p53的肺瘤細(xì)胞中顯示抗增殖作用，并且能提高致腫瘤細(xì)胞對(duì)化療和放療的敏感性。
背景技術(shù)：
：1999年5月18日/>布的JP11130750，連同其它物質(zhì)一起，描述了作為5-HT受體拮抗劑的苯氨基羰基吲咮基衍生物。2000年5月18日公布的EP1129074描述了作為血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體(VEGFR)抑制劑，并可用于治療血管源性疾病的鄰氨基苯甲酰胺化合物。2002年3月21日公布的EP1317443公布了三環(huán)叔胺衍生物，它們可用來(lái)作為趨化因子受體CXCR4或CCR5調(diào)節(jié)劑，用于治療人免疫缺損病毒和豬免疫缺損病毒。2002年月10月10日7^布的EP1379239公開了作為5-HT6受體的拮抗劑的N-(2-芳基乙基)苯曱胺。2000年3月23日公布的WO00/15357提供了作為MDM2和p53之間相互作用抑制劑的哌漆-4-苯基衍生物。2000年6月8日公布的EP1137418提供了用于恢復(fù)p53家族一種蛋白的構(gòu)象穩(wěn)定性的三環(huán)化合物。2003年5月22日公布的EP1443937描述了取代的1,4-苯并二氮雜萆及其作為MDM2-p53相互作用抑制劑的應(yīng)用。2003年6月26日公布的EP1458380提供了順-2,4,5-三苯基咪唑酮化合物，它們抑制MDM2蛋白與p53樣肽的相互作用，并有抗增殖活性。2004年1月15日公布的EP1519932公開了二芳基磺酰胺化合物，它們與MDM2結(jié)合，并能用于癌癥治療。仍然需要能抑制MDM2和p53之間相互作用的有效和強(qiáng)有力的小分子化合物。本發(fā)明化合物與先有技術(shù)在結(jié)構(gòu)、藥理活性和/或藥理效力方面不同。發(fā)明敘述本發(fā)明提供了用于抑制MDM2和p53之間相互作用以便治療癌癥的化合物、組合物和方法。另外，本發(fā)明的化合物和組合物可用于增強(qiáng)4b療和it療的承支力。本發(fā)明涉及式(I)化合物其N-氧化物形式，加成鹽形式或立體化學(xué)異構(gòu)形式，其中m是O,1或2,當(dāng)m為0時(shí)則代表一個(gè)直接鍵；n是0、1、2、3或4,當(dāng)n為0時(shí)則代表一個(gè)直接鍵；p是O或l,當(dāng)p為0時(shí)則代表一個(gè)直接鍵；s是O或l,當(dāng)s為0時(shí)則代表一個(gè)直接鍵；t是O或l,當(dāng)t為0時(shí)則代表一個(gè)直接鍵；Ri和I^各自獨(dú)立地是氫，鹵素，C!-C6烷基，Cw烷氧基，芳基Cw烷氧基，雜芳基Cw烷氧基，苯硫基，羥基d—6烷基羰基，被選自氨基、芳基和雜芳基的一個(gè)取代基取代的Cw烷基；或被選自氨基、芳基和雜芳基的一個(gè)取代基取代的C3—7環(huán)烷基；A是一個(gè)基團(tuán)，選自<formula>formulaseeoriginaldocumentpage0</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage0</formula>114和115各自獨(dú)立地選自氫，卣素，d—6烷基，基，氰基C^6烷基，羥基C^烷基，羥基，氨基,基羰基，曱磺酰氨基，芳基或雜芳基；Z是選自以下的一個(gè)基團(tuán)多鹵代d—6烷基，氰<formula>formulaseeoriginaldocumentpage0</formula>其中W或W彼此獨(dú)立地選自氫，卣素，羥基，氨基，d—6烷基，硝基，多卣代d—6烷基，氰基，氰基d—6烷基，四唑并d—6烷基，芳基，雜芳基，芳基C"烷基，雜芳基C"烷基，芳基(羥基)d—6烷基，雜芳基(羥基)C"烷基，芳基羰基，雜芳基羰基，d—6烷基羰基，芳基d-6烷基羰基，雜芳基Cw烷基羰基，d—6烷氧基，C3—7環(huán)烷基羰基，C3-7環(huán)烷基(羥基)Cw烷基，芳基d—6烷氧基d—6烷基，d—6烷氧基d-6烷氧基Cw烷基，6烷基羰氧基d—6烷基，d—6烷氧羰基d—6烷氧基Cw烷基，羥基Q-6烷氧基C卜6烷基，Ci—6烷氧羰基C2—6烯基d-6烷氧基<formula>formulaseeoriginaldocumentpage0</formula>Cw烷基，C^烷氧羰基，C]—6烷基羰氧基，氨基羰基，羥基d—6烷基，氨基d-6烷基，羥基羰基，羥基羰基d.6烷基和-(CH2)v-(C(=0)r)-(CHR1C))u-NR8R9;其中v是O,1，2,3,4,5或6,當(dāng)v是0時(shí)代表一個(gè)直接鍵；r是O或l,當(dāng)r是0時(shí)代表一個(gè)直接鍵；u是O,1,2，3，4,5或6,當(dāng)u是0時(shí)代表一個(gè)直接鍵；R"是氳或d—6烷基；RS和I^各自獨(dú)立地選自氫，Cw2烷基，d—6烷基羰基，d—6烷基磺?；蓟鵆p6烷基羰基，Cw環(huán)烷基，C3.7環(huán)烷基羰基，-(CH^k-NRUR12,被選自羥基、羥基羰基、氰基，Cw烷氧羰基，d—6烷氧基、芳基或雜芳基的一個(gè)取代基取代的Cw2烷基；或被選自羥基，d—6烷氧基，芳基，氨基，芳基Cw烷基，雜芳基或雜芳基C^烷基的一個(gè)取代基取代的C3_7環(huán)烷基；或者RS和R9與它們所連接的氮一起可以任選地形成一個(gè)嗎紳木基、哌啶基、吡咯烷基、哌溱基或被選自d-6烷基、芳基Cw烷基、芳基d—6烷氧羰基、雜芳基Cw烷基、Cw環(huán)烷基和C3—7環(huán)烷基6烷基的一個(gè)取代基取代的哌嗪基；其中k是O,1，2,3，4,5或6,當(dāng)k是0時(shí)代表一個(gè)直接鍵；R"和R"各自獨(dú)立地選自氫，Q-6烷基，芳基d—6烷氧羰基，C3—7環(huán)烷基，被選自羥基，Cw烷氧基，芳基和雜芳基的一個(gè)取代基取代的C.!2烷基；以及被選自羥基，Q-6烷氧基，芳基，芳基d—6烷基，雜芳基和雜芳基C"烷基的一個(gè)取代基取代的Cw環(huán)烷基；或者RU和RU與它們所連接的氮一起，可以任選地形成一個(gè)嗎啉基，派。秦基或被Cw烷氧羰基取代的哌嗪基；芳基是苯基或萘基；各苯基或萘基可以任選地被各自獨(dú)立地選自囟素、羥基、羥基d-6烷基、C"烷基、氨基、多卣代C"烷基和d-6烷氧基的1、2或3個(gè)取代基取代；和各苯基或萘基可以任選地被一個(gè)選自亞甲二氧基和亞乙二氧基的二價(jià)基團(tuán)取代；雜芳基是吡啶基、吲哚基、喹啉基、咪唑基、呋喃基、噻吩基、嗜二唑基、四唑基、苯并p夫喃基或四氫呋喃基；各吡啶基、P引咮基、喹啉基、咪唑基、呋喃基、噻吩基、嗜二唑基、四唑基、苯并吹喃基或四氫呋喃基可以任選地^皮獨(dú)立選自卣素、羥基、Cw烷基、氨基、多卣代Q-6烷基、芳基、芳基d—6烷基或d—6烷氧基的1、2或3個(gè)取4戈基取代；和各吡啶基、卩引咮基、喹啉基、咪唑基、呋喃基、噻吩基、苯并呋喃基或四氫呋喃基可以任選地:帔選自亞曱二氧基或亞乙二氧基的一個(gè)二價(jià)基團(tuán)取代。式(1)化合物也可以以其互變異構(gòu)體形式存在。這些形式雖然在以上化學(xué)式中未明確指出，但也被包括在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。下面解釋在以上定義和后文中使用的若干術(shù)語(yǔ)。這些術(shù)語(yǔ)有時(shí)原樣使用，或是以復(fù)合詞的形式使用。當(dāng)在以上定義和后文中使用時(shí)，鹵素是氟、氯、溴和碘的通稱；d-6烷基定義為有1-6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈飽和烴基，例如，甲基，乙基，丙基，丁基，戊基，己基，l-甲基乙基，2-甲基丙基，2-曱基丁基，2-曱基戊基等；羥基C^烷基定義為在有1-6個(gè)碳原子的直鏈和支鏈飽和烴基上的羥基取代基；三卣甲基定義為含三個(gè)相同或不同的卣素取代基的曱基，例如三氟曱基；03-7環(huán)烷基包括有3-10個(gè)碳的環(huán)形烴基，例如環(huán)丙基，環(huán)丁基，環(huán)戊基，環(huán)戊烯基，環(huán)己基，環(huán)己烯基，環(huán)庚基等。術(shù)語(yǔ)"加成鹽"包括式(I)化合物與無(wú)機(jī)或有機(jī)堿，例如胺、堿金屬石咸或^咸土金屬;咸，或季4妄;咸，或與無(wú)才凡或有一幾酸，例如無(wú)機(jī)酸、》黃酸、羧酸或含磷酸，能夠形成的鹽。術(shù)語(yǔ)"加成鹽"還包括式(I)化合物能夠形成的可藥用的鹽，金屬絡(luò)合物和溶劑化物，以及它們的鹽。術(shù)語(yǔ)"可藥用的鹽"指可藥用的酸或堿加成鹽。如上所述的可藥用的酸或堿加成鹽包括式(I)化合物能形成的治療活性的無(wú)毒性酸和無(wú)毒性堿加成鹽形式。具有堿性的式(I)化合物能通過(guò)用適當(dāng)?shù)乃崽幚碓搲A，轉(zhuǎn)化成其可藥用的酸加成鹽。適當(dāng)?shù)乃岚?，例如，無(wú)機(jī)酸，如氳卣酸，例如鹽酸或氫溴酸，石危酸，；肖酸，^岸酸等；或有;f幾酸，例如，乙酸，丙酸，羥基乙酸，乳酸，丙酮酸，草酸，丙二酸，琥珀酸(即，丁二酸)，馬來(lái)酸，富馬酸，蘋果酸，酒石酸，檸檬酸，曱磺酸，乙磺酸，苯磺酸，對(duì)曱苯磺酸，環(huán)己烷氨基磺酸，水楊酸，對(duì)氨基水楊酸，雙鞋萘酸等。具有酸性的式(I)化合物可以通過(guò)用合適的有機(jī)或無(wú)機(jī)堿處理該酸形式，轉(zhuǎn)化成其可藥用的堿加成鹽。合適的堿鹽形式包括，例如，銨鹽，堿金屬和堿土金屬鹽，例如鋰、鈉、鉀、鎂、鈣鹽等，與有機(jī)石咸形成的鹽，例如，N,N，-二卡基乙二胺、N-甲基-D-葡糖胺，N,N，-二(脫氫松香基)乙二胺的鹽，以及與氨基酸如精氨酸，賴氨酸等的鹽。術(shù)語(yǔ)"酸或堿加成鹽"還包括式(I)化合物能形成的水合物和溶劑加成形式。這些形式的實(shí)例是水合物，醇化物等。術(shù)語(yǔ)"金屬絡(luò)合物"指式(I)化合物和一種或多種有機(jī)或無(wú)機(jī)金屬鹽之間形成的絡(luò)合物。所述的有機(jī)或無(wú)機(jī)鹽的實(shí)例包括周期表的第二主族的金屬(如鎂或鈣)，第三或第四主族的金屬(例如鋁、錫、鉛)，以及周期表第一至第八過(guò)渡金屬族的金屬(例如鉻、錳、鐵、鈷、鎳、銅、鋅等)的面化物、硝酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽、乙酸鹽、三氟乙酸鹽、三氯乙酸鹽、丙酸鹽、酒石酸鹽、磺酸鹽(如甲磺酸鹽，4-曱基苯磺酸鹽)、水楊酸鹽、苯甲酸鹽等。前面使用的術(shù)語(yǔ)"式(I)化合物的立體化學(xué)異構(gòu)形式"，定義了式(I)化合物可以具有的所有可能的化合物，它們由相同的原子按照相同的鍵序結(jié)合而成，但具有不可交換的不同的三維結(jié)構(gòu)。除非另外指明，一個(gè)化合物的化學(xué)標(biāo)示包括該化合物可以具有的所有可能的立體化學(xué)異構(gòu)形式的混合物。該混合物可以含有所述化合物的基本分子結(jié)構(gòu)的所有非對(duì)映體和/或?qū)τ丑w。式(I)化合物的所有立體化學(xué)異構(gòu)形式，無(wú)論是純形式或是彼此混合的形式，均被包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。特別重要的是立體化學(xué)純的式(I)化合物。本文中所述的化合物和中間體的純立體異構(gòu)形式被定義為，異構(gòu)體中基本不含該化合物或中間體的相同基本分子結(jié)構(gòu)的其它對(duì)映或非對(duì)映形式。具體地說(shuō)，術(shù)語(yǔ)"立體異構(gòu)純"是指化合物或中間體的立體異構(gòu)過(guò)量至少為80%(即，一種異構(gòu)體最少為90%,而其它可能的異構(gòu)體最多為10%)，直至100%(即，100%的一種異構(gòu)體，無(wú)其它異構(gòu)體)，特別是，化合物或中間體的立體異構(gòu)過(guò)量為90%直至100%,甚至立體異構(gòu)過(guò)量為94%直至100%,尤其是立體異構(gòu)過(guò)量為97%直至100%。術(shù)語(yǔ)"對(duì)映異構(gòu)純，，和"非對(duì)映異構(gòu)純，，應(yīng)以類似方式理解，但涉及的分別是所關(guān)心的混合物中的對(duì)映體過(guò)量和非對(duì)映體過(guò)量。式(I)化合物的互變異構(gòu)形式意味著包括其中例如烯醇基被轉(zhuǎn)化成酮基(酮-烯醇互變異構(gòu))的那些式(I)化合物。式(I)化合物的N-氧化物形式包括其中一個(gè)或幾個(gè)氮原子被氧化成所謂的N-氧化物的式(I)化合物，特別是其中一個(gè)或多個(gè)哌啶、哌。秦或噠n秦氮原子一皮N-氧化的那些N-氧化物。式(I)化合物可以按照本領(lǐng)域已知的將三價(jià)氮轉(zhuǎn)化成其N-氧化物形式的步驟，轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的N-氧化物。所述的N-氧化反應(yīng)通常可以通過(guò)式(I)的起始物與合適的有機(jī)或無(wú)機(jī)過(guò)氧化物反應(yīng)來(lái)進(jìn)行。合適的無(wú)才幾過(guò)氧化物包4舌，例如，過(guò)氧化氳；石咸金屬或石咸土金屬過(guò)氧化物，如過(guò)氧化鈉、過(guò)氧化鉀；合適的有機(jī)氧化物可包括過(guò)氧酸，例如，過(guò)苯甲酸或卣代過(guò)苯曱酸(例如3-氯過(guò)苯曱酸)，過(guò)氧鏈烷酸，例如過(guò)乙酸，烷基氳過(guò)氧化物，例如叔丁基氬過(guò)氧化物。合適的溶劑是，例如，水、低級(jí)醇(如乙醇等)、烴類(如曱苯)、酮類(如2-丁酮)、卣代烴(如二氯曱烷)及這些溶劑的混合物。如，氬同位素包括氚和氛，碳的同位素包括C-13和C-14。后文中在使用時(shí)，術(shù)語(yǔ)"式(I)化合物"意味著還包括N-氧化物形式，可藥用的酸或堿加成鹽，和所有的立體異構(gòu)形式。第一組重要化合物包括其中施加以下一個(gè)或多個(gè)限制的那些式(I)化合物a)m為0;b)n是0或2;c)p為1;d)s為0;e)t為0;f)R^和R各自獨(dú)立地是氳；g)A是選自(a-15)、(a-21)、(a-30)、(a-39)或(a-40)的一個(gè)基團(tuán)；h)R4和R5各自獨(dú)立地選自氫或d-6烷氧基；i)Z是基團(tuán)(b-2);或j)R6和R7各自獨(dú)立地選自氳。第二組重要化合物包括其中施加以下一個(gè)或多個(gè)限制的那些式(I)化合物或上述一組化合物a)m為0;b)11是2;c)p為1;d)s為0;e)t為0;f)1^和112各自獨(dú)立地為氫；g)A是選自(a-21)、(a-39)或(a-40)的一個(gè)基團(tuán)；h)114和115各自獨(dú)立地選自氳或Cw烷氧基；i)Z是基團(tuán)(b-2);或j)R6和R7各自獨(dú)立地選自氬。n為0或2，p為l,s為O，t為O,W和R2各自獨(dú)立地為氫，a是選自(a畫15)、(a-21)、(a-30)、(a隱39)或(a-40)的一個(gè)基團(tuán)；114和RS各自獨(dú)立地選自氳或CL6烷氧基；Z是基團(tuán)(b-2);或者116和117各自獨(dú)立地選自氬。一組更優(yōu)選的化合物由式(I)化合物或其任何子群組成，其中m為O,n為2，p為l,s為O,t為0，W和R2各自獨(dú)立地是氪，A是選自(a-21)、(a-39)或(a-40)的一個(gè)基團(tuán)，114和115各自獨(dú)立地選自氫或d—6烷氧基；Z是基團(tuán)(b-2),或者116和117各自獨(dú)立地選自氫。最優(yōu)選的化合物是化合物No.2,化合物No.3或化合物No.5。<table>tableseeoriginaldocumentpage0</column></row><table>式(I)化合物，其可藥用的鹽、N-氧化物及立體化學(xué)異構(gòu)形式，可以用常規(guī)方式制備。起始物和一些中間體是已知化合物，并有市售商品或是可以按照本領(lǐng)域通常已知的常規(guī)反應(yīng)步驟制備。下面將更詳細(xì)地描述一些此類制備方法。用來(lái)得到最終的式(I)化合物的其它方法描述于實(shí)施例中。式(I)化合物可以通過(guò)式(II)中間體與式(III)中間體反應(yīng)制備，其中W是一個(gè)合適的離去基團(tuán)，例如，卣素(如氟、氯、溴或碘)，或磺酰氧基團(tuán)(如甲磺酰氧基，4-甲基苯磺酰氧基等)。該反應(yīng)可以在反應(yīng)惰性溶劑中進(jìn)行，例如醇，如曱醇，乙醇，2-曱氧基乙醇，丙醇，丁醇等；醚，例如4,4-二嗜烷，l,l，-氧聯(lián)二丙烷等；酮，例如4-曱基-2-戊酮；或N,N-二曱基曱酰胺、硝基苯、乙腈、乙酸等?？梢约尤牒线m的堿，例如堿金屬或堿土金屬碳酸鹽或碳酸氫鹽，如三乙胺或碳酸鈉，用來(lái)吸收在反應(yīng)過(guò)程中釋放出的酸。可以加入少量的合適的金屬硪化物，例如碘化鈉或硪化鉀，以促進(jìn)反應(yīng)。攪拌可以才是高反應(yīng)的速率。該反應(yīng)可以方便地在/人室溫到反應(yīng)混合物的回流溫度的某個(gè)溫度下進(jìn)行，如果需要，反應(yīng)可以在加壓下進(jìn)行。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage20</formula>則<formula>formulaseeoriginaldocumentpage20</formula>(I)其中p是1的式(I)化合物在本文中稱作式(I-a)化合物，它可通過(guò)在合適的溶劑如四氳呋喃中用氳化鋁鋰轉(zhuǎn)化式(IV)中間體來(lái)制備。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage21</formula>式(I-a)化合物也可以通過(guò)合適的式(VI)甲醛與中間體(V)在合適的試劑如硼氫化鈉(例如四氳硼酸鈉或聚合物7fC載的氰基三氫硼酸鹽)存在下，于合適的溶劑例如醇(如甲醇)中反應(yīng)制備。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage21</formula>其中t為1的式(I)化合物在本文中稱作式(I-b)化合物，它可以按照相同的方式，通過(guò)式(ii)中間體與合適的式(vn)甲醛反應(yīng)制備。(CH2)S—HN——(CH》t一Z<formula>formulaseeoriginaldocumentpage22</formula>其中S是1的式(I)化合物稱作式(I-C)化合物，它可以通過(guò)式(VIII)中間體與氫化鋁鋰在合適的溶劑如四氳吹喃中反應(yīng)制備<formula>formulaseeoriginaldocumentpage22</formula>式(I)化合物或其中間體也可以通過(guò)本領(lǐng)域已知的反應(yīng)或官能基轉(zhuǎn)化反應(yīng)，彼此轉(zhuǎn)化。此前已經(jīng)描述了這樣一些轉(zhuǎn)化反應(yīng)。其它的實(shí)例是羧酸酯水解成相應(yīng)的羧酸或醇；酰胺水解成相應(yīng)的羧酸或胺；腈水解成相應(yīng)的酰胺；咪唑或苯基上的氨基可以利用本領(lǐng)域已知的重氮化反應(yīng)和隨后用氳置換重氮基，替換成氳；醇可以轉(zhuǎn)化成酯和醚；伯胺可以轉(zhuǎn)化成仲胺或叔胺；雙鍵可以氫化成相應(yīng)的單鍵；苯基上的缺基團(tuán)可以通過(guò)在合適的鈀催化劑存在下的一氧化碳插入反應(yīng)，轉(zhuǎn)化成酯基。其中m是O和s是O的式(II)中間體被稱作式(II-a)中間體，它可以從式(IX)中間體出發(fā)，在金屬催化劑如Raney鎳和合適還原劑如氫的存在下，于合適的溶劑如甲醇或乙醇中，利用硝基轉(zhuǎn)化成胺的還原反應(yīng)來(lái)制備。(IX)其中s是0的式(X)中間體，可以通過(guò)式(XI)中間體與式(XII)中間體在合適的試劑例如n，-(乙基碳亞氨基)-^:^-二曱基-1,3-丙二胺的一氳氯化物(EDC)和l-羥基-lH-苯并三唑(HOBT)存在下反應(yīng)制備。反應(yīng)可以在堿(例如三乙胺)存在下于合適的溶劑(例如二氯甲烷和四氫吹喃的混合物)中進(jìn)4亍。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage23</formula>(X)式(vi)中間體可以通過(guò)式(xni)中間體與氫化鋁鋰在合適的溶劑如四氫呋喃中反應(yīng)制備。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage23</formula>式(VIII)中間體可以通過(guò)式(XIV)中間體與式(XV)中間體在碘化2-氯-l-甲基吡啶輸和三乙胺存在下于合適的溶劑如乙腈中反應(yīng)制<formula>formulaseeoriginaldocumentpage23</formula>備。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage24</formula>)其中p為1的式(IX)中間體稱作式(IX-a)中間體，它可以通過(guò)式(XVI)中間體與式(XVIII)中間體在二異丙基乙胺中反應(yīng)制備，其中Q是一個(gè)合適的離去基團(tuán)，例如，自素，如氟、氯、溴或碘，或d—6烷氧基，如甲氧基。式(XIV)中間體可以通過(guò)在氫氧化鈉和水存在下，在合適的溶劑如乙醇中，將式(XVIII)中間體轉(zhuǎn)化來(lái)制備。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage24</formula>其中m是0的式(xvni)中間體稱作式(xvm-a)中間體，它可以通過(guò)式(XVI)中間體與其中Q定義如上的式(XIX)中間體，在合適的溶劑如二異丙基乙胺中反應(yīng)制備。其中m、n和s是0的式(V)中間體稱作式(V-a)中間體，它可以通過(guò)用氯化氫溶液轉(zhuǎn)化式(XX)中間體來(lái)制備。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage0</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage0</formula>(XX)(V-a)式(XX)中間體可以通過(guò)式(XXI)中間體與其中w是合適的離去基團(tuán)(例如卣素)的式(III)中間體反應(yīng)制備。該反應(yīng)可以在反應(yīng)惰形溶劑如乙酸內(nèi)進(jìn)行。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage0</formula>(XX)式(I)化合物和一些中間體在其結(jié)構(gòu)中可以有至少一個(gè)立體異構(gòu)源中心。這種立體異構(gòu)源中心可以以R或S構(gòu)型存在。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage0</formula>本發(fā)明中的一些式(I)化合物和一些中間體可能含有一個(gè)不對(duì)稱碳原子。該化合物和中間體的純立體化學(xué)異構(gòu)形式可以利用本領(lǐng)域已知的步驟得到。例如，非對(duì)映異構(gòu)體可以利用物理方法，例如選擇性結(jié)晶，或色諳技術(shù)，例如反流分布、液相色譜等方法分離。對(duì)映體可以從外消旋混合物得到，先將該外消旋混合物用合適的拆解劑，例如手性酸，轉(zhuǎn)化成非對(duì)映的鹽或化合物的混合物；然后利用例如選擇性結(jié)晶、超臨界流體色譜或色譜技術(shù)(如液相色譜及類似方法)等方法，將所述的非對(duì)映異構(gòu)鹽或化合物的混合物物理分離；最后將分離出的非對(duì)映異構(gòu)鹽或化合物轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的對(duì)映體。純的立體化學(xué)異構(gòu)形式也可以由純立體化學(xué)異構(gòu)形式的合適的中間體和起始物得到，只要居間反應(yīng)是立體特異性地發(fā)生。式(I)化合物，其可藥用酸加成鹽和立體異構(gòu)形式具有寶貴的藥理性質(zhì)，即，它們抑制p53和MDM2之間的相互作用。這里使用的術(shù)語(yǔ)"MDM2"是指由于mdm2基因表達(dá)的結(jié)果而得到的一種蛋白。在此術(shù)語(yǔ)的意義內(nèi)，MDM2包括所有一皮mdm2編碼的蛋白，其突變體、另路剪接蛋白和磷酸化蛋白。另外，在本文中使用時(shí)，術(shù)語(yǔ)"MDM2"包括MDM2類似物，例如MDMX,也稱作MDM4,以及其它動(dòng)物的MDM2同源物和類似物，例如人同源HDM2或人類似物HDMX。這里使用的術(shù)語(yǔ)"抑制相互作用"或"相互作用抑制劑"意味著阻止或減小一種或多種分子、肽、蛋白、酶或受體的直接或間接的結(jié)合；或者阻止或減小一種或多種分子、肽、蛋白、酶或受體的正常活性。這里4吏用術(shù)語(yǔ)"p53與MDM2的相互作用的抑制劑"來(lái)描述在C.l部分中描述的試驗(yàn)中增強(qiáng)p53的表達(dá)的試劑。這一增強(qiáng)可以由，但不限于，一種或多種以下作用機(jī)制引起—抑制p53和MDM2之間的相互作用，—與MDM2或p53蛋白直接結(jié)合，一與上游或下游耙物如激酶，或與泛素化或SUMO修飾中涉及的酶活性相互作用，—MDM2和p53螯合或轉(zhuǎn)運(yùn)到不同的細(xì)胞區(qū)室中，—調(diào)節(jié)與MDM2結(jié)合的蛋白，例如(但不限于)，p73、E2F-1、Rb、p21wafl或cipl，—下調(diào)或干護(hù)匸MDM2表達(dá)和/或MDM2活性，例如U旦不限于)，影響其細(xì)胞定位、翻譯后修飾，核輸出或泛素連接酶活性，—直接或間接地穩(wěn)定p53蛋白，例如通過(guò)將其保持在功能結(jié)構(gòu)形式，或防止錯(cuò)折疊，—增強(qiáng)p53表達(dá)或p53家族成員(例如p63和p73)的表達(dá)，一提高p53活性，例如(但不限于)通過(guò)提高其轉(zhuǎn)錄活性和/或—增大p53信號(hào)傳導(dǎo)途徑的基因和蛋白，例如(但不限于)p21wafl、cipl、MIC畫1(GDF-15)、PIG-3和ATF-3的表達(dá)。因此，本發(fā)明公開了作為藥物使用的式(I)化合物。另外，本發(fā)明還涉及一種化合物在制造用于治療通過(guò)p53-MDM2相互作用介導(dǎo)的疾病的藥物方面的應(yīng)用，其中該化合物是一種式(I)化合物。這里使用的術(shù)語(yǔ)"治療"包括動(dòng)物，特別是人的疾病和/癥狀的任何治療，包4舌(1)在可能易患疾病和/或癥狀，^旦還未確診的對(duì)象中防止疾病和/或癥狀的發(fā)生；(2)抑制該疾病和/或癥狀，即，阻止其發(fā)展；(3)減輕該疾病和/或癥狀，即，4吏疾病和/或癥狀消退。術(shù)語(yǔ)"受p53-MDM2相互作用介導(dǎo)的疾病"，是指造成或起因于MDM2蛋白和p53或i秀發(fā)凋亡、細(xì)胞死亡或調(diào)節(jié)細(xì)月包周期的其它細(xì)月包蛋白之間相互作用的抑制的任何不良或有害的病癥。本發(fā)明還提供了一種通過(guò)向需要治療的對(duì)象，例如哺乳動(dòng)物(尤其是人)，施用有效數(shù)量的本發(fā)明化合物，治療經(jīng)由p53-MDM2相互作用介導(dǎo)的疾病的方法。本發(fā)明化合物在腫瘤細(xì)胞中能具有抗增殖作用，即使這些細(xì)胞沒有功能性p53。特別是，本發(fā)明化合物在含有野生型p53和/或超量表達(dá)MDM2的肺瘤中能有抗增殖作用。因此，本發(fā)明還提供了一種通過(guò)向需要治療的對(duì)象，例如哺乳動(dòng)物(特別是人)，施用有效數(shù)量的本發(fā)明化合物以抑制肺瘤生長(zhǎng)的方法?？梢砸种频姆瘟龅膶?shí)例，包括但不限于，肺癌(例如，腺癌，包括非小細(xì)胞肺癌)，胰腺癌(例如胰腺癌，如，外分泌胰腺癌)，結(jié)腸癌(例如結(jié)腸直腸癌，如，結(jié)腸腺癌和結(jié)腸腺瘤)，食道癌，口腔鱗狀癌，舌癌，胃癌，鼻咽癌'淋系造血肺瘤(例如急性淋巴細(xì)胞性白血病，B細(xì)胞淋巴瘤，Burkitt淋巴瘤)，非霍奇金淋巴瘤，霍奇金病，髓性白血病(例如，急性髓細(xì)胞源性白血病(AML)),甲狀腺濾泡性癌，骨髓發(fā)育不良綜合癥(MDS),間充質(zhì)源性肺瘤(例如纖維肉瘤和橫紋肌肉瘤)，黑素瘤，畸胎癌，成神經(jīng)細(xì)胞瘤，腦瘤，膠質(zhì)瘤，良性皮膚胂瘤(例如角化棘皮瘤)，乳腺癌(例如晚期乳腺癌)，腎癌，卵巢癌，宮頸癌，子宮內(nèi)膜癌，膀胱癌，前列腺癌(包括晚期疾病)，睪丸癌，骨肉瘤，頭頸癌和表皮癌。本發(fā)明化合物還可用于治療和預(yù)防炎癥。因此，本發(fā)明化合物還提供了一種通過(guò)向需要治療的對(duì)象，例如哺乳動(dòng)物(特別是人)，施用有效數(shù)量的本發(fā)明化合物用以治療和預(yù)防炎癥的方法。本發(fā)明化合物還可用于治療自免疫疾病和癥狀。"自免疫疾病"是指動(dòng)物的免疫系統(tǒng)對(duì)自身抗原作出敵對(duì)響應(yīng)的任何疾病。術(shù)語(yǔ)"自身抗原"是指在動(dòng)物體內(nèi)通常存在的任何抗原。代表性的自免疫病包括，但不限于橋本曱狀腺炎，格雷夫斯病，多發(fā)性硬化癥，惡性貧血，艾迪生病，胰島素依賴性糖尿病，類內(nèi)濕性關(guān)節(jié)炎，系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE或狼瘡)，皮肌炎，克羅恩病，韋格納肉芽肺病，抗腎小球基膜病，抗磷脂綜合癥，皰滲樣皮炎，變應(yīng)性腦脊髓炎，腎小球腎炎，膜性腎小球腎炎，古德帕斯綜合癥，蘭-伊綜合癥，肌無(wú)力綜合癥，重癥肌無(wú)力，大皰性類天皰癡，多內(nèi)分泌A泉病，Reiter病，僵人綜合癥。因此，本發(fā)明還提供了一種通過(guò)向需要治療的對(duì)象，例如哺乳動(dòng)物(特別是人)，施用有效數(shù)量的本發(fā)明化合物，用以治療自身免疫疾病和癥狀以及治療與構(gòu)象不穩(wěn)定或錯(cuò)折疊的蛋白有關(guān)的疾病的方法。本發(fā)明化合物還可用于治療與構(gòu)象不穩(wěn)定或錯(cuò)折疊的蛋白有關(guān)的疾病。與構(gòu)象不穩(wěn)定或錯(cuò)折疊的蛋白有關(guān)的疾病實(shí)例包括但不限于嚢性纖維化(CFTR)，馬方綜合癥(原纖蛋白)，肌萎縮側(cè)索硬化(超氧化物歧化酶)，壞血病(膠原)，楓糖尿病(a-酮酸脫氫酶絡(luò)合物)，成骨不全(I型前膠原前-oc型)，克-雅病(朊病毒)，阿爾茲海默病(p-淀粉樣蛋白)，家族性淀粉樣變(溶菌酶)，白內(nèi)障(晶體蛋白)，家族性高膽固醇血癥(LDL受體)，otl-抗胰蛋白酶缺損，泰-薩病(P-己糖胺酶)，視網(wǎng)膜色素變性(視紫質(zhì))，和矮怪病(胰島素受體)。因此，本發(fā)明還提供了一種通過(guò)向需要治療的對(duì)象，例如哺乳動(dòng)物(特別是人)，施用有效數(shù)量的本發(fā)明化合物用以治療與構(gòu)象不穩(wěn)定或錯(cuò)折疊蛋白有關(guān)的疾病的方法。由于其有用的藥理性質(zhì)，本發(fā)明化合物可以被配制成各種藥物形式用于給藥。為制備本發(fā)明的藥物組合物，將作為活性成分的酸或堿加成鹽形式的有效數(shù)量的特定化合物，與一種可藥用的載體結(jié)合成緊密混合物，該載體依據(jù)希望施用的制劑的形式可以采用各式各樣的形式。這些藥物組合物最好是適合口服、直腸、透皮或非腸道注射給藥的單元?jiǎng)┬汀＠?，在制備口服劑型的組合物時(shí)，可以使用任何常用的藥物介質(zhì)，例如，在口服液體制劑的情形，如混懸劑、糖漿劑、酏劑和溶液劑，使用水、二醇、油、醇等；或者在散劑、丸劑、膠嚢劑和片劑等情形，使用固體載體，例如淀粉、糖、高岑土、潤(rùn)滑劑、粘合劑、崩解劑等。因?yàn)榻o藥容易，片劑和膠嚢劑是最方便的口服劑型，在這種情形顯然使用固體藥物載體。對(duì)于非腸道組合物，載體經(jīng)常含有無(wú)菌水，至少占大部分，雖然為了幫助溶解也可以包含其它成分。例如，可以配制其中載體包含鹽溶液、葡萄糖溶液或者鹽水與葡萄糖溶液的混合物的可注射的溶液劑。可注射的混懸劑也可以配制，這時(shí)可以〗吏用合適的液體載體、懸浮劑等。在適合透皮給藥的組合物中，載體可任選地含有滲透增強(qiáng)劑和/或潤(rùn)濕劑，任選地與少量的任何性質(zhì)的合適添加劑組合，這些添加劑對(duì)皮爿夫不產(chǎn)生明顯的不利影響。該添加劑可以方^更對(duì)皮膚施藥，和/或有助于配制所要的組合物。這些組合物可以以各種方式施用，例如，作為透皮貼劑、點(diǎn)施劑和軟膏劑。特別方便的是將上述藥物組合物配制成劑量單元以便于給藥和劑量均一。在本文的說(shuō)明書和權(quán)利要求中所說(shuō)的劑量單元形式是指適合作為單位劑量的物理上分離的單元，每個(gè)單元含有經(jīng)計(jì)算能產(chǎn)生所要的療效的預(yù)定數(shù)量活性成分，和與其結(jié)合的所需的藥物載體。這些劑量單元形式的實(shí)例是片劑(包括刻痕和包衣片劑)、膠嚢劑、丸劑、散劑、糯米紙嚢劑、可注射溶液劑或混懸劑、茶匙劑、湯匙劑等，及其分離的多重制劑。本發(fā)明化合物以足以抑制MDM2和p53或誘發(fā)細(xì)胞凋亡、細(xì)胞死亡或調(diào)節(jié)細(xì)胞周期的其它細(xì)胞蛋白之間相互作用的數(shù)量施用。MDM2的致癌潛力不僅由其抑制p53的能力決定，而且還由其調(diào)節(jié)其它腫瘤抑制蛋白(例如，成視網(wǎng)膜細(xì)胞瘤蛋白pRb和密切相關(guān)的E2F1轉(zhuǎn)錄因子)的能力決定。因此，本發(fā)明4t合物以足以調(diào)節(jié)MDM2和E2F轉(zhuǎn)錄因子之間相互作用的數(shù)量施用。本領(lǐng)域技術(shù)人員容易根據(jù)后文展示的試驗(yàn)結(jié)果確定有效數(shù)量。一般認(rèn)為治療有效數(shù)量應(yīng)為每kg體重0.005-100mg,特別是每kg體重0.005-10mg。將所需劑量以單劑量或2、3、4或更多分劑量的形式在全天內(nèi)以適量的間隔給藥可能合適。所述分劑量可以被配制成單元?jiǎng)┬?，例如每單元?jiǎng)┬秃?.5-500mg，特別是10-500mg活性成分。作為本發(fā)明的另一方面，設(shè)想了p53-MDM2抑制劑與另一種抗癌藥物的聯(lián)合，尤其是用來(lái)作為藥物，特別是用于治療癌癥或相關(guān)疾病。為治療以上病癥，本發(fā)明化合物可以有利地與一種或多種其它藥物，尤其是與抗癌藥物，聯(lián)合使用?？拱┧幬锏膶?shí)例包括但不限于柏配位^i合物，例如順鈿、卡柏或奧沙利鈿；紫杉烷化合物，例如紫杉醇或多西他富；拓樸異構(gòu)酶I抑制劑，例如喜樹堿化合物，如伊立替康或托泊替康；拓樸異構(gòu)酶II抑制劑，例如抗肺瘤表鬼臼毒素或鬼臼毒素衍生物，如伊托泊苦或替尼泊苦；抗肺瘤長(zhǎng)春花生物堿，例如長(zhǎng)春堿、長(zhǎng)春新堿或長(zhǎng)春瑞濱；抗腫瘤核苷衍生物，例如5-氟尿嘧咬、亞葉酸、吉西他濱或卡培他濱；烷化劑，例如氮芥或硝基脲，如環(huán)磷酰胺、苯丁酸氮芥、卡莫司汀、塞替派、馬法蘭或洛莫司汀；抗腫瘤蒽環(huán)霉素衍生物，例如柔紅霉素、多柔比星、鹽酸多柔比星脂質(zhì)全注射劑、伊達(dá)比星或米托蒽醌；以IGF-1受體為目標(biāo)的分子，例如鬼臼苦素；安樂(lè)米星衍生物，例如安樂(lè)米星A;糖皮質(zhì)素，例如潑尼+》；抗體，例如曲妥珠單抗(HER2抗體)、利妥昔單抗(CD20抗體)、吉妥珠單抗、西妥昔單抗、培妥珠單抗或貝伐珠單抗；雌激素受體拮抗劑或選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑，例如他莫昔芬、氟維司群、托瑞米芬、屈洛昔芬、Faslodex或雷洛昔芬；芳化酶抑制劑，例如^f尹西美坦、阿那曲唑、來(lái)曲唑和優(yōu)氯唑；分化劑，例如維A類、維生素D，或維A酸及維A酸代謝阻斷劑(RAMBA),例如異維A酸；DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑，例如氮雜胞苷或地西他濱；抗葉酸劑，例如培美曲塞二鈉；抗生素，例如放線菌素D、博來(lái)霉素、絲裂霉素C、放線菌素D、去曱柔紅霉素或道諾霉素；抗代謝藥，例如氯法拉濱、氨喋呤、阿糖胞苷或曱氨喋呤；凋亡i秀發(fā)劑和抗血管形成劑，例如Bcl-2抑制劑，如YC137、BH312、ABT737，棉酚，HA14-1,TW37或癸酸；微管蛋白結(jié)合劑，例如風(fēng)車子抑堿、秋水仙堿或諾考達(dá)唑；激酶抑制劑，例如黃酮吡多、曱磺酸伊馬替尼、厄洛替尼或吉非替尼；法基尼轉(zhuǎn)移酶抑制劑，例如替匹法尼；組蛋白脫乙酰酶(HDAC)抑制劑，例如丁酸鈉、辛二酰苯胺異羥月虧酸(SAHA)、縮肽(FR901228)、NVP-LAQ824、R306465、JNJ-26481585或曲古抑霉素A;泛素-蛋白酶體通道抑制劑，例如PS-341,MLN-41或硼替佐米；Yondelis(曲貝替定)；端粒酶抑制劑，例如端粒抑素；間質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑，例如巴馬司他，馬立馬司他，prmostat或metastat。如上所述，本發(fā)明化合物還在提高肺瘤細(xì)胞對(duì)化療和放療的敏感性方面有治療用途。因此，本發(fā)明化合物可作為"輻射敏化劑，，和/或"化學(xué)敏化劑"，或者以與其它的"輻射敏化劑"和/或"化學(xué)敏化劑"聯(lián)合的形式使用。這里使用的術(shù)語(yǔ)"輻射敏化劑"被定義為一種分子，優(yōu)選低分子量分子，當(dāng)其以治療有效量施用于動(dòng)物時(shí)，能提高細(xì)胞對(duì)于離子化輻射的敏感性和/或促進(jìn)對(duì)于可用離子化輻射治療的疾病的治療。這里使用的術(shù)語(yǔ)"化學(xué)敏化劑"被定義為一種分子，優(yōu)選低分子量分子，當(dāng)其以治療有效量施用于動(dòng)物時(shí)，能提高細(xì)胞對(duì)于化學(xué)療法的敏感性和/或促進(jìn)對(duì)于可用化學(xué)療法治療的疾病的治療。文獻(xiàn)中已提出關(guān)于輻射敏化劑作用模式的幾種機(jī)制缺氧細(xì)胞輻射敏化劑(例如，2-硝基咪唑化合物和苯并三漆二氧化物化合物)模擬氧或者在缺氧下其行為類似生物還原劑；非缺氧細(xì)胞輻射敏化劑(例如，卣化嘧啶化合物)可以是DNA堿基類似物，優(yōu)選結(jié)合到癌細(xì)胞的DNA中，從而促進(jìn)輻射誘發(fā)的DNA分子破裂和/或阻止正常的DNA修復(fù)機(jī)制；和對(duì)于輻射敏化劑在疾病治療中設(shè)想的其它各種可能的作用機(jī)制。4艮多癌癥治療方案目前在用X-射線照射的同時(shí)，使用輻射敏化劑。X-射線激活的輻射敏化劑的實(shí)例包括，但不限于，以下化合物曱硝唑，米索硝唑，去曱米索硝唑，哌莫硝唑，依他硝唑，尼莫唑，絲裂霉素C,RSU1069,SR4233,E09,RB6145,煙酰胺，5-溴脫氧尿普(BUdR),5-碘脫氧尿苷(IUdR),溴脫氧胞普，氟脫氧胞苷(FudR)，羥基脲，順鉑和治療上有效的類似物和衍生物。癌癥的光動(dòng)力學(xué)療法(PDC)使用可見光作為敏化劑的輻射活化物。光動(dòng)力學(xué)輻射敏化劑的實(shí)例包括，但不限于血卟啉衍生物，光敏素，苯并p卜啉衍生物，初卟啉錫，pheoborbide-a,細(xì)菌葉綠素-oc，萘酞菁，酞菁，鋅酞菁和其治療上有效的類似物和書f生物。輻射敏化劑可以與治療有效量的一種或多種其它化合物一起施用，這包括但不限于促進(jìn)輻射敏化劑與靶細(xì)胞結(jié)合的化合物；控制治療藥物、營(yíng)養(yǎng)物和/或氧向靶細(xì)胞流動(dòng)的化合物；在有或無(wú)另外的輻射下作用在胂瘤上的化學(xué)治療藥物；或用于治療癌癥或其它疾病的其它治療有效化合物。化學(xué)敏化劑可以與治療有效量的一種或多種其它化合物一起施用，這包括但不限于促進(jìn)化學(xué)敏化劑與靶細(xì)胞結(jié)合的化合物；控制治療藥物、營(yíng)養(yǎng)物和/或氧向靶細(xì)胞流動(dòng)的化合物；對(duì)肺瘤起作用的化學(xué)治療藥例如維拉帕米，被發(fā)現(xiàn)適合與抗腫瘤藥物聯(lián)合使用，以便在對(duì)所接受的化療藥物有抗性的腫瘤細(xì)胞內(nèi)建立化學(xué)每丈感性，和加強(qiáng)這些化合物在藥物壽丈感性惡性肺瘤中的^t力。由于其有用的藥理性質(zhì)，本發(fā)明聯(lián)合藥物的各組分，即，其它的藥物和p53-MDM抑制劑，可以配制成用于給藥的各種藥物形式。各組分可以分別地配制成各自的藥物組合物，或是配制成含兩種組分的單一藥物組合物中。因此，本發(fā)明還涉及一種藥物組合物，其中含有其它的藥物和p53-MDM抑制劑，以及一種或多種藥物載體。本發(fā)明還涉及使用本發(fā)明的聯(lián)合藥物制造用于抑制肺瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的藥物組合物。本發(fā)明還涉及一種產(chǎn)物，其中含有本發(fā)明的p53-MDM2抑制劑作為第一活性成分，和一種抗癌藥物作為第二活性成分，它們以聯(lián)合制劑的形式同時(shí)、分別或順序地使用，用于癌癥患者的治療。其它藥物和p53-MDM2抑制劑可以同時(shí)(例如在分別的或單一的組合物中)或按任何次序順序地用藥。在后一情形，兩種化合物將在一段時(shí)間內(nèi)以一定的數(shù)量和方式服用，使其足以保證實(shí)現(xiàn)有利的或協(xié)同的作用。應(yīng)該理解，對(duì)于聯(lián)合藥物中的每一組分，用藥的優(yōu)選方法和次序及各自的劑量和方案，將取決于所施用的特定的其它藥物和p53-MDM2抑制劑，它們的用藥途徑，所治療的具體肺瘤和受治療的特定宿主。給藥的最佳方法和次序以及劑量和方案容易由本領(lǐng)域技術(shù)人員利用常規(guī)方法和根據(jù)本文所述的信息來(lái)確定。鉑配位化合物宜以每平方米身體表面積每個(gè)療程1至500mg(mg/m2)的劑量給藥，例如50-400mg/m2,具體地，對(duì)于順祐，劑量為約75mg/m2,對(duì)于卡鉑，為約300mg/m2。紫杉烷化合物宜以每平方米身體表面積每個(gè)療程50至400mg(mg/m2)的劑量給藥，例如75-250mg/m2,具體地，對(duì)于紫杉醇，劑理為約175-250mg/m2,對(duì)于多西他賽，為約75-]50mg/m2。喜樹堿化合物宜以每平方米身體表面積每個(gè)療程0.1-400mg(mg/m)的劑量給藥，例如1-300mg/m2，具體地，對(duì)于依立替康，劑量為約100-350mg/m2,對(duì)于托泊替康為約1-2mg/m2。抗肺瘤的鬼臼毒素衍生物宜以每平方米身體表面積每個(gè)療程30-300mg(mg/m2)的劑量給藥，例如50-250mg/m2,具體地，對(duì)于表鬼臼毒素，劑量為約35-100mg/m2，對(duì)于替尼泊苷為約50-250mg/m2?？鼓[瘤的長(zhǎng)春花生物堿宜以每平方米身體表面積每個(gè)療程2-30mg(mg/m2)的劑量給藥，具體地，對(duì)于長(zhǎng)春堿，劑量為約3-12mg/m2,對(duì)于長(zhǎng)春新堿，劑量為約1-2mg/m2,對(duì)于長(zhǎng)春瑞濱，劑量為約10-30mg/m2。抗肺瘤核苷衍生物宜以每平方米身體表面積每個(gè)療程200-2500mg(mg/m2)的劑量給藥，例如700-1500mg/m2,具體地，對(duì)于5-FU,劑量為約200-500mg/m2,對(duì)于吉西他濱為約800-1200mg/m2,對(duì)于卡培他濱為約1000-2500mg/m2。烷化劑，如氮介或硝基脲，宜以每平方米身體表面積每個(gè)療程100-500mg(mg/m2)的劑量給藥，例如120-200mg/m2,具體地，對(duì)于環(huán)磷酰胺，劑量為約100-500mg/m、對(duì)于苯丁酸氮芥為約0.1-0.2mg/kg,對(duì)于卡莫司汀為約150-200mg/m2，對(duì)于洛莫司汀為約100-150mg/m2?？鼓[瘤蒽環(huán)霉素衍生物宜以每平方米身體表面積每個(gè)療程10-75mg(mg/m2)的劑量給藥，例如15-60mg/m2,具體地，對(duì)于柔紅霉素，劑量為約40-75mg/m2,對(duì)于多柔比星為約25-45mg/m2，對(duì)于^[尹達(dá)比星為約10-15mg/m2?？勾萍に厮幬镆艘悦咳占s1-100mg的劑量給藥，這取決于具體的藥物和所治療的病癥。他莫昔芬宜以5-50mg、優(yōu)選10-20mg的劑量口服給藥，每日2次，繼續(xù)治療足夠的時(shí)間以達(dá)到和維持療效。托瑞米芬宜以約60mg的劑量每日一次口服給藥，繼續(xù)治療足夠時(shí)間以達(dá)到和維持療效。阿那曲唑宜以約1mg的劑量每日一次口服給藥。屈洛昔芬宜以約20-100mg的劑量每日一次口服給藥。雷洛昔芬宜以約60mg的劑量每日一次口服給藥。依西美坦宜以約25mg的劑量每日一次口服給藥。抗體宜以每平方米身體表面積每個(gè)療程約1-5mg(mg/m2)的劑量給藥，或者如本領(lǐng)域已知的，有所不同。曲妥珠單抗宜以每個(gè)療程每平方米身體表面積l-5mg(mg/m2)、尤其是2-4mg/m2的劑量給藥。這些劑量可以每個(gè)療程給藥1次、2次或多次，可以例如每7、14、21或28天重復(fù)一個(gè)療程。式(l)化合物，其可藥用的酸加成鹽和立體異構(gòu)形式，具有寶貴的診斷性能，即，它們能用來(lái)檢測(cè)或鑒別生物樣品中的p53-MDM2相互作用，包括檢測(cè)或測(cè)定標(biāo)記化合物和/或p53和/或MDM2和/或其它分子、肽、蛋白質(zhì)、酶或受體之間的絡(luò)合物的形成。檢測(cè)或筌別方法可以使用用標(biāo)記劑，例如放射性同位素、酶、熒光物質(zhì)、發(fā)光物質(zhì)等，標(biāo)記的化合物。放射性同位素的實(shí)例包括1251、1311、&和14C。酶通常通過(guò)與一種本身會(huì)催化一個(gè)可檢測(cè)反應(yīng)的合適底物綴合而成為可檢測(cè)的。其實(shí)例包括，p-半乳糖苦酶、P-葡糖苷酶、堿性磷酸酶、過(guò)氧化物酶和蘋果酸脫氫酶，優(yōu)選纟束根過(guò)氧化物酶。發(fā)光物質(zhì)包括，例如，鄰笨二曱酰肼、鄰苯二曱酰肼衍生物、焚光素、水母蛋白和焚光酶。生物樣品可^皮定義為體組織或體液。體液的實(shí)例是腦脊髓液、血液、血漿、血清、尿、痰、唾液等。以下實(shí)施例說(shuō)明了本發(fā)明。實(shí)驗(yàn)部分后文中，"DCM，，定義為二氯曱烷，"DIPE，，代表二異丙基醚，"EtOAc，，代表乙酸乙酯，"EtOH，，代表乙醇，"MeOH，，代表甲醇，"THF，，代表四氳吹喃。熔點(diǎn)對(duì)于用(Kofler)標(biāo)示的化合物，熔點(diǎn)是用Kofler加熱臺(tái)測(cè)定的，該熱臺(tái)由一個(gè)具有線性溫度梯度的加熱板、一個(gè)滑動(dòng)指針和一個(gè)攝氏溫標(biāo)組成。LCMS一般步驟HPLC梯度由AllianceHT2795(Waters)系統(tǒng)提供，該系統(tǒng)包括一個(gè)帶有脫氣器、自動(dòng)加樣器和二極管陣列檢測(cè)器(DAD)的四級(jí)泵。柱中的液流被分流到MS檢測(cè)器。該MS檢測(cè)器帶有電噴霧離子化源。LCT上毛細(xì)針壓為3kV，源溫保持100°C(Waters公司的時(shí)間飛行質(zhì)謙儀，Z-Spray接口)。使用氮?dú)庾鳛閲婌F氣。數(shù)據(jù)采集用Waters-MicromassMassLynx-Openlynx凄史據(jù)系統(tǒng)進(jìn)行。方法A:除了一4殳步驟之外反相HPLC在一只Xterra-RPC18柱(5)am,3.9x150mm)上進(jìn)行，流速1.0ml/分，溫度30。C。兩個(gè)流動(dòng)相(流動(dòng)相A:100。/。7mM乙酸銨；流動(dòng)相B:100%乙腈)用來(lái)運(yùn)行以下梯度條件從85。/oA、15%B(保持3分鐘)在5分鐘內(nèi)至20%A、80%B,并且在20%A和80%B保持6分鐘，用初始條件再平衡3分鐘。使用20pl的注射體積。對(duì)于正和負(fù)離子化^t式，錐壓為20V。質(zhì)語(yǔ)條件掃描區(qū)間100-900,0.8秒，掃描間隔0.08秒。方法B:除了一般步驟之外.'反相HPLC在一臺(tái)Xterra-RPC18柱(5nm，3.9x150mm)上進(jìn)行，流速1.0ml/分，溫度30°C。兩個(gè)流動(dòng)相(流動(dòng)相A:100%7mM乙酸銨；流動(dòng)相B:100%乙腈)用來(lái)運(yùn)行以下梯度條件從100%A(保持1分鐘)在4分鐘內(nèi)到50%A、50%B,在50%A和50。/。B保持9分鐘，用初始條件再平4軒3分鐘。使用20ju1的注射體積。對(duì)于正和負(fù)離子化^t式，錐壓為20V。質(zhì)譜條件掃描區(qū)間100-900,0.8秒-,才34笛間隔0.08秒、。A.中間體化合物的制備實(shí)施例Al中間體1的制備<formula>formulaseeoriginaldocumentpage36</formula>將苯并[b]呋喃-3-酮(400mg,0.0029mol)和N-曱氧基-N-曱基(亞三苯膦基)乙酰胺(1.19g,0.0032mol)在二甲苯(10ml)中的混合物于135。C下攪拌35小時(shí)。用水猝滅反應(yīng)，用飽和碳酸氫鈉溶液堿化。用EtOAc萃取該混合物，分離出有機(jī)層，干燥(MgS04),過(guò)濾，蒸發(fā)溶劑。殘留物用色譜法在硅膠(40-63)am)上純化(洗脫劑EtOAc/環(huán)己烷50/50)。收集純級(jí)分，蒸發(fā)溶劑，得到210mg(32。/。)棕色油狀的中間體l。'HNMR(300MHz,CDC13)S7.63(m,2H)，7.46(d,1H，J=7.1),7.25(m,2H),3.84(s,2H)，3.70(s,3H),3.22(s，3H).MS(ES+)w/z220(M+l).實(shí)施例A2a)中間體2的制備<formula>formulaseeoriginaldocumentpage0</formula>將1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-乙胺(0.014mol)、l隱氟誦4-硝苯基(0.015mol)和DIPE(0.048mol)的混合物在21(TC攪拌30分鐘，蒸發(fā)DIPE。將沉淀物溶在DCM/MeOH中。有機(jī)層用10%碳酸鉀洗，干燥(MgS〇4),過(guò)濾和蒸發(fā)溶劑。殘留物(2g)在硅膠(15-40)Lim)上用柱色鐠法純化(洗脫劑DCM/MeOH/NH4OH97/3/0.3)。收集純級(jí)分，蒸發(fā)溶劑，得到0.152g(280/。)中間體2，熔點(diǎn)201。C(Kofler)。b)中間體3的制備將中間體2(0.004mol)和Raney4臬(1g)在MeOH(20ml)中的混合物于室溫下在3巴壓力氬化2小時(shí)，然后經(jīng)硅藻土過(guò)濾。硅藻土用曱醇洗，將濾液蒸發(fā)，得到0.92g(100%)中間體3。實(shí)施例A3a)中間體4的制備咪唑并[l,2畫ap比啶-3-乙腈(0.028mol)和Rh/Al2〇3(5%,4.5g)在EtOH(45ml)和MeOH/NH3(12.5ml)中的混合物于室溫和3巴壓力下氫化72小時(shí)，然后經(jīng)硅藻土過(guò)濾。硅藻土用DCM/EtOH洗，將濾液蒸發(fā)。殘留物溶在DCM中。有機(jī)層用10%碳酸鉀洗，干燥(MgSOj,過(guò)濾和蒸發(fā)溶劑，產(chǎn)量3.4g(73%)中間體4。b)中間體5的制備中間體4(0.006mol)、l-氟-4-硝基苯(0.007mol)和DIPE(0.021mol)的混合物在210。C加熱30分鐘，蒸發(fā)DIPE。將粗制的油狀物在DCM和EtOH(90/10)中稀釋，有機(jī)層用10%碳酸鉀洗，干燥(MgS〇4),過(guò)濾，蒸發(fā)溶劑。殘留物U.3g)用柱色鐠法在硅膠(20-45pm)上純化(洗脫劑DCM/MeOH98/2)。收集純級(jí)分，蒸發(fā)溶劑。殘留物(0.36g)自乙腈中結(jié)晶。濾出沉淀物并干燥，得到0.199g中間體5，熔點(diǎn)171°C(Kofler)。c)中間體6的制備中間體5(0.003mol)和Raney4臬(1g)在MeOH(20ml)中的混合物在室溫和3巴壓力下氳化3小時(shí)，然后經(jīng)硅藻土過(guò)濾。硅藻土用MeOH洗，將濾液蒸發(fā)，得到lg(〉1000/0)中間體6。實(shí)施例A4a)中間體7的制備l-氟-4-硝基苯(0.0083mol)、1H-。引哚-5-胺(0.0076mol)和DIPE(0.0166mol)的混合物在21(TC攪拌18小時(shí)，然后置于DCM中。將有機(jī)層用3N鹽酸洗，然后用NaHC03洗，干燥(MgS04),過(guò)濾，蒸發(fā)溶劑。殘留物置于乙醇中，濾出沉淀，用乙醚洗并干燥，得到1.08g(65%)中間體7，熔點(diǎn)180。C。b)中間體8的制備中間體7(0.0039mol)和Raney鎳(1g)在MeOH(20ml)中的混合物于室溫和3巴壓力下氳化2小時(shí)，然后經(jīng)硅藻土過(guò)濾。硅藻土用DCM/MeOH洗，將濾液蒸發(fā)，得到lg(〉1000/。)中間體8。實(shí)施例A5中間體9的制備<formula>formulaseeoriginaldocumentpage0</formula>向(6-曱氧基苯并呋喃-3-基)乙酸(400mg,0.0019mol)在DCM(10ml)中的溶液逐滴加入l,l，-羧基二咪唑(315mg,0駕9mo1)。將混合物在室溫下攪拌3小時(shí)。加入O,N-二甲基羥胺鹽酸鹽(190mg，0.0019mol),室溫下攪拌混合物4小時(shí)。用水猝滅反應(yīng)，用4N氬氧化鈉堿化?；旌衔镉肈CM萃取，將有機(jī)層分離，干燥(MgS04),過(guò)濾并蒸發(fā)溶劑。殘留物在硅膠(40-63pm)上用柱色譜法純化(洗脫劑EtOAc/環(huán)己烷50/50)。收集純級(jí)分，蒸發(fā)溶劑，得到410mg(850/。)無(wú)色油狀中間體9。畫R(300MHz，CDC13)S7.54(m，2H),6.99(s,1H),6.88(d，1H,J=6.4)，3.83(s，3H)，3.79(s,2H),3.69(s,3H)，3.21(s，3H).實(shí)施例A6a)中間體10的制備將(3-碘-2-噻吩基)氨基甲酸1,1-二甲基乙基酯(0.0105mol)、4-溴-2-丁烯酸乙酯(0.0158mol)和碳酸鉀(0.021mol)在N,N-二甲基曱酰胺(100ml)中的混合物于室溫下攪拌16小時(shí)。加入三苯膦(0.001mol)和乙酸鈀(0.0005mol)。將混合物在70。C攪拌8小時(shí)，然后用水洗。用EtOAc分離出有機(jī)層，干燥(MgSO4)，蒸發(fā)溶劑。殘留物用柱色謙法在珪膠上純化(洗脫劑EtOAc/環(huán)己烷10/90),得到2.3g(70%)中間體10。b)中間體11的制備將中間體10(0.0016mol)在THF(10ml)中的溶液于氬氣和-78。C下攪拌。在氬氣和-78。C下攪拌N,0-二甲基羥胺鹽酸鹽(0.0004mol)在THF(40ml)中的溶液，將丁基4里(1.6M己烷溶液，0.016mol)在-78。C下逐滴加到N,O-二甲基幾胺鹽酸鹽(0.0004mol)中，室溫下攪拌該混合物20分鐘，然后再冷卻至-78。C。逐滴加入中間體IO。將該混合物在-78。C攪拌2小時(shí)，在-78。C下倒入飽和NH4Cl中，用EtOAc萃取。分離出有機(jī)層，干燥(MgS04),過(guò)濾和蒸發(fā)溶劑。殘留物在硅膠上用柱色語(yǔ)法純化(洗脫劑EtOAc/環(huán)己烷10/90至30/70)。收集純級(jí)分，蒸發(fā)溶劑，得到0.4g(77%)中間體11。c)中間體12的制備將中間體ll(0.0012mol)溶于DCM中并吸附在硅膠上，該混合物在6(TC于真空中攪拌24小時(shí)，殘留物在硅膠上用柱色譜法純化(洗脫劑EtOAc/環(huán)己烷80/20)。收集純級(jí)分，蒸發(fā)溶劑，得到中間體12,產(chǎn)率62%。d)中間體13的制備在(TC下向中間體12(0.0008mol)在THF(4ml,無(wú)水)中的溶液慢慢加入氫化鋁鋰(0.0008mol)。將混合物在0。C攪拌1小時(shí)，倒在水上，用5。/oKHS04洗，用EtOAc萃取。分離有機(jī)層，干燥(MgS〇4)，過(guò)濾，蒸發(fā)溶劑，得到中間體13。此產(chǎn)物直接用于下一反應(yīng)步驟。B.最終化合物的制備實(shí)施例Bl化合物1的制備<formula>formulaseeoriginaldocumentpage0</formula>在(TC下向中間體1(162mg,0.00065mol)在THF(4ml)中的懸浮液逐滴加入IN的氫化鋁鋰/THF溶液(0.65ml)。將該混合物在0。C攪拌1小時(shí)，在0。C通過(guò)慢慢加入5%硫酸氫鉀水溶液猝滅反應(yīng)，用EtOAc萃取2次。分離有機(jī)層，干燥(MgS04),過(guò)濾，蒸發(fā)溶劑，得到苯并呋喃-3-基乙醛。向N-4-處啶基-l,4-苯二胺在甲醇(3ml)和乙酸(4滴)中的溶液加入氰基硼氫化鈉(57mg,0.00091mol)和前面的醛在曱醇(1ml)中的溶液。室溫下攪拌混合物18小時(shí)，蒸發(fā)溶劑，殘留的油狀物溶于EtOAc中，用》友酸氬鈉飽和溶液洗。分離有才幾層，干燥(MgSCU),過(guò)濾，蒸發(fā)溶劑。殘留物在硅膠(40-63jum)上用柱色譜法純化(洗脫劑DCM/MeOH95/5)。收集純級(jí)分，蒸發(fā)溶劑，得到41mg(20%)4匕合物1,熔點(diǎn)152°C-154°C。HNMR(300MHz,MeOH-d4)S7.9S(d,2H，J=6.6)，7.59(m,2H),7,43(d，1H，J=7,4)，7.24(m,2H),7.00(dd，2H,J-S.7,J-3.3),6.68(m,4H),3.45(t，2H,J=7.2)，2.98(t，2H,J-7.2).MS(ES+)w/z330(M+l).實(shí)施例B2化合物2的制備<formula>formulaseeoriginaldocumentpage0</formula>將中間體3(0.004mol)和4-溴吡啶鹽酸鹽(0.004mol)在乙酸(5ml)中的混合物于140°C攪拌15分鐘，然后蒸發(fā)。殘留物溶在DCM/MeOH中。有機(jī)層用10%碳酸鉀洗，干燥(MgS04),過(guò)濾，蒸發(fā)溶劑。殘留物(1g)在硅膠(15-40pm)上用柱色鐠法純化(洗脫劑DCM/MeOH/NH4OH,90/10/1)。收集純級(jí)分，將溶劑蒸發(fā)。殘留物(0.74g，63%)自乙腈中重結(jié)晶。濾出沉淀，干燥，得到0.541g化合物2，熔點(diǎn)182°C(Kofler)。'H畫R(而SO-d6)52.96(2H,t，J=7,7Hz),3.30(2H,t，J=7.7Hz),5.6(lH,br,t,J=7.6Hz),6.58(4H，m)，6.95(2H,d，J=7.7Hz),7.03(1H,m)，7.33(1H，m)，7.96(lH'd,J=7.7Hz)，8.03(2H，d,J-7.6Hz)'8.17-8.21(lH,m)，8.22(1H，br，s),11.38(1H,br,s)LCMS(ES+)m/z330(M+l),Rt=7.10,方法A.實(shí)施例B3化合物3的制備4-溴吡咬鹽酸鹽(0.004mol)加到中間體6(0.004mol)的乙酸(10ml)溶液中。將混合物在微波爐中于140。C加熱15分鐘。蒸除乙酸，將粗制的油狀物溶在DCM/EtOH(90/10)中。有才幾層用^友酸鉀洗，干燥(MgS〇4),過(guò)濾，蒸發(fā)溶劑。殘留物(1g)在硅膠(15-40jum)上用柱色i普法純化(洗脫劑DCM/MeOH/NH4OH90/10/0.5至90/10/1)。收集純級(jí)分，蒸發(fā)溶劑，得到0.63g(48%)化合物3。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage0</formula>,方法B.熔點(diǎn)256°C(Kofler).實(shí)施例B4化合物4的制備4-溴吡啶鹽酸鹽(0.002mol)加到中間體8(0.0022mol)的乙酸(2.8ml)溶液中。將混合物在ll(TC加熱30分鐘，倒入冰水中，用10%碳酸鉀堿化，濾出沉淀并干燥之。殘留物(0.739g)在Kromasil(5)Lim)上用柱色i普法純化(洗脫劑DCM/MeOH/NH4OH96/4/0.4至88/12/1.2)。收集純級(jí)分，蒸發(fā)溶劑，得到0.018g化合物4。!HNMR(DMSO-d6)S6.32(1H,brs)，6.68(1H,d，J=5.6Hz),6.9(1H,dd，J=10.2Hz,J=2.5Hz),6.55(2H,d,J=10.2Hz),7.0(2H,d，J=10.2Hz)，7.27(1H,m),7,32(1H,d,J=10.2Hz),7.7(1H,brs)，8.17(1H，dd,J=10.2Hz,J=2.5Hz)，8.37(1H,brs)，10.9(1H，brs).LCMS(ES+)m/z301(M+l),Rt7.73,方法A,實(shí)施例B5化合物5的制備在0°C向中間體9(249mg，0.0010mol)的懸浮液逐滴加入IN的氫化鋁鋰/THF溶液(1.0ml)。將混合物在0。C攪拌1小時(shí)，在0。C下慢慢加入5%硫酸氫鉀水溶液猝滅反應(yīng)，用EtOAc萃取2次。分離出有機(jī)層，干燥(MgS04),過(guò)濾，蒸發(fā)溶劑得到(6-甲氧基苯并呋喃-3-基)乙醛。向N-4-p比啶基-l,4-苯二胺在MeOH(5ml)和乙酸(5滴)中的溶液加入氰基硼氫化鈉(90mg，0.0014mol)和溶在曱醇(1ml)中的先前的醛。室溫下攪拌該混合物18小時(shí)。蒸發(fā)溶劑，殘留的油狀物溶在EtOAc中，用碳酸氫鈉飽和溶液洗。分離有機(jī)層，干燥(MgS04),過(guò)濾和蒸發(fā)溶劑。殘留物用MeOH洗，干燥，得到125mg(34%)化合物5,熔點(diǎn)184-186。C。'H畫R(300MHz,DMSO-d6)58.23(s,1H),8.01(dd,2H,J-6.3,J=1.5)，7,71(s,IH),7.51(d,1H,J-8.5),7.14(d，1H，J-2.1),6.92(d,2H，J-8.6),6.85(dd,1H,J=8.5,J-2.2),6.58(m，4H),5.64(t,1H,J-5.6)，3.77(s，3H)，3.30(t，2H,J=7.0)，2.48(t,2H，風(fēng)O).MS(ES+)m/z360(M+l).實(shí)施例B6化合物6的制備向N-4-。比啶基-l,4-苯二胺(0.0008mol)和氰基硼氪化鈉(0.001mol)在甲醇(4ml)中的溶液依次滴加乙酸(幾滴)和中間體13(0.0004mol),中間體13(0.0004mol)是溶在甲醇(4ml)中。將該混合物在室溫下攪拌20小時(shí)，倒入水中，用NaHC03飽和溶液洗，用EtOAc萃取。分離有機(jī)層，干燥(MgS04),過(guò)濾，蒸發(fā)溶劑。殘留物在硅膠上用柱色譜法純化(洗脫劑DCM/MeOh85/15)。收集純級(jí)分，蒸發(fā)溶劑，得到0.086g(34%)化合物6。表F-1列出了在以上實(shí)施例之一中制備的化合物。表F-1<table>tableseeoriginaldocumentpage45</column></row><table>c.藥理實(shí)施例能力。P53試驗(yàn)是二;;吏用兩個(gè)多克隆抗體的"夾心"式酶免疫試驗(yàn)。、一種對(duì)p53蛋白特異性的多克隆抗體被固定在塑料孔的表面上。要測(cè)定的樣品中存在的任何p53將會(huì)與該捕捉抗體結(jié)合。生物素化的檢測(cè)元件多克隆抗體也識(shí)別p53蛋白，并將與已被捕捉抗體阻留的任何p53結(jié)合。檢測(cè)元件抗體本身又被辣根過(guò)氧化物酶綴合的鏈霉親合素結(jié)合。辣根過(guò)氧化物酶催化生色底物鄰苯二胺的轉(zhuǎn)化，其強(qiáng)度與結(jié)合到板上的p53蛋白的數(shù)量成正比。該顏色反應(yīng)的產(chǎn)物用光度計(jì)定量測(cè)定。定量化是通過(guò)使用已知濃度的純化重組HIS標(biāo)記的p53蛋白構(gòu)筑標(biāo)準(zhǔn)曲線實(shí)現(xiàn)的(見實(shí)施C.l.)。式(I)化合物的細(xì)胞活性利用對(duì)于細(xì)胞毒性或存活的比色測(cè)定法對(duì)U87MG胂瘤細(xì)胞進(jìn)行測(cè)定。U87MG細(xì)胞是帶有野生型p53的人成力交質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞。在此細(xì)胞系中MDM2緊緊控制著p53表達(dá)。C丄p53ELISAA2780細(xì)胞(ATCC)在補(bǔ)充了10%胎牛血清(FCS)、2mML-谷氨酰胺和慶大霉素的RPMI1640中，在含5%C02的增濕培養(yǎng)箱中于37。C培養(yǎng)。將A2780細(xì)胞按每孔20000個(gè)細(xì)胞接種在96孑L板上，在加濕的培養(yǎng)箱中于37。C培養(yǎng)24小時(shí)，并用化合物處理16小時(shí)。培養(yǎng)后，將細(xì)胞用磷酸緩沖鹽水洗一次，每孔加入30|ul低鹽RIPA緩沖液(20mMTns,pH7.0,0.5mMEDTA,1%NonidetP40,0.5%DOC,0.05%SDS,1mMPMSF,1jug/ml抑蛋白肽酶和0.5ju/ml亮抑酶肽)。將板放在冰上30分鐘以完成裂解。使用下面敘述的夾心型ELISA檢測(cè)裂解物中的p53蛋白。將高結(jié)合性聚苯乙烯EIA/RIA96孔板(Costar卯18)用濃度為1i:ig/ml的捕捉抗體pAb1801(Abcamab28-100)在涂布緩沖液(0.1MNaHC03pH8.2)中的溶液涂l支，每孑L50(lU。令抗體在4°C下粘附過(guò)^復(fù)。涂布過(guò)的板用磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)/0.05%Tween20洗一次，加入300ial封閉緩沖液(PBS,1%牛血清蛋白(BSA)),室溫下培養(yǎng)2小時(shí)。在封閉緩沖液中配制濃度為3-200ng/ml的純化的重組HIS標(biāo)記的p53蛋白的稀釋液作為標(biāo)準(zhǔn)使用。將板用PBS/0.05%Tween20洗2次，按80)Lil/孔加入封閉緩沖液或標(biāo)準(zhǔn)樣。對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)樣，加入20jid裂解緩沖液。其它孔中^要20裂解液/孔加樣。在4pl培養(yǎng)過(guò)夜后，將板用PBS/0.05%Tween20洗2次。向每孔中加入濃度為1(ag/ml的第二多克隆抗體p53(FL-393)(Tebubio,SC-6243)在封閉緩沖液中的溶液100pl，令其在室溫粘附2小時(shí)。將板用PBS/0.05%Tween20洗3次。加入濃度為0.04jug/ml的在PBS/1%BSA中的檢測(cè)抗體抗兔HRP(SC-2004，Tebubio),室溫下培養(yǎng)1小時(shí)。將板用PBS/0.05%Tween20洗3次，加入100|ul底物緩沖液(底物緩沖液在使用前臨時(shí)配制向25mlOPD緩沖液(35mM檸檬酸，66mMNa2P04,pH5.6)中力口入1片10mg鄰苯二胺(OPD,Sigma)和125jul3%H2〇2)。5至10分鐘后，每孔加入50]ul終止緩沖液(1MH2S〇4)終止顏色反應(yīng)。用一臺(tái)Biorad酶標(biāo)卩義測(cè)定雙波長(zhǎng)490/655nm下的吸光度，然后分析結(jié)果。每次實(shí)驗(yàn)均平行地進(jìn)行空白培養(yǎng)(不含細(xì)胞或藥物)和對(duì)照培養(yǎng)(不含藥物)。從所有的對(duì)照值和樣品值中減去空白值。對(duì)于各樣品，p53的值(吸光度單位)均用對(duì)照樣中存在的p53值的百分?jǐn)?shù)表示。保存百分?jǐn)?shù)高于140%被定義為顯著的。本文中試驗(yàn)化合物的效力用至少達(dá)到對(duì)照樣中存在的p53值的140。/。時(shí)的最低劑量表示(LAD)(見表F-2)。C.2.增殖試馬全所有試驗(yàn)化合物均溶在DMSO中并在培養(yǎng)基中進(jìn)一步稀釋。在細(xì)胞增殖試驗(yàn)中最終DMSO濃度不能超過(guò)0.1。/o(v/v)。對(duì)照樣中含U87MG細(xì)胞和DMSO,^f旦無(wú)化合物?？瞻讟又泻珼MSO,但無(wú)細(xì)胞。將U87MG細(xì)胞按3000細(xì)胞/孔/100pl接種在96孔板中。24小時(shí)后，改換培養(yǎng)基，加入化合物和/或溶劑至最終體積200^。培養(yǎng)4天后，將培養(yǎng)基換成200jLil新鮮培養(yǎng)基，用MTT試驗(yàn)判斷細(xì)胞的生長(zhǎng)。為此，向每孔中加入25]ulMTT溶液(0.5%MTT(研究級(jí)，Serva)磷酸鹽緩沖鹽水溶液)，將細(xì)胞在37。C再培養(yǎng)2小時(shí)。然后小心地吸走培養(yǎng)基，將藍(lán)色的MTT-曱臘產(chǎn)物通過(guò)向各孔中加入25|ul0.1M甘氨酸和100julDMSO使其溶解。將板在微板搖蕩器上搖蕩IO分鐘，然后用Biorad酶標(biāo)儀讀取540nm的吸光度。在一次試驗(yàn)內(nèi)，每個(gè)試驗(yàn)條件的結(jié)果均為3個(gè)重復(fù)孔的平均值。為進(jìn)行初步篩選，將化合物在單一的固定濃度1CT5M下試驗(yàn)。對(duì)于活性化合物，重復(fù)進(jìn)行試z驗(yàn)以建立完整的濃度-響應(yīng)曲線。每次試驗(yàn)都平行地進(jìn)行對(duì)照樣(不含藥物)和空白培養(yǎng)(不含細(xì)胞或藥物)。從所有的對(duì)照值和樣品值中減去空白值。對(duì)于每個(gè)樣品，細(xì)胞生長(zhǎng)的平均值(吸光度單位)都用對(duì)照樣細(xì)胞生長(zhǎng)的平均值的百分?jǐn)?shù)表示。適當(dāng)時(shí)，利用對(duì)于分級(jí)數(shù)據(jù)的概率分析計(jì)算出IC5o值(為將細(xì)胞生長(zhǎng)降至對(duì)照樣的50%所需的藥物濃度)(Fmney，D.J.，ProbitAnalyses,2ndEd.chapter10，GradedResponses,CambridgeUniversityPress,Cambridge1962)。本文中將試-瞼化合物的作用表示成PI5()(IC5o值的負(fù)對(duì)數(shù)值)(見表F-2)。在一些實(shí)驗(yàn)中，將增殖試驗(yàn)作了修改并用在384孔培養(yǎng)板中(見F-2)。表F-2:表F-2列出了按照實(shí)施例C.l和C.2所試-驗(yàn)的化合物的結(jié)果。<table>tableseeoriginaldocumentpage48</column></row><table>D.組合物實(shí)施例包膜片劑藥片核心的制備將100g式(I)化合物，570g乳糖和200g淀粉的混合物充分混合，然后用5g十二烷基硫酸鈉和10g聚乙烯吡咯烷酮在約200ml水中的溶液濕化。將濕的粉末衍生物過(guò)篩，干燥，再過(guò)篩。然后加入100g樣史晶纖維素和15g氳化植物油。將其充分混合，壓制成片，得到10000片，每片含10mg式(I)化合物。包膜向10g曱基纖維素在75ml變性酒精中的溶液加入5g乙基纖維素在150ml二氯甲烷中的溶液。然后加入75ml二氯甲烷和2.5ml1,2,3-丙三醇。將10g聚乙二醇熔化并溶在75ml二氯甲烷中。將后一溶液加到前一溶液中，然后加入2.5g十八烷酸4美，5g聚乙烯吡咯烷酮和30ml濃的色素懸浮液，將其混合均勻。用這樣得到的混合物在涂布裝置中涂覆藥片核心。權(quán)利要求1.一種式(1)化合物其N-氧化物形式，加成鹽或立體化學(xué)異構(gòu)形式，其中m是0，1或2，當(dāng)m為0時(shí)則代表一個(gè)直接鍵；n是0、1、2、3或4，當(dāng)n為0時(shí)則代表一個(gè)直接鍵；p是0或1，當(dāng)p為0時(shí)則代表一個(gè)直接鍵；s是0或1，當(dāng)s為0時(shí)則代表一個(gè)直接鍵；t是0或1，當(dāng)t為0時(shí)則代表一個(gè)直接鍵；R1和R2各自獨(dú)立地是氫，鹵素，C1-C6烷基，C1-6烷氧基，芳基C1-6烷氧基，雜芳基C1-6烷氧基，苯硫基，羥基C1-6烷基羰基，被選自氨基、芳基和雜芳基的一個(gè)取代基取代的C1-6烷基；或被選自氨基、芳基和雜芳基的一個(gè)取代基取代的C3-7環(huán)烷基；A是一個(gè)基團(tuán)，選自其中R4和R5各自獨(dú)立地選自氫，鹵素，C1-6烷基，多鹵代C1-6烷基，氰基，氰基C1-6烷基，羥基C1-6烷基，羥基，氨基，C1-6烷氧基，C1-6烷基羰基，甲磺酰氨基，芳基或雜芳基；Z是選自以下的一個(gè)基團(tuán)其中R6或R7彼此獨(dú)立地選自氫，鹵素，羥基，氨基，C1-6烷基，硝基，多鹵代C1-6烷基，氰基，氰基C1-6烷基，四唑并C1-6烷基，芳基，雜芳基，芳基C1-6烷基，雜芳基C1-6烷基，芳基(羥基)C1-6烷基，雜芳基(羥基)C1-6烷基，芳基羰基，雜芳基羰基，C1-6烷基羰基，芳基C1-6烷基羰基，雜芳基C1-6烷基羰基，C1-6烷氧基，C3-7環(huán)烷基羰基，C3-7環(huán)烷基(羥基)C1-6烷基，芳基C1-6烷氧基C1-6烷基，C1-6烷氧基C1-6烷氧基C1-6烷基，C1-6烷基羰氧基C1-6烷基，C1-6烷氧羰基C1-6烷氧基C1-6烷基，羥基C1-6烷氧基C1-6烷基，C1-6烷氧羰基C2-6烯基C1-6烷氧基C1-6烷基，C1-6烷氧羰基，C1-6烷基羰氧基，氨基羰基，羥基C1-6烷基，氨基C1-6烷基，羥基羰基，羥基羰基C1-6烷基和-(CH2)v-(C(＝0)r)-(CHR10)u-NR8R9；其中v是0，1，2，3，4，5或6，當(dāng)v是0時(shí)代表一個(gè)直接鍵；r是0或1，當(dāng)r是0時(shí)代表一個(gè)直接鍵；u是0，1，2，3，4，5或6，當(dāng)u是0時(shí)代表一個(gè)直接鍵；R10是氫或C1-6烷基；R8和R9各自獨(dú)立地選自氫，C1-12烷基，C1-6烷基羰基，C1-6烷基磺?；蓟鵆1-6烷基羰基，C3-7環(huán)烷基，C3-7環(huán)烷基羰基，-(CH2)k-NR11R12，被選自羥基、羥基羰基、氰基，C1-6烷氧羰基，C1-6烷氧基、芳基或雜芳基的一個(gè)取代基取代的C1-12烷基；或被選自羥基，C1-6烷氧基，芳基，氨基，芳基C1-6烷基，雜芳基或雜芳基C1-6烷基的一個(gè)取代基取代的C3-7環(huán)烷基；或者R8和R9與它們所連接的氮一起可以任選地形成一個(gè)嗎啉基、哌啶基、吡咯烷基、哌嗪基或被選自C1-6烷基、芳基C1-6烷基、芳基C1-6烷氧羰基、雜芳基C1-6烷基、C3-7環(huán)烷基和C3-7環(huán)烷基C1-6烷基的一個(gè)取代基取代的哌嗪基；其中k是0，1，2，3，4，5或6，當(dāng)k是0時(shí)代表一個(gè)直接鍵；R11和R12各自獨(dú)立地選自氫，C1-6烷基，芳基C1-6烷氧羰基，C3-7環(huán)烷基，被選自羥基，C1-6烷氧基，芳基和雜芳基的一個(gè)取代基取代的C1-12烷基；以及被選自羥基，C1-6烷氧基，芳基，芳基C1-6烷基，雜芳基和雜芳基C1-6烷基的一個(gè)取代基取代的C3-7環(huán)烷基；或者R11和R12與它們所連接的氮一起，可以任選地形成一個(gè)嗎啉基，哌嗪基或被C1-6烷氧羰基取代的哌嗪基；芳基是苯基或萘基；各苯基或萘基可以任選地被各自獨(dú)立地選自鹵素、羥基、羥基C1-6烷基、C1-6烷基、氨基、多鹵代C1-6烷基和C1-6烷氧基的1、2或3個(gè)取代基取代；和各苯基或萘基可以任選地被一個(gè)選自亞甲二氧基和亞乙二氧基的二價(jià)基團(tuán)取代；雜芳基是吡啶基、吲哚基、喹啉基、咪唑基、呋喃基、噻吩基、噁二唑基、四唑基、苯并呋喃基或四氫呋喃基；各吡啶基、吲哚基、喹啉基、咪唑基、呋喃基、噻吩基、噁二唑基、四唑基、苯并呋喃基或四氫呋喃基可以任選地被獨(dú)立選自鹵素、羥基、C1-6烷基、氨基、多鹵代C1-6烷基、芳基、芳基C1-6烷基或C1-6烷氧基的1、2或3個(gè)取代基取代；和各吡啶基、吲哚基、喹啉基、咪唑基、呋喃基、噻吩基、苯并呋喃基或四氫呋喃基可以任選地被選自亞甲二氧基或亞乙二氧基的一個(gè)二價(jià)基團(tuán)取代。2.權(quán)利要求1的化合物，其中m是0，n是0或2，p是l，s是O,t是O,Ri和R2各自獨(dú)立地是氫；A是選自(a-15)、(a-21)、(a-30)、(a-39)或(a-40)的一個(gè)基團(tuán)；W和RS各自獨(dú)立地選自氫或Cw烷氧基，Z是基團(tuán)(b-2),或者R6和117各自獨(dú)立地選自氬。3.權(quán)利要求1或2的化合物，其中m是O,n是2，p是l,s是O,t是O,R1和112各自獨(dú)立地是氫，A是選自(a-21)、U-39)或(a-40)的一個(gè)基團(tuán)；r4和尺5各自獨(dú)立地選自氳或Cw烷氧基；Z是基團(tuán)(b-2);或者R6和117各自獨(dú)立地選自氬。4.權(quán)利要求l、2或3的化合物，其中該化合物是化合物No.2,化合物No.3或化合物No.5。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>5.作為藥物使用的權(quán)利要求1、2、3或4的化合物。6.—種藥物組合物，其中含有可藥用的載體和作為活性成分的治療有效量的權(quán)利要求1至4中的化合物。7.—種制備權(quán)利要求6中的藥物組合物的方法，其中該藥物載體與權(quán)利要求1至4中的一種化合物緊密混合。8.權(quán)利要求1、2、3或4的一種化合物在制造用于治療被p53-MDM2相互作用介導(dǎo)的疾病的藥物方面的應(yīng)用。9.一種抗癌藥和權(quán)利要求1、2、3或4的一種化合物的聯(lián)合藥物。10.—種制備權(quán)利要求1的化合物的方法，其特征在于a)式(II)中間體與其中W是適當(dāng)?shù)碾x去基團(tuán)如卣素的式(III)中間體反應(yīng)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>叨則R'A~(CH2);r(NH)p—(CH2)m~^——~(CH2)S—HN——(CH2)t——Zb)在合適的溶劑中于氳化鋁鋰存在下，將式(IV)中間體轉(zhuǎn)化成式(I)化合物，其中p為l,本文中稱作式(I-a)化合物，R1R2A~(CH2)n陽(yáng)廣G-NH-(CH2)4~(CH2)「HN—(CH^—Z<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>-,『3—(CH2)m"jf~(CH2)S—HN—(CH2)t—Z(I-a)c)合適的式(VI)甲醛，在合適的溶劑中和合適的試劑存在下與式(V)中間體反應(yīng)，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>(VI)(V)R'R2HA~(CH2)h"NH"^——~~(CH2)r"HN——(CH2)t——Z(I-a)d)式(n)中間體與合適的式(vn)曱醛反應(yīng)，形成式(i)化合物，其中t為i,本文中稱作式(i-b)化合物，或R1R2A~(CH2)『(NH)p-(CH2)m"7J——;j~(CH2)S—HN—CH2——Z(I-b)e)式(VIII)中間體與氫化鋁鋰在合適的溶劑中反應(yīng)，形成其中s是1的式(I)化合物，本文中稱作式(1-c)化合物。o(CH2)S_H2N+H&Z(vn)R》R、恥<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula>全文摘要本發(fā)明提供式(I)化合物，它們作為p53-MDM2相互作用抑制劑的應(yīng)用，以及含有該式(I)化合物的藥物組合物，其中n、m、p、s、t、R¹、R²、A和Z具有所定義的含義。文檔編號(hào)C07D471/04GK101405281SQ200780009903公開日2009年4月8日申請(qǐng)日期2007年3月19日優(yōu)先權(quán)日2006年3月22日發(fā)明者A·P·龐塞萊特,B·肖恩特杰斯,C·邁耶,D·Y·R·拉多,J·F·A·萊克拉姆普,L·范希夫特申請(qǐng)人:詹森藥業(yè)有限公司