專利名稱：：白蛋白溶液的制作方法白蛋白溶液本發(fā)明涉及一種從含有能占據(jù)白蛋白結(jié)合位點(diǎn)的穩(wěn)定劑分子的原料白蛋白溶液制備白蛋白水溶液的方法，所述方法中，為了提高對(duì)其它分子的白蛋白結(jié)合能力(ABiC)，例如那些具有生理作用的分子結(jié)合能力，至少要除去原料白蛋白溶液中白蛋白上的一部分穩(wěn)定劑分子使它們與原料白蛋白溶液分離。
背景技術(shù)：
：在許多可導(dǎo)致器官衰竭的嚴(yán)重疾病中，血管容量和血管含血量之間不匹配起著主要作用。如果容量太大或者含血量太少，可引起血壓降低器官不能被血液灌滿。如果容量太小或含血量太多，則血壓升高引起心臟機(jī)能不全和/或肺水腫。血管的含血量急劇和緩慢減少均可引起血壓下降灌注減到最少。出血時(shí)會(huì)發(fā)生含血量急劇減少。緩慢的含血量減少例如可以是由于作為括容蛋白(onkotisch)的白蛋白濃度降低使得血液從血管床滲透入胞間隙而致血液?jiǎn)适?例如在肝病中白蛋白合成受影響時(shí))。然而，血管容量的急劇和緩慢增長(zhǎng)也可引起血壓下降。急劇的血管擴(kuò)張是由于例如在過敏性休克中產(chǎn)生的血管擴(kuò)張纖維激素(vasodilatorytextilehormone)例如組胺、緩激肽、激肽釋放酶、白細(xì)胞三烯或前列腺素的急性級(jí)聯(lián)反應(yīng)所引起。門動(dòng)脈壓緩慢升高導(dǎo)致的血管緩慢擴(kuò)張與內(nèi)臟網(wǎng)絡(luò)微動(dòng)脈擴(kuò)張的增加相關(guān)，弓I起肝腎綜合征和由于容量擴(kuò)大而形成腹水。對(duì)每種病例均存在的容量和含血量不匹配可用兩種治療策略來改變。第一，可嘗試通過給予擬晶體或膠體類血漿替代液來增加血管內(nèi)含血量。如果這樣平均動(dòng)脈壓仍然不足以使足夠的血液流入所有器官，那么在第二個(gè)步驟中采用"升壓劑"(血管收縮劑例如兒茶酚胺)使血管收縮。這種血管收縮方法具體可用于治療肝病和敗血癥的血管張力喪失，以試圖進(jìn)一步減少血管系統(tǒng)的容量。在因較高水平血管擴(kuò)張劑所引起急性或慢性血管擴(kuò)張疾病中，單通過長(zhǎng)時(shí)間輸注來增加血量而不用血管收縮劑要維持足夠的血壓是不可能的。此類重癥監(jiān)護(hù)醫(yī)學(xué)疾病的例子是因血壓下降導(dǎo)致的肝臟衰竭和肝腎衰竭(由于血流不足引起肝衰竭繼發(fā)腎衰竭)或敗血癥。這兩種疾病均與高死亡率和高醫(yī)療費(fèi)用相關(guān)聯(lián)?，F(xiàn)有的解決方案推薦聯(lián)合給予血管收縮劑和血漿替代液。然而，現(xiàn)有的血漿替代液在血管中的存留時(shí)間有限。擬晶體(含鹽)輸注液會(huì)很快擴(kuò)散入胞間隙。含聚合物的血槳替代液例如淀粉液(羥乙基淀粉、HAES)或明膠液(Gelaflindin)在血管中較長(zhǎng)時(shí)間有效，因?yàn)樗鼈兊乃Y(jié)合性能夠保持使得血漿液留在血管內(nèi)而較長(zhǎng)時(shí)間增加血管內(nèi)含血量。然而，人造聚合物的問題是不相容。特別合適的血漿替代液是天然的血清白蛋白膠體溶液。血清白蛋白作為血漿擴(kuò)充劑在醫(yī)療領(lǐng)域已使用了幾十年，認(rèn)為它具有最佳的生物耐受性因此是最優(yōu)選的血漿擴(kuò)充介質(zhì)，盡管最昂貴。用于輸注的人血清白蛋白溶液可商品化獲得。然而，這些溶液必須添加穩(wěn)定劑才能進(jìn)行巴氏消毒和保存，和避免白蛋白的自發(fā)性聚合。通常單用或聯(lián)用N-乙酰色氨酸和辛酸或它們的鈉鹽。這些穩(wěn)定劑對(duì)白蛋白分子具有很高的結(jié)合親和力可占據(jù)和阻斷白蛋白生物學(xué)功能的重要結(jié)合位點(diǎn)。Meta-分析顯示當(dāng)與其它血漿血漿替代液比較時(shí)，在重癥監(jiān)護(hù)中采用血清白蛋白溶液與死亡率增加相關(guān)聯(lián)(Cochranemeta-analysisinBMJ1998;317,第235-240頁)。那么，除少數(shù)特殊適應(yīng)癥外，現(xiàn)有的白蛋白輸注液看來沒有臨床價(jià)值。目前理論上不知道現(xiàn)有的血清白蛋白液制備方法對(duì)作為血漿擴(kuò)充劑的血清白蛋白的理想性能如何起負(fù)面影響。該篇文獻(xiàn)前后矛盾地提到穩(wěn)定劑N-乙酰色氨酸和辛酸在某些情況下具有破壞性副作用。因?yàn)檫@些穩(wěn)定劑高親和力地占據(jù)封閉了對(duì)白蛋白重要功能所需的結(jié)合位點(diǎn)，故希望是否可以在給予患者白蛋白溶液之前除去這些穩(wěn)定劑。然而，無穩(wěn)定劑的白蛋白溶液具有上述問題即白蛋白自發(fā)聚合使得此種溶液很難保存。人血清白蛋白可結(jié)合的配體具有重要生物學(xué)功能在許多出版物中有所論述。綜述可見J.Petersjr.,AllaboutAlbumin(有關(guān)白蛋白的一切)，AcademicPress,SanDiego，NewYork,Boston,London,Sydney,TokyoToronto,1996禾口在PacificiGM,VianiA，MethodsofDeterminingPlasmaandTextileBindingofDrugs(領(lǐng)iJ定血槳纖維蛋白所結(jié)合藥物的方法)，ClinPharmacokinet,1992,23(6):449-468。由于測(cè)定白蛋白結(jié)合能力的方法非常多，結(jié)果難以比較對(duì)其醫(yī)療相關(guān)用途的解釋實(shí)際上是不可能的。以建立的一種顯示白蛋白結(jié)合行為的新方法是檢測(cè)結(jié)合丹磺酰肌氨酸(dansylsarcosin)的白蛋白結(jié)合能力(ABiC)(KlammtS、BrinkmannB、MitznerS、MunzertE、LoockJ、StangeJ、EmmrichJ、LiebeS，AlbuminBindingCapacity(ABiC)isreducedincommerciallyavailableHumanSerumAlbuminpreparationswithstabilizers(商品化含禾急定劑的人血清白蛋白制品的白蛋白結(jié)合能力(ABiC)減弱)，ZeitschriftfUrGastroenterologie,增刊2001,39:24-27.)。這些方法是根據(jù)在預(yù)定的實(shí)驗(yàn)條件下檢測(cè)測(cè)試的標(biāo)記物丹磺酰肌氨酸的超濾部分和將這種結(jié)合能力與參比白蛋白作比較。在對(duì)健康獻(xiàn)血者和嚴(yán)重肝病患者的比較中，觀察到血清白蛋白的這種結(jié)合能力顯著降低，其解釋是由于所研究的患者肝臟解毒功能失調(diào)引起內(nèi)源配體大量占據(jù)血清白蛋白的結(jié)合位點(diǎn)。已知商品化人血清白蛋白制品對(duì)特定模式標(biāo)記物(例如布洛芬)的結(jié)合能力也受到顯著限制。特己知在無配體的白蛋白中，如果將N-乙酰色氨酸以高摩爾比1:1的量分布加入，白蛋白結(jié)合丹磺酰肌氨酸的能力可從100%降低到約60%(根據(jù)Klammt等，2001，采用AbiC檢測(cè))。技術(shù)和醫(yī)療文獻(xiàn)中包括了許多關(guān)于純化供體血漿或用生物技術(shù)制備(重組)白蛋白的出版物屬于所述。然而，這些出版物主要講述的是關(guān)于最純的白蛋白片段的可能制備物和從血漿中或在重組產(chǎn)物的情況下，從載體系統(tǒng)中去除其它蛋白質(zhì)成分或可能的毒性成分。直到1976年，除去商品化血清白蛋白溶液中低分子量配體例如穩(wěn)定劑的方法都采用基于用異辛垸和醋酸混合物抽提的Goodman方法(GoodmanDS，Science,125，1996，1957)，或采用基于在強(qiáng)酸介質(zhì)中自發(fā)形成脂質(zhì)層的William方法(WilliamsEJ和FosterJF，JAmChemSoc，81,965，1959)。這兩種方法非常費(fèi)時(shí)并且由于其潛在的毒性而不適合制備治療用制品。用這些方法制備的白蛋白溶液在保存時(shí)穩(wěn)定性極差。1967年以來，已在白蛋白溶液中加入游離脂肪酸例如辛酸作為穩(wěn)定劑，可通過提高溶液的酸性再用活性炭處理將其從白蛋白溶液中去除。該方法最初由Chen等發(fā)表在JournalofBiologicalChemistry,第212巻，第2號(hào)，第173-181頁，1967年1月25日。該方法中，用酸(HCl)將蒸餾水配的白蛋白溶液酸化至pH3或更低導(dǎo)致氫鍵斷裂和相應(yīng)的脂肪酸質(zhì)子化而使白蛋白分子解折疊。這樣使白蛋白與脂肪酸之間的鍵松馳，其程度能讓脂肪酸以小分子擴(kuò)散到活性炭中。然后，將白蛋白溶液與活性炭混合在冰浴中用磁性攪拌子攪拌1小時(shí)。接著，20200g離心此混合物分離除去活性炭。用這個(gè)方法可去除各種脂肪酸。去除脂肪酸的這種標(biāo)準(zhǔn)方法(至今)是依據(jù)對(duì)各種條件例如pH和活性炭與白蛋白的質(zhì)量比的詳細(xì)研究而建立的，至今為止，上述標(biāo)準(zhǔn)方法最為成功。因此，去除白蛋白分子中的穩(wěn)定劑只能通過用強(qiáng)酸介質(zhì)破壞白蛋白分子結(jié)構(gòu)和同時(shí)降低結(jié)合親和力來實(shí)現(xiàn)。在pH3以上不能成功地實(shí)質(zhì)性降低人血清白蛋白中的游離脂肪酸。該方法的一個(gè)重要缺點(diǎn)是采用相當(dāng)酸性的水性介質(zhì)會(huì)改變白蛋白分子的結(jié)構(gòu)，不僅會(huì)切斷氨基酸之間彼此分開的成環(huán)鍵，還會(huì)打開疏水結(jié)合袋導(dǎo)致白蛋白增量吸附到所用的活性炭上。Chen等人發(fā)現(xiàn)在他們的方法中20。/。的白蛋白損失在炭顆粒中。由于白蛋白分子結(jié)構(gòu)的改變會(huì)觸發(fā)人血清白蛋白在保存時(shí)的自發(fā)性聚合，因此該方法不適合作為商品化治療性白蛋白溶液的主要制備方法。因此，本發(fā)明的目的是提供一種對(duì)白蛋白溫和的簡(jiǎn)單、快速和費(fèi)用低廉的方法來制備穩(wěn)定的商品化原料白蛋白溶液，例如在臨給予患者之前可在病床旁去除大部分穩(wěn)定劑而提高白蛋白結(jié)合能力卻不破壞白蛋白結(jié)構(gòu)的方法。具體而言，所述方法能提高白蛋白SudlowII結(jié)合位點(diǎn)的結(jié)合能力，在所有白蛋白應(yīng)用于靜脈血漿替代療法中，此結(jié)合位點(diǎn)對(duì)內(nèi)源性白蛋白搜尋固定毒素的作用至關(guān)重要，對(duì)體外脫毒方法，例如血漿交換白蛋白或體外白蛋白透析也至關(guān)重要。為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，本發(fā)明提供一種從含有能占據(jù)白蛋白結(jié)合位點(diǎn)的穩(wěn)定劑分子的原料白蛋白溶液來制備白蛋白水溶液的方法，在提高白蛋白對(duì)其它分子的白蛋白結(jié)合能力(ABiC)的方法中，需要除去原料白蛋白溶液中白蛋白上的一部分穩(wěn)定劑分子使其與原料白蛋白溶液分離，此方法中(a)使原料白蛋白溶液與固體吸附材料接觸，該吸附材料對(duì)至少一部分優(yōu)選所有穩(wěn)定劑分子的親和力高于白蛋白對(duì)相應(yīng)穩(wěn)定劑分子的親和力；所述方法在pH〉3時(shí)進(jìn)行；和(b)使白蛋白與吸附材料分離。特別優(yōu)選所述方法在pH5-9時(shí)進(jìn)行，更優(yōu)選在6-8。特別優(yōu)選的pH范圍是6.9-7.5。目前醫(yī)療應(yīng)用的人血清白蛋白中四分之一用作血漿替代介質(zhì)(總共每年約200噸)，除了其膠體滲透性能外，完整的結(jié)合毒素(例如苯并二氮卓類)的性能起著主要作用，即可用于治療肝病相關(guān)適應(yīng)癥。然而，商品白蛋白制劑的結(jié)合位點(diǎn)被穩(wěn)定劑占據(jù)，反映為白蛋白結(jié)合能力(ABiC)下降，使此種性能受到限制。本發(fā)明方法使得可在給藥地點(diǎn)附近制備商品化的、穩(wěn)定的白蛋白溶液而無需活性pH處理。所制備溶液含有的白蛋白的ABiC提高。因此，人血清白蛋白作為血漿擴(kuò)充劑的特性得到了臨床改進(jìn)，使得白蛋白的結(jié)合能力可與人血清白蛋白(HSA)的生理轉(zhuǎn)運(yùn)能力相媲美。對(duì)患者的循環(huán)腎和腦功能有積極影響并且顯著改善了成本/效益比。本發(fā)明獲得以下驚人的發(fā)現(xiàn)利用相應(yīng)的方法采用合適的吸附材料，無需大大降低pH，即可簡(jiǎn)單、快速、無須大的花費(fèi)而大量去除商品白蛋白溶液中所含的用來穩(wěn)定和防止自發(fā)聚合的穩(wěn)定劑，得到的白蛋白溶液輸送能力以白蛋白結(jié)合能力(ABiC)衡量獲得了提高。本發(fā)明的方法特別適合臨時(shí)或在病床邊制備商品化的穩(wěn)定的白蛋白溶液，制備后可馬上給予患者。此方法的另一優(yōu)點(diǎn)是溶液中的白蛋白不會(huì)遭受現(xiàn)有技術(shù)采用的大大降低pH極端條件使白蛋白鏈中形成環(huán)和結(jié)合位點(diǎn)的結(jié)合鍵斷裂而氨基酸彼此分離來去除白蛋白分子結(jié)合位點(diǎn)上的穩(wěn)定劑。本發(fā)明的方法中，不會(huì)發(fā)生現(xiàn)有技術(shù)已知的可導(dǎo)致對(duì)白蛋白結(jié)構(gòu)有害的改變。定義白蛋白結(jié)合能力(ABiC)本
發(fā)明內(nèi)容中所述的白蛋白結(jié)合能力(ABiC)是用Klammt等的方法測(cè)定的。首先，用光散射測(cè)量法(濁度法)測(cè)定白蛋白溶液中的白蛋白濃度，然后稀釋將溶液的白蛋白濃度調(diào)至150微摩爾/升或300微摩爾/升。接下來，加入等摩爾比的一體積含預(yù)定濃度的白蛋白結(jié)合位點(diǎn)II(安定結(jié)合位點(diǎn))特異性熒光標(biāo)記物(丹磺酰肌氨酸，SigmaChemical)的白蛋白溶液，25。C溫育20分鐘。溫育后，通過超濾(CentrisartI,SartoriusG6ttingen;排除分子量:20000道爾頓)分離去除未結(jié)合的熒光標(biāo)記物，用熒光光譜測(cè)定分離溶液中未結(jié)合的熒光標(biāo)記物含量(Fluoroscan，Labsystems,芬蘭；激發(fā)光:355nm;發(fā)射光:460nm)。為了加強(qiáng)熒光，在未結(jié)合的熒光標(biāo)記物溶液中添加濃度150微摩爾/升或300微摩爾/升的無配體白蛋白(無脂肪酸，粉劑購自SigmaAldrich)。與樣品氨基酸溶液一起，對(duì)相應(yīng)的參比白蛋白溶液進(jìn)行同樣檢測(cè)。參比是純化的去配體的人血清白蛋白(BiSeKo,BiotestPharmaGmbH，Dreieich，德國(guó))?；蛘?，還可去除50名以上健康獻(xiàn)血者(采用DeutschesRotesKreuz[德國(guó)紅十字會(huì)]標(biāo)準(zhǔn))合并血清白蛋白中的配體。白蛋白結(jié)合能力(ABiC)用以下公式計(jì)算ABiC[%]=未結(jié)合熒光標(biāo)記物濃度(參比白蛋白)x100未結(jié)合熒光標(biāo)記物濃度(樣品白蛋白)NB:按照Klammt等的方法用上述公式測(cè)定的白蛋白結(jié)合能力(ABiC)不能給出白蛋白所有結(jié)合位點(diǎn)對(duì)配體的絕對(duì)結(jié)合能力，而是與參比白蛋白比較的結(jié)合SudlowII結(jié)合位點(diǎn)(安定結(jié)合位點(diǎn))的配體的相對(duì)結(jié)合能力。因此，該數(shù)值可能超過100%。然而，這種標(biāo)記物特別容易從結(jié)合鍵上去除，故這種專用的檢測(cè)方法特別適用于檢測(cè)白蛋白結(jié)合能力甚至最微小的變化。用N-乙酰色氨酸和/或辛酸或它們的鈉鹽作為穩(wěn)定劑的常用商品化白蛋白溶液采用本文所述測(cè)定方法檢測(cè)得到的白蛋白結(jié)合能力通常不到60%。本發(fā)明采用帶有吸附劑的吸附方法，所用吸附劑在pH〉3，優(yōu)選pH5-9時(shí)對(duì)所用的穩(wěn)定劑(例如辛酸和/或N-乙酰色氨酸)的親和力高于對(duì)白蛋白本身。采用本發(fā)明的方法，無需酸化超過100%(與參比白蛋白相比)在不到30分鐘內(nèi)即可提高商品化穩(wěn)定白蛋白溶液中的白蛋白結(jié)合能力。本發(fā)明方法的一個(gè)基本優(yōu)點(diǎn)是白蛋白不會(huì)經(jīng)歷極端條件(例如嚴(yán)重酸化或采用變性方法)發(fā)生結(jié)構(gòu)的實(shí)質(zhì)性變化，而基本上維持其天然構(gòu)象。因此，輸注入患者體內(nèi)后，由于去除了穩(wěn)定劑而結(jié)合能力提高，獲得了比商品化白蛋白制品高得多的活性。本發(fā)明方法的另一優(yōu)點(diǎn)是可利用便宜和簡(jiǎn)單的設(shè)備快速去除含穩(wěn)定劑白蛋白溶液中的穩(wěn)定劑，而制備去除穩(wěn)定劑的白蛋白溶液。因此，在去除穩(wěn)定劑后，不需要使白蛋白復(fù)性例如自發(fā)再生白蛋白內(nèi)部的環(huán)(其與不確定地自發(fā)形成減少的或聚合的白蛋白分子相關(guān)關(guān))。通常，去除穩(wěn)定劑后，本發(fā)明的白蛋白溶液只需流經(jīng)孔徑65000道爾頓以上的顆粒濾除器來去除可能存在的粗顆粒。這使得此方法可在接近給藥時(shí)刻(例如在病床旁)時(shí)實(shí)施。由于白蛋白常規(guī)用作血漿擴(kuò)充劑給予病人，因此優(yōu)選采用本發(fā)明的人血清白蛋白(HSA)。盡管本發(fā)明方法可用來去除許多穩(wěn)定劑或其它配體，但特別適合用來去除穩(wěn)定劑分子N-乙酰色氨酸和/或辛酸或它們的陰離子。本方法優(yōu)選用于Ka值(結(jié)合常數(shù))大于104的配體。本發(fā)明方法的一優(yōu)選實(shí)施方式中，在步驟a)中使原料白蛋白溶液流經(jīng)含有吸附材料的柱子(層析柱)使原料白蛋白溶液與吸附材料接觸。本發(fā)明方法的另一實(shí)施方式中，在步驟a)中使原料白蛋白流經(jīng)吸附材料形成的床使原料白蛋白溶液與吸附材料接觸。一特別合適的例子是采用緩速攪拌器或振蕩器或逆流器輕柔搖動(dòng)的流體床。這可防止靠近吸附材料的填充床中的通道或通路被非常小的顆粒占據(jù)而阻止或阻斷白蛋白溶液的流通量。如已提到的那樣，在步驟b)中優(yōu)選通過顆粒濾除器過濾白蛋白溶液來實(shí)現(xiàn)白蛋白溶液與吸附材料的分離，所選擇的顆粒濾除期能讓白蛋白通過而固體吸附材料留下。本發(fā)明方法的另一優(yōu)選實(shí)施方式中，所述吸附材料結(jié)合于或位于基質(zhì)上。合適的基質(zhì)材料為支撐紡織物(例如聚合物纖維紡織物)或開孔聚合物泡沫結(jié)構(gòu)(例如開孔聚氨基甲酸酯泡沫)。另一替代實(shí)施方式中，通過混合作為"間隔"的高度多孔顆粒使吸附材料顆粒同樣簡(jiǎn)單地形成固體反應(yīng)床，為吸附材料顆粒提供足夠的空間和合適的通道尺寸。當(dāng)固定于高度多孔的開孔聚合物泡沫中時(shí)，還可(例如)通過鉆孔同時(shí)或隨后產(chǎn)生通道。采用這一實(shí)施方式的優(yōu)選填塞是采用能對(duì)相對(duì)高黏稠白蛋白溶液提供低灌注反壓的紡織物或支撐聚合物的"疏松"填塞。而且，本說明書所采用的用來留住微粒的濾器比上述實(shí)施例中的要低級(jí)的多。本發(fā)明方法還有一優(yōu)選實(shí)施方式中，重復(fù)步驟a)和b)多次，優(yōu)選2-6次，每次都將步驟b)獲得的處理過的白蛋白溶液再返回給步驟a)。為了提高穩(wěn)定劑的去除速率，步驟a)中最好采用再生的和/或新鮮的吸附材料來去除穩(wěn)定劑分子。這可通過在提供的設(shè)備中更換吸附材料來進(jìn)行，但特別優(yōu)選使白蛋白溶液依次進(jìn)料通過順序排列的多個(gè)裝有吸附材料的吸附裝置。本發(fā)明方法還有一優(yōu)選實(shí)施方式中，選擇好與原料白蛋白溶液中的白蛋白濃度相當(dāng)?shù)奈讲牧嫌昧亢?或步驟a)中原料白蛋白溶液與吸附材料之間的接觸時(shí)間，這樣根據(jù)Klammt等的方法檢測(cè)得到的白蛋白溶液的白蛋白結(jié)合能力(ABiC)至少是參比品的60%，優(yōu)選至少70%，特別優(yōu)選至少80%和還要特別優(yōu)選至少90%。此式所需的吸附材料用量和接觸時(shí)間將根據(jù)所用的原料白蛋白和所用的裝置而不同，可由技術(shù)人員按其通用知識(shí)和技術(shù)來確定。本發(fā)明方法還有一優(yōu)選實(shí)施方式中，選擇好與原料白蛋白溶液中的白蛋白濃度相當(dāng)?shù)奈讲牧嫌昧亢?或步驟a)中原料白蛋白溶液與吸附材料之間的接觸時(shí)間，這樣將原料白蛋白溶液中結(jié)合和未結(jié)合的穩(wěn)定劑分子，具體是N-乙酰色氨酸和/或辛酸或它們的陰離子的濃度降到低于其初始濃度的70%，優(yōu)選低于50%，特別優(yōu)選低于30%和還要特別優(yōu)選低于10%。吸附材料用量和接觸時(shí)間將根據(jù)所用的原料白蛋白和所用的裝置而不同，可由技術(shù)人員按其通用知識(shí)和技術(shù)來確定。本發(fā)明方法的還有一優(yōu)選實(shí)施方式中，選擇好與原料白蛋白溶液中的白蛋白濃度相當(dāng)?shù)奈讲牧嫌昧亢?或步驟a)中原料白蛋白溶液與吸附材料之間的接觸時(shí)間，這樣將原料白蛋白溶液中結(jié)合和未結(jié)合的穩(wěn)定劑分子，具體是N-乙酰色氨酸和/或辛酸或它們的陰離子的濃度降到低于其初始濃度的3.5摩爾/摩爾白蛋白，優(yōu)選低于2.5摩爾/摩爾白蛋白,特別優(yōu)選低于1.5摩爾/摩爾白蛋白和還要特別優(yōu)選低于0.5摩爾/摩爾白蛋白。特別優(yōu)選用于進(jìn)行本發(fā)明方法的吸附材料是填裝在柱內(nèi)或床中或支撐基質(zhì)上的微粒材料，這樣可在吸附材料顆粒之間形成載流通道，其中覆蓋所用的所有吸附材料顆粒之間形成的通道全長(zhǎng)的平均通道直徑為100nm-1000pm，優(yōu)選小于500pm，更優(yōu)選小于300pm和特別優(yōu)選小于200|im，還要優(yōu)選小于100pm。通道直徑越小，白蛋白分子與吸附材料所形成的通道壁接觸的概率或頻率就越高，本發(fā)明方法的去除率也就越高。然而，通道尺寸一定不能太小而使白蛋白流速減緩太多。因此，如果覆蓋所用的所有吸附材料顆粒之間形成的通道全長(zhǎng)的平均直徑為100nm-60pm是優(yōu)選的，特別優(yōu)選小于10nm。本發(fā)明方法一特別優(yōu)選實(shí)施方式中，如下選擇步驟a)中原料白蛋白溶液與吸附材料之間的最短接觸時(shí)間dm[iim〗/10[pm/min〗S接觸時(shí)間[min]Sdm[pm〗/0.1|>m/min]，其中"dm"指覆蓋所用的所有吸附材料顆粒之間形成的通道全長(zhǎng)的平均直徑。如下選擇步驟a)中原料白蛋白溶液與吸附材料之間的最短接觸時(shí)間可更有效地去除(穩(wěn)定劑)dm[|um]/4[jim/min]^接角蟲日寸間[min]^dm[nm]/0.3[]im/min]，其中"dm"指覆蓋所有吸附材料顆粒之間形成的通道全長(zhǎng)的平均通道直徑。本發(fā)明方法一特別優(yōu)選實(shí)施方式中，所述吸附材料是活性炭。采用活性炭的優(yōu)點(diǎn)是此材料形成懸液或粉劑，例如裝填到柱中或作為吸附床材料。重要的是，活性炭粉末顆粒之間可形成通道，一方面形成的通道足夠?qū)捘茏尠椎鞍兹芤阂宰銐蛄魉倭鬟^吸附材料，另一方面通道又足夠窄使得白蛋白溶液中的白蛋白分子在流過時(shí)能高頻率地直接接觸活性炭顆粒。特別優(yōu)選活性炭粉顆粒之間形成的通道具有所引用的優(yōu)選通道直徑。覆蓋活性炭顆粒之間形成的通道全長(zhǎng)的活性炭顆粒產(chǎn)生的通道平均直徑應(yīng)是100nm-100(^m，優(yōu)選小于500(im，特別優(yōu)選小于300|im，更優(yōu)選小于200pm和還要優(yōu)選小于100|im?；蛘撸部蓪⒒钚蕴孔鳛槲讲牧习裨诠腆w多孔基質(zhì)中，例如由纖維素、樹脂或其它聚合纖維或開孔泡沫所形成的聚合物基質(zhì)中。當(dāng)將活性炭包埋在基質(zhì)中時(shí)，應(yīng)注意該基質(zhì)要讓白蛋白溶液流入并且該基質(zhì)攜帶活性炭顆粒的方式應(yīng)能使活性炭顆粒與白蛋白接觸。而且，基質(zhì)材料的孔隙率應(yīng)能使孔形成直徑為如上所述的通道可讓白蛋白溶液流過。最好采用親水性支撐基質(zhì)，讓吸附材料變濕。這樣的支撐基質(zhì)(例如)包括纖維素或其它天然或合成制備的親水聚合物?；钚蕴款w粒本身是一種含有大孔(〉25nm)、細(xì)孔(l-25nm)和微孑L(〈lnm)的多孔材料，因此活性炭具有非常大的內(nèi)表面積?；钚蕴康倪@些孔尺寸通常以糖蜜值(大孔)、亞甲藍(lán)吸附(細(xì)孑L)和碘值(微孑L)表示。采用BET測(cè)定內(nèi)表面積以m2/g活性炭表示。眾所周知，活性炭是一種吸附介質(zhì)，能吸收分子到其孔中留在那里或通過表面化學(xué)鍵固定物質(zhì)。因?yàn)榭锥嗪蛢?nèi)表面積很大，活性炭相對(duì)它的重量或外部體積具有非常高的吸附能力。這取決于分子能否擴(kuò)散進(jìn)入這些孔中。本領(lǐng)域制備的商品化白蛋白的現(xiàn)狀顯示單用活性炭不足以去除含穩(wěn)定劑白蛋白溶液中與白蛋白分子牢固結(jié)合的穩(wěn)定劑，具體說是不能以可接受的速率去除。至今采用在漿液中加入作為吸附介質(zhì)的活性炭去除白蛋白溶液中的穩(wěn)定劑方法在pH超過3時(shí)不成功也證實(shí)了上述說法。已知的方法只有在強(qiáng)酸化和伴有白蛋白結(jié)構(gòu)改變或變性后才能成功去除白蛋白中的穩(wěn)定劑分子并成功地使它們結(jié)合于活性炭。本發(fā)明人目前發(fā)現(xiàn)對(duì)吸附材料顆粒(具體是活性炭)進(jìn)行一種特別安排，即通過選擇顆粒之間的通道尺寸可導(dǎo)致與白蛋白分子牢固結(jié)合的穩(wěn)定劑分子在較溫和條件例如pH〉3下比以往更容易更快速地釋放。所述通道的平均直徑超過100nm因而白蛋白分子能輕松進(jìn)入。因此，此孔徑必需比活性炭吸附劑常用的細(xì)孔或微孔要大得多。但通道的平均直徑應(yīng)不超過lOOOium。已證明只要大于100nm的平均通道直徑越小，去除白蛋白分子上的穩(wěn)定劑的速率就越快。吸附材料顆粒的安排宜使通道具有至少一個(gè)進(jìn)口和一個(gè)出口，這樣進(jìn)入的白蛋白分子不會(huì)被困住而可離開通道。而且，已發(fā)現(xiàn)當(dāng)采用活性炭作為吸附材料時(shí)穩(wěn)定劑的去除速率還可進(jìn)一步改進(jìn)，如果獲得和制造的用作吸附材料的活性炭具有各種孔隙和內(nèi)表面積，選擇糖蜜值(IUPAC)為100-400、優(yōu)選200-300的活性炭。更優(yōu)選活性炭的亞甲基蘭吸附值(IUPAC)為l-100g/100g活性炭，優(yōu)選為10-30g/100g活性炭，碘值(IUPAC)為500-3000，優(yōu)選為800-1500，禾卩/或內(nèi)表面總面積(BET)(IUPAC)為100-5000m2/g活性炭，優(yōu)選為800-1400m2/g活性炭。本發(fā)明還涉及具有上述特征的吸附材料和其在實(shí)施本發(fā)明方法中的應(yīng)用。而且，本發(fā)明還涉及用本發(fā)明方法制備的白蛋白水溶液來制備治療低白蛋白血癥的制劑、血漿替代介質(zhì)或血漿擴(kuò)充劑和或改善患者循環(huán)功能、腎和/或腦功能的制劑。所述介質(zhì)指能更強(qiáng)地固定對(duì)白蛋白具有親和力的生理物質(zhì)。本發(fā)明還涉及利用本發(fā)明方法制備的白蛋白水溶液來制備作為血漿替代劑或作為白蛋白透析的透析液來純化血液的方法。特別是對(duì)后一種應(yīng)用，本發(fā)明制備的白蛋白溶液比相應(yīng)的無配體白蛋白溶液例如重組人血清白蛋白要便宜得多。本發(fā)明方法或根據(jù)本方法制備的去除了穩(wěn)定劑的白蛋白溶液能很好地應(yīng)用于醫(yī)療。嚴(yán)重肝病、血循環(huán)低滲和肌張力過度疾病的患者的白蛋白結(jié)合能力(ABiC)受限，采用目前生產(chǎn)的標(biāo)準(zhǔn)白蛋白制品不能得到改善。盡管這種聯(lián)系還未得到實(shí)驗(yàn)證實(shí)，但理論上這種受限的結(jié)合能力是由于白蛋白搜尋的毒素不再被損傷的肝臟生理性完全破壞而內(nèi)源性積累的結(jié)果。用人血清白蛋白的商品制品來增強(qiáng)受限的白蛋白結(jié)合能力的嘗試由于其制備方法必然導(dǎo)致的制品含有過量穩(wěn)定劑因而失敗了。然而，為保證白蛋白溶液不含病毒和防止自發(fā)聚合安全貯而進(jìn)行的巴氏消毒必須用這些穩(wěn)定劑。迄今除去這些穩(wěn)定劑都需要用極端酸性條件和/或伴有大量白蛋白損失。本發(fā)明提供了一種不需要主動(dòng)先酸化而在臨用前制備具有改善的白蛋白結(jié)合能力的白蛋白溶液的方法。根據(jù)本發(fā)明制備的白蛋白溶液可用作血漿替代劑，為不含穩(wěn)定劑的白蛋白，白蛋白的安定結(jié)合位點(diǎn)(sudiow結(jié)合位點(diǎn)n)對(duì)血管活性物質(zhì)和毒素具有親和力，從而具有高度結(jié)合能力。本發(fā)明方法所采用的裝置廉價(jià)又經(jīng)濟(jì)，因此容易實(shí)施，例如可在病床邊，面臨將所述溶液輸注到患者體內(nèi)之前。由于本發(fā)明制備的白蛋白的結(jié)合能力有所改善，所述白蛋白溶液不僅可作為血漿替代劑，如上述通過提高膠體滲透壓使水份結(jié)合滲入血管中，而且可通過主動(dòng)吸附而固定血管擴(kuò)張劑和其它有毒物質(zhì)。這導(dǎo)致血管擴(kuò)張減輕，而血容量補(bǔ)充對(duì)血管床充盈程度具有協(xié)同作用。最終，對(duì)平均動(dòng)脈壓產(chǎn)生可觀的影響，改善了對(duì)血管系統(tǒng)的灌注，如舒張壓升高顯示的那樣。而且，優(yōu)選用本發(fā)明制備的白蛋白溶液來改善白蛋白透析時(shí)的配體結(jié)合。本發(fā)明方法的優(yōu)點(diǎn)是，可高速，即在相對(duì)短的時(shí)間內(nèi)除去白蛋白溶液中的穩(wěn)定劑。商品化白蛋白溶液用10-30分鐘處理機(jī)可實(shí)質(zhì)性提高白蛋白的結(jié)合能力。因此，本方法尤其適合在病床邊制備商品化穩(wěn)定的白蛋白溶液，雖然本發(fā)明不限于此。也可以不在診所或其它機(jī)構(gòu)或企業(yè)中制備這種藥物。用本發(fā)明的方法，可將含用辛酸和或N-乙酰色氨酸穩(wěn)定劑的商品白蛋白溶液中這些穩(wěn)定劑各自的濃度降低到低于5摩爾/摩爾白蛋白，優(yōu)選低于1摩爾/摩爾白蛋白，尤其優(yōu)選低于0.2摩爾/摩爾白蛋白?，F(xiàn)在利用一些實(shí)施例更詳細(xì)地描述本發(fā)明。實(shí)施例實(shí)施例l:填裝柱中的粉末吸附材料在比較去除含穩(wěn)定劑白蛋白溶液中的穩(wěn)定劑分子效果的實(shí)驗(yàn)中，制備并檢測(cè)了各種吸附材料制品。對(duì)于本發(fā)明吸附材料的兩種制品而言，用工業(yè)研磨機(jī)將成分明確的活性炭NoritGAC830(Norit)研磨加工成不同大小的顆粒粒徑。然后用顯微鏡和商品顆粒分析儀測(cè)量研磨產(chǎn)品的粒徑。對(duì)于本發(fā)明的第一批產(chǎn)品(A1)，將NoritGAC830研磨成粒徑lmm(D50)，就第二批次而言(A2)，NoritGAC830被研磨到粒徑達(dá)0.1mm(D50)。D50對(duì)應(yīng)于50%(見下)。采用NoritROX壓碎的炭來進(jìn)行比較(V)。將100g活性炭材料置于直徑6cm高10cm帶有篩網(wǎng)底的柱內(nèi)加入水。使20g商品化白蛋白的330ml鹽溶液(ZLBBehring,pH7.2)以170ml/min的速率循環(huán)回流通過各柱內(nèi)的吸附材料。檢測(cè)0時(shí)和20、30、60和120分鐘時(shí)的辛酸、N-乙酰色氨酸和白蛋白的濃度以及白蛋白結(jié)合能力(Klammt等,2001)。也測(cè)定了240、1440和2880分鐘時(shí)的對(duì)照值。結(jié)果見圖1所示。NoritROX壓碎的炭末材料顆粒之間形成的間隙或通道非常大，這是因?yàn)閿D壓成形的這種材料當(dāng)裝填入柱中時(shí)，其顆粒直徑有時(shí)會(huì)超過lmm，尤其是在100-250ml/min高速率時(shí)對(duì)輸注壓有利。然而，對(duì)本發(fā)明的Al批和A2批研磨活性炭進(jìn)行比較顯示，通道相當(dāng)大的吸附材料在實(shí)踐中不適合在短時(shí)間內(nèi)提高白蛋白的結(jié)合能力。對(duì)于裝柱的Al批和A2批研磨活性炭粉末材料而言，以下公式(I)給出了通道直徑的良好近似值Rk=[Rp2+(Rp*0.57735)2]05-RP(I)其中，RK是顆粒之間的平均通道半徑，Rp是顆粒本身的平均半徑。對(duì)平均直徑為lmm，即半徑Rp為50(Him的Al批的研磨顆粒而言，平均通道半徑RK為77pm，即平均通道寬度(也就是直徑)約150Mm。對(duì)平均直徑為O.lmm，即半徑Rp為5(Hmi的A2批的研磨顆粒而言，平均通道半徑RK為7.7pm，即平均通道寬度(也就是直徑)約15|_mi。根據(jù)以上公式計(jì)算的通道寬度結(jié)果也的到了樹脂柱材料的固定樣品顯微鏡檢查的證實(shí)。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>用NoritROX得到的結(jié)果證實(shí)了以上所述，在生理?xiàng)l件下，具體在中性pH時(shí)，在迄今所釆用的實(shí)驗(yàn)條件下即利用含大寬度通道的活性炭粉末或懸液不可能在60分鐘內(nèi)基本去除穩(wěn)定劑，至少在數(shù)量上不可能實(shí)質(zhì)上提高白蛋白的結(jié)合能力。令人驚奇的是，根據(jù)本申請(qǐng)給出的數(shù)據(jù)延長(zhǎng)接觸時(shí)間后，即使用這種活性炭也可去除辛酸，而導(dǎo)致白蛋白結(jié)合能力提高。據(jù)估計(jì)所需的最短接觸時(shí)間是通道寬度的函數(shù)這個(gè)準(zhǔn)則，對(duì)平均寬度(dm)為1000pm的通道，接觸時(shí)間應(yīng)延長(zhǎng)到250分鐘以上。實(shí)驗(yàn)顯示在240分鐘時(shí)ABiC剛超過80%，超過90%的可接受值只是在一天(1440分鐘)之后才檢測(cè)到。在對(duì)測(cè)試的活性炭的表面結(jié)構(gòu)研究中，顯示只有小到幾乎看不見的一小部分白蛋白分子才可能真正直接接觸活性炭表面，這是因?yàn)橐环矫嬷挥写罂撞抛尠椎鞍追肿右欢ǔ潭鹊剡M(jìn)入，而大部分細(xì)孔太小白蛋白不能通過。然而，大孔僅構(gòu)成全部孔的非常小的一部分并立即迅速在外表面以下分枝為細(xì)孔，而細(xì)孔不再讓白蛋白分子通過。當(dāng)大孔讓白蛋白分子進(jìn)入后，大部分白蛋白分子被困在孔中，特別是采用大孔活性炭時(shí)，可能引起白蛋白大量損失。測(cè)試批次Al和A2顯示可通過產(chǎn)生更窄的平均通道寬度來解決這個(gè)問題，例如采用平均直徑更小的顆粒粉末。結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)吸附材料的安排對(duì)除去穩(wěn)定劑的效果具有重要作用，這是不能單單通過選擇吸附劑來自動(dòng)實(shí)現(xiàn)的。另一方面，在本發(fā)明方法中，采用通道尺寸與白蛋白分子相匹配的吸附材料。這些通道的全長(zhǎng)均能讓白蛋白分子通過而且其大小便于白蛋白分子頻繁進(jìn)入和吸附材料表面密切接觸。這些通道的特征在于它們的平均內(nèi)部寬度或它們的平均直徑。實(shí)施例2:流體床反應(yīng)器中的活性炭顆粒懸液為了證明本發(fā)明的成功不是通過研磨方法擴(kuò)大活性炭的外表面積而是通過調(diào)節(jié)顆粒材料之間的通道優(yōu)化平均通道直徑所致，在另一實(shí)驗(yàn)中，對(duì)具有相同外表面積僅通道寬度不同的吸附材料進(jìn)行了檢測(cè)。此例中合適的實(shí)驗(yàn)載體是流體床，床中裝有用攪拌、振蕩或?qū)α骰驕u流形成的精細(xì)微粒吸附材料懸液。在此流體床中，懸液中均勻分布的顆粒之間形成的空隙形成了讓白蛋白流過的通道。流體床中的通道直徑可用以下公式(II)給出良好的近似值<formula>formulaseeoriginaldocumentpage17</formula>其中DK是顆粒之間的平均通道直徑，Dp是顆粒本身的平均直徑，n是顆粒數(shù)，VwB是流體床體積。具有所需平均通道直徑的流體床容量可根據(jù)公式(II)推導(dǎo)，用以下公式(IIa)給出容量<formula>formulaseeoriginaldocumentpage17</formula>為了確定通道直徑，只有改變流體床體積、顆粒數(shù)和顆粒尺寸才能獲得所需的通道直徑。估計(jì)團(tuán)塊中的顆粒數(shù)目所需要的平均顆粒直徑Dp和堆密度可由制造商提供或用簡(jiǎn)單的標(biāo)準(zhǔn)方法測(cè)定。實(shí)踐中，干粉的顆粒數(shù)n可用以下公式(III)以堆密度(填裝的)和粒徑測(cè)定n=[VTS033/(0.86*Dp)]3(III)其中n是干粉的顆粒數(shù)，VTs是填裝的干粉體積，Dp是平均顆粒直徑。如果給出了某具體吸附材料的干粉密度，也可用干粉密度除質(zhì)量計(jì)算出體積VTS。由于實(shí)踐中，顆粒并不總是完美的球形，大小也不總是一樣，實(shí)踐中，對(duì)大小分布范圍很廣的顆粒，必須假設(shè)吸附劑流體床懸液中的空隙分布取決于吸附劑顆粒大小的分布。具體對(duì)粉末吸附劑(例如NoritCExtraUSP)而言，規(guī)則是給出顆粒大小分布的特征性數(shù)目，即大小分布的—分?jǐn)?shù)值例如D10和D90。利用此D10和D卯值，可描述出包括約80%顆粒的大小分布范圍。因此，實(shí)踐中流體床顆粒的重量或干粉體積確定時(shí)可估計(jì)其分布體積，來產(chǎn)生所需通道直徑的良好近似值。這種情況下，可利用D10值代替Dp，D90值代替Dp來計(jì)算流體床容量，以確定在本發(fā)明吸附顆粒(通道寬度)之間進(jìn)行本發(fā)明最佳分離的流體床容量的上限和下限?？筛鶕?jù)D90值的計(jì)算出去除配體使白蛋白結(jié)合能力(ABiC)確實(shí)有效地提高的(上下限的)最大差異。如下測(cè)定通道寬度的影響。將不同體積的lg活性炭/lg白蛋白(活性炭:購自NoritNederlandBV，荷蘭的NoritCExtraUSP;商品化白蛋白，每毫摩爾白蛋白含穩(wěn)定劑5.2毫摩爾辛酸和5.2毫摩爾N-乙酰色氨酸)的活性炭-白蛋白混合物加入NaCl溶液的流體床中室溫?cái)嚢?0分鐘。處理后，離心分離活性炭顆粒與白蛋白溶液。然后檢測(cè)白蛋白、辛酸和N-乙酰色氨酸的濃度和ABiC，觀察與獲得的通道寬度的關(guān)系。結(jié)果見表2所示。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table><table>complextableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>n50、n10、n90=粒徑，以d50、D10或D90百分?jǐn)?shù)值作為平均顆粒直徑根據(jù)公式(in)計(jì)算。Dk50、DklO、Dk卯=平均通道直徑，以d50、D10或D90百分?jǐn)?shù)值作為平均顆粒直徑根據(jù)公式(II)計(jì)算。Oct/Alb=辛酸與白蛋白的摩爾比。NAC/Alb-N-乙酰色氨酸與白蛋白的摩爾比。結(jié)果清楚地顯示流體床中平均通道直徑(Dk50)增加導(dǎo)致辛酸和N-乙酰色氨酸去除效力和白蛋白結(jié)合能力降低，因?yàn)轭w粒類型和數(shù)目恒定時(shí)以上公式(II)中平均通道直徑的增加與流體床容量的增加直接相關(guān)聯(lián)，而與吸附材料的外表面積無關(guān)。類似地，此表顯示了本發(fā)明優(yōu)選實(shí)施方式所制造的規(guī)律dm[pm]/4[pm/min]S接角蟲時(shí)間[min]Sdm[|im)/0.3[|am/min]，當(dāng)選好最短所需接觸時(shí)間的上限不超過30分鐘的通道寬度時(shí)，可在30分鐘內(nèi)獲得最佳去除效果(試驗(yàn)1)。這種情況下，對(duì)于平均通道直徑5.2pm的最短所需接觸時(shí)間的上限是17.3分鐘，而最大去除NAC和辛酸時(shí)，ABiC達(dá)到數(shù)值110%。在試驗(yàn)2-6中，最短接觸時(shí)間不超過此上限值。因此，可觀察到非常優(yōu)良的去除效果和ABiC改善，而試驗(yàn)1中未實(shí)現(xiàn)最佳值。實(shí)施例1和2顯示有效去除穩(wěn)定劑所需的白蛋白溶液與吸附材料之間的接觸時(shí)間強(qiáng)烈依賴于吸附材料中通道的平均直徑。選擇與之相配的吸附材料通道平均直徑可影響到所需接觸時(shí)間，(例如)也影響裝填有吸附材料的柱內(nèi)白蛋白溶液的流通速率。實(shí)施例3:將吸附劑固定于紡織物、開孔泡沫或混合粉末中在下述實(shí)施方式中，本發(fā)明吸附顆粒之間的距離，即通道寬度，被固定在網(wǎng)格內(nèi)，可仔細(xì)觀看。因此，吸附材料的顆粒，例如活性炭可利用支撐紡織物(例如聚合物纖維)、開孔聚合物泡沫結(jié)構(gòu)(例如開孔聚氨酯泡沫)或簡(jiǎn)單通過混合高度多孔顆粒作為"間隔"制成固體床反應(yīng)器形式，為吸附材料顆粒彼此間提供足夠的間距，以此提供本發(fā)明的通道寬度。還可同時(shí)或依次固定于高度多孔、開孔聚合泡沫中通過鉆孔方法形成通道。這些通道寬度應(yīng)滿足本發(fā)明確定的通道寬度與最短所需接觸時(shí)間之間相關(guān)性的規(guī)律。在此實(shí)施方式中，最好用紡織物或支撐聚合物來獲得"疏松"填塞，使對(duì)高黏稠白蛋白溶液產(chǎn)生的灌注反壓較低。此外，留住微粒的過濾所需灌注壓不像上述實(shí)施方式那么大。而且，當(dāng)將吸附劑固定于紡織物、開孔泡沬或混合粉末時(shí)，公式(IV)給出了平均通道直徑的最接近近似值Dk=[V033-(n033*Dp)]/n0'33(IV)其中Dk是顆粒之間通道的平均直徑，Dp是顆粒本身的平均直徑，n是顆粒數(shù)，V是終末期紡織物、混合粉劑或泡沫的容量。確定了所需通道直徑后，對(duì)于已知顆粒數(shù)目和已知顆粒直徑，可用公式(IVa)計(jì)算其相應(yīng)的容量V=[(n033*Dp)+(n033*DK)]3(IVa)對(duì)優(yōu)選的吸附劑重量和最終容積的組合的基礎(chǔ)計(jì)算對(duì)應(yīng)于實(shí)施例2的基礎(chǔ)計(jì)算。在一實(shí)施例中，將2g平均粒徑23nm(D50)(Dl(^5^n，D9(^82^im)的活性炭(購自NORITNederlandBV的NoritCExtraUSP,荷蘭)與纖維聚合物(本例中為纖維素)和有交聯(lián)傾向的聚合物(例如樹脂、聚氨酯、聚丙烯酰甲基丙烯酯)形成的水懸液/溶液混合，通道寬度設(shè)為3.6pm，可在不到12分鐘的接觸時(shí)間內(nèi)實(shí)現(xiàn)恰當(dāng)?shù)拿撆潴w作用。根據(jù)本發(fā)明的公式dm[pm]/4[>m/min]S接觸時(shí)間[min〗^dm|>m〗/0.3[pm/min]，最短接觸時(shí)間的上限是12分鐘。用公式(IVa)，重量是2g時(shí)，得到的與該混合物最終總?cè)萘肯鄬?duì)應(yīng)的容量是12.5ml。將此混合物加入表面積約25cn^的的封閉篩網(wǎng)中，篩孔足夠小到可留住吸附劑顆粒而讓液體通過交聯(lián)支撐聚合物(例如5pm網(wǎng)篩)。將該混合物分置于篩網(wǎng)上，通過壓力梯度(latm)引流，獲得物干燥后的厚度為5mm。所制備的此吸附材料最終具有的總?cè)萘繛?2.5ml。用以上公式(IV)以粒徑d50為23pm計(jì)算出的平均通道直徑Dk是3.6pm。使10ml的20%商品化含穩(wěn)定劑的白蛋白溶液以lml/min速率垂直通過商品過濾裝置篩網(wǎng)表面吸附材料流動(dòng)方向與干燥時(shí)的壓力梯度相同。用此方法在IO分鐘內(nèi)除去了穩(wěn)定劑，經(jīng)處理白蛋白溶液的白蛋白結(jié)合能力從45%提高到100%以上。辛酸和N-乙酰色氨酸與白蛋白的比率小于0.2毫摩爾/毫摩爾。實(shí)施例4:臨床應(yīng)用在臨床試驗(yàn)中，研究了本發(fā)明白蛋白結(jié)合能力提高的白蛋白溶液的效果。隨機(jī)選擇30名慢性酒精中毒肝硬化和丙2型肝炎肝功能衰竭，膽紅素水平超過20mg/dl并且蛋白質(zhì)合成受限(INR升高)和伴有血循環(huán)低滲和肌張力過度疾病的患者，將其分成兩組。一組用本發(fā)明白蛋白結(jié)合能力提高的白蛋白溶液治療，對(duì)照組不用。試驗(yàn)期間定期監(jiān)測(cè)循環(huán)血液參數(shù)和腎腦的終末器官功能，觀察時(shí)間為2周。結(jié)果見以下附圖所示圖1顯示治療前和2周后這兩個(gè)試驗(yàn)組的血白蛋白濃度；圖2顯示治療前和2周后兩個(gè)試驗(yàn)組血液白蛋白的白蛋白結(jié)合能力；圖3顯示治療前和2周后兩個(gè)試驗(yàn)組的平均動(dòng)脈壓變化；圖4、5、6顯示治療前和2周后兩個(gè)試驗(yàn)組的收縮壓、擴(kuò)張壓和心率；圖7顯示治療前和2周后通過肌酸酐檢測(cè)對(duì)兩個(gè)試驗(yàn)組的腎功能影響；圖8顯示治療前和2周后兩個(gè)試驗(yàn)組因流入大腦的血液和搜尋白蛋白的量受限，毒素所導(dǎo)致的血流改變對(duì)肝腦病的影響。這些臨床試驗(yàn)的結(jié)果顯示白蛋白結(jié)合能力(ABiC)的改善伴有平均動(dòng)脈壓的改善，顯然這是由于擴(kuò)壓升高而非心率增加所致。此結(jié)果在醫(yī)學(xué)上證明了肝病中血管擴(kuò)張壓降低通常是由對(duì)白蛋白具有親和力的擴(kuò)血管物質(zhì)所造成的。利用改善的白蛋白結(jié)合能力固定它們就能改善循環(huán)功能、腎和腦功能。最終，除了改善血壓狀況外，還可改善與直接引起神經(jīng)毒性的物質(zhì)(這些物質(zhì)也結(jié)合ABiC改善的白蛋白)的結(jié)合。權(quán)利要求1.一種從含有能占據(jù)白蛋白結(jié)合位點(diǎn)的穩(wěn)定劑分子的原料白蛋白溶液制備白蛋白水溶液的方法，所述方法中，為了提高對(duì)其它分子的白蛋白結(jié)合能力(ABiC)，要從原料白蛋白溶液的白蛋白中去除至少一部分穩(wěn)定劑分子并使它們與原料白蛋白溶液分離，該方法包括a)使原料白蛋白溶液與固體吸附材料接觸，所述固體吸附材料對(duì)至少一部分、優(yōu)選所有的所用穩(wěn)定劑分子的親和力高于所述白蛋白對(duì)相應(yīng)穩(wěn)定劑分子的親和力；其中所述方法在pH＞3時(shí)進(jìn)行；和b)使白蛋白與吸附材料分離。2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法在pH5-9的范圍，優(yōu)選在pH6-8范圍內(nèi)，特別優(yōu)選在pH6.9-7.5的范圍內(nèi)進(jìn)行。3.如上述任一權(quán)利要求所述的方法，其特征在于，所述白蛋白是人血清白蛋白(HSA)。4.如上述任一權(quán)利要求所述的方法，其特征在于，所述待除去的穩(wěn)定劑分子包括N-乙酰色氨酸和/或辛酸或它們的陰離子。5.如上述任一權(quán)利要求所述的方法，其特征在于，在步驟a)中通過使原料白蛋白溶液流經(jīng)含有吸附材料的柱子(層析柱)或流經(jīng)由吸附材料形成的床而使原料白蛋白溶液與吸附材料接觸。6.如上述任一權(quán)利要求所述的方法，其特征在于，在步驟b)中使白蛋白溶液通過顆粒過濾器過濾實(shí)現(xiàn)白蛋白溶液與吸附材料的分離，選擇能讓白蛋白通過而固體吸附材料留下的顆粒過濾器。7.如上述任一權(quán)利要求所述的方法，其特征在于，重復(fù)步驟a)和b)多次，優(yōu)選2-6次，每次將步驟b)獲得的經(jīng)過處理的白蛋白溶液返回給步驟a)，并在步驟a)中采用再生的和/或新鮮的吸附材料來去除穩(wěn)定劑分子。8.如上述任一權(quán)利要求所述的方法，其特征在于，選擇與原料白蛋白溶液中的白蛋白濃度相當(dāng)?shù)奈讲牧嫌昧亢?或步驟a)中原料白蛋白溶液與吸附材料的接觸時(shí)間，從而使根據(jù)Klammt等的方法檢測(cè)得到的白蛋白溶液的白蛋白結(jié)合能力(ABiC)至少是60%，優(yōu)選至少70%，特別優(yōu)選至少80%和更特別優(yōu)選至少90%。9.如上述任一權(quán)利要求所述的方法，其特征在于，選擇與原料白蛋白溶液中的白蛋白濃度相當(dāng)?shù)奈讲牧嫌昧亢?或步驟a)中原料白蛋白溶液與吸附材料的接觸時(shí)間，從而使原料白蛋白溶液中結(jié)合和未結(jié)合的穩(wěn)定劑分子，具體是N-乙酰色氨酸和/或辛酸或它們的陰離子的濃度降到低于其初始濃度的70%，優(yōu)選低于50%，更優(yōu)選低于30%和特別優(yōu)選低于10%。10.如上述任一權(quán)利要求所述的方法，其特征在于，所述吸附材料是裝填在柱內(nèi)或床上或支撐基質(zhì)上的顆粒材料，能在吸附材料顆粒之間形成載流通道，其中覆蓋所有所用吸附材料顆粒之間形成的通道全長(zhǎng)的平均通道直徑為100nm-1000pm，優(yōu)選小于500nm，更優(yōu)選小于300pm和特別優(yōu)選小于200pm，還要優(yōu)選小于100jim。11.如權(quán)利要求IO所述的方法，其特征在于，覆蓋由所有吸附材料顆粒形成的通道全長(zhǎng)的通道的平均直徑是100nm-60|um，特別優(yōu)選小于10pm。12.如上述任一權(quán)利要求所述的方法，其特征在于，如下選擇步驟a)中原料白蛋白溶液與吸附材料的最短接觸時(shí)間dm[[im]/10[nm/min]^接角蟲時(shí)間[min]Sdm[|im]/0.1[pm/min]，其中"dm"指覆蓋所用的所有吸附材料顆粒之間形成的通道全長(zhǎng)的平均通道直徑。13.如上述任一權(quán)利要求所述的方法，其特征在于，如下選擇步驟a)中原料白蛋白溶液與吸附材料的最短接觸時(shí)間dm[[im]/4[|im/min]S接觸時(shí)間[min]Sdm[pm]/0.3[(im/min]，其中"dm"指覆蓋所有吸附材料顆粒之間形成的通道全長(zhǎng)的平均通道直徑。14.如上述任一權(quán)利要求所述的方法，其特征在于，所述吸附材料是活性炭。15.如權(quán)利要求14所述的方法，其特征在于，所述活性炭的糖蜜值(IUPAC)是100-400，優(yōu)選200-300。16.如權(quán)利要求14或15所述的方法，其特征在于，所述活性炭的亞甲基蘭吸附(IUPAC)值是每100克活性碳1-100克，優(yōu)選每100克活性碳10-30克。17.如權(quán)利要求14-16中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述活性炭的碘值(IUPAC)是500-3000，優(yōu)選800-1500。18.如權(quán)利要求14-17中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述活性炭的內(nèi)表面總面積(BET)(IUPAC)是每克活性碳100-5000m2，優(yōu)選每克活性炭800-1400m2。19.一種吸附材料，其具有如上述任一權(quán)利要求所述的特征，可用于實(shí)施上述任一權(quán)利要求所述的方法。20.如權(quán)利要求19所述的吸附材料在實(shí)施權(quán)利要求1-18中任一項(xiàng)所述方法中的應(yīng)用。21.如權(quán)利要求1-18中任一項(xiàng)所述方法制備的白蛋白水溶液在制備治療底白蛋白血癥制劑中的應(yīng)用。22.如權(quán)利要求1-18中任一項(xiàng)所述方法制備的白蛋白水溶液，在制備血漿替代液或血漿擴(kuò)充劑或在制備利用血漿分離置換或白蛋白透析進(jìn)行體外血液純化的溶液中的應(yīng)用。23.利用權(quán)利要求1-18中任一項(xiàng)所述的方法制備的白蛋白水溶液在制備改善患者循環(huán)功能、腎和/或腦功能的制劑中的應(yīng)用。24.—種根據(jù)權(quán)利要求1-18中任一項(xiàng)所述方法制備的白蛋白溶液。全文摘要本發(fā)明涉及一種從含有能占據(jù)白蛋白結(jié)合位點(diǎn)的穩(wěn)定劑分子的原料白蛋白溶液制備白蛋白水溶液的方法，所述方法中，為了提高對(duì)其它分子的白蛋白結(jié)合能力(ABiC)，至少要去除一部分原料白蛋白溶液中白蛋白上的穩(wěn)定劑分子并使它們與原料白蛋白溶液分離。為了實(shí)施此方法，可用更簡(jiǎn)單、快速、便宜的和對(duì)白蛋白溫和的方式除去穩(wěn)定化商品化原料白蛋白中的大部分穩(wěn)定劑分子而提高白蛋白結(jié)合能力，所述方法包括以下步驟使原料白蛋白溶液與固體吸附材料接觸，所述固體吸附材料對(duì)至少一部分優(yōu)選所有的穩(wěn)定劑分子的親和力高于含相應(yīng)穩(wěn)定劑分子的白蛋白；使所述白蛋白與吸附材料分離；其中所述方法在pH＞3時(shí)進(jìn)行。文檔編號(hào)C07K1/22GK101175766SQ200680016267公開日2008年5月7日申請(qǐng)日期2006年5月11日優(yōu)先權(quán)日2005年5月13日發(fā)明者K·施坦格申請(qǐng)人:奧布泰克有限公司