專利名稱：新的黃皮酰胺的光學(xué)活性衍生物、其制法和其藥物組合物與用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及羥芐基、羥基、苯基取代γ-內(nèi)酰胺(黃皮酰胺)的立體異構(gòu)體，光活的立體異構(gòu)體，及它們的制備方法，以它們作為活性物質(zhì)的藥物組合物，和它們在制備促智，抗衰老藥物的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
目前我國人口的平均壽命已超過70歲，比解放時的人均壽命增加了一倍。國外一項(xiàng)科學(xué)研究預(yù)測到2025年時，15歲以下兒童的比例將占總?cè)丝诘?8.6％，而65歲及65歲以上的老年人將超過童數(shù)，達(dá)到18.8％，這個數(shù)字表明，再過20余年，每5個人中就有1個老年人。早老性癡呆癥(Alzheimer’s Disease)多發(fā)生在50余歲。因腦血管病變引發(fā)的多發(fā)性栓塞性癡呆或老年性癡呆多發(fā)生在60歲以后?？梢?，由于人口的老齡化，早老性癡呆癥和老年性癡呆癥的發(fā)病率也必將增加。老年人及其特有的神經(jīng)退化性疾病——各種癡呆癥要經(jīng)歷兩種死亡，首先是精神上的死亡，后是肉體上的死亡，苦不堪言，更給社會和家庭帶來沉重負(fù)擔(dān)。人口老齡化被認(rèn)為是僅次于戰(zhàn)爭，瘟疫，饑荒，資源能源短缺而影響社會發(fā)展和安定的不利因素。
防治衰老和治療老年癡呆的藥物種類繁多。腦血管擴(kuò)張藥，通過改善腦血流量有助于提供能量和改善智能，但真正有價值的腦血管擴(kuò)張藥必須具有高度選擇性，不影響腦代謝，無“竊血”現(xiàn)象，有抗血小板聚集和抗血栓作用。鈣拮抗劑尼莫地平雖符合上述某些條件，但它僅作用于電壓依賴性鈣通道中的L-通道，對N型和T型鈣通道無影響。增強(qiáng)膽堿系統(tǒng)功能的藥物中，Ach前體僅有微弱的治療作用，Ach受體激動劑和膽堿脂酶抑制劑雖有一定效果，但作用較短暫，毒副作用較大。多種神經(jīng)肽和神經(jīng)生長因子曾被認(rèn)為有治療癡呆癥的希望，但臨床效果不佳，可能主要?dú)w因于這類物質(zhì)難以通過血腦屏障進(jìn)入腦內(nèi)發(fā)揮作用，2-吡咯烷酮乙酰胺(piracetam國內(nèi)已生產(chǎn)，商品名腦復(fù)康)問世后，在早期文獻(xiàn)中屬沒有爭論的一類新型促智藥(nootropil，該詞是從希臘詞noo(腦)和tropein(向)衍化而來)，近幾年來國內(nèi)外報道，該藥對各類型的記憶障礙和老年癡呆作用輕微或尚無定論，一個主要原因是該藥為水溶性化合物，通過血腦屏障率低，不易集中到靶點(diǎn)發(fā)揮作用。
本發(fā)明人從蕓香科植物黃皮[Clausena Lansium(lour.)Skells]中第一次分離出含有腦復(fù)康藥的γ-內(nèi)酰胺骨架的化合物，稱之為黃皮酰胺(黃皮酰胺)。黃皮酰胺是具有四個手性中心的γ-內(nèi)酰胺，天然品為消旋體，消旋黃皮酰胺的合成方法曾申請歐洲專利，其申請?zhí)枮镋P0414020，中國專利申請為86107090，90107145.5和90107144.7。左旋黃皮酰胺具有較好的促智作用，該化合物的純物質(zhì)、制備方法及其潛在的醫(yī)藥應(yīng)用本發(fā)明人已申請專利，CN00124630.5。
黃皮酰胺分子中有4個手性中心，應(yīng)有16個光活的立體異構(gòu)體，組成互為非對映關(guān)系的8對對映異構(gòu)體(其構(gòu)型與命名如表1)
表1 8對光活立體異構(gòu)體

其中黃皮酰胺的一對對映體(I1)本發(fā)明人已申請專利(專利申請?zhí)朇N00124630.5)。消旋的新黃皮酰胺(I2)和消旋的表新黃皮酰胺(I4)是公知的，但光活新黃皮酰胺(I2)和表新黃皮酰胺(I4)及其制備方法未見文獻(xiàn)報道。(-)和(+)黃皮酰胺(I1)的體內(nèi)、外代謝的研究結(jié)果表明兩者的代謝物的種類基本相同，而(-)黃皮酰胺的代謝物中(-)N-羥甲基去甲黃皮酰胺[(-)-CM1]和(-)-5-羥基黃皮酰胺[(-)-CM2]的含量明顯高于(+)黃皮酰胺的代謝產(chǎn)物中相應(yīng)的[(+)-CM1]和[(+)-CM2]的含量。其母體(-)黃皮酰胺的藥理試驗(yàn)表明，具有明顯的促智作用，而(+)黃皮酰胺無此作用，并有拮抗作用，據(jù)此合成了代謝物CM1和CM2的一對對映體及其衍生物，其中CM11的制備本發(fā)明人已發(fā)表，。
現(xiàn)有技術(shù)不能直接用于制備本發(fā)明所述的具有光學(xué)活性黃皮酰胺及其衍生物。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一類新的光活的手性藥物黃皮酰胺衍生物。
本發(fā)明的另一目的在于提供制備本發(fā)明的光學(xué)活性黃皮酰胺衍生物的方法；
本發(fā)明的另一目的在于提供一種新的光學(xué)活性化合物(一)黃皮酰胺在制備促智，抗衰老作用藥物的應(yīng)用。
具體講，本發(fā)明涉及如通式(I)所示的黃皮酰胺光活衍生物中的另外14個立體異構(gòu)體，組成互為非對映關(guān)系的7對對映異構(gòu)體，(其構(gòu)型與命名如表2) 其中，各個碳原子的立體構(gòu)型為I2(3R，4S，5R，6S) (+)新黃皮酰胺(3S，4R，5S，6R) (-)新黃皮酰胺I3(3R，4S，5S，6S) (+)表黃皮酰胺(3S，4R，5R，6R) (-)表黃皮酰胺I4(3R，4S，5R，6R) (+)表新黃皮酰胺(3S，4R，5S，6S) (-)表新黃皮酰胺I5(3S，4S，5S，6R) (+)順黃皮酰胺(3R，4R，5R，6S) (-)順黃皮酰胺I6(3R，4R，5S，6R) (+)順新黃皮酰胺(3S，4S，5R，6S) (-)順新黃皮酰胺I7(3S，4S，5S，6S) (+)順表黃皮酰胺(3R，4R，5R，6R) (-)順表黃皮酰胺I8(3R，4R，5S，6S) (+)順表新黃皮酰胺(3S，4S，5R，6R) (-)順表新黃皮酰胺根據(jù)本發(fā)明，還涉及黃皮酰胺光活衍生物中I2、I4、I5、I6、I7和I8的制備方法，反應(yīng)路線如路線1所示。
路線1其中(a)堿催化環(huán)合可用NaOCH3、(CH3)4NOH或二異丙基胺基鋰(LDA)；(b)拆分劑(-)-薄荷醇氧乙酰氯、N保護(hù)的氨基酸酰氯；(c)羥基的保護(hù)，二氫吡喃，乙酰氯/吡啶或乙酸酐/吡啶；(d)還原C6酮的還原劑NaBH4或L-selectride；(e)還原C6酮的還原劑Al(i-C3H7O)3；(f)氧化C3-OH的氧化劑K2Cr2O7/H+、或KMnO4+CuSO4、MnO2orDMSO/(COCl)2；(g)還原Δ3，4雙鍵的還原劑NaBH4/H+、NaBH4/AlCl3或催化氫化；(h)C3-OH的構(gòu)型反轉(zhuǎn)，用偶氮甲酸二異丙酯(DIAD)或偶氮甲酸二乙酯(DEAD)/TPP，H+(Mitsunobu method)或以CsOAc/18-冠醚-6完成。
本路線均以已知的消旋或光活的N-甲基-N-苯甲酰基-3-苯基縮水甘油酰胺(A)為原料。若以光活的化合物A為原料，則可略去步驟2(b)拆分這一步。
本發(fā)明化合物中黃皮酰胺的光活立體異構(gòu)體中I3(C6差向異構(gòu)體表黃皮酰胺)的制備方法如路線2所示。
路線2本路線原料的原料消旋3-去氧表黃皮酰胺(3-去氧-I3)為已知化合物，是拜爾藥廠合成消旋黃皮酰胺的中間體[Walfgang Hartwig，Liborrious Born，J.Org，Chem.，1987，52，4352.]的副產(chǎn)物。本路線經(jīng)化合物3-去氧-I3引入C3位羥基得到消旋表黃皮酰胺(I3)。或先拆分得到3-去氧-I3的光活體，然后引羥得到光活的表黃皮酰胺(I3)。
(1)3-去氧表黃皮酰胺(3-去氧-I3)中引入3位羥基，采用的條件是選自二異丙基胺基鋰(LDA)/O2/亞磷酸三乙酯(P(OEt)3)/六甲基磷酰胺(HMPT)/THF。
(2)3-去氧表黃皮酰胺(3-去氧-I3)的拆分，拆分劑選自O(shè)-乙酰-R-扁桃酸、O-乙酰-S-扁桃酸、薄荷醇氧乙酸、N-保護(hù)的氨基酸。
(3)水解拆分劑采用K2CO3/CH3OH的條件。
本發(fā)明因此還涉及含有作為活性成份的本發(fā)明化合物和常規(guī)藥物賦形劑或輔劑的藥物組合物。通常本發(fā)明藥物組合物含有0.1-95重量％的本發(fā)明化合物。
本發(fā)明化合物的藥物組合物可根據(jù)本領(lǐng)域公知的方法制備。用于此目的時，如果需要，可將本發(fā)明化合物與一種或多種固體或液體藥物賦形劑和/或輔劑結(jié)合，制成可作為人藥或獸藥使用的適當(dāng)?shù)氖┯眯问交騽┝啃问健?br> 本發(fā)明化合物或含有它的藥物組合物可以單位劑量形式給藥，給藥途徑可為腸道或非腸道，如口服、肌肉、皮下、鼻腔、口腔粘膜、皮膚、腹膜或直腸等，優(yōu)選口服。
本發(fā)明化合物或含有它的藥物組合物的給藥途徑可為注射給藥。注射包括靜脈注射、肌肉注射、皮下注射和皮內(nèi)注射等。
給藥劑型可以是液體劑型、固體劑型。如液體劑型可以是真溶液類、膠體類、微粒劑型、乳劑劑型、混懸劑型。其他劑型例如片劑、膠囊、滴丸、氣霧劑、丸劑、粉劑、溶液劑、混懸劑、乳劑、顆粒劑、栓劑、凍干粉針劑等。
本發(fā)明化合物可以制成普通制劑、也可以是緩釋制劑、控釋制劑、靶向制劑及各種微粒給藥系統(tǒng)。
為了將單位給藥劑型制成片劑，可以廣泛使用本領(lǐng)域公知的各種載體。關(guān)于載體的例子是，例如稀釋劑與吸收劑，如淀粉、糊精、硫酸鈣、乳糖、甘露醇、蔗糖、氯化鈉、葡萄糖、尿素、碳酸鈣、白陶土、微晶纖維素、硅酸鋁等；濕潤劑與粘合劑，如水、甘油、聚乙二醇、乙醇、丙醇、淀粉漿、糊精、糖漿、蜂蜜、葡萄糖溶液、阿拉伯膠漿、明膠漿、羧甲基纖維素鈉、紫膠、甲基纖維素、磷酸鉀、聚乙烯吡咯烷酮等；崩解劑，例如干燥淀粉、海藻酸鹽、瓊脂粉、褐藻淀粉、碳酸氫鈉與枸櫞酸、碳酸鈣、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸鈉、甲基纖維素、乙基纖維素等；崩解抑制劑，例如蔗糖、三硬脂酸甘油酯、可可脂、氫化油等；吸收促進(jìn)劑，例如季銨鹽、十二烷基硫酸鈉等；潤滑劑，例如滑石粉、二氧化硅、玉米淀粉、硬脂酸鹽、硼酸、液體石蠟、聚乙二醇等。還可以將片劑進(jìn)一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、腸溶包衣片，或雙層片和多層片。
例如為了將給藥單元制成丸劑，可以廣泛使用本領(lǐng)域公知的各種載體。關(guān)于載體的例子是，例如稀釋劑與吸收劑，如葡萄糖、乳糖、淀粉、可可脂、氫化植物油、聚乙烯吡咯烷酮、Gelucire、高嶺土、滑石粉等；粘合劑，如阿拉伯膠、黃蓍膠、明膠、乙醇、蜂蜜、液糖、米糊或面糊等；崩解劑，如瓊脂粉、干燥淀粉、海藻酸鹽、十二烷基磺酸鈉、甲基纖維素、乙基纖維素等。
例如為了將給藥單元制成膠囊，將有效成分本發(fā)明化合物與上述的各種載體混合，并將由此得到的混合物置于硬的明膠膠囊或軟膠囊中。也可將有效成分本發(fā)明化合物制成微囊劑，混懸于水性介質(zhì)中形成混懸劑，亦可裝入硬膠囊中或制成注射劑應(yīng)用。
例如，將本發(fā)明化合物制成注射用制劑，如溶液劑、混懸劑溶液劑、乳劑、凍干粉針劑，這種制劑可以是含水或非水的，可含一種和/或多種藥效學(xué)上可接受的載體、稀釋劑、粘合劑、潤滑劑、防腐劑、表面活性劑或分散劑。如稀釋劑可選自水、乙醇、聚乙二醇、1，3-丙二醇、乙氧基化的異硬脂醇、多氧化的異硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯等。另外，為了制備等滲注射液，可以向注射用制劑中添加適量的氯化鈉、葡萄糖或甘油，此外，還可以添加常規(guī)的助溶劑、緩沖劑、pH調(diào)節(jié)劑等。這些輔料是本領(lǐng)域常用的此外，如需要，也可以向藥物制劑中添加著色劑、防腐劑、香料、矯味劑、甜味劑或其它材料。
為達(dá)到用藥目的，增強(qiáng)治療效果，本發(fā)明的藥物或藥物組合物可用任何公知的給藥方法給藥。
本發(fā)明化合物藥物組合物的給藥劑量取決于許多因素，例如所要預(yù)防或治療疾病的性質(zhì)和嚴(yán)重程度，患者或動物的性別、年齡、體重、性格及個體反應(yīng)，給藥途徑、給藥次數(shù)、治療目的，因此本發(fā)明的治療劑量可以有大范圍的變化。一般來講，本發(fā)明中藥學(xué)成分的使用劑量是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的?？梢愿鶕?jù)本發(fā)明化合物組合物中最后的制劑中所含有的實(shí)際藥物數(shù)量，加以適當(dāng)?shù)恼{(diào)整，以達(dá)到其治療有效量的要求，完成本發(fā)明的預(yù)防或治療目的。本發(fā)明化合物的每天的合適劑量范圍本發(fā)明的化合物的用量為0.001-150mg/Kg體重，優(yōu)選為0.01-100mg/Kg體重，更優(yōu)選為0.01-60mg/Kg體重，最優(yōu)選為0.1-10mg/Kg體重。上述劑量可以單一劑量形式或分成幾個，例如二、三或四個劑量形式給藥這受限于給藥醫(yī)生的臨床經(jīng)驗(yàn)以及包括運(yùn)用其它治療手段的給藥方案。
每一種治療所需總劑量可分成多次或按一次劑量給藥。本發(fā)明的化合物或組合物可單獨(dú)服用，或與其他治療藥物或?qū)ΠY藥物合并使用并調(diào)整劑量。
在對人胚胎腦神經(jīng)干細(xì)胞克隆形成率的試驗(yàn)中本發(fā)明的化合物具有明顯促進(jìn)人胚胎腦神經(jīng)干細(xì)胞克隆形成的作用，說明本發(fā)明的化合物具有治療老年性神經(jīng)退行性疾病如老年性癡呆的作用。
在對神經(jīng)細(xì)胞胞漿游離鈣的影響的試驗(yàn)中本發(fā)明的化合物有升高神經(jīng)細(xì)胞胞漿游離鈣水平的趨勢。鈣作為第二信使在細(xì)胞活動中起著重要作用，胞漿游離鈣濃度的變化與許多生理/病理刺激和細(xì)胞內(nèi)效應(yīng)器的反應(yīng)具有密切關(guān)系。
在對大鼠海馬長時程增強(qiáng)(LTP)的試驗(yàn)中本發(fā)明化合物對大鼠海馬長時程增強(qiáng)(LTP)具有明顯的增強(qiáng)作用，(P＜0.05vs control，n＝5)。本發(fā)明化合物對神經(jīng)細(xì)胞基礎(chǔ)突觸傳遞有增強(qiáng)作用，說明本發(fā)明的化合物有促智作用。


圖1 16種光學(xué)活性黃皮酰胺對人胚腦神經(jīng)干細(xì)胞的影響具體實(shí)施方式
實(shí)施例1光活新黃皮酰胺(I2)的制備(見路線1)消旋新黃皮酰胺酮的拆分消旋新黃皮酰胺酮2.7g，加至由2.7g(-)-薄荷醇氧乙酸制備的(-)-薄荷醇氧乙酰氯的30mL的二氯甲烷溶液，以冰水浴冷卻，然后加入1.5mL吡啶，室溫攪拌至反應(yīng)完全，反應(yīng)液以50mL的二氯甲烷稀釋，依次以2N鹽酸，飽和碳酸鈉溶液和食鹽水洗，有機(jī)層用無水硫酸鈉干燥。濃縮后得6g油狀物，加入己烷固化，固體過濾，以甲醇重結(jié)晶得1.48g 3-O-[(-)薄荷醇氧乙酰基]-(3R，4S，5R)-新黃皮酰胺酮[酯(a)]，mp170-172℃，[α]D15＝-50.9(c，1.25，CHCl3)，收率33.8％。濾液柱層析得到3-O-[(-)薄荷醇氧乙酰基]-(3S，4R，5S)-新黃皮酰胺酮[酯(b)]，mp104-105℃，[α]D15＝-31.2(c，1.40，CHCl3)，收率31.8％。酯(a)和酯(b)分別以對甲苯磺酸的甲醇溶液水解，蒸去甲醇，殘余物溶于二氯甲烷，溶液依次以堿和酸的水溶液洗，從6g酯(a)得到3.25g的(-)-(3R，4S，5R)-新黃皮酰胺酮，收率86％，mp164-167℃，[α]D15＝-14.9(c，0.60，CHCl3)；5.5g酯(b)得到3.0g的(+)-(3S，4R，5S)-新黃皮酰胺酮，收率89％，mp167-169℃，[α]D15＝+14.1(c，0.54，CHCl3)。
光活新黃皮酰胺(I2)由光活新黃皮酰胺酮的3-O-四氫吡喃醚還原得到。
(+)-3-O-四氫吡喃基新黃皮酰胺酮0.45g(1.19mmol)的10ml無水四氫呋喃液注入到-25--30℃的2.5ml 1.0M LTBB/THF中，反應(yīng)1小時后，用40ml冰水(含2ml，30％H2O2)分解，用二氯甲烷提取，合併提取液，依次用2N NaOH、飽和NaHCO3及NaCl水溶液洗滌(PH≈8)，無水硫酸鈉干燥，濃縮得油狀物，用3ml無水乙醇及25mg TSOH·H2O，60℃反應(yīng)30分鐘，稍冷后加乙醚5ml，續(xù)冷析出(+)-(3R，4S，5R，6S)-新黃皮酰胺(I2)，mp186-187℃，[α]D18＝+89.5(c，0.20，MeOH)，收率77.9％。
(-)-3-O-四氫吡喃基新黃皮酰胺酮0.379g(1.0mmol)，同上法還原去保護(hù)得(-)-(3S，4R，5S，6R)-新黃皮酰胺(I2)，mp186-187℃，[α]D18＝-88.6(c，0.18，MeOH)，收率77.4％。
實(shí)施例2光活表新黃皮酰胺(I4)的制備(+)-(3S，4R，5S)-新黃皮酰胺酮1.05g(3.56mmol.)，異丙醇鋁2.4g(11.75mmol.)溶于30ml無水無水異丙醇中，加熱攪拌，慢慢蒸出異丙醇及丙酮，并同時等速滴加無水異丙醇，約6.5小時反應(yīng)完成，蒸除大部分溶劑，冷至室溫加60ml水及20ml 3N鹽酸室溫攪拌，析出大量白色固體，用甲醇重結(jié)晶，得(-)-(3S，4R，5S，6S)-表新黃皮酰胺，收率85％，m.p.217-219℃，[α]D24＝-36.5(c，0.128，MeOH)。用甲醇再次重結(jié)晶，m.p.221-222℃，[α]D20＝-37.3(c，0.15，MeOH)。
(-)-(3R，4S，5R)-新黃皮酰胺酮為原料，同上操作，以異丙醇鋁還原，得(+)-(3R，4S，5R，6R)-表新黃皮酰胺，m.p.220-222℃，[α]D20＝+36.5(c，0.16，MeOH)。
實(shí)施例3表黃皮酰胺(I3)的制備(見路線2)A(±)-表黃皮酰胺(I3)的制備將(±)-(4R*，5R*，6R*)-3-去氧表黃皮酰胺(3-去氧I3)90mg(0.032mmol.)，用2.5mL無水THF和0.7mL六甲基磷酰胺溶解(N2保護(hù)下)，冷至-70℃，攪拌5分鐘，用注射器加入1mL(0.32mmol.)新制的二異丙基氨基鋰THF溶液，-60℃至-70℃下攪拌1小時，加入亞磷酸三乙酯53ul，通入依次經(jīng)過氫氧化鉀、濃硫酸、無水氯化鈣處理過的O2，保持溫度在-60℃至-70℃，2小時后停止通氣，反應(yīng)液用0.5mol/L鹽酸在冰水浴下調(diào)至PH值＝3-4，再依次用乙酸乙酯洗、水洗、氯化鈉水溶液洗，無水硫酸鈉干燥，蒸發(fā)溶劑后柱層析得到標(biāo)題化合物40mg，回收原料40mg，收率40％，重結(jié)晶mp193-195℃。
B(-)-(3S，4R，5R，6R)-表黃皮酰胺(I3)和(+)-(3R，4S，5S，6S)-表黃皮酰胺(I3)的制備將(±)-3-去氧表黃皮酰胺(3-去氧I3)600mg溶于30mL無水二氯甲烷中，再將O-乙酰-(-)-R-扁桃酸621mg，4-(二甲基氨基)吡啶26mg及1，3-二環(huán)己基碳酰亞胺880mg依次加入，室溫下攪拌1小時，濾去不溶物，20mL二氯甲烷洗滌濾餅，有機(jī)相用2mol/L鹽酸洗至偏酸，再用飽和碳酸氫鈉水溶液、飽和氯化鈉水溶液洗，無水硫酸鈉干燥過夜，蒸去溶劑得油狀物930mg。硅膠H乙酸乙酯∶石油醚＝1∶2。純化得(4R，5R，6R)-5-O-乙酰-R-扁桃酰基-3-去氧表黃皮酰胺452mg，收率46％，mp212-215℃；和(4S，5S，6S)-5-(O-乙酰-R-扁桃酰)-O-3-去氧表黃皮酰胺370mg，mp 206-209℃，收率40％。
將(4S，5S，6S)-5-(O-乙酰-R-扁桃酰基)-O-3-去氧表黃皮酰胺234mg溶于20mL甲醇和10mL二氯甲烷中，加入碳酸鉀141mg，室溫攪拌12小時。用2mol/L鹽酸中和后減壓蒸去溶劑，再用二氯甲烷溶解，水洗后用飽和氯化鈉水溶液洗一次，無水硫酸鈉干燥，蒸發(fā)溶劑得150mg固體。柱層析純化得(+)-(4S，5S，6S)-3-去氧表黃皮酰胺(3-去氧I3)134mg，白色固體，收率93％。mp239-242℃[α]30D＝+137(c，0.465，甲醇)按上步反應(yīng)同樣的方法，將(4R，5R，6R)-5-O-乙酰-R-扁桃?；?3-去氧表黃皮酰胺以K2CO3/CH3OH處理得到(-)-(4R，5R，6R)-3-去氧表黃皮酰胺(3-去氧I3)，白色固體，收率與上相近，mp237-240℃，[α]30D＝-136(c，0.480，甲醇)。
以(-)-(4R，5R，6R)-3-去氧表黃皮酰胺(3-去氧I3)或(+)-(4S，5S，6S)-3-去氧表黃皮酰胺(3-去氧I3)為原料，應(yīng)用消旋3-去氧表黃皮酰胺(3-去氧I3)引入3位羥基的方法，可分別得到(-)-(3S，4R，5R，6R)-表黃皮酰胺(I3)，mp107-109℃，[α]29D＝-204(c，0.445，甲醇)或(+)-(3R，4S，5S，6S)-表黃皮酰胺(I3)，mp108-110℃[α]29D＝+201(c，0.245，甲醇)。
實(shí)施例4順黃皮酰胺(I5)的制備 路線5順黃皮酰胺(I5)的制備酸性重鉻酸鈉溶液(0.7g重鉻酸鈉，0.7g濃硫酸和5mL水配成)加至0.25g的(+)-(3S，4R，5S)新黃皮酰胺酮的10ml二氯甲烷溶液，在室溫攪拌5小時，加入二氯甲烷提取，提取液依次以碳酸氫鈉溶液和水洗，蒸去溶劑，殘留物以甲醇重結(jié)晶得0.19g，收率78％，mp157-159℃，[α]D15＝-199.6(c，0.75，CHCl3)的(-)-(5S)Δ3，4-新黃皮酰胺酮(-)-(5S)-Δ3，4-新黃皮酰胺酮0.1克溶于含有1ml醋酸，0.01mol硼氫化鈉的10ml二氯甲烷，攪拌，以薄層跟蹤反應(yīng)完畢后，滴入醋酸以分解剩余的硼氫化鈉，然后加入20ml二氯甲烷，反應(yīng)液傾至50ml冰水中，分離出有機(jī)層，依次以飽和碳酸氫鈉水溶液和水洗，蒸去二氯甲烷，殘留物柱層折得0.074g的(-)-(3S，4S，5S)-順黃皮酰胺酮，收率73％，mp145-147℃，[α]D20＝-111.0(C，0.48，CHCl3)。
(-)-(3S，4S，5S)-順黃皮酰胺酮0.08g溶于10ml二氯甲烷，以0.01g硼氫化鈉/甲醇還原，在反應(yīng)完畢后加入30ml二氯甲烷，然后以乙酸處理剩余硼氫化鈉，用碳酸氫鈉和水洗，蒸去溶劑得油狀物，以丙酮和石油醚重結(jié)晶，得(+)-(3S，4S，5S，6R)-順黃皮酰胺(I5)的晶體0.59g，收率77％，mp197-199.5℃，[α]D22＝+6.30(c，0.46，CHCl3)。
以(-)-(3R，4S，5R)-新黃皮酰胺酮為原料，按上述方法反應(yīng)得(+)-(5R)-Δ3，4-新黃皮酰胺酮，收率75％，m.p.154-156℃，[α]15D＝+206.8(c，0.90，CHCl3)；(+)-(3R，4R，5R)-順黃皮酰胺酮，收率76％，m，p，130-132℃，[α]D20＝+116.5(c，40，CHCl3)；(-)-(3R，4R，5R，6S)-順黃皮酰胺(I5)，產(chǎn)率69％，m，p，196-198℃，[α]D22＝-6.07(c，0.67，CHCl3)。
實(shí)施例5順表黃皮酰胺(I7)的制備 R＝-CO-R’(R’＝C1-C6)，四氫吡喃，MEM[(2-甲氧基-乙氧基)-亞甲基)，MOM(甲氧基亞甲基)路線6順表黃皮酰胺(I7)的制備將0.2克6-O-乙酰表新黃皮酰胺溶于20ml二氯甲烷溶劑中，分批滴加重鉻酸鈉的酸性水溶液(Na2Cr2O7/H2SO4＝20mol/7mol)5ml，室溫攪拌至原料點(diǎn)消失，加入20mlCH2Cl2稀釋，分去水層，用水和飽和碳酸氫鈉水溶液分別洗滌有機(jī)層，無水硫酸鈉干燥，蒸去溶劑后得淺棕色固體，柱層折分離(CH2Cl2/CH3OH 50/1)得產(chǎn)物0.163g，mp166.5-168℃，產(chǎn)率65％。
本方法亦適用于相應(yīng)光活體的合成.
由(+)-(3R，4S，5R，6R)-表新黃皮酰胺得(5R，6R)-6-O-乙酰-Δ3，4-表黃皮酰胺，[α]D22＝+80.4°(c，0.47，CHCl3)，mp170-172℃，由(-)-(3S，4R，5S，6S)-表新黃皮酰胺得(5S，6S)-6-O-乙酰-Δ3，4-表黃皮酰胺，[α]D22＝-83.4°(c，0.37，CHCl3)，mp168-170℃。
將0.1g 6-O-乙酰-Δ3，4-表黃皮酰胺溶于20mL二氯甲烷中，室溫下滴加冰醋酸0.5mL，分批加入0.2g硼氫化鈉，攪拌至原料點(diǎn)消失，再加入20mL二氯甲烷稀釋，傾入50mL冰水中，攪拌數(shù)分鐘后分去水層，有機(jī)層用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌2次，無水硫酸鈉干燥，蒸干溶劑得到白色固體，用乙醚/石油醚重結(jié)晶得到白色絲狀晶體0.073g，mp128-130℃，收率71％。
本方法同樣適用于光活體的合成，由光活的原料分別得到(+)-(3R，4R，5R，6R)-6-O-乙酰順表黃皮酰胺，mp128-130℃，[α]D16＝+13.8(c，0.50，CHCl3)；(-)-(3S，4S，5S，6S)-6-O-乙酰順表黃皮酰胺，mp126-128℃，[α]D16＝-14.3(c，0.43，CHCl3)。
將0.07g 6-O-乙酰順表黃皮酰胺溶于10mL甲醇中，加入0.05g無水碳酸鉀，室溫下攪拌至原料點(diǎn)消失，蒸去大部分溶劑后，加入30mL二氯甲烷稀釋，分別用0.1N鹽酸、水和飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌，無水硫酸鈉干燥，蒸去溶劑得到白色固體，用丙酮/乙醚/石油醚重結(jié)晶得到白色絲狀固體0.04g，mp191-193℃，收率65％。
本方法同樣適用于光活體的合成，由光活的原料可得到(-)-(3R，4R，5R，6R)順表黃皮酰胺(I7)，mp197-199℃，[α]D15＝-38.7(c，0.385，CHCl3)；(+)-(3S，4S，5S，6S)順表黃皮酰胺(I7)，mp199-202℃，[α]D16＝+39.7(c，0.785，CHCl3)。
實(shí)施例6順新黃皮酰胺(I6)和順表新黃皮酰胺(I8)的制備 路線7順新黃皮酰胺(I6)和順表新黃皮酰胺(I8)的制備A順新黃皮酰胺酮的制備方法一，以偶氮二甲酸二乙酯/氯乙酸/三苯磷轉(zhuǎn)位的方法制備順新黃皮酰胺酮將2.10g mL的偶氮二甲酸二乙酯(DEAD)漸漸滴入1.5g(-)-(3R，4S，5R)-新黃皮酰胺酮，2.6g三苯磷和0.99g氯乙酸的甲苯溶液中，反應(yīng)液在室溫下攪拌12小時，然后加入乙酸乙酯和石油醚的混合液，過濾，濾餅以乙酸乙酯洗滌，合并濾液和洗滌液，以水洗后蒸去溶劑，殘余物以750mg對甲苯磺酸的3mL甲醇溶液在室溫下攪拌18小時，蒸去甲醇，殘余物溶于二氯甲烷，有機(jī)層依次用碳酸氫鈉水溶液、飽和氯化鈉水溶液洗，蒸去溶劑，殘余物經(jīng)柱層析分離后重結(jié)晶得到1.05g(-)-(3S，4S，5R)-順新黃皮酰胺酮，mp145.8-146.9℃，[α]D25＝-138.6(c，0.81，CHCl3)。
以(+)-(3S，4R，5S)-新黃皮酰胺酮為原料，按上述方法，得到(+)-(3R，4R，5S)-順新黃皮酰胺酮，mp143.8-145.7℃，[α]D25＝+139.8(c，1.74，CHCl3)。
方法二，以碳酸銫/冠醚轉(zhuǎn)位的方法制備順新黃皮酰胺酮消旋新黃皮酰胺酮1g溶于10mL無水吡啶中，冰水浴冷卻下加入0.42g甲磺酰氯，然后在室溫下攪拌至反應(yīng)完全，加入50mL二氯甲烷稀釋反應(yīng)液，以稀鹽酸中和，然后水洗，無水硫酸鈉干燥，蒸去溶劑得到殘余物1.18g，收率94％。
取上述磺酸酯0.5g溶于30mL無水苯中，加入4.1g醋酸銫和2.4g二苯酰-18-冠醚-6，加熱洄流至反應(yīng)完全，冷卻濃縮除去苯，柱層析得3-O-乙酰順新黃皮酰胺酮0.39g，油狀物，收率87％。
以上述3-O-乙酰順新黃皮酰胺酮0.27g溶于40mL甲醇中，加入對甲苯磺酸118mg，加熱洄流至反應(yīng)完全，蒸去甲醇，殘余物溶于二氯甲烷，依次以飽和碳酸氫鈉，飽和食鹽水溶液洗，無水硫酸鈉干燥，濃縮得到固體0.21g收率89％，乙酸乙酯/石油醚重結(jié)晶得到消旋順新黃皮酰胺酮，mp189.3-192.4℃。
本法以光活新黃皮酰胺酮為原料得到光活順新黃皮酰胺酮，結(jié)果與方法一相同。
B順新黃皮酰胺酮還原制備順表新黃皮酰胺(I8)消旋順新黃皮酰胺的制備將0.15g(0.5mmol)(±)順新黃皮酰胺酮溶于20ml甲醇中，攪拌下分批加入0.41g(1.1mmol)硼氫化鈉，室溫攪拌3小時，TLC(乙酸乙酯/石油醚＝2∶1)監(jiān)測原料點(diǎn)消失，并有Rf值0.26和0.33兩點(diǎn)生成，用醋酸中和，并傾入到50mlCH2Cl2/20ml冰水?dāng)嚢枰褐?，然后分出有機(jī)層，分別用水、飽和NaHCO3洗滌，無水Na2SO4干燥，蒸除溶劑得白色固體0.134g，柱層分離，得前組分(±)順新黃皮酰胺0.04g，收率26.5％，用乙醚重結(jié)晶，得白色絲狀結(jié)晶，m.p164.5-166℃，和后組分(±)順表新黃皮酰0.075g，收率49.7％，甲醇重結(jié)晶得白色片晶，m.p252-254℃，光活順新黃皮酰胺的制備以250mg(+)-3R，4R，5S-順新黃皮酰胺酮為原料，同上操作，用硼氫化鈉還原，得(+)-(3R，4R，5S，6R)-順新黃皮酰胺73mg，收率29％，m.p164.5-166℃，[α]D20＝+66.7(c，0.525，MeOH)；同時還得到3R，4R，5S，6S-順表新黃皮酰胺132mg，收率52.45％，m.p248-250℃，[α]D22+19.2(c，0.525，MeOH)以250mg(-)-3S，4S，5R-順新黃皮酰胺酮為原料，同上操作，用硼氫化鈉還原，得(-)-(3S，4S，5R，6S)-順新黃皮酰胺67mg，收率26.6％，m.p168-170℃，[α]D22＝-65.3(c，0.32，MeOH)；同時還得到(-)-(3S，4S，5R，6R)-順表新黃皮酰胺134mg，收率53.24％m.p250-252℃，[α]D22＝-20.75(c，0.265，MeOH)上述(-)-(3S，4S，5R)-順新黃皮酰胺酮100mg溶于5mL異丙醇鋁中，加入160mg異丙醇鋁，在100℃的油浴中加熱，攪拌蒸出異丙醇和丙酮，并等速補(bǔ)加無水異丙醇，歷時數(shù)小時后反應(yīng)完畢，蒸去大部分異丙醇，加水以分解異丙醇鋁，以6N的鹽酸酸化，冰水浴冷卻析出90mg的片晶，薄層層析顯示產(chǎn)物中順表新黃皮酰胺(I8)和順新黃皮酰胺(I6)的比率約為3/1，總收率90％，以甲醇重結(jié)晶得到(-)-(3S，4S，5R，6R)-順表新黃皮酰胺(I8)，mp271.1-273℃，[α]D30＝-33.3(c，0.34，DMSO)
以(+)(3R，4R，5S)-順新黃皮酰胺酮為原料，按上述方法還原可得到(+)-(3R，4R，5S，6S)-順表新黃皮酰胺(I8)，mp275-277℃，[α]D30＝+31.2(c，0.31，DMSO)表二黃皮酰胺16個光活異構(gòu)體的常數(shù)

藥理實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)例1本發(fā)明化合物對人胚胎腦神經(jīng)干細(xì)胞克隆形成率的影響目的和意義神經(jīng)干細(xì)胞數(shù)量的增加或壽命的延長對增加神經(jīng)元和防止神經(jīng)元丟失具有特別重要的意義。我們建立人胚胎腦神經(jīng)干細(xì)胞的特殊培養(yǎng)結(jié)合細(xì)胞克隆形成的方法檢測黃皮酰胺16個光活異構(gòu)體是否具有促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞增殖的作用。
方法人胚胎腦神經(jīng)干細(xì)胞在含有表皮生長因子(EGF)20ng/ml、堿性成纖維細(xì)胞生長因子(FGF-2)20ng/ml、N-2添加劑的DMEM/F12培養(yǎng)基(購于BIBCO公司)和在5％CO2和37℃培養(yǎng)箱中連續(xù)培養(yǎng)。用0.1％胰蛋白酶溶液將人胚胎腦神經(jīng)干細(xì)胞的神經(jīng)球消化成單細(xì)胞懸液，離心1000rpm×5min，再用培養(yǎng)基沖洗，細(xì)胞經(jīng)接種于96孔培養(yǎng)板中，神經(jīng)干細(xì)胞1×103細(xì)胞/孔，每組4孔，連續(xù)培養(yǎng)。24h后加藥，16種光學(xué)活性的黃皮酰胺異構(gòu)體(No.1-No.16名稱見表1)的給藥劑量為1μM，每周換一次含藥的低營養(yǎng)培養(yǎng)基(FGF-22ng/ml、EGF 2ng/ml和N-2添加劑的DMEM/F12培養(yǎng)基)，每周兩次在顯微鏡下觀測細(xì)胞生長狀態(tài)，在第3周，4周，6周分別在顯微鏡下計數(shù)細(xì)胞克隆數(shù)，用t檢驗(yàn)與對照組進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理。
結(jié)果見表1和附圖1表1-A.16種化合物對人胚胎腦神經(jīng)干細(xì)胞克隆形成的影響

●p＜0.05(single tail T test)；#p＜0.05(double tail T test)表1-B.本發(fā)明化合物對人胚胎腦神經(jīng)干細(xì)胞克隆形成的影響


●*P＜0.05；#P＜0.01。
結(jié)論本發(fā)明的16種光學(xué)活性黃皮酰胺異構(gòu)體中有三種黃皮酰胺(異構(gòu)體I2((+)新黃皮酰胺))；I4((-)表新黃皮酰胺)和I6((-)順新黃皮酰胺)具有明顯促進(jìn)人胚胎腦神經(jīng)干細(xì)胞克隆形成的作用，這對老年性神經(jīng)退行性疾病如老年性癡呆等具有特別重要的意義。
實(shí)驗(yàn)例2、化合物對神經(jīng)細(xì)胞胞漿游離鈣的影響目的和意義鈣作為第二信使在細(xì)胞活動中起著重要作用，胞漿游離鈣濃度的變化是聯(lián)系許多生理/病理刺激和細(xì)胞內(nèi)效應(yīng)器反應(yīng)之間的樞紐，化合物對胞漿游離鈣濃度的影響在藥物篩選中有著重要意義。
方法取新生大鼠，分離大腦皮層神經(jīng)細(xì)胞，制備單細(xì)胞懸液106細(xì)胞/ml，在37度條件下，細(xì)胞經(jīng)熒光探針(Fura-2/AM，購于SIGMA公司)5μM劑量進(jìn)行負(fù)載40min，在日本SHIMADZU RF-5000熒光光密度測定儀中測定細(xì)胞內(nèi)鈣離子的熒光強(qiáng)度，在靜息時和加入藥物37℃溫育5分鐘，以及50mM KCl刺激后的胞漿游離鈣濃度，分別計算加藥5分鐘和加入KCl后的胞漿游離鈣升高幅度，每種化合物重復(fù)做5-8次(N＝5～8)，結(jié)果合并計算出每個化合物的細(xì)胞內(nèi)游離鈣濃度。
結(jié)果見表2表2.16個化合物對神經(jīng)細(xì)胞胞漿游離鈣的影響


本發(fā)明的化合物中有6黃皮酰胺(I1(+)黃皮酰胺)；(I2(+)新黃皮酰胺)；(I3(-)表黃皮酰胺)；(I6(-)順新黃皮酰胺)；(I7(-)順表黃皮酰胺)；(I8(-)順表新黃皮酰胺)有升高胞漿游離鈣水平的趨勢。鈣作為第二信使在細(xì)胞活動中起著重要作用，胞漿游離鈣濃度的變化與許多生理/病理刺激和細(xì)胞內(nèi)效應(yīng)器的反應(yīng)具有密切關(guān)系。
實(shí)驗(yàn)例3本發(fā)明化合物對大鼠海馬長時程增強(qiáng)(LTP)的影響目的和意義黃皮酰胺在多種行為學(xué)實(shí)驗(yàn)中表現(xiàn)出明顯的促智作用，但其對突觸傳遞活動的影響目前還不清楚，而突觸是神經(jīng)系統(tǒng)中細(xì)胞間信息傳遞和加工的基礎(chǔ)環(huán)節(jié)，其功能活動和形態(tài)結(jié)構(gòu)上的改變是學(xué)習(xí)記憶活動的神經(jīng)生物學(xué)基礎(chǔ)，因此，本實(shí)驗(yàn)采用電生理學(xué)技術(shù)從突觸水平對黃皮酰胺的促智作用進(jìn)行研究。
方法成年雄性SD大鼠(5只/組)以20％(w/v)烏拉坦(1.0g·kg-1，ip)麻醉并固定于立體定位儀上。參照Pellegrino大鼠腦立體定位圖譜，在海馬齒狀回顆粒細(xì)胞層埋藏記錄電極(外覆絕緣層，尖端裸露0.2mm，直徑0.2mm的不銹鋼針)。側(cè)腦室給予表9所示的4對光學(xué)活性的黃皮酰胺。刺激電極(兩枚間距0.5mm，外覆聚四氟乙烯絕緣層，尖端裸露0.2mm，直徑0.15mm的不銹鋼針構(gòu)成)埋植于大鼠內(nèi)嗅區(qū)穿通路(perforant path，PP)纖維間。電子刺激器產(chǎn)生持續(xù)的電流刺激后，經(jīng)刺激隔離器和刺激電極輸向PP。調(diào)整刺激電極的位置，直到觀察到典型的興奮性突觸后電位(EPSP)。電流通過放大器放大后，經(jīng)過計算機(jī)DataWave軟件處理。刺激強(qiáng)度則采用引起最大群峰電位(Populationspike，PS)所需刺激強(qiáng)度的1/2。在整個實(shí)驗(yàn)過程中，每30秒鐘給予一次測試刺激頻率，記錄群峰電位幅度(Population spike amplitude，PSA)，根據(jù)公式(PSA/基礎(chǔ)幅度值)計算出相對的PSA百分率。
結(jié)果見表3表3.16種光學(xué)活性黃皮酰胺對大鼠海馬長時程增強(qiáng)(LTP)的結(jié)果

結(jié)論由實(shí)驗(yàn)結(jié)果(表達(dá))可知，本發(fā)明16種光學(xué)活性黃皮酰胺異構(gòu)體中有4種黃皮酰胺異構(gòu)體((I6(+)順新黃皮酰胺)；(I5(-)順黃皮酰胺)；(I1(-)黃皮酰胺)；(I3(+)表黃皮酰胺))對大鼠海馬長時程增強(qiáng)(LTP)具有明顯的增強(qiáng)作用，(P＜0.05vs control，n＝5)。本發(fā)明化合物對神經(jīng)細(xì)胞基礎(chǔ)突觸傳遞有增強(qiáng)作用，說明本發(fā)明的化合物有促智作用。
權(quán)利要求
1.如通式(I)所示的黃皮酰胺光活立體異構(gòu)體化合物 其特征在于I2(3R，4S，5R，6S) (+)新黃皮酰胺(3S，4R，5S，6R) (-)新黃皮酰胺I3(3R，4S，5S，6S) (+)表黃皮酰胺(3S，4R，5R，6R) (-)表黃皮酰胺I4(3R，4S，5R，6R) (+)表新黃皮酰胺(3S，4R，5S，6S) (-)表新黃皮酰胺I5(3S，4S，5S，6R) (+)順黃皮酰胺(3R，4R，5R，6S) (-)順黃皮酰胺I6(3S，4S，5S，6S) (+)順表黃皮酰胺(3R，4R，5R，6R) (-)順表黃皮酰胺I7(3R，4R，5S，6R) (+)順新黃皮酰胺(3S，4S，5R，6S) (-)順新黃皮酰胺I8(3R，4R，5S，6S) (+)順表新黃皮酰胺(3S，4S，5R，6R) (-)順表新黃皮酰胺
2.如權(quán)利要求1所述光活立體異構(gòu)體化合物I2、I4、I5、I6、I7和I8的制備方法，其特征在于，包括如下步驟 路線1其中(a)堿催化環(huán)合可用NaOCH3、(CH3)4NOH或二異丙基胺基鋰(LDA)；(b)拆分劑(-)-薄荷醇氧乙酰氯、N保護(hù)的氨基酸酰氯；(c)羥基的保護(hù)，二氫吡喃，乙酰氯/吡啶或乙酸酐/吡啶；(d)還原C6酮的還原劑NaBH4或L-selectride；(e)還原C6酮的還原劑Al(i-C3H7O)3；(f)氧化C3-OH的氧化劑K2Cr2O7/H+、或KMnO4+CuSO4、MnO2orDMSO/(COCl)2；(g)還原Δ3，4雙鍵的還原劑NaBH4/H+、NaBH4/AlCl3或催化氫化；(h)C3-OH的構(gòu)型反轉(zhuǎn)，用偶氮甲酸二異丙酯(DIAD)或偶氮甲酸二乙酯(DEAD)/TPP，H+(Mitsunobu method)或以CsOAc/18-冠醚-6完成；本路線均以已知的消旋或光活的N-甲基-N-苯甲酰基-3-苯基縮水甘油酰胺(A)為原料。若以光活的化合物A為原料，則可略去步驟2(b)拆分這一步。
3.如權(quán)利要求1所述光活立體異構(gòu)體化合物I3(C6差向異構(gòu)體表黃皮酰胺)的制備方法，其特征在于，包括如下步驟 路線2消旋3-去氧表黃皮酰胺(3-去氧-I3)引入C3位羥基得到消旋表黃皮酰胺(I3)；或先拆分得到3-去氧-I3的光活體，然后引羥得到光活的表黃皮酰胺(I3)；(1)3-去氧表黃皮酰胺(3-去氧-I3)中引入3位羥基，采用的條件是選自二異丙基胺基鋰(LDA)/O2/亞磷酸三乙酯(P(OEt)3)/六甲基磷酰胺(HMPT)/THF；(2)3-去氧表黃皮酰胺(3-去氧-I3)的拆分，拆分劑選自O(shè)-乙酰-R-扁桃酸、O-乙酰-S-扁桃酸、薄荷醇氧乙酸、N-保護(hù)的氨基酸；(3)水解拆分劑采用K2CO3/CH3OH的條件。
4.一種藥物組合物，其特征在于，含有有效劑量的如權(quán)利要求1所述的任一化合物，以及藥效學(xué)上可接受的載體。
5.如權(quán)利要求1所述的化合物在制備促智，抗衰老作用藥物的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及羥芐基、羥基、苯基取代γ－內(nèi)酰胺(黃皮酰胺)的立體異構(gòu)體，光活的立體異構(gòu)體，及它們的制備方法，以它們作為活性物質(zhì)的藥物組合物，和它們在制備促智，抗衰老藥物的應(yīng)用。
文檔編號C07D207/267GK1618790SQ20031012387
公開日2005年5月25日 申請日期2003年12月31日 優(yōu)先權(quán)日2002年12月31日
發(fā)明者黃量, 張均田, 吳克美, 鄭國鈞, 馮志強(qiáng), 陳世明 申請人:中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所