專(zhuān)利名稱(chēng)：制備取代的2-氨基-3-(2-氨基-苯硫基)-丙酸的酶催化方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種制備式I化合物的新的酶催化方法， 其中R1是氫或烷基；R2是氨基保護(hù)基團(tuán)；每個(gè)R3獨(dú)立地是鹵素、羧基、烷氧羰基、鏈烯氧基羰基或芐氧基羰基；n是1或2。
在EP0407033A中描述了將不是2-鹵素丙酸的2-取代的酸的酯外消旋混合物經(jīng)酶催化的立體選擇性地水解成相應(yīng)的對(duì)映異構(gòu)酸。在皺落假絲酵母(Candida rugosa)脂肪酶同工酶、有機(jī)溶劑(例如甲苯)和還原劑的存在下進(jìn)行該反應(yīng)。該方法對(duì)立體選擇性地生產(chǎn)S-酮洛芬、S-布洛芬、S-非諾洛芬、S-2-苯基丙酸和S-吲哚洛芬尤其有用。
在EP0178553中描述了用胰凝乳蛋白酶通過(guò)選擇性水解相應(yīng)的烷基酯制備芳族取代的L-氨基酸的方法。
在DE2804892中描述了用絲氨酸蛋白酶、特別是枯草蛋白酶Carlsberg水解N-?；?DL-蘇氨酸酯制備光學(xué)純的N-?；?L-蘇氨酸的方法。
但是，迄今為止，文獻(xiàn)中還沒(méi)有描述過(guò)制備式I化合物的酶催化反應(yīng)方法。
通過(guò)化學(xué)水解合成式I化合物的嘗試導(dǎo)致低產(chǎn)量和起始物質(zhì)的分解。
所以，本發(fā)明的目的是提供一種新的、創(chuàng)造性的制備取代的2-氨基-3-(2-氨基-苯硫基)-丙酸的方法。
可通過(guò)本發(fā)明的方法生產(chǎn)式I化合物，本發(fā)明提供了一種新的制備式I的取代的2-氨基-3-(2-氨基-苯硫基)-丙酸的方法， 其中R1是氫或烷基；R2是氨基保護(hù)基團(tuán)；每個(gè)R3獨(dú)立地是鹵素、羧基、烷氧羰基、鏈烯氧基羰基或芐氧基羰基；n是1或2，該方法包括在含有一種有機(jī)共溶劑的含水體系中使式II化合物與蛋白酶反應(yīng)， 其中R1、R2、R3和n如上所定義，R4是烷基或芐基。
使用本文描述的酶催化方法使得在溫和的反應(yīng)條件下選擇性地水解酯成為可能。
在本文所給的結(jié)構(gòu)式中，楔形鍵 表示取代基在紙平面的上方。
本文所用術(shù)語(yǔ)“烷基”表示含有1到12個(gè)碳原子、任選取代的直鏈或支鏈的烴殘基，如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、仲丁基、異丁基、叔丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基、十一烷基和十二烷基，包括它們的不同異構(gòu)體。
烷基鏈的適宜的取代基可以是選自1-3個(gè)鹵素原子(如氟或氯)和C1-4-烷氧基(如甲氧基或乙氧基)。取代的烷基的實(shí)例是2-氯乙基、2-氟乙基、2，2，2-三氟乙基或2-甲氧基乙基。
R1中烷基如上定義并且優(yōu)選是含有1到7個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烴殘基。R1中烷基更優(yōu)選甲基、乙基、丙基、異丙基、正丁基、仲丁基、異丁基或叔丁基。
R4中烷基如上定義并且優(yōu)選是含有1到7個(gè)碳原子的任選取代的直鏈或支鏈烴殘基。烷基鏈的適宜取代基可以選自1-3個(gè)鹵素原子(如氟或氯)和C1-4-烷氧基(如甲氧基或乙氧基)。取代的烷基的實(shí)例是2-氯乙基、2-氟乙基、2，2，2-三氟乙基或2-甲氧基乙基。R4中烷基更優(yōu)選是含有1到7個(gè)或1到4個(gè)碳原子的直鏈烴殘基。其實(shí)例是甲基、乙基、丙基、正丁基、正戊基、正己基、正庚基。優(yōu)選的實(shí)例是甲基、乙基或丙基。R4中最優(yōu)選的烷基是甲基。
本文所用術(shù)語(yǔ)“氨基保護(hù)基團(tuán)”指如在“有機(jī)合成中的保護(hù)基團(tuán)”(GreenT.Protective Groups in Organic Synthesis，第5章，John Wiley和Sons，Inc.(1981)，218-287頁(yè))中所描述的肽化學(xué)中所用的那些基團(tuán)，如烯丙氧基羰基基團(tuán)(ALLOC)、低級(jí)烷氧基羰基基團(tuán)(例如叔丁氧基羰基(t-BOC))、取代的低級(jí)烷氧基羰基基團(tuán)(例如三氯乙氧基羰基)、任選取代的芳氧基羰基基團(tuán)(例如對(duì)-硝基芐氧基羰基、芐氧基羰基(Z)或苯氧基羰基)、烷酰基基團(tuán)(例如甲?；?、乙酰基)、芳?；鶊F(tuán)(例如苯甲酰基)、鹵代烷?；鶊F(tuán)(例如三氟乙?；?或甲硅烷基保護(hù)基團(tuán)(例如叔丁基二甲基甲硅烷基)。優(yōu)選的氨基保護(hù)基團(tuán)是芐氧基羰基、叔丁氧基羰基、烯丙氧基羰基或苯甲?；?，特別優(yōu)選的氨基保護(hù)基團(tuán)是叔丁氧基羰基。
術(shù)語(yǔ)“烷氧基羰基”表示連接到羰基基團(tuán)(＞C＝O)的C1-7-烷氧基。烷氧基的實(shí)例是甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、1-仲丁氧基、異丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、己氧基和庚氧基，包括它們的不同異構(gòu)體。烷氧基羰基基團(tuán)的實(shí)例是甲氧基羰基、乙氧基羰基、丙氧基羰基、叔丁氧基羰基等。優(yōu)選的低級(jí)烷氧基羰基是叔丁氧基羰基。
術(shù)語(yǔ)“鏈烯氧基羰基”表示連接到羰基基團(tuán)(＞C＝O)的鏈烯氧基。本文所用術(shù)語(yǔ)“鏈烯基”表示具有2到8個(gè)碳原子、優(yōu)選2到4個(gè)碳原子并且具有至少一個(gè)烯烴雙鍵的未取代或取代的烴鏈基，包括它們的不同異構(gòu)體。實(shí)例是乙烯基、烯丙基或異丙烯基。
R3的優(yōu)選的“鏈烯氧基羰基”是烯丙氧基羰基或異丙烯氧基羰基，更優(yōu)選的是烯丙氧基羰基。
術(shù)語(yǔ)鹵素表示氟、氯、溴或碘。優(yōu)選的鹵素是溴。
數(shù)字n可以是1或2，優(yōu)選數(shù)字n是1。
取代基R3可以在任何可能的位置連接到苯環(huán)。如果n是1，R3可以在苯環(huán)的3、4、5或6位。優(yōu)選地，R3取代基處于4位。如果n是2，兩個(gè)R3取代基可以相互獨(dú)立地位于苯環(huán)的3、4、5或6位。
本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案是一種制備式I化合物的方法，其特征是式II化合物是 其中R1、R2、R3、R4和n如上定義。
在本發(fā)明進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，R1是氫或烷基。
更優(yōu)選R1是氫；R2是氨基保護(hù)基團(tuán)。
更優(yōu)選R2是氨基保護(hù)基團(tuán)；每個(gè)R3獨(dú)立地是鹵素、羧基或鏈烯氧基羰基；R4是烷基或芐基。
更優(yōu)選R4是烷基；n是1或2。
更優(yōu)選n是1。
在本發(fā)明另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，在含有有機(jī)共溶劑的含水體系中，在pH 4.0-10、優(yōu)選6.0-8.5下用蛋白酶實(shí)施該方法。
在將式II的底物酶催化水解后，通過(guò)酸化和隨后萃取分離對(duì)映體純的式I產(chǎn)物。
式II化合物可用于L或D對(duì)映異構(gòu)體的任何可能的混合物中。優(yōu)選用外消旋混合物或者只含有L-異構(gòu)體的混合物完成轉(zhuǎn)化。
當(dāng)使用異構(gòu)體混合物時(shí)，在酸化反應(yīng)介質(zhì)之前通過(guò)萃取步驟除去未反應(yīng)的D-酯并隨后萃取L-酸。
催化反應(yīng)的適宜的酶是蛋白酶，優(yōu)選微生物來(lái)源的廉價(jià)散裝蛋白酶，更優(yōu)選為芽孢桿菌蛋白酶(象Novo Nordisk生產(chǎn)的Savinase)或枯草蛋白酶例如Novo Nordisk的枯草蛋白酶Carlsbeg(Alkalase)或者Solvay生產(chǎn)的枯草蛋白酶(蛋白酶-L)或者曲霉蛋白酶(象Amano的Prozyme 6)或者Tritachium蛋白酶(Fluka的Proteinase K)。該反應(yīng)的作為催化劑的最優(yōu)選的酶是枯草蛋白酶Carlsberg(例如Norvo Nordisk的Alcalase)。
作為備選方案，這些酶可以以固定的形式使用。
反應(yīng)在含有有機(jī)共溶劑如不水混溶的溶劑或者水可混合的有機(jī)共溶劑的含水體系中進(jìn)行。水不混溶的溶劑可以以任何比例用于水相中，優(yōu)選的比例是25-75％(v/v)。水混溶的有機(jī)共溶劑的用量可以高至酶的耐受量，通常是5-25％(v/v)，但是不能超過(guò)50％(v/v)，例如對(duì)于枯草蛋白酶Carlsberg就是如此。
反應(yīng)的反應(yīng)溫度為0℃到50℃，優(yōu)選反應(yīng)溫度是15℃到40℃之間，最優(yōu)選的反應(yīng)溫度是15℃到25℃之間。
對(duì)于水相，可以使用本領(lǐng)域進(jìn)行生化轉(zhuǎn)化的常用緩沖溶液，例如最高1M，優(yōu)選約5mM到50mM的磷酸鈉或磷酸鉀緩沖液。這種緩沖溶液還可以含有一種常用鹽如氯化鈉或氯化鉀，以及LiSCN、Na2SO4或一種多羥基醇例如糖；該鹽濃度最高1M。
適宜的有機(jī)共溶劑是技術(shù)上常用的溶劑。實(shí)例是醚(例如四氫呋喃(THF)、二噁烷或叔丁基甲基醚(TBME))、低級(jí)醇、酯(例如乙酸乙酯)、極性非質(zhì)子溶劑(例如二甲亞砜(DMSO)、二甲基乙酰胺、N，N-二甲基甲酰胺(DMF)或丙酮)。優(yōu)選的有機(jī)共溶劑是四氫呋喃(THF)、叔丁基甲基醚(TBME)和乙酸乙酯。
本文所用術(shù)語(yǔ)“低級(jí)醇”指具有一個(gè)羥基基團(tuán)、含有1到8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基殘基，例如甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、丁醇、異丁醇、叔丁醇、戊醇、己醇、庚醇或辛醇，優(yōu)選甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、丁醇、異丁醇、叔丁醇，更優(yōu)選的醇是甲醇或乙醇。
底物適于應(yīng)用的總濃度為0.1-25％(w/w)的溶液。更優(yōu)選的總濃度是1-10％。
加入酶后，在劇烈攪拌下，通過(guò)可控地加入堿使反應(yīng)混合物的pH保持在選定的pH值。優(yōu)選的堿是水性NaOH或KOH溶液。
終止反應(yīng)后，首先進(jìn)行相分離，然后通過(guò)用適宜的酸酸化、隨后用適宜的有機(jī)溶劑萃取來(lái)對(duì)式I的對(duì)映異構(gòu)純的產(chǎn)物進(jìn)行處理。
根據(jù)本發(fā)明合成高對(duì)映異構(gòu)純的式I化合物，高對(duì)映異構(gòu)純指對(duì)映體過(guò)量90％或更高，優(yōu)選對(duì)映體過(guò)量95％或更高。
根據(jù)下面的反應(yīng)方案或者本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的常用方法制備式II化合物。
反應(yīng)方案1 其中R1、R2、R3和R4如式I和式II化合物所描述的。
在反應(yīng)方案1中，式a)的取代的2-硝基氟代芳香族化合物和式b)的受保護(hù)的半胱氨酸(例如BOC-半胱氨酸-甲基酯)反應(yīng)，得到相應(yīng)的式c)的硝基-苯基取代的受保護(hù)的半胱氨酸。通常在堿性條件下(含有一種二異丙胺，例如乙基二異丙胺)，合適的有機(jī)溶劑(如己烷、二異丙基醚、乙酸乙酯、甲醇、乙醇、丙醇、二氯甲烷、DMF或DMSO)中進(jìn)行該反應(yīng)。反應(yīng)溫度優(yōu)選在-30℃到+150℃之間。最優(yōu)選地，在110℃的溫度下、在乙基二異丙胺存在下、于乙醇中與BOC-半胱氨酸-甲基酯進(jìn)行該反應(yīng)。
式a)化合物和式b)的受保護(hù)的半胱氨酸(例如BOC-半胱氨酸-甲基酯)可通過(guò)商業(yè)途徑得到或者按照有機(jī)化學(xué)教科書(shū)(例如J.March(1992)，“Advanced Organic ChemistryReactions，Mechanisms，andStructure”，第四版，John Wiley & Sons)中已知的方法合成。
進(jìn)行該反應(yīng)的第二步，在該步驟中式c)的硝基-苯基取代的受保護(hù)的半胱氨酸的硝基被還原成相應(yīng)的式II的氨基-苯基取代的受保護(hù)的半胱氨酸。根據(jù)本領(lǐng)域中已知的方法例如有機(jī)化學(xué)教科書(shū)(例如J.March(1992)，“Advanced Organic ChemistryReactions，Mechanisms，and Structure”，第四版，John Wiley & Sons)中已知方法進(jìn)行還原反應(yīng)。優(yōu)選在含有有機(jī)溶劑(如己烷、二異丙基醚、乙酸乙酯、甲醇、乙醇、丙醇、二氯甲烷、DMF或DMSO，優(yōu)選甲醇)的酸性介質(zhì)中與合適的還原劑(例如鋅和任選的NH4Cl)進(jìn)行該反應(yīng)。反應(yīng)溫度優(yōu)選在-30℃到+150℃之間。
可以用R1Hal烷基化式II的氨基-苯基取代的受保護(hù)的半胱氨酸化合物的NH2-基團(tuán)，其中R1如上定義，Hal為氯或溴。
式II-a和II-b化合物(見(jiàn)下面)是新的中間產(chǎn)物，因此也是本發(fā)明的主題。
或
式I化合物是合成1，5-苯并硫氮雜類(lèi)的通用結(jié)構(gòu)單元。這種苯并硫氮雜骨架被用作各種酶(蛋白酶、白介素-1β-轉(zhuǎn)化酶、彈性蛋白酶或血管緊張肽-轉(zhuǎn)化酶抑制劑，但是也作為GPCR拮抗劑(縮膽囊素、血管緊張肽II受體)中的受限二肽模擬物。可能的不同用途在G.C.Morton等，Tet.Lett.，41(2000)3029-3033中描述。
根據(jù)反應(yīng)方案2制備苯并硫氮雜類(lèi) 其中，R1、R2、R3、R4和n如式I和式II化合物所描述的。
加熱或者在適當(dāng)試劑的存在下(例如在G.C.Morton等，Tet.Lett.，41(2000)3029-3033中所描述的)進(jìn)行式I化合物的環(huán)化反應(yīng)以得到式III的苯并硫氮雜類(lèi)。優(yōu)選在合適的溶劑如己烷、二甲苯、二異丙基醚、乙酸乙酯、甲醇、乙醇、丙醇、二氯甲烷、DMF或DMSO中，用碳二亞胺進(jìn)行該反應(yīng)。反應(yīng)溫度優(yōu)選-30℃到+150℃。優(yōu)選在EDAC(1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽)的存在下、在DMF中、于室溫下進(jìn)行該反應(yīng)。
在下面的實(shí)施例中所用的縮寫(xiě)具有下面的含義。
ISP-MS 離子噴霧陽(yáng)性質(zhì)譜ISN-MS 離子噴霧陰性質(zhì)譜EI-MS 電子沖擊質(zhì)譜
SFC超臨界液相色譜NMR核磁共振譜IR 紅外光譜HV 高真空min分鐘實(shí)施例1(起始物質(zhì)的制備)(S)-3-(4-溴-2-硝基-苯硫基)-2-叔丁氧基羰基氨基-丙酸甲基酯 按照M.K.Schwarz等(J.Org.Chem.1999，64，2219-2231)描述的方法進(jìn)行反應(yīng)。向市售BOC-半胱氨酸-甲基酯(27.38g，116.35mmol，1eq)和N-乙基二異丙基胺(DIPEA)(4.4mL，25.75mmol，2.5eq)的EtOH(310ml)溶液加入5-溴-2-氟硝基苯(25.62g；116.45mmol；1eq)并在110℃下加熱3h。通過(guò)HPLC監(jiān)視反應(yīng)的進(jìn)程。蒸發(fā)溶劑得到紅褐色油狀物，其在水(600ml)和乙酸乙酯(3×300ml)之間分配。干燥(Na2SO4)并蒸發(fā)得到粗產(chǎn)物，用環(huán)己烷將其重結(jié)晶得到黃色晶體(38.75g，77％)。分析數(shù)據(jù)1H-NMR(CDCl3，400MHz)1.430(s，9H，O(CH3))；3.350(dd，1H，H(4′)，J4’-4″＝5.2Hz，J4′-5＝14.4Hz)；3.500(dd，1H，H(4″)，J4″-4′＝5.2Hz，J4″-5＝14.4Hz)；3.755(s，3H，OCH3)；4.621(m，1H，H(5))；5.301(d，1H，H(6)，J6-5＝6.4Hz)；7.449(d，1H，H(1)，J1-2＝8.8Hz)；7.670(dd，1H，H(2)，J1-2＝8.8Hz，J2-3＝2.0Hz)；8.278(d，1H，H(3)，J2-3＝2Hz).IR3353cm-1(NH)；1765cm-1(酯-C＝O)；1686cm-1(氨基甲酸酯-C＝O)；1546cm-1(酰胺-C＝O)；1460和1329cm-1(NO2)；1220cm-1(酯).MSm/z＝452.3[M+NH4+]，用79Br；m/z＝454.3[M+NH4+]，用81Br；m/z＝457.3[M+Na+]，用79Br；m/z＝459.3[M+Na+]，用81Br。Rf＝0.38，在乙酰乙酯/己烷(1∶2)中，在SiO2上。
實(shí)施例2(S)-3-(2-氨基-4-溴-苯硫基)-2-叔丁氧基羰基氨基-丙酸甲基酯 按照J(rèn).Slade等(J.Slade et.al.，J.Med.Chem.1985，28，1571-1521)所描述的方法進(jìn)行反應(yīng)。加入上面硝基化合物(40.34g，92.6mmol，1eq)和NH4Cl(19.81g，370.6mmol，4eq)的混合物并且將置于MeOH(950mL)中的Zn(79.37g，1.204mmol，13eq)回流加熱16h，所得混合物通過(guò)硅藻土過(guò)濾并用沸騰的MeOH洗滌。濃縮后，粗產(chǎn)物在乙酸乙酯和NaHCO3(aq.)之間分配。層析(用乙酸乙酯/己烷/3％三乙胺)所得油得到產(chǎn)物(21.11g，56％)。分析數(shù)據(jù)1H-NMR(CDCl3，400MHz)1.395(s，9H，O(CH3)；3.185(d，2H，H(4)，J4-5＝4Hz)；3.617(s，3H，OCH3)；4.446(s，2H，H(7))；4.528(m，1H，H(5))；5.502(d，1H，H(6)，J6-5＝8Hz)；6.793(dd，1H，H(3)，J3-2＝2Hz，J3-1＝8.4Hz)；6.868(d，1H，H(3)，J3-2＝2Hz)，7.225(d，1H，H(1)，J1-2＝8.4Hz).IR3356cm-1(-NH2，-NH)；1744cm-1酯-C＝O)；1707cm-1(氨基甲酸酯-C＝O)；1540cm-1(酰胺)；1250cm-1(酯).MSm/z＝405.3[M+H+]，用79Br；m/z＝407.3[M+H+]，用81Br。Rf＝0.47，在乙酰乙酯/己烷(1∶2)中，在SiO2上。
實(shí)施例3.1(大規(guī)模酶促水解)(S)-3-(2-氨基-4-溴-苯硫基)-2-叔丁氧基羰基氨基-丙酸
將19.9g(48.02mmol)N-叔丁氧基羰基-3-(2-氨基-4-溴苯硫基)-L-丙氨酸甲基酯(97.8％)溶于750ml TBME中并在劇烈攪拌下在3L緩沖液(0.1M氯化鈉，20mM磷酸鈉，pH 7.5)中乳化。加入12.0ml Alcalase 2.4L和30mg枯草蛋白酶A[兩種酶制劑都是Novo Nordisk生產(chǎn)的枯草蛋白Carlsberg]并通過(guò)可控地加入1.0N氫氧化鈉溶液在劇烈攪拌下保持pH在7.5(pH-恒定)。7天后，消耗掉44.75ml 1.0N氫氧化鈉溶液，轉(zhuǎn)化率＞99％(HPLC分析)。分離兩相反應(yīng)混合物。迅速用1LTBME洗滌水相以便分離少量親脂性雜質(zhì)和痕量剩余底物。用pH 7.6的1×250ml 0.1M磷酸鉀緩沖液萃取合并的有機(jī)相。用32％鹽酸將合并的水相酸化到pH 2并用1.5L乙酸乙酯萃取。通過(guò)攪拌下加入10％Dicalite并過(guò)濾分離所得乳液。用2×1L乙酸乙酯萃取水相。經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥合并的乙酸乙酯相并蒸發(fā)。將所得殘?jiān)苡诙燃淄椤⒄舭l(fā)并在HV中干燥得到灰黃色固態(tài)18.79g N-叔丁氧基羰基-3-(2-氨基-4-溴苯硫基)-L-丙氨酸(產(chǎn)率81.8％)。分析數(shù)據(jù)1H-NMR(CDCl3，400MHz)1.399(s，9H，OC(CH3))；3.184(dd，1H，SCH2，J＝14.2Hz，J＝6.6Hz)；3.235(dd，1H，SCH2，J＝14.2Hz，J＝6.6Hz)；4.515(m，1H，COCHNH)；5.517(d，1H，CONHCH，J＝6.8Hz)；6.796(dd，1H，arom.，J＝2Hz，J＝8.4Hz)；6.876(d，1H，arom.，J＝2Hz)；7.250(d，1H，arom.，J＝8.4Hz)。IR(ATR-IR)3445和3355cm-1(-NH，-NH2)；2978和2929cm-1寬峰(-COOH)；1693cm-1(COOH-C＝O，氨基甲酸酯-C＝O)；1508cm-1(酰胺-CO-NH)；1247和1157cm-1(COOH)。MS(ESI-陽(yáng)性離子化)m/z＝391.1[M+H+]，用79Br；m/z＝393.1[M+H+]，用81Br；m/z＝413.2[M+Na+]，用79Br；m/z＝415.2[M+Na+]，用81Br。OR[α]D＝+53.3°(CHCl3；c＝1.0).HPLC分析柱子ABZ+plus；流動(dòng)相A0.1％TFA水溶液；BMeCN；梯度B30-80％0-15min，80-30％15-16min，30％16-19.5min；流速1ml/min；壓力50-80巴；檢測(cè)UV，300nm；保留時(shí)間12.1min(產(chǎn)物-酸)13.5min(底物-酯)。
實(shí)施例3.2(小規(guī)模酶促水解)(S)-3-(2-氨基-4-溴-苯硫基)-2-叔丁氧基羰基氨基-丙酸將1.65g(3.99mmol)N-叔丁氧基羰基-3-(2-氨基-4-溴苯硫基)-L-丙氨酸甲基酯(98％)溶于65ml TBME并在劇烈攪拌下將其在240緩沖液中(0.1M氯化鈉；20mM磷酸鈉，pH 7.5)乳化。加入0.75ml Alcalase2.4L[NovoNordisk生產(chǎn)的一種枯草蛋白酶Carlsberg]并通過(guò)可控地加入1.0N氫氧化鈉溶液在劇烈攪拌下保持pH在7.5(pH-恒定)。33h后消耗4.23ml 1.0N氫氧化鈉溶液，轉(zhuǎn)化率＞99％(HPLC分析)。用32％的鹽酸酸化反應(yīng)混合物到pH 2，在Decalite上過(guò)濾。相分離后用3×275ml乙酸乙酯萃取水相。合并的有機(jī)相經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥并蒸發(fā)。將殘?jiān)芙庥诙燃淄?、蒸發(fā)并在HV中干燥得到1.56g灰黃色固態(tài)N-叔丁氧基羰基-3-(2-氨基-4-溴苯硫基)-L-丙氨酸(產(chǎn)率99.8％)。
實(shí)施例3.3(用不同溶劑酶促水解)(S)-3-(2-氨基-4-溴-苯硫基)-2-叔丁氧基羰基氨基-丙酸劇烈攪拌下將100mg(0.242mmol)N-叔丁氧基羰基-3-(2-氨基-4-溴苯硫基)-L-丙氨酸甲基酯(98％)加入到由20％有機(jī)共溶劑(見(jiàn)下表)和80％緩沖溶液(0.1M氯化鈉；3mM磷酸鈉，pH 7.5)組成的系統(tǒng)中。加入100μlAlcalase 2.4L[一種Novo Nordisk生產(chǎn)的枯草蛋白酶Carlsberg]并通過(guò)可控地加入0.1N氫氧化鈉溶液在劇烈攪拌下保持pH在7.5(pH-恒定)。反應(yīng)結(jié)束時(shí)用HPLC測(cè)定轉(zhuǎn)化率。
a轉(zhuǎn)化從300nm處HPLC分析的峰面積計(jì)算。
實(shí)施例3.4(用其他酶酶促水解)(S)-3-(2-氨基-4-溴-苯硫基)-2-叔丁氧基羰基氨基-丙酸劇烈攪拌下將200mg(0.493mmol)N-叔丁氧基-3-(4-溴-2-氨基苯硫基)-L-丙氨酸甲基酯(93.8％)加到由5ml TBME和20ml緩沖液(0.1M氯化鈉；3mM磷酸鈉，pH 7.0)組成的系統(tǒng)中。加入酶[見(jiàn)下表]并通過(guò)可控地加入0.1N氫氧化鈉溶液在劇烈攪拌下保持pH在7.0(pH-恒定)。終止反應(yīng)后將反應(yīng)混合物用25ml TBME洗滌兩次，用25％HCl酸化到pH 2.5并用3×25ml乙酸乙酯萃取。在硫酸鈉上干燥合并的有機(jī)相，蒸發(fā)溶劑并在高真空中干燥殘?jiān)?
實(shí)施例4(S)-(7-溴-4-氧代-2，3，4，5-四氫-苯并[b][1，4]硫氮雜-3-基)-氨基甲酸叔丁基酯
按照G.C.Morton等(G.C.Morton et.al，Tet.Lett.，41(2000)3029-3033)所描述的方法進(jìn)行反應(yīng)。將酶水解產(chǎn)物(15.2g，38.8mmol，1eq)和EDAC(1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽)(7.44g，38.8mmol，1eq)的DMF(500mL)溶液在室溫下攪拌16h，濃縮并將殘?jiān)芙庥谝宜嵋阴?500ml)中并用NaHCO3(1M)水溶液(500mL)和水(500mL)萃取。干燥(Na2SO4)并濃縮得到產(chǎn)物(14.5g，定量的)。分析數(shù)據(jù)1H-NMR(CDCl3，400MHz)1.409(s，9H，O(CH3))；2.939(t，1H，H(4′)，J＝11.6Hz)；3.794(dd，1H，H(4″)，J4″-5＝11Hz，J4″-4′＝6.4Hz)；4.439(m，1H，H(5))；5.567(d，1H，H(6)，J6-5＝8Hz)；7.306(d，1H，H(2)，J2-1＝8Hz，J2-3＝2Hz)；7.337(d，1H，H(3)，J3-2＝2Hz)；7.748(d，1H，H(1)，J1-2＝8Hz)；8.042(s，1H，H(7))。IR3284和3184cm-1(-NH)；1729cm-1(氨基甲酸酯-C＝O)；1678cm-1(酰胺-C＝O)；1574cm-1(酰胺)；1251cm-1(酯)。MSm/z＝373.3[M+H+]，用79Br；m/z＝375.3[M+H+]，用81Br；m/z＝395[M+Na+]，用79Br；m/z＝397[M+Na+]，用81Br。Rf＝0.23，在乙酸乙酯/己烷(1∶2)中，在SiO2上。
實(shí)施例5(S)-4-(2-叔丁氧基羰基氨基-2-甲氧基羰基-乙硫基)-3-硝基-苯甲酸烯丙基酯 將4-氟-3-硝基苯甲酸(49.95g，269.8mmol，1eq)溶于甲醇(350mL)，加入Cs2CO3(44.06g，135.2mmol，0.5eq)并蒸發(fā)溶劑。然后將Cs鹽溶于DMF，加熱到50℃并用烯丙基溴(22.8mL，269.8mmol，1eq)處理。5分鐘后蒸發(fā)溶劑并將所得固體在Et2O中研磨。過(guò)濾并蒸發(fā)得到定量的粗烯丙基酯。根據(jù)M.K.Schwarz等(M.K.Schwarz et al.，J.Org.Chem.1999，64，2219-2231)描述的方法進(jìn)行下一步。將烯丙基酯(30g，133.2mmol，1eq)、BOC-半胱氨酸-甲基酯(31.35g，133.2mmol，1eq)和DIPEA(68.3mL，399.6mmol，3eq)緩慢加入EtOH中(觀察到放熱反應(yīng))并在室溫?cái)嚢?小時(shí)，濃縮得到固體，將其用二異丙基醚(46.16g，79％)重結(jié)晶。分析數(shù)據(jù)1H-NMR(CDCl3，400MHz)1.443(s，9H，O(CH3))；3.401(dd，1H，H(7′)，J7′-7″＝2.4Hz，J7’-8＝6Hz)；3.506(dd，1H，H(7″)，J7″-7′＝2.4Hz，J7″-8＝6Hz)；3.777(s，3H，OCH3)；4.608(m，1H，H(8))；4.860(dt，2H，H(3′，3″)，J3-2＝5.6Hz；J3-1＝1.6Hz)；5.322(q，1H，H(1′)，J＝0.8Hz)；5.347(t，1H，H(1″)，J＝0.8Hz)；5.406(d，1H，H(9)，J9-8＝1.6Hz)；6.032(m，1H，H(2))；7.625(d，1H，H(5)，J5-4＝8.4Hz)；8.201(dd，1H，H(4)，J4-5＝8.4Hz，J4-6＝1.6Hz)；8.830(d，1H，H(6)，J6-4＝1.6Hz).IR3350cm-1(-NH)；1742cm-1(酯-C＝O)；1719cm-1(Conj.酯-C＝O)；1686cm-1(氨基甲酸酯-C＝O)；1523和1334cm-1(-NO2)；1245cm-1(酯).MSm/z＝441.3[M+H+]；m/z＝458.4[M+NH4+]；m/z＝463.2[M+Na+].Rf＝0.40，在乙酸乙酯/己烷(1∶2)中，在SiO2上.
實(shí)施例6(S)-3-氨基-4-(2-叔丁氧基羰基氨基-2-甲氧基羰基-乙硫基)-苯甲酸烯丙基酯 按照J(rèn).Slade等(J.Slade et.al.，J.Med.Chem.1985，28，1517-1521)描述的方法進(jìn)行反應(yīng)。將上面產(chǎn)物(506mg，1.15mmol，1eq)含水NH4Cl(20mL)和Zn(976mg，14.9mmol，13eq)在DME(15mL)中攪拌，將其在80℃下加熱16h。蒸發(fā)溶劑并將殘?jiān)芙庥谝宜嵋阴?250mL)并用(含水)NaHCO3(1M)(3×50mL)萃取。用Na2SO4干燥有機(jī)相并蒸發(fā)得到黃色油，其在幾天后結(jié)晶(276mg，60％)。分析數(shù)據(jù)1H-NMR(CDCl3，400MHz)1.380(s，1H，O(CH3))；3.283(d，2H，H(7′，7″)，J7-8＝4.4Hz)；3.579(s，3H，OCH3)；4.445(s，2H，H(10′，10″))；4.554(m，1H，H(8))；4.787(ddd，2H，H(2′，2″)，J＝1.2Hz)；5.283(dd，1H，H(1′)，J1’-2＝10.6Hz，J1’-1”＝1.2Hz)；5.390(dd，1H，H(1″)，J1”-2＝17.8Hz，J1”-1’＝1.2Hz)；5.506(d，1H，H(9)，J9-8＝7.6Hz)；6.015(m，1H，H(8))；7.360(dd，1H，H(2)，J4-5＝8Hz，J4-6＝1.6Hz)；7.398(d，1H，H(6)，J6-4＝1.6Hz)；7.425(d，1H，H(5)，J5-4＝8Hz).IR3378cm-1(-NH，-NH2)；1751cm-1(酯-C＝O)；1713cm-1(Conj.酯-C＝O)；1685cm-1(氨基甲酸酯-C＝O)；1511cm-1(-酰胺)；1220cm-1(酯).MSm/z＝411.3[M+H+]；m/z＝433.3[M+Na+].Rf＝0.27，在乙酸乙酯/己烷(1∶2)中，在SiO2上。
實(shí)施例7.1(大規(guī)模酶促水解)(S)-3-氨基-4-(2-叔丁氧基羰基氨基-2-羧基-乙硫基)-苯甲酸烯丙基酯 將6.4g(15.658mmol)N-叔丁氧基羰基-3-(4-烯丙氧基羰基-2-氨基苯硫基)-L-丙氨酸甲基酯(99％)溶解于480ml TBME并在劇烈攪拌下在1.5升緩沖液(0.1M氯化鈉；160mM磷酸鈉，pH 7.5)中乳化。加入12.0ml Alcalase 2.4L[Novo Nordisk的一種枯草蛋白酶Carlsberg]并通過(guò)可控地加入1.0N氫氧化鈉溶液在劇烈攪拌下保持pH在7.5(pH-恒定)。48.5h后消耗16.6ml1.0N氫氧化鈉溶液，轉(zhuǎn)化率＞97％(HPLC分析)。相分離后用1l TBME萃取水相。用2×0.4L 0.1M磷酸鉀緩沖液(pH 7.6)萃取合并的TBME相。用32％鹽酸酸化合并的水相到pH 2并用3×0.5l乙酸乙酯萃取。如果形成穩(wěn)定的乳液，則通過(guò)在Dicalite上過(guò)濾完成相分離。經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥合并的乙酸乙酯相并蒸發(fā)。將殘?jiān)苡诙燃淄?、蒸發(fā)、HV中干燥得到5.85g黃色高粘性油狀N-叔丁氧基羰基-3-(4-烯丙氧基羰基-2-氨基苯硫基)-L-丙氨酸(產(chǎn)率94.6％)。分析數(shù)據(jù)1H-NMR(DMSO，400MHz)1.338(s，9H，OC(CH3))；3.077(dd，1H，SCH2，J＝12.8Hz，J＝6.8Hz)；3.238(dd，1H，SCH2，J＝13.8Hz，J＝4.6Hz)；3.867(m，1H，COCHNH)；4.753(d，2H，COOCH2，J＝5.2Hz)；5.526(d，1H，CH＝CH2，J＝10Hz)；5.538(d，1H，CH＝CH2，J＝17.6Hz)；5.595(m，2H，NH2)；6.018(ddtr，1H，CH2CH＝CH2，J＝16.6Hz，J＝10.6Hz，J＝5.6Hz)；6.519(m，1H，CONHCH)；6.876(d，1H，arom.CSCH，J＝8.4Hz)；7.330(d，1H，arom.CSCHCH，J＝8.4Hz)；7.338(s，1H，arom.CHCNH2).IR(ATR-IR)3420和3355cm-1(-NH，-NH2)；2980和2935cm-1寬峰(-COOH)；1705cm-1(COOH-C＝O，氨基甲酸酯-C＝O)；1510cm-1(酰胺-CO-NH)；1486cm-1aromate；1229和1160cm-1(COOH)；982和932cm-1(乙烯基，-C＝CH2).MS(ESI-陽(yáng)性離子化)m/z＝397.1[M+H+]；m/z＝419.4[M+Na+].OR[α]D＝+16.16°(CHCl3；c＝1.0).HPLC分析柱子ABZ+plus；流動(dòng)相A0.1％TFA水溶液；BMeCN；梯度B30-80％0-15min，80-30％15-16min，30％16-19.5min；流速1ml/min；壓力50-80巴；檢測(cè)UV，300nm；保留時(shí)間11.2min(產(chǎn)物-酸)；12.7min(底物-酯)。
實(shí)施例7.2(小規(guī)模酶促水解)(S)-3-氨基-4-(2-叔丁氧基羰基氨基-2-羧基-乙硫基)-苯甲酸烯丙基酯將0.769g(1.658mmol)N-叔丁氧基羰基-3-(4-烯丙氧基羰基-2-氨基苯基-硫代)-L-丙氨酸甲基酯溶于40ml TBME并在劇烈攪拌下在220ml 0.1M氯化鈉溶液、3mM磷酸鈉緩沖液(pH7.5)中乳化。加入0.1ml Alcalase2.4L[Novo Nordisk的一種枯草蛋白酶Carlsberg]并通過(guò)可控地加入1.0N氫氧化鈉溶液在劇烈攪拌下保持pH在7.5(pH-恒定)。45.4h后消耗23.6ml1.0N氫氧化鈉溶液，轉(zhuǎn)化率＞97％(HPLC分析)。用100ml TBME萃取反應(yīng)混合物。相分離后用32％鹽酸酸化合并的水相到pH2.3并用3×250ml乙酸乙酯萃取。如果形成穩(wěn)定的乳液，則通過(guò)在Dicalite上過(guò)濾完成相分離。經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥合并的乙酸乙酯相并蒸發(fā)。將殘?jiān)苡诙燃淄?、蒸發(fā)、HV中干燥得到604mg灰黃色固態(tài)N-叔丁氧基羰基-3-(4-烯丙氧基羰基-2-氨基苯硫基)-L-丙氨酸(產(chǎn)率93.9％，純度95％)。
實(shí)施例7.3(用不同溶劑的酶促水解)(S)-3-氨基-4-(2-叔丁氧基羰基氨基-2-羧基-乙硫基)-苯甲酸烯丙基酯將200mg(0.487mmol)N-叔丁氧基羰基-3-(4-烯丙氧基羰基-2-氨基苯硫基)-L-丙氨酸甲基酯(96.7％)在劇烈攪拌下加入到由2到5ml有機(jī)共溶劑(見(jiàn)下表)和20ml緩沖液(0.1M氯化鈉；3mM磷酸鈉，pH 7.0)組成的系統(tǒng)中。加入Alcalase 2.4L[Novo Nordisk的一種枯草蛋白酶Carlsberg，用量見(jiàn)下表]并通過(guò)可控地加入0.1N氫氧化鈉溶液在劇烈攪拌下保持pH在7.5(pH-恒定)。通過(guò)滴定劑的消耗監(jiān)控反應(yīng)，用HPLC確定產(chǎn)物的形成。
實(shí)施例7.4(用其他酶的酶促水解)(S)-3-氨基-4-(2-叔丁氧基羰基氨基-2-羧基-乙硫基)-苯甲酸烯丙基酯將200mg(0.487mmol)N-叔丁氧基羰基-3-(4-烯丙氧基羰基-2-氨基苯硫基)-L-丙氨酸甲基酯(96.7％)在劇烈攪拌下加入到由5ml TBME和20ml緩沖液(0.1M氯化鈉；3mM磷酸鈉，pH 7.0)組成的系統(tǒng)中。加入酶[見(jiàn)下表]并通過(guò)可控地加入0.1N氫氧化鈉溶液在劇烈攪拌下保持pH在7.0(pH-恒定)。通過(guò)滴定劑的消耗監(jiān)控反應(yīng)，用HPLC確定產(chǎn)物的形成。
實(shí)施例7.5(較高溫度的酶促水解)
(S)-3-氨基-4-(2-叔丁氧基羰基氨基-2-羧基-乙硫基)-苯甲酸烯丙基酯40℃下將200mg(0.487mmol)N-叔丁氧基羰基-3-(4-烯丙氧基羰基-2-氨基苯硫基)-L-丙氨酸甲基酯(96.7％)在劇烈攪拌下加入到由5ml TBME和20ml緩沖液(0.1M氯化鈉；3mM磷酸鈉，pH 7.0)組成的系統(tǒng)中。加入100μl Alcalase 2.4L[Novo Nordisk的一種枯草蛋白酶Carlsberg]并通過(guò)可控地加入(pH-恒定)0.1N氫氧化鈉溶液在劇烈攪拌下于40℃保持pH在7.0。消耗5.44ml滴定劑(理論值的112％；17.4h后)后，將反應(yīng)混合物用25mlTBME洗滌，用1N HCl酸化到pH 2.5并用3×25ml乙酸乙酯萃取。經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥合并的有機(jī)相，蒸發(fā)溶劑并將殘?jiān)诟哒婵罩懈稍锏玫?90mg(0.479mmol；98％)94.5％HPLC-純(面積-％)的產(chǎn)物酸。
實(shí)施例8(S)-3-叔丁氧基羰基氨基-4-氧代-2，3，4，5-四氫-苯并[b][1，4]硫氮雜-7-羧酸烯丙基酯 按照G.C.Morton等(G.C.Morton et al.，Tet.Lett.，41(2000)3029-3033)描述的方法進(jìn)行反應(yīng)。將酶水解產(chǎn)物(5.6g，14.1mmol，1eq)溶于DMF(75ml)并用EDAC(2.70g，14.1mmol，1eq)處理并在室溫下攪拌16h。濃縮后，將殘?jiān)苡谝宜嵋阴?500mL)中并用(含水的)NaHCO3(1M)(3×150mL)和水(3×150mL)萃取。干燥有機(jī)相(Na2SO4)并蒸發(fā)得到黃色油。用乙酸乙酯/己烷(1∶2)層析后得到黃色晶體(4.96g，93％)。分析數(shù)據(jù)1H-NMR(CDCl3，400MHz)1.400(s，1H，O(CH3))；3.014(t，1H，H(7′或7″)，J＝12Hz)；3.815(dd，1H，H(7′或7″)，J7-8＝12Hz，J7’-7”＝6.4Hz)；4.466(m，1H，H(8))；4.835(d，2H，H(3′，3″)，J3-2＝5.7Hz)；5.316(dd，1H，H(1′)，J1′-2＝10.5Hz，J1′-1″＝1.2Hz)；5.413(dd，1H，H(1″)，J1″-2＝17.2Hz，J1″-1′＝1.2Hz)；5.581(d，1H，H(9)，J9-8＝8Hz)；6.013(m，1H，H(8))；7.338(d，1H，H(5)，J5-4＝11.1Hz)；7.704(s，1H，H(10))；7.751(d，1H，H(6)，J6-4＝1.8Hz)；7.338(dd，1H，H(2)，J4-5＝11.1Hz，J4-6＝1.8Hz).IR3206cm-1(-NH)；1720cm-1(氨基甲酸酯-C＝O)；1671cm-1(酰胺-C＝O)；1500cm-1(酰胺-CONH)；1209cm-1(酯)。MSm/z＝379.3[M+H+]；m/z＝401.4[M+Na+].Rf＝0.36，在乙酸乙酯/己烷(1∶2)中，在SiO2上.
實(shí)施例9(S)-3-氨基-4-(2-叔丁氧基羰基氨基-2-羰基-乙硫基)-苯甲酸 將200mg(0.540mmol)N-叔丁氧基羰基-3-(4-羧基-2-氨基苯硫基)-L-丙氨酸甲基酯加入由5ml TBME和20ml緩沖液(0.1M氯化鈉；3mM磷酸鈉，pH 7.0)組成的系統(tǒng)中。加入100μl Alcalase 2.5L[Novo Nordisk的一種枯草蛋白酶Carlsberg]并通過(guò)可控地加入0.1N氫氧化鈉溶液在劇烈攪拌下保持pH在7.0(pH-恒定)。消耗5.847ml滴定劑(理論值的108％；1.5h后)后，將反應(yīng)混合物用25ml TBME洗滌兩次，用25％HCl酸化到pH 2.5并用3×25ml乙酸乙酯萃取。經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥合并的有機(jī)相，蒸發(fā)溶劑并將殘?jiān)贖V中干燥得到187mg(0.479mmol)黃色晶體的N-叔丁氧基羰基-3-(2-氨基-4-羧基苯硫基)-L-丙氨酸(產(chǎn)率93.4％)。分析數(shù)據(jù)HPLC純度96.4％(面積％).1H-NMR(DMSO，400MHz)1.378(s，9H，OC(CH3))；2.982(dd，1H，SCH2，J＝13.2Hz，J＝9.6Hz)；3.150(dd，1H，SCH2，J＝13.2Hz，J＝4.4Hz)；3.950(m，1H，COCHNH)；5.542(m，2H，-NH2)；7.067(dd，1H，CONHCH，J＝8.0Hz，J＝1.6Hz)；7.201(d，1H，arom.SCCH，J＝8.0Hz)；7.298(d，1H，arom.SCCHCH，J＝8.0Hz)；7.323(d，1H，arom.CHCNH2，J＝1.6Hz)；12.73(bs，2H，2-COOH).IR3445和3347cm-1(-NH，-NH2)；2977和2930cm-1寬峰(-COOH)；1720和1692cm-1(COOH-C＝O，氨基甲酸酯-C＝O)；1608cm-1(-COO-)；1509cm-1(酰胺-CO-NH)；1486cm-1(aromate)；1247和1163cm-1(COOH).ISN-MSm/z＝355.1[M-H+].OR[α]D＝+13.00°(EtOH；c＝1.0)。
權(quán)利要求
1.一種制備式I化合物的方法 其中R1是氫或烷基；R2是氨基保護(hù)基團(tuán)；每個(gè)R3獨(dú)立地是鹵素、羧基、烷氧羰基、鏈烯氧基羰基或芐氧基羰基；n是1或2，該方法包括在含有一種有機(jī)共溶劑的水性系統(tǒng)中，使式II化合物與一種蛋白酶反應(yīng) 其中R1、R2、R3和n如上定義，R4是烷基或芐基。
2.一種根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其特征是式II化合物是 其中R1、R2、R3、R4和n如權(quán)利要求1所定義。
3.一種根據(jù)權(quán)利要求1或2的方法，其特征是R1是氫或烷基；R2是氨基保護(hù)基團(tuán)；每個(gè)R3獨(dú)立地是鹵素、羧基或鏈烯氧基羰基；R4是烷基或芐基；n是1或2。
4.一種根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)的方法，其特征是R1是氫；R2是氨基保護(hù)基團(tuán)；R3是鹵素、羧基或鏈烯氧基羰基；R4是烷基；n是1。
5.一種根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)的方法，其特征是在6.0-8.5的pH下進(jìn)行反應(yīng)。
6.一種根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)的方法，其特征是用芽孢桿菌蛋白酶、枯草桿菌蛋白酶、曲霉蛋白酶或Tritachium蛋白酶進(jìn)行反應(yīng)。
7.一種根據(jù)權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)的方法，其特征是所述有機(jī)共溶劑是四氫呋喃、二噁烷、叔丁基甲基醚、C1-8-醇、乙酸乙酯、二甲亞砜、二甲基乙酰胺或丙酮。
8.下式的化合物 或
9.一種根據(jù)權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)的方法，其特征是式I化合物被進(jìn)一步處理成式III的苯并硫氮雜 其中R1、R2、R3、R4和n如式I和式II所描述的。
全文摘要
式(I)化合物可用于制備1，5－苯并硫氮雜類(lèi)，1，5－苯并硫氮雜類(lèi)可用作酶(如蛋白酶、白介素－1β－轉(zhuǎn)化酶、彈性蛋白酶或血管緊張肽－轉(zhuǎn)化酶)抑制劑，或者GPCR拮抗劑(縮膽囊素、血管緊張肽II受體)。本發(fā)明涉及一種制備式(I)化合物(其中R
文檔編號(hào)C07C323/63GK1553959SQ02817772
公開(kāi)日2004年12月8日 申請(qǐng)日期2002年9月19日 優(yōu)先權(quán)日2001年9月25日
發(fā)明者K·布萊謝爾, S·博思威克, H·伊丁, M·羅杰斯-埃文斯, S·施密德, H·M·佟, B·沃茲, K 布萊謝爾, 佟, 紀(jì), 艿, 芩 埃文斯 申請(qǐng)人:弗·哈夫曼-拉羅切有限公司, 弗 哈夫曼-拉羅切有限公司