專利名稱：具有消腫抗炎改善血液循環(huán)的精氨酸七葉皂苷及制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種適用于消腫、抗炎和改善血液循環(huán)的精氨酸七葉皂苷和相應(yīng)的異構(gòu)體及制備方法。
由于七葉皂苷不溶解于水，現(xiàn)階段在臨床上使用的為七葉皂苷鈉，經(jīng)過長期大量的臨床觀察，七葉皂苷鈉對外傷及外周血管疾病有很高的治療價值。七葉皂苷鈉為靜脈給藥，在給藥過程中，血管易產(chǎn)生痙攣，所以存在輸液部位疼痛等副作用，長期使用易產(chǎn)生靜脈炎等現(xiàn)象。
本發(fā)明的特征在于用精氨酸和七葉皂苷反應(yīng)成鹽，并以下列結(jié)構(gòu)式(I)表示的鹽或相應(yīng)的異構(gòu)體 本發(fā)明所述的制備方法如下(A)在反應(yīng)器中依次加入七葉皂苷、L-精氨酸和蒸餾水，攪拌反應(yīng)至澄清液，減壓蒸干溶劑，在殘留物中加入乙醇或丙酮，研磨得類白色沉淀，過濾，減壓干燥，得類白色固體；或(B)在反應(yīng)瓶中依次加入七葉皂苷、L-精氨酸和蒸餾水，攪拌反應(yīng)至澄清液，自-40℃起分段升溫真空冷凍干燥，得類白色固體。
本發(fā)明所述的七葉皂苷、L-精氨酸的摩爾配比為1∶1。
本發(fā)明所述的精氨酸包括L-精氨酸，或D-精氨酸，或D、L-精氨酸。
本發(fā)明所述的七葉皂苷包括七葉皂苷A，或七葉皂苷B。
本發(fā)明所述的分段升溫真空冷凍干燥具體如下-40℃下預(yù)凍8小時后，繼續(xù)抽真空冷凍2小時，再分別在-30℃、-20℃、-10℃、-5℃、0℃、10℃、20℃、30℃溫度下抽真空冷凍2小時、2小時、4小時、8小時、8小時、4小時、2小時、2小時。
本發(fā)明經(jīng)過蛋清誘發(fā)大鼠足趾腫脹試驗，小鼠耳二甲苯致炎法試驗，急性毒性試驗，血管刺激性試驗等證明本發(fā)明在保留消腫、抗炎和改善血液循環(huán)用途的同時，解決了七葉皂苷在水中的溶解性，能降低血管痙攣的產(chǎn)生，提高了用藥的安全性。
用七葉皂苷為對照品進(jìn)行含量測定，產(chǎn)品含量為99.5％。
用七葉皂苷為對照品進(jìn)行含量測定，產(chǎn)品含量為99.7％。
冷凍干燥條件溫度(℃) 時間(小時) 備注-40 8 預(yù)凍-40 2 抽真空-30 2 抽真空-20 2 抽真空-10 4 抽真空-58 抽真空0 8 抽真空104 抽真空202 抽真空302 抽真空得類白色固體129.7g，收率99.3％。
用七葉皂苷為對照品進(jìn)行含量測定，產(chǎn)品含量為99.6％。
計算各組大鼠足爪腫脹度均值與標(biāo)準(zhǔn)差，并作t檢驗比較各給藥組與空白對照組間有無顯著性差異。結(jié)果見下表。
精氨酸七葉皂苷對蛋清誘發(fā)大鼠足爪腫脹的影響劑量組別動物數(shù) 體重 致炎前足 致炎后足爪體積(ml)(mg/kg) (只) (g)爪體積(ml)1.5hr 3hr4 .5hr4.082 精氨酸七葉皂苷 10 172±7 0.835±0.071 0.411±0.063*0.401±0.054*0.519±0.0252.857 精氨酸七葉皂苷 10 171±6 0.836±0.080 0.47±0.122*0.476±0.109*0.61±0.101*2.000 精氨酸七葉皂苷 10 171±5 0.822±0.063 0.602±0.09*0.632±0.092*0.7723±0.092*1.400 精氨酸七葉皂苷 10 171±6 0.826±0.071 0.74±0.039*0.814±0.54*0.898±0.06*0.980 精氨酸七葉皂苷 10 171±5 0.831±0.065 0.923±0.095 0.939±0.091 1.001±0.095空白組(同體積氯化鈉注射液) 0.841±0.038 0.993±0.025 0.993±0.05 0.983±0.035與空白對照相比 +P＜0.05*P＜0.01由表可見，與空白對照組相比，精氨酸七葉皂苷在給藥后1.5、3、4.5小時，劑量4.082、2.857、2.000mg/kg組，均有非常顯著性差異。試驗結(jié)果表明，精氨酸七葉皂苷對雞蛋清所致的大鼠足爪腫脹，呈現(xiàn)明顯的抗炎作用。
選取體重26-30g雄性小鼠60只，隨機(jī)分成6組，每組10只。將二甲苯滴于小鼠右耳，每鼠30μl，左耳對照。致炎1小時后，第1至第5組小鼠分別腹腔注射精氨酸七葉皂苷溶液劑量以七葉皂苷計為6.67、4.67、3.27、2.29、1.06mg/kg，藥液濃度分別為0.267、0.187、0.131、0.091、0.0641mg/ml，給藥體積為0.5ml/20g，第6組同法腹腔注射氯化鈉注射液0.5ml/20g。
給藥后2小時，將小鼠頸椎脫臼致死，沿耳廓基線剪下兩耳，用直徑為8mm的打孔器分別在左、右耳同一部位打下園耳片，稱重，求每鼠左、右耳片重量之差，作為腫脹度。將腫脹度進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理，比較各給藥組與空白對照組間有無顯著性差異，結(jié)果見下表。
精氨酸七葉皂苷對二甲苯致小鼠耳腫脹的影響劑量 組別 動物數(shù) 腫脹度(mg/ml) (只)(mg)6.670精氨酸七葉皂苷 10 4.65±1.076*4.670精氨酸七葉皂苷 10 5.64±1.085*3.270精氨酸七葉皂苷 10 6.28±0.705*2.290精氨酸七葉皂苷 10 6.93±1.059*1.061精氨酸七葉皂苷 10 7.67±0.866空白同體積N.S 10 8.16±0.486與空白對照相比+P＜0.05*P＜0.01由表可見，與空白對照組相比，劑量6.67、4.67、3.27mg/kg、2.29mg的精氨酸七葉皂苷均有非常顯著性差異，劑量1.06mg/kg組的精氨酸七葉皂苷無顯著性差異。試驗結(jié)果表明，精氨酸七葉皂苷二甲苯所致的小鼠耳腫脹，呈現(xiàn)明顯的抗炎作用。
選取體重為19～21g小鼠50只，隨機(jī)分成5組，每組10只，雌雄各半，按所設(shè)置的劑量靜脈注射給藥，給藥后立即開始觀察。5分鐘內(nèi)有動物開始死亡，1天內(nèi)陸續(xù)有動物死亡，精氨酸七葉皂苷各組動物死亡數(shù)見下表，以后觀察的2～14天內(nèi)無動物死亡。死亡動物尸解，主要器官經(jīng)肉眼觀察無明顯病變，存活動物觀察14天后處死解剖肉眼觀察各器官未見異常。
小鼠靜脈給藥精氨酸七葉皂苷LD50測定結(jié)果受試動物劑量 對數(shù)劑量 動物數(shù) 死亡動物 死亡率 機(jī)率單 LD50及置(mg/kg) (X) (只)數(shù)(只)(％)位(Y) 信限50.0 1.7 10 9 90 6.2840.0 1.6 10 8 80 5.84 29.7±32.0 1.51 10 7 70 5.52 5.9mg/kg25.0 1.4 10 3 30 4.4820.5 1.31 10 1 10 3.72 (P＝0.95)試驗結(jié)果表明，小鼠靜脈注射精氨酸七葉皂苷LD50為29.7±5.9mg/kg。而七葉皂苷鈉LD50文獻(xiàn)值為4.8±5.6mg/kg。
試驗結(jié)果表明，肉眼觀察注射部位血管均未見明顯充血水腫等刺激反應(yīng)現(xiàn)象，病理切片觀察結(jié)果與氯化鈉注射液對照組相似，耳廊皮膚的表皮和真皮各結(jié)構(gòu)完好，未見變性、壞死、缺失及過度角化，耳緣靜脈未見擴(kuò)張充血、未見血栓行成，周圍組織未見出血、水腫。
本發(fā)明經(jīng)過蛋清誘發(fā)大鼠足趾腫脹試驗，小鼠耳二甲苯致炎法試驗，急性毒性試驗，血管刺激性試驗等證明本發(fā)明在保留消腫、抗炎和改善血液循環(huán)用途的同時，解決了七葉皂苷在水中的溶解性，能降低血管痙攣的產(chǎn)生，提高了用藥的安全性。
權(quán)利要求
1.適用于消腫、抗炎和改善血液循環(huán)的精氨酸七葉皂苷和相應(yīng)的異構(gòu)體及制備方法，其特征在于用精氨酸和七葉皂苷反應(yīng)成鹽，并以下列結(jié)構(gòu)式(I)表示的鹽或相應(yīng)的異構(gòu)體
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種適用于消腫、抗炎和改善血液循環(huán)的精氨酸七葉皂苷和相應(yīng)的異構(gòu)體及制備方法，其特征在于所述的制備方法如下(A)在反應(yīng)器中依次加入七葉皂苷、L-精氨酸和蒸餾水，攪拌反應(yīng)至澄清液，減壓蒸干溶劑，在殘留物中加入乙醇或丙酮，研磨得類白色沉淀，過濾，減壓干燥，得類白色固體；或(B)在反應(yīng)瓶中依次加入七葉皂苷、L-精氨酸和蒸餾水，攪拌反應(yīng)至澄清液，自-40℃起分段升溫真空冷凍干燥，得類白色固體。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種適用于消腫、抗炎和改善血液循環(huán)的精氨酸七葉皂苷和相應(yīng)的異構(gòu)體及制備方法，其特征在于所述的七葉皂苷、左旋精氨酸的摩爾配比為1∶1。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種適用于消腫、抗炎和改善血液循環(huán)的精氨酸七葉皂苷和相應(yīng)的異構(gòu)體及制備方法，其特征在于所述的七葉皂苷包括七葉皂苷A，或七葉皂苷B。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種適用于消腫、抗炎和改善血液循環(huán)的精氨酸七葉皂苷和相應(yīng)的異構(gòu)體及制備方法，其特征在于所述的精氨酸包括L-精氨酸，或D-精氨酸，或D、L-精氨酸。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種適用于消腫、抗炎和改善血液循環(huán)的精氨酸七葉皂苷和相應(yīng)的異構(gòu)體及制備方法，其特征在于所述的分段升溫真空冷凍干燥具體如下-40℃下預(yù)凍8小時后，繼續(xù)抽真空冷凍2小時，再分別在-30℃、-20℃、-10℃、-5℃、0℃、10℃、20℃、30℃溫度下抽真空冷凍2小時、2小時、4小時、8小時、8小時、4小時、2小時、2小時。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種適用于消腫、抗炎和改善血液循環(huán)的精氨酸七葉皂苷和相應(yīng)的異構(gòu)體及制備方法,用精氨酸和七葉皂苷反應(yīng)成鹽,并以結(jié)構(gòu)式(I)表示的鹽或相應(yīng)的異構(gòu)體:本發(fā)明解決了七葉皂苷在水中的溶解性,能降低血管痙攣的產(chǎn)生,提高了用藥的安全性。
文檔編號C07J63/00GK1376675SQ0211359
公開日2002年10月30日 申請日期2002年4月10日 優(yōu)先權(quán)日2002年4月10日
發(fā)明者文永均, 謝期林, 韓五成 申請人:成都圣諾科技發(fā)展有限公司