一種復(fù)方黨參總皂苷免疫多糖納米乳組合物及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種復(fù)方黨參總皂苷免疫多糖納米乳組合物及其制備方法。本發(fā)明納米乳組合物是一種水包油型納米乳，粒徑介于1～100nm，其成分包含三種中藥活性成分(黨參總皂苷、茯苓多糖、甘草多糖)、表面活性劑、助表面活性劑、油相和蒸餾水。本發(fā)明納米乳制備方法簡(jiǎn)單易行，設(shè)備易控制，產(chǎn)品質(zhì)量易于控制；液滴粒徑小，能提高藥物的溶解性和穩(wěn)定性，能提高免疫低下小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖活性。本發(fā)明納米乳組合物能顯著提高三種中藥活性成分的免疫調(diào)節(jié)活性，具有開發(fā)免疫增強(qiáng)劑的潛力，從而促進(jìn)中藥資源及其活性成分的開發(fā)利用。
【專利說明】
一種復(fù)方黨參總皂苷免疫多糖納米乳組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及一種復(fù)方黨參總皂苷免疫多糖納米乳組合物，特別涉 及含有中藥活性成分黨參總皂苷、甘草多糖、茯苓多糖的納米乳免疫增強(qiáng)劑。
【背景技術(shù)】
[0002] 中藥具有資源豐富、副作用小、無藥物殘留等優(yōu)點(diǎn)，成為免疫增強(qiáng)劑研究的熱點(diǎn)。 黨參為傳統(tǒng)補(bǔ)益藥，可以增強(qiáng)體質(zhì)，提高人體免疫力，具有抗衰老、抗氧化、抗缺氧、抗疲勞、 抗腫瘤等功能。黨參總皂苷作為其主要活性成分之一，有很好的免疫調(diào)節(jié)活性:能作用于自 然殺傷細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，增強(qiáng)機(jī)體的非特異性免疫;能增強(qiáng)T、B淋巴細(xì)胞活性，促進(jìn)細(xì)胞免 疫和體液免疫的特異性免疫。
[0003] 甘草為常用的傳統(tǒng)中藥，近年來，對(duì)其有效成分的研究成為開發(fā)新藥研究的熱點(diǎn)， 甘草多糖就是從中提取的一類吡喃多糖，有多種藥理活性:提高免疫力、抗病毒、抗腫瘤、抗 氧化、抗炎、抑菌作用等。
[0004] 茯苓是傳統(tǒng)中藥中"藥食同源"的，茯苓多糖作為其主要活性成分，能夠控制細(xì)胞 生長(zhǎng)分化，具有很強(qiáng)的提高免疫力、降糖降脂、抗病毒、抗腫瘤、抗氧化衰老等生物活性，在 國際上被稱為"生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑"，現(xiàn)已被開發(fā)成多種藥物和功能性食品的添加劑。
[0005] 納米乳作為藥物載體有一些優(yōu)勢(shì):將藥物包埋于液滴中，減少藥物和外界作用，提 高藥物穩(wěn)定性;納米小液滴的結(jié)構(gòu)和成分可以同時(shí)增溶脂溶性和(或者)水溶性的藥物，改 善不同藥物溶解性;液滴小于100nm，分散性好，有利于促進(jìn)藥物的吸收，提高生物利用度。
[0006] 雖然黨參總皂苷和茯苓多糖有很好的免疫增強(qiáng)作用，但它們的不足之處在于:黨 參總皂苷和茯苓多糖中含有多種單體，單體的溶解性可能有一定的差異，如何改善它們的 溶解性是需要解決的問題。另外，市售的黨參、甘草和茯苓制劑主要是傳統(tǒng)的飲片、口服液、 中藥湯劑。在中藥免疫調(diào)節(jié)研究方面，以單味藥或其所含有的單體成分研究居多，而中藥復(fù) 方的免疫調(diào)節(jié)作用方面的研究較少。但復(fù)方是中醫(yī)用藥的主要形式，與單味藥和其單體成 分相比，中藥復(fù)方具有藥效協(xié)同互補(bǔ)的優(yōu)勢(shì)。
[0007] 因此，可以用納米乳作藥物載體，研制一種含有黨參總皂苷、甘草多糖和茯苓多糖 的納米乳組合物，促進(jìn)三種中藥資源的利用及其活性成分的研究開發(fā)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題與不足，本發(fā)明的目的在于提供一種復(fù)方黨參總 皂苷免疫多糖納米乳組合物，用作免疫增強(qiáng)劑。本發(fā)明的另一目的在于提供上述納米乳組 合物的制備方法。
[0009] 實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的技術(shù)方案是一種復(fù)方黨參總皂苷免疫多糖納米乳組合物，該制 劑是一種水包油納米乳，粒徑介于1~l〇〇nm，由下述重量百分比的原料組成：黨參總皂苷 0· 10 %~5.50 %、茯苓多糖0· 10 %~5.50 %、甘草多糖0· 10 %~5.50 %、表面活性劑 20 · 00%~38 · 00%、助表面活性劑1.00 %~14 · 00%、油相0.50 %~12.00 %，余量為蒸餾 水，上述原料的總質(zhì)量比為100%。
[0010] 本發(fā)明復(fù)方黨參總皂苷免疫多糖納米乳組合物的優(yōu)選配比為:黨參總皂苷1.00% ~4.50 %、茯苓多糖1.00 %~4.50 %、甘草多糖1.00 %~4.50 %、表面活性劑25.00 %~ 32.00 %、助表面活性劑2.00 %~10.00 %、油相4.00 %~8.00 %，余量為蒸餾水，上述原料 的總質(zhì)量比為100%。
[0011] 本發(fā)明所述的黨參總皂苷是通過超聲法提取、大孔吸附樹脂分離純化所得，其含 量為85.70%。
[0012] 本發(fā)明所述的茯苓多糖是通過超聲法提取、大孔吸附樹脂純化所得，其含量為 90.84%〇
[0013] 本發(fā)明所述的甘草多糖是通過超聲法提取、柱層析純化所得，其含量為90.78%。 [0014]本發(fā)明所述的表面活性劑是吐溫-80、吐溫-60、聚氧乙烯醚(40)氫化蓖麻油、蓖麻 油聚氧乙烯醚40、蓖麻油聚氧乙烯醚35中的一種。
[0015] 本發(fā)明所述的助表面活性劑是聚乙二醇200、聚乙二醇400、甘油、乙醇中的一種。
[0016] 本發(fā)明所述的油相是肉豆蔻酸異丙酯、橄欖油、大豆油、菜籽油、棕櫚油中的一種。
[0017] 本發(fā)明的另一目的是提供上述復(fù)方黨參總皂苷免疫多糖納米乳組合物的制備方 法，包括以下步驟：
[0018] 1)稱取黨參總皂苷、茯苓多糖、甘草多糖、表面活性劑、助表面活性劑、油和蒸餾 水，備用；
[0019] 2)25°C條件下，將助表面活性劑加入到表面活性劑中，得到混合表面活性劑;將黨 參總皂苷和茯苓多糖加入到混合表面活性劑中，然后加入油相，攪拌混勻，所得即為混合油 相；
[0020] 3)25°C條件下，將甘草多糖溶于蒸餾水中，攪拌使其溶解，所得即為水相；
[0021] 4)25°C條件下，將水相緩慢滴加到混合油相中，滴加的同時(shí)不斷攪拌，然后通過納 米乳化機(jī)，即得復(fù)方黨參總皂苷免疫多糖納米乳組合物。
[0022]本發(fā)明復(fù)方黨參總皂苷免疫多糖納米乳組合物的組成原理：
[0023] 1)黨參總皂苷、茯苓多糖和甘草多糖都有免疫調(diào)節(jié)作用，能作用于巨噬細(xì)胞、淋巴 細(xì)胞，調(diào)劑特異性免疫和非特異性免疫功能。
[0024] 2)皂苷由皂苷元與糖構(gòu)成，多糖是單糖通過糖苷鍵形成的。
[0025] 3)傳統(tǒng)的"四君子湯"由黨參(或人參）、茯苓、甘草和白術(shù)四種中藥組成，對(duì)機(jī)體免 疫系統(tǒng)具有多方面的作用。茯苓被稱為"四時(shí)神藥"，將它與各種藥物配伍，不分四季，不管 寒、溫、風(fēng)、濕諸疾，都能發(fā)揮其獨(dú)特功效。甘草素有"十方九草"之稱，作為單味藥或復(fù)方組 分在臨床上廣泛應(yīng)用。
[0026] 4)黨參總皂苷溶解性不好，可以利用納米乳增溶作用，使其存在于納米乳液滴中； 甘草多糖溶于水，可以存在于納米乳液滴外，這樣的組合可以使納米乳液滴內(nèi)外都有藥物。
[0027] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明復(fù)方黨參總皂苷免疫多糖納米乳組合物具有以下優(yōu)點(diǎn)：
[0028] 1)目前，有關(guān)三種中藥主要活性成分黨參總皂苷、甘草多糖和茯苓多糖相關(guān)制劑 的開發(fā)研究較少。本發(fā)明利用納米乳的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，將三種活性成分巧妙地融入到納米乳中， 制備了一種復(fù)方制劑，盡可能發(fā)揮藥效協(xié)同互補(bǔ)的優(yōu)勢(shì)。
[0029] 2)本發(fā)明納米乳組合物粒徑小于IOOnm，透明好、穩(wěn)定性高、粘度小、流動(dòng)性好，可 以將藥物富集于納米液滴中，改善藥物溶解性，促進(jìn)藥物吸收，提高藥物生物利用度。
[0030] 3)本發(fā)明制備方法簡(jiǎn)單易行，設(shè)備易于控制，產(chǎn)品可以通過過濾、紫外或高溫等進(jìn) 行滅菌，質(zhì)量易于控制。，可以用于口服或注射給藥。
【附圖說明】
[0031] 圖1復(fù)方黨參總皂苷免疫多糖納米乳組合物透射電鏡照片。
【具體實(shí)施方式】
[0032] 下面通過具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步說明。
[0033] 實(shí)施例1:
[0034] 1)稱取:黨參總皂苷5.50g、茯苓多糖5.50g、甘草多糖5.50g、聚氧乙烯醚(40)氫化 蓖麻油32.00g、聚乙二醇400 3.50g、肉豆蔻酸異丙酯8.00g、蒸餾水40.OOg，備用；
[0035] 2) 25 °C下，將助表面活性劑聚乙二醇400加入到表面活性劑聚氧乙烯醚(40)氫化 蓖麻油中，得到混合表面活性劑;將黨參總皂苷和茯苓多糖加入到混合表面活性劑中，然后 加入油相肉豆蔻酸異丙酯，攪拌混勻，所得即為混合油相；
[0036] 3)25°C下，將甘草多糖溶于蒸餾水中，攪拌使其溶解，所得即為水相；
[0037] 4)25°C下，將水相緩慢滴加到混合油相中，滴加的同時(shí)不斷攪拌，然后通過納米乳 化機(jī)，即得復(fù)方黨參總皂苷免疫多糖納米乳組合物。
[0038] 實(shí)施例2 組分 含量 黨參總皂苷 4 50 S 茯苓多糖 4 50 g
[0039] 甘草多糖 4 50 g 蓖麻油聚氧乙烯醚35 35,00 g 聚乙二醇200 4.00 g 肉豆蓮酸異丙酯_ 6.00 g
[0040] 蒸餾水 41.50 g
[0041] 上述原料的總質(zhì)量比為100%，其具體制備方法同實(shí)施例1。
[0042] 實(shí)施例3 組分 含量 黨參總皂苷 2.50 g 茯苓多糖 2 50 g 甘草多糖 2.獨(dú)g
[0043] 蓖麻油聚氧乙烯醚40 29.00 g 甘油 6.0:0 g 大豆油 6,00 g 蒸餾水 5150g
[0044] 上述原料的總質(zhì)量比為100%，其具體制備方法同實(shí)施例1。
[0045] 實(shí)施例4 組分 含量 黨參總皂苷 LOOg 茯苓多糖 1.00 g 甘草多糖 1.00 g
[0046] 吐溫-80 25.00 g 乙醇 2 00 g 橄欖油 4.00 g 蒸懐水 66.00 g
[0047] 上述原料的總質(zhì)量比為100%，其具體制備方法同實(shí)施例1。
[0048] 實(shí)施例5 組分 含量 黨參總皂苷 0.10 g 茯苓多糖 0.10 g 甘草多糖 OlOg
[0049] 吐溫-60 20,00 g 聚乙二醇400 ? 00 g 菜籽油 0.50 g 蒸餾水 78,20 g
[0050] 上述原料的總質(zhì)量比為100%，其具體制備方法同實(shí)施例1。 [0051 ] 實(shí)施例6 組分 含量 黨參總皂苷 2.00 g 茯苓多糖 2.0Qg 甘草多糖 2 OOg
[0052] 聚氧乙烯醚(40)氫化蓖麻油 38.00 g 聚乙二醇400 3 OOg 棕櫚油 12.00 g 蒸傭水 41.00 g
[0053] 上述原料的總質(zhì)量比為100%，其具體制備方法同實(shí)施例1。 [0054] 實(shí)施例7 組分 含量 黨參總阜音_ 1.50 g 茯苓多糖 1.50 g 甘草多糖 1 50 g
[0055] 蓖麻油聚氧乙烯醚40 34.00 g 聚乙一.醇 400 14.00 g 肉豆蔻酸異丙酯 5.00g 蒸饋水 42.50 g
[0056] 上述原料的總質(zhì)量比為100%，其具體制備方法同實(shí)施例1。
[0057] 實(shí)施例8 組分 含量 黨參總皂苷 1.80 g 茯苓多糖 1 80 g 甘草多糖 1 80 g
[0058] 聚氧乙烯醚(40)氫化蓖麻油 32.00 g 聚乙二醇 400 10.00 g 大豆油 7.00 g 蒸饋水 45 60 g
[0059]試驗(yàn)例1:形態(tài)觀察
[0060]復(fù)方黨參總皂苷免疫多糖納米乳組合物用蒸餾水稀釋后，滴在覆有支持膜的銅網(wǎng) 上，靜置lOmin，再滴加3%的磷鎢酸溶液于銅網(wǎng)上負(fù)染5min，自然揮干，透射電子顯微鏡觀 察納米乳形態(tài)，見附圖1。圖中近似圓形的黑點(diǎn)即為復(fù)方黨參總皂苷免疫多糖納米乳組合物 液滴，粒徑小于IOOnm，符合納米乳要求。
[0061 ]試驗(yàn)例2:加速穩(wěn)定性試驗(yàn)
[0062]參照《中國藥典》方法進(jìn)行。三批次復(fù)方黨參總皂苷免疫多糖納米乳組合物分別密 封于棕色玻璃瓶?jī)?nèi)，在(30±2)°C、相對(duì)濕度(60±5)%條件下放置6個(gè)月，分別于0、1、2、3和 6個(gè)月末取樣，指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果見表1。三批次樣品放置6個(gè)月，其外觀均保持透明，沒有發(fā)生分 層、渾濁、絮凝和藥物析出現(xiàn)象，穩(wěn)定性好。
[0063]表1加速試驗(yàn)結(jié)果
[0065]試驗(yàn)例3復(fù)方黨參總皂苷免疫多糖納米乳組合物對(duì)免疫抑制小鼠免疫增強(qiáng)作用的 研究
[0066]小鼠分為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、空白納米乳組(空白納米乳）、黨參總皂苷納米 乳組(黨參總阜苷納米乳150mg/kg)、茯苳多糖納米乳組(茯苳多糖納米乳150mg/kg)、甘草 多糖納米乳組(甘草多糖納米乳150mg/kg)、復(fù)方黨參總皂苷免疫多糖溶液組（以黨參總皂 苷劑量計(jì)，劑量為150mg/kg。溶液中黨參總皂苷、茯苓多糖和甘草多糖質(zhì)量比為1: 1:1)、復(fù) 方黨參總皂苷免疫多糖納米乳組合物高中低劑量組（以黨參總皂苷劑量計(jì)，50、100、150mg/ kg) 〇
[0067]給藥前，除了正常對(duì)照組（注射等量生理鹽水）外，其余各組腹腔注射環(huán)磷酰胺 50mg/kg，連續(xù)3天，造成小鼠免疫功能低下。第4天開始灌胃給藥，灌胃量為20mL/kg，連續(xù)15 天，正常對(duì)照組和模型對(duì)照組均灌胃蒸餾水。
[0068] 末次給藥12h后，取小鼠脾臟，制成5 X IO6個(gè)/mL脾細(xì)胞懸液。于96孔培養(yǎng)板中每孔 加入IOOyL脾細(xì)胞懸液，然后每孔再分別加入含ConA(終濃度5yg/mL)或者LPS(終濃度為10μ g/mL)的培養(yǎng)液，每孔總體積為200yL，不足者用RPMI-1640培養(yǎng)液補(bǔ)至200yL。同時(shí)設(shè)陰性對(duì) 照組（細(xì)胞和RPMI-1640培養(yǎng)液）和空白對(duì)照組(RPMI-1640培養(yǎng)液）。將細(xì)胞于37°C 5 %⑶2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)44h后，摻入MTT，然后繼續(xù)培養(yǎng)4h后，酶標(biāo)儀于490nm測(cè)其OD值，計(jì)算增殖刺激 指數(shù)SI。結(jié)果見表2。
[0069]表2復(fù)方黨參總皂苷免疫多糖納米乳組合物對(duì)免疫抑制小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖活 性的影響(n = 10，χ士s)
[0071] 注：同列相同字母表示差異顯著(P<0.05)。
[0072] 與模型對(duì)照組比較，空白納米乳組ConA和LPS誘導(dǎo)的SI值均變化不顯著，表明空白 納米乳對(duì)脾淋巴細(xì)胞的增殖活性無明顯影響。復(fù)方黨參總皂苷免疫多糖納米乳組合物高劑 量組ConA和LPS誘導(dǎo)SI值均顯著高于復(fù)方黨參總皂苷免疫多糖溶液組、黨參總皂苷納米乳 組、茯苓多糖納米乳組和甘草多糖納米乳組，表明黨參總皂苷、茯苓多糖和甘草多糖具有協(xié) 同作用，且納米乳能提高這三種活性成分的免疫調(diào)節(jié)功效。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種復(fù)方黨參總皂巧免疫多糖納米乳組合物，其特征在于，該納米乳的粒徑在1~ lOOnm之間，由下述重量百分比的原料制成： 覺參總皂昔 化10%~5.50% 快《多糖 0.10%~5.50% 甘草多糖 0.i(m~5.50% 表面活性劑 20.00%~3S.00:% 助表面活性劑 1.00%~14.00% 油相 0.50% ~12.00% 余量為蒸饋水，上述原料的總質(zhì)量比為100% ; 所述的黨參總皂巧是通過超聲法提取、大孔吸附樹脂分離純化所得，其含量為 85.70%; 所述的巧等多糖是通過超聲法提取、大孔吸附樹脂純化所得，其含量為90.84%; 所述的甘草多糖是通過超聲法提取、柱層析純化所得，其含量為90.78%; 所述的表面活性劑是吐溫-80、吐溫-60、聚氧乙締酸(40)氨化藍(lán)麻油、藍(lán)麻油聚氧乙締 酸40、藍(lán)麻油聚氧乙締酸35中的一種； 所述的助表面活性劑是聚乙二醇200、聚乙二醇400、甘油、乙醇中的一種； 所述的油相是肉豆違酸異丙醋、橄攬油、大豆油、菜巧油、棟桐油中的一種。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的復(fù)方黨參總皂巧免疫多糖納米乳組合物，其特征在于，由下述 重量百分比的原料制成： 黨參總皂昔 1.00%~4.50% 巧冬多糖 1.00%~4.50% 甘草多糖 1.00%~4.50% 泰面活構(gòu)劑 25.00%~32.00% 助泰面活性劑 2.00%~10.00% 油相 4.00% ~8.00% 余量為蒸饋水，上述原料的總質(zhì)量比為100%。3. 權(quán)利要求1所述的復(fù)方黨參總皂巧免疫多糖納米乳組合物，其特征在于，包括下列步 驟： 1) 稱取黨參總皂巧、巧等多糖、甘草多糖、表面活性劑、助表面活性劑、油和蒸饋水，備 用； 2) 25°C條件下，將助表面活性劑加入到表面活性劑中，得到混合表面活性劑;將黨參總 皂巧和巧等多糖加入到混合表面活性劑中，然后加入油相，攬拌混勻，所得即為混合油相； 3) 25°C條件下，將甘草多糖溶于蒸饋水中，攬拌使其溶解，所得即為水相； 4) 25°C條件下，將水相緩慢滴加到混合油相中，滴加的同時(shí)不斷攬拌，然后通過納米乳 化機(jī)，即得復(fù)方黨參總皂巧免疫多糖納米乳組合物。
【文檔編號(hào)】A61K31/715GK105963343SQ201610316516
【公開日】2016年9月28日
【申請(qǐng)日】2016年5月14日
【發(fā)明人】曹發(fā)昊, 王艷萍, 劉中華
【申請(qǐng)人】運(yùn)城學(xué)院