專利名稱：以樹脂吸附法從沙棘葉中制備沙棘黃酮(苷)的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是以大孔吸附樹脂法從沙棘葉中制備沙棘黃酮(苷)的方法。
沙棘是胡頹子科沙棘屬的灌木或亞喬木，其莖、葉、果中均含有大量的黃酮(苷)類成份，如槲皮素、異鼠李素、山奈酚、楊梅素及其甙類等[1-6][1.CA 65(11):17361C,1966；2.CA62(7):7587a,1965；3.CA 67(9):41015k,1967；4.CA 104:85268q；5.CA 93:41502d；6.CA86:136310j]，共約三十多種[7][7．高錦明，張鞍靈等，沙棘黃酮化學(xué)研究的進(jìn)展，沙棘，1998,11(2):34-40]。這些黃酮類成分可以用于治療心腦血管類疾病，且有較好的療效[8-9][8．沂偉鈞，陳萍等，醋柳黃酮治療高脂血癥和高粘血癥，新藥與臨床，1997,16(1):17-18；9．包文芳，李銳等，沙棘屬植物藥理作用研究進(jìn)展，1997,14(4):303-307]。
長期以來，對于沙棘黃酮(苷)的研究多集中于其藥理藥效上[8-12][10．劉鳳鳴等，沙棘總黃酮對培養(yǎng)大鼠心肌細(xì)胞和心室肌內(nèi)cAMP及腺苷酸環(huán)化酶的影響，中國藥理學(xué)報1988,9(6):539-542；11．吳英等，沙棘總黃酮對兔老化紅細(xì)胞膜的影響，中藥藥理與臨床 ，1997,13(2):24-25；12.WU Jie etc,Electrophysio-logic effects of totalflavones of Hippophae rhamnoides L on guineapig papillary muscles and culturedrat myocardial cells,Acta Pharmacoligica Sinica,1994,15(4):341-343]，對于其提取分離方法的研究報道很少。近年來，關(guān)于從沙棘果中提取沙棘油和以異鼠李素為主的沙棘總黃酮(苷)的報道較多，且已有工業(yè)化生產(chǎn)。提取方法有溶劑萃取法和超臨界二氧化碳萃取法。目前已生產(chǎn)的含沙棘黃酮(苷)類產(chǎn)品，如咳樂沖劑、沙棘口服液等多是用溶劑萃取法從沙棘果中提取的沙棘總黃酮(苷)制得的。而據(jù)文獻(xiàn)報道，沙棘葉中總黃酮(苷)的含量明顯高于沙棘果[13][13．葛效炎等，沙棘化學(xué)成分的研究概況，中草藥，1986,17(8):42-44]，且其生物量很大，是一種豐富的、極有價值的藥用資源。
對于天然產(chǎn)物的提取分離，樹脂吸附法是一種非常有效的方法。利用吸附樹脂從沙棘葉中提取分離黃酮(苷)類成分的研究目前尚未見國內(nèi)外有關(guān)文獻(xiàn)和專利報道。
本發(fā)明的目的是提供一種以樹脂吸附法從沙棘葉中制備沙棘黃酮(苷)的方法，利用具有高選擇性的大孔吸附樹脂的選擇性吸附作用，通過簡單、安全、易于工業(yè)化的工藝從沙棘葉中分離出黃酮(苷)類成分。
本發(fā)明的內(nèi)容主要為樹脂吸附法分離提取沙棘黃酮(苷)。首先用乙醇水溶液提取沙棘葉，得到沙棘葉提取液，沙棘葉與乙醇水溶液的重量比為1∶10-15；使用中極性或強(qiáng)極性大孔吸附樹脂，使沙棘葉提取液以0.5-3 BV/h的流速緩慢流過裝有上述予處理好的吸附樹脂的樹脂柱。然后用1-5倍樹脂體積的水緩慢清洗樹脂柱，用50-90％的乙醇溶液(最好70％)以0.5-2BV/h的流速進(jìn)行洗脫，收集洗脫液，濃縮至干，得到淺棕色提取物，其沙棘總黃酮(苷)的含量為20-40％。
本發(fā)明的具體操作步驟敘述如下沙棘葉提取液的制備稱取沙棘葉粉末，用總量10-15倍50-90％的乙醇水溶液在70℃回流提取三次，依次遞減用量，過濾，回收乙醇，并向體系加適量的水，得混濁液，加甲殼素絮凝劑微量，以滑石粉助濾，得澄清溶液備用。
沙棘黃酮(苷)的提取制備稱取一定量的吸附樹脂用適量的乙醇溶脹過夜，然后逐漸過渡到水相，準(zhǔn)確量取一定體積的濕樹脂并將其轉(zhuǎn)入內(nèi)徑為0.8-100cm，樹脂層徑高比為1∶1.5-20的樹脂柱中，以0.5-3BV/h(最好1BV/h,1BV為1個床體積)的流速使沙棘葉提取液緩慢流過樹脂床。然后用一定量的水緩慢清洗樹脂柱。用50-90％的乙醇溶液以0.5BV-2BV/h的流速緩慢洗脫，收集洗脫液，濃縮至干。

圖1是樹脂吸附法提取物沙棘黃酮產(chǎn)品的HPLC圖。
本發(fā)明提供了簡單易行的從沙棘葉中提取黃酮(苷)類成分的方法-大孔樹脂吸附法，用此方法可以得到含量為20-40％的產(chǎn)品。
實(shí)施例1稱取50g的沙棘葉粉末，用650m185％的乙醇水溶液在70℃回流提取三次，每次用量分別為300ml,200ml,150ml，濾過，回收乙醇，并向體系加適量的水，得混濁液200ml，加0.25％甲殼素絮凝劑4ml，過濾，得澄清溶液250ml備用。
稱取一定量的中極性ADS-17吸附樹脂，用適量的乙醇溶脹過夜，然后逐漸過渡到水相。準(zhǔn)確量取10ml的濕樹脂并將其轉(zhuǎn)入內(nèi)徑為0.8cm樹脂柱中，以1BV/h的流速使50ml沙棘葉提取液緩慢流過樹脂床。然后用10ml水緩慢清洗樹脂柱。用10ml 70％的乙醇溶液以0.5BV/h的流速緩慢洗脫，收集洗脫液，濃縮至干，得到棕色提取物，其沙棘總黃酮(苷)的含量大于20％。
實(shí)施例2稱取50g的沙棘葉粉末，用650m185％的乙醇水溶液在70℃回流提取三次，每次用量分別為300ml,200ml,150ml，濾過，回收乙醇，并向體系加適量的水，得混濁液200ml，加0.25％甲殼素絮凝劑4ml，過濾，得澄清溶液250ml備用。
稱取一定量的強(qiáng)極性ADS-7吸附樹脂，用適量的乙醇溶脹過夜，然后逐漸過渡到水相，準(zhǔn)確量取10ml的濕樹脂并將其轉(zhuǎn)入內(nèi)徑為1.0cm樹脂柱中。用50m15％的稀鹽酸溶液通過樹脂柱，然后用水洗至中性，再用50m15％的NaOH溶液通過樹脂柱，用水洗滌至中性。以1BV/h的流速使50ml沙棘葉提取液緩慢流過樹脂床。然后用10ml水緩慢清洗樹脂柱。用30m170％的乙醇溶液以0.5BV/h的流速緩慢洗脫，收集洗脫液，濃縮至干，得到淺棕色提取物，其沙棘總黃酮(苷)的含量大于22％。
權(quán)利要求
1.一種以樹脂吸附法從沙棘葉中制備沙棘黃酮(苷)的方法，其特征在于它包括下述步驟(1)首先依次遞減用量50-90％的乙醇水溶液在70℃下回流提取沙棘葉三次，沙棘葉與乙醇水溶液的總重量比為1∶10-15，加入微量甲殼素絮凝劑，過濾，得澄清溶液，回收乙醇，得到沙棘葉提取液；(2)使沙棘葉提取液以0.5-3 BV/h的流速緩慢流過裝有予處理好的中極性或強(qiáng)極性大孔吸附樹脂的樹脂柱；(3)用1-5倍樹脂體積的水緩慢清洗樹脂柱，用50-90％的乙醇溶液以0.5-2 BV/h的流速進(jìn)行洗脫，收集洗脫液，濃縮至干，得到淺棕色提取物，即可。
2.按照權(quán)利要求1所述的以樹脂吸附法從沙棘葉中制備沙棘黃酮(苷)的方法，其特征在于過濾時加入助濾劑滑石粉。
3.按照權(quán)利要求1所述的以樹脂吸附法從沙棘葉中制備沙棘黃酮(苷)的方法，其特征在于所述的樹脂柱內(nèi)徑為0.8-100cm，樹脂層徑高比為1∶1.5-20。
4.權(quán)利要求1所述的以樹脂吸附法從沙棘葉中制備沙棘黃酮(苷)方法得到的淺棕色提取物產(chǎn)品，其沙棘總黃酮(苷)的含量為20-40％。
全文摘要
本發(fā)明是以大孔吸附樹脂法從沙棘葉中制備沙棘黃酮(苷)的方法。首先用乙醇水溶液提取沙棘葉,沙棘葉與乙醇水溶液的重量比為1∶10－15;提取液以0.5－3BV/h的流速流過裝有中極性或強(qiáng)極性大孔吸附樹脂的樹脂柱;然后用水清洗樹脂柱,用50－90%的乙醇溶液以0.5－2BV/h的流速洗脫,濃縮脫洗液至干,得到淺棕色提取物,其沙棘總黃酮(苷)的含量為20－40%。本發(fā)明簡單易行、易于工業(yè)化。
文檔編號C07H1/00GK1308084SQ0110373
公開日2001年8月15日 申請日期2001年2月13日 優(yōu)先權(quán)日2001年2月13日
發(fā)明者孫江曉, 黃瑞川 申請人:天津市陽成高科技天然制品有限公司