專利名稱：含(磺基吡喃糖基)?；视脱苌锏乃幤返闹谱鞣椒?br> 技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及含有選自(磺基吡喃糖基)酰基甘油衍生物及其藥學上許可的鹽的至少1種有效成分的藥品。
背景技術(shù)：
眾所周知，在藻類、高等植物等天然物質(zhì)所含有的硫糖脂質(zhì)中，含有具有生理活性的物質(zhì)。
例如，太田等的文章(Chemical & Pharmaceutical Bulletin，46(4)，(1998))中記載著從紅藻杉藻中得到的特定的(磺基吡喃糖基)?；视脱苌锞哂幸种聘叩壬铴痢ⅵ滦虳NA合成酶的活性以及從HIV得到的逆轉(zhuǎn)錄酶的活性。太田等的文章中公開的(磺基奎諾糖基)二酰基甘油衍生物，其以酯鏈結(jié)合在甘油的1位碳原子上的脂肪酸為含有5個雙鍵的20個碳原子的不飽和脂肪酸，與2位的碳原子結(jié)合的脂肪酸為含有16個碳原子的飽和脂肪酸。
水品等的文章(Biochemical Pharmacology，55，537-541，(1998))中記載了從歐洲蕨植物中提取特定的(磺基奎諾糖基)?；视脱苌锏幕旌衔镫m然具有抑制小牛α型DNA合成酶及小鼠β型DNA合成酶的活性，但對從HIV得到的逆轉(zhuǎn)錄酶活性無影響。
另一方面，佐原等的文章(British Journal of Cancer，75(3)，324-332，(1997))記載了鱷魚腸道的丙酮抽提物中含有的(磺基奎諾糖基)單?；视徒M份，在體內(nèi)外均有抑制癌的作用。然而，佐原等發(fā)現(xiàn)的具有抑癌作用的(磺基奎諾糖基)單?；视徒M份為含有16個碳原子的飽和脂肪酸以酯鏈結(jié)合的(磺基奎諾糖基)單酰基甘油為主要成分的物質(zhì)。此(磺基奎諾糖基)單酰基甘油組份中，脂肪酸的?；糠譃椴伙柡椭舅岬孽；鶜埢?，其量是及其微量的。而且，佐原等對其發(fā)現(xiàn)的具有抑癌活性的(磺基奎諾糖基)單酰基甘油混合物中所含有的每種成分的抑癌活性沒有進行探討。
另外，在特表平5-501105號中雖然記載著(磺基奎諾糖基)單?；视脱苌锞哂锌共《净钚裕唧w地說具有抗人免疫缺陷病毒活性，但沒有記載其具有抑制DNA合成酶活性和抗癌活性。
發(fā)明的揭示因此，本發(fā)明的目的為提供含有有效成分為(磺基吡喃糖基)?；视脱苌锏乃幤?。
本發(fā)明的發(fā)明者們，發(fā)現(xiàn)了在特定的(磺基吡喃糖基)?；视脱苌镏杏兴幚砘钚缘奈镔|(zhì)，完成了本發(fā)明。即，本發(fā)明提供含有選自如下通式(1) (式中，R101表示不飽和高級脂肪酸的?；鶜埢?，R102表示氫原子和不飽和高級脂肪酸的?；鶜埢?所表示的化合物及其藥學上許可的鹽類的至少1種有效成分的藥品。
附圖的簡單說明

圖1為利用細胞來顯示本發(fā)明藥品抑癌活性的圖。
圖2為用動物實驗法來顯示本發(fā)明藥品抑癌活性的圖。
圖3為用動物實驗法來顯示本發(fā)明藥品抑癌活性的圖。
圖4為用動物實驗法來顯示本發(fā)明藥品抑癌活性的圖。
圖5為用動物實驗法來顯示本發(fā)明藥品抑癌活性的圖。
圖6為用動物實驗法來顯示本發(fā)明藥品抑癌活性的圖。
圖7為用動物實驗法來顯示本發(fā)明藥品抑癌活性的圖。
實施發(fā)明的最佳形態(tài)在本說明書中，保護基團的“碳原子數(shù)”即該保護基未取代時的碳原子數(shù)。因此，例如以R6來表示的基團為取代烷基時，其碳原子數(shù)不包含該烷基上取代基團的碳原子數(shù)，而僅為烷基骨架部分的碳原子數(shù)。保護基團不是烷基時也同樣。
首先，對本發(fā)明藥品所含有的作為有效成分的通式(1)所表示的(磺基吡喃糖基)?；视脱苌镒饕辉敿氄f明。
在上述通式(1)的(磺基吡喃糖基)?；视脱苌镏?，構(gòu)成吡喃糖苷的糖骨架的吡喃糖包括α-D-奎諾糖(6-脫氧-α-D-葡萄糖)、β-D-奎諾糖(6-脫氧-β-D-葡萄糖)、α-D-巖藻糖(6-脫氧-α-D-半乳糖)、β-D-巖藻糖(6-脫氧-β-D-半乳糖)、α-D-鼠李糖(6-脫氧-α-D-甘露糖)和β-D-鼠李糖(6-脫氧-β-D-甘露糖等)。
在甘油的2位碳原子(不對稱碳原子)的絕對構(gòu)型，可以是S也可以是R。
這些吡喃糖苷的糖骨架可以是船式或者椅式構(gòu)象。但是，從穩(wěn)定性的角度來看椅式構(gòu)象較好。
在上述的通式(1)的(磺基吡喃糖基)?；视脱苌镏?，R101表示氫原子或不飽和高級脂肪酸的酰基殘基。
雖然提供R101所示不飽和高級脂肪酸的酰基殘基的脂肪酸包括直鏈或支鏈不飽和高級脂肪酸，但從通式(1)所示化合物用作藥品這一點來看，直鏈不飽和脂肪酸更好。
直鏈不飽和脂肪酸的?；鶜埢?4-26個碳原子數(shù)(最好是14-26的偶數(shù))有1-6個不飽和鍵。即直鏈不飽和高級脂肪酸的?；鶜埢猛ㄊ絉-C(＝O)-[式中，R為13-15個碳原子(最好是13-25的奇數(shù))的、直鏈脂肪族不飽和烴基，此烴基中含有1-6個不飽和鍵]來表示。
在上述通式(1)的(磺基吡喃糖基)?；视脱苌镏?，R102表示氫原子或不飽和高級脂肪酸的酰基殘基。特別在抑癌活性上來說，R102為氫原子更好。R102為不飽和高級脂肪酸的?；鶜埢鶗r，作為提供此?；鶜埢闹舅?，可選擇與R101具有同樣意義的物質(zhì)。R101與R102可以是相同或不同的?；?。
下面說明本發(fā)明的(磺基吡喃糖基)酰基甘油衍生物的制造方法。
本發(fā)明的(磺基吡喃糖基)?；视脱苌锇聪铝辛鞒?的反應式，可經(jīng)(工序A)-(工序J)而制成。流程1 (工序A)將與吡喃糖的C1碳原子結(jié)合的羥基進行2-丙烯基化。(工序B)保護吡喃糖的C6碳原子的羥基。(工序C)保護結(jié)合在吡喃糖的C2、C3及C4碳原子上的羥基。(工序D)使先前保護的C6碳原子的羥基去保護。(工序E)將與C6碳原子結(jié)合的羥基取代為可變換成碳酰硫基的基團(例如烷磺酰氧基或者芳基磺酰氧基)。(工序F)將C6碳原子碳酰硫基化。(工序G)將與C1碳原子結(jié)合的2-丙烯基進行二醇化。(工序H)對所得的二醇的兩個羥基或者僅僅1位羥基用所期望的不飽和高級脂肪酸進行酯化。(工序I)將C6碳原子的碳酰硫基形成磺酸鹽。(工序J)通過使所得到磺酸鹽的C2、C3及C4碳原子的保護基脫保護，可制成鹽形式的本發(fā)明的(磺基吡喃糖基)酰基甘油衍生物。如此得到的鹽采用鹽酸等酸的滴定，可制成本發(fā)明的(磺基吡喃糖基)?；视脱苌铩?br> 下面對上述工序A-J進行更詳細的說明。
工序A的2-丙烯基化通?？稍谌谆撬岬葟娝釛l件下，在室溫-100℃，最好在80-90℃的溫度下，使吡喃糖和烯丙醇反應半天-2天來完成。但是，設(shè)定的反應條件不同，反應時間也不同。
在工序B中，保護與C6碳原子鍵合的羥基，使-OR6結(jié)合到C6碳原子上(在此，R6表示烷基或取代的甲硅烷基。)能保護羥基的化合物可采用能使以R6表示的基團形成烷基或取代甲硅烷基的化合物。
在以R6表示的烷基中，最好含有體積大的取代烷基。取代基包括甲基、苯基等。取代烷基的具體例子可為叔丁基、三苯甲基等。
以R6表示的基團為取代甲硅烷基時，取代的甲硅烷基的取代基包括低級烷基，較好是碳原子數(shù)為1-4的烷基(例如甲基、乙基、異丙基和叔丁基)，及芳基，較好為碳原子數(shù)為6的芳基(如苯基)。以R6表示的取代甲硅烷基較好是三取代的甲硅烷基，更好的是叔丁基二苯基甲硅烷基。
在工序B的羥基保護中，得到R6為烷基的化合物3的情況下，可在溶解于干燥吡啶等有機溶劑中的化合物2的溶液中，加入以R6-X表示的化合物(式中的R6為上述規(guī)定的烷基，X為氯原子等鹵原子)，在對-二甲基氨基吡啶(DMAP)等催化劑存在的條件下，于室溫下進行反應。從制造成本、反應的容易性來看，化合物R6-X最好采用三苯氯甲基。
得到取代甲硅烷基為R6的化合物3的情況下，化合物R6-X可采用叔丁基二苯基甲硅烷基氯等，在咪唑等催化劑存在的條件下，通常于室溫下反應半天-2天。但是，設(shè)定的反應條件不同，反應時間也不同。
在工序C中，保護與C2、C3及C4碳原子結(jié)合的羥基，使其分別為-OR1、-OR2和-OR3(在此R1-R3互相獨立地表示烷基或取代甲硅烷基)。這些羥基的保護可通過用氫氧化鈉使溶解于N，N-二甲基甲酰胺(DMF)等有機溶劑中的化合物3的與C2、C3及C4碳原子結(jié)合的羥基活化，使能保護羥基的化合物在室溫進行反應來完成。
能保護羥基的化合物可采用芐基溴、對甲氧基芐基溴、叔丁基二甲基甲硅烷基氯和三乙基甲硅烷基氯等。
用這些能保護羥基的化合物進行的反應，可根據(jù)不同保護基適用的條件來進行。
在工序D中，與C6碳原子結(jié)合的保護基的脫保護可通過使溶解于甲醇等有機溶劑中的化合物4的溶液在對甲苯磺酸等催化劑存在的條件下，通常于室溫反應12小時-1天。但是，設(shè)定的反應條件不同，反應時間也不同。
在工序E中，通過在化合物5的C6碳原子的羥基上，結(jié)合上R4，即烷基磺?；蚍蓟酋；?，使此羥基轉(zhuǎn)化為-OR4，得到化合物6。
轉(zhuǎn)化為-OR4基團的反應，可通過在溶于有機溶劑的化合物5的溶液中加入具有烷基磺?；蚍蓟酋；幕衔飦磉M行。具有烷基磺?；幕衔锏耐榛^好為未取代的烷基，更好為低級烷基，更理想的為含有1-2個碳原子的烷基(甲基和乙基)。具有烷基磺?；幕衔?，可采用以通式R4’-X(式中R4’表示烷基磺酰基、X表示鹵原子)表示的化合物。例如可用具有甲磺酰氯、乙磺酰氯等基團的化合物。
另一方面，具有芳基磺?；幕衔锏姆蓟鶠槲慈〈蛉〈姆蓟?，較好為含有6個碳原子的芳基(例如苯基)。在取代的芳香基的情況下，其取代基包括對-甲基、對-甲氧基等。具有芳基磺?；幕衔锟捎靡酝ㄊ絉4”-X(式中R4”表示芳基磺酰基、X表示鹵原子)表示的化合物。例如，包括對-甲基苯磺酰氯、對-甲氧基苯磺酰氯、苯磺酰氯等。
這些具有烷基磺酰基或者芳基磺?；幕衔镏?，最好為具有甲苯磺?；幕衔?，由于其易于反應。
在工序E的反應中，有機溶劑可采用吡啶、二氯甲烷等。
上述反應，根據(jù)需要可在DMAP等催化劑存在的情況下，通常于室溫下進行2小時-1天的反應。但是，設(shè)定的反應條件不同，反應時間也不同。
在工序F中，化合物6的磺酰氧基(-OR4)取代為碳酰硫基[-SC(＝O)R5(在此R5表示氫原子、烷基或芳基)]。
在此反應中，通過使在有機溶劑中的化合物6的烷基磺酰氧基或芳基磺酰氧基可取代為碳酰硫基的化合物(以下也稱作“O-取代基→S-取代基化合物”)反應得到化合物7。
在O-取代基→S-取代基化合物中，包括硫代羧酸的堿金屬鹽及堿土金屬鹽。硫代羧酸包括硫代甲酸和低級硫代羧酸，較佳為由碳原子數(shù)為1-5個的脂肪烴取代得到的脂肪族硫代羧酸(如硫代乙酸、硫代丙酸)、及最好是由6-10個碳原子的芳烴取代的芳香族硫代羧酸(如硫代安息香酸)等。
和這些硫代羧酸形成鹽的堿金屬包括鉀、鈉等，堿土金屬包括鎂、鈣等。
在上述的O-取代基→S-取代基化合物中，常使用硫代乙酸的鹽，由于其反應的穩(wěn)定性及其在此后的制造過程中硫原子容易被氧化。
反應中使用的有機溶劑包括醇類，較佳為低級醇(如甲醇、乙醇、丙醇)、N，N-二甲基甲酰胺、二甲亞砜等。
上述反應通?？筛鶕?jù)室溫及所使用的溶劑的沸點，攪拌1小時-1天來進行。但是，設(shè)定的反應條件不同，反應時間也不同。
工序G的二醇化可在叔丁醇和水等溶劑的混合液中溶解的化合物7的溶液中加入四氧化鋨等氧化劑，在N-氧化三甲胺等再氧化劑存在的條件下，在室溫下通常進行1小時-1天的反應而得。但是，設(shè)定的反應條件不同，反應時間也不同。
通過工序H的酯化反應，可得到所期望的不飽和脂肪酸和甘油以酯鍵結(jié)合的(磺基吡喃糖基)酰基甘油衍生物。
此反應可在溶解于二氯甲烷等合適的有機溶劑中的化合物8的溶液中，加入對應于最終生成物的不飽和脂肪酸，如有必要，可使其在乙基二甲氨基丙基碳二亞胺(EDCI)-DMAP類等合適的催化劑存在的條件下進行。
工序H的反應中，應加入的脂肪酸可采用由上述通式(1)的R101所表示的含有?；鶜埢牟伙柡透呒壷舅?。
通過工序H的反應，將化合物9中R101及R102為添加的不飽和高級脂肪酸?；鶜埢谋景l(fā)明通式(1)所表示的二酰基酯與僅R101上的不飽和高級脂肪酸的?；鶜埢Y(jié)合，可得到單酰基酯的混合物。在工序H的反應中，根據(jù)需要，應加入的不飽和高級脂肪酸可有兩種以上。此時，可得到R101和R102為相同或不同?；鶜埢耐ㄊ?1)所示二?；ズ蚏101為互不相同的酰基的單?；サ幕旌衔?。
這些單酯和二酯的混合物可根據(jù)需要，例如采用色譜法，將各種酯分離以提供給下個工序。
另外，也可根據(jù)需要，對上述工序H中得到的單酯，可通過將R101的?；鶜埢c含有其他酰基殘基的脂肪酸反應，得到與R102和R101不同酰基殘基的二酯。此酯化反應的條件，除脂肪酸是不同的以外，可設(shè)定與工序H同樣的條件。
工序I的磺酸鹽化可通過以乙酸和乙酸鉀緩沖的有機溶劑中的化合物9的溶液中，加入OXONE(2KHSO5、KHSO4、K2SO4)、鉬類氧化劑(如七鉬酸六銨)等氧化劑，在室溫使其反應來進行。
工序J的與C2-C4碳原子結(jié)合的保護基的脫保護，可采用與使用的保護劑相應、而且能維持不飽和脂肪酸的雙鏈的脫保護方法進行。例如對甲硅烷基類的保護基，可用酸催化劑(如三氟乙酸)來進行脫保護。
另外，初始物質(zhì)吡喃糖，由于可在溶液中形成α-差向異構(gòu)體及β-差向異構(gòu)體，各工序的生成物變成了α-差向異構(gòu)體及β-差向異構(gòu)體的混合物。這些混合物可采用色譜法等進行分離。另外，可根據(jù)糖的種類不同，通過工序A后的亞芐基化使其結(jié)晶得到分離。
下面，就本發(fā)明的含有選自(磺基吡喃糖基)?；视脱苌锛捌渌帉W上許可的鹽類的至少1種有效成分的藥品進行說明。
本發(fā)明的藥理有效成分(磺基吡喃糖基)?；视脱苌镏?，吡喃糖為奎諾糖、巖藻糖和鼠李糖，吡喃糖與甘油的結(jié)合為α鍵或β鍵的異構(gòu)體，含有甘油的C2碳原子(不對稱碳原子)的異構(gòu)體等。本發(fā)明的藥品中，只要對其活性沒有壞的影響，可單獨含有這些異構(gòu)體或含有兩種以上異構(gòu)體的混合物。
本發(fā)明作為藥品的用途包括DNA合成酶抑制劑及抗癌劑。
本發(fā)明的藥品能采用的藥學上許可的鹽中，包括如鈉、鉀的一價陽離子的鹽，但并不僅限于這些。下面的本發(fā)明的(磺基吡喃糖基)?；视脱苌锛捌渌帉W上許可的鹽類的化合物也稱作為“本發(fā)明的藥理活性物質(zhì)”。
本發(fā)明的藥理活性物質(zhì)，例如可經(jīng)口用藥、非經(jīng)口用藥。本發(fā)明的藥理活性物質(zhì)可按不同的用藥途徑，通過與合適的藥學上許可的賦形劑或稀釋劑等組合，使其制成為藥品。
適合于經(jīng)口用藥的劑型包括固體、半固體、液體或氣體等狀態(tài)的物質(zhì)，具體可有片劑、膠囊劑、粉劑、顆粒劑、溶液劑、懸濁液、糖漿、酏劑等，但也并不限于這些。
為了將本發(fā)明的藥理活性物質(zhì)制成片劑、膠囊劑、粉劑、顆粒劑、溶液劑、懸濁液等，可采用已知的方法，將本發(fā)明的藥理活性物質(zhì)與粘合劑、片劑崩解劑、潤滑劑等混合，更可根據(jù)需要，與稀釋劑、緩沖劑、濕潤劑、防腐劑、矯味劑等混合制成藥劑。具例來說，上述粘合劑可使用結(jié)晶纖維素、纖維素衍生物、玉米淀粉、明膠等，片劑崩解劑可使用玉米淀粉、馬鈴薯淀粉、羧甲基纖維素鈉等，而潤滑劑包括滑石、硬脂酸鎂等，更可使用乳糖、甘露醇等以往使用的添加劑。
另外，本發(fā)明的藥理活性物質(zhì)，其液體、細微粉末狀物質(zhì)可與氣體或液體的噴霧劑一起，或可根據(jù)需要與濕潤性賦予劑之類已知的助劑一起，填充至如氣溶膠容器、噴霧器那樣的非加壓容器中，以氣溶膠劑或吸入劑的形式用藥。噴霧劑可用二氯氟甲烷、丙烷、氮氣等加壓氣體。
本發(fā)明的藥理活性物質(zhì)非經(jīng)口用藥時，可采用如直腸用藥及注射用藥等方式。
直腸用藥時，可作為栓劑來用。栓劑通過已知的方法，將本發(fā)明的藥理活性物質(zhì)與體溫融化、室溫固化的可可脂、碳石蠟、聚乙二醇等賦形劑混合，使之成形而制成制劑。
通過注射用藥的話，可注射至皮下、皮內(nèi)、靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)等。這些注射用制劑可采用己知的方法，將本發(fā)明的藥理活性物質(zhì)在植物油、合成脂肪酸甘油酯、高級脂肪酸的酯、丙二醇類非水性溶劑中溶解、懸濁、或乳化，更可根據(jù)需要，與可溶化劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑、乳化劑、穩(wěn)定劑及防腐劑之類常用添加劑一起制成制劑。
為使將本發(fā)明的藥理活性物質(zhì)制成溶液、懸濁液、糖漿、酏劑等形態(tài)、可采用注射用滅菌水、生理鹽水之類藥學上許可的溶劑。本發(fā)明的藥理活性物質(zhì)也可與藥學上許可的具有其他活性的化合物一起制成制劑。
本發(fā)明的藥理活性物質(zhì)可根據(jù)用藥方式、用藥途徑、所要治療的疾病的程度和階段等設(shè)定、調(diào)節(jié)合適的用藥量。舉1例說明，經(jīng)口用藥時，藥理活性物質(zhì)可設(shè)定為1-10mg/kg體重/日，注射用藥時，藥理活性物質(zhì)為1-5mg/kg體重/日，經(jīng)直腸用藥時，藥理活性物質(zhì)為1-5mg/kg體重/日，但也并不僅限于此。
將本發(fā)明的藥理活性物質(zhì)用作抗癌劑時，本發(fā)明的藥理活性物質(zhì)可奏效的癌中，包括具有惡性腫瘤性質(zhì)的癌，如包括人類的乳腺癌、上皮癌、肉瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、黑色素瘤、淋巴瘤等類固形癌、以及白血病等類液性癌。
實施例下面，舉例說明本發(fā)明。但本發(fā)明并不基僅限于這些例子。
<合成例>
本發(fā)明的(磺基吡喃糖基)?；视脱苌锏闹圃旃ば蛞?磺基奎諾糖基)單?；视挺裂苌餅槔?，以下面的流程2表示。
流程2 Ts＝甲苯磺?；?，TBDMS＝叔丁基二甲基甲硅烷、AnS＝乙酰硫基R1-1表示不飽和高級脂肪酸的?；鶜埢鵕102表示氫原子或不飽和高級脂肪酸的?；鶜埢磻獥l件a；烯丙醇、三氟甲磺酸，80℃m；苯甲醛、氯化鋅、室溫n；乙酸，水100℃p；甲苯磺酰氯、二甲基氨基吡啶，吡啶，室溫q；叔丁基二甲基甲硅烷基三氟甲磺酸，2，6-二甲基吡啶，二氯甲烷，室溫f；硫代乙酸鉀、乙醇，回流g；四氧化鋨，N-氧化三甲胺水合物，叔丁醇，水h；脂肪酸，1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)-碳二亞胺鹽酸鹽(EDCI)，二氯甲烷，室溫i；OXONE，冰乙酸，乙酸鉀，室溫j；乙酸、四氫呋喃，三氟乙酸，水，室溫上述流程2除了先前所述的流程1的工序B-工序E以外，與流程1相同。即在流程2中，用化合物II和苯甲醛反應制得亞芐基衍生物(工序m)代替流程1的工序B。根據(jù)此反應，可使α-差向異構(gòu)體結(jié)晶得到分離。
流程2的反應中，在工序p中，使C6碳與對-甲苯磺酰氯反應，結(jié)合上甲苯磺?；?，采用叔丁基二甲基甲硅烷基保護C2、3、4碳(工序q)的途徑。這時，由于甲苯磺?；欠€(wěn)定的，因此流程1的反應中由烷基和取代甲硅烷基對C6碳原子的保護(工序B)、脫保護(工序D)的工序可省去。
另外，通過工序h得到單酯和二酯的混合物，用色譜法將它們分離，可分別提供給工序i。
<實施例1>
途徑a；1-0-(2-丙烯基)-D-葡萄糖(II)在250ml烯丙醇中加入D-葡萄糖(I)100g，使其充分溶解，在冰浴條件下緩慢加入0.8ml三氟甲磺酸。此后在80℃的油浴條件下攪拌30小時使其反應。當反應進行得很充分時，用1ml三甲胺中和后，減壓濃縮。用薄層色譜法確認收率為60-70％。 途徑m；1-O-(2-丙烯基)-4，6-O-亞芐基-α-D-葡萄糖(III)在210ml苯甲醛中加入37.5g化合物(II)，使其充分溶解，在此溶液中加入98g氯化鋅，室溫反應4小時。此后，將反應液加入到500ml己烷中，再加入100ml碳酸氫鈉稀溶液，0℃放置30分鐘使其結(jié)晶。將此結(jié)晶抽濾后，溶解于50ml乙醇中，于0℃放置30分鐘，使其重結(jié)晶(產(chǎn)量21g，68.1mmol，收率40.0％)。
1H NMR(300MHz、CDCl3＋TMS)；7.51～7.49(2H、m、Ar)、7.38～7.33(3H、m、Ar)、5.98～5.85(1H、m、-CH＝CH2)、5.51(1H、s、Ar-CH)、5.31(1H、dd、J＝1.5&15.9、-CH＝CH2)、5.23(1H、dd、J＝1.2&10.4、-CH＝CH2)、4.90(1H、d、J＝3.9、H-1)、4.28～4.19(2H、m、-CH2-CH＝CH2)、4.06～4.00(1H、m、H-5)、3.93(1H、t、J＝9.3、H-3)、3.87～3.78(1H、m、H-6a)、3.70(1H、t、J＝10.2、H-2)、3.60(1H、dd、J＝3.8&9.2、H-6b)、3.47(1H、t、J＝9.3、H-4) 途徑n；1-0-(2-丙烯基)-α-D-葡萄糖(IV)將10.7g(34.7mmol)化合物(III)加入260ml醋酸∶水＝8∶5的溶液中溶解，于100℃反應1小時后，減壓濃縮，最后用硅膠快速色譜法(二氯甲烷∶甲醇＝6∶1)提純(產(chǎn)量6.3mg，28.6mmol，收率82.4％)。
1H NMR(300MHz、CD3OD＋TMS)；5.92～5.79(1H、m、-CH＝CH2)、5.26～5.18(1H、m、-CH＝CH2)、5.07～5.03(1H、m、-CH＝CH2)、4.23～3.23(7H、m) 途徑p；1-0-(2-丙烯基)-6-0-(4-甲苯磺?；?-α-D-葡萄糖(V)將6.3g(28.6mmol)化合物(IV)溶解在200ml干燥吡啶中，加入195g對-二甲氨基吡啶(DMAP)、7.0g對-甲苯磺酰氯，邊攪拌邊于室溫下反應16小時。此后，加入20ml冷的蒸餾水終止反應。用乙酸乙酯抽提(200ml×3次)，合并有機層用1.0M及0.1M的鹽酸中和至pH為4，再用飽和食鹽水洗滌(200ml×2次)后，用無水硫酸鈉干燥、過濾、減壓濃縮，最后用硅膠快速色譜法(二氯甲烷∶甲醇＝20∶1)純化(產(chǎn)量8.6mg，23.0mmol，收率83.8％)。
1HNMR(300MHz、CDCl3＋TMS)；7.77(2H、d、J＝8.3、TsCH3側(cè)的Ar)、7.30(2H、d、J＝8.1、TsSO2側(cè)的Ar)、5.90-5.77(1H、m、-CH＝CH2)、5.24(1H、dd、J＝1.4和17.2、-CH＝CH2)、5.11(1H、d、J-1.2和12.4、-CH＝CH2)、4.79(1H、d、J＝3.3、H-1)、4.38-3.38(8H、m)、2.40(3H、s、TSCH3) 途徑q；2，3，4-三-0-(叔丁基二甲基甲硅烷基)-1-0-(2-丙烯基)-6-0-(4-甲苯磺?；?-α-D-葡萄糖(VI)將11.2g(29.9mmol)化合物(V)溶解在25ml干燥的二氯甲烷中，加入23.8g三氟甲磺酸叔丁基二甲基甲硅烷酯、14.4g 2，6-二甲基吡啶，在氮氣流下邊攪拌邊反應16小時。此后，加入150ml二氯甲烷終止反應，再用飽和食鹽水洗滌(200ml×2次)后，用無水硫酸鈉干燥、過濾、減壓濃縮，最后用硅膠快速色譜法(己烷∶乙酸乙酯＝30∶1)純化)(產(chǎn)量19.6g，27.4mmol，收率91.6％)。
1HNMR(300MHz、CDCl3＋TMS)；7.83(2H、d、J＝8.3、TsCH3側(cè)的Ar)、7.29(2H、d、J＝8.0、TsSO2側(cè)的Ar)、5.92-5.79(1H、m、-CH＝CH2)、5.21(1H、dd、J＝1.5和17.2、-CH＝CH2)、5.11(1H、d、J＝10.4、-CH＝CH2)、4.67(1H、d、J＝2.8、H-1)、4.30-3.44(8H、m)、2.41(3H、s、TSCH3)、0.91-0.78(27H、m、t-Bu的CH3)、0.13-0.02(18H、m、Si-CH3)， 途徑f；2，3，4-三-0-(叔丁基二甲基甲硅烷基)-1-0-(2-丙烯基)-6-脫氧-6-乙酰硫代-α-D-葡萄糖(VII)將7.9g(11.0mmol)化合物(VI)溶解在20ml干燥的乙醇中，加入1.8g硫代乙酸鉀、在回流條件下邊攪拌邊反應3小時。此后，加入100ml冷蒸餾水終止反應，用乙酸乙酯抽提(200ml×3次)，合并有機層，用飽和食鹽水洗滌(200ml×2次)后，用無水硫酸鈉干燥、過濾、減壓濃縮，最后用硅膠快速色譜法(己烷∶乙酸乙酯＝50∶1)純化(產(chǎn)量5.6g，9.02mmol，收率82.0％)。
1HNMR(300MHz、CDCl3＋TMS)；5.97-5.81(1H、m、-CH＝CH2)、5.26(1H、dd、J＝1.6和17.2、-CH＝CH2)、5.13(1H、dd、J＝1.6和10.4、-CH＝CH2)、4.73(1H、d、J＝3.2、H-1)、4.32-3.42(7H、m)、2.83(1H、dd、J＝9.8和13.3、H-6b)、2.30(3H、s、SCOCH3)、0.91-0.82(27H、m、t-Bu的CH3)、0.12—-0.03(18H、m、Si-CH3) 途徑g；3-0-[2，3，4-三-0-(叔丁基二甲基甲硅烷基)-6-脫氧-6-乙酰硫代-α-D-吡喃葡萄糖基]-甘油(VIII)將5.6g(9.02mmol)化合物(VII)溶解在t-丁醇∶水＝4∶1的溶液中，加入1.5gN-氧化三甲胺二水合物、15ml四氧化鋨-t-丁醇溶液(0.04M)，在室溫攪拌下反應22小時。此后，加入15g活性碳，在攪拌下室溫放置1.5小時，使其吸附了四氧化鋨后，減壓過濾。隨后，加入200ml冷的蒸餾水終止反應，用乙酸乙酯抽提(200ml×3次)，合并有機層，用飽和食鹽水洗滌(300ml×2次)后，用無水硫酸鈉干燥、過濾、減壓濃縮，最后用硅膠快速色譜法(己烷∶乙酸乙酯＝3∶1→2∶1)純化(產(chǎn)量5.2g，7.94mmol，收率88.0％)。
1HNMR(300MHz、CDCl3＋TMS)；4.73(1H、m、H-1(R及S))、4.12-3.4(10H、m)、2.86(1H、dd、J＝9.2和13.6、H-6b)、2.32(3H、s、SCOCH3)、0.86-0.79(27H、m、t-Bu的CH3)、0.08—-0.03(18H、m、Si-CH3) 途經(jīng)h；3-0-[2，3，4-三-0-(叔丁基二甲基甲硅烷基)-6-脫氧-6-乙酰硫代-α-D-吡喃葡萄糖基]-1-0-油酰-甘油(IX)及3-0-[2，3，4-三-0-(叔丁基二甲基甲硅烷基)-6-脫氧-6-乙酰硫代-α-D-吡喃葡萄糖基]-1，2-二-0-油酰-甘油(IX’)將1.37g(2.09mmol)化合物(VIII)溶解在20ml干燥的二氯甲烷中，加入600mgEDCI、26mgDMAP、660mg油酸，于室溫攪拌下反應16小時。此后，加入200ml二氯甲烷終止反應，再用飽和食鹽水洗滌(100ml×2次)后，用無水硫酸鈉干燥、過濾、減壓濃縮，最后用硅膠快速色譜法(己烷∶乙酸乙酯＝20∶1→10∶1→7∶1)純化(二酯的產(chǎn)量772mg(652μmol)；單酯的產(chǎn)量895mg(974μmol)，收率(兩者總和)78.0％)。
1HNMR(300MHz、CDCl3＋TMS)；5.32-5.28(2H、m、-CH＝CH-)、4.68(1H、m、H-1(R及S))、3.98-3.36(10H、m)、2.81(1H、dd、J＝9.5和13.4、H-6b)、2.32-2.27(5H、m、OCOCH2和SCOCH3)、1.98-1.93(4H、m、CH2-CH＝CH-CH2)、1.61-1.56(2H、m、OCOCH2CH2)、1.28-1.23(20H、br、-CH2-)、0.88-0.79(30H、m、t-Bu的CH3和Acyl的CH3)、0.09—-0.04(18H、m、Si-CH3)(單酯的NMR) (單酯(IX)；R101＝油?；?、R102＝H二酯(IX’)；R101＝R102＝油酰基)途經(jīng)i；3-0-[2，3，4-三-0-(叔丁基二甲基甲硅烷基)-6-脫氧-6-磺基-α-D-吡喃葡萄糖基]-1-0-油酰-甘油鈉鹽(X)將21.4g(23.2mol)化合物(IX；單酯)溶解在3.5ml冰乙酸中，加入500mg乙酸鉀、35.4mgOXONE，室溫攪拌反應6小時。此后，加入15ml冷的蒸餾水終止反應，用乙酸乙酯抽提(20ml×5次)，合并有機層，用飽和碳酸氫鈉溶液中和(70ml×5次)后，再用飽和食鹽水洗滌(60ml×2次)，用無水硫酸鈉干燥、過濾、減壓濃縮，最后用硅膠快速色譜法(二氯甲烷∶甲醇＝50∶1→20∶1)純化后，再用高速液相色譜(ODS柱，甲醇∶水＝80∶20)純化(產(chǎn)量3.3mg，3.49μmol，收率15.0％)。
1HNMR(300MHz、CDCl3＋TMS)；5.16-5.14(2H、br、-CH＝CH-)、4.60(1H、br、H-1(R及S))、4.32-2.88(11H、m)、2.17-2.13(2H、br、OCOCH2)、1.82-1.80(4H、br、CH2-CH＝CH-CH2)、1.42(2H、br、OCOCH2CH2)、1.11(20H、br、-CH2-)、0.72(30H、m、t-Bu的CH3和Acyl的CH3)、-0.08(18H、br、Si-CH3) 途經(jīng)j；3-0-[6-脫氧-6-磺基-α-D-吡喃葡萄糖基]-1-0-油酰-甘油鈉鹽(XI)將358.4g(378mol)化合物(X)溶解在7ml乙酸∶四氫呋喃∶三氟乙酸∶水＝3∶1∶0.4∶1的溶液中，室溫攪拌反應16小時。此后，用乙酸乙酯抽提(10ml×3次)，合并有機層，用飽和食鹽水洗滌(20ml×2次)，用無水硫酸鈉干燥、過濾、減壓濃縮，最后用硅膠快速色譜法(二氯甲烷∶甲醇＝10∶1→二氯甲烷∶甲醇∶水＝65∶25∶4)純化(產(chǎn)量138.1mg，229mol，收率62.7％)。
1HNMR(300MHz、CD3OD＋TMS)；5.24-5.17(2H、m、-CH＝CH-)、4.69(1H、m、H-1(R及S))、4.18-2.75(11H、m)、2.29-2.21(2H、m、OCOCH2)、1.94-1.90(4H、m、CH2-CH＝CH-CH2)、1.49(2H、br、OCOCH2CH2)、1.20(20H、br、-CH2-)、0.78(3H、t、J＝6.3、CH3) <實施例2>
除以9-十四烯酸代替上述實施例1的工序H中的油酸以外，其余的與實施例1相同，進行工序h-j的反應，合成3-0-(6-脫氧-6-磺基-α-D-吡喃葡萄糖基)-1-0-肉豆蔻腦酰甘油鈉鹽(產(chǎn)量118.7mg，217μmol，收率59.8％)。
<實施例3>
以棕櫚烯酸代替油酸，與上述例2同樣地，合成3-0-(6-脫氧-6-磺基-α-D-吡喃葡萄糖基)-1-0-棕櫚酰-甘油鈉鹽(產(chǎn)量142mg，247μmol，收率67.7％)。
<實施例4>
上述實施例1的從化合物(IX)制造化合物(X)的途徑i中，以化合物(IX’∶二酯)取代化合物(IX單酯)及用鉬類氧化劑取代OXONE的例子如下。
取13.1mg(11.0mol)化合物(IX’二酯)溶解在0.5ml二氯甲烷和0.5ml甲醇中，加入50μL溶解在30％過氧化氫溶液中的0.06M七鉬酸六銨四水合物(NH4)6MO7O244H2O的溶液，于室溫攪拌50小時。此后在反應液中加入10ml乙酸乙酯，用飽和碳酸氫鈉溶液(5ml×2次)及飽和食鹽水洗滌(5ml×2次)后，用無水硫酸鈉干燥、過濾、減壓濃縮，最后用硅膠快速色譜法(二氯甲烷∶甲醇＝50∶1→10∶1)純化，得到無色的油狀物質(zhì)(產(chǎn)量7.8mg，6.4μmol，收率58.2％)。 進行了有關(guān)本發(fā)明的通式(1)所表示的化合物的生理學試驗。
<試驗1>
按下面的方法進行了對α型DNA合成酶抑制效果的檢定。
用抗體層析柱從牛胸腺純化的α型DNA合成酶0.05U和被檢化合物(溶解于DMSO，下面的表1中所表示的(磺基吡喃糖基)?；视脱苌?(以下，略稱為“SQAG”)SQAG1、SQAG2、SQAG3分別混合，再加入酶反應所必需的無機鹽緩沖液、[3H]標記的dTTP、含有嵌合DNA鏈的反應用化合物，于37℃培養(yǎng)60分鐘。
酶反應終止后，將反應生成物固定在專用的濾膜上，用液體閃爍計數(shù)儀測定。將酶合成的dTTP量以[3H]放射線量(cpm)計，算出結(jié)果。所使用的(磺基吡喃糖基)?；视脱苌锞鶠楦视?位碳原子絕對構(gòu)型為S的物質(zhì)與為R的物質(zhì)的混合物。
所得到的的結(jié)果以IC50表示，在下表中一并列出。
表1對α型DNA合成酶的抑制效果 表1表明，所試驗的化合物均有顯著的對α型DNA合成酶的抑制活性。
下面2個試驗中所使用的大腸癌及胃癌細胞為本發(fā)明的藥理活性物質(zhì)能顯效的癌細胞之一。即這些試驗的意圖并不是為了限定本發(fā)明的藥理活性物質(zhì)可顯效的癌細胞。
<試驗2>
對大腸癌培養(yǎng)細胞的抑癌試驗按下面的方法進行。
將大腸癌細胞DLD-1用RPMI1640培養(yǎng)基(含有10％小牛血清)培養(yǎng)、傳代。被檢化合物(上表1中所示的SQAG2及SQAG3)分別在培養(yǎng)基中懸濁、稀釋，與每孔3×103個細胞一起在96孔培養(yǎng)皿中培養(yǎng)。培養(yǎng)48小時后，進行MTT試驗(Mosmann，TJournal of immunological method，65，55-63(1983))，比較生存率。
得到的結(jié)果在圖1中顯示。
在圖1中，用實線連接的空白四方形表示SQAG2。用實線連接的空白圓形表示SQAG3。
從圖1可以看到，本發(fā)明的(磺基吡喃糖基)?；视脱苌飳λ玫拇竽c癌細胞具有抑制活性。
<試驗3>
對胃癌培養(yǎng)細胞的抑癌試驗除使用胃癌細胞NUGC-3代替大腸癌細胞DLD-1以外，均采用與試驗2相同的方法進行。
得到的結(jié)果一并在圖1中顯示。
在圖1中，用實線連接的黑色四方形表示SQAG2。用實線連接的黑色圓形表示SQAG3。
從圖1中可以看到，本發(fā)明的(磺基吡喃糖基)?；视脱苌飳λ玫奈赴┘毎哂幸种苹钚浴?br> <試驗4>
對人癌細胞移植小鼠的試驗按下面的方法進行。
在裸小鼠BALB/cAc1-nu上，每只裸鼠分別植入5×105個用含有5％胎牛血清的MEM培養(yǎng)基培養(yǎng)的人肺癌細胞A-549。定期測定腫瘤形成部位的大小，至其達到30×50mm3時(移植后第42天)，供試驗用。
試驗組、對照組分別隨機分配5只小鼠，試驗組給予配成濃度為100μg/μl的懸浮于PBS中的被檢化合物(上表1中所示的化合物SQAGl、SQAG2及SQAG3)，對照組給予PBS。每次藥量100μl，每三天1次，共8次。每次測定腫瘤形成部位的大小。腫瘤的體積根據(jù)下式算出。
腫瘤的體積＝腫瘤部位的長度×(腫瘤部位的寬度)2×0.5各被檢化合物得到的結(jié)果分別在圖2(SQAG1)、圖3(SQAG2)、圖4(SQAG3)中顯示。
各圖中橫軸表示移植癌細胞后飼養(yǎng)的天數(shù)，縱軸表示腫瘤的體積。
結(jié)果顯示，與對照組相比，各個被檢化合物均顯著地抑制了腫瘤的形成。
采用上述給藥量的試驗組小鼠的狀態(tài)與對照組相比，并沒有特別的變化，與對照組的小鼠以同樣的狀態(tài)生存著。
<試驗5>
在體重20-22g、7周齡的雌性小鼠BALB/cAc1-nu上，各皮下注射入5×105個培養(yǎng)的肺癌細胞A-549，移植后第37天開始每三天測定腫瘤的大小。移植43天后，移植癌細胞的所有小鼠的腫瘤的大小均達到25-35mm3時，將小鼠隨機分成7組，每組4只，其中的1組作為對照組，皮下注射100μl PBS。剩余的6組分別注射總藥量達到每kg體重4mg及20mg的溶解于100μl PBS中的SQAG1(141)、SQAG2(161)、SQAG3(181)。注射從移植癌細胞的第43后開始到第64天結(jié)束，每三天注射1次，共注射8次。每三天測定1次腫瘤的大小直到移植后第70天。腫瘤的體積按與試驗4相同的方法算出。
各種被檢化合物得到的結(jié)果分別在圖5(SQAG1)、圖6(SQAG2)、圖7(SQAG3)中表示。
結(jié)果顯示，與對照組相比，各試驗組的腫瘤形成均被顯著地抑制。
試驗結(jié)束后，對每個用藥組的小鼠的肺、心臟、胃、肝臟、胰臟、腎臟、小腸、腦等主要臟器進行病理組織學的評價，未見任何異常。
產(chǎn)業(yè)上利用的可能性如上所述，本發(fā)明提供含有選自通式(1)所示(磺基吡喃糖基)?；视脱苌锛捌渌帉W上許可的鹽類的至少1種作為有效成分的藥品。
權(quán)利要求
1.含選自如下通式(1)所示化合物及其藥學上許可的鹽中至少一種作為有效成分的藥品 式中R101表示不飽和高級脂肪酸的?；鶜埢?，R102表示氫原子或不飽和高級脂肪酸的酰基殘基。
2.如權(quán)利要求1所述的藥品，其中通式(1)的R101為式R-C(＝O)-基，式中，R為有13-25個碳原子的直鏈脂肪族不飽和烴基，此烴基有1-6個不飽和鍵；R102為氫原子或式R’-C(＝O)-基，式中，R’為有13-25個碳原子的直鏈脂肪族不飽和烴基，此烴基有1-6個不飽和鍵。
3.如權(quán)利要求2所述的藥品，其中通式(1)的R102為氫原子。
4.如權(quán)利要求1-3中任一項所述的藥品，其中通式(1)表示的化合物的吡喃糖為奎諾糖。
5.如權(quán)利要求4所述的藥品，其中奎諾糖為α-奎諾糖。
6.如權(quán)利要求4所述的藥品，所述藥品為DNA合成酶抑制劑。
7.如權(quán)利要求4所述的藥品，所述藥品為癌抑制劑。
全文摘要
含有選自下列通式(1):(式中R
文檔編號C07H15/06GK1341025SQ00804302
公開日2002年3月20日 申請日期2000年2月21日 優(yōu)先權(quán)日1999年2月26日
發(fā)明者山崎隆之, 菅原二三男, 太田慶裕, 正木和好, 中山小太郎, 坂口謙吾, 佐藤升志, 佐原弘益, 藤田龍哉 申請人:東洋水產(chǎn)株式會社