本發(fā)明涉及一種含有復合菌劑的脲醛緩釋肥料的制備方法。

背景技術(shù)：

海藻肥料以天然海藻為原料，經(jīng)過特殊生化工藝處理，提取并保留海藻天然活性成分，精煉濃縮而形成的一種新型有機肥料。海藻肥料具有提高作物產(chǎn)量和品質(zhì)，抵抗病蟲害及不良環(huán)境以及改良土壤保持水土的功效，其應用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)有巨大的市場需求和良好的發(fā)展前景。但是，要保障海藻肥料的質(zhì)量，就必須把握好海藻原料和提取工藝兩個關(guān)鍵環(huán)節(jié)。

首先，海藻肥料質(zhì)量的優(yōu)劣取決于所用的原料。目前，海藻肥生產(chǎn)企業(yè)所用的原料主要以褐藻為主，包括泡葉藻、昆布、海帶、馬尾藻等。其他藻類如墨角藻、滸苔、石莼、卡帕藻等也有少數(shù)企業(yè)在用。國外海藻肥企業(yè)絕大多數(shù)使用褐藻為原料，其中尤以泡葉藻應用最為廣泛如Seasol、Maxicrop等知名品牌，實際作用效果也表明泡葉藻是優(yōu)質(zhì)的海藻原料。但是，我國沿海沒有泡葉藻分布，國內(nèi)企業(yè)采用的原料種類繁雜，品質(zhì)參差不一，造成海藻肥產(chǎn)品質(zhì)量良莠不齊，甚至有些廠家打著“海藻肥”的幌子，直接勾兌褐藻酸，黃腐酸、氮磷鉀等冒充海藻肥，影響了海藻肥質(zhì)量，擾亂了海藻肥市場。

其次，決定海藻肥質(zhì)量的第二個因素是提取工藝。不同的提取工藝對海藻肥活性成分的種類和含量影響巨大。目前，海藻活性成分的提取方法主要有化學法、物理法以及生物法?；瘜W法主要是利用酸、堿及有機溶劑處理海藻細胞，使細胞消解或內(nèi)源物質(zhì)增溶，該方法操作簡單，容易實現(xiàn)，也是國內(nèi)外絕大多數(shù)海藻肥生產(chǎn)企業(yè)采用的方法。但是，化學試劑對海藻細胞內(nèi)的活性物質(zhì)成分的破壞是相當大的，并且殘留的有機試劑對環(huán)境也是潛在的危害。物理法的原理是控制壓力，溫度等物理環(huán)境條件，利用機械力使海藻細胞破碎，內(nèi)容物釋放。該方法雖然工藝清潔、環(huán)境友好，但是對于儀器設備的要求嚴苛，反應條件變化劇烈，成本較高，難以實現(xiàn)大規(guī)模生產(chǎn)。生物法包括酶法降解和微生物發(fā)酵兩種方法，其主要原理是破壞海藻細胞壁結(jié)構(gòu)并降解大分子物質(zhì)為植物容易吸收利用的小分子物質(zhì)，該方法反應溫和，產(chǎn)物多元化，整個生產(chǎn)過程安全環(huán)保無污染，是理想的海藻肥生產(chǎn)方法。

利用微生物發(fā)酵法生產(chǎn)海藻肥料的研究相對較少，僅有的幾例研究是選用多種微生物對海藻原料進行類似堆肥發(fā)酵或好氧發(fā)酵處理，存在發(fā)酵過程可控性差，發(fā)酵周期長，目標產(chǎn)物不明確等問題，難以滿足工業(yè)化生產(chǎn)要求的統(tǒng)一，穩(wěn)定，可控的標準，產(chǎn)品的質(zhì)量難以保障。

針對農(nóng)業(yè)用微生物的評價指標主要包括菌劑的純度和單位質(zhì)量中的菌劑數(shù)量。因此，作為現(xiàn)有技術(shù)的菌劑制備方法一般是：在微生物適宜生存的溫度和pH條件下進行一次發(fā)酵工藝，相當于溫室培養(yǎng)。

由于目前土壤板結(jié)酸化嚴重，外界氣溫變化無常，溫室培養(yǎng)的微生物菌劑直接投放到土壤中，因不能適應惡劣的土壤環(huán)境造成大量死亡，即使有少量存活因無法形成種群效應，也無法發(fā)揮微生物菌劑的效果。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是，提供一種含有復合菌劑的脲醛緩釋肥料的制備方法，第一、采用性能優(yōu)良的用于降解褐藻酸的巨大芽孢桿菌和噬糖芽孢桿菌降解海藻，并模擬土壤自然生態(tài)環(huán)境，使發(fā)酵后的巨大芽孢桿菌和噬糖芽孢桿菌在投入土壤后，能很快適應環(huán)境，確保存活率；第二、提供利用巨大芽孢桿菌和噬糖芽孢桿菌的復合菌劑制備脲醛緩釋肥料的方法，該方法發(fā)酵過程穩(wěn)定可控，發(fā)酵周期短，產(chǎn)物功效顯著，適于規(guī)?；a(chǎn)。

為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

一種含有復合菌劑的脲醛緩釋肥料的制備方法，其特征在于按照以下步驟進行：

將氮肥、磷肥、鉀肥、脲醛粉和輔料按照質(zhì)量比10～90∶10～90∶10～90∶5～15∶5～20加入到造粒滾筒中造粒，經(jīng)烘干、冷卻和篩分后，得到脲醛緩釋肥料；在包裹滾筒中，將包裹油和復合菌劑噴入到脲醛緩釋肥料表面，得到含有復合菌劑的脲醛緩釋肥料，脲醛緩釋肥料、包裹油和復合菌劑的質(zhì)量比是50～99.8∶0.1～10∶0.1～40；

所述輔料為膨潤土、高嶺土和滑石粉中的一種或任意比例的兩種以上；

所述脲醛粉是尿素和甲醛按照摩爾比1∶1.2聚合，然后壓濾烘干后得到的粉劑；

其中復合菌劑按照以下步驟制備而成：

1)、制備海藻粉末：將烘干后的海藻磨成粉末；

2)、制備產(chǎn)品A：海藻粉末與水按照質(zhì)量比1～10∶100裝入發(fā)酵罐中，在100～150℃條件下滅菌15～35min，得到產(chǎn)品A；

并制備種子液：將巨大芽孢桿菌和噬糖芽孢桿菌按照1～5∶1～5的體積比例混合接種至液體培養(yǎng)基，在25℃～40℃培養(yǎng)20～30小時；復合菌種與培養(yǎng)基之間的體積比為1～10∶100；

3)、制備產(chǎn)品B：將種子液加入到產(chǎn)品A中得到產(chǎn)品B，其中種子液與產(chǎn)品A的質(zhì)量比為1～10∶100；

4)、制備產(chǎn)品C：在溫度為25℃～40℃，pH5～9的條件下對產(chǎn)品B進行發(fā)酵，發(fā)酵時間為6～10天，得到產(chǎn)品C；

5)、制備產(chǎn)品D：調(diào)整產(chǎn)品C的pH至5.0～6.0，溫度至3～10℃，保存3h～72h，得到產(chǎn)品D；

6)、制備產(chǎn)品E：調(diào)整產(chǎn)品D的溫度至25℃～40℃，pH至5～9，然后補充種子液，補充的種子液與產(chǎn)品D的質(zhì)量比為1～10∶100，保存3h～72h，得到產(chǎn)品E；

7)、制備產(chǎn)品F：調(diào)整產(chǎn)品E的pH至5.0～6.0，溫度至3～10℃，保存3h～72h，得到產(chǎn)品F；

8)、制備產(chǎn)品G：調(diào)整產(chǎn)品F的溫度至25℃～40℃，pH至5～9，然后補充種子液，補充的種子液與產(chǎn)品F的質(zhì)量比為1～10：100，保存3h～72h，得到產(chǎn)品G；

9)、制備復合菌劑：將產(chǎn)品G風干后得到復合菌劑。

所述液體培養(yǎng)基按照以下質(zhì)量比配成：海藻酸鈉5份、硫酸銨5份、硫酸鎂1份、磷酸氫二鉀2份、硫酸亞鐵0.01份和蒸餾水1000份。

步驟2)所述海藻粉末和水的質(zhì)量比為4∶100；滅菌溫度115℃，滅菌時間25min；制備種子液時，復合菌種接種至液體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)22小時，得到種子液，復合菌種和培養(yǎng)基的體積比例為5∶100；步驟5)和步驟7)中，溫度為5℃，保存時間為12h。

步驟4)、步驟6)和步驟8)中，溫度為25℃，pH為6.5～7.0；步驟4)發(fā)酵時間為8天；步驟6)和步驟8)保存時間為12h；步驟6)中發(fā)酵種子液與產(chǎn)品D的質(zhì)量比以及步驟8)中發(fā)酵種子液與產(chǎn)品F的質(zhì)量比均為5∶100。

步驟5)、步驟6)步驟7)和步驟8)中，調(diào)整溫度均為每小時調(diào)整3℃。

所述海藻是指鼠尾藻，海帶，裙帶，銅藻和馬尾藻中的一種或任意比例的兩種以上。

所述的巨大芽孢桿菌為巨大芽孢桿菌YIC～BM1，保藏號為CGMCC No.12156；所述的噬糖芽孢桿菌為嗜糖芽孢桿菌YIC～Alg3，保藏號為CGMCC No.12155。

發(fā)明具有以下有益技術(shù)效果：

本發(fā)明通過篩選得到兩株海洋來源的菌株：巨大芽孢桿菌和噬糖芽孢桿菌，兩株菌均具有降解褐藻酸的能力，一方面能夠降解褐藻酸生成小分子量的褐藻寡糖等易于植物吸收利用的營養(yǎng)成分；另一方面破壞海藻細胞壁結(jié)構(gòu)促使海藻體內(nèi)更多營養(yǎng)物質(zhì)得以釋放。利用此混合菌株發(fā)酵處理銅藻、鼠尾藻等馬尾藻屬海藻原料，發(fā)酵一定天數(shù)后在發(fā)酵液中可檢測到分子量在4000Da以下、聚合度為2-20的褐藻寡糖，以此發(fā)酵液作為海藻肥母液，直接或者復配N、P、K，微量元素，氨基酸，有機質(zhì)等有效成分用于農(nóng)作物生長。肥效實驗表明，利用該方法獲得發(fā)酵液能夠明顯促進植物根系生長，改良土壤微環(huán)境，提高作物產(chǎn)量。

本發(fā)明還具有以下特點：

1、采用本發(fā)明得到的海洋來源的巨大芽孢桿菌YIC～BM1和嗜糖芽孢桿菌YIC～Alg3對海藻發(fā)酵，發(fā)酵過程穩(wěn)定可控，發(fā)酵周期短，產(chǎn)物功效顯著，適于規(guī)?；a(chǎn)。

2、本發(fā)明得到的復合菌劑具有水溶性好，易于植物吸收利用，同時作為一種重要的信號分子，能夠參與植物的生長調(diào)節(jié)和誘導抗病過程促進植物的生長，提高植物對不良環(huán)境及病蟲害的抵抗力。

3、本發(fā)明通過緩慢的溫度調(diào)節(jié)，使復合菌劑適應溫度的變化，避免溫度變化過快，復合菌劑不能適應而大量死亡。

4、本發(fā)明得到的巨大芽孢桿菌和噬糖芽孢桿菌的復合菌株在具有海藻提取物特征外，還具有較強的環(huán)境適應性，在投入到酸化的土壤中及溫度變化無常的環(huán)境中，能很快適應環(huán)境存活，發(fā)揮微生物菌劑的作用。

5、本發(fā)明通過包裹油將復合菌劑和脲醛緩釋肥料阻隔，并且利用包裹油的粘性將復合菌劑均勻的粘結(jié)在肥料的表面，可以有效避免復合菌劑與高鹽分的脲醛緩釋肥直接接觸，防止因有機無機肥鹽分過高導致復合菌劑細胞失水，造成復合菌劑大量死亡。

具體實施方式

下面結(jié)合具體實例進一步說明本發(fā)明。

實施例1

將洗凈烘干后的新鮮鼠尾藻磨成50～60目粉末；

海藻粉末與水按照質(zhì)量比2∶100裝入發(fā)酵罐中，在115℃條件下滅菌30min，得到產(chǎn)品A；并制備種子液：將巨大芽孢桿菌YIC～BM1和噬糖芽孢桿菌YIC～Alg3按照體積比1∶1的比例混合接種至液體培養(yǎng)基培養(yǎng)20小時；所述巨大芽孢桿菌YIC～BM1的保藏號為CGMCC No.12156，所述的嗜糖芽胞桿菌YIC～Alg3保藏號為CGMCC No.12155；所述液體培養(yǎng)基為：海藻酸鈉5g、硫酸銨5g、硫酸鎂1g、磷酸氫二鉀2g、硫酸亞鐵0.01g和蒸餾水1000ml的混合物，pH7.2～7.4；巨大芽孢桿菌YIC～BM1和培養(yǎng)基的體積比例為2∶100，嗜糖芽胞桿菌YIC～Alg3和培養(yǎng)基的體積比例為1∶100。將種子液加入到產(chǎn)品A中，其中種子液與產(chǎn)品A的質(zhì)量比為1∶100，得到產(chǎn)品B；在溫度為20℃，pH5.5～6.0的條件下對產(chǎn)品B進行發(fā)酵，發(fā)酵時間為7天，得到產(chǎn)品C；調(diào)整產(chǎn)品C的pH至5.0～6.0，并以每小時20℃的溫度變化調(diào)整溫度至5℃，保存24h，得到產(chǎn)品D；以每小時20℃的溫度變化調(diào)整產(chǎn)品D的溫度至20℃，pH至5.5～6.0，然后補充種子液，補充的種子液與產(chǎn)品D的質(zhì)量比為1∶100，保存24h，得到產(chǎn)品E；調(diào)整產(chǎn)品E的pH至5.0～6.0，并以每小時20℃的溫度變化調(diào)整溫度溫度至5℃，保存24h，得到產(chǎn)品F；以每小時20℃的溫度變化調(diào)整產(chǎn)品F的溫度至20℃，pH至5.5～6.0，然后補充種子液，補充的種子液與產(chǎn)品F的質(zhì)量比為1∶100，保存24h，得到產(chǎn)品G；將產(chǎn)品G風干后得到復合菌劑；將氮肥、磷肥、鉀肥、脲醛粉和輔料按照質(zhì)量比25∶30∶30∶10∶5加入到造粒滾筒中造粒，產(chǎn)品經(jīng)烘干、冷卻和篩分后，進入到包裹滾筒，得脲醛緩釋肥料在包裹滾筒中，將包裹油和復合菌劑噴入到脲醛緩釋肥料表面，脲醛緩釋肥料、包裹油和復合菌劑的質(zhì)量比為99∶0.5∶0.5，得到含有復合菌劑的脲醛緩釋肥。

實施例2

將洗凈烘干后的新鮮銅藻和新鮮馬尾藻按照質(zhì)量比1∶1復配，磨成50～60目粉末；

海藻粉末與水按照質(zhì)量比4∶100裝入發(fā)酵罐中，在115℃條件下滅菌25min，得到產(chǎn)品A；并制備種子液：將巨大芽孢桿菌YIC～BM1和嗜糖芽胞桿菌YIC～Alg3按照體積比1∶2的比例混合接種至液體培養(yǎng)基培養(yǎng)20小時；所述巨大芽孢桿菌YIC～BM1的保藏號為CGMCC No.12156，所述的嗜糖芽胞桿菌YIC～Alg3保藏號為CGMCCNo.12155；所述液體培養(yǎng)基為：海藻酸鈉5g、硫酸銨5g、硫酸鎂1g、磷酸氫二鉀2g、硫酸亞鐵0.01g和蒸餾水1000ml的混合物，pH7.2～7.4；巨大芽孢桿菌YIC～BM1和培養(yǎng)基的體積比例為5∶100，嗜糖芽胞桿菌YIC～Alg3和培養(yǎng)基比例為2∶100，將種子液加入到產(chǎn)品A中，其中種子液與產(chǎn)品A的質(zhì)量比為5∶100，得到產(chǎn)品B；在溫度為25℃，pH6.5～7.0的條件下對產(chǎn)品B進行發(fā)酵，發(fā)酵時間為8天，得到產(chǎn)品C；調(diào)整產(chǎn)品C的pH至5.0～6.0，并以每小時3℃的溫度變化調(diào)整溫度至5℃，保存12h，得到產(chǎn)品D；以每小時3℃的溫度變化調(diào)整產(chǎn)品D的溫度至25℃，pH至6.5～7.0，然后補充種子液，補充的種子液與產(chǎn)品D的質(zhì)量比為5∶100，保存12h，得到產(chǎn)品E；調(diào)整產(chǎn)品E的pH至5.0～6.0，并以每小時3℃的溫度變化調(diào)整溫度溫度至5℃，保存12h，得到產(chǎn)品F；

以每小時3℃的溫度變化調(diào)整產(chǎn)品F的溫度至25℃，pH至6.5～7.0，然后補充種子液，補充的種子液與產(chǎn)品F的質(zhì)量比為5∶100，保存12h，得到產(chǎn)品G；將產(chǎn)品G風干后得到復合菌劑；將氮肥、磷肥、鉀肥、脲醛粉和輔料按照質(zhì)量比30∶25∶30∶10∶5加入到造粒滾筒中造粒，產(chǎn)品經(jīng)烘干、冷卻和篩分后，進入到包裹滾筒，得脲醛緩釋肥料；在包裹滾筒中，將包裹油和復合菌劑噴入到脲醛緩釋肥表面，脲醛緩釋肥料、包裹油和復合菌劑的質(zhì)量比為99∶0.5∶0.5，得到含有復合菌劑的脲醛緩釋肥。

實施例3

將洗凈烘干后的新鮮馬尾藻磨成50～60目粉末；

海藻粉末與水按照質(zhì)量比6∶100裝入發(fā)酵罐中，在125℃條件下滅菌35min，得到產(chǎn)品A；并制備種子液：將巨大芽孢桿菌YIC～BM1和嗜糖芽胞桿菌YIC～Alg3按照體積比1∶1的比例混合接種至液體培養(yǎng)基，分別接種至液體培養(yǎng)基培養(yǎng)20小時；所述巨大芽孢桿菌YIC～BM1的保藏號為CGMCC No.12156，所述的嗜糖芽胞桿菌YIC～Alg3保藏號為CGMCC No.12155；所述液體培養(yǎng)基為：海藻酸鈉5g、硫酸銨5g、硫酸鎂1g、磷酸氫二鉀2g、硫酸亞鐵0.01g和蒸餾水1000ml的混合物，pH7.2～7.4；巨大芽孢桿菌YIC～BM1和培養(yǎng)基的體積比例為1∶100，嗜糖芽胞桿菌YIC～Alg3和培養(yǎng)基比例為5∶100，將種子液加入到產(chǎn)品A中，其中種子液與產(chǎn)品A的質(zhì)量比為4∶100，得到產(chǎn)品B；在溫度為30℃，pH7～7.5的條件下對產(chǎn)品B進行發(fā)酵，發(fā)酵時間為9天，得到產(chǎn)品C；調(diào)整產(chǎn)品C的pH至5.0～6.0，并以每小時1℃的溫度變化調(diào)整溫度至5℃，保存18h，得到產(chǎn)品D；以每小時8℃的溫度變化調(diào)整產(chǎn)品D的溫度至30℃，pH至7～7.5，然后補充種子液，補充的種子液與產(chǎn)品D的質(zhì)量比為4∶100，保存18h，得到產(chǎn)品E；調(diào)整產(chǎn)品E的pH至5.0～6.0，并以每小時1℃的溫度變化調(diào)整溫度溫度至5℃，保存18h，得到產(chǎn)品F；

以每小時8℃的溫度變化調(diào)整產(chǎn)品F的溫度至30℃，pH至7.0～7.5，然后補充種子液，補充的種子液與產(chǎn)品F的質(zhì)量比為4∶100，保存18h，得到產(chǎn)品G；將產(chǎn)品G風干后得到復合菌劑；將氮肥、磷肥、鉀肥脲醛粉和輔料按照質(zhì)量比30∶30∶25∶8∶7加入到造粒滾筒中造粒，產(chǎn)品經(jīng)烘干、冷卻和篩分后，進入到包裹滾筒，得脲醛緩釋肥料；在包裹滾筒中，將包裹油和復合菌劑噴入到脲醛緩釋肥表面，脲醛緩釋肥料、包裹油和巨大芽孢桿菌菌劑的質(zhì)量比為99∶0.5∶0.5，得到含復合菌劑的脲醛緩釋肥。

實施例4

將洗凈烘干后的新鮮馬尾藻磨成50～60目粉末；

海藻粉末與水按照質(zhì)量比9∶100裝入發(fā)酵罐中，在140℃條件下滅菌15min，得到產(chǎn)品A；并制備種子液：將巨大芽孢桿菌YIC～BM1和嗜糖芽胞桿菌YIC～Alg3分別接種至液體培養(yǎng)基培養(yǎng)20小時；所述巨大芽孢桿菌YIC～BM1的保藏號為CGMCC No.12156，所述的嗜糖芽胞桿菌YIC～Alg3保藏號為CGMCC No.12155；所述液體培養(yǎng)基為：海藻酸鈉5g、硫酸銨5g、硫酸鎂1g、磷酸氫二鉀2g、硫酸亞鐵0.01g和蒸餾水1000ml的混合物，pH7.2～7.4；巨大芽孢桿菌YIC～BM1和培養(yǎng)基的體積比例為1∶100，嗜糖芽胞桿菌YIC～Alg3和培養(yǎng)基比例為1∶100，將兩種種子液按照1∶2的比例加入到產(chǎn)品A種，其中種子液與產(chǎn)品A的質(zhì)量比為8∶100，得到產(chǎn)品B；在溫度為35℃，pH6.5～7.0的條件下對產(chǎn)品B進行發(fā)酵，發(fā)酵時間為9天得到產(chǎn)品C；調(diào)整產(chǎn)品C的pH至5.0～6.0，并以每小時3℃的溫度變化調(diào)整溫度至5℃，保存12h，得到產(chǎn)品D；以每小時3℃的溫度變化調(diào)整產(chǎn)品D的溫度至35℃，pH至6.5～7.0，然后補充種子液，補充的種子液與產(chǎn)品D的質(zhì)量比為8∶100，保存12h，得到產(chǎn)品E；調(diào)整產(chǎn)品E的pH至5.0～6.0，并以每小時3℃的溫度變化調(diào)整溫度溫度至5℃，保存12h，得到產(chǎn)品F；

以每小時3℃的溫度變化調(diào)整產(chǎn)品F的溫度至35℃，pH至6.5～7.0，然后補充種子液，補充的種子液與產(chǎn)品F的質(zhì)量比為8∶100，保存12h，得到產(chǎn)品G；將產(chǎn)品G風干后得到復合菌劑；將氮肥、磷肥、鉀肥、脲醛粉和輔料按照質(zhì)量比25∶30∶30∶7∶8加入到造粒滾筒中造粒，產(chǎn)品經(jīng)烘干、冷卻和篩分后，進入到包裹滾筒，得脲醛緩釋肥料；在包裹滾筒中，將包裹油和復合菌劑噴入到脲醛緩釋肥料表面，脲醛緩釋肥料、包裹油和復合菌劑的質(zhì)量比為99∶0.5∶0.5，得到含有復合菌劑的脲醛緩釋肥。

實施例1至4中，所述氮肥是硫酸銨，磷肥是磷酸一銨，脲醛粉為尿素和甲醛摩爾比1∶1.2縮合而成的經(jīng)壓濾后得到的粉劑，鉀肥是硫酸鉀，所述輔料為膨潤土。

1試驗時間和地點

1.1試驗時間

2014年10月5日(播種)-2015年6月2日(收獲)

1.2試驗地點

山東省費縣上冶鎮(zhèn)寧國莊村。

2試驗材料

2.1供試土壤

供試土壤為褐土，質(zhì)地為輕壤壤土，土壤肥力中下等，灌排條件較好?；A肥力見表1。

表1供試土壤基礎肥力

2.2供試肥料

含復合菌劑的脲醛緩釋肥：復合菌≥0.2億/克，N≥15％，P₂O₅≥15％，K₂O≥15％，其中緩釋有效氮≥2，由五洲豐農(nóng)業(yè)科技有限公司提供；普通復混肥：N≥15％，P₂O₅≥15％，K₂O≥15％，由五洲豐農(nóng)業(yè)科技有限公司提供；尿素，N≥46％，山東新泰市樓德化肥廠生產(chǎn)。

2.3供試作物及栽培方式

小麥，山農(nóng)15，于2014年10月5日播種，播種量為120kg/hm²。

2.4試驗方法

2.4.1試驗設計試驗設6個處理：

處理1(CK1)：普通有機無機復混肥；

處理2(CK2)：加入未調(diào)整溫度和pH的復合菌的海藻脲醛緩釋肥；

處理3(T1)：實施例1所述海藻脲醛緩釋肥；

處理4(T2)：實施例2所述海藻脲醛緩釋肥；

處理5(T3)：實施例3所述海藻脲醛緩釋肥；

處理6(T4)：實施例4所述海藻脲醛緩釋肥。

每個處理3次重復，隨機區(qū)組排列，小區(qū)長12m，寬5m，面積60m²，設保護行。

2.4.2施肥方法

各施肥處理均施復混肥60kg/666.7m²作基肥，于起壟時一次施入，并于小麥返青期追施尿素15kg/666.7m²。

2.4.3收獲

各試驗小區(qū)于2014年6月2日進行測產(chǎn)驗收，分別稱量計產(chǎn)；在小麥收獲時，以小區(qū)為單位，在小區(qū)中間部位量取1m²面積區(qū)域收獲1m²籽粒，經(jīng)自然風干，測定籽粒含水量后，進行計產(chǎn)和統(tǒng)計分析。于小麥收割后采用五點取樣法取耕層混合土樣，涂布平板法測定土壤中復合菌數(shù)量。

3試驗結(jié)果與分析

3.1小麥不同施肥處理肥料效應分析

如表2所示，與普通施肥處理(CK)相比，加入復合菌的海藻脲醛緩釋肥處理均有不同程度的增產(chǎn)。其中實施例2和實施例3產(chǎn)量顯著高于其他幾個處理，達極顯著水平，分別比CK1增產(chǎn)50.2kg/666.7m²，增幅9.6％和增產(chǎn)51.9kg/666.7m²，增幅9.8％；實施例4和實施例1比對照1和對照2明顯增產(chǎn)達極顯著水平，分別比CK1增產(chǎn)39.2kg/666.7m²，增幅7.5％和增產(chǎn)32.6kg/666.7m²，增幅6.3％；加入未調(diào)整溫度和pH的復合菌的海藻脲醛緩釋肥也有明顯的增產(chǎn)效果，增產(chǎn)13.0kg/666.7m²和2.5％?？傮w來說，幾個處理的產(chǎn)量順序為T3＞T2＞T4＞T1＞CK2＞CK1。

表2供試肥料對小麥產(chǎn)量的影響

3.2不同施肥處理土壤中復合菌的活性分析

表3不同處理土壤中復合菌數(shù)量

10⁴CFU/g

如表3所示，施入添加復合菌的海藻脲醛緩釋混肥后，小麥收割時耕層土壤中都有不同數(shù)量的巨大芽孢桿菌和噬糖芽孢桿菌存活，并且存活數(shù)量與小麥產(chǎn)量呈正相關(guān)關(guān)系。其中實施例3處理土壤中兩種復合菌數(shù)量最多，達到34.2*10⁴CFU/g，其后T2、T4、T1、CK2依次遞減。

本發(fā)明所述巨大芽孢桿菌YIC～BM1的保藏號為CGMCC No.12156；保藏單位名稱是：中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心；保藏單位地址是：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號；保藏日期：2016年3月2日；拉丁文分類命名為：Bacillus megaterium。

所述巨大芽孢桿菌YIC～BM1的生物特性如下：

YIC～BM1菌株在纖維素培養(yǎng)基平板上生長48h后，菌落圓形，白色，表面平整。顯微鏡觀察菌株為革蘭氏陽性，桿狀，能運動，產(chǎn)芽孢。生長溫度范圍20～40℃，PH范圍6-10，NaCl濃度范圍0～20％，菌株最適生長溫度37℃，最適生長pH 7.5。觸酶，氧化酶，半乳糖苷酶陽性，吲哚，VP實驗陰性，不還原硝酸；能夠利用葡萄糖，甘露糖，乳糖，棉子糖，蔗糖，阿拉伯糖，木糖，甘露醇，山梨醇。根據(jù)其生理生化特征，基因序列及系統(tǒng)發(fā)育樹信息，將該菌株鑒定為巨大芽孢桿菌Bacillus megaterium。

本發(fā)明所述嗜糖芽孢桿菌YIC～Alg3的保藏號為CGMCC No.12155；保藏單位名稱是：中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心；保藏單位地址是：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號；保藏日期：2016年3月2日；拉丁文分類命名為：Bacillus halosaccharovorans。

所述嗜糖芽孢桿菌YIC～Alg3的生物特性如下：

YIC～Alg3菌株在褐藻酸唯一碳源平板上生長48h后，菌落不規(guī)則，淡黃色，中間不透明，邊緣半透明，表面褶皺。顯微鏡觀察菌株為桿狀，在末端或近末端可產(chǎn)生芽孢，革蘭氏陽性，能運動，生長后期菌體易聚集成團。生長溫度范圍20～45℃，PH范圍6～9，NaCl濃度范圍0～15％，菌株最適生長溫度37℃，最適生長pH 7.5。觸酶，氧化酶，VP試驗陽性，能夠利用葡萄糖，甘露糖，甘露醇，果糖，乳糖，半乳糖，淀粉；不能利用山梨醇，纖維素。根據(jù)其生理生化特征，基因序列及系統(tǒng)發(fā)育樹信息，將該菌株鑒定為嗜糖芽孢桿菌Bacillus halosaccharovorans。

注：+表示可以利用，～表示不能利用。