專利名稱：：一種可加速有機氯降解的鐵還原菌-礦物復(fù)合菌劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及有機氯降解
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體的說，涉及一種可加速有機氯降解的鐵還原菌-礦物復(fù)合菌劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
：有機氯是指含有一個或多個氯原子的氯代烴類或芳香化合物，是一類重要的持久性有機污染物(POPs)，其包括DDT(dichloro-diphenyl-trichloroethane，二氯二苯三氯乙烷)、HCH(hexachlorocyolohexane，六氯環(huán)已烷)、PCP(pentachlorophenol，五氯苯酚)、PCBs(Polychlorinatedbiphenyls，多氯聯(lián)苯)等。大多數(shù)有機氯具有強疏水性、生物積累性和難降解性，有些還具有內(nèi)分泌干擾作用，對環(huán)境及生物存在很大的危害。因此，有機氯污染及其修復(fù)已經(jīng)成為環(huán)境科學(xué)的研究熱點。土壤有機氯污染是一個全球性的環(huán)境問題，我國尤為突出。根據(jù)廣東省生態(tài)環(huán)境與土壤研究所的調(diào)查，珠江三角洲地區(qū)土壤有機氯污染范圍廣、種類多，600個土壤樣品DDT等六種有機氯含量為0.0031.568mg/kg，蔬菜中的含量為0.0311.102mg/kg，DDT檢出率達(dá)到90%以上，已經(jīng)引起突出的農(nóng)產(chǎn)品安全問題與環(huán)境健康問題。厭氧條件下的還原脫氯反應(yīng)是土壤有機氯降解的重要途徑。有機氯還原脫氯的本質(zhì)是氯原子獲得電子并從有機物結(jié)構(gòu)上脫除形成氯離子的過程。水稻土、紅壤等環(huán)境的厭氧過程能夠明顯促進(jìn)還原脫氯反應(yīng)。其中，水溶態(tài)、吸附態(tài)、絡(luò)合態(tài)的Fe(II)含量較高，在厭氧環(huán)境下這些離子可以通過電子傳遞，作用于有機氯，使其還原脫氯，降低其毒性。大量研究表明，水稻土中有機氯含量明顯低于其它土壤。例如，早年蔡道基院士發(fā)現(xiàn)，長江三角洲大量施用DDT的棉田改為水田后，明顯促進(jìn)了DDT的降解。珠江三角洲地區(qū)的調(diào)査也發(fā)現(xiàn)水稻土、潮土的六六六、DDT、七氯、艾氏劑、狄氏劑、硫丹、異狄氏劑等有機氯含量均低于旱地土壤。鐵在自然環(huán)境中通常以難溶性Fe(III)氧化物的形式存在，F(xiàn)e(III)的還原是由特定微生物介導(dǎo)的酶促反應(yīng)，具有Fe(III)還原能力的細(xì)菌是鐵氧化物還原的動力。厭氧環(huán)境下，鐵還原菌的存在能夠有效促進(jìn)具有還原脫氯活性的Fe(II)的生成，從而加速有機氯的還原降解。經(jīng)文獻(xiàn)與專利檢索，在現(xiàn)有技術(shù)中還未發(fā)現(xiàn)利用鐵還原菌與含鐵礦物制備復(fù)合菌劑，并應(yīng)用于有機氯污染修復(fù)的報道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，提供一種可加速有機氯降解的鐵還原菌-礦物復(fù)合菌劑。本發(fā)明的另一個目的在于提供上述鐵還原菌-礦物復(fù)合菌劑的制備方法。為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的可加速有機氯降解的鐵還原菌-礦物復(fù)合菌劑的制備方法采用液體深層發(fā)酵方法，包括如下步驟(1)培養(yǎng)基選用細(xì)菌培養(yǎng)基，加入消泡劑，調(diào)pH為7.07.2，滅菌備用；(2)搖瓶培養(yǎng)將產(chǎn)氣腸桿菌(五繞ra^z"er臟oge廳)或鐵還原叢毛單胞菌(aw2flmwzay/ern>edwce/w)接種到裝有細(xì)菌液體培養(yǎng)基中，進(jìn)行搖瓶培養(yǎng)，條件為溫度3037°C、轉(zhuǎn)速150250轉(zhuǎn)/分鐘、三角瓶裝液量2040%、培養(yǎng)時間810小時；所述產(chǎn)氣腸桿菌保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，編號為CGMCC1969;所述鐵還原叢毛單胞菌保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，編號為CGMCC1968;(3)種子罐發(fā)酵按13%的接種量將產(chǎn)氣腸桿菌或叢毛單胞菌的搖瓶菌液移入種子罐，進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，條件為罐溫3037X:、罐壓0.020.06MPa、通氣量1:1.01.5v/v/min、攪拌速度300400轉(zhuǎn)/分鐘、發(fā)酵時間912小時；(4)發(fā)酵罐發(fā)酵按36%的接種量將產(chǎn)氣腸桿菌或鐵還原叢毛單胞菌的種子液移種到發(fā)酵罐，培養(yǎng)條件為罐溫3037°C、罐壓0.020.06MPa、通氣量1:1.0L5v/v/min、攪拌速度300400轉(zhuǎn)/分鐘、發(fā)酵時間1218小時；(5)含鐵礦物-發(fā)酵液混合處理發(fā)酵結(jié)束后，收集所得菌液，按含鐵礦物與發(fā)酵液的重量比為25:1，將兩者混合處理，充分?jǐn)嚢?，混合均勻后分裝。所述含鐵礦物優(yōu)選水鐵礦、針鐵礦、赤鐵礦、褐鐵礦或紅壤膠體。在上述制備方法中，步驟(1)所述細(xì)菌培養(yǎng)基優(yōu)選牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，其配方為5g/L牛肉膏、10g/L蛋白胨、5g/LNaCl。在上述制備方法中，步驟(1)所述消泡劑為泡敵、聚醚消沫劑GPE或豆油，加入消泡劑的重量比為0.05%。(6)產(chǎn)品質(zhì)量檢驗合格產(chǎn)品中鐵還原菌活菌數(shù)25億個/克，含鐵量24%。鐵還原菌活菌數(shù)檢測方法為稀釋平板計數(shù)法。具體操作過程如下①稱取鐵還原菌-礦物混合菌劑l.Og，加入盛有99ml并裝有玻璃珠的無菌生理鹽水錐形瓶中，震蕩1020分鐘，使復(fù)合菌劑中菌體均勻分散，制成10-2稀釋度的稀釋液；②按10倍稀釋法進(jìn)行稀釋取盛有9ml無菌生理鹽水試管6支，并依次編號為10—310—8，用無菌移液管吸取1.0ml10—z稀釋液到一支盛有9ml無菌生理鹽水試管中，用漩渦混合器震蕩l分鐘，使菌體均勻分散，制成10—3稀釋液，用同樣的方法制備10—A10-8稀釋液;③用無菌移液管分別吸取0.1ml10-6、10—7、10—8三個稀釋液于相應(yīng)編號已制備好的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基平板上(每個稀釋度做三個平行)，用無菌玻璃涂布棒將平板表面的菌液均勻向四周涂布擴散，將平板倒置于3(TC恒溫箱中培養(yǎng)；1016小時后每一個活菌細(xì)胞可以在平板上繁殖形成一個肉眼可見的菌落，根據(jù)平板上菌落的數(shù)目，計算每克混合菌劑中所含的活菌總數(shù)，計算公式如下每克混合菌劑中活菌數(shù)=(同一稀釋度的3個平板上菌落平均數(shù)x稀釋倍數(shù))/混合菌劑克數(shù)含鐵量的檢測方法為鄰菲羅啉顯色法。具體操作過程如下取lg鐵還原菌-礦物混合菌劑于20ml6.0MHC1溶液(M表示每升水中含HC1的摩爾數(shù))中180轉(zhuǎn)/分鐘震蕩1.5小時；把菌體等沉淀濾掉，用1%的鹽酸羥胺將濾液中的Fe(III)還原成Fe(II)，然后采用鄰菲羅林法顯色，采用紫外-可見分光光度計在510nm處測定混合菌劑中的鐵其中，g/L是指每lL液體培養(yǎng)基中加入目標(biāo)物的克數(shù)；%是指每100份質(zhì)量的液體發(fā)酵培養(yǎng)基中接入接種物的質(zhì)量分?jǐn)?shù)；v/v/min是指每分鐘向1份體積的培養(yǎng)基中通入空氣的體積分?jǐn)?shù)。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下有益效果本發(fā)明以普通細(xì)菌培養(yǎng)基(牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基)為主要營養(yǎng)物，在維持適宜pH、溫度與通氣量的條件下，使具有鐵還原活性的菌株得以生長與增殖，所得發(fā)酵液按一定比例與含鐵礦物混合制成鐵還原菌-礦物復(fù)合菌劑。(1)此鐵還原菌-礦物復(fù)合菌劑具有加速有機氯降解的功效，可為有機氯污染修復(fù)提供一條新的處理途徑。(2)鐵還原菌是從自然環(huán)境中分離純化所得，含鐵礦物也是自然環(huán)境原有物質(zhì)，因此本發(fā)明來源于自然環(huán)境，又應(yīng)用于自然環(huán)境，對環(huán)境友好無害，不會對原有環(huán)境的生態(tài)結(jié)構(gòu)造成破壞。(3)生產(chǎn)方法簡單，易于實現(xiàn)大規(guī)模生產(chǎn)。圖1為本發(fā)明的制備流程圖。具體實施例方式實施例l產(chǎn)氣腸桿菌-水鐵礦復(fù)合菌劑(1)培養(yǎng)基選用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，5g/L牛肉膏，10g/L蛋白胨，5g/LNaCl，按0.05%重量比例加入消泡劑泡敵，調(diào)pH為7.05，充分溶解，攪拌均勻后，在種子罐或發(fā)酵罐中經(jīng)15磅壓力與12rc下滅菌30分鐘，冷卻至35。C備用。(2)搖瓶培養(yǎng)從保藏正常的產(chǎn)氣腸桿菌(五.CGMCC1969)斜面培養(yǎng)基上挑取一環(huán)接種到裝有牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基的三角瓶中，進(jìn)行搖瓶培養(yǎng)。條件為溫度35。C、轉(zhuǎn)速200轉(zhuǎn)/分鐘，三角瓶裝液量40%，培養(yǎng)時間9小時。(3)種子罐發(fā)酵按2%的接種量將產(chǎn)氣腸桿菌搖瓶菌液移入種子罐，進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)。培養(yǎng)條件為罐溫35。C、罐壓0.04MPa、通氣量1:1.0v/v/min、攪拌速度400轉(zhuǎn)/分鐘、發(fā)酵時間10小時。(4)發(fā)酵罐發(fā)酵按5%的接種量將產(chǎn)氣腸桿菌種子液移種到發(fā)酵罐。培養(yǎng)條件為罐溫35。C、罐壓0.04MPa、通氣量1:1.0v/v/min、攪拌速度400轉(zhuǎn)/分鐘、發(fā)酵時間12小時。(5)礦物-發(fā)酵液混合處理發(fā)酵結(jié)束后，收集所得菌液。按水鐵礦與產(chǎn)氣腸桿菌發(fā)酵液的重量比為5:1，將兩者混合處理，充分?jǐn)嚢?，混合均勻后分裝。(6)產(chǎn)品質(zhì)量檢驗采用稀釋平板計數(shù)法檢驗產(chǎn)品中產(chǎn)氣腸桿菌活菌數(shù)。具體操作過程如下①稱取產(chǎn)氣腸桿菌-水鐵礦混合菌劑1.0g，加入盛有99ml并裝有玻璃珠的無菌生理鹽水錐形瓶中，震蕩1020分鐘，使復(fù)合菌劑中菌體均勻分散，制成10—2稀釋度的稀釋液；②按10倍稀釋法進(jìn)行稀釋:取盛有9ml無菌生理鹽水試管6支，并依次編號為10—310—8，用無菌移液管吸取l.Oml10—2稀釋液到一支盛有9ml無菌生理鹽水試管中，用漩渦混合器震蕩1分鐘，使菌體均勻分散，制成10—3稀釋液，用同樣的方法制備10—410—s稀釋液；③用無菌移液管分別吸取O.lml10—6、10—7、10-8三個稀釋液于相應(yīng)編號已制備好的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基平板上(每個稀釋度做三個平行)，用無菌玻璃涂布棒將平板表面的菌液均勻向四周涂布擴散，將平板倒置于3(TC恒溫箱中培養(yǎng)；④16小時后根據(jù)平板上菌落的數(shù)目，按照如下公式計算每克混合菌劑中所含的活菌總數(shù)每克混合菌劑中活菌數(shù)=(同一稀釋度的三個平板上菌落平均數(shù)x稀釋倍數(shù))/混合菌劑克數(shù)結(jié)果顯示，產(chǎn)氣腸桿菌-水鐵礦復(fù)合菌劑中活菌數(shù)為8.2億個/克。采用鄰菲羅林顯色法檢驗產(chǎn)品的含鐵量。具體操作過程如下取lg產(chǎn)氣腸桿菌-水鐵礦混合菌劑于20ml6.0MHC1溶液(M表示每升水中含HC1的摩爾數(shù))中180轉(zhuǎn)/分鐘震蕩1.5小時；把菌體等沉淀濾掉，用l免的鹽酸羥胺將濾液中的Fe(in)還原成Fe(n)，然后采用鄰菲羅林法給濾液中的Fe(II)顯色，采用紫外-可見分光光度計在510nm處測定混合菌劑中的鐵含量。結(jié)果顯示，產(chǎn)氣腸桿菌-水鐵礦復(fù)合菌劑中鐵含量為52.3%。實施例2產(chǎn)氣腸桿菌-紅壤膠體復(fù)合菌劑(1)培養(yǎng)基選用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，5g/L牛肉膏，10g/L蛋白胨，5g/LNaCl，按0.05免重量比加入消泡劑聚醚消沫劑GPE，調(diào)pH為7.17，充分溶解，攪拌均勻后，在種子罐或發(fā)酵罐中經(jīng)15磅壓力與121°C下滅菌40分鐘，冷卻至3(TC備用。(2)搖瓶培養(yǎng)從保藏正常的產(chǎn)氣腸桿菌(￡.^ragw"CGMCC1969)斜面培養(yǎng)基上挑取一環(huán)接種到裝有牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基的三角瓶中，進(jìn)行搖瓶培養(yǎng)。條件為溫度37。C、轉(zhuǎn)速220轉(zhuǎn)/分鐘，三角瓶裝液量40%，培養(yǎng)時間IO小時。(3)種子罐發(fā)酵.按3%的接種量將產(chǎn)氣腸桿菌的搖瓶菌液移入種子罐，進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)。培養(yǎng)條件為罐溫37。C、罐壓0.03MPa、通氣量1:1.5v/v/min、攪拌速度300轉(zhuǎn)/分鐘、發(fā)酵時間12小時。(4)發(fā)酵罐發(fā)酵按5%的接種量將產(chǎn)氣腸桿菌的種子液移種到發(fā)酵罐。培養(yǎng)條件為罐溫37。C、罐壓0.03MPa、通氣量1:1.5v/v/min、攪拌速度300轉(zhuǎn)/分鐘、發(fā)酵時間15小時。(5)礦物-發(fā)酵液混合處理發(fā)酵結(jié)束后，收集所得菌液。按紅壤膠體與產(chǎn)氣腸桿菌發(fā)酵液的重量比為4:1，將兩者混合處理，充分?jǐn)嚢?，混合均勻后分裝。(6)產(chǎn)品質(zhì)量檢驗產(chǎn)品中產(chǎn)氣腸桿菌活菌數(shù)檢驗方法同實施例l。結(jié)果顯示，產(chǎn)氣腸桿菌-紅壤膠體復(fù)合菌劑中活菌數(shù)為7.8億個/克。產(chǎn)品的含鐵量檢驗方法同實施例1。結(jié)果顯示，產(chǎn)氣腸桿菌-紅壤膠體復(fù)合菌劑中鐵含量為5.6%。實施例3鐵還原叢毛單胞菌-針鐵礦復(fù)合菌劑(1)培養(yǎng)基選用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，5g/L牛肉膏，10g/L蛋白胨，5g/LNaCl，按0.05%重量比加入消泡劑豆油，調(diào)pH為7.12，充分溶解，攪拌均勻后，在種子罐或發(fā)酵罐中經(jīng)15磅壓力與121'C下滅菌30分鐘，冷卻至37。C備用。(2)搖瓶培養(yǎng)從保藏正常的鐵還原叢毛單胞菌(C./m7'm^"似CGMCC1968)斜面培養(yǎng)基上挑取一環(huán)接種到裝有牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基的三角瓶中，進(jìn)行搖瓶培養(yǎng)。條件為溫度3(TC、轉(zhuǎn)速180轉(zhuǎn)/分鐘，三角瓶裝液量40%，培養(yǎng)時間8小時。(3)種子罐發(fā)酵按3%的接種量將鐵還原叢毛單胞菌的搖瓶菌液移入種子罐，進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)。培養(yǎng)條件為罐溫3(TC、罐壓0.02MPa、通氣量l:1.0v/v/min、攪拌速度300轉(zhuǎn)/分鐘、發(fā)酵時間9小時。(4)發(fā)酵罐發(fā)酵按5%的接種量將鐵還原叢毛單胞菌種子液移種到發(fā)酵罐。培養(yǎng)條件為罐溫3(TC、罐壓0.02MPa、通氣量1:1.0v/v/min、攪拌速度300轉(zhuǎn)/分鐘、發(fā)酵時間12小時。(5)礦物-發(fā)酵液混合處理發(fā)酵結(jié)束后，收集所得菌液。按針鐵礦與產(chǎn)氣腸桿菌發(fā)酵液的重量比為2:1，將兩者混合處理，充分?jǐn)嚢?，混合均勻后分裝。(6)產(chǎn)品質(zhì)量檢驗產(chǎn)品中鐵還原叢毛單胞菌活菌數(shù)檢驗方法同實施例1。結(jié)果顯示，鐵還原叢毛單胞菌-針鐵礦復(fù)合菌劑中活菌數(shù)為97億個/克。產(chǎn)品的含鐵量檢驗方法同實施例l。結(jié)果顯示，鐵還原叢毛單胞菌-針鐵礦復(fù)合菌劑中鐵含量為31.9%。實施例4鐵還原叢毛單胞菌-赤鐵礦復(fù)合菌劑(1)培養(yǎng)基選用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，5g/L牛肉膏，10g/L蛋白胨，5g/LNaCl，按0.05%重量比加入消泡劑泡敵，調(diào)pH為7.10，充分溶解，攪拌均勻后，在種子罐或發(fā)酵罐中經(jīng)15磅壓力與12rC下滅菌30分鐘，冷卻至35。C備用。(2)搖瓶培養(yǎng)從保藏正常的鐵還原叢毛單胞菌(C./wnV"e^"似CGMCC1968)斜面培養(yǎng)基上挑取一環(huán)接種到裝有牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基的三角瓶中，進(jìn)行搖瓶培養(yǎng)。條件為溫度32。C、轉(zhuǎn)速200轉(zhuǎn)/分鐘，三角瓶裝液量40%，培養(yǎng)時間9小時。(3)種子罐發(fā)酵按3%的接種量將鐵還原叢毛單胞菌搖瓶菌液移入種子罐，進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)。培養(yǎng)條件為罐溫32°C、罐壓0.02MPa、通氣量1:1.0v/v/min、攪拌速度400轉(zhuǎn)/分鐘、發(fā)酵時間10小時。(4)發(fā)酵罐發(fā)酵按5%的接種量將鐵還原叢毛單胞菌種子液移種到發(fā)酵罐。培養(yǎng)條件為罐溫32。C、罐壓0.02MPa、通氣量1:1.0v/v/min、攪拌速度400轉(zhuǎn)/分鐘、發(fā)酵時間15小時。(5)礦物-發(fā)酵液混合處理發(fā)酵結(jié)束后，收集所得菌液。按赤鐵礦與鐵還原叢毛單胞發(fā)酵液的重量比為3:1，將兩者混合處理，充分?jǐn)嚢瑁旌暇鶆蚝蠓盅b。(6)產(chǎn)品質(zhì)量檢驗產(chǎn)品中鐵還原叢毛單胞菌活菌數(shù)檢驗方法同實施例1。結(jié)果顯示，鐵還原叢毛單胞菌-赤鐵礦復(fù)合菌劑中活菌數(shù)為109億個/克。產(chǎn)品的含鐵量檢驗方法同實施例l。結(jié)果顯示，鐵還原叢毛單胞菌-赤鐵礦復(fù)合菌劑中鐵含量為50.8%。實施例5產(chǎn)氣腸桿菌-水鐵礦復(fù)合菌劑加速有機氯降解的效果稱取5g按實施例1制備所得的產(chǎn)氣腸桿菌-水鐵礦復(fù)合菌劑，投放到含有10mg/kgDDT(二氯二苯三氯乙垸)的土壤中，充分混合均勻，并置于N2/CO2=80/20的厭氧環(huán)境下3(TC恒溫培養(yǎng)，030天內(nèi)測定并記錄其DDT含量(單位為mg/kg)，結(jié)果見表l:表1.產(chǎn)氣腸桿菌-水鐵礦復(fù)合菌劑對DDT降解的效果<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>說明產(chǎn)氣腸桿菌-水鐵礦復(fù)合菌劑可顯著加速有機氯的降解。實施例6鐵還原叢毛單胞菌-針鐵礦復(fù)合菌劑加速有機氯降解效果稱取5g按實施例3制備所得的鐵還原叢毛單胞菌-針鐵礦復(fù)合菌劑，投放到含有10mg/kgDDT的土壤中，充分混合均勻，并置于N2/CO2=80/20的厭氧環(huán)境下30'C恒溫培養(yǎng)，030天內(nèi)測定并記錄其DDT含量(單位為mg/kg)，結(jié)果見表2:表2.鐵還原叢毛單胞菌-針鐵礦復(fù)合菌劑對DDT降解效果<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>說明鐵還原叢毛單胞菌-針鐵礦復(fù)合菌劑同樣具有加速有機氯降解的功效。實施例7產(chǎn)氣腸桿菌-紅壤膠體復(fù)合菌劑加速有機氯降解的效果稱取5g按實施例2制備所得的產(chǎn)氣腸桿菌-紅壤膠體復(fù)合菌劑，投放到含有10mg/kgPCP(五氯苯酚)的土壤中，充分混合均勻，并置于N2/CO2=80/20的厭氧環(huán)境下3CTC恒溫培養(yǎng)，030天內(nèi)測定并記錄PCP的含量(單位為mg/kg)，結(jié)果見表3:表3.產(chǎn)氣腸桿菌-紅壤膠體復(fù)合菌劑對PCP降解的效果<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>說明產(chǎn)氣腸桿菌-紅壤膠體復(fù)合菌劑可顯著加速有機氯的降解。實施例8鐵還原叢毛單胞菌-赤鐵礦復(fù)合菌劑加速有機氯降解的效果稱取5g按實施例4制備所得的鐵還原叢毛單胞菌-赤鐵礦復(fù)合菌劑，投放到含有10mg/kgHCH(六氯環(huán)已垸)的土壤中，充分混合均勻，并置于N2/CO2=80/20的厭氧環(huán)境下3(TC恒溫培養(yǎng)，030天內(nèi)測定并記錄HCH含量(單位為mg/kg)，結(jié)果見表4:表4.鐵還原叢毛單胞菌-赤鐵礦復(fù)合菌劑對HCH降解的效果<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>說明鐵還原叢毛單胞菌-赤鐵礦復(fù)合菌劑可顯著加速有機氯的降解。權(quán)利要求1.一種可加速有機氯降解的鐵還原菌-礦物復(fù)合菌劑的制備方法，其特征在于包括如下步驟(1)培養(yǎng)基選用細(xì)菌培養(yǎng)基，加入消泡劑，調(diào)pH為7.0～7.2，滅菌備用；(2)搖瓶培養(yǎng)將產(chǎn)氣腸桿菌或鐵還原叢毛單胞菌接種到裝有細(xì)菌液體培養(yǎng)基中，進(jìn)行搖瓶培養(yǎng)；條件為溫度30～37℃、轉(zhuǎn)速150～250轉(zhuǎn)/分鐘、三角瓶裝液量20～40％、培養(yǎng)時間8～10小時；所述產(chǎn)氣腸桿菌保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，編號為CGMCC1969；所述鐵還原叢毛單胞菌保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，編號為CGMCC1968；(3)種子罐發(fā)酵按1～3％的接種量將產(chǎn)氣腸桿菌或叢毛單胞菌的搖瓶菌液移入種子罐，進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，條件為罐溫30～37℃、罐壓0.02～0.06MPa、通氣量1∶1.0～1.5v/v/min、攪拌速度300～400轉(zhuǎn)/分鐘、發(fā)酵時間9～12小時；(4)發(fā)酵罐發(fā)酵按3～6％的接種量將產(chǎn)氣腸桿菌或鐵還原叢毛單胞菌的種子液移種到發(fā)酵罐，培養(yǎng)條件為罐溫30～37℃、罐壓0.02～0.06MPa、通氣量1∶1.0～1.5v/v/min、攪拌速度300～400轉(zhuǎn)/分鐘、發(fā)酵時間12～18小時；(5)發(fā)酵液-礦物混合處理發(fā)酵結(jié)束后，收集發(fā)酵所得菌液，按含鐵礦物與發(fā)酵液的重量比為2～5∶1，將含鐵礦物與發(fā)酵液混合處理，充分?jǐn)嚢瑁旌暇鶆?，分裝。2.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟(1)所述細(xì)菌培養(yǎng)基為牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，配方為5g/L牛肉膏、10g/L蛋白胨、5g/LNaCl。3.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟(1)所述消泡劑為泡敵、聚醚消沫劑GPE或豆油，加入消泡劑的重量比為0.05%。4.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟(5)所述含鐵礦物為水鐵礦、針鐵礦、赤鐵礦、褐鐵礦或紅壤膠體。5.—種可加速有機氯降解的鐵還原菌-礦物復(fù)合菌劑，其特征是利用權(quán)利要求1所述制備方法制備得到。全文摘要本發(fā)明公開了一種可加速有機氯降解的鐵還原菌-礦物復(fù)合菌劑及其制備方法。本發(fā)明以普通細(xì)菌培養(yǎng)基為主要營養(yǎng)物，在維持適宜pH、溫度與通氣量的條件下，使具有鐵還原活性的菌株得以生長與增殖，所得發(fā)酵液按一定比例與含鐵礦物混合制成鐵還原菌-礦物復(fù)合菌劑。(1)此鐵還原菌-礦物復(fù)合菌劑具有加速有機氯降解的功效，可為有機氯污染修復(fù)提供一條新的處理途徑。(2)鐵還原菌是從自然環(huán)境中分離純化所得，含鐵礦物也是自然環(huán)境原有物質(zhì)，因此本發(fā)明來源于自然環(huán)境，又應(yīng)用于自然環(huán)境，對環(huán)境友好無害，不會對原有環(huán)境的生態(tài)結(jié)構(gòu)造成破壞。(3)生產(chǎn)方法簡單，易于實現(xiàn)大規(guī)模生產(chǎn)。文檔編號C22B3/18GK101096646SQ20071002839公開日2008年1月2日申請日期2007年6月1日優(yōu)先權(quán)日2007年6月1日發(fā)明者周順桂,李曉敏,李芳柏,王躍強申請人:廣東省生態(tài)環(huán)境與土壤研究所