專(zhuān)利名稱(chēng)：含有多取代的蛋白酶變體和淀粉酶變體的清洗組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及包含一種或多種蛋白酶和一種或多種淀粉酶的清洗組合物，其中所述蛋白酶是多取代的蛋白酶變體，所述淀粉酶是淀粉酶變體。更具體地，本發(fā)明涉及包含一種或多種多取代的蛋白酶變體和一種或多種淀粉酶變體的洗衣洗滌劑組合物、洗餐具洗滌劑組合物、硬表面清洗組合物和個(gè)人清洗組合物。
背景技術(shù)：
長(zhǎng)期在洗衣洗滌劑中使用各種類(lèi)型的酶，以助于從織物上去除某些污漬。每種類(lèi)型的酶(淀粉酶、蛋白酶等)一般催化不同的化學(xué)反應(yīng)。例如，已知蛋白酶具有水解(將化合物分解成兩種或多種更簡(jiǎn)單的化合物)其他蛋白質(zhì)的能力。通過(guò)將天然產(chǎn)生的或工程蛋白酶加入洗衣洗滌劑組合物中已利用了它們的這種能力。
最近幾年，還研究了酶在自動(dòng)洗餐具組合物中的應(yīng)用。遺憾地是，許多酶，例如許多常規(guī)蛋白酶，不能很好地轉(zhuǎn)移到洗滌環(huán)境中。具體說(shuō)，要求熱穩(wěn)定性、pH穩(wěn)定性、氧化穩(wěn)定性和基質(zhì)特異性最好以保證滿意的性能。
Estell等的美國(guó)專(zhuān)利RE34606公開(kāi)了在對(duì)應(yīng)于淀粉分解芽孢桿菌枯草溶菌素中的酪氨酸-1、天冬氨酸+32、天冬酰胺+155、酪氨酸+104、蛋氨酸+222、甘氨酸+166、組氨酸+64、甘氨酸+169、苯基丙氨酸+189、絲氨酸+33、絲氨酸+221、酪氨酸+217、谷氨酸+156和丙氨酸+152位置的枯草溶菌素氨基酸殘基的修飾。
美國(guó)專(zhuān)利5182204公開(kāi)了對(duì)淀粉分解芽孢桿菌枯草溶菌素中的+224氨基酸殘基和對(duì)其他枯草溶菌素中的等同位置的修飾，這種修飾可以借助于取代、插入或缺失改進(jìn)并且可以結(jié)合美國(guó)專(zhuān)利RE34606中確定的殘基的修飾，以形成有用的枯草溶菌素突變體或變體。美國(guó)專(zhuān)利5182204還公開(kāi)了對(duì)枯草溶菌素中的許多氨基酸殘基的修飾，具體包括+99、+101、+103、+107、+126、+128、+135、+197和+204。
Baeck等的美國(guó)專(zhuān)利5679630公開(kāi)了包含蛋白酶變體和一種或多種清洗組合物材料的清洗組合物，所述蛋白酶變體包括在對(duì)應(yīng)于淀粉分解芽孢桿菌枯草溶菌素的76位置處，同時(shí)結(jié)合99，101，103，104，107，123，27，105，109，126，128，135，156，166，195，197，204，206，210，216，217，218，222，260，265和/或274位中的一個(gè)或多個(gè)位置處用其他氨基酸殘基取代所述位置的氨基酸殘基。
除了蛋白酶外，已使用淀粉酶用于各種不同的目的，其中最重要的是淀粉液化、織物退漿、紙和紙漿工業(yè)的淀粉改性和用于釀造和烘烤。成為日益重要的淀粉酶的另外用途是在洗滌織物、硬表面和/或餐具過(guò)程中，對(duì)含淀粉的污垢和污漬的去除。
1994年8月18日公布的WO94/18314(Genencor)、1994年2月3日公布的WO94/02596(Novo)和1995年4月20日公布的WO95/10603(Novo)描述了摻入突變體淀粉酶的清洗組合物。
用于清洗組合物中已知的其他淀粉酶包括α-和β-淀粉酶。α-淀粉酶是現(xiàn)有技術(shù)已知的并包括在美國(guó)專(zhuān)利5003257；EP252666；WO91/00353；FR2676456；EP285123；EP525610；EP368341；和英國(guó)專(zhuān)利說(shuō)明書(shū)1296839(Novo)中公開(kāi)的那些。
1995年10月5日公布的WO95/26397(Novo)公開(kāi)了一種α-淀粉酶，其在溫度25℃-55℃和pH值為8-10下，比活度比Termamyl的比活度高至少25％。
1998年2月12日公布的WO98/05748(P&G)公開(kāi)了用于洗滌劑組合物中的在WO95/26397中描述的α-淀粉酶的變體。
1998年7月16日公布的WO98/30669(Henkel)公開(kāi)了含有蛋白酶和淀粉酶的洗滌劑組合物，其中蛋白酶是一種蛋白酶突變體，其中在野生型蛋白酶的211位置(BLAP編號(hào)方法)處存在的氨基酸亮氨酸被天冬氨酸或谷氨酸交換；淀粉酶是一種淀粉酶突變體，其中在野生型淀粉酶中存在的至少一個(gè)蛋氨酸、色氨酸、半胱氨酸或酪氨酸被除去或被具體不是半胱氨酸或蛋氨酸的另一種氨基酸交換。適用于WO98/30669的組合物中的淀粉酶突變體的實(shí)例公開(kāi)在WO94/02597(Novo)、WO95/10603(Novo)和WO94/18314(Genencor)中并且可按Duramyl(Novo)和Purafect OxAm(Genencor)商購(gòu)。
然而，仍存在消費(fèi)者對(duì)清洗組合物的需求，這種清洗組合物比含常規(guī)酶的清洗組合物能提供從底物上更強(qiáng)和/或改善的對(duì)污垢和/或污漬的清洗(去除和/或減少)。
本發(fā)明已發(fā)現(xiàn)新蛋白酶和淀粉酶的組合比含常規(guī)酶清洗組合物和/或含本發(fā)明新蛋白酶而不存在本發(fā)明淀粉酶的清洗組合物提供了增強(qiáng)和/或改善的去污垢和/或污漬效果，其中所述新蛋白酶是多取代的蛋白酶變體，所述淀粉酶是淀粉酶變體。
另外，令人吃驚地發(fā)現(xiàn)包含本發(fā)明新蛋白酶和本發(fā)明淀粉酶的新組合的清洗組合物提供了比包含本發(fā)明新蛋白酶或本發(fā)明淀粉酶中的一種或另一種，但不是這兩種的清洗組合物提供的累積清洗效果更優(yōu)異的清洗效果。
因此，本發(fā)明的目的是提供清洗組合物，特別是洗衣洗滌劑組合物和/或洗餐具洗滌劑組合物，其具有改善的去污垢和/或污漬效果和/或清潔織物效果。
另外，本申請(qǐng)中要求保護(hù)的特定組合未在任何這些現(xiàn)有技術(shù)參考文獻(xiàn)中被確認(rèn)。
發(fā)明概述本發(fā)明滿足了上述需求，在于令人吃驚地發(fā)現(xiàn)本發(fā)明多取代的蛋白酶變體當(dāng)與本發(fā)明淀粉酶變體組合用于清洗組合物中時(shí)比含常規(guī)酶的清洗組合物提供了改善和增強(qiáng)的清洗能力，包括，但不限于去除和/或減少污漬和/或污垢和/或保持白度和/或使污穢清潔和/或去除和/或減少污斑和/或膜。
本發(fā)明多取代的蛋白酶變體和淀粉酶變體適用于高和低密度顆粒、重垢和輕垢型液體、片以及合成洗滌劑條組合物和其他清洗組合物。
本發(fā)明的一方面，清洗組合物包含(a)蛋白酶變體，優(yōu)選有效量的蛋白酶變體，按該清洗組合物的重量計(jì)更優(yōu)選約0.0001％-10％蛋白酶變體，其中所述蛋白酶變體包括在對(duì)應(yīng)于淀粉分解芽孢桿菌枯草溶菌素的103位的氨基酸殘基位置處用另一種天然產(chǎn)生的氨基酸殘基取代所述位置的氨基酸殘基，同時(shí)結(jié)合在對(duì)應(yīng)于淀粉分解芽孢桿菌枯草溶菌素的1、3、4、8、9、10、12、13、16、17、18、19、20、21、22、24、27、33、37、38、42、43、48、55、57、58、61、62、68、72、75、76、77、78、79、86、87、89、97、98、99、101、102、104、106、107、109、111、114、116、117、119、121、123、126、128、130、131、133、134、137、140、141、142、146、147、158、159、160、166、167、170、173、174、177、181、182、183、184、185、188、192、194、198、203、204、205、206、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、222、224、227、228、230、232、236、237、238、240、242、243、244、245、246、247、248、249、251、252、253、254、255、256、257、258、259、260、261、262、263、265、268、269、270、271、272、274和275位的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基位置處用另一種天然產(chǎn)生的氨基酸殘基取代所述位置的氨基酸殘基；其中當(dāng)所述蛋白酶變體包括在對(duì)應(yīng)于103和76位置處的氨基酸殘基的取代時(shí)，還存在在非對(duì)應(yīng)于淀粉分解芽孢桿菌枯草溶菌素的27、99、101、104、107、109、123、128、166、204、206、210、216、217、218、222、260、265或274位的氨基酸殘基位置的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基位置處的氨基酸殘基的取代；(b)淀粉酶變體，優(yōu)選有效量的淀粉酶變體，按該清洗組合物的重量計(jì)更優(yōu)選約0.0001％-10％淀粉酶變體，其中所述淀粉酶變體選自(i)α-淀粉酶，特征在于由Phadebasα-淀粉酶活性實(shí)驗(yàn)測(cè)定，其在溫度25℃-55℃和pH值為8-10下，比活度比Termamyl的比活度高至少25％；和/或(ii)根據(jù)(i)的α-淀粉酶，其包含在SEQ ID No.1中所示的氨基酸序列或與SEQ ID No.1中所示的氨基酸序列至少80％同源的α-淀粉酶，和/或(iii)根據(jù)(i)的α-淀粉酶，其包含在SEQ ID No.2中所示的氨基酸序列或與SEQ ID No.2中所示的氨基酸序列至少80％同源的α-淀粉酶，和/或(iv)根據(jù)(i)的α-淀粉酶，其包含以下N-端氨基酸序列His-His-Asn-Gly-Thr-Asn-Gly-Thr-Met-Met-Gln-Tyr-Phe-Glu-Trp-Tyr-Leu-Pro-Asn-Asp(SEQ ID No.3)或與N-端中所示的氨基酸序列(SEQID No.3)至少80％同源的α-淀粉酶，和/或(v)根據(jù)(i-iv)的α-淀粉酶，其中該α-淀粉酶可由嗜堿的芽孢桿菌種得到，和/或(vi)根據(jù)(v)的α-淀粉酶，其中該淀粉酶可由NCIB 12289、NCIB12512、NCIB12513和DSM935中的任何菌株得到，和/或
(vii)α-淀粉酶，其與具有分別對(duì)應(yīng)于SEQ ID No.1、ID No.2或ID No.3的氨基酸序列的α-淀粉酶產(chǎn)生的抗體表現(xiàn)出陽(yáng)性免疫交叉反應(yīng)活性，和/或(viii)母體α-淀粉酶變體，其中母體α-淀粉酶(1)具有分別在SEQ ID No.1、ID No.2或ID No.4中所示的一種氨基酸序列，或(2)表現(xiàn)出與一個(gè)或多個(gè)所述的氨基酸序列至少80％同源，和/或與具有一個(gè)所述氨基酸序列的α-淀粉酶產(chǎn)生的抗體表現(xiàn)出免疫交叉反應(yīng)活性，和/或由一種DNA序列編碼，該DNA序列與編碼具有一個(gè)所述氨基酸序列的α-淀粉酶的DNA序列相同的探針雜交，該變體中(A)所述母體α-淀粉酶中缺失至少一個(gè)氨基酸殘基；和/或(B)所述母體α-淀粉酶的至少一個(gè)氨基酸殘基被不同的氨基酸殘基代替；和/或(C)相對(duì)所述的母體α-淀粉酶，插入至少一個(gè)氨基酸殘基；所述變體具有α-淀粉酶活性并相對(duì)所述母體α-淀粉酶表現(xiàn)出至少一種以下性質(zhì)提高了熱穩(wěn)定性、提高了抗氧化的穩(wěn)定性；降低了對(duì)Ca離子的依賴(lài)性；在中性至相對(duì)高pH值下提高了穩(wěn)定性和/或α-淀粉分解活性；在相對(duì)高溫下提高了α-淀粉分解活性；和提高或降低了等電點(diǎn)(pI)，以便使α-淀粉酶變體的pI值更好地與介質(zhì)的pH匹配；和(c)一種或多種清洗輔助材料。
本發(fā)明另一方面，提供了一種織物清洗組合物，其包含(a)蛋白酶變體，優(yōu)選有效量的蛋白酶變體，按該織物清洗組合物的重量計(jì)更優(yōu)選約0.0001％-10％蛋白酶變體，其中所述蛋白酶變體如上文所述；(b)淀粉酶變體，優(yōu)選有效量的淀粉酶變體，按該清洗組合物的重量計(jì)更優(yōu)選約0.0001％-10％淀粉酶變體，其中所述淀粉酶變體如上文所述；(c)按織物清洗組合物重量計(jì)至少約5％的表面活性劑；和(d)按織物清洗組合物重量計(jì)至少約5％的助洗劑。
本發(fā)明還一方面，提供了一種清洗需要被清潔的織物的方法，包括將織物與本發(fā)明的織物清洗組合物接觸。
本發(fā)明還一個(gè)方面，提供了一種洗餐具組合物，其包含(a)蛋白酶變體，優(yōu)選有效量的蛋白酶變體，按該洗餐具組合物的重量計(jì)更優(yōu)選約0.0001％-10％蛋白酶變體，其中所述蛋白酶變體如上文所述；(b)淀粉酶變體，優(yōu)選有效量的淀粉酶變體，按該清洗組合物的重量計(jì)更優(yōu)選約0.0001％-10％淀粉酶變體，其中所述淀粉酶變體如上文所述；和(c)約0.1％-10％重量表面活性劑。
本發(fā)明還一個(gè)方面，提供了一種清洗需要被清潔的餐具的方法，其包括將餐具與本發(fā)明洗餐具組合物接觸。
本發(fā)明還一個(gè)方面，提供了一種個(gè)人清洗組合物，其包含(a)蛋白酶變體，優(yōu)選有效量的蛋白酶變體，按該個(gè)人清洗組合物的重量計(jì)更優(yōu)選約0.001％-5％蛋白酶變體，其中所述蛋白酶變體如上文所述；(b)淀粉酶變體，優(yōu)選有效量的淀粉酶變體，按該清洗組合物的重量計(jì)更優(yōu)選約0.0001％-10％淀粉酶變體，其中所述淀粉酶變體如上文所述；和(c)按個(gè)人清洗組合物的重量計(jì)，約0.1％-95％表面活性劑體系；和(d)任選地，按個(gè)人清洗組合物的重量計(jì)，約0.05％-50％酶穩(wěn)定劑。
本發(fā)明還一個(gè)方面，提供了一種個(gè)人清洗需要被清潔的人體或低級(jí)動(dòng)物體部分的方法，包括將所述部分與本發(fā)明個(gè)人清洗組合物接觸。
本發(fā)明還一個(gè)方面，提供了一種清洗組合物，其包含(a)蛋白酶變體，優(yōu)選有效量的蛋白酶變體，按該清洗組合物的重量計(jì)更優(yōu)選約0.0001％-10％蛋白酶變體，其中所述蛋白酶變體包括在對(duì)應(yīng)于淀粉分解芽孢桿菌枯草溶菌素的62、212、230、232、252和257位置處的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基位置處用另一種天然產(chǎn)生的氨基酸殘基取代所述位置的氨基酸殘基；(b)淀粉酶變體，優(yōu)選有效量的淀粉酶變體，按該清洗組合物的重量計(jì)更優(yōu)選約0.0001％-10％淀粉酶變體，其中所述淀粉酶變體選自(i)α-淀粉酶，特征在于由Phadebasα-淀粉酶活性實(shí)驗(yàn)測(cè)定，其在溫度25℃-55℃和pH值為8-10下，比活度比Termamyl的比活度高至少25％；和/或(ii)根據(jù)(i)的α-淀粉酶，其包含在SEQ ID No.1中所示的氨基酸序列或與SEQ ID No.1中所示的氨基酸序列至少80％同源的α-淀粉酶，和/或(iii)根據(jù)(i)的α-淀粉酶，其包含在SEQ ID No.2中所示的氨基酸序列或與SEQ ID No.2中所示的氨基酸序列至少80％同源的α-淀粉酶，和/或(iv)根據(jù)(i)的α-淀粉酶，其包含以下N-端氨基酸序列His-His-Asn-Gly-Thr-Asn-Gly-Thr-Met-Met-Gln-Tyr-Phe-Glu-Trp-Tyr-Leu-Pro-Asn-Asp(SEQ ID No.3)或與N-端中所示的氨基酸序列(SEQID No.3)至少80％同源的α-淀粉酶，和/或(v)根據(jù)(i-iv)的α-淀粉酶，其中該α-淀粉酶可由嗜堿的芽孢桿菌種得到，和/或(vi)根據(jù)(v)的α-淀粉酶，其中該淀粉酶可由NCIB 12289、NCIB12512、NCIB12513和DSM935中的任何菌株得到，和/或(vii)α-淀粉酶，其與具有分別對(duì)應(yīng)于SEQ ID No.1、ID No.2或ID No.3的氨基酸序列的α-淀粉酶產(chǎn)生的抗體表現(xiàn)出陽(yáng)性免疫交叉反應(yīng)活性，和/或(viii)母體α-淀粉酶變體，其中母體α-淀粉酶(1)具有分別在SEQ ID No.1、ID No.2或ID No.4中所示的一種氨基酸序列，或(2)表現(xiàn)出與一個(gè)或多個(gè)所述的氨基酸序列至少80％同源，和/或與具有一個(gè)所述氨基酸序列的α-淀粉酶產(chǎn)生的抗體表現(xiàn)出免疫交叉反應(yīng)活性，和/或由一種DNA序列編碼，該DNA序列與編碼具有一個(gè)所述氨基酸序列的α-淀粉酶的DNA序列相同的探針雜交，該變體中(A)所述母體α-淀粉酶中缺失至少一個(gè)氨基酸殘基；和/或(B)所述母體α-淀粉酶的至少一個(gè)氨基酸殘基被不同的氨基酸殘基代替；和/或(C)相對(duì)所述的母體α-淀粉酶，插入至少一個(gè)氨基酸殘基；所述變體具有α-淀粉酶活性并相對(duì)所述母體α-淀粉酶表現(xiàn)出至少一種以下性質(zhì)提高了熱穩(wěn)定性、提高了抗氧化的穩(wěn)定性；降低了對(duì)Ca離子的依賴(lài)性；在中性至相對(duì)高pH值下提高了穩(wěn)定性和/或α-淀粉分解活性；在相對(duì)高溫下提高了α-淀粉分解活性；和提高或降低了等電點(diǎn)(pI)，以便使α-淀粉酶變體的pI值更好地與介質(zhì)的pH匹配；和
(c)一種或多種清洗輔助材料。
本發(fā)明還一個(gè)方面，提供了一種織物清洗組合物，其包含(a)蛋白酶變體，優(yōu)選有效量的蛋白酶變體，按該織物清洗組合物的重量計(jì)更優(yōu)選約0.0001％-10％蛋白酶變體，其中所述蛋白酶變體包括在對(duì)應(yīng)于淀粉分解芽孢桿菌枯草溶菌素的62、212、230、232、252和257位置處的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基位置處用另一種天然產(chǎn)生的氨基酸殘基取代所述位置的氨基酸殘基；(b)淀粉酶變體，優(yōu)選有效量的淀粉酶變體，按該清洗組合物的重量計(jì)更優(yōu)選約0.0001％-10％淀粉酶變體，其中所述淀粉酶變體如上文所述；(c)按該織物清洗組合物的重量計(jì)，至少約5％表面活性劑；和(d)按該織物清洗組合物的重量計(jì)，至少約5％助洗劑。
本發(fā)明還一個(gè)方面，提供了一種清洗需要被清潔的織物的方法，其包括將織物與本發(fā)明織物清洗組合物接觸。
本發(fā)明還一個(gè)方面，提供了一種洗餐具組合物，其包含(a)蛋白酶變體，優(yōu)選有效量的蛋白酶變體，按該織物清洗組合物的重量計(jì)更優(yōu)選約0.0001％-10％蛋白酶變體，其中所述蛋白酶變體包括在對(duì)應(yīng)于淀粉分解芽孢桿菌枯草溶菌素的62、212、230、232、252和257位置處的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基位置處用另一種天然產(chǎn)生的氨基酸殘基取代所述位置的氨基酸殘基；(b)淀粉酶變體，優(yōu)選有效量的淀粉酶變體，按該清洗組合物的重量計(jì)更優(yōu)選約0.0001％-10％淀粉酶變體，其中所述淀粉酶變體如上文所述；和(c)按該洗餐具組合物的重量計(jì)，約0.1％-10％表面活性劑。
本發(fā)明還一個(gè)方面，提供了一種清洗需要被清潔的餐具的方法，其包括將餐具與本發(fā)明洗餐具組合物接觸。
本發(fā)明還一個(gè)方面，提供了一種個(gè)人清洗組合物，其包含(a)蛋白酶變體，優(yōu)選有效量的蛋白酶變體，按該個(gè)人清洗組合物的重量計(jì)更優(yōu)選約0.001％-5％蛋白酶變體，其中所述蛋白酶變體包括在對(duì)應(yīng)于淀粉分解芽孢桿菌枯草溶菌素的62、212、230、232、252和257位置處的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基位置處用另一種天然產(chǎn)生的氨基酸殘基取代所述位置的氨基酸殘基；
(b)淀粉酶變體，優(yōu)選有效量的淀粉酶變體，按該清洗組合物的重量計(jì)更優(yōu)選約0.0001％-10％淀粉酶變體，其中所述淀粉酶變體如上文所述；和(c)按該個(gè)人清洗組合物的重量計(jì)，約0.1％-95％表面活性劑體系；和(d)任選地，按該個(gè)人清洗組合物的重量計(jì)，約0.05％-50％酶穩(wěn)定劑。
本發(fā)明還一個(gè)方面，提供了一種個(gè)人清洗需要被清潔的人體或低級(jí)動(dòng)物體部分的方法，包括將所述部分與本發(fā)明個(gè)人清洗組合物接觸。
因此，本發(fā)明的目的是提供含有蛋白酶變體和淀粉酶變體的組合的清洗組合物，其能夠改善和增強(qiáng)對(duì)織物、器皿、餐具、廚具、炊具和其他硬表面載污體的清洗。本發(fā)明還一個(gè)目的是通過(guò)使用本發(fā)明含蛋白酶變體/淀粉酶變體的清洗組合物來(lái)提供清洗織物、器皿、餐具、廚具、炊具和其他硬表面載污體的方法。
由以下的詳細(xì)描述、實(shí)施例和所附的權(quán)利要求書(shū)，本發(fā)明的這些和其他目的、特征和優(yōu)點(diǎn)將是顯然的。
除非另外說(shuō)明，本發(fā)明的所有百分?jǐn)?shù)、比例和比率是按重量計(jì)。本文引用的所有文獻(xiàn)在此引用作參考。
附圖簡(jiǎn)述

圖1A-C描述了淀粉分解芽孢桿菌枯草溶菌素的DNA和氨基酸序列和該基因的部分限制圖。
圖2描述了得自淀粉分解芽孢桿菌(BPN’)和緩慢芽孢桿菌(野生型)的枯草溶菌素中的保守氨基酸殘基。
圖3A和3B描述了四種枯草溶菌素的氨基酸序列。上部的線表示得自淀粉分解芽孢桿菌枯草溶菌素(有時(shí)還稱(chēng)為枯草溶菌素BPN’)的枯草溶菌素的氨基酸序列。第二條線描述了得自枯草芽孢桿菌的枯草溶菌素的氨基酸序列。第三條線描述了得自地衣形芽孢桿菌的枯草溶菌素的氨基酸序列。第四條線描述了得自緩慢芽孢桿菌的枯草溶菌素(在PCT WO89/06276中還稱(chēng)為枯草溶菌素309)的枯草溶菌素的氨基酸序列。符號(hào)*表示與枯草溶菌素BPN相比，不存在特定的氨基酸殘基。
發(fā)明詳述1.蛋白酶-蛋白酶是通常起到使蛋白質(zhì)或肽的肽鍵斷開(kāi)作用的羰基水解酶。這里所述的“蛋白酶”意思是天然產(chǎn)生的蛋白酶或重組蛋白酶。天然產(chǎn)生的蛋白酶包括α-氨基酰基肽水解酶、肽基氨基酸水解酶、?；被饷?、絲氨酸羧基肽酶、金屬羧基肽酶、硫醇蛋白酶、羧基蛋白酶和金屬蛋白酶。包括絲氨酸、金屬、硫醇和酸蛋白酶以及內(nèi)切和外切蛋白酶。
本發(fā)明包括蛋白酶，其是非天然產(chǎn)生的羰基水解酶變體(蛋白酶變體)，其與產(chǎn)生該變體的氨基酸序列的前體羰基水解酶相比具有不同的蛋白水解活性、穩(wěn)定性、基質(zhì)特異性、pH范圍和/或性能特征。具體而言，這種蛋白酶變體具有在自然界中未發(fā)現(xiàn)的氨基酸序列，其由用不同的氨基酸取代前體蛋白酶的多個(gè)氨基酸殘基得到。該前體蛋白酶可以是天然產(chǎn)生的蛋白酶或重組蛋白酶。如先前所述，蛋白酶變體被設(shè)計(jì)成具有似胰蛋白酶的特異性并優(yōu)選還是漂白穩(wěn)定的。
本發(fā)明有用的蛋白酶變體包括任何十九個(gè)天然產(chǎn)生的L-氨基酸在指定氨基酸殘基位置處的取代。這種取代可在任何前體枯草溶菌素(原核生物、真核生物、哺乳動(dòng)物等)中進(jìn)行。本申請(qǐng)中，通過(guò)普通的1和3個(gè)字母編碼的方式來(lái)參考各種氨基酸。這種編碼確定在Dale，M.W.(1989)，細(xì)菌的分子遺傳，John Wiley&Sons，Ltd.，附錄B中。
本發(fā)明有用的蛋白酶變體優(yōu)選得自枯草芽孢桿菌。更優(yōu)選，該蛋白酶變體得自緩慢芽孢桿菌枯草溶菌素和/或枯草溶菌素309。
羰基水解酶-羰基水解酶是水解含 鍵的化合物的蛋白酶，其中X是氧或氮。它們包括天然產(chǎn)生的羰基水解酶和重組羰基水解酶。天然產(chǎn)生的羰基水解酶主要包括水解酶例如肽水解酶例如枯草溶菌素或金屬蛋白酶。肽水解酶包括α-氨基?；乃饷浮㈦幕被崴饷?、?；被饷?、絲氨酸羧基肽酶、金屬羧基肽酶、硫醇蛋白酶、羧基蛋白酶和金屬蛋白酶。包括絲氨酸、金屬、硫醇和酸蛋白酶以及內(nèi)切和外切蛋白酶。
枯草溶菌素-枯草溶菌素是細(xì)菌或真菌蛋白酶，其一般起到使蛋白質(zhì)或肽的肽鍵斷開(kāi)的作用。這里所述的“枯草溶菌素”意思是天然產(chǎn)生的枯草溶菌素或重組枯草溶菌素。一組天然產(chǎn)生的枯草溶菌素已知是可生產(chǎn)的并通常由各種微生物物種分泌。該組中的枯草溶菌素的氨基酸序列不完全是同源的。然而，該組中的枯草溶菌素表現(xiàn)出相同或相似類(lèi)型的蛋白水解活性。此類(lèi)絲氨酸蛋白酶具有定義催化三分體的普通氨基酸序列，它們不同于胰凝乳蛋白酶相關(guān)類(lèi)型的絲氨酸蛋白酶。該枯草溶菌素和胰凝乳蛋白酶相關(guān)的絲氨酸蛋白酶都具有催化三分體，包括天冬氨酸、組氨酸和絲氨酸。在枯草溶菌素相關(guān)的蛋白酶中，這些氨基酸的相對(duì)順序，從與端羧基相連的氨基讀起，是天冬氨酸-組氨酸-絲氨酸。然而，在胰凝乳蛋白酶相關(guān)的蛋白酶中，相對(duì)的順序是組氨酸-天冬氨酸-絲氨酸。因此，本發(fā)明的枯草溶菌素是指具有枯草溶菌素相關(guān)的蛋白酶的催化三分體的絲氨酸蛋白酶。實(shí)例包括，但不限于在本文的圖3中確定的枯草溶菌素。一般，對(duì)于本發(fā)明目的，蛋白酶的氨基酸編號(hào)對(duì)應(yīng)于在圖1中所示的成熟的淀粉分解芽孢桿菌枯草溶菌素序列給定的編號(hào)。
蛋白酶變體-“蛋白酶變體”具有從“前體蛋白酶”的氨基酸序列衍生得到的氨基酸序列。前體蛋白酶包括天然產(chǎn)生的蛋白酶和重組蛋白酶。蛋白酶變體的氨基酸序列是通過(guò)前體氨基酸序列中的一個(gè)或多個(gè)氨基酸的取代、缺失或插入而由前體蛋白酶氨基酸序列“衍生”得到。這種修飾是對(duì)“前體DNA序列”的修飾，其編碼了前體蛋白酶的氨基酸序列，而不是前體蛋白酶本身的操作。這種操作前體DNA序列的適合方法包括本文中公開(kāi)的方法以及本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的方法(參見(jiàn)，例如EP0328299，WO89/06279和本文已參考的美國(guó)專(zhuān)利和申請(qǐng))。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白酶變體是本發(fā)明清洗組合物中有用的蛋白酶，所述清洗組合物包含下述的蛋白酶變體和一種或多種清洗輔助材料，所述蛋白酶變體包括在對(duì)應(yīng)于淀粉分解芽孢桿菌枯草溶菌素的103位的氨基酸殘基位置處用另一種天然產(chǎn)生的氨基酸殘基取代所述位置的氨基酸殘基，同時(shí)結(jié)合在對(duì)應(yīng)于淀粉分解芽孢桿菌枯草溶菌素的1、3、4、8、9、10、12、13、16、17、18、19、20、21、22、24、27、33、37、38、42、43、48、55、57、58、61、62、68、72、75、76、77、78、79、86、87、89、97、98、99、101、102、104、106、107、109、111、114、116、117、119、121、123、126、128、130、131、133、134、137、140、141、142、146、147、158、159、160、166、167、170、173、174、177、181、182、183、184、185、188、192、194、198、203、204、205、206、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、222、224、227、228、230、232、236、237、238、240、242、243、244、245、246、247、248、249、251、252、253、254、255、256、257、258、259、260、261、262、263、265、268、269、270、271、272、274和275位置處中的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基位置處用另一種天然產(chǎn)生的氨基酸殘基取代所述位置的氨基酸殘基；其中當(dāng)所述蛋白酶變體包括在對(duì)應(yīng)于103和76位置處的氨基酸殘基的取代時(shí)，還存在在非對(duì)應(yīng)于淀粉分解芽孢桿菌枯草溶菌素的27、99、101、104、107、109、123、128、166、204、206、210、216、217、218、222、260、265或274位的氨基酸殘基位置處的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基位置處的氨基酸殘基的取代。
雖然可使用以上所列的氨基酸取代的任何組合，但本發(fā)明適用的優(yōu)選的蛋白酶變體包括按下列組合方式的取代、缺失或插入氨基酸殘基(1)一種蛋白酶變體，其包括在103位置和在以下236和245位置中的一個(gè)或多個(gè)位置處的氨基酸殘基的取代；(2)一種蛋白酶變體，其包括在103和236位置和在以下12、61、62、68、76、97、98、101、102、104、109、130、131、159、183、185、205、209、210、211、212、213、215、217、230、232、248、252、257、260、270和275位置中的一個(gè)或多個(gè)位置處的氨基酸殘基的取代；(3)一種蛋白酶變體，其包括在103和245位置和在以下12、61、62、68、76、97、98、101、102、104、109、130、131、159、、170、183、185、205、209、210、211、212、213、215、217、222、230、232、248、252、257、260、270和275位置中的一個(gè)或多個(gè)位置處的氨基酸殘基的取代；和(4)一種蛋白酶變體，其包括在103、236和245位置和在以下12、61、62、68、76、97、98、101、102、104、109、130、131、159、183、185、205、209、210、211、212、213、215、217、230、232、243、248、252、257、260、270和275位置中的一個(gè)或多個(gè)位置處的氨基酸殘基的取代。
本發(fā)明清洗組合物中有用的更優(yōu)選的蛋白酶變體包括選自以下的一組取代(下表I中每行一組取代)表I
本發(fā)明清洗組合物中有用的甚至更優(yōu)選的蛋白酶變體包括選自以下的一組取代(下表II中每行一組取代)表II
本發(fā)明清洗組合物中有用的還甚至更優(yōu)選的蛋白酶變體包括一組取代，其選自除了以下表III的多組取代外的表I中的多組取代表III
本發(fā)明清洗組合物中有用的還甚至更優(yōu)選的蛋白酶變體包括一組取代，其選自表IV中的多組取代表IV
本發(fā)明清洗組合物中有用的還甚至更優(yōu)選的蛋白酶變體包括一組取代，其選自表V中的多組取代表V
本發(fā)明清洗組合物中有用的高度優(yōu)選的蛋白酶變體包括選自以下的一組取代12/102/103/104/159/212/232/236/245/248/252； 12/76/103/104/130/170/185/222/243/245；12/76/103/104/130/222/245/261； 12/76/103/104/130/222/245；12/76/103/104/222/245；61/68/103/104/159/232/236/245/248/252； 62/103/104/159/213/232/236/245/248/252；62/103/104/109/159/213/232/236/245/248/252； 62/103/104/159/232/236/245/248/252；62/101/103/104/159/212/213/232/236/245/248/252；62/103/104/130/159/213/232/236/245/248/252； 68/103/104/159/232/236/245/248/252/270；68/103/104/159/185/232/236/245/248/252； 68/103/104/159/210/232/236/245/248/252；68/103/104/159/185/210/232/236/245/248/252； 68/103/104/159/213/232/236/245/248/252；68/103/104/159/230/232/236/245； 68/76/103/104/159/209/932/236/245；68/103/104/232/236/245/248/257/275； 68/103/104/213/232/236/245/248/252；68/103/104/159/232/236/245/248/252； 68/103/104/159/209/232/36/245；68/76/103/104/159/236； 68/76/103/104/159/236/245；68/76/103/104/159/232/236/245； 68/103/104/159/232/236/245/252；68/103/104/159/232/236/245； 68/103/104/159/232/236/245/257；68/76/103/104/159/211/232/236/245； 68/76/103/104/159/215/232/236/245；68/103/104/159/210/232/236/245； 68/103/104/159/213/232/236/245/260；68/76/103/104/159/213/232/236/245/260； 68/103/104/159/236；68/76/103/104/159/210/232/236/245/260； 68/103/104/159/236/245；68/103/104/159/183/232/236/245/248/252； 68/76/103/104/159/236/245；68/103/104/232/236/245/257/275； 68/103/104/159/213/232/236/245；76/103/222/245； 76/103/104/222/245；76/103/104/159/232/236/245；76/103/104/159/213/232/236/245/260； 76/103/104/159；76/103/104/131/159/232/236/245/248/252； 97/103/104/159/232/236/245/248/252；98/102/103/104/159/212/232/236/245/248/252； 98/103/104/159/232/236/245/248/252；101/103/104/159/232/236/245/248/252；102/103/104/159/232/236/245/248/252；103/104/159/232/236/245；103/104/159/232/236/245/248/252；103/104/159/205/209/232/236/245/257 103/104/159/232/245/248/252；103/104/159/205/209/210/232/236/245/257；103/104/159/213/232/236/245/248/252；103/104/159/217/232/236/245/248/252；103/104/130/159/232/236/245/248/252；103/104/159/230/236/245；103/104/159/236/245；103/104/159/248/252/270；103/104/131/159/232/236/245/248/252；103/104/159/205/209/232/236/245；和 103/104/159/232/236/245/257.
本發(fā)明清洗組合物中有用的更高度優(yōu)選的蛋白酶變體包括選自以下的一組取代12R/76D/103A/104T/130T/222S/245R；12R/76D/103A/104I/222S/245R；12R/102A/103A/104I/159D/212G/232V/236H/245R/248D/252K；12R/76D/103A/104T/130G/222S/245R/261D；12R/76D/103A/104T/130G/170S/185D/222S/243D/245R；61E/68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K；62D/103A/104I/109R/159D/213R/232V/236H/245R/248D/252K；62D/103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/248D/252K；62D/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K；62D/103A/104I/130G/159D/213R/232V/236H/245R/248D/252K；62D/101G/103A/104I/159D/212G/213R/232V/236H/245R/248D/252K；68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K/270A；68A/76D/103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/260A；68A/103A/104I/159D/236H；68A/103A/104I/159D/236H/245R；68A/76D/103A/104I/159D/210I/232V/236H/245R/260A；68A/103A/104I/159D/183D/232V/236H/245R/248D/252K；68A/103A/104I/159D/209W/232V/236H/245R；68A/76D/103A/104I/159D/211R/232V/236H/245R；68A/76D/103A/104I/159D/215R/232V/236H/245R；68A/103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/260A；68A/76D/103A/104I/159D/236H；68A/76D/103A/104I/159D/236H/245R；68A/76D/103A/104I/159D/232V/236H/245R；68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/252K；68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R；68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/257V；68A/103A/104I/159D/185D/232V/236H/245R/248D/252K；68A/103A/104I/159D/210L/232V/236H/245R/248D/252K；68A/103A/104I/159D/185D/210L/232V/236H/245R/248D/252K；68A/103A/104I/159D/213E/232V/236H/245R/248D/252K；68A/103A/104I/159D/230V/232V/236H/245R；
68A/76D/103A/104I/159D/209W/232V/236I/245R；68A/103A/104I/232V/236H/245R/248D/257V/275H；68A/103A/104I/232V/236H/245R/257V/275H；68A/103A/104I/213E/232V/236H/245R/248D/252K；68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K；68A/103A/104I/159D/210I/232V/236H/245R；68A/103A/104I/159D/210L/232V/236H/245R；68A/103A/104I/159D/213G/232V/236H/245R；76D/103A/222S/245R；76D/103A/104I/222S/245R；76D/103A/104I/159D/232V/236H/245R；76D/103A/104I/159D；76D/103A/104I/131V/159D/232V/236H/245R/248D/252K；76D/103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/260A；97E/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K；98L/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K；98L/102A/103A/104I/159D/212G/232V/236H/245R/248D/252K；101G/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K；102A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K；103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K；103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/248D/252K；103A/104I/130G/159D/232V/236H/245R/248D/252K；103A/104I/159D/230V/236H/245R；103A/104I/159D/217E/232V/236H/245R/248D/252K；103A/104I/159D/236H/245R；103A/104I/159D/248D/252K/270V；103A/1041/159D/232V/236H/245R；103A/104I/159D/205I/209W/232V/236H/245R；103A/104I/159D/232V/236H/245R/257V；103A/104I/159D/205I/209W/232V/236H/245R/257V；103A/104I/131V/159D/232V/236H/245R/248D/252K；103A/104I/159D/205I/209W/210I/232V/236H/245R/257V；和103A/104I/159D/232V/245R/248D/252K.
本發(fā)明清洗組合物中有用的甚至更高度優(yōu)選的蛋白酶變體包括選自以下的一組取代12/76/103/104/130/222/245/261；62/103/104/159/232/236/245/248/2252；62/103/104/159/213/232/236/245/248/252；62/101/103/104/159/212/213/232/236/245/248/252；68/103/104/159/232/236/245；68/103/104/159/230/232/236/245；68/103/104/159/209/232/236/245；68/103/104/159/232/236/245/257；68/76/103/104/159/213/232/236/245/260；68/103/104/159/213/232/236/245/248/252；68/103/104/159/183/232/236/245/248/252；68/103/104/159/185/232/236/245/248/252；68/103/104/159/185/210/232/236/245/248/252；68/103/104/159/210/232/236/245/248/252；68/103/104/159/213/232/236/245；98/103/104/159/232/236/245/248/252；98/102/103/104/159/212/232/236/245/248/252；101/103/104/159/232/236/245/248/252；102/103/104/159/232/236/245/248/252；103/104/159/230/236/245；103/104/159/232/236/245/248/252；103/104/159/217/232/236/245/248/252；103/104/130/159/232/236/245/248/252；103/104/131/159/232/236/245/248/252；103/104/159/213/232/236/245/248/252；和103/104/159/232/236/245.
本發(fā)明清洗組合物中有用的最高度優(yōu)選的蛋白酶變體包括選自以下的一組取代
12R/76D/103A/104T/130T/222S/245R/261D；62D/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K；62D/103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/248D/252K；68A/103A/104I/159D/209W/232V/236H/245R；68A/76D/103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/260A；68A/103A/104I/159D/213E/232V/236H/245R/248D/252K；68A/103A/104I/159D/183D/232V/236H/245R/248D/252K；68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R；68A/103A/104I/159D/230V/232V/236H/245R；68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/257V；68A/103A/104I/159D/213G/232V/236H/245R/248D/252K；68A/103A/104I/159D/185D/232V/236H/245R/248D/252K；68A/103A/104I/159D/185D/210L/232V/236H/245R/248D/252K；68A/103A/104I/159D/210L/232V/236H/245R/248D/252K；68A/103A/104I/159D/213G/232V/236H/245R；98L/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K；98L/102A/103A/104I/159D/212G/232V/236H/245R/248D/252K；101G/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K；102A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K；103A/104I/159D/230V/236H/245R；103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K；103A/104I/159D/217E/232V/236H/245R/248D/252K；103A/104I/130G/159D/232V/236H/245R/248D/252K；103A/104I/131V/159D/232V/236H/245R/248D/252K；103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/248D/252K；和103A/104I/159D/232V/236H/245R在另一優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白酶變體是本發(fā)明清洗組合物中有用的蛋白酶，該蛋白酶變體包括在對(duì)應(yīng)于淀粉分解芽孢桿菌枯草溶菌素的62、212、230、232、252和257位置中的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基位置處用另一種天然產(chǎn)生的氨基酸殘基取代所述位置的氨基酸殘基。
雖然可使用以上所列的氨基酸取代的任何組合，但本發(fā)明適用的優(yōu)選的蛋白酶變體包括按下列組合方式的取代、缺失或插入氨基酸殘基
(1)一種蛋白酶變體，其包括在62位置和在以下103、104、109、159、213、232、236、245、248和252位置中的一個(gè)或多個(gè)位置處的氨基酸殘基的取代；(2)一種蛋白酶變體，其包括在212位置和在以下12、98、102、103、104、159、232、236、245、248和252位置中的一個(gè)或多個(gè)位置處的氨基酸殘基的取代；(3)一種蛋白酶變體，其包括在230位置和在以下68、103、104、159、232、236和245位置中的一個(gè)或多個(gè)位置處的氨基酸殘基的取代；(4)一種蛋白酶變體，其包括在232位置和在以下12、61、62、68、76、97、98、101、102、103、104、109、130、131、159、183、185、205、209、210、212、213、217、230、236、245、248、252、257、260、270和275位置中的一個(gè)或多個(gè)位置處的氨基酸殘基的取代；(5)一種蛋白酶變體，其包括在232位置和在以下103、104、236和245位置中的一個(gè)或多個(gè)位置處的氨基酸殘基的取代；(6)一種蛋白酶變體，其包括在232和103位置和在以下12、61、62、68、76、97、98、101、102、103、104、109、130、131、159、183、185、205、209、210、212、213、217、230、236、245、248、252、257、260、270和275位置中的一個(gè)或多個(gè)位置處的氨基酸殘基的取代；(7)一種蛋白酶變體，其包括在232和104位置和在以下12、61、62、68、76、97、98、101、102、103、104、109、130、131、159、183、185、205、209、210、212、213、217、230、236、245、248、252、257、260、270和275位置中的一個(gè)或多個(gè)位置處的氨基酸殘基的取代；(8)一種蛋白酶變體，其包括在232和236位置和在以下12、61、62、68、76、97、98、101、102、103、104、109、130、131、159、183、185、205、209、210、212、213、217、230、236、245、248、252、257、260、270和275位置中的一個(gè)或多個(gè)位置處的氨基酸殘基的取代；(9)一種蛋白酶變體，其包括在232和245位置和在以下12、61、62、68、76、97、98、101、107、103、104、109、130、131、159、183、185、205、209、210、212、213、217、230、236、245、248、252、257、260、270和275位置中的一個(gè)或多個(gè)位置處的氨基酸殘基的取代；(10)一種蛋白酶變體，其包括在232、103、104、236和245位置和在以下12、61、62、68、76、97、98、101、102、103、104、109、130、131、159、183、185、205、209、210、212、213、217、230、236、245、248、252、257、260、270和275位置中的一個(gè)或多個(gè)位置處的氨基酸殘基的取代；(11)一種蛋白酶變體，其包括在252位置和在以下12、61、62、68、97、98、101、102、103、104、109、130、131、159、183、185、210、212、213、217、232、236、245、248和270位置中的一個(gè)或多個(gè)位置處的氨基酸殘基的取代；(12)一種蛋白酶變體，其包括在252位置和在以下103、104、236和245位置中的一個(gè)或多個(gè)位置處的氨基酸殘基的取代；(13)一種蛋白酶變體，其包括在252和103位置和在以下12、61、62、68、97、98、101、102、103、104、109、130、131、159、183、185、210、212、213、217、232、236、245、248和270位置中的一個(gè)或多個(gè)位置處的氨基酸殘基的取代；(14)一種蛋白酶變體，其包括在252和104位置和在以下12、61、62、68、97、98、101、102、103、104、109、130、131、159、183、185、210、212、213、217、232、236、245、248和270位置中的一個(gè)或多個(gè)位置處的氨基酸殘基的取代；(15)一種蛋白酶變體，其包括在252和236位置和在以下12、61、62、68、97、98、101、102、103、104、109、130、131、159、183、185、210、212、213、217、232、236、245、248和270位置中的一個(gè)或多個(gè)位置處的氨基酸殘基的取代；(16)一種蛋白酶變體，其包括在252和245位置和在以下12、61、62、68、97、98、101、102、103、104、109、130、131、159、183、185、210、212、213、217、232、236、245、248和270位置中的一個(gè)或多個(gè)位置處的氨基酸殘基的取代；(17)一種蛋白酶變體，其包括在252、103、104、236和245位置和在以下12、61、62、68、97、98、101、102、103、104、109、130、131、159、183、185、210、212、213、217、232、236、245、248和270位置中的一個(gè)或多個(gè)位置處的氨基酸殘基的取代；(18)一種蛋白酶變體，其包括在257位置和在以下68、103、104、205、209、210、232、236、245和275位置中的一個(gè)或多個(gè)位置處的氨基酸殘基的取代。
本發(fā)明清洗組合物中有用的更優(yōu)選的蛋白酶變體包括選自以下的一組取代(下表VI中每行一組取代)表VI
本發(fā)明清洗組合物中有用的甚至更優(yōu)選的蛋白酶變體包括選自以下的一組取代(下表VII中每行一組取代)表VII
本發(fā)明清洗組合物中有用的還甚至更優(yōu)選的蛋白酶變體包括一組取代，其選自除了以下表VIII的取代組外的表VI中的多組取代表VIII
本發(fā)明清洗組合物中有用的還甚至更優(yōu)選的蛋白酶變體包括一組取代，其選自表IX中的多組取代表IX
本發(fā)明清洗組合物中有用的還甚至更優(yōu)選的蛋白酶變體包括一組取代，其選自表X中的多組取代表X
本發(fā)明清洗組合物中有用的高度優(yōu)選的蛋白酶變體包括選自以下的一組取代12/102/103/104/159/212/232/236/245/248/252； 61/68/103/104/159/232/236/245/248/252；62/103/104/130/159/213/232/236/245/248/252； 62/103/104/159/213/232/236/245/248/252；62/103/104/109/159/213/232/236/245/248/252； 62/103/104/159/232/236/245/248/252；62/101/103/104/159/212/213/232/236/245/248/252；68/103/104/159/232/236/245/248/252/270；68/103/104/159/185/232/236/245/248/252； 68/103/104/159/210/232/236/245/248/252；68/103/104/159/185/210/232/236/245/248/252； 68/103/104/159/213/232/236/245/248/252；68/103/104/159/230/232/236/245； 68/76/103/104/159/209/232/236/245；68/103/104/232/236/245/248/257/275； 68/103/104/213/232/236/245/248/252；68/103/104/159/232/236/245/248/252； 68/103/104/159/209/232/236/245；68/76/103/104/159/232/236/245； 68/103/104/159/232/236/245/252；68/103/104/159/232/236/245； 68/103/104/159/232/236/245/257；68/76/103/104/159/211/232/236/245； 68/76/103/104/159/215/232/236/245；68/103/104/159/210/232/236/245； 68/103/104/159/213/232/236/245/260；68/76/103/104/159/213/232/236/245/260； 68/76/103/104/159/210/232/236/245/260；68/103/104/159/183/232/236/245/248/252； 68/103/104/232/236/245/257/275；68/103/104/159/213/232/236/245 ；76/103/104/159/232/236/245；76/103/104/159/213/232/236/245/260； 76/103/104/131/159/232/236/245/248/252；97/103/104/159/232/236/245/248/252； 98/103/104/159/232/236/245/248/252；98/102/103/104/159/212/232/236/245/248/252； 101/103/104/159/232/236/245/248/252；102/103/104/159/232/236/245/248/252；103/104/159/232/236/245；103/104/159/248/252/270；103/104/159/232/236/245/248/252；103/104/159/205/209/232/236/245/257 103/104/159/232/245/248/252；103/104/159/205/209/210/232/236/245/257；103/104/159/213/232/236/245/248/252；103/104/159/217/232/236/245/248/252；103/104/130/159/232/236/245/248/252；103/104/131/159/232/236/245/248/252；103/104/159/205/209/232/236/245；和103/104/159/232/236/245/257.本發(fā)明清洗組合物中有用的更高度優(yōu)選的蛋白酶變體包括選自以下的一組取代12R/102A/103A/104I/159D/212G/232V/236H/245R/248D/252K；61E/68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K；62D/103A/104I/109R/159D/213R/232V/236H/245R/248D/252K；62D/103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/248D/252K；62D/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K；62D/103A/104I/130G/159D/213R/232V/236H/245R/248D/252K；62D/101G/103A/104I/159D/212G/213R/232V/236H/245R/248D/252K；68A/76D/103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/260A；68A/76D/103A/104I/159D/2101/232V/236H/245R/260A；68A/103A/104I/159D/183D/232V/236H/245R/248D/252K；68A/103A/104I/159D/209W/232V/236H/245R；68A/76D/103A/104I/159D/211R/232V/236H/245R；68A/76D/103A/104I/159D/215R/232V/236H/245R；68A/103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/260A；68A/76D/103A/104I/159D/232V/236H/245R；68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/252K；68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R；68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/257V；68A/103A/104I/159D/185D/232V/236H/245R/248D/252K；68A/103A/104I/159D/210L/232V/236H/245R/248D/252K；68A/103A/104I/159D/185D/210L/232V/236H/245R/248D/252K；68A/103A/104I/159D/213E/232V/236H/245R/248D/252K；68A/103A/104I/159D/230V/232V/236H/245R；68A/76D/103A/104I/159D/209W/232V/236H/245R；68A/103A/104I/232V/236H/245R/248D/257V/275H；68A/103A/104I/232V/236H/245R/257V/275H；68A/103A/104I/213E/232V/236H/245R/248D/252K；68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K；68A/103A/104I/159D/2101/232V/236H/245R；68A/103A/104I/159D/210L/232V/236H/245R；68A/103A/104I/159D/213G/232V/236H/245R；68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K/270A；76D/103A/104I/159D/232V/236H/245R；76D/103A/104I/131V/159D/232V/236H/245R/248D/252K；76D/103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/260A；97E/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K；98L/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K；98L/102A/103A/104I/159D/212G/232V/236H/245R/248D/252K；101G/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K；102A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K；103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K；103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/248D/252K；103A/104I/130G/159D/232V/236H/245R/248D/252K；103A/104I/159D/217E/232V/236H/245R/248D/252K；103A/104I/159D/248D/252K/270V；103A/104I/159D/232V/236H/245R；103A/1041/159D/205I/209W/232V/236H/245R；103A/104I/159D/232V/236H/245R/257V；103A/104I/159D/205I/209W/232V/236H/245R/257V；103A/104I/131V/159D/232V/236H/245R/248D/252K；103A/104I/159D/205I/209W/210I/232V/236H/245R/257V；和103A/104I/159D/232V/245R/248D/252K重組蛋白酶/重組枯草溶菌素-“重組蛋白酶”或“重組枯草溶菌素”是指其中分別編碼天然產(chǎn)生的蛋白酶或枯草溶菌素的DNA序列被修飾產(chǎn)生突變DNA序列的蛋白酶或枯草溶菌素，所述突變DNA序列編碼了蛋白酶或枯草溶菌素氨基酸序列中的一個(gè)或多個(gè)氨基酸的取代、插入或缺失。適合的修飾方法公開(kāi)在本文和美國(guó)專(zhuān)利RE34606，US5204015和5185258中。
非人體蛋白酶/非人體枯草溶菌素-“非人體蛋白酶”或“非人體枯草溶菌素”和編碼它們的DNA可由許多原核生物和真核生物得到。原核生物的適合實(shí)例包括革蘭氏陰性生物例如大腸桿菌或假單胞菌和革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌例如微球菌或芽孢桿菌?？捎善涞玫紧驶饷负退鼈兊幕虻恼婧松锏膶?shí)例包括酵母例如啤酒糖酵母，真菌例如曲霉屬和非人類(lèi)的哺乳動(dòng)物源例如牛物種，由其可得到編碼蛋白凝乳酶或枯草溶菌素凝乳酶的基因?？蓮母鞣N相關(guān)的物種得到一系列蛋白酶和/或枯草溶菌素，該系列物種之間具有不完全同源的氨基酸序列，但盡管如此仍表現(xiàn)出相同或相似類(lèi)型的生物活性。因此，本文使用的非人體蛋白酶或非人體枯草溶菌素具有一種功能定義，其分別稱(chēng)為蛋白酶或枯草溶菌素，其直接或間接與原核和真核生物源相關(guān)。
變異的DNA序列-編碼這種蛋白酶或枯草溶菌素變體的變異的DNA序列是由編碼天然產(chǎn)生的或重組前體酶的前體DNA序列衍生得到。該變異的DNA序列是由修飾前體DNA序列衍生得到，其編碼了由前體DNA序列編碼的對(duì)應(yīng)于淀粉分解芽孢桿菌枯草溶菌素的103位置的一個(gè)或多個(gè)特定氨基酸殘基的取代，同時(shí)結(jié)合淀粉分解芽孢桿菌枯草溶菌素的以下1、3、4、8、10、12、13、15、16、17、18、20、21、22、24、25、27、33、37、38、42、43、48、55、57、61、62、68、72、75、76、77、78、79、86、87、89、97、98、99、101、102、104、106、107、109、111、114、115、116、117、119、121、123、128、130、131、133、134、137、140、141、142、146、147、158、159、160、161、166、167、170、173、174、177、181、182、183、184、185、188、192、194、198、203、204、205、206、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、222、224、227、228、230、232、236、237、238、240、242、243、244、245、246、247、248、249、251、252、253、254、255、256、257、258、259、260、261、262、263、265、268、269、270、271、272、274和275位置處的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基的取代；其中當(dāng)所述蛋白酶變體包括在對(duì)應(yīng)于103和76位置處的氨基酸殘基的取代時(shí)，還存在在非對(duì)應(yīng)于淀粉分解芽孢桿菌枯草溶菌素的27、99、101、104、107、109、123、128、166、204、206、210、216、217、218、222、260、265或274位的氨基酸殘基位置處的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基位置處的氨基酸殘基的取代。盡管在本文確認(rèn)用于修飾的氨基酸殘基是根據(jù)淀粉分解芽孢桿菌應(yīng)用的編號(hào)來(lái)確定(其已成為確定在所有枯草溶菌素中的殘基位置的常規(guī)方法)，但本發(fā)明適用的優(yōu)選的前體DNA序列是如圖3中所示的緩慢芽孢桿菌的DNA序列。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，這些變異的DNA序列編碼了對(duì)應(yīng)于淀粉分解芽孢桿菌枯草溶菌素的103位置的氨基酸殘基的取代、插入或缺失，同時(shí)結(jié)合淀粉分解芽孢桿菌枯草溶菌素的以下1、3、4、8、9、10、12、13、16、17、18、19、20、21、22、24、27、33、37、38、42、43、48、55、57、58、61、62、68、72、75、76、77、78、79、86、87、89、97、98、99、101、102、104、106、107、109、111、114、116、117、119、121、123、126、128、130、131、133、134、137、140、141、142、146、147、158、159、160、166、167、170、173、174、177、181、182、183、184、185、188、192、194、198、203、204、205、206、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、222、224、227、228、230、232、236、237、238、240、242、243、244、245、246、247、248、249、251、252、253、254、255、256、257、258、259、260、261、262、263、265、268、269、270、271、272、274和275位置處的一個(gè)或多個(gè)其他氨基酸殘基的取代、插入或缺失；其中當(dāng)所述蛋白酶變體包括在對(duì)應(yīng)于103和76位置處的氨基酸殘基的取代時(shí)，還存在在非對(duì)應(yīng)于淀粉分解芽孢桿菌枯草溶菌素的27、99、101、104、107、109、123、128、166、204、206、210、216、217、218、222、260、265或274位的氨基酸殘基位置處的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基位置處的氨基酸殘基的取代。更優(yōu)選，這些變異DNA序列編碼本文描述的蛋白酶變體。
在另一優(yōu)選的實(shí)施方案中，這些變異的DNA序列編碼了對(duì)應(yīng)于淀粉分解芽孢桿菌枯草溶菌素的62、212、230、232、252和257位置的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基的取代、插入或缺失。更優(yōu)選這些變異的DNA序列編碼了本文描述的蛋白酶變體。
盡管在本文確認(rèn)用于修飾的氨基酸殘基是根據(jù)淀粉分解芽孢桿菌應(yīng)用的編號(hào)來(lái)確定(其已成為確定在所有枯草溶菌素中的殘基位置的常規(guī)方法)，但本發(fā)明適用的優(yōu)選的前體DNA序列是如圖3中所示的緩慢芽孢桿菌的DNA序列。
這些重組DNA序列編碼了具有新氨基酸序列的蛋白酶變體，并且一般至少有一種性質(zhì)顯著地不同于由前體蛋白酶DNA序列編碼的酶的同一性質(zhì)。這種性質(zhì)包括蛋白水解活性、基質(zhì)特異性、穩(wěn)定性、變化的pH范圍和/或增強(qiáng)的性能特征。
本文描述了對(duì)應(yīng)于淀粉分解芽孢桿菌枯草溶菌素的103位置的特定取代，同時(shí)結(jié)合以下1、3、4、8、9、10、12、13、16、17、18、19、20、21、22、24、27、33、37、38、42、43、48、55、57、58、61、62、68、72、75、76、77、78、79、86、87、89、97、98、99、101、102、104、106、107、109、111、114、116、117、119、121、123、126、128、130、131、133、134、137、140、141、142、146、147、158、159、160、166、167、170、173、174、177、181、182、183、184、185、188、192、194、198、203、204、205、206、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、222、224、227、228、230、232、236、237、238、240、242、243、244、245、246、247、248、249、251、252、253、254、255、256、257、258、259、260、261、262、263、265、268、269、270、271、272、274和275位置中的一個(gè)或多個(gè)位置的取代；其中當(dāng)所述蛋白酶變體包括在對(duì)應(yīng)于103和76位置處的氨基酸殘基的取代時(shí)，還存在在非對(duì)應(yīng)于27、99、101、104、107、109、123、128、166、204、206、210、216、217、218、222、260、265或274位的氨基酸殘基位置處的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基位置處的氨基酸殘基的取代，其中編號(hào)的位置對(duì)應(yīng)于來(lái)自淀粉分解芽孢桿菌的天然產(chǎn)生的枯草溶菌素或?qū)?yīng)于在其他羰基水解酶或枯草溶菌素(例如緩慢芽孢桿菌枯草溶菌素)中的相當(dāng)氨基酸殘基。另外，本文描述了對(duì)應(yīng)于以下62、212、230、232、252和257位置中的一個(gè)或多個(gè)位置的特定取代，其中編號(hào)的位置對(duì)應(yīng)于來(lái)自淀粉分解芽孢桿菌的天然產(chǎn)生的枯草溶菌素或?qū)?yīng)于在其他羰基水解酶或枯草溶菌素(例如緩慢芽孢桿菌枯草溶菌素)中的相當(dāng)氨基酸殘基。這些氨基酸位置編號(hào)是指編排在圖1中表示的成熟淀粉分解芽孢桿菌枯草溶菌素序列的那些。然而，本發(fā)明不限于使用該特定枯草溶菌素的突變，而是延伸到在“相當(dāng)于”與淀粉分解芽孢桿菌枯草溶菌素中特別確定的殘基位置處含有氨基酸殘基的前體蛋白酶。在本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方案中，前體蛋白酶是緩慢芽孢桿菌枯草溶菌素和在緩慢芽孢桿菌中對(duì)應(yīng)于以上所列的那些相當(dāng)氨基酸殘基處進(jìn)行取代、缺失或插入。
若是同源的(即對(duì)應(yīng)于一級(jí)或三級(jí)結(jié)構(gòu)中的位置)或類(lèi)似于淀粉分解芽孢桿菌枯草溶菌素中的特定殘基或部分特定殘基(即在化學(xué)上具有相同或相似的結(jié)合、反應(yīng)或相互作用的功能)，則前體蛋白酶的殘基(氨基酸)相當(dāng)于淀粉分解芽孢桿菌枯草溶菌素的殘基。
為了確定與一級(jí)結(jié)構(gòu)的同源性，直接將前體蛋白酶的氨基酸序列與淀粉分解芽孢桿菌枯草溶菌素的一級(jí)序列相比，特別是與已知序列的枯草溶菌素中不變的一組已知?dú)埢啾取＠?，本文圖2說(shuō)明了在淀粉分解芽孢桿菌枯草溶菌素和緩慢芽孢桿菌枯草溶菌素之間保守殘基。在排列保守殘基后，允許必要的插入和缺失以保持排列(即避免通過(guò)任意的缺失和插入而消除保守殘基)，確定與淀粉分解芽孢桿菌枯草溶菌素的一級(jí)序列中的特定氨基酸相當(dāng)?shù)臍埢１Ｊ貧埢呐帕袃?yōu)選應(yīng)當(dāng)保守100％這種殘基。然而，有大于75％或少至50％保守殘基的排列也足以確定相當(dāng)殘基。應(yīng)當(dāng)維持催化三分體，Asp32/His64/Ser221的保守。
例如，在圖3中，排列了從淀粉分解芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、地衣形芽孢桿菌(carlsbergensis)和緩慢芽孢桿菌得到的枯草溶菌素的氨基酸序列以提供在氨基酸序列間最大量的同源性。這些序列的比較表明存在許多含在各序列中的保守殘基。在圖2中確定了這些保守殘基(如BPN’和緩慢芽孢桿菌之間)。
因此這些保守殘基可用于確定相應(yīng)的緩慢芽孢桿菌的相當(dāng)氨基酸殘基(PCT公開(kāi)號(hào)WO89/06279，1989年7月13日公布)、本發(fā)明優(yōu)選的蛋白酶前體酶或稱(chēng)為PB92的枯草溶菌素(EP0328299)，其與優(yōu)選的緩慢芽孢桿菌枯草溶菌素高度同源。這些中的一些枯草溶菌素的氨基酸序列被排列在圖3A和3B中，其中列出了產(chǎn)生保守殘基的最大同源性的淀粉分解芽孢桿菌枯草溶菌素的序列?？梢钥闯?，與淀粉分解芽孢桿菌枯草溶菌素相比，在緩慢芽孢桿菌序列中存在許多缺失。因此，例如在其他枯草溶菌素中與淀粉分解芽孢桿菌枯草溶菌素中的Val 165相當(dāng)?shù)陌被?，?duì)于緩慢芽孢桿菌和地衣形芽孢桿菌是異亮氨酸。因此，例如在淀粉分解芽孢桿菌和緩慢芽孢桿菌枯草溶菌素中的+76位置的氨基酸是天冬酰胺(N)。然而，在本發(fā)明蛋白酶變體中，相當(dāng)于淀粉分解芽孢桿菌枯草溶菌素的+76位置的氨基酸被天冬氨酸(D)取代。本發(fā)明中所有氨基酸的縮寫(xiě)和一種字母編號(hào)符合Patentin使用手冊(cè)(GenBank，Mountain View，CA)，1990，第101頁(yè)。
也可通過(guò)測(cè)定前體蛋白酶的三級(jí)結(jié)構(gòu)水平的同源性來(lái)確定“相當(dāng)殘基”，前體蛋白酶的三級(jí)結(jié)構(gòu)是通過(guò)X-射線晶體學(xué)來(lái)測(cè)定。相當(dāng)殘基被定義為以下的那些前體蛋白酶和淀粉分解芽孢桿菌枯草溶菌素的特定氨基酸殘基的兩個(gè)或多個(gè)主鏈原子的原子坐標(biāo)(N對(duì)N，CA對(duì)CA，C對(duì)C和O對(duì)O)在排列之后是在0.13nm內(nèi)，優(yōu)選0.1nm內(nèi)。在最好的模型被定位和放置得到最大覆蓋關(guān)于淀粉分解芽孢桿菌枯草溶菌素的蛋白酶的非氫蛋白質(zhì)原子的原子坐標(biāo)后之后，才獲得排列。最好的模型是晶體學(xué)模型，其在可得到的最高分辨率下給出了實(shí)驗(yàn)衍射數(shù)據(jù)的最低R因子 功能類(lèi)似于淀粉分解芽孢桿菌枯草溶菌素的特定殘基的相當(dāng)殘基被定義為那些下述的前體蛋白酶的氨基酸其可采取一定的構(gòu)型使得它們改變、改善或有助于蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)、結(jié)合基質(zhì)或催化，這是以一種確認(rèn)的方式和歸結(jié)于淀粉分解芽孢桿菌枯草溶菌素的特定殘基的原因。另外，它們是占據(jù)類(lèi)似位置至一定程度的前體蛋白酶的那些殘基(已由X-射線晶體學(xué)得到三級(jí)結(jié)構(gòu))，使得按占據(jù)同源位置為基礎(chǔ)計(jì)，雖然給定殘基的主鏈原子可能不滿足等價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，但該殘基的至少兩個(gè)側(cè)鏈原子的原子坐標(biāo)落在淀粉分解芽孢桿菌枯草溶菌素的相應(yīng)側(cè)鏈原子的0.13nm內(nèi)。淀粉分解芽孢桿菌枯草溶菌素的三維結(jié)構(gòu)的坐標(biāo)在EPO公開(kāi)號(hào)0251446(等同于美國(guó)專(zhuān)利5182204，其公開(kāi)內(nèi)容在本文引用作參考)中給出并可按以上概述用于測(cè)定在三級(jí)結(jié)構(gòu)水平上的相當(dāng)殘基。
確認(rèn)用于取代、插入或缺失的一些殘基是保守殘基，而其他的不是。在殘基不被保守的情況下，取代一個(gè)或多個(gè)氨基酸是受限于這樣的取代其產(chǎn)生的變體的氨基酸序列不對(duì)應(yīng)于自然界中發(fā)現(xiàn)的一種。在保守殘基的情況中，這種取代不應(yīng)當(dāng)導(dǎo)致天然產(chǎn)生的序列。本發(fā)明蛋白酶變體包括成熟的蛋白酶變體形式以及這種蛋白酶變體的原體和前體形式。該前體形式是優(yōu)選的結(jié)構(gòu)，因?yàn)檫@有助于蛋白酶變體的表達(dá)、分泌和成熟。
“原序列”指的是與成熟形式的蛋白酶的N-端部分相連的氨基酸序列，當(dāng)其除去時(shí)，得到了“成熟”形式的蛋白酶狀態(tài)。在自然界中發(fā)現(xiàn)許多蛋白水解酶為翻譯酶原產(chǎn)品，在不存在后翻譯加工下，其按此方式表達(dá)。產(chǎn)生蛋白酶變體的優(yōu)選原序列是淀粉分解芽孢桿菌枯草溶菌素的推定的原序列，但可使用其他的蛋白酶原序列。
“信號(hào)序列”或“前序列”指的是與蛋白酶的N’端部分或蛋白酶原的N-端部分相連的任何氨基酸序列，其可參與成熟或原體形式的蛋白酶的分泌。信號(hào)序列的此定義是一種功能性的定義，意思是包括由蛋白酶基因的N-端部分編碼的所有那些氨基序列，其參與在自然條件下的蛋白酶分泌的實(shí)施。本發(fā)明使用這種序列以實(shí)現(xiàn)本文定義的蛋白酶變體的分泌。一種可能的信號(hào)序列包括來(lái)自枯草芽孢桿菌枯草溶菌素的信號(hào)序列的頭七個(gè)氨基酸殘基并合到來(lái)自緩慢芽孢桿菌(ATCC21536)的枯草溶菌素的信號(hào)序列的其余部分上。
“前體”形式的蛋白酶變體由成熟形式的蛋白酶組成，該成熟形式的蛋白酶具有與蛋白酶的氨基端可操作連接的原序列和與該原序列的氨基端可操作連接的“前”或“信號(hào)”序列。
“表達(dá)載體”指的是含有可操作連接適合的控制序列的DNA序列的DNA構(gòu)建物，所述控制序列能夠?qū)崿F(xiàn)所述DNA在適合宿主中的表達(dá)。這種控制序列包括轉(zhuǎn)錄的啟動(dòng)子、控制這種轉(zhuǎn)錄的選擇性的操縱基因序列、編碼適合的控制轉(zhuǎn)錄和翻譯的mRNA核糖體結(jié)合部位和序列。該載體可以是質(zhì)粒、噬菌?；蚝?jiǎn)單潛在的基因組插入片段。一旦轉(zhuǎn)化至適合的宿主中，該載體可獨(dú)立地復(fù)制和起作用或宿主基因組在某些情況下可整合到基因組本身中。在本說(shuō)明書(shū)中，“質(zhì)?！焙汀拜d體”有時(shí)相互交換使用，因?yàn)橘|(zhì)粒是目前最通常使用的載體形式。然而，本發(fā)明預(yù)期包括這種其他形式的表達(dá)載體，其具有等價(jià)的功能并是或成為現(xiàn)有技術(shù)中已知的。
本發(fā)明使用的“宿主細(xì)胞”一般是原核生物或真核生物宿主，其優(yōu)選用美國(guó)專(zhuān)利RE34606中公開(kāi)的方法控制使用，以使它們不能酶催分泌活性的內(nèi)切蛋白酶。表達(dá)蛋白酶的優(yōu)選的宿主細(xì)胞是芽孢桿菌屬菌株BG2036，在酶催活性的中性蛋白酶和堿性蛋白酶(枯草溶菌素)中其是缺損的。菌株BG2036的構(gòu)建詳細(xì)地描述在美國(guó)專(zhuān)利5264366中。表達(dá)蛋白酶的其他宿主細(xì)胞包括枯草芽孢桿菌168(還描述在美國(guó)專(zhuān)利RE34606和美國(guó)專(zhuān)利5264366中，其公開(kāi)內(nèi)容在本文引用作參考)以及任何適合的芽孢桿菌菌株例如地衣形芽孢桿菌、緩慢芽孢桿菌等。
用重組DNA技術(shù)構(gòu)建的載體轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞。這種被轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞能夠復(fù)制編碼蛋白酶變體或表達(dá)所需的蛋白酶變體的載體。在編碼前體形式的蛋白酶變體的載體的情況下，這種變體當(dāng)被表達(dá)時(shí)一般是從宿主細(xì)胞分泌到宿主細(xì)胞介質(zhì)中。
當(dāng)描述兩個(gè)DNA區(qū)之間的關(guān)系時(shí)，“可操作連接”簡(jiǎn)單地意思是它們彼此間功能相關(guān)。例如，原序列如果作為一種信號(hào)序列的話與肽可操作連接，參與成熟形式的蛋白酶的分泌，多半可能包括信號(hào)序列的斷開(kāi)。啟動(dòng)子如果控制編碼序列的轉(zhuǎn)錄的話，其與編碼序列可操作連接，核糖體結(jié)合部位如果其處的位置允許翻譯的話，其與編碼序列可操作連接。
根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的一般方法可得到編碼天然產(chǎn)生的前體蛋白酶的基因。該方法一般包括合成標(biāo)記的探針，其具有編碼感興趣的蛋白酶區(qū)域的推定的序列，從表達(dá)蛋白酶的有機(jī)體制備基因組文庫(kù)，通過(guò)與探針雜交篩分該文庫(kù)得到感興趣的基因。然后繪制和排序正雜交克隆。
克隆的蛋白酶然后用于轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞，以便表達(dá)該蛋白酶。該蛋白酶基因然后被連接入高拷貝數(shù)目的質(zhì)粒中。該質(zhì)粒在宿主中復(fù)制，在這種意義上其含有質(zhì)粒復(fù)制必要的公知要素一種與所述的基因可操作連接的啟動(dòng)子(其可作為該基因自身同源的啟動(dòng)子提供，如果其被確認(rèn)，即由宿主轉(zhuǎn)換的話)，轉(zhuǎn)錄終止和聚腺苷酸化區(qū)域(對(duì)由宿主從某些真核宿主細(xì)胞中的蛋白酶基因轉(zhuǎn)換的mRNA的穩(wěn)定性是必要的)其是外源的或由蛋白酶基因的內(nèi)源終止區(qū)提供，最好選擇基因例如抗生素抗性基因通過(guò)在含抗生素的介質(zhì)中生長(zhǎng)能夠連續(xù)地培養(yǎng)維持質(zhì)粒感染的宿主細(xì)胞。高拷貝數(shù)目的質(zhì)粒還含有宿主的復(fù)制源，由此使得多數(shù)質(zhì)粒在細(xì)胞質(zhì)中生殖而不受染色體的限制。然而，在本發(fā)明范圍內(nèi)是將多次將蛋白酶基因拷貝整合到宿主基因組中。這被原核生物和真核生物促進(jìn)，它們對(duì)同源重組特別敏感。該基因可以是天然的緩慢芽孢桿菌基因。另外，可生產(chǎn)編碼天然產(chǎn)生的或突變前體蛋白酶的合成基因。在這種方法中，確定了前體蛋白酶的DNA和/或氨基酸序列。在下文合成了多重重疊合成的單鏈DNA片段，其經(jīng)雜交和連接產(chǎn)生編碼前體蛋白酶的合成DNA。合成基因構(gòu)建的實(shí)例在美國(guó)專(zhuān)利5204105的實(shí)施例3中列出，其公開(kāi)內(nèi)容在本文引用作參考。
一旦天然產(chǎn)生或合成前體蛋白酶基因被克隆，就進(jìn)行多種修飾以增加不能合成天然產(chǎn)生的前體蛋白酶的基因的使用。這種修飾包括生產(chǎn)重組蛋白酶如美國(guó)專(zhuān)利RE34606和EPO公開(kāi)號(hào)0251446中所述和生產(chǎn)本文描述的蛋白酶變體。
可使用以下盒式誘變方法來(lái)促進(jìn)本發(fā)明蛋白酶變體的構(gòu)建，但也可使用其他方法。首先，得到編碼蛋白酶的天然產(chǎn)生的基因，其是完整的或部分序列。然后在該序列中尋找到一理想的點(diǎn)，以在被編碼的酶中對(duì)一個(gè)或多個(gè)氨基酸進(jìn)行突變(缺失、插入或取代)。在有用寡核苷酸庫(kù)替代短基因碎片的限制部位存在下，評(píng)價(jià)旁側(cè)所述點(diǎn)位的序列，所述寡核苷酸庫(kù)當(dāng)被表達(dá)時(shí)將編碼各種突變體。這種限制部位優(yōu)選是在蛋白酶基因中的獨(dú)特部位，以便促使基因碎片的替代。然而，可使用在蛋白酶基因中不過(guò)分多余的任何適宜限制部位，條件是由限制消化產(chǎn)生的基因碎片可以適當(dāng)?shù)男蛄兄匮b配。如果在離所選擇的點(diǎn)的適宜距離(從10-15個(gè)核苷酸)內(nèi)的位置處不存在限制部位，則以一定的方式通過(guò)取代基因中的核苷酸而產(chǎn)生這種部位，所述方式是使得讀框或編碼的氨基酸在最終結(jié)構(gòu)中都不改變。為改變其序列以符合所要求序列的基因突變是根據(jù)一般公知的方法由M13引子擴(kuò)展完成。確定適合的旁側(cè)區(qū)域和評(píng)價(jià)達(dá)到兩種適宜的限制部位序列所需的變化，這兩方面工作通常是由多余的遺傳密碼、基因的限制酶圖和大量的不同限制性酶來(lái)完成。注意到若適宜的旁側(cè)限制部位可得到，以上方法的使用僅與不含所述部位的旁側(cè)區(qū)域有關(guān)。
一旦天然產(chǎn)生的DNA或合成DNA被克隆，旁側(cè)被突變的位置的限制部位就用相關(guān)限制性酶消化并且多個(gè)末端互補(bǔ)的寡核苷酸盒被連接到基因中。通過(guò)該方法簡(jiǎn)化了誘變，因?yàn)榭珊铣伤械墓押塑账?，以便具有相同的限制部位，和不需要合成連接物來(lái)產(chǎn)生限制部位。這里使用的蛋白水解活性被定義為每毫克活性酶的肽鍵水解速率。存在測(cè)定蛋白水解活性的許多公知方法(K.M.Kalisz，“微生物蛋白酶”，高等生物化學(xué)工程/生物技術(shù)A.Fiechter等，1988)。除此之外或作為改性的蛋白水解活性的替代，本發(fā)明變異體酶具有許多其他的改性性質(zhì)例如Km，kcat，kcat/Km比例和/或具體改性的基質(zhì)和/或改性的pH活性范圍。這些酶可適合特定的基質(zhì)，所述基質(zhì)例如在制備肽中或?qū)τ谒膺^(guò)程例如洗衣應(yīng)用中是預(yù)期存在的。
本發(fā)明的一方面，目的是保證變體蛋白酶具有與前體蛋白酶相比改變的蛋白水解活性，由于增加了這種活性(數(shù)值上較大)能夠使酶更有效地作用于目標(biāo)基質(zhì)。還有利的是與前體相比具有改變的熱穩(wěn)定性和/或改變的基質(zhì)特異性的變異體酶。在一些情況下，較低的蛋白水解活性可能是理想的，例如當(dāng)?shù)鞍酌傅暮铣苫钚允抢硐霑r(shí)，蛋白水解活性的降低是有用的(如用于合成肽)。一種情況可能希望降低此蛋白水解活性，其能夠破壞這種合成的產(chǎn)品。相反，在一些情況下，可能需要增加變體酶相對(duì)其前體的蛋白水解活性。此外，可能需要增加或降低(改變)變異體的穩(wěn)定性，無(wú)論是堿性或熱穩(wěn)定性。Km，kcat或kcat/Km的增加或降低對(duì)用于測(cè)定這些動(dòng)力學(xué)參數(shù)的基質(zhì)是特定的。
本發(fā)明的另一方面，已確定在對(duì)應(yīng)于淀粉分解芽孢桿菌枯草溶菌素的103位置的取代，同時(shí)結(jié)合以下1、3、4、8、9、10、12、13、16、17、18、19、20、21、22、24、27、33、37、38、42、43、48、55、57、58、61、62、68、72、75、76、77、78、79、86、87、89、97、98、99、101、102、104、106、107、109、111、114、116、117、119、121、123、126、128、130、131、133、134、137、140、141、142、146、147、158、159、160、166、167、170、173、174、177、181、182、183、184、185、188、192、194、198、203、204、205、206、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、222、224、227、228、230、232、236、237、238、240、242、243、244、245、246、247、248、249、251、252、253、254、255、256、257、258、259、260、261、262、263、265、268、269、270、271、272、274和275位置中的一個(gè)或多個(gè)位置的取代對(duì)調(diào)整酶的總穩(wěn)定性和/或蛋白水解活性是重要的。
本發(fā)明的另一方面，已確定在對(duì)應(yīng)于淀粉分解芽孢桿菌枯草溶菌素的以下62、212、230、232、252和257位中的一個(gè)或多個(gè)位置處的取代對(duì)調(diào)整酶的總穩(wěn)定性和/或蛋白水解活性也是重要的。
這些取代優(yōu)選在緩慢芽孢桿菌(重組或天然類(lèi)型的)枯草溶菌素中進(jìn)行，盡管在任何芽孢桿菌蛋白酶中也可以進(jìn)行取代。
根據(jù)變體蛋白酶得到的篩分結(jié)果，注意到在淀粉分解芽孢桿菌枯草溶菌素中的突變對(duì)于這些酶的蛋白水解活性、性能和/或穩(wěn)定性和對(duì)這種變體酶的清洗或洗滌性能都是重要的。
制備本發(fā)明洗滌劑和清洗組合物中使用的酶的方法和步驟是已知的并披露在PCT申請(qǐng)?zhí)朩O95/10615中。
本發(fā)明酶具有似胰蛋白酶的特異性。即本發(fā)明酶水解蛋白質(zhì)是通過(guò)優(yōu)先斷開(kāi)帶電荷的氨基酸殘基的肽鍵，更具體地是例如精氨酸和賴(lài)氨酸的殘基，而不優(yōu)先斷開(kāi)疏水氨基酸殘基的肽鍵，更具體地是苯基丙氨酸、色氨酸和酪氨酸。具有后者情況的酶具有似胰凝乳蛋白酶的特異性。以上所述的基質(zhì)特異性由酶對(duì)兩種合成基質(zhì)的作用來(lái)說(shuō)明。具有似胰蛋白酶特異性的蛋白酶要優(yōu)先于合成基質(zhì)sucAAPF-pNA水解合成基質(zhì)bVGR-pNA。相反，似胰凝乳蛋白酶的蛋白酶水解前者要比后者更快。對(duì)于本發(fā)明目的而言，使用以下方法定義本發(fā)明蛋白酶的似胰蛋白酶的特異性。
將pH為10和在溫度25℃下的固定量的甘氨酸緩沖液加入標(biāo)準(zhǔn)10ml試管中。將要測(cè)試的0.5ppm活性酶加入該試管中。將每ml緩沖溶液大約1.25mg合成基質(zhì)加入試管中。使該混合物在25℃下培養(yǎng)15分鐘。培養(yǎng)階段完成時(shí)，向混合物中以每ml緩沖液0.5mg量加入酶抑制劑，PMSF。在410nm波長(zhǎng)處讀取混合物的吸光度或OD值。該吸光度則表示酶對(duì)合成基質(zhì)的活性。吸光度越大，對(duì)基質(zhì)的活性水平越高。
為了測(cè)定各酶的特異性，可將對(duì)兩種合成基質(zhì)蛋白質(zhì)的吸光度轉(zhuǎn)化成特異性比值。對(duì)于本發(fā)明目的，由下式確定特異性比值[對(duì)sAAPF-pNA的活性]/[對(duì)bVGR-pNA的活性]則具有比值低于約10，更優(yōu)選低于約5，最優(yōu)選低于約2.5的酶被認(rèn)為證明有似胰蛋白酶的活性。
這種變體一般具有至少一種性質(zhì)不同于得到變體的氨基酸序列的蛋白酶前體的同一種性質(zhì)。
本發(fā)明的一方面是用于處理織物、器皿、餐具、廚具、炊具和其他硬表面底物的組合物，例如洗滌劑和清洗組合物，其包括一種或多種本發(fā)明的變體蛋白酶。含蛋白酶的組合物可用于處理例如絲綢或羊毛以及其他類(lèi)型的織物，如公開(kāi)文獻(xiàn)例如RD216034，EP134267，US4533359和EP344259中所述；和處理器皿、餐具、廚具、炊具和其他硬表面底物如公開(kāi)文獻(xiàn)例如美國(guó)專(zhuān)利5478742，US5346822，US5679630和US5677272中所述。
II.淀粉酶變體-用于本發(fā)明的淀粉酶變體包括，但不限于描述在W095/26397和W096/23873(Novo)中的淀粉酶。這些酶在清洗組合物中的摻入量，按該清洗組合物的重量計(jì)，為從約0.0001％，優(yōu)選從約0.00018％，更優(yōu)選從約0.00024％，最優(yōu)選從約0.05％至約0.1％，優(yōu)選至約0.060％，更優(yōu)選至約0.048％純酶。
淀粉酶變體優(yōu)選選自α-淀粉酶變體。
用于本發(fā)明的適合的α-淀粉酶變體包括，但不限于以下的α-淀粉酶(i)α-淀粉酶，特征在于由Phadebasα-淀粉酶活性實(shí)驗(yàn)測(cè)定，其在溫度25℃-55℃和pH值為8-10下，比活度比Termamyl的比活度高至少25％；和/或(ii)根據(jù)(i)的α-淀粉酶，其包含在SEQ ID No.1中所示的氨基酸序列或與SEQ ID No.1中所示的氨基酸序列至少80％同源的α-淀粉酶，和/或(iii)根據(jù)(i)的α-淀粉酶，其包含在SEQ ID No.2中所示的氨基酸序列或與SEQ ID No.2中所示的氨基酸序列至少80％同源的α-淀粉酶，和/或(iv)根據(jù)(i)的α-淀粉酶，其包含以下N-端氨基酸序列His-His-Asn-Gly-Thr-Asn-Gly-Thr-Met-Met-Gln-Tyr-Phe-Glu-Trp-Tyr-Leu-Pro-Asn-Asp(SEQ ID No.3)或與N-端中所示的氨基酸序列(SEQ ID No.3)至少80％同源的α-淀粉酶，和/或(v)根據(jù)(i-iv)的α-淀粉酶，其中該α-淀粉酶可由嗜堿的芽孢桿菌種得到，和/或(vi)根據(jù)(v)的α-淀粉酶，其中該淀粉酶可由NCIB 12289、NCIB12512、NCIB12513和DSM935中的任何菌株得到，和/或(vii)α-淀粉酶，其與具有分別對(duì)應(yīng)于SEQ ID No.1、ID No.2或ID No.3的氨基酸序列的α-淀粉酶產(chǎn)生的抗體表現(xiàn)出陽(yáng)性免疫交叉反應(yīng)活性，和/或(viii)母體α-淀粉酶變體，其中母體α-淀粉酶(1)具有分別在SEQ ID No.1、ID No.2或ID No.4中所示的一種氨基酸序列，或(2)表現(xiàn)出與一個(gè)或多個(gè)所述的氨基酸序列至少80％同源，和/或與具有一個(gè)所述氨基酸序列的α-淀粉酶產(chǎn)生的抗體表現(xiàn)出免疫交叉反應(yīng)活性，和/或由一種DNA序列編碼，該DNA序列與編碼具有一個(gè)所述氨基酸序列的α-淀粉酶的DNA序列相同的探針雜交，該變體中(A)所述母體α-淀粉酶中缺失至少一個(gè)氨基酸殘基；和/或(B)所述母體α-淀粉酶的至少一個(gè)氨基酸殘基被不同的氨基酸殘基代替；和/或(C)相對(duì)所述的母體α-淀粉酶，插入至少一個(gè)氨基酸殘基；所述變體具有α-淀粉酶活性并相對(duì)所述母體α-淀粉酶表現(xiàn)出至少一種以下性質(zhì)提高了熱穩(wěn)定性、提高了抗氧化的穩(wěn)定性；降低了對(duì)Ca離子的依賴(lài)性；在中性至相對(duì)高pH值下提高了穩(wěn)定性和/或α-淀粉分解活性；在相對(duì)高溫下提高了α-淀粉分解活性；和提高或降低了等電點(diǎn)(pI)，以便使α-淀粉酶變體的pI值更好地與介質(zhì)的pH匹配。
若比較通過(guò)例如由Lipman和Pearson在科學(xué)227，1985，第1435頁(yè)中所述的一種算法預(yù)制的各氨基酸序列顯示了有X％同一性，則認(rèn)為多肽與母體淀粉酶有X％同源。
在本發(fā)明中，術(shù)語(yǔ)“由…可得”意思不僅表示由芽孢桿菌屬菌株產(chǎn)生的淀粉酶，而且表示由從芽孢桿菌屬菌株中分離出的DNA序列編碼的淀粉酶和在用DNA序列轉(zhuǎn)化的宿主有機(jī)體中產(chǎn)生的淀粉酶。
III.蛋白酶/淀粉酶組合-在本發(fā)明高度優(yōu)選的實(shí)施方案中，盡管上述的任何一種或多種蛋白酶變體可與上述的一種或多種淀粉酶變體組合，但蛋白酶變體包含一組取代101/103/104/159/232/236/245/248/252，更高度優(yōu)選的一組取代是101G/103A/104I/232V/236H/245R/248D/252K。
盡管蛋白酶變體和淀粉酶變體可以任何ppm計(jì)的比例存在于清洗組合物中，但在本發(fā)明清洗組合物中，蛋白酶變體與淀粉酶變體的ppm優(yōu)選比例為約1∶20-20∶1，優(yōu)選約1∶10-10∶1，更優(yōu)選約1∶3-3∶1。
清洗組合物除了上文所述的一種或多種蛋白酶變體外，本發(fā)明清洗組合物還包含優(yōu)選與蛋白酶變體相容的一種或多種清洗輔助物質(zhì)。本文使用的術(shù)語(yǔ)“清洗輔助物質(zhì)”意思是選擇用于理想的特定類(lèi)型的清洗組合物和產(chǎn)品形式(例如液體；顆粒；粉狀；條；膏狀；噴霧劑；片；凝膠；泡沫體組合物)的任何液體、固體或氣態(tài)材料，該材料還優(yōu)選與組合物中使用的蛋白酶是相容的。顆粒組合物還可以是“濃縮”形式，液體組合物還可以是“濃縮”形式。
清洗輔助物質(zhì)的具體選擇可容易地由考慮被清洗的表面、物品或織物和用于使用中的清洗條件(例如洗滌劑使用經(jīng)過(guò)的)的所需組合物形式來(lái)確定。本文所述術(shù)語(yǔ)“相容”意思是清洗組合物材料不降低蛋白酶的蛋白水解活性至蛋白酶在正常的使用條件下不是預(yù)期有效的程度。適合的清洗輔助物質(zhì)的實(shí)例包括，但不限于表面活性劑、助洗劑、漂白劑、漂白活化劑、漂白催化劑、其他酶、酶穩(wěn)定體系、螯合劑、熒光增白劑、污垢解脫聚合物、染料轉(zhuǎn)移抑制劑、分散劑、抑泡劑、染料、香料、著色劑、填料鹽、水溶助長(zhǎng)劑、光活化劑、熒光劑、織物調(diào)理劑、可水解的表面活性劑、防腐劑、抗氧化劑、防縮劑、抗皺劑、殺菌劑、殺真菌劑、色粒、銀器護(hù)理劑、防晦暗和/或防腐蝕劑、堿源、增溶劑、載體、加工助劑、顏料和pH控制劑，其描述在美國(guó)專(zhuān)利5705464、5710115、5698504、5695679、5686014和5646101中。具體的清洗組合物物質(zhì)在下文詳細(xì)舉例說(shuō)明。
若清洗輔助物質(zhì)與清洗組合物中的蛋白酶變體不相容，則可使用適當(dāng)?shù)姆椒?，保持清洗輔助物質(zhì)和蛋白酶變體隔離(彼此不相互接觸)，直至兩種組分的組合是適當(dāng)?shù)?。適合的方法可以是本領(lǐng)域任何公知的方法，例如膠封、包膠、成片、物理分離等。
優(yōu)選在適用于清洗需要去除蛋白質(zhì)類(lèi)污垢的各種表面的組合物中包括有效量的上述一種或多種蛋白酶變體。這種清洗組合物包括用于清洗硬表面的洗滌劑組合物，形式不限(例如液體和顆粒)；用于清洗織物的洗滌劑組合物，形式不限(例如顆粒、液體和條制品等)；洗餐具組合物(形式不限并包括自動(dòng)洗餐具用顆粒和液體)；口腔清洗組合物，形式不限(例如潔齒劑、牙膏和漱口制劑)；和假牙清洗組合物，形式不限(例如液體、片)。
這里所述的“有效量的蛋白酶變體”是指需要獲得在特定清洗組合物中所需的酶活性的上述蛋白酶變體的數(shù)量。這種有效量容易由本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)確定，其基于許多因素，例如所用的特定變體、清洗應(yīng)用、清洗組合物的特定組成和是否需要液體或干燥(例如顆粒、條)組合物等。
按清洗組合物的重量計(jì)，優(yōu)選清洗組合物包含從約0.0001％，優(yōu)選從約0.001％，更優(yōu)選從約0.01％至約10％，優(yōu)選至約1％，更優(yōu)選至約0.1％的一種或多種本發(fā)明蛋白酶變體。還優(yōu)選本發(fā)明蛋白酶變體在組合物中存在足夠量，以提供每100g組合物的活性蛋白酶mg與由洗滌水溶液中的任何過(guò)氧酸得到的理論有效O2(“AvO2”)ppm之比，在本文稱(chēng)為酶與漂白劑之比(E/B之比)，為約1∶1-20∶1。在下文進(jìn)一步詳細(xì)地討論其中可使用本發(fā)明蛋白酶變體的各種清洗組合物的幾個(gè)實(shí)例。另外，清洗組合物按該組合物的重量計(jì)可包括約1％-99.9％清洗輔助物質(zhì)。
本發(fā)明清洗組合物可以是“織物清洗組合物”或“非織物清洗組合物”形式。
這里所述的“織物清洗組合物”包括手洗和機(jī)器洗衣洗滌劑組合物，包括洗衣添加劑組合物和適用于浸泡和/或預(yù)處理臟織物的組合物。
這里所述的“非織物清洗組合物”包括硬表面清洗組合物、洗餐具洗滌劑組合物、口腔清洗組合物、假牙清洗組合物和個(gè)人清洗組合物。
當(dāng)本發(fā)明清洗組合物配制成適用于洗衣機(jī)洗滌方法的組合物時(shí)，本發(fā)明組合物優(yōu)選含有表面活性劑和助洗劑兩類(lèi)化合物和其他的一種或多種清洗輔助物質(zhì)，其優(yōu)選選自有機(jī)聚合物、漂白劑、附加酶、抑泡劑、分散劑、鈣皂分散劑、污垢懸浮和抗再沉積劑和腐蝕抑制劑。洗衣組合物還可含有柔軟劑，其作為其他的清洗輔助物質(zhì)。
本發(fā)明組合物還可作為固體或液體形式的洗滌劑添加劑產(chǎn)品。這種添加劑產(chǎn)品用于補(bǔ)充或促進(jìn)常規(guī)洗滌劑組合物的性能并可在清洗過(guò)程的任何階段加入。
當(dāng)配制成用于手洗餐具方法的組合物時(shí)，本發(fā)明組合物優(yōu)選含有表面活性劑和優(yōu)選含有其它的清洗輔助物質(zhì)，其選自有機(jī)聚合物、增泡劑、II族的金屬離子、溶劑、水溶助長(zhǎng)劑和附加酶。
如果需要的話，本發(fā)明洗衣洗滌劑組合物在20℃下測(cè)定的密度為400-1200g/l，優(yōu)選500-950g/l組合物。
本發(fā)明清洗組合物的“密實(shí)”形式由密度和就組成而言，由無(wú)機(jī)填料鹽的量得以最好地反映。無(wú)機(jī)填料鹽是粉狀洗滌劑組合物的常規(guī)組分。在常規(guī)洗滌劑組合物中，填料鹽是以大量存在，一般為總組合物重量的17-35％。在密實(shí)組合物中，填料鹽的含量不超過(guò)總組合物的15％，優(yōu)選不超過(guò)10％，最優(yōu)選不超過(guò)組合物重量的5％。無(wú)機(jī)填料鹽，例如在本發(fā)明組合物中意思是選自堿金屬和堿土金屬硫酸鹽和氯化物。優(yōu)選的填料鹽是硫酸鈉。
根據(jù)本發(fā)明的液體清洗組合物還可以是“濃縮形式”，在這種情況下，根據(jù)本發(fā)明的液體清洗組合物比常規(guī)液體洗滌劑將含有更低量的水。一般濃縮液體清洗組合物的水含量，按該清洗組合物重量計(jì)，優(yōu)選少于40％，更優(yōu)選少于30％，最優(yōu)選少于20％。清洗輔助物質(zhì)表面活性劑體系-包括在由本發(fā)明制得的完整配方的清洗組合物中的去污表面活性劑占清洗組合物重量的至少0.01％，優(yōu)選至少約0.1％，更優(yōu)選至少約0.5％，最優(yōu)選至少約1％-60％，更優(yōu)選至約35％，最優(yōu)選至約30％，這取決于所用的特定表面活性劑和所要求的效果。
去污表面活性劑可以是非離子型、陰離子型、兩性型、兩性離子型、陽(yáng)離子型、半極性非離子型的表面活性劑和其混合物，其非限制性實(shí)例公開(kāi)在美國(guó)專(zhuān)利5707950和5576282中。優(yōu)選的洗滌劑和清洗組合物包含陰離子去污表面活性劑或陰離子表面活性劑與其他表面活性劑，特別是非離子表面活性劑的混合物。
適用于本發(fā)明的表面活性劑的非限制實(shí)例包括常規(guī)C11-C18烷基苯磺酸鹽和伯、仲和無(wú)規(guī)烷基硫酸鹽，C10-C18烷基烷氧基硫酸鹽，C10-C18烷基多苷和它們相應(yīng)的硫酸化多苷，C12-C18α-磺化的脂肪酸酯，C12-C18烷基和烷基酚烷氧基化物(特別是乙氧基化物和混合的乙氧基/丙氧基化物)，C12-C18甜菜堿和磺基甜菜堿，C10-C18氧化胺等。其它常規(guī)適用的表面活性劑列在標(biāo)準(zhǔn)教科書(shū)中。
優(yōu)選配制表面活性劑與組合物中存在的酶組分相容。在液體或凝膠組合物中，最優(yōu)選配制表面活性劑使得其促進(jìn)或至少不降低這些組合物中的任何酶的穩(wěn)定性。
非離子表面活性劑-烷基酚的聚氧乙烯、聚氧丙烯和聚氧丁烯的縮合物適合用作本發(fā)明表面活性劑體系中的非離子型表面活性劑，優(yōu)選的是聚氧乙烯縮合物。商業(yè)上可購(gòu)得的這種類(lèi)型的非離子表面活性劑包括IgepalTMC0-630，是由GAF Corporation出售的；和TritonTMX-45，X-114，X-100和X-102，它們都是由Rohm&Haas公司出售的。這些表面活性劑通常稱(chēng)為烷基酚烷氧基化物(例如烷基酚乙氧基化物)。
伯和仲脂肪醇與約1至約25摩爾環(huán)氧乙烷的縮合產(chǎn)物適合用作本發(fā)明非離子表面活性劑體系中的非離子表面活性劑。商業(yè)上可購(gòu)得的這種類(lèi)型的非離子表面活性劑包括TergitolTM15-S-9(C11-C15直鏈醇與9摩爾環(huán)氧乙烷的縮合產(chǎn)物)、TergitolTM24-L-6 NMW(C12-C14伯醇與6摩爾環(huán)氧乙烷的縮合產(chǎn)物，并具有窄的分子量分布)，兩種均由Union Carbide Corporation出售；由Shell Chemical Company出售的NeodolTM45-9(C14-C15直鏈醇與9摩爾環(huán)氧乙烷的縮合產(chǎn)物)，NeodolTM23-3(C12-C13直鏈醇與3.0摩爾環(huán)氧乙烷的縮合產(chǎn)物)，NeodolTM45-7(C14-C15直鏈醇與7摩爾環(huán)氧乙烷的縮合產(chǎn)物)，NeodolTM45-5(C14-C15直鏈醇與5摩爾環(huán)氧乙烷的縮合產(chǎn)物)；由Procter&GambleCompany出售的KyroTMEOB(C13-C15醇與9摩爾環(huán)氧乙烷的縮合產(chǎn)物)；和由Hoechst出售的Genapol LA030或LA 050(C12-C14醇與3或5摩爾環(huán)氧乙烷的縮合產(chǎn)物)。這些產(chǎn)物優(yōu)選的HLB范圍是8-11，最優(yōu)選8-10。
還適合用作本發(fā)明表面活性劑體系中的非離子表面活性劑的是在美國(guó)專(zhuān)利US 4565647中公開(kāi)的烷基多糖。
優(yōu)選的烷基多苷具有式R2O(CnH2nO)t(糖基)x其中R2選自烷基、烷基苯基、羥烷基、羥烷基苯基和其混合物，其中烷基含有約10至約18個(gè)碳原子，優(yōu)選約12至約14個(gè)碳原子；n是2或3，優(yōu)選2；t是0至約10，優(yōu)選0；x是約1.3至約10，優(yōu)選約1.3至約3，最優(yōu)選約1.3至約2.7。
環(huán)氧乙烷與通過(guò)環(huán)氧丙烷與丙二醇縮合形成的疏水基的縮合產(chǎn)物也適合用作本發(fā)明附加的非離子表面活性劑體系。這種類(lèi)型化合物的實(shí)例包括一些商業(yè)上可購(gòu)得的P1urafacTMLF404和PluronicTM表面活性劑，它由BASF出售。
也適合用作本發(fā)明非離子表面活性劑體系中的非離子表面活性劑的是環(huán)氧乙烷與由環(huán)氧丙烷和乙二胺反應(yīng)得到的產(chǎn)物進(jìn)行縮合的產(chǎn)物。這種類(lèi)型非離子表面活性劑的實(shí)例包括一些商業(yè)上可購(gòu)得的TetronicTM化合物，由BASF出售。
優(yōu)選的用作本發(fā)明表面活性劑體系中的非離子表面活性劑的是烷基酚的聚氧乙烯縮合物、伯和仲脂肪醇與約1至約25摩爾環(huán)氧乙烷的縮合產(chǎn)物、烷基多糖和其混合物。最優(yōu)選的是具有3至15個(gè)乙氧基的C8-C14烷基酚乙氧基化物和具有2至10個(gè)乙氧基的C8-C18醇乙氧基化物(優(yōu)選C10平均)，和其混合物。
高度優(yōu)選的非離子表面活性劑是式R2-C(O)-N(R1)-Z的多羥基脂肪酸酰胺表面活性劑，其中R1是H，或R1是C1-4烴基、2-羥基乙基、2-羥基丙基或其混合物，R2是C5-31烴基，Z是具有直接連有至少3個(gè)羥基的直鏈烴基鏈的多羥基烴基，或其烷氧基化的衍生物。優(yōu)選R1是甲基，R2是直鏈C11-15烷基或C16-18烷基或鏈烯基例如椰子油烷基或其混合物，Z是由在還原胺化反應(yīng)中的還原糖例如葡萄糖、果糖、麥芽糖、乳糖衍生得到。
陰離子表面活性劑-適合使用的陰離子表面活性劑是直鏈烷基苯磺酸鹽、烷基酯磺酸鹽表面活性劑，包括按照“美國(guó)油化學(xué)家學(xué)會(huì)雜志”(“The Journal of the American Oil Chemists Society”)，52(1975)，第323-329頁(yè)的方法用氣態(tài)SO3磺化的直鏈C8-C20羧酸(即脂肪酸)酯。適合的原料包括天然的脂肪類(lèi)物質(zhì)如由牛油、棕櫚油等衍生的物質(zhì)。
特別用于洗衣應(yīng)用的優(yōu)選的烷基酯磺酸鹽表面活性劑包括具有以下結(jié)構(gòu)式的烷基酯磺酸鹽表面活性劑 其中R3是C8-C20烴基，優(yōu)選烷基，或其組合，R4是C1-C6烴基，優(yōu)選烷基，或其組合，M是陽(yáng)離子，其與烷基酯磺酸根形成水溶性鹽。適合的形成鹽陽(yáng)離子包括金屬例如鈉、鉀和鋰，以及取代或未取代的銨陽(yáng)離子例如單乙醇胺、二乙醇胺和三乙醇胺。優(yōu)選R3是C10-C16烷基，R4是甲基、乙基或異丙基。特別優(yōu)選的是甲基酯磺酸鹽其中R3是C10-C16烷基。
其它適合的陰離子表面活性劑包括烷基硫酸鹽表面活性劑，其是式ROSO3M的水溶性鹽或酸，其中R優(yōu)選是C10-C24烴基，優(yōu)選烷基或具有C10-C20烷基部分的羥烷基，更優(yōu)選C12-C18烷基或羥烷基，M是H或陽(yáng)離子。一般對(duì)于較低的洗滌溫度(例如低于約50℃)，優(yōu)選C12-C16烷基鏈，而對(duì)較高的洗滌溫度(例如高于約50℃)，優(yōu)選C16-C18烷基鏈。
其它可用于洗滌目的的陰離子表面活性劑包括皂的鹽、C8-C22伯或仲烷烴磺酸鹽、C8-C24鏈烯烴磺酸鹽、通過(guò)磺化堿土金屬檸檬酸鹽的熱解產(chǎn)物制得的磺化的多羧酸，例如在英國(guó)專(zhuān)利說(shuō)明書(shū)No.1,082,179中所描述的；C8-C24烷基聚乙二醇醚硫酸鹽(含有多至10摩爾氧乙烯)；烷基甘油磺酸鹽、脂肪?；视突撬猁}、脂肪油?；视土蛩猁}、烷基酚氧乙烯醚硫酸鹽、石蠟烴磺酸鹽、烷基磷酸鹽、羥乙磺酸鹽例如酰基羥乙磺酸鹽、N-?；；撬猁}、烷基琥珀酰胺酸鹽和磺基琥珀酸鹽、磺基琥珀酸單酯(特別是飽和和不飽和的C12-C18單酯)和磺基琥珀酸二酯(特別是飽和和不飽和的C6-C12二酯)、?；“彼猁}、烷基多糖的硫酸鹽例如烷基多葡萄糖苷硫酸鹽(下文描述的非離子性的非硫酸化的化合物)、支鏈的伯烷基硫酸鹽和烷基聚乙氧基羧酸鹽例如那些具有式RO(CH2CH2O)kCH2COO-M+的鹽，其中R是C8-C22烷基，k為1至10的整數(shù)，M是形成可溶性鹽的陽(yáng)離子。樹(shù)脂酸和氫化樹(shù)脂酸也是適用的，例如松香、氫化松香，以及存在于松漿油或由松漿油衍生的樹(shù)脂酸和氫化樹(shù)脂酸。
其它例子被描述在“表面活性劑和洗滌劑”(第1和II卷，由Schwartz，Perry及Berch編著)書(shū)中。各種這樣的表面活性劑也一般性地公開(kāi)在1975年12月30日授予Laughlin等人的美國(guó)專(zhuān)利US3,929,678，第23欄58行至29欄23行中(本文引用作參考)。
高度優(yōu)選的陰離子表面活性劑包括烷基烷氧基化硫酸鹽表面活性劑，其是式R0(A)mS03M的水溶性鹽或酸，其中R是未取代的C10-C24烷基或具有C10-C24烷基部分的羥烷基，優(yōu)選C12-C20烷基或羥烷基，更優(yōu)選C12-C18烷基或羥烷基，A是乙氧基或丙氧基單元，m值大于0，一般在約0.5至約6之間，更優(yōu)選在約0.5至約3之間，M是H或陽(yáng)離子，其可以是例如金屬陽(yáng)離子(例如鈉、鉀、鋰、鈣、鎂等)、銨或取代的銨陽(yáng)離子。烷基乙氧基化硫酸鹽以及烷基丙氧基化硫酸鹽是本發(fā)明預(yù)期使用的。取代的銨陽(yáng)離子的具體實(shí)例包括甲基、二甲基、三甲基銨陽(yáng)離子和季銨陽(yáng)離子例如四甲基銨和二甲基哌啶鎓陽(yáng)離子，以及那些由烷基胺例如乙胺、二乙胺、三乙胺和其混合物衍生的陽(yáng)離子等。示例性的表面活性劑有C12-C18烷基聚乙氧基化物(1.0)硫酸鹽(C12-C18E(1.0)M)，C12-C18烷基聚乙氧基化物(2.25)硫酸鹽(C12-C18E(2.25)M)，C12-C18烷基聚乙氧基化物(3.0)硫酸鹽(C12-C18E(3.0)M)和C12-C18烷基聚乙氧基化物(4.0)硫酸鹽(C12-C18E(4.0)M)，其中M適宜選自鈉和鉀。
當(dāng)含有它們時(shí)，本發(fā)明清洗組合物典型地含有從約1％，優(yōu)選從約3％至約40％，優(yōu)選約20％重量的這種陰離子表面活性劑。
陽(yáng)離子表面活性劑-適合用于本發(fā)明清洗組合物中的陽(yáng)離子去污表面活性劑是那些具有一個(gè)長(zhǎng)鏈烴基的表面活性劑。這種陽(yáng)離子型表面活性劑的實(shí)例包括銨鹽表面活性劑例如烷基三甲基鹵化銨，以及具有下式的那些表面活性劑[R2(OR3)y][R4(OR3)y]2R5N+X-，其中R2是在其烷基鏈中含有約8至約18個(gè)碳原子的烷基或烷基芐基，每個(gè)R3選自-CH2CH2-、-CH2CH(CH3)-、-CH2CH(CH2OH)-、-CH2CH2CH2-和其混合物；每個(gè)R4選自C1-C4烷基、C1-C4羥烷基、由連接兩個(gè)R4基團(tuán)形成的芐基環(huán)結(jié)構(gòu)、-CH2CHOH-CHOHCOR6CHOHCH2OH，其中R6是分子量小于約1000的任何己糖或己糖聚合物基團(tuán)，以及氫(當(dāng)y不為0時(shí))；R5是同R4相同的基團(tuán)，或者是烷基鏈，其中R2加R5的碳原子總數(shù)不多于約18個(gè)；每個(gè)y是0至約10，并且y值總和為0至約15；X是任何一種相容的陰離子。
適用于本發(fā)明組合物的高度優(yōu)選的陽(yáng)離子型表面活性劑是水溶性季銨鹽化合物，其具有式(i)R1R2R3R4N+X-，其中R1是C8-C16烷基，每個(gè)R2、R3和R4獨(dú)立地為C1-C4烷基、C1-C4羥烷基、芐基和-(C2H4O)xH，其中x值為2至5，X是陰離子。R2、R3、R4中是芐基的應(yīng)當(dāng)不能多于一個(gè)。R1的烷基鏈長(zhǎng)優(yōu)選是C12-C15，特別是，該烷基是由椰子或棕櫚仁脂肪衍生的鏈長(zhǎng)的混合物，或者是通過(guò)鏈烯烴或羰基合成醇合成得到的。R2、R3和R4優(yōu)選的基團(tuán)是甲基和羥乙基，并且陰離子X(jué)可選自鹵化物、甲基硫酸根、乙酸根和磷酸根離子。
用于本發(fā)明的具有式(i)的適合季銨鹽化合物的實(shí)例包括，但不限于椰子油三甲基氯化銨或溴化銨；椰子油甲基二羥乙基氯化銨或溴化銨；癸基三乙基氯化銨；癸基二甲基羥乙基氯化銨或溴化銨；C12-C15二甲基羥乙基氯化銨或溴化銨；椰子油二甲基羥乙基氯化銨或溴化銨；肉豆蔻基三甲基甲基硫酸銨；月桂基二甲基芐基氯化銨或溴化銨；月桂基二甲基(氧乙烯)4氯化銨或溴化銨；膽堿酯(式(i)的化合物，其中R1是CH2-CH2-O-C(O)-C12-14烷基，和R2、R3、R4是甲基)；和二烷基咪唑啉[(i)]。
本發(fā)明有用的其它陽(yáng)離子表面活性劑還描述在1980年10月14日授予的Cambre的美國(guó)專(zhuān)利US4,228,044和歐洲專(zhuān)利申請(qǐng)EP000,224中。
當(dāng)包含它們時(shí)，本發(fā)明清洗組合物典型地含有約0.2％，優(yōu)選從約1％至約25％，優(yōu)選至約8％重量這種陽(yáng)離子表面活性劑。
兩性表面活性劑-兩性表面活性劑也適用于本發(fā)明清洗組合物中，其實(shí)例描述在美國(guó)專(zhuān)利3929678中。
當(dāng)包含它們時(shí)，本發(fā)明清洗組合物典型地含有約0.2％，優(yōu)選從約1％至約15％，優(yōu)選至約10％重量這種兩性表面活性劑。
兩性離子表面活性劑-兩性離子表面活性劑也適用于清洗組合物中，其實(shí)例描述在美國(guó)專(zhuān)利3929678中。
當(dāng)包含它們時(shí)，本發(fā)明清洗組合物典型地含有約0.2％，優(yōu)選從約1％至約15％，優(yōu)選至約10％重量這種兩性離子表面活性劑。
半極性非離子表面活性劑-半極性非離子表面活性劑是特殊的一類(lèi)非離子表面活性劑，其包括具有下式的水溶性氧化胺 其中R3是含有約8至約22個(gè)碳原子的烷基、羥烷基或烷基苯基、或它們的混合物；R4是含有約2至約3個(gè)碳原子的亞烷基或羥亞烷基或它們的混合物；x為0至約3；每個(gè)R5是含有約1至約3個(gè)碳原子的烷基或羥烷基或含有約1至約3個(gè)氧乙烯基團(tuán)的聚氧乙烯基團(tuán)。(R5基團(tuán)可彼此連接，例如通過(guò)氧或氮原子連接形成環(huán)狀結(jié)構(gòu))；水溶性氧化膦，其含有一個(gè)約10-18個(gè)碳原子的烷基部分和選自含有約1-3個(gè)碳原子的烷基和羥烷基的兩個(gè)殘基部分；和水溶性亞砜，其含有一個(gè)約10-18個(gè)碳原子的烷基部分和選自具有約1-3個(gè)碳原子的烷基和羥烷基的一個(gè)殘基部分。
氧化胺表面活性劑特別是包括C10-C18烷基二甲基氧化胺和C8-C12烷氧基乙基二羥乙基氧化胺。
當(dāng)包含它們時(shí)，本發(fā)明清洗組合物典型地含有0.2％，優(yōu)選從約1％至約15％，優(yōu)選至約10％重量這種半極性非離子表面活性劑。
輔助表面活性劑-本發(fā)明清洗組合物還可包含選自伯或叔胺的輔助表面活性劑。用于本發(fā)明的適合的伯胺包括根據(jù)式R1NH2的胺，其中R1是C6-C12，優(yōu)選C6-C10烷基鏈，或R4X(CH2)n，X是-O-，-C(O)NH-或-NH-，R4是C6-C12烷基鏈，n是1-5，優(yōu)選3。R1烷基鏈可以是直鏈或支鏈，并且可間隔多至12個(gè)，優(yōu)選少于5個(gè)氧乙烯部分。
根據(jù)本文上式，優(yōu)選的胺是正烷基胺。用于本發(fā)明適合的胺可選自1-己胺、1-辛胺、1-癸胺和月桂胺。其它優(yōu)選的伯胺包括C8-C10氧丙胺、辛氧基丙基胺、2-乙基己基氧丙基胺、月桂基酰氨基丙基胺和酰氨基丙基胺。用于本發(fā)明組合物最優(yōu)選的胺是1-己胺、1-辛胺、1-癸胺、1-十二烷基胺。特別適合的是正十二烷基二甲基胺和二羥乙基椰子油烷基胺和7摩爾乙氧基化的油胺、月桂基酰氨基丙基胺和椰子油酰氨基丙基胺。
LFNIs-在本發(fā)明自動(dòng)洗餐具組合物(ADD)中特別優(yōu)選的表面活性劑是低泡非離子表面活性劑(LFNI)，其描述在美國(guó)專(zhuān)利5705464和5710115中。LFNI的含量可為0.01％-約10％重量，優(yōu)選約0.1％-10％，最優(yōu)選約0.25％-4％。ADDs中最典型使用LFNIs，這是由于它們賦予ADD產(chǎn)品改善的使水成片的作用(特別是從玻璃上)。它們還包含下文進(jìn)一步說(shuō)明的已知能使自動(dòng)洗餐具中碰到的食物污垢消泡的非硅氧烷、非磷酸鹽聚合材料。
優(yōu)選的LFNIs包括非離子烷氧基化表面活性劑，特別是由伯醇衍生的乙氧基化物和它們與更復(fù)雜的表面活性劑的混合體，例如聚氧丙烯/聚氧乙烯/聚氧丙烯(PO/EO/PO)逆嵌段聚合物，其描述在美國(guó)專(zhuān)利5705464和5710115中。
還可使用的LFNIs包括從Olin Corp。購(gòu)得的那些POLY-TERGENTSLF18非離子表面活性劑，和具有上文討論的熔點(diǎn)性質(zhì)的任何可生物降解的LFNI。
這些和其它非離子表面活性劑是現(xiàn)有技術(shù)公知的，其更詳細(xì)地描述在Kirk Othmer’s的化學(xué)工藝百科全書(shū)(Encyclopedia of ChemicalTechnology)，第3版，第22卷，第360-379頁(yè)，“表面活性劑和去污酶”中，其在本文引用作參考。
漂白體系-本發(fā)明清洗組合物優(yōu)選包含漂白體系。漂白體系一般包含“漂白劑”(過(guò)氧化氫源)和“引發(fā)劑”或“催化劑”。當(dāng)存在時(shí)，漂白劑一般占組合物重量的從約1％，優(yōu)選從約5％至約30％，優(yōu)選至約20％。如果存在的話，漂白活化劑的含量一般為包含漂白劑加上漂白活化劑的漂白組合物重量的從約0.1％，優(yōu)選從約0.5％至約60％，優(yōu)選至約40％。
漂白劑-過(guò)氧化氫源詳細(xì)地描述在本文引用的Kirk Othmer的化學(xué)工藝百科全書(shū)，第4版(1992，John Wiley&Sons)，第4卷，第271-300頁(yè)“漂白劑(綜述)”，包括各種形式的過(guò)硼酸鈉和過(guò)碳酸鈉，包括各種涂覆和改性的形式。
本發(fā)明使用的優(yōu)選的過(guò)氧化氫源可以來(lái)自任何適宜的來(lái)源，包括過(guò)氧化氫本身。本發(fā)明可使用例如，過(guò)硼酸鹽，例如過(guò)硼酸鈉(任何水合物，但優(yōu)選一水合物或四水合物)、碳酸鈉過(guò)氧水合物或等同的過(guò)碳酸鹽、焦磷酸鈉過(guò)氧水合物、尿素過(guò)氧水合物或過(guò)氧化鈉。還適合的是有效氧的來(lái)源例如過(guò)硫酸鹽漂白劑(例如OXONE，由DuPont生產(chǎn))。過(guò)硼酸鈉一水合物和過(guò)碳酸鈉是特別優(yōu)選的。還可使用任何適宜的過(guò)氧化氫源的混合物。
優(yōu)選的過(guò)碳酸鹽漂白劑包括具有平均顆粒度在約500至約1000微米范圍的干燥顆粒，小于約200微米的所述顆粒不超過(guò)約10％(重量)，大于約1250微米的所述顆粒不超過(guò)約10％(重量)。過(guò)碳酸鹽可以選擇性地用硅酸鹽、硼酸鹽或水溶性表面活性劑涂覆。過(guò)碳酸鹽可以從各種商業(yè)來(lái)源如FMC，Solvay和Tokai Denka得到。
本發(fā)明組合物還可包含作為漂白劑的氯型漂白物質(zhì)。這種試劑是本領(lǐng)域已知的并包括例如二氯異氰脲酸鈉(“NaDCC”)。然而，氯型漂白劑在包含酶的組合物中不太優(yōu)選。
(a)漂白活化劑-優(yōu)選，組合物中的過(guò)氧漂白劑組分與活化劑(過(guò)酸前體)一起配制。按組合物的重量計(jì)，活化劑的含量為從約0.01％，優(yōu)選從約O.5％，更優(yōu)選從約1％至約15％，優(yōu)選至約10％，更優(yōu)選至約8％。優(yōu)選的漂白活化劑選自四乙酰乙二胺(TAED)、苯甲酰己內(nèi)酰胺(BzCl)、4-硝基苯甲酰己內(nèi)酰胺、3-氯代苯甲酰己內(nèi)酰胺、苯甲酰氧基苯磺酸鹽(BOBS)、壬酰氧基苯磺酸鹽(NOBS)、苯甲酸苯酯(PhBz)、癸酰氧基苯磺酸鹽(C10-OBS)、苯甲酰戊內(nèi)酰胺(BZVL)、辛酰氧基苯磺酸鹽(C8-OBS)、可過(guò)水解的酯和它們的混合物，最優(yōu)選苯甲酰己內(nèi)酰胺和苯甲酰戊內(nèi)酰胺。在pH約8-9.5范圍的特別優(yōu)選的漂白活化劑是那些選擇具有OBS或VL離去基團(tuán)的活化劑。
優(yōu)選的疏水漂白活化劑包括，但不限于壬酰氧基苯磺酸鹽(NOBS)、4-[N-(壬?；?氨基己?；鮙苯磺酸鈉(NACA-OBS)，其實(shí)例描述在美國(guó)專(zhuān)利5523434中，十二烷?；趸交撬猁}(LOBS或C12-0BS)、10-十一碳烯酰基氧基苯磺酸鹽(UDOBS或C11-OBS，在10-位置有不飽和度)和癸酰基氧基苯甲酸(DOBA)。
優(yōu)選的漂白活化劑描述在1997年12月16日授權(quán)的Christie等的美國(guó)專(zhuān)利5698504；1997年12月9日授權(quán)的Christie等的美國(guó)專(zhuān)利5695679；1997年11月11日授權(quán)的Willey等的美國(guó)專(zhuān)利5686401；1997年11月11日授權(quán)的Hartshorn等的美國(guó)專(zhuān)利5686014；1995年4月11日授權(quán)的Willey等的美國(guó)專(zhuān)利5405412；1995年4月11日授權(quán)的Willey等美國(guó)專(zhuān)利5405413；1992年7月14日授權(quán)的Mitchel等的美國(guó)專(zhuān)利5130045；和1983年11月1日授權(quán)的Chung等的美國(guó)專(zhuān)利4412934，和未結(jié)案的美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)序號(hào)08/709072，08/064564，所有這些在本文引用作參考。
本發(fā)明中，過(guò)氧漂白化合物(按AvO)與漂白活化劑的摩爾比一般至少為1∶1，優(yōu)選約20∶1，更優(yōu)選約10∶1至約1∶1，優(yōu)選至約3∶1。
還可包括四元取代的漂白活化劑。本發(fā)明清洗組合物優(yōu)選包含四元取代的漂白活化劑(QSBA)或四元取代的過(guò)酸(QSP)；更優(yōu)選前者。優(yōu)選的QSBA結(jié)構(gòu)還被描述在1997年11月11日授權(quán)的Willey等的美國(guó)專(zhuān)利5686015；1997年8月5日授權(quán)的Taylor等的美國(guó)專(zhuān)利5654421；1995年10月24日授權(quán)的Gosselink等的美國(guó)專(zhuān)利5460747；1996年12月17日授權(quán)的Miracle等的美國(guó)專(zhuān)利5584888和1996年11月26日授權(quán)的Taylor等的美國(guó)專(zhuān)利5578136，所有這些在本文引用作參考。
本發(fā)明有用的高度優(yōu)選的漂白活化劑是酰胺-取代的類(lèi)型，如美國(guó)專(zhuān)利5698504，5695679和5686014中所述，其在本文引用作參考。這種漂白活化劑的優(yōu)選實(shí)例包括(6-辛酰氨基己?；?氧苯磺酸鹽，(6-壬酰氨基己?；?氧苯磺酸鹽，(6-癸酰氨基己?；?氧苯磺酸鹽，和它們的混合物。
公開(kāi)在美國(guó)專(zhuān)利5698504，5695679和5686014(其在本文引用作參考)和1990年10月30日授權(quán)的Hodge等的美國(guó)專(zhuān)利4966723中的其他有用的活化劑包括苯并噁嗪型活化劑，例如C6H4環(huán)被稠合在-C(O)OC(R1)＝N-部分的1，2-位置。
根據(jù)活化劑和確切的應(yīng)用，可由在使用中pH為約6-約13，優(yōu)選約9.O-約10.5的漂白體系得到良好的漂白結(jié)果。一般，例如，具有吸電子部分的活化劑是用于近中性或中性以下pH范圍。堿和緩沖劑可用于保證這種pH。
如描述在美國(guó)專(zhuān)利5698504，5695679和5686014(其在本文引用作參考)中的?；鶅?nèi)酰胺活化劑是本發(fā)明非常有用的，尤其是?；簝?nèi)酰胺(參見(jiàn)例如WO94-28102A)和酰基戊內(nèi)酰胺(參見(jiàn)1996年4月2日授權(quán)的Willey等的US5503639，其在本文引用作參考)。
(b)有機(jī)過(guò)氧化物，特別是二?；^(guò)氧化物這些化合物詳細(xì)地描述在Kirk Othmer的化學(xué)工藝百科全書(shū)(Encylopedia of Chemical Technology)，第17卷，John Wiley andSons，1982，第27-90頁(yè)，特別是第63-72頁(yè)，所有這些被本文引用作參考。如果使用二?；^(guò)氧化物的話，優(yōu)選其是對(duì)去斑/成膜產(chǎn)生最小不利影響的一種。
(c)含金屬的漂白催化劑本發(fā)明組合物和方法使用了用于漂白組合物中有效的含金屬的漂白催化劑。優(yōu)選的是含錳和鈷的漂白催化劑。
一種類(lèi)型的含金屬的漂白催化劑是一種催化劑體系，其包含具有所定義的漂白催化活性的過(guò)渡金屬陽(yáng)離子例如銅、鐵、鈦、釕、鎢、鉬或錳陽(yáng)離子；具有少的或不具有漂白催化活性的輔助金屬陽(yáng)離子例如鋅或鋁陽(yáng)離子，和對(duì)催化和輔助金屬陽(yáng)離子具有定義的穩(wěn)定常數(shù)的螯合劑，特別是乙二胺四乙酸、乙二胺四(亞甲基膦酸)和其水溶性鹽。這類(lèi)催化劑公開(kāi)在1982年2月2日授權(quán)的Bragg的美國(guó)專(zhuān)利4,430,243中。
錳金屬配合物如果需要的話，本發(fā)明組合物可以用錳化合物來(lái)催化。該類(lèi)化合物和其用量是本領(lǐng)域公知的，包括例如在美國(guó)專(zhuān)利US5576282、US5246621，US5244594，US5194416，US5114606和歐洲專(zhuān)利申請(qǐng)公開(kāi)號(hào)EP549271A1，EP549272A1，EP54444OA2和EP544490A1中公開(kāi)的錳基催化劑。這些催化劑的優(yōu)選實(shí)例包括MnTV2(u-O)3(1，4，7-三甲基-1，4，7-三氮雜環(huán)壬烷)2(PF6)2，MnIII2(u-O)1(u-OAc)2(1，4，7-三甲基-1，4，7-三氮雜環(huán)壬烷)2(ClO4)2，MnTV4(u-O)6(1，4，7-三氮雜環(huán)壬烷)4(ClO4)4，MnIIIMnIV4(u-O)1(u-OAc)2(1，4，7-三甲基-1，4，7-三氮雜環(huán)壬烷)2(ClO4)3，MnIV(1，4，7-三甲基-1，4，7-三氮雜環(huán)壬烷)(OCH3)3(PF6)，和它們的混合物。其他金屬基漂白催化劑包括在美國(guó)專(zhuān)利US4430243、US5114611中公開(kāi)的那些。使用帶有各種配合物配體的錳用于提高漂白力也在下列美國(guó)專(zhuān)利中被報(bào)道US4728455，US5284944，US5246612，US5256779，US5280117，US5274147，US5153161和US5227084。
鈷金屬配合物-用于本發(fā)明的鈷漂白催化劑是已知的，其描述在例如美國(guó)專(zhuān)利5597936；5595967和5703030和M.L.Tobe，“過(guò)渡金屬配合物的堿水解”，高等無(wú)機(jī)生物無(wú)機(jī)機(jī)理(Adv.Inorg.Bioinorg.Mech.)，(1983)，2，第1-94頁(yè)中。適合于本發(fā)明的最優(yōu)選的鈷催化劑是具有式[Co(NH3)5OAc]Ty的鈷五胺乙酸鹽，其中“OAc”表示乙酸根部分，“Ty”是陰離子，特別是氯化鈷五胺乙酸[Co(NH3)5OAc]Cl2；以及[Co(NH3)5OAc](OAc)2；[Co(NH3)5OAc](PF6)2；[Co(NH3)5OAc](S04)；[Co(NH3)5OAc](BF4)2；和[Co(NH3)5OAc](NO3)2(本文“PAC”)。
這些鈷催化劑容易用已知的方法制備，例如在美國(guó)專(zhuān)利5597936；5595967和5703030；在Tobe文章和其中引用的參考文獻(xiàn)；在美國(guó)專(zhuān)利US4,810,410；J.Chem.Ed.(1989)，66(12)，1043-1045；無(wú)機(jī)化合物的合成和表征，W.L.Jolly(Prentice-Hall；1970)，第461-463頁(yè)；無(wú)機(jī)化學(xué)，18，1497-1502(1979〕；無(wú)機(jī)化學(xué)，21，2881-2885(1982)；無(wú)機(jī)化學(xué)，18，2023-2025(1979)；無(wú)機(jī)合成，173-176(1960)；和物理化學(xué)雜志，56，22-25(1952)中講述的。
大多環(huán)剛性配位體的過(guò)渡金屬配合物-本發(fā)明組合物還適宜包括作為漂白催化劑的大多環(huán)剛性配位體的過(guò)渡金屬配合物。短語(yǔ)“大多環(huán)剛性配位體”在下文討論中有時(shí)縮寫(xiě)為“MRL”。所用量是催化有效量，適宜為約1ppb或更多，例如高至約99.9％，更典型地是約0.001ppm或更多，優(yōu)選約0.05ppm-500ppm(其中“ppb”表示十億分之一重量份，“ppm”表示百萬(wàn)分之一重量份)。
適合的過(guò)渡金屬例如錳，在下文被例舉說(shuō)明。“大多環(huán)”意思是MRL既是大環(huán)又是多環(huán)。“多環(huán)”意思是至少雙環(huán)。這里所述的術(shù)語(yǔ)“剛性”包括“具有超結(jié)構(gòu)”和“交聯(lián)”?！皠傂浴北欢x為撓曲性轉(zhuǎn)變是受限的參見(jiàn)D.H Bush.化學(xué)綜述(Chemical Reviews)(1993)，93，847-860，其在本文引用作參考。更具體地講，本文所述的“剛性”意思是MRL必須比否則相同的(在主環(huán)中具有相同的環(huán)尺寸和類(lèi)型和原子數(shù)目)但缺少M(fèi)RL中存在的超結(jié)構(gòu)(特別是連接部分，或優(yōu)選交聯(lián)部分)的大環(huán)(“母體大環(huán)”)有可測(cè)定的更強(qiáng)的剛性。在測(cè)定具有和不具有超結(jié)構(gòu)的大環(huán)的對(duì)比剛性中，本專(zhuān)業(yè)人員使用大環(huán)的游離形式(不是結(jié)合金屬的形式)。已知可使用剛性來(lái)比較大環(huán)；測(cè)定、測(cè)量或比較剛性的適合方法包括計(jì)算方法(參見(jiàn)例如Zimmer，.化學(xué)綜述(Chemical RevieWS)(1995)，95(38)，2629-2648或Hancock等，無(wú)機(jī)Chimica Acta，(1989)，164，73-84)。
本發(fā)明優(yōu)選的MRL是特殊類(lèi)型的交聯(lián)的超剛性配位體?！敖宦?lián)”非限制性地說(shuō)明在以下的1.11中。在1.11中，交聯(lián)是-CH2CH2-部分，其橋連該示例結(jié)構(gòu)中的N1和N8。通過(guò)對(duì)比，“同側(cè)的”橋連，例如若橫跨1.11中的N1和N12加入的一個(gè)橋連，其不能充分地構(gòu)成“交聯(lián)”，因此不是優(yōu)選的。
剛性配位體配合物中的適合金屬包括Mn(II)、Mn(III)、Mn(IV)、Mn(V)、Fe(II)、Fe(III)、Fe(IV)、Co(I)、Co(II)、Co(III)、Ni(I)、Ni(II)、Ni(III)、Cu(I)、Cu(II)、Cu(III)、Cr(II)、Cr(III)、Cr(IV)、Cr(V)、Cr(VI)、V(III)、V(IV)、V(V)、Mo(IV)、Mo(V)、Mo(VI)、W(IV)、W(V)、W(VI)、Pd(II)、Ru(II)、Ru(III)和Ru(IV)。本發(fā)明過(guò)渡金屬漂白催化劑中優(yōu)選的過(guò)渡金屬包括錳、鐵和鉻。
更一般地是，本發(fā)明MRL(和相應(yīng)的過(guò)渡金屬催化劑)適宜包含(a)至少一個(gè)包含4個(gè)或更多個(gè)雜原子的主要的大環(huán)；和(b)能夠增強(qiáng)大環(huán)剛性的共價(jià)連接的非金屬超結(jié)構(gòu)，優(yōu)選選自(i)橋連超結(jié)構(gòu)，例如連接部分；(ii)交聯(lián)超結(jié)構(gòu)，例如交聯(lián)的連接部分；和(iii)它們的組合。
本文所述的術(shù)語(yǔ)“超結(jié)構(gòu)”如在Busch等的文章中所定義，參見(jiàn)例如Busch在“化學(xué)綜述”中的文章。
本文優(yōu)選的超結(jié)構(gòu)不僅增強(qiáng)了母體大環(huán)的剛性，而且還有助于大環(huán)的折疊，使得其與縫隙處的金屬配位。適合的超結(jié)構(gòu)明顯可以是簡(jiǎn)單的，例如可使用諸如以下圖1和圖2中說(shuō)明的任何連接部分 圖1其中n是整數(shù)，例如為2-8，優(yōu)選低于6，一般為2-4，或 圖2其中m和n是約1-8的整數(shù)，更優(yōu)選1-3；Z是N或CH；T是相容的取代基，例如H、烷基、三烷基銨、鹵素、硝基、磺酸根等。在1.10中的芳環(huán)可被飽和環(huán)代替，其中連接環(huán)的Z中的原子可含N、O、S或C。
適合的MRL還非限制性地由以下化合物說(shuō)明 圖3這是根據(jù)本發(fā)明的MRL，其是高度優(yōu)選的交聯(lián)的甲基取代的(所有氮原子是叔氮)cyclam的衍生物。正規(guī)地講，使用推廣的von Baeyer系統(tǒng)，該配位體的名稱(chēng)為5，12-二-甲基-1，5，8，12-四氮雜雙環(huán)[6.6.2]十六烷。參見(jiàn)“有機(jī)化合物IUPAC命名法介紹指南1993”，(A Guideto IUPAC Nomenclature of Organic CompoundsRecommendations1993)，R.Panico，W.H.Powell和J-C Richer(編輯)，Blackwell科技出版社，波士頓，1993；特別參見(jiàn)R-2.4.2.1部分。
本發(fā)明組合物適用的大環(huán)剛性配位體的過(guò)渡金屬漂白催化劑一般可包括符合本發(fā)明定義的公知化合物，以及更優(yōu)選一些大量的特意指定用于本發(fā)明洗衣或清洗應(yīng)用的新化合物，由以下進(jìn)行非限制說(shuō)明二氯-5，12-二甲基-1，5，8，12，-四氮雜雙環(huán)[6.6.2]十六烷錳(II)；二水合-5，12-二甲基-1，5，8，12-四氮雜雙環(huán)[6.6.2]十六烷錳(II)六氟磷酸鹽；水合-羥基-5，12-二甲基-1，5，8，12-四氮雜雙環(huán)[6.6.2]十六烷錳(III)六氟磷酸鹽；二水合-5，12-二甲基-1，5，8，12-四氮雜雙環(huán)[6.6.2]十六烷錳(II)四氟硼酸鹽；二氯-5，12-二甲基-1，5，8，12-四氮雜雙環(huán)[6.6.2]十六烷錳(III)六氟磷酸鹽；二氯-5，12-二-正丁基-1，5，8，12-四氮雜雙環(huán)[6.6.2]十六烷錳(II)；二氯-5，12-二芐基-1，5，8，12-四氮雜雙環(huán)[6.6.2]十六烷錳(II)；二氯-5-正丁基-12-甲基-1，5，8，12-四氮雜雙環(huán)[6.6.2]十六烷錳(II)；二氯-5-正辛基-12-甲基-1，5，8，12-四氮雜雙環(huán)[6.6.2]十六烷錳(II)；二氯-5-正丁基-12-甲基-1，5，8，12-四氮雜雙環(huán)[6.6.2]十六烷錳(II)。
在實(shí)施中，不受限制，本發(fā)明組合物和清洗方法可被調(diào)整以在含水洗滌介質(zhì)中提供約至少萬(wàn)萬(wàn)分之一份的活性漂白催化劑物質(zhì)，優(yōu)選在洗滌水溶液中提供約0.01ppm至約25ppm，更優(yōu)選約0.05ppm至約10ppm，最優(yōu)選約0.1ppm至約5ppm漂白催化劑物質(zhì).在自動(dòng)洗滌過(guò)程的洗滌水溶液中為了達(dá)到這種含量，本發(fā)明典型的組合物按該漂白組合物重量計(jì)將包含約0.0005％至約0.2％，更優(yōu)選約0.004％至約0.08％漂白催化劑，特別是錳或鈷催化劑。
(d)其他漂白催化劑-本發(fā)明組合物可包含一種或多種其他漂白催化劑。優(yōu)選的漂白催化劑是兩性離子漂白催化劑，其描述在美國(guó)專(zhuān)利5576282中，特別是3-(3，4-二氫異喹啉鎓)丙磺酸鹽。其他漂白催化劑包括陽(yáng)離子漂白催化劑，其描述在美國(guó)專(zhuān)利5360569、5442066、5478357、5370826、5482515、5550256和WO95/13351，WO95/13352和WO95/13353中。
還適合作為漂白劑的是預(yù)制過(guò)酸，例如苯二甲酰亞氨基-過(guò)氧己酸(“PAP”)。參見(jiàn)例如美國(guó)專(zhuān)利5487818，5310934，5246620，5279757和5132431。
任選的去污酶-本發(fā)明洗滌劑和清洗組合物還可任選地含有一種或多種類(lèi)型的洗滌劑酶。這種酶可包括其他蛋白酶、淀粉酶、纖維素酶和脂肪酶。這種物質(zhì)是現(xiàn)有技術(shù)公知的并可按商品名商購(gòu)。它們可以懸浮液、“顆?！?marumes)或“小球”的形式摻入本發(fā)明非水基液體洗滌劑組合物中。另一類(lèi)適合的酶包括酶在非離子表面活性劑中的漿料形式，例如由Novo Nordisk按商品名“SL”銷(xiāo)售的酶或由NovoNordisk按商品名“LDP”銷(xiāo)售的微囊包封的酶。適合的酶和其用量描述在美國(guó)專(zhuān)利5576282、5705464和5710115中。
對(duì)用于本發(fā)明，酶以常規(guī)的酶小球的形式加入本發(fā)明組合物中是特別優(yōu)選的。這種小球一般尺寸在約100-1000微米，更優(yōu)選在約200-800微米，并且將懸浮在組合物的整個(gè)非水液相中。本發(fā)明組合物中的酶小球與其它酶形式相比，就隨時(shí)間推移保持酶活性而論，發(fā)現(xiàn)表現(xiàn)出特別理想的酶穩(wěn)定性。因此，使用酶小球的組合物不需要含有常規(guī)的酶穩(wěn)定劑，例如當(dāng)酶摻入含水液體洗滌劑中時(shí)必須通常使用的酶穩(wěn)定劑。
然而，加入本發(fā)明組合物中的酶可以是顆粒，優(yōu)選T-顆粒形式。
本文中使用的“去污酶”指在洗衣、硬表面清洗或個(gè)人護(hù)理洗滌劑組合物中具有洗滌、去污漬或其它有益效果的任何酶。優(yōu)選的洗滌酶是水解酶如蛋白酶，淀粉酶和脂肪酶。優(yōu)選的用于洗衣用途的酶包括，但不局限于，蛋白酶，纖維素酶，脂肪酶和過(guò)氧化物酶。用于自動(dòng)洗餐具高度優(yōu)選的是淀粉酶和/或蛋白酶，包括通常商業(yè)可購(gòu)得的類(lèi)型和改進(jìn)的類(lèi)型，雖然越來(lái)越多的漂白劑經(jīng)過(guò)不斷的改進(jìn)是可相容的，但仍保留一定程度的漂白劑失活敏感度。
適合的酶的實(shí)例包括，但不限于半纖維素酶、過(guò)氧化物酶、蛋白酶、纖維素酶、木聚糖酶、脂肪酶、磷脂酶、酯酶、角質(zhì)酶、果膠酶、角蛋白酶、還原酶、氧化酶、酚氧化酶、脂氧合酶、木質(zhì)素酶、支鏈淀粉酶、單寧酶、戊聚糖酶、蘋(píng)果酸酶(malanase)、β-葡聚糖酶、阿拉伯糖苷酶、透明質(zhì)酶、軟骨素酶、漆酶和公知的淀粉酶，或它們的混合物。
這種適合的酶的實(shí)例公開(kāi)在美國(guó)專(zhuān)利US5705464、5710115、5576282、5728671和5707950中。
本發(fā)明使用的纖維素酶包括細(xì)菌和霉菌纖維素酶。優(yōu)選它們具有最佳pH范圍5-12和比活性高于50CEVU(纖維素粘度單位)。適宜的纖維素酶公開(kāi)在美國(guó)專(zhuān)利US4,435,307，J61078384和WO96/02653中，其公開(kāi)了分別由Humicola insolens、木霉屬、草根霉屬和孢子絲菌屬產(chǎn)生的霉菌纖維素酶。EP739982描述了從新的桿菌種分離出的纖維素酶。適宜的纖維素酶還公開(kāi)在GB-A-2075028；GB-A-2095275；DE-OS-2247832和WO95/26398中。
這種纖維素酶的實(shí)例是由Humicola insolens(灰色腐質(zhì)霉變異的thermoidea)菌株，特別是腐質(zhì)霉屬菌株DSM1800產(chǎn)生的纖維素酶。其它適合的纖維素酶是來(lái)源于Humicola insolens、具有分子量約50KDa、等電點(diǎn)為5.5并含有415個(gè)氨基酸的纖維素酶，和由腐質(zhì)霉屬insolens，DSM1800衍生的具有纖維素酶活性的～43kD的內(nèi)葡聚糖酶；優(yōu)選的內(nèi)葡聚糖酶組分具有在WO91/17243中公開(kāi)的氨基酸序列。還適合的纖維素酶是由Trichoderma longibrachiatum得到的EGIII纖維素酶，其描述在Genencor的WO94/21801中。特別適合的纖維素酶是具有護(hù)理顏色作用的纖維素酶。這種纖維素酶的實(shí)例是在1991年11月6日(Novo)提交的歐洲專(zhuān)利申請(qǐng)No.91202879.2中描述的那些纖維素酶。Carezyme和Celluzyme(Novo Nordisk A/S)是特別適用的。還參見(jiàn)WO 91/17244和WO 91/21801。具有護(hù)理織物和/或清洗性質(zhì)的其它適合的纖維素酶描述在WO 96/34092、WO 96/17994和WO 95/24471中。
纖維素酶，當(dāng)存在時(shí)，一般在清洗組合物中的摻入量為清洗組合物重量的0.0001％-2％純酶。
過(guò)氧化物酶是與氧源，例如過(guò)碳酸鹽、過(guò)硼酸鹽、過(guò)硫酸鹽、過(guò)氧化氫等以及與作為增強(qiáng)漂白劑分子的酚類(lèi)基質(zhì)結(jié)合使用。它們用于“漂白溶液”，即抑制在洗滌過(guò)程中從底物上脫落的染料或顏料遷移至洗滌溶液中的其它底物上。過(guò)氧化物酶在本文技術(shù)領(lǐng)域中是已知的，包括例如，辣根過(guò)氧化物酶、木質(zhì)素酶和鹵代過(guò)氧化物酶，如氯代和溴代過(guò)氧化物酶。適合的過(guò)氧化物酶和含有過(guò)氧化物酶的洗滌劑組合物公開(kāi)在，例如美國(guó)專(zhuān)利5705464、5710115、5576282、5728671和5707950、PCT國(guó)際申請(qǐng)WO 89/099813、WO89/09813和1991年11月6日申請(qǐng)的歐洲專(zhuān)利申請(qǐng)No.91202882.6和1996年2月20日申請(qǐng)的EP96870013.8中。還適合的是漆酶。
增效劑一般占總組合物重量的0.1％-5％。優(yōu)選的增效劑為取代的吩噻嗪和吩噁嗪10-吩噻嗪丙酸(PPT)、10-乙基吩噻嗪-4-羧酸(EPC)、10-吩噁嗪丙酸(POP)和10-甲基吩噁嗪(如WO94/12621所述)和取代的丁香酸酯(C3-C5取代的烷基丁香酸酯)和苯酚。過(guò)碳酸鈉或過(guò)硼酸鈉是優(yōu)選的過(guò)氧化氫源。
以清洗組合物重量計(jì)，清洗組合物中所述過(guò)氧化物酶的摻入量通常為0.0001-2％純酶。
可使用酶催體系作為漂白劑。還可通過(guò)加入能在洗滌和/或漂清過(guò)程的開(kāi)始或過(guò)程中產(chǎn)生過(guò)氧化氫的酶催體系(即酶和隨之的基質(zhì))產(chǎn)生過(guò)氧化氫。這種酶催體系公開(kāi)在1991年10月9日申請(qǐng)的歐洲專(zhuān)利申請(qǐng)91202655.6中。
本發(fā)明清洗組合物可包括的其它優(yōu)選酶包括脂肪酶。洗滌劑可使用的適宜脂肪酶包括由假單胞菌屬族中的微生物，如司徒茨氏(stutzeri)假單胞菌ATCC 19.154產(chǎn)生的那些脂肪酶，如公開(kāi)在英國(guó)專(zhuān)利1372034中。適合的脂肪酶包括由微生物熒光假單胞菌IAM1057產(chǎn)生的與脂肪酶的抗體表現(xiàn)出陽(yáng)性免疫交叉反應(yīng)的那些脂肪酶。這種脂肪酶可由Amano Pharmacetical有限公司，Nagoya，日本買(mǎi)到，商品名為脂肪酶P“Amano”，下文稱(chēng)之為“Amano-P”。其他適合的商業(yè)脂肪酶包括Amano-CES，由粘稠色桿菌(Chromobacter viscosum)得到的脂酶，例如由Toyo Jozo公司，Tagata，日本得到的粘稠色桿菌變異的lipolyticum NRRLB 3673，；由U.S.Biochemical公司，U.S.A.和荷蘭的Disoynth公司得到的粘稠色桿菌脂酶和由唐菖蒲假單胞菌(Pseudomonas gladioli)得到的脂酶。特別適合的脂肪酶是諸如M1LipaseR和LipomaxR(Gist-Brocades)和LipolaseR和LipolaseUltraLR(Novo)的脂酶，已發(fā)現(xiàn)當(dāng)它們與本發(fā)明組合物組合使用時(shí)是非常有效的。還適合的是由Novo Nordisk描述在EP258068、WO92/05249和WO 95/22615和由Unilever描述在WO 94/03578、WO 95/35381和WO 96/00292中的脂解酶。
還適合的酶是角質(zhì)酶[EC 3.1.1.50]，其被認(rèn)為是一種特殊種類(lèi)的脂肪酶，稱(chēng)為不需要界面活化的脂肪酶。在清洗組合物中加入角質(zhì)酶已被描述在例如WO-A-88/09367(Genencor)；WO 90/09446(PlantGenetic System)和WO 94/14963和WO 94/14964(Unilever)中。
脂肪酶和/或角質(zhì)酶，當(dāng)存在時(shí)，一般在清洗組合物中的摻入量為清洗組合物重量的0.0001％-2％純酶。
除了上述的脂肪酶外，磷脂酶也可摻入本發(fā)明清洗組合物中。適合的磷脂酶的非限制實(shí)例包括EC 3.1.1.32磷脂酶A1；EC3.1.1.4磷脂酶A2；EC3.1.1.5溶血磷脂酶；EC3.1.4.3磷脂酶C；EC3.1.4.4磷脂酶D?？缮藤?gòu)的磷脂酶包括從丹麥的Novo Nordisk A/S購(gòu)得的LECITASE和從Sigma購(gòu)得的磷脂酶A2。當(dāng)磷脂酶包括在本發(fā)明組合物中時(shí)，優(yōu)選還包括淀粉酶。不希望受理論的限制，相信磷脂酶和淀粉酶的結(jié)合作用顯著地去除了污漬，特別是對(duì)油脂/油性的淀粉和濃色的污漬和污垢。優(yōu)選，磷脂酶和淀粉酶，當(dāng)存在時(shí)，是以重量比為4500∶1-1∶5，更優(yōu)選50∶1-1∶1的純酶摻入本發(fā)明組合物中。
適宜的蛋白酶為枯草溶菌素，它是由枯草芽胞桿菌和地衣型芽胞桿菌的特定菌株得到(枯草溶菌素BPN和BPN’)。一種適合的蛋白酶是由桿菌菌株得到，它在pH8-12范圍內(nèi)具有最大活性，它由丹麥的NovoIndustries A/S公司，下文中稱(chēng)為“Novo”，開(kāi)發(fā)并以ESPERASE銷(xiāo)售。這種酶和類(lèi)似酶的制備描述在Novo公司的英國(guó)專(zhuān)利說(shuō)明書(shū)GB1243784中。蛋白水解酶還包括改性的細(xì)菌絲氨酸蛋白酶，例如在1987年4月28日提交的歐洲專(zhuān)利申請(qǐng)序列號(hào)為87303761.8中(特別是第17、24和98頁(yè))描述的那些，其在本文被稱(chēng)為“蛋白酶B”，和在1986年10月29日公開(kāi)的Venegas的歐洲專(zhuān)利申請(qǐng)199404中描述的那些，它們是改性的細(xì)菌絲氨酸蛋白水解酶，在本文被稱(chēng)為“蛋白酶A”。適合的是在本文被稱(chēng)為“蛋白酶C”的蛋白酶，它們是由桿菌得到的堿性絲氨酸蛋白酶的變體，其中賴(lài)氨酸取代27位置的精氨酸，酪氨酸取代104位置的纈氨酸、絲氨酸取代123位置的天冬酰胺，和丙氨酸取代274位置的蘇氨酸。蛋白酶C描述在EP909159584中，其相應(yīng)于1991年5月16日公開(kāi)的WO91/06637。遺傳改性的變體，特別是蛋白酶C的變體也包括在本發(fā)明中。
被稱(chēng)為“蛋白酶D”的優(yōu)選蛋白酶是如描述在美國(guó)專(zhuān)利5677272和WO95/10591中的羰基水解酶。還適合的是描述在WO95/10591中的蛋白酶的羰基水解酶變體，其氨基酸序列是通過(guò)取代位于前體酶中對(duì)應(yīng)于+210位置處的多個(gè)氨基酸殘基，同時(shí)結(jié)合取代以下位置處的一個(gè)或多個(gè)殘基得到的+33，+62，+67，+76，+100，+101，+103，+104，+107，+128，+129，+130，+132，+135，+156，+158，+164，+166，+167，+170，+209，+215，+217，+218，和+222，這里的編號(hào)位置對(duì)應(yīng)于由淀粉分解芽孢桿菌得到的天然存在的枯草溶菌素或其它羰基水解酶或枯草溶菌素例如緩慢芽孢桿菌枯草溶菌素的等價(jià)的氨基酸殘基(1997年6月4日申請(qǐng)的未結(jié)案的專(zhuān)利申請(qǐng)US60/048550和PCT國(guó)際申請(qǐng)序號(hào)PCT/IB98/00853)。
還適合于本發(fā)明的是描述在專(zhuān)利申請(qǐng)EP251446和WO91/06637中的蛋白酶、描述在WO91/02792中的蛋白酶BLAP和描述在WO95/23221中的它們的變體。
還參見(jiàn)描述在Novo的WO9318140A中的得自桿菌NCIMB 40338的高pH蛋白酶。含有蛋白酶，一種或多種其他酶，和可逆蛋白酶抑制劑的加酶洗滌劑描述在Novo的WO9203529A中。當(dāng)需要時(shí)，如在Procter&Gamble的WO95/07791中描述的，可以得到吸附降低和水解提高的蛋白酶。適合于本發(fā)明洗滌劑的類(lèi)似胰蛋白酶的重組蛋白酶描述在Novo的WO9425583中。其它適合的蛋白酶描述在Unilever的EP516200中。
特別適用的蛋白酶描述在PCT公開(kāi)文獻(xiàn)WO95/30010；WO95/30011和WO95/29979中。適合的蛋白酶可從丹麥的Novo Nordisk A/S按ESPERASE、ALCALASE、DURAZyM、SAVINASE、EVERLASE和KANNASE商購(gòu)，和從Genencor International(以前是荷蘭的Gist-Brocades)按MAXATASE、MAXACAL、PROPERASE和MAXAPEM商購(gòu)。
這種蛋白水解酶，當(dāng)存在時(shí)，在本發(fā)明清洗組合物中的摻入量，按組合物的重量計(jì)，為0.0001％-2％，優(yōu)選0.001％-0.2％，更優(yōu)選0.005％-0.1％純酶。
可包括淀粉酶(α和/或β)用于去除基于碳水化合物的污漬。WO/94/02597描述了摻入突變體淀粉酶的清洗組合物。還參見(jiàn)WO95/10603。用于清洗組合物中的其它公知的淀粉酶包括α-和β-淀粉酶。α-淀粉酶是現(xiàn)有技術(shù)已知的，包括在US5003257；EP252666；WO91/00353；FR 2676456；EP285123；EP525610；EP368341和英國(guó)專(zhuān)利說(shuō)明書(shū)1296839(Novo)中公開(kāi)的那些淀粉酶。其它適合的淀粉酶是穩(wěn)定性增強(qiáng)的淀粉酶，其描述在WO94/18314和Genencor的WO96/05295中；和在WO95/10603中公開(kāi)的由Novo Nordisk A/S購(gòu)得的對(duì)直接母體進(jìn)行附加修飾得到的淀粉酶變異體。還適合的是描述在EP277216中的淀粉酶。
商業(yè)α-淀粉酶產(chǎn)品的實(shí)例是從Genencor購(gòu)得的Purafect Ox Am和Termamyl，Ban，F(xiàn)ungamyl和Duramyl，它們都可從Novo NordiskA/S丹麥購(gòu)得。WO95/26397描述了其它適合的淀粉酶α-淀粉酶，其特征在于通過(guò)Phadebasα-淀粉酶活性實(shí)驗(yàn)測(cè)定，在25℃-55℃溫度和pH值在8-10范圍下具有比活度大于Termamyl的比活度至少25％。適合的是描述在WO96/23873(Novo Nordisk)中的以上酶的變體。具有改善的關(guān)于活性量和熱穩(wěn)定性與更高活性量組合性質(zhì)的其它淀粉分解酶描述在WO95/35382中。
這種淀粉分解酶，當(dāng)存在時(shí)，在本發(fā)明清洗組合物中的摻入量，按該組合物的重量計(jì)，為0.0001％-2％，優(yōu)選0.00018％-0.06％，更優(yōu)選0.00024％-0.048％純酶。
上述酶可以來(lái)自任何適宜的來(lái)源，如植物、動(dòng)物、細(xì)菌、霉菌和酵母源。該源還可以是親中介態(tài)或嗜極端態(tài)的(extremophilic)(嗜冷的、冷食性的、嗜熱的、嗜壓的、嗜堿的、嗜酸的、嗜鹽的等)?？墒褂眠@些酶的純化或非純化形式。當(dāng)今，普通的作法是通過(guò)蛋白/遺傳工程技術(shù)修飾野生型酶，以便使其在本發(fā)明洗衣洗滌劑和/或織物護(hù)理組合物中的性能最有效。例如，可修飾變體使得酶與這種組合物中通常遇到的組分的相容性增加。另外，可修飾變體使得該酶變體的最佳pH、漂白或螯合穩(wěn)定性、催化活性等適合于特定的清洗應(yīng)用。
特別是，在漂白劑穩(wěn)定的情況下，應(yīng)將注意力集中在對(duì)氧化敏感的氨基酸上和使表面活性劑相容的表面電荷上。這種酶的等電點(diǎn)可通過(guò)取代一些帶電荷的氨基酸而改變，例如等電點(diǎn)的增加可有助于改善與陰離子表面活性劑的相容性。酶穩(wěn)定性的增強(qiáng)還可通過(guò)產(chǎn)生例如附加的鹽橋鍵和強(qiáng)化鈣的結(jié)合部位以增加螯合劑的穩(wěn)定性來(lái)實(shí)現(xiàn)。
這些任選的去污酶，當(dāng)存在時(shí)，一般在清洗組合物中的摻入量為清洗組合物重量的0.0001％至2％純酶。該酶可作為獨(dú)立的單一組分加入(含有一種酶的丸、粒、穩(wěn)定的液體等…)或作為兩種或多種酶的混合物加入(例如復(fù)合顆粒)。
可加入的其它適合的洗滌劑組分是酶氧化清除劑。這種酶氧化清除劑的實(shí)例是乙氧基化的四亞乙基多胺。
各種酶物質(zhì)和將它們摻入合成洗滌劑組合物中的方法還公開(kāi)在Genencor International的WO 9307263和WO 9307260，WO 8908694，和1971年1月5日授權(quán)的McCarty等人的美國(guó)專(zhuān)利US3553139中。一些酶還公開(kāi)在美國(guó)專(zhuān)利US4101457和美國(guó)專(zhuān)利US4507219中。用于液體洗滌劑配方的酶物質(zhì)和它們摻入到這些配方中的方法公開(kāi)在美國(guó)專(zhuān)利US4261868中。
酶穩(wěn)定劑-用于洗滌劑中的酶可用各種技術(shù)使其穩(wěn)定化。酶穩(wěn)定化技術(shù)公開(kāi)并舉例說(shuō)明在美國(guó)專(zhuān)利US3600319，EP199405和EP200586中。酶穩(wěn)定體系也描述在例如美國(guó)專(zhuān)利US3519570中。產(chǎn)生蛋白酶、木聚糖酶和纖維素酶的有用的桿菌AC13描述在WO 9401532A中。本發(fā)明使用的酶可通過(guò)在成品組合物中存在鈣和/或鎂離子的水溶性源，以給酶提供這種離子而使酶穩(wěn)定。適合的酶穩(wěn)定劑和其用量描述在美國(guó)專(zhuān)利5705464，5710115和5576282中。
助洗劑-本文描述的洗滌劑和清洗組合物優(yōu)選包含一種或多種洗滌劑助洗劑或助洗劑體系。當(dāng)存在助洗劑時(shí)，組合物中一般包含至少約1％的助洗劑，優(yōu)選從約5％，更優(yōu)選從約10％-80％，優(yōu)選至約50％，更優(yōu)選至約30％的洗滌劑助洗劑。但這不意味著排除更低和更高含量的助洗劑。
用于本文描述的洗滌劑和清洗組合物，特別是洗餐具組合物中的優(yōu)選助洗劑包括，但不限于水溶性助洗劑化合物(例如多羧酸鹽)如美國(guó)專(zhuān)利5695679、5705464和5710115中所述。其他適合的多羧酸鹽公開(kāi)在美國(guó)專(zhuān)利4144226、3308067和3723322中。優(yōu)選的多羧酸鹽是每分子含有多至三個(gè)羧基的羥基羧酸鹽，更具體地是檸檬酸鹽。
無(wú)機(jī)或含磷助洗劑包括，但不局限于以下的堿金屬，銨和烷醇銨鹽聚磷酸鹽(例如三聚磷酸鹽，焦磷酸鹽，和玻璃狀聚合的偏磷酸鹽)、膦酸鹽(參見(jiàn)例如美國(guó)專(zhuān)利3159581；3213030；3422021；3400148和3422137)、肌醇六磷酸、硅酸鹽、碳酸鹽(包括碳酸氫鹽和倍半碳酸鹽)、硫酸鹽和硅鋁酸鹽。
但是，在某些地區(qū)需要非磷助洗劑。重要的是，甚至在所謂的“弱”助洗劑(與磷酸鹽比較)如檸檬酸鹽存在下，或在使用沸石或?qū)訝罟杷猁}助洗劑時(shí)可發(fā)生的所謂“低復(fù)配”情況下，本發(fā)明組合物的性能出乎意料地好。
適合的硅酸鹽包括SiO2∶Na2O比為約1.0-2.8，優(yōu)選約1.6-2.4，最優(yōu)選約2.0的水溶性硅酸鈉。硅酸鹽可以是無(wú)水鹽或水合鹽的形式。SiO2∶Na2O比為2.0的硅酸鈉是最優(yōu)選的。硅酸鹽，當(dāng)存在時(shí)，優(yōu)選在本文描述的洗滌劑和清洗組合物中的含量為組合物重量的約5％-50％，更優(yōu)選約10％-40％。
適用于洗滌劑和清洗組合物，特別是顆粒洗滌劑組合物中的部分可溶性或不溶性的助洗劑化合物包括，但不限于結(jié)晶層狀硅酸鹽，特別是結(jié)晶層狀硅酸鈉(部分水溶性)如美國(guó)專(zhuān)利4664839中所述和鋁硅酸鈉(水不溶性)。當(dāng)存在于洗滌劑和清洗組合物中時(shí)，這些助洗劑的含量一般為組合物重量的約1％-80％，優(yōu)選約10％-70％，最優(yōu)選約20％-60％。
本文所述組合物中可使用具有通式NaMSixO2x+1·yH2O的結(jié)晶層狀硅酸鈉，其中M為鈉或氫，x為約1.9至約4的數(shù)值，優(yōu)選為約2至約4，最優(yōu)選為2，y為約0至約20的數(shù)值，優(yōu)選為0。該類(lèi)結(jié)晶層狀硅酸鈉公開(kāi)在EP-A-0164514中，它們的制備方法公開(kāi)在DE-A-3417649和DE-A-3742043中。最優(yōu)選的物質(zhì)是從Hoechst AG按NaSKS-6購(gòu)得的δ-Na2SiO5(在本文中通?？s寫(xiě)為″SKS-6″)。不象沸石助洗劑，Na SKS-6硅酸鹽助洗劑不含鋁。NaSKS-6是具有δ-Na2SiO5形態(tài)學(xué)形式的層狀硅酸鹽。SKS-6是本文所述組合物中使用的高度優(yōu)選的層狀硅酸鹽，但本文所述組合物中也可以使用這樣其它的層狀硅酸鹽，如那些具有通式NaMSixO2x+1·yH2O的層狀硅酸鹽，其中M為鈉或氫，x為1.9至4的數(shù)值，優(yōu)選為2，y為0至20的數(shù)值，優(yōu)選為0。從Hoechst購(gòu)得的各種其它層狀硅酸鹽包括NaSKS-5，NaSKS-7，和NaSKS-11，它們是以α、β和γ形式。如上面所提到的，δ-Na2SiO5(NaSKS-6形式)是本文中最優(yōu)選使用的。其它的硅酸鹽也是有用的，例如硅酸鎂，其可作為顆粒配方的松脆劑、作為氧漂白劑的穩(wěn)定劑和作為控泡體系的組分。
結(jié)晶層狀硅酸鈉材料優(yōu)選作為與固體水溶性的可電離材料的緊密混合物顆粒形式存在于顆粒洗滌劑組合物中。固體水溶性的可電離材料優(yōu)選選自有機(jī)酸、有機(jī)和無(wú)機(jī)酸鹽和其混合物。
硅鋁酸鹽助洗劑在最通常市售的重垢型顆粒洗滌劑組合物中最重要，并且也可以是液體洗滌劑配方中重要的助洗劑組分。硅鋁酸鹽助洗劑具有下列經(jīng)驗(yàn)式[Mz(zAlO2)y]·xH2O其中z和y為至少6的整數(shù)，z與y的摩爾比在1.0至約0.5的范圍內(nèi)，x是約15至約264的整數(shù)。優(yōu)選硅鋁酸鹽助洗劑是具有以下單元晶胞的硅鋁酸鹽沸石Naz[(AlO2)z(SiO2)y]·xH2O其中z和y至少為6；z與y的摩爾比為1.0至0.5，x至少為5，優(yōu)選7.5-276，更優(yōu)選10-264。硅鋁酸鹽助洗劑優(yōu)選是水合形式，優(yōu)選是晶體，其含有約10％-28％，更優(yōu)選約18％-22％結(jié)合水。
這些硅鋁酸鹽離子交換材料可以是結(jié)晶或無(wú)定形結(jié)構(gòu)，并且可以是天然產(chǎn)生的硅鋁酸鹽或是合成得到的。制備硅鋁酸鹽離子交換材料的方法揭示于美國(guó)專(zhuān)利US3985669中。用于本文的優(yōu)選的合成結(jié)晶硅鋁酸鹽離子交換材料可以按注冊(cè)商標(biāo)為沸石A、沸石B、沸石P、沸石X、沸石MAP和沸石HS和其混合物購(gòu)買(mǎi)到。在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，結(jié)晶硅鋁酸鹽離子交換材料具有下式Na12[(AlO2)12(SiO2)12]·xH2O其中x為約20至約30，尤其是約27。該物質(zhì)稱(chēng)為沸石A。脫水沸石(x＝0-10)也可以在本文中使用。硅鋁酸鹽優(yōu)選具有直徑為約0.1-10微米的粒度。沸石X具有式Na86[(AlO2)86(SiO2)106]·276H2O檸檬酸鹽助洗劑，例如，檸檬酸和其可溶性鹽(特別是鈉鹽)是重垢液體洗滌劑配方中特別重要的多羧酸鹽助洗劑，原因是它們可由再生資源得到和它們具有生物降解能力。檸檬酸鹽也可用于顆粒組合物中，特別是與沸石和/或?qū)訝罟杷猁}助洗劑結(jié)合使用。氧二琥珀酸鹽在這種組合物和混合物中也特別有用。
適合于本文所述洗滌劑組合物的還有在美國(guó)專(zhuān)利US4566984中公開(kāi)的3，3-二羧基-4-氧雜-1，6-己二酸鹽以及有關(guān)的化合物。有用的琥珀酸助洗劑包括C5-C20烷基和鏈烯基琥珀酸和它們的鹽。這種類(lèi)型中特別優(yōu)選的化合物是十二碳烯基琥珀酸。琥珀酸鹽助洗劑的具體實(shí)例包括月桂基琥珀酸鹽，肉豆寇基琥珀酸鹽、棕櫚基琥珀酸鹽、2-十二碳烯基琥珀酸鹽(優(yōu)選)，2-十五碳烯基琥珀酸鹽等。月桂基琥珀酸鹽是該組中優(yōu)選的助洗劑，并被描述在1986年11月5日公開(kāi)的歐洲專(zhuān)利申請(qǐng)86200690.5/0200263中。
脂肪酸，例如C12-C18單羧酸，也可以單獨(dú)地?fù)饺虢M合物中，或與前述的助洗劑，尤其是檸檬酸鹽和/或琥珀酸鹽助洗劑結(jié)合摻入組合物中，以提供額外的助洗劑活性。使用脂肪酸一般會(huì)導(dǎo)致消弱起泡，這是配方師應(yīng)當(dāng)考慮的。
分散劑-可將一種或多種適合的聚亞烷基亞胺分散劑摻入本發(fā)明清洗組合物中。這種適合的分散劑的實(shí)例可參見(jiàn)歐洲專(zhuān)利申請(qǐng)111965、111984和112592；美國(guó)專(zhuān)利4597898、4548744和5565145。然而，在本發(fā)明洗衣組合物中可使用任何適合的粘土/污垢分散劑或抗再沉積劑。
此外，包括聚合多羧酸鹽和聚乙二醇的聚合分散劑也適合用于本發(fā)明中?？梢越?jīng)聚合形成適合的聚合多羧酸鹽的不飽和單體酸包括丙烯酸，馬來(lái)酸(或馬來(lái)酸酐)，富馬酸，衣康酸，烏頭酸，中康酸，檸康酸和亞甲基丙二酸。尤其適合的聚合多羧酸鹽可以從丙烯酸得到?？梢杂糜诒景l(fā)明中的該類(lèi)基于丙烯酸的聚合物是聚合丙烯酸的水溶性鹽。以酸形式存在的該類(lèi)聚合物的平均分子量?jī)?yōu)選為約2000-10000，更優(yōu)選為約4000-7000，最優(yōu)選為約4000-5000。該類(lèi)丙烯酸聚合物的水溶性鹽可以包括，例如，堿金屬鹽，銨鹽和取代銨鹽。該類(lèi)可溶的聚合物是已知的材料。該類(lèi)聚丙烯酸鹽在洗滌劑組合物中的應(yīng)用公開(kāi)在例如美國(guó)專(zhuān)利US3308067中。
基于丙烯酸/馬來(lái)酸的共聚物也可以用作分散/抗沉積劑的優(yōu)選組分。這類(lèi)物質(zhì)包括丙烯酸和馬來(lái)酸共聚物的水溶性鹽。以酸形式存在的該類(lèi)共聚物的平均分子量?jī)?yōu)選為約2000-100000，更優(yōu)選為約5000-75000，最優(yōu)選為約7000-65000。在該類(lèi)共聚物中丙烯酸鹽部分與馬來(lái)酸鹽部分的比率一般為約30∶1至約1∶1，更優(yōu)選約10∶1至2∶1.這類(lèi)丙烯酸/馬來(lái)酸共聚物的水溶性鹽可以包括，例如，堿金屬鹽，銨鹽和取代銨鹽。這類(lèi)可溶性丙烯酸鹽/馬來(lái)酸鹽共聚物是在1982年12月15日公開(kāi)的歐洲專(zhuān)利申請(qǐng)EP66915以及在1986年9月3日公開(kāi)的歐洲專(zhuān)利EP193360中描述的已知物質(zhì)，后者還描述了包括丙烯酸羥基丙基酯的該類(lèi)聚合物。另一類(lèi)有用的分散劑包括馬來(lái)酸/丙烯酸/乙烯基醇三元共聚物。該材料也在EP193160中被公開(kāi)，包括，例如，45/45/10的丙烯酸/馬來(lái)酸/乙烯基醇三元共聚物。
另一類(lèi)可以被包括的聚合材料是聚乙二醇(PEG)。PEG除了可以作為去除粘土污垢-抗再沉積劑之外還具有分散劑的性能。作為該用途的聚乙二醇的平均分子量一般為約500-約100000，優(yōu)選為約1000-約50000，更優(yōu)選為約1500-約10000。
本發(fā)明也可以使用聚天冬氨酸鹽和聚谷氨酸鹽分散劑，尤其是與沸石助洗劑結(jié)合使用。分散劑如聚天冬氨酸鹽優(yōu)選具有約10000的分子量(平均)。
污垢解脫劑-本發(fā)明組合物可任選地包含一種或多種污垢解脫劑。如果使用的話，污垢解脫劑一般占本發(fā)明組合物重量的約0.01％，優(yōu)選從約0.1％，更優(yōu)選從約0.2％至約10％，優(yōu)選至約5％，更優(yōu)選至3％。適合的污垢解脫聚合物的非限制實(shí)例公開(kāi)在美國(guó)專(zhuān)利5728671；5691298；5599782；5415807；5182043；4956447；4976879；4968451；4925577；4861512；4877896；4771730；4711730、4721580；4000093；3959230和3893929；和歐洲專(zhuān)利申請(qǐng)0219048。
另外適合的污垢解脫劑描述在美國(guó)專(zhuān)利US4201824；US4240918；US4525524；US4579681；US4240918；US4787989；EP279134A；EP457205A；和DE2335044。
螯合劑-本發(fā)明組合物還可以任選地含有起螯合否則會(huì)使漂白劑失活的金屬離子和金屬雜質(zhì)作用的螯合劑。有用的螯合劑可包括氨基羧酸鹽，膦酸鹽、氨基膦酸鹽，多官能取代的芳族螯合劑及其混合物。適合的螯合劑的進(jìn)一步實(shí)例和其用量描述在美國(guó)專(zhuān)利US5705454、5710115、5728671和5576282中。
本發(fā)明組合物還可含有水溶性的甲基甘氨酸二乙酸(MGDA)鹽(或酸形式)作為螯合劑，或作為例如不溶性的助洗劑如沸石、層狀硅酸鹽等的有用的輔助助洗劑。
如果使用螯合劑，則這些螯合劑一般占本發(fā)明洗滌劑組合物重量的約0.1％-15％，更優(yōu)選約0.1％-3.0％。
抑泡劑-另一種任選的組分是抑泡劑，示例為聚硅氧烷，和二氧化硅-聚硅氧烷混合物。適合的抑泡劑的實(shí)例公開(kāi)在美國(guó)專(zhuān)利US5707950和5728671中。這些抑泡劑使用量一般為組合物重量的0.001％至2％，優(yōu)選0.01％至1％。
柔軟劑-織物柔軟劑也可摻入本發(fā)明洗衣洗滌劑組合物中。無(wú)機(jī)柔軟劑的示例有公開(kāi)在GB-A-1400898和USP5,019,292中的綠土類(lèi)。有機(jī)柔軟劑包括如公開(kāi)在GB-A1514276和EP-B0011340中的水不溶性叔胺和公開(kāi)在EP-B-0026527和EP-B-0026528中前者叔胺與單C12-C14季銨鹽的混合物，以及如公開(kāi)在EP-B-0242919中的雙長(zhǎng)鏈酰胺。用于織物柔軟劑體系的其它適合的有機(jī)組分包括公開(kāi)在EP-A-0299575和0313146中的高分子量聚環(huán)氧乙烷物質(zhì)。
特別適合的織物柔軟劑公開(kāi)在美國(guó)專(zhuān)利US577950和5728673中。
綠土的含量通常為2％至20％，更優(yōu)選5％至15％重量，該物質(zhì)是作為干混組分加入到配方的其余組分中。有機(jī)織物柔軟劑例如水不溶性叔胺或雙長(zhǎng)鏈的酰胺物質(zhì)的摻入量是0.5％至5％重量，通常是1％至3％重量，而高分子量聚環(huán)氧乙烷物質(zhì)和水溶性陽(yáng)離子物質(zhì)的加入量是0.1％至2％，通常是0.15％至1.5％重量。雖然在某些情況下，這些物質(zhì)作為干混顆粒加入或?qū)⑺鼈冏鳛槿廴谝后w噴到組合物的其它固體組分上可能更為方便，但通常將它們加入組合物的噴霧干燥的部分中。
如描述在EP-A-040562和EP-A-239910中的生物可降解的季銨化合物已作為傳統(tǒng)使用的氯化和甲基硫酸化雙長(zhǎng)鏈烷基銨的替代物而存在。
用于季銨化合物和胺前體的與柔軟劑相容的陰離子的非限制實(shí)例包括氯或甲基硫酸根。
染料轉(zhuǎn)移抑制作用-本發(fā)明洗滌劑組合物還可包括用于抑制在包含帶色織物的洗滌織物和調(diào)理操作過(guò)程中碰到的溶解和懸浮的染料從一種織物轉(zhuǎn)移至另一種織物上的化合物。
聚合染料轉(zhuǎn)移抑制劑本發(fā)明洗滌劑組合物還可包含0.001％至10％，優(yōu)選0.01％至2％，更優(yōu)選0.05％至1％重量聚合的染料轉(zhuǎn)移抑制劑。通常將所說(shuō)的聚合染料轉(zhuǎn)移抑制劑摻入洗滌劑組合物中是為了抑制染料從帶色的織物上轉(zhuǎn)移至同時(shí)洗滌的織物上。在從帶色織物洗滌下來(lái)的短效染料有機(jī)會(huì)接觸洗滌中的其它物品之前，這些聚合物具有將其螯合或吸附的能力。
特別適合的聚合染料轉(zhuǎn)移抑制劑是聚胺N-氧化物聚合物、N-乙烯基吡咯烷酮和N-乙烯基咪唑的共聚物、聚乙烯基吡咯烷酮聚合物、聚乙烯基噁唑烷酮和聚乙烯基咪唑或它們的混合物。這種染料轉(zhuǎn)移抑制劑的實(shí)例公開(kāi)在美國(guó)專(zhuān)利US5707950和US5707951中。
其他適合的染料轉(zhuǎn)移抑制劑包括，但不限于交聯(lián)的聚合物。交聯(lián)聚合物是其骨架互連至一定程度的聚合物；這些鍵可以是化學(xué)或物理性的，在骨架上或在支鏈上可具有活性基團(tuán)。交聯(lián)聚合物已被描述在聚合物科技雜志，第22卷，第1035-1039頁(yè)。
在一種實(shí)施方案中，交聯(lián)聚合物是以這樣的方法制備的，即它們形成三維的剛性結(jié)構(gòu)，其能將染料捕集在由三維結(jié)構(gòu)形成的孔中。在另一實(shí)施方案中，交聯(lián)聚合物通過(guò)溶脹捕集染料。這種交聯(lián)聚合物被描述在未結(jié)案的歐洲專(zhuān)利中請(qǐng)94870213.9中。
另外，這種聚合物還增強(qiáng)了本發(fā)明酶的性能。
pH和緩沖變化-本文描述的許多洗滌劑和清洗組合物將被緩沖，即在酸性污垢存在下，它們相對(duì)耐pH降低。然而，本發(fā)明其他組合物可具有優(yōu)異的低緩沖能力或可基本上不被緩沖。在建議使用值下控制或變化pH的技術(shù)更通常是包括不僅使用緩沖劑，而且使用其他的堿、酸、pH調(diào)節(jié)體系、雙室容器等，它們是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的。
本發(fā)明優(yōu)選的ADD組合物包含pH調(diào)節(jié)組分，其選自水溶性堿性無(wú)機(jī)鹽和水溶性有機(jī)或無(wú)機(jī)助洗劑，如描述在美國(guó)專(zhuān)利5705464和5710115中。
材料護(hù)理劑-優(yōu)選的ADD組合物可含有作為腐蝕抑制劑和/或防晦暗助劑有效的一種或多種材料護(hù)理劑，如描述在美國(guó)專(zhuān)利5705464、5710115和5646101中。
當(dāng)存在時(shí)，這種保護(hù)材料優(yōu)選摻入低量，例如為ADD組合物的約0.01％-5％。
其他材料-任選地包括在本發(fā)明組合物中的去污組分或輔助材料可包括有助于或增強(qiáng)清洗性能、對(duì)被清洗的底物的處理或用于改善組合物的美學(xué)性的一種或多種材料。還可包括在本發(fā)明組合物中的輔助物，是以它們常規(guī)技術(shù)確定的含量使用(一般，輔助材料總共占組合物重量約30％-99.9％，優(yōu)選約70％-95％)，包括其他活性組分例如非磷酸鹽助洗劑、色粒、銀器護(hù)理劑、防晦暗和/或防腐蝕劑、染料、填料、殺菌劑、堿源、水溶助長(zhǎng)劑、抗氧化劑、香料、增溶劑、載體、加工助劑、顏料和pH控制劑，其描述在美國(guó)專(zhuān)利5705464、5710115、5698504、5695679、5686014和5646101中。
清洗方法-除了本文描述的清洗織物、餐具和其他硬表面和由個(gè)人清洗人體部分的方法外，本發(fā)明還包括已帶有污垢或污漬的織物的洗滌預(yù)處理方法，包括在使用常規(guī)洗滌水溶液洗滌這種織物之前，將所述污漬和/或污垢直接與高濃度形式的上述清洗組合物接觸。優(yōu)選，在用常規(guī)方法洗滌預(yù)處理過(guò)的污垢/污漬底物之前，將清洗組合物與污垢/污漬保持接觸約30秒-24小時(shí)。更優(yōu)選，預(yù)處理時(shí)間為約1-180分鐘。
以下實(shí)施例是用于說(shuō)明本發(fā)明組合物，但不必然用于限制或另外定義本發(fā)明的范圍。
在所有以下實(shí)施例中，蛋白酶1意思是指包含在對(duì)應(yīng)于淀粉分解芽孢桿菌枯草溶菌素的101G/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K位置處用另一種天然產(chǎn)生的氨基酸殘基取代所述位置的氨基酸殘基的蛋白酶變體。蛋白酶1可以用本發(fā)明任何其他附加的蛋白酶變體代替，在以下實(shí)施例中得到明顯相似的結(jié)果。
在本發(fā)明清洗組合物實(shí)施例中，蛋白酶1的酶含量是按純酶占總組合物重量表示，其他酶含量是按原料占總組合物重量表示，和除非另外說(shuō)明，其他組分按占總組合物重量表示。
另外，在所有以下實(shí)施例中，淀粉酶3意思是根據(jù)本發(fā)明的淀粉酶變體。
另外，在以下實(shí)施例中，使用本領(lǐng)域普通技術(shù)人員公知的一些縮寫(xiě)，其與本文公開(kāi)內(nèi)容一致。
實(shí)施例1-7液體硬表面清洗組合物實(shí)施例編號(hào)組分1 2 3 4 5 6 7蛋白酶10.050.05 0.200.02 0.03 0.10 0.03蛋白酶2- - - - - 0.20 0.1淀粉酶3- 0.002 0.002 0.0005 0.04 0.0008 0.005螯合劑** - - - 2.90 2.90 - -檸檬酸鹽 - - - - - 2.90 2.90LAS- 1.95 - 1.95 - 1.95 -AS 2.00- 2.20- 2.20 - 2.20AES2.00- 2.20- 2.20 - 2.20氧化胺 0.40- 0.50- 0.50 - 0.50水溶助長(zhǎng)劑 - 1.30 - 1.30 - 1.30 -溶劑***- 6.30 6.306.30 6.30 6.30 6.30水和少量組分平衡量至100％2非蛋白酶1的蛋白酶，包括，但不限于這里所述的本發(fā)明中有用的其他蛋白酶**乙二胺二乙酸四鈉***二乙二醇一己醚****所有配方均調(diào)至pH7在實(shí)施例6和7中，其中，在這里所述的本發(fā)明中有用的蛋白酶的任何組合用于代替蛋白酶1和蛋白酶2，得到基本上相似的結(jié)果。
實(shí)施例2-7洗餐具組合物實(shí)施例編號(hào)組分 2 3 4 5 6 7蛋白酶10.05 0.50 0.02 0.40 0.10 0.03蛋白酶2- - - - 0.40 0.1淀粉酶30.002 0.002 0.0005 0.04 0.0008 0.005TFAAI 0.90 0.90 0.90 0.90 0.90 0.90AES 12.00 12.00 12.00 12.00 12.00 12.002-甲基十一烷酸 4.50 4.50 - 4.50 4.50-C12乙氧基(2)羧酸鹽 4.50 4.50 4.50 4.50 4.50 4.50C12醇乙氧基化物(4) 3.00 3.00 3.00 300 3.00 3.00氧化胺 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00水溶助長(zhǎng)劑 2.00 2.00 2.00 2.00 2.00 2.00乙醇4.00 4.00 4.00 4.00 4.00 4.00Mg++(為MgCl2) 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20Ca++(為CaCl2) 0.40 0.40 0.40 0.40 0.40 0.40水和少量組分****平衡量至100％2非蛋白酶1的蛋白酶，包，但不限于這里所述的本發(fā)中有用的其他蛋白酶****產(chǎn)品pH被調(diào)至pH7在實(shí)施例6和7中，其中，在這里所述的本發(fā)明中有用的蛋白酶的任何組合用于代替蛋白酶1和蛋白酶2，得到基本上相似的結(jié)果。
實(shí)施例8洗餐具組合物(A&B ADWC液體)組分 A B CSTPP 17.5 - -檸檬酸鹽 15.0 -聚丙烯酸鈉(MW 4500) 0.80 - -Acusol 480N - 5.10 -碳酸鉀8.30 - -碳酸鈉- 8.50 -2.1r硅酸鉀3.99 - -2.0r硅酸納2.00 - -3.2r硅酸鈉 5.18- -三硬脂酸鉛 0.10- -非離子表面活性劑 - 2.50-NaAE0.6S - - 24.70葡糖酰胺 - - 3.09C10E8 - - 4.11甜菜堿 - - 2.06氧化胺 - - 2.06氧化鎂 - - 0.49水溶助長(zhǎng)劑 - - 4.47為AvCl2的次氯酸鈉 1.15- -淀粉酶30.002 0.030.005蛋白酶10.010.430.05平衡量至100％實(shí)施例9液體洗餐具組合物(特別適合于日本條件)組分 A BAE1.4S24.6924.69N-椰油基N-甲基葡糖胺 3.09 3.09氧化胺2.06 2.06甜菜堿2.06 2.06非離子表面活性劑 4.11 4.11水溶助長(zhǎng)劑4.47 4.47鎂0.49 0.49乙醇 7.2 7.2LemonEase 0.45 0.45香葉醇/BHT-0.60/0.02淀粉酶30.03 0.005蛋白酶10.01 0.43平衡量至100％
實(shí)施例10粒狀自動(dòng)洗餐具組合物組分 AB C檸檬酸15.0 - -檸檬酸鹽 4.0 29.0 15.0丙烯酸鹽/異丁烯酸鹽共聚物 6.0 - 6.0丙烯酸馬來(lái)酸共聚物- 3.7-干添加劑碳酸鹽9.0 - 20.0堿金屬硅酸鹽 8.5 17.0 9.0石蠟 - 0.5-苯并三唑 - 0.3-淀粉酶31.6 1.61.6蛋白酶110.2 0.10.06過(guò)碳酸鹽(AvO) 1.5 - -過(guò)硼酸鹽一水合物 - 0.31.5過(guò)硼酸鹽四水合物 - 0.9-四乙酰乙二胺 3.8 4.4-二亞乙基三胺五甲基膦酸(Mg鹽) 0.13 0.13 0.133摩爾乙氧基化的烷基乙氧基硫酸鹽 3.0 - -烷基乙氧基丙氧基非離子表面活性劑 - 1.5-抑泡劑2.0 - -Olin SLF18非離子表面活性劑- - 2.0硫酸鹽 平衡量至100％實(shí)施例11根據(jù)本發(fā)明的密實(shí)型高密度(0.96Kg/l)洗餐具洗滌劑組合物A-F
實(shí)施例12根據(jù)本發(fā)明的堆密度為1.02Kg/l的粒狀洗餐具洗滌劑組合物實(shí)施例A-F
實(shí)施例13使用標(biāo)準(zhǔn)12頭旋轉(zhuǎn)壓型機(jī)，在壓力13KN/cm2下擠壓粒狀洗餐具洗滌劑組合物來(lái)制備根據(jù)本發(fā)明的片狀洗滌劑組合物實(shí)施例A-H
實(shí)施例14凹片狀自動(dòng)洗餐具組合物組分 A(％R.M.)B(gR.M.)C(gR.M.)片體碳酸鈉 15.348 3.500 5.25STPP(12％H2O) 46.482 10.600 9.93Gran HEDP0.789 0.180 0.28SKS6 6.578 1.500 2.252比例硅酸鹽 7.016 1.600 1.65PB1 10.743 2.450 3.68Termamyl 2x PCA 0.491 0.112 .17Savinase 0.526 0.120 0.18Plurafac 3.508 0.800 0.9BTA 0.263 0.060 0.09PEG 1.140 0.260 -PEG 4000 - - 0.39Winog0.439 0.100 0.15香料 0.101 0.023 0.01凹處的填料檸檬酸 0.987 0.225 0.23碳酸氫鹽 2.600 0.593 0.59Sandolan EHRL染料0.007 0.0017 0.0017PEG 400/4000 0.395 0.090PEG 400 - - 0.02PEG 4000 - - 0.08蛋白酶10.05 0.268 0.27淀粉酶31.412 0.322 0.32粒狀織物清洗組合物本發(fā)明粒狀織物清洗組合物含有有效量的一種或多種蛋白酶，按組合物的重量計(jì)，優(yōu)選約0.001％-10％，更優(yōu)選約0.005％-5％，更優(yōu)選0.01％-1％活性蛋白酶。(參見(jiàn)美國(guó)專(zhuān)利5679630的實(shí)施例)。
實(shí)施例15粒狀織物清洗組合物實(shí)施例編號(hào)組分 A B C D蛋白酶10.10 0.20 0.03 0.05蛋白酶2- - 0.2 0.15淀粉酶30.002 0.0005 0.04 0.005C13直鏈烷基苯磺酸鹽 22.00 22.00 22.00 22.00磷酸鹽(為三聚磷酸鈉) 23.00 23.00 23.00 23.00碳酸鈉 23.00 23.00 23.00 23.00硅酸鈉 14.00 14.00 14.00 14.00沸石 8.20 8.20 8.20 8.20螯合劑(二亞乙基三胺五乙酸) 0.40 0.40 0.40 0.40硫酸鈉 5.50 5.50 5.50 5.50水 平衡量至100％2非蛋白酶1的蛋白酶，包括，但不限于這里所述的本發(fā)明中有用的其他蛋白酶。
在實(shí)施例15C和D中，其中，在這里所述的本發(fā)明中有用的蛋白酶的任何組合用于代替蛋白酶1和蛋白酶2，得到基本上相似的結(jié)果。
實(shí)施例16粒狀織物清洗組合物實(shí)施例編號(hào)組分 A B C D蛋白酶10.100.20 0.03 0.05蛋白酶2- - 0.2 0.1淀粉酶30.005 0.0005 0.04 0.002C12烷基苯磺酸鹽 12.00 12.00 12.00 12.002-丁基辛酸4.00 4.00 4.00 4.00C12-C14仲(2，3)烷基硫酸鈉 5.00 5.00 5.00 5.00檸檬酸鈉 5.00 5.00 5.00 5.00熒光增白劑0.10 0.10 0.10 0.10硫酸鈉17.00 17.00 17.00 17.00填料，水，少量組分 平衡量至100％2非蛋白酶1的蛋白酶，包括，但不限于這里所述的本發(fā)明中有用的其他蛋白酶。
在實(shí)施例16C和D中，其中，在這里所述的本發(fā)明中有用的蛋白酶的任何組合用于代替蛋白酶1和蛋白酶2，得到基本上相似的結(jié)果。
實(shí)施例17粒狀織物清洗組合物組分 實(shí)施例編號(hào)AB直鏈烷基苯磺酸鹽 11.410.70牛油烷基硫酸鹽 1.802.40C14-15烷基硫酸鹽 3.003.107摩爾乙氧基化的C14-15醇 4.004.0011摩爾乙氧基化的牛油醇 1.801.80分散劑 0.070.1聚硅氧烷流體 0.800.80檸檬酸三鈉 14.00 15.00檸檬酸 3.002.50沸石 32.50 32.10馬來(lái)酸丙烯酸共聚物 5.005.00二亞乙基三胺五亞甲基膦酸 1.000.20蛋白酶10.1 0.01脂肪酶 0.36 0.40淀粉酶30.30 0.30硅酸鈉 2.00 2.50硫酸鈉 3.50 5.20聚乙烯基吡咯烷酮0.30 0.50過(guò)硼酸鹽0.5 1苯酚磺酸鹽 0.1 0.2過(guò)氧化物酶 0.1 0.1少量組分最多至100最多至100實(shí)施例18粒狀織物清洗組合物實(shí)施例編號(hào)組分 ABC12直鏈烷基苯磺酸鈉6.5 8.0硫酸鈉 15.0 18.0沸石A 26.0 22.0次氮基三乙酸鈉 5.0 5.0聚乙烯基吡咯烷酮0.5 0.7四乙酰乙二胺3.0 3.0硼酸4.0 -過(guò)硼酸鹽0.5 1苯酚磺酸鹽 0.1 0.2蛋白酶10.02 0.05淀粉酶30.005 0.002填料(例如硅酸鹽、碳酸鹽、香料、水) 最多至100 最多至100
實(shí)施例19密實(shí)型粒狀織物清洗組合物組分重量％烷基硫酸鹽 8.0烷基乙氧基硫酸鹽2.03和7摩爾乙氧基化的C25和C45醇的混合物 6.0多羥基脂肪酸酰胺2.5沸石17.0層狀硅酸鹽/檸檬酸鹽 16.0碳酸鹽 7.0馬來(lái)酸丙烯酸共聚物 5.0污垢解脫聚合物 0.4羧甲基纖維素0.4聚(4-乙烯基吡啶)-N-氧化物 0.1乙烯基咪唑和乙烯基吡咯烷酮的共聚物 0.1PEG2000 0.2蛋白酶10.03脂肪酶 0.2纖維素酶0.2淀粉酶30.005四乙酰乙二胺6.0過(guò)碳酸鹽22.0乙二胺二琥珀酸 0.3抑泡劑 3.54，4′-二(2-嗎啉代-4-苯胺基-S-三嗪-6- 0.25基氨基)芪-2，2′-二磺酸二鈉4，4′-二(2-磺基苯乙烯基)聯(lián)苯二鈉 0.05水、香料和少量組分 最多至100
實(shí)施例20粒狀織物清洗組合物組分 重量％直鏈烷基苯磺酸鹽 7.6C16-C18烷基硫酸鹽 1.37摩爾乙氧基化的C14-C15醇4.0椰油烷基二甲基羥乙基氯化銨1.4分散劑0.07聚硅氧烷流體 0.8檸檬酸三鈉5.0沸石4A15.0馬來(lái)酸丙烯酸共聚物4.0二亞乙基三胺五亞甲基膦酸 0.4過(guò)硼酸鹽 15.0四乙酰乙二胺 5.0綠土 10.0聚(氧乙烯)(MW300.000) 0.3蛋白酶10.02脂肪酶0.2淀粉酶220.3纖維素酶 0.2硅酸鈉3.0碳酸鈉10.0羧甲基纖維素 0.2增白劑0.2水、香料和少量組分最多至100
實(shí)施例21粒狀織物清洗組合物組分 重量％直鏈烷基苯磺酸鹽 6.92牛油烷基硫酸鹽 2.057摩爾乙氧基化的C14-C15醇 4.43摩爾乙氧基化的C12-C15烷基乙氧基硫酸鹽 0.16沸石 20.2檸檬酸鹽 5.5碳酸鈉 15.4硅酸鈉 3.0馬來(lái)酸丙烯酸共聚物 4.0羧甲基纖維素 0.31污垢解脫聚合物 0.30蛋白酶10.1脂肪酶 0.36纖維素酶 0.13淀粉酶30.005過(guò)硼酸鹽四水合物 11.64過(guò)硼酸鹽一水合物 8.7四乙酰乙二胺 5.0二亞乙基三胺五甲基磷酸 0.38硫酸鎂 0.40增白劑 0.19香料、聚硅氧烷、抑泡劑 0.85少量組分 最多至100
實(shí)施例22粒狀織物清洗組合物組分 A B C基本顆粒組分LAS/AS/AES(65/35)9.95- -LAS/AS/AES(70/30)- 12.05 7.70硅鋁酸鹽 14.06 15.74 17.10碳酸鈉 11.86 12.74 13.07硅酸鈉 0.58 0.580.58NaPAA固體2.26 2.261.47PEG固體 1.01 1.120.66增白劑 0.17 0.170.11DTPA - - 0.70硫酸鹽 5.46 6.644.25DC-1400 Deaerant 0.02 0.020.02水分 3.73 3.984.33少量組分 0.31 0.490.31B.O.T.噴霧非離子表面活性劑 0.50 0.500.50附聚物組分LAS/AS(25/75)11.70 9.6010.47硅鋁酸鹽 13.73 11.26 12.28碳酸鹽 8.11 6.667.26PEG4000 0.59 0.480.52水/少量組分 4.88 4.004.36功能性添加劑碳酸鈉 7.37 6.987.45過(guò)硼酸鹽 1.03 1.032.56AC底涂層 - 1.00-NOBS - - 2.40污垢解脫聚合物 0.41 0.410.31纖維素酶 0.33 0.330.24蛋白酶10.10.050.15淀粉酶30.002 0.005 0.04AE-薄片 0.40 0.400.29噴上液體香料 0.42 0.420.42非離子型噴霧劑 1.001.000.50少量組分 最多至100實(shí)施例23粒狀織物清洗組合物
實(shí)施例24粒狀織物清洗組合物
實(shí)施例25粒狀洗衣洗滌劑組合物25A-C特別適用于歐洲洗衣機(jī)條件并根據(jù)本發(fā)明制備
實(shí)施例26以下配方是根據(jù)本發(fā)明組合物的實(shí)施例，其可以是顆?；蚱瑺?。
實(shí)施例27以下粒狀洗衣洗滌劑組合物27A-E特別適用于日本洗衣機(jī)條件并根據(jù)本發(fā)明制備
液體織物清洗組合物本發(fā)明液體織物清洗組合物優(yōu)選含有有效量的一種或多種蛋白酶，按組合物的重量計(jì)，優(yōu)選約0.001％-10％，更優(yōu)選約0.001％-1％，最優(yōu)選0.0001％-0.1％活性蛋白酶。(參見(jiàn)美國(guó)專(zhuān)利5679630的實(shí)施例)。
實(shí)施例28液體織物清洗組合物實(shí)施例編號(hào)組分 A BC D E蛋白酶10.05 0.03 0.30 0.03 0.10蛋白醇2- - - 0.1 0.20淀粉酶3C12-C14烷基硫酸鈉 20.00 20.00 20.00 20.00 20.002-丁基辛酸 5.00 5.00 5.00 5.00 5.00檸檬酸鈉1.00 1.00 1.00 1.00 1.00C10醇乙氧基化物(3) 13.00 13.00 13.00 13.00 13.00單乙醇胺2.50 2.50 2.50 2.50 2.50水/丙二醇/乙醇(100∶1∶1) 平衡量至100％2非蛋白酶1的蛋白酶，包括，但不限于這里所述的本發(fā)明中有用的其他蛋白酶在實(shí)施例28D和E中，其中，在這里所述的本發(fā)明中有用的蛋白酶的任何組合用于代替蛋白酶1和蛋白酶2，得到基本上相似的結(jié)果。
實(shí)施例29液體織物清洗組合物實(shí)施例編號(hào)組分 ABC12-14烯基琥珀酸3.0 8.0檸檬酸一水合物 10.0 15.0C12-14烷基硫酸鈉8.0 8.02摩爾乙氧基化的C12-15醇 -3.07摩爾乙氧基化的C12-15醇 -8.05摩爾乙氧基化的C12-15醇 8.0 -二亞乙基三胺五(亞甲基膦酸) 0.2 -油酸1.8 -乙醇4.0 4.0丙二醇 2.0 2.0蛋白酶10.01 0.02淀粉酶30.0050.002聚乙烯基吡咯烷酮1.0 2.0抑泡劑0.15 0.15NaOH 最多至pH7.5過(guò)硼酸鹽 0.5 1苯酚磺酸鹽0.1 0.2過(guò)氧化物酶0.4 0.1水和少量組分 最多至100％實(shí)施例30液體織物清洗組合物實(shí)施例編號(hào)組分28NaLAS(100％am) 16Neodol 21.5檸檬酸鹽6.8EDDS1.2分散劑 1.3過(guò)硼酸鹽12N-壬?；?6-氨基己酸的苯酚磺酸酯 6蛋白酶1(％純酶)0.03淀粉酶30.40Carezyme0.03溶劑(BPP) 18.5聚合物 0.1碳酸鹽 10FWA 15 0.2TiO20.5PEG8000 0.4香料1.0-1.2抑泡劑 0.06水和少量組分最多至100％
實(shí)施例31液體織物清洗組合物實(shí)施例編號(hào)組分 ABD1水 38.63 -MEA 0.48 9.0NaOH 4.40 1.0Pdiol4.00 10.0檸檬酸 2.50 2.0DTPA 0.50 1.0FWA預(yù)混合物(Br 15/MEA/NI 23-9) 0.15 0.15Na C25AE1.80S23.50 -AE3S(H) - 4.0C11.8HLAS3.00 14.0Neodol 2.00 6.0EtOH 0.50 2.0甲酸鈣*0.10 0.1硼砂預(yù)混合物(硼砂/MEA/Pdiol/檸檬酸) 2.50 -C10 APA 1.50 -TEPA 105 1.20 -FA C12-185.00 -Neptune LC 0.50 -染料 0.00400.0015纖維素酶 0.053 0.2淀粉酶30.15 0.2蛋白酶10.1 0.1DC 2-35970.12 0.2菜子FA 6.50 4.0水和少量組分 最多至100％
實(shí)施例32液體織物清洗組合物組分 30Na0H 5.50Pdiol6.90檸檬酸 1.50DTPA 1.50FWA預(yù)混合物(Br15/MEA/N1 23-9)0.15AE3S(H) 2.50LAS(H) 13.0Neodol 2.00EtOH 3.50甲酸鈣*0.10硼酸 1.00粘土 4.00淀粉酶30.15蛋白酶10.02脂肪酸 16.50水和少量組分 最多至100％實(shí)施例34液體織物清洗組合物根據(jù)本發(fā)明制備以下特別適用于日本洗衣機(jī)條件的液體織物清洗組合物
實(shí)施例35液體織物清洗組合物根據(jù)本發(fā)明制備以下特別適用于日本洗衣機(jī)條件的液體織物清洗組合物
條狀織物清洗組合物適用于手洗臟織物的本發(fā)明條狀織物清洗組合物一般含有有效量的一種或多種蛋白酶，按組合物的重量計(jì)，優(yōu)選約0.001％-10％，更優(yōu)選約0.01％-1％活性蛋白酶。(參見(jiàn)美國(guó)專(zhuān)利5679630的實(shí)施例)。
實(shí)施例36條狀織物清洗組合物實(shí)施例編號(hào)組分A B C D蛋白酶10.3 - 0.10.02蛋白酶2- - 0.40.1淀粉酶30.01 0.02 0.002 0.005C12-C16烷基硫酸鈉20.0 20.0 20.0 20.00C12-C14N-甲基葡糖酰胺5.05.05.05.00C11-C13烷基苯磺酸鈉 10.0 10.0 10.0 10.00碳酸鈉 25.0 25.0 25.0 25.00三聚磷酸鈉 7.07.07.07.00沸石A(0.1-.10μ) 5.05.05.05.00羧甲基纖維素 0.20.20.20.20聚丙烯酸鹽(MW 1400)0.20.20.20.20椰子單乙醇酰胺 5.05.05.05.00增白劑，香料 0.20.20.20.20CaSO41.01.01.01.00MgSO4 1.01.01.01.00水 4.04.04.04.00填料* 平衡量100％*可選自適宜的材料例如CaCO3、滑石粉、粘土、硅酸鹽等。2非蛋白酶1的蛋白酶，包括，但不限于這里所述的本發(fā)明中有用的其他蛋白酶。
在實(shí)施例36C和D中，其中，在這里所述的本發(fā)明中有用的蛋白酶的任何組合用于代替蛋白酶1和蛋白酶2，得到基本上相似的結(jié)果。
雖然已描述了本發(fā)明的具體實(shí)施方案，但在不脫離本發(fā)明精神和范圍下可對(duì)本發(fā)明進(jìn)行各種變化和修改，這對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是顯而易見(jiàn)的。在所附的權(quán)利要求書(shū)中意圖覆蓋在本發(fā)明范圍內(nèi)的所有這樣的修改。
本發(fā)明組合物可適宜用配方師選擇的任何方法來(lái)制備，其非限制實(shí)施例描述在1997年11月11日授權(quán)的Nassano等的美國(guó)專(zhuān)利5691297；1996年11月12日授權(quán)的Welch等的美國(guó)專(zhuān)利5574005；1996年10月29日授權(quán)的Dinniwell等的美國(guó)專(zhuān)利5569645；1996年10月15日授權(quán)的Greco等的美國(guó)專(zhuān)利5565422；1996年5月14日授權(quán)的Capeci等的美國(guó)專(zhuān)利5516448；1996年2月6日授權(quán)的Capeci等的美國(guó)專(zhuān)利5489392和1996年1月23日授權(quán)的Capeci等的5486303中，所有這些專(zhuān)利在本文引用作參考。
除了上述實(shí)施例外，本發(fā)明清洗組合物可配制成任何適合的洗衣洗滌劑組合物，其非限制實(shí)例描述在1997年10月21日授權(quán)的Baeck等的美國(guó)專(zhuān)利5679630；1996年10月15日授權(quán)的Watson等的美國(guó)專(zhuān)利5565145；1995年12月26日授權(quán)的Fredj等的美國(guó)專(zhuān)利5478489；1995年11月28日授權(quán)的Fredj等美國(guó)專(zhuān)利5470507；1995年11月14日授權(quán)的Panandiker等的美國(guó)專(zhuān)利5466802；1995年10月24日授權(quán)的Fredj等的美國(guó)專(zhuān)利5460752；1995年10月17日授權(quán)的Fredj等美國(guó)專(zhuān)利5458810；1995年10月17日授權(quán)的Fredj等美國(guó)專(zhuān)利5458809和1994年2月22日授權(quán)的Huber等的美國(guó)專(zhuān)利5288431中，所有這些專(zhuān)利在本文引用作參考。
參考優(yōu)選的實(shí)施方案和實(shí)施例，已詳細(xì)描述了本發(fā)明，在不脫離本發(fā)明范圍下可作各種變化和修改，這對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是顯然的，并且不認(rèn)為本發(fā)明限制在說(shuō)明書(shū)中所述內(nèi)容。序列描述SEQ ID No.1His His Asn Gly Thr Asn Gly Thr Met Met Gln Tyr Phe Glu Trp Tyr1 5 10 15Leu Pro Asn Asp Gly Asn His Trp Asn Arg Leu Arg Asp Asp Ala Ala20 2530Asn Leu Lys Ser Lys Gly Ile Thr Ala Val Trp Ile Pro Pro Ala Trp35 40 45Lys Gly Thr Ser Gln Asn Asp Val Gly Tyr Gly Ala Tyr Asp Leu Tyr50 55 60Asp Leu Gly Glu Phe Asn Gln Lys Gly Thr Val Arg Thr Lys Tyr Gly65 70 75 80Thr Arg Asn Gln Leu Gln Ala Ala Val Thr Ser Leu Lys Asn Asn Gly85 9095Ile Gln Val Tyr Gly Asp Val Val Met Asn His Lys Gly Gly Ala Asp100 105110Gly Tnr Glu Ile Val Asn Ala Val Glu Val Asn Arg Ser Asn Arg Asn115 120 125Gln Glu Thr Ser Gly Glu Tyr Ala Ile Glu Ala Trp Thr Lys Phe Asp130 135 140Phe Pro Gly Arg Gly Asn Asn His Ser Ser Phe Lys Trp Arg Trp Tyr145 150 155160His Phe Asp Gly Thr Asp Trp Asp Gln Ser Arg Gln Leu Gln Asn Lys165 170 175Ile Tyr Lys Phe Arg Gly Thr Gly Lys Ala Trp Asp Trp Glu Val Asp180 185 190Thr Glu Asn Gly Asn Tyr Asp Tyr Leu Met Tyr Ala Asp Val Asp Met195 200205Asp His Pro Glu Val Ile His Glu Leu Arg Asn Trp Gly Val Trp Tyr210 215 220Thr Asn Thr Leu Asn Leu Asp Gly Phe Arg Ile Asp Ala Val Lys His225 230 235240Ile Lys Tyr Ser Phe Thr Arg Asp Trp Leu Thr His Val Arg Asn Thr245 250 255Thr Gly Lys Pro Met Phe Ala Val Ala Glu Pha Trp Lys Asn Asp Leu260265 270Gly Ala Ile Glu Asn Tyr Leu Asn Lys Thr Ser Trp Asn His Set Val275 280 285Phe Asp Val Pro Leu His Tyr Asn Leu Tyr Asn Ala Ser Asn Ser Gly290 295 300Gly Tyr Tyr Asp Met Arg Asn Ile Leu Asn Gly Ser Val Val Gln Lys305310 315320His Pro Thr His Ala Val Thr Phe Val Asp Asn His Asp Ser Gln Pro325 330 335Gly Glu Ala Leu Glu Sar Phe Val Gln Gln Trp Phe Lys Pro Leu Ala340 345 350Tyr Ala Leu Val leu Thr Arg Glu Gln Gly Tyr Pro Ser Val Phe Tyr355 360 365Gly Asp Tyr Tyr Gly Ile Pro Tnr His Gly Val Pro Ala Met Lys Ser370 375 380Lys Ile Asp Pro leu Leu Gln Ala Arg Gln Thr Phe Ala Tyr Gly Thr385 390 395 400Gln His Asp Tyr Phe Asp His His Asp Ile Ile Gly Trp Thr Arg Glu405410 415Gly Asn Ser Ser His Pro Asn Ser Gly Leu Ala Thr Ile Met Ser Asp420 425 430Gly Pro Gly Gly Asn Lys Trp Met Tyr Val Gly Lys Asn Lys Ala Gly435 440 445Gln Val Trp Arg Asp Ile Thr Gly Asn Arg Thr Gly Thr Val Thr Ile450 455460Ash Ala Asp Gly Trp Gly Asn Phe Ser Val Asn Gly Gly Ser Val Ser465470 475480Val Trp Val Lys Gln485序列描述SEQ ID NO.2His His Asn Gly Thr Asn Gly Thr Met Met Gln Tyr Phe Glu Trp His1 5 10 15Leu Pro Asn Asp Gly Asn His Trp Asn Arg Leu Arg Asp Asp Ala Ser20 25 30Asn Leu Arg Asn Arg Gly Ile Thr Ala Ile Trp Ile Pro Pro Ala Trp3540 - 45Lys Gly Thr Ser Gln Asn Asp Val Gly Tyr Gly Ala Tyr Asp Leu Tyr50 5560Asp Leu Gly Glu Phe Asn Gln Lys Gly Thr Val Arg Thr Lys Tyr Gly65 7075Thr Arg Ser Gln Leu Glu Ser Ala Ile His Ala Leu Lys Asn Asn Gly80 85 90 95Val Gln Val Tyr Gly Asp Val Val Met Asn His Lys Gly Gly Ala Asp100 105 110Ala Tnr Glu Asn Val Leu Ale Val Glu Val Asn Pro Asn Asn Arg Asn115 120 125Gln Glu Ile Ser Gly Asp Tyr Thr Ile Glu Ala Trp Thr Lys Phe Asp130 135 140Pne Pro Gly Arg Gly Asn Thr Tyr Ser Asp Phe Lys Trp Arg Trp Tyr145 150 155His Phe Asp Gly Val Asp Trp Asp Gln Ser Arg Gln Phe Gln Asn Arg160165 170175Ile Tyr Lys Phe Arg Gly Asp Gly Lys Ala Trl Asp Trp Glu Val Asp180185190Ser Glu Asn Gly Asn Tyr Asp Tyr Leu Met Tyr Ala Asp Val Asp Met195200 205Asp His Pro Glu Val Val Asn Glu Leu Arg Arg Trp Gly Glu Trp Tyr210215220Thr Asn Thr Leu Asn Leu Asp Gly Phe Atg Ile Asp Ala Val Lys His225 230 235Ile Lys Tyr Ser Phe Thr Arg Asp Trp Leu Thr His Val Arg Asn Ala240245250 255Thr Gly Lys Glu Met Phe Ala Val Ala Glu Phe Trp Lys Asn Asp Leu260 265 270Gly Ala Leu Glu Asn Tyr Leu Asn Lys Thr Asn Trp Asn His Ser Val275 280285Phe Asp Val Pro Leu His Tyr Asn Leu Tyr Asn Ala Ser Asn Ser Gly290295 300Gly Asn Tyr Asp Met Ala Lys Leu Leu Asn Gly Thr Val Val Gln Lys305310 315His Pro Met His Ala Val Tnr Phe Val Asp Asn His Asp Ser Gln Pro320325330 335Gly Glu Ser Leu Glu Ser Phe Val Gln Glu Trp Phe Lys Pro Leu Ala340 345350Tyr Ala Leu Ile Leu Thr Arg Glu Gln Gly Tyr Pro Ser Val Phe Tyr355 360 365Gly Asp Tyr Tyr Gly Ile Pro Thr His Ser Val Pro Ala Met Lys Ala370375 380Lys Ile Asp Pro Ile Leu Glu Ala Arg Gln Asn Phe Ala Tyr Gly Tnr385 390395Gln His Asp Tyr Phe Asp His His Asn Ile Ile Gly Trp Thr Arg Glu400405 410415Gly Asn Thr Thr His Pro Asn Ser Gly Leu Ala Thr Ile Met Ser Asp420 425 430Gly Pro Gly Gly Glu Lys Trp Met Tyr Val Gly Gln Asn Lys Ala Gly435 440 445Gln Val Trp His Asp Ile Thr Gly Asn Lys Pro Gly Thr Val Thr Ile450455 450Asn Ala Asp Gly Trp Ala Asn Phe Ser Val Asn Gly Gly Ser Val Ser465 470 475Ile Trp Val Lys Arg480序列描述SEQ ID No.3His-His-Asn-Gly-Thr-Asn-Gly-Thr-Met-Met-Gln-Tyr-Phe-Glu-Trp-Tyr-Leu-Pro-Asn-Asp序列描述SEQ ID No.4AAPFNGTMMO YFEWYLPDDG TLWTKVANEA NNLSSLGTTA LWLPPAYKGTSRSDVGYGVY DLYDLGEFNO KGAVRTKYGT KAOYLOAIOAAHAAGMOVYADVVFDHKGGA DGTEWVDAVE VNPSDRNOEI SGTYOIOAWTKFDFPGRGNTYSSFKWRWYH FDGVDWDESR KLSRIYKFRG IGKAWDWEVDTENGNYDYLMYADLDMDHFE VVTELKSWGK WYVNTTNIDG FRLDAVKHIK FSFFPDWLSDVRRSOTGKPLFTVGEYWSYD NKLHNYIMKT NGTMSLFDAP LHNKFYTASKSGGTFDMRTL MTNTLMKDOP TLAVTFVDNH DTEPGOALOSWVDPWFKPLAYAFILTROEG YPCVFYGDYY GIPOYNIPSL KSKIDPLLIA RRDYAYGTOHDYLDHSDIIG WTREGVTEKP GSGLAALITD GPGGSKWMYVGKOHAGKVFYDLTGNRSDTV TINSDGWGEF KVNGGSVSVW VPRKTTVSTI AWSITTRPWTDEFVRWTEPR LVAWP
權(quán)利要求
1.一種織物和/或洗餐具和/或硬表面清洗組合物，其包含(a)有效量的蛋白酶變體，其中所述蛋白酶變體包括在對(duì)應(yīng)于淀粉分解芽孢桿菌枯草溶菌素的103位的氨基酸殘基位置處用另一種天然產(chǎn)生的氨基酸殘基取代所述位置的氨基酸殘基，同時(shí)結(jié)合在對(duì)應(yīng)于淀粉分解芽孢桿菌枯草溶菌素的1、3、4、8、9、10、12、13、16、17、18、19、20、21、22、24、27、33、37、38、42、43、48、55、57、58、61、62、68、72、75、76、77、78、79、86、87、89、97、98、99、101、102、104、106、107、109、111、114、116、117、119、121、123、126、128、130、131、133、134、137、140、141、142、146、147、158、159、160、166、167、170、173、174、177、181、182、183、184、185、188、192、194、198、203、204、205、206、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、222、224、227、228、230、232、236、237、238、240、242、243、244、245、246、247、248、249、251、252、253、254、255、256、257、258、259、260、261、262、263、265、268、269、270、271、272、274和275位的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基位置處用另一種天然產(chǎn)生的氨基酸殘基取代所述位置的氨基酸殘基；其中當(dāng)所述蛋白酶變體包括在對(duì)應(yīng)于103和76位置處的氨基酸殘基的取代時(shí)，還存在在非對(duì)應(yīng)于淀粉分解芽孢桿菌枯草溶菌素的27、99、101、104、107、109、123、128、166、204、206、210、216、217、218、222、260、265或274位的氨基酸殘基位置的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基位置處的氨基酸殘基的取代；(b)淀粉酶變體，其中所述淀粉酶變體選自(i)α-淀粉酶，特征在于由Phadebasα-淀粉酶活性實(shí)驗(yàn)測(cè)定，其在溫度25℃-55℃和pH值為8-10下，比活度比Termamyl的比活度高至少25％；和/或(ii)根據(jù)(i)的α-淀粉酶，其包含在SEQ ID No.1中所示的氨基酸序列或與SEQ ID No.1中所示的氨基酸序列至少80％同源的α-淀粉酶，和/或(iii)根據(jù)(i)的α-淀粉酶，其包含在SEQ ID No.2中所示的氨基酸序列或與SEQ ID No.2中所示的氨基酸序列至少80％同源的α-淀粉酶，和/或(iv)根據(jù)(i)的α-淀粉酶，其包含以下N-端氨基酸序列His-His-Asn-Gly-Thr-Asn-Gly-Thr-Met-Met-Gln-Tyr-Phe-Glu-Trp-Tyr-Leu-Pro-Asn-Asp(SEQ ID No.3)或與N-端中所示的氨基酸序列(SEQID No.3)至少80％同源的α-淀粉酶，和/或(v)根據(jù)(i-iv)的α-淀粉酶，其中該α-淀粉酶可由嗜堿的芽孢桿菌種得到，和/或(vi)根據(jù)(v)的α-淀粉酶，其中該淀粉酶可由NCIB 12289、NCIB12512、NCIB12513和DSM935中的任何菌株得到，和/或(vii)α-淀粉酶，其與具有分別對(duì)應(yīng)于SEQ ID No.1、ID No.2或ID No.3的氨基酸序列的α-淀粉酶產(chǎn)生的抗體表現(xiàn)出陽(yáng)性免疫交叉反應(yīng)活性，和/或(viii)母體α-淀粉酶變體，其中母體α-淀粉酶(1)具有分別在SEQ ID No.1、ID No.2或ID No.4中所示的一種氨基酸序列，或(2)表現(xiàn)出與一個(gè)或多個(gè)所述的氨基酸序列至少80％同源，和/或與具有一個(gè)所述氨基酸序列的α-淀粉酶產(chǎn)生的抗體表現(xiàn)出免疫交叉反應(yīng)活性，和/或由一種DNA序列編碼，該DNA序列與編碼具有一個(gè)所述氨基酸序列的α-淀粉酶的DNA序列相同的探針雜交，該變體中(A)所述母體α-淀粉酶中缺失至少一個(gè)氨基酸殘基；和/或(B)所述母體α-淀粉酶的至少一個(gè)氨基酸殘基被不同的氨基酸殘基代替；和/或相對(duì)所述的母體α-淀粉酶，插入至少一個(gè)氨基酸殘基；所述變體具有α-淀粉酶活性并相對(duì)所述母體α-淀粉酶表現(xiàn)出至少一種以下性質(zhì)提高了熱穩(wěn)定性、提高了抗氧化的穩(wěn)定性；降低了對(duì)Ca離子的依賴(lài)性；在中性至相對(duì)高pH值下提高了穩(wěn)定性和/或α-淀粉分解活性；在相對(duì)高溫下提高了α-淀粉分解活性；和提高或降低了等電點(diǎn)(pI)，以便使α-淀粉酶變體的pI值更好地與介質(zhì)的pH匹配；和(c)一種或多種清洗輔助材料。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的清洗組合物，其中所述蛋白酶變體是由枯草芽孢桿菌，優(yōu)選由緩慢芽孢桿菌枯草溶菌素或枯草溶菌素309衍生得到。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的清洗組合物，其中所述蛋白酶變體包括在以下位置處的氨基酸殘基的取代在103位置和在以下236和245位的一個(gè)或多個(gè)位置，優(yōu)選在103和236位置和以下12、61、62、68、76、97、98、101、102、104、109、130、131、159、183、185、205、209、210、211、212、213、215、217、230、232、248、252、257、260、270和275位中的一個(gè)或多個(gè)位置，或在103和245位置和在以下12、61、62、68、76、97、98、101、102、104、109、130、131、159、170、183、185、205、209、210、211、212、213、215、217、222、230、232、248、252、257、260、261、270和275位中的一個(gè)或多個(gè)位置，更優(yōu)選在103、236和245位置和以下12、61、62、68、76、97、98、101、102、104、109、130、131、159、183、185、205、209、210、211、212、213、215、217、230、232、248、252、257、260、270和275位中的一個(gè)或多個(gè)位置。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的清洗組合物，其中所述蛋白酶變體包括選自以下的一組取代12/102/103/104/159/212/232/236/245/248/252；12/76/103/104/130/170/185/222/243/245；12/76/103/104/130/222/245/261； 12/76/103/104/222/245；12/76/103/104/130/222/245；61/68/103/104/159/232/236/245/248/252； 62/103/104/159/213/232/236/245/248/252；62/103/104/109/159/213/232/236/245/248/252；62/103/104/159/232/236/245/248/252；62/101/103/104/159/212/213/232/236/245/248/252；62/103/104/130/159/213/232/236/245/248/252；68/103/104/159/232/236/245/248/252/270；68/103/104/159/185/232/236/245/248/252；68/103/104/159/210/232/236/245/248/252；68/103/104/159/185/210/232/236/245/248/252；68/103/104/159/213/232/236/245/248/252；68/103/104/159/230/232/236/245；68/76/103/104/159/209/232/236/245；68/103/104/232/236/245/248/257/275；68/103/104/213/232/236/245/248/252；68/103/104/159/232/236/245/248/252；68/103/104/159/209/232/236/245；68/76/103/104/159/236； 68/76/103/104/159/236/245；68/76/103/104/159/232/236/245； 68/103/104/159/232/236/245/252；68/103/104/159/232/236/245；68/103/104/159/232/236/245/257；68/76/103/104/159/211/232/236/245； 68/76/103/104/159/215/232/236/245；68/103/104/159/210/232/236/245；68/103/104/159/213/232/236/245/260；68/76/103/104/159/213/232/236/245/260； 68/103/104/159/236；68/76/103/104/159/210/232/236/245/260； 68/103/104/159/236/245；68/103/104/159/183/232/236/245/248/252；68/76/103/104/159/236/245；68/103/104/232/236/245/257/275；68/103/104/159/213/232/236/245；76/103/222/245；76/103/104/159/232/236/245；76/103/104/159/213/232/236/245/260；76/103/104/159；76/103/104/131/159/232/236/245/248/252；76/103/104/222/245；97/103/104/159/232/236/245/248/252；98/102/103/104/159/212/232/236/245/248/252；98/103/104/159/232/236/245/248/252；101/103/104/159/232/236/245/248/252； 102/103/104/159/232/236/245/248/252；103/104/159/232/236/245； 103/104/159/232/236/245/248/252；103/104/159/205/209/232/236/245/257 103/104/159/232/245/248/252；103/104/159/205/209/210/232/236/245/257； 103/104/159/213/232/236/245/248/252；103/104/159/217/232/236/245/248/252； 103/104/130/159/232/236/245/248/252；103/104/159/230/236/245； 103/104/159/236/245；103/104/159/248/252/270； 103/104/131/159/232/236/245/248/252；103/104/159/205/209/232/236/245；和 103/104/159/232/236/245/257.
5.根據(jù)權(quán)利要求4的清洗組合物，其中所述蛋白酶變體包括選自以下的一組取代12R/76D/103A/104T/130T/222S/245R；12R/76D/103A/104I/222S/245R；12R/102A/103A/104I/159D/212G/232V/236H/245R/248D/252K；12R/76D/103A/104T/130G/222S/245R/261D；12R/76D/103A/104T/130G/170S/185D/222S/243D/245R；61E/68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K；62D/103A/104I/109R/159D/213R/232V/236H/245R/248D/252K；62D/103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/248D/252K；62D/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K；62D/103A/104I/130G/159D/213R/232V/236H/245R/248D/252K；62D/101G/103A/104I/159D/212G/213R/232V/236H/245R/248D/252K；68A/76D/103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/260A；68A/103A/104I/159D/2361；68A/103A/104I/159D/236H/245R；68A/76D/103A/104I/159D/210I/232V/236H/245R/260A；68A/103A/104I/159D/183D/232V/236H/245R/248D/252K；68A/103A/104I/159D/209W/232V/236H/245R；68A/76D/103A/104I/159D/211R/232V/236H/245R；68A/76D/103A/104I/159D/215R/232V/236H/245R；68A/103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/260A；68A/76D/103A/104I/159D/236H；68A/76D/103A/104I/159D/236H/245R；68A/76D/103A/104I/159D/232V/236H/245R；68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/252K；68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R；68A/103A/104I/159D/232V/20036H/245R/257V；68A/103A/104I/159D/185D/232V/236H/245R/248D/252K；68A/103A/104I/159D/210L/232V/236H/245R/248D/252K；68A/103A/104I/159D/185D/210L/232V/236H/245R/248D/252K；68A/103A/104I/159D/213E/232V/236H/245R/248D/252K；68A/103A/104I/159D/230V/232V/236H/245R；68A/76D/103A/104I/159D/209W/232V/236H/245R；68A/103A/104I/232V/236H/245R/248D/257V/275H；68A/103A/104I/232V/236H/245R/257V/275H；68A/103A/104I/213E/232V/236H/245R/248D/252K；68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K；68A/103A/104I/159D/210I/232V/236H/245R；68A/103A/104I/159D/210L/232V/236H/245R；68A/103A/104I/159D/213G/232V/236H/245R；68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K/270A；76D/103A/222S/245R；76D/103A/104I/159D/232V/236H/245R；76D/103A/104I/159D；76D/103A/104I/222S/245R；76D/103A/104I/131V/159D/232V/236H/245R/248D/252K；76D/103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/260A；97E/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K；98L/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K；98L/102A/103A/104I/159D/212G/232V/236H/245R/248D/252K；101G/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K；102A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K；103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K；103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/248D/252K；103A/104I/130G/159D/232V/236H/245R/248D/252K；103A/104I/159D/230V/236H/245R；103A/104I/159D/217E/232V/236H/245R/248D/252K；103A/104I/159D/236H/245R；103A/104I/159D/248D/252K/270V；103A/104I/159D/232V/236H/245R；103A/104I/159D/205I/209W/232V/236H/245R；103A/104I/159D/232V/236H/245R/257V；103A/1041/159D/205I/209W/232V/236H/245R/257V；103A/104I/131V/159D/232V/236H/245R/248D/252K；103A/104I/159D/205I/209W/210I/232V/236H/245R/257V； 和103A/104I/159D/232V/245R/248D/252K
6.根據(jù)權(quán)利要求1的清洗組合物，其中所述清洗輔助物質(zhì)選自表面活性劑、溶劑、緩沖劑、酶、污垢解脫劑、粘土污垢去除劑、分散劑、增白劑、抑泡劑、織物柔軟劑、增泡劑、酶穩(wěn)定劑、助洗劑、其他漂白劑、染料、香料、螯合劑和其混合物。
7.根據(jù)權(quán)利要求6的清洗組合物，其中所述清洗輔助物質(zhì)包括至少一種去污表面活性劑，優(yōu)選支化表面活性劑，更優(yōu)選中鏈支化的表面活性劑。
8.根據(jù)權(quán)利要求7的清洗組合物，其中清洗輔助物質(zhì)包括占組合物重量至少約0.1％表面活性劑，所述表面活性劑包括選自以下的物質(zhì)烷基苯磺酸鹽、伯烷基硫酸鹽、仲烷基硫酸鹽、烷基烷氧基硫酸鹽、烷基烷氧基羧酸鹽、烷基多苷和它們相應(yīng)的硫酸化多苷、a-磺化的脂肪酸酯、烷基和烷基酚烷氧基化物、甜菜堿和磺基甜菜堿、氧化胺、N-甲基葡糖酰胺、非離子伯醇乙氧基化物、帶有混合的乙氧基/丙氧基的非離子伯醇和其混合物。
9.根據(jù)權(quán)利要求8的清洗組合物，其還包含至少約5％助洗劑，其選自沸石、多羧酸鹽、層狀硅酸鹽、磷酸鹽和其混合物。
10.根據(jù)權(quán)利要求6的清洗組合物，其中所述清洗輔助物質(zhì)包括至少一種去污酶，其選自纖維素酶、脂肪酶、其他淀粉酶、磷脂酶、其他蛋白酶、過(guò)氧化物酶和其混合物.
11.根據(jù)權(quán)利要求6的清洗組合物，其中所述清洗輔助物質(zhì)包含至少一種漂白劑，其優(yōu)選選自過(guò)碳酸鹽、過(guò)硼酸鹽和其混合物，任選地，其還包含至少一種漂白活化劑，其優(yōu)選選自苯甲酰氧基苯磺酸鹽(BOBS)、壬酰氧基苯磺酸鹽(NOBS)、癸酰氧基苯磺酸鹽(C10-OBS)、辛酰氧基苯磺酸鹽(C8-OBS)、可過(guò)水解的酯、4-[N-(壬酰基)氨基己?；鮙苯磺酸鈉(NACA-OBS)、月桂基氧基苯磺酸鹽(LOBS或C12-OBS)、10-十一碳烯酰基氧基苯磺酸鹽(UDOBS或C11-OBS，在10-位置有不飽和度)和癸?；趸郊姿?DOBA)和其混合物，還任選地包含漂白催化劑，優(yōu)選3-(3，4-二氫異喹啉鎓)丙磺酸鹽。
12.根據(jù)權(quán)利要求1的清洗組合物，其中所述清洗組合物是織物清洗組合物，優(yōu)選是液體、顆粒、條、片、凝膠、粉末或泡沫體形式，其包含占該組合物重量至少約5％表面活性劑和至少約5％助洗劑。
13.根據(jù)權(quán)利要求1的清洗組合物，其中所述清洗組合物是織物清洗組合物，其包含(a)0.0001％-10％重量的所述蛋白酶變體；(b)0.0001％-0.1％重量的所述淀粉酶變體；(c)至少約5％重量表面活性劑，優(yōu)選其選自烷基苯磺酸鹽、伯烷基硫酸鹽、仲烷基硫酸鹽、烷基烷氧基硫酸鹽、烷基烷氧基羧酸鹽、烷基多苷和它們相應(yīng)的硫酸化多苷、a-磺化的脂肪酸酯、烷基和烷基酚烷氧基化物、甜菜堿和磺基甜菜堿、氧化胺、N-甲基葡糖酰胺、非離子伯醇乙氧基化物、帶有混合的乙氧基/丙氧基的非離子伯醇和其混合物；和其中另外助洗劑選自沸石、多羧酸鹽、層狀硅酸鹽、磷酸鹽和其混合物；和(d)至少約5％重量助洗劑，優(yōu)選其選自沸石、多羧酸鹽、層狀硅酸鹽、磷酸鹽和其混合物。
14.根據(jù)權(quán)利要求25的清洗組合物，其是包含至少約15％表面活性劑的濃縮粒狀織物清洗組合物形式。
15.一種清洗織物的方法，所述方法包括將需要清洗的織物與根據(jù)權(quán)利要求12或13的清洗組合物接觸。
16.根據(jù)權(quán)利要求1的清洗組合物，其中所述清洗組合物是洗餐具組合物，優(yōu)選是液體、顆粒、粉末、凝膠或片形式，其包含(a)0.0001％-10％重量所述蛋白酶變體；(b)按洗餐具組合物的重量計(jì)，0.0001％-0.1％所述淀粉酶變體；和(c)0.1％-10％重量表面活性劑。
17.一種清洗餐具的方法，所述方法包括將需要清洗的餐具與根據(jù)權(quán)利要求16的清洗組合物接觸。
18.一種個(gè)人清洗組合物，其包含(a)有效量的蛋白酶變體，其中所述蛋白酶變體包括在對(duì)應(yīng)于淀粉分解芽孢桿菌枯草溶菌素的103位的氨基酸殘基位置處用另一種天然產(chǎn)生的氨基酸殘基取代所述位置的氨基酸殘基，同時(shí)結(jié)合在對(duì)應(yīng)于淀粉分解芽孢桿菌枯草溶菌素的1、3、4、8、9、10、12、13、16、17、18、19、20、21、22、24、27、33、37、38、42、43、48、55、57、58、61、62、68、72、75、76、77、78、79、86、87、89、97、98、99、101、102、104、106、107、109、111、114、116、117、119、121、123、126、128、130、131、133、134、137、140、141、142、146、147、158、159、160、166、167、170、173、174、177、181、182、183、184、185、188、192、194、198、203、204、205、206、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、222、224、227、228、230、232、236、237、238、240、242、243、244、245、246、247、248、249、251、252、253、254、255、256、257、258、259、260、261、262、263、265、268、269、270、271、272、274和275位的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基位置處用另一種天然產(chǎn)生的氨基酸殘基取代所述位置的氨基酸殘基；其中當(dāng)所述蛋白酶變體包括在對(duì)應(yīng)于103和76位置處的氨基酸殘基的取代時(shí)，還存在在非對(duì)應(yīng)于淀粉分解芽孢桿菌枯草溶菌素的27、99、101、104、107、109、123、128、166、204、206、210、216、217、218、222、260、265或274位的氨基酸殘基位置的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基位置處的氨基酸殘基的取代；(b)淀粉酶變體，其中所述淀粉酶變體選自(i)α-淀粉酶，特征在于由Phadebasα-淀粉酶活性實(shí)驗(yàn)測(cè)定，其在溫度25℃-55℃和pH值為8-10下，比活度比Termamyl的比活度高至少25％；和/或(ii)根據(jù)(i)的α-淀粉酶，其包含在SEQ ID No.1中所示的氨基酸序列或與SEQ ID No.1中所示的氨基酸序列至少80％同源的α-淀粉酶，和/或(iii)根據(jù)(i)的α-淀粉酶，其包含在SEQ ID No.2中所示的氨基酸序列或與SEQ ID No.2中所示的氨基酸序列至少80％同源的α-淀粉酶，和/或(iv)根據(jù)(i)的α-淀粉酶，其包含以下N-端氨基酸序列His-His-Asn-Gly-Thr-Asn-Gly-Thr-Met-Met-Gln-Tyr-Phe-Glu-Trp-Tyr-Leu-Pro-Asn-Asp(SEQ ID No.3)或與N-端中所示的氨基酸序列(SEQID No.3)至少80％同源的α-淀粉酶，和/或(v)根據(jù)(i-iv)的α-淀粉酶，其中該α-淀粉酶可由嗜堿的芽孢桿菌種得到，和/或(vi)根據(jù)(v)的α-淀粉酶，其中該淀粉酶可由NCIB 12289、NCIB12512、NCIB12513和DSM935中的任何菌株得到，和/或(vii)α-淀粉酶，其與具有分別對(duì)應(yīng)于SEQ ID No.1、ID No.2或ID No.3的氨基酸序列的α-淀粉酶產(chǎn)生的抗體表現(xiàn)出陽(yáng)性免疫交叉反應(yīng)活性，和/或(viii)母體α-淀粉酶變體，其中母體α-淀粉酶(1)具有分別在SEQ ID No.1、ID No.2或ID No.4中所示的一種氨基酸序列，或(2)表現(xiàn)出與一個(gè)或多個(gè)所述的氨基酸序列至少80％同源，和/或與具有一個(gè)所述氨基酸序列的α-淀粉酶產(chǎn)生的抗體表現(xiàn)出免疫交叉反應(yīng)活性，和/或由一種DNA序列編碼，該DNA序列與編碼具有一個(gè)所述氨基酸序列的α-淀粉酶的DNA序列相同的探針雜交，該變體中(A)所述母體α-淀粉酶中缺失至少一個(gè)氨基酸殘基；和/或(B)所述母體α-淀粉酶的至少一個(gè)氨基酸殘基被不同的氨基酸殘基代替；和/或(C)相對(duì)所述的母體α-淀粉酶，插入至少一個(gè)氨基酸殘基；所述變體具有α-淀粉酶活性并相對(duì)所述母體α-淀粉酶表現(xiàn)出至少一種以下性質(zhì)提高了熱穩(wěn)定性、提高了抗氧化的穩(wěn)定性；降低了對(duì)Ca離子的依賴(lài)性；在中性至相對(duì)高pH值下提高了穩(wěn)定性和/或α-淀粉分解活性；在相對(duì)高溫下提高了α-淀粉分解活性；和提高或降低了等電點(diǎn)(pI)，以便使α-淀粉酶變體的pI值更好地與介質(zhì)的pH匹配；和(c)一種或多種清洗輔助材料。
19.根據(jù)權(quán)利要求18的個(gè)人清洗組合物，其中所述個(gè)人清洗組合物包含(a)0.001％-5％，優(yōu)選0.001％-2％，更優(yōu)選0.002％-0.8％重量所述蛋白酶變體；(b)按該個(gè)人清洗組合物的重量計(jì)，0.0001％-0.1％所述淀粉酶變體；和(c)0.1％-95％重量表面活性劑體系，優(yōu)選其包含選自以下的表面活性劑陰離子羧酸鹽、氧化胺、烷基葡糖苷、葡糖酰胺、烷基硫酸鹽、烷基醚硫酸鹽、?；u乙磺酸鹽、烷基磺基琥珀酸鹽、烷基磷酸酯、乙氧基化磷酸酯、烷基甘油醚磺酸鹽和其混合物，更優(yōu)選包含選自以下的表面活性劑皂、?；劝彼猁}、烷基肌氨酸鹽、月桂基氧化胺、椰油基氧化胺、椰油酰氨基丙基氧化胺、癸基葡糖苷、月桂基硫酸鹽、月桂醚硫酸鹽、C12-18?；u乙磺酸鹽和其混合物；和(d)任選地，0.05％-50％重量酶穩(wěn)定劑。
20.根據(jù)權(quán)利要求19的個(gè)人清洗組合物，其中所述表面活性劑是皂，按清洗組合物的重量計(jì)，其含量為至少約2％，優(yōu)選至少約10％，更優(yōu)選至少約25％。
21.根據(jù)權(quán)利要求20的個(gè)人清洗組合物，其中皂與蛋白酶變體的比例為2000∶1-8∶1，優(yōu)選400∶1-40∶1。
22.一種個(gè)人清洗方法，所述方法包括將需要清洗的人體或低級(jí)動(dòng)物體部分與根據(jù)權(quán)利要求18的清洗組合物接觸。
23.一種織物和/或洗餐具和/或硬表面清洗組合物，其包含(a)有效量的蛋白酶變體，其中所述蛋白酶變體包括在對(duì)應(yīng)于淀粉分解芽孢桿菌枯草溶菌素的62、212、230、232、252和257位中的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基位置處用另一種天然產(chǎn)生的氨基酸殘基取代所述位置的氨基酸殘基；(b)淀粉酶變體，其中所述淀粉酶變體選自(i)α-淀粉酶，特征在于由Phadebasα-淀粉酶活性實(shí)驗(yàn)測(cè)定，其在溫度25℃-55℃和pH值為8-10下，比活度比Termamyl的比活度高至少25％；和/或(ii)根據(jù)(i)的α-淀粉酶，其包含在SEQ ID No.1中所示的氨基酸序列或與SEQ ID No.1中所示的氨基酸序列至少80％同源的α-淀粉酶，和/或(iii)根據(jù)(i)的α-淀粉酶，其包含在SEQ ID No.2中所示的氨基酸序列或與SEQ ID No.2中所示的氨基酸序列至少80％同源的α-淀粉酶，和/或(iv)根據(jù)(i)的α-淀粉酶，其包含以下N-端氨基酸序列His-His-Asn-Gly-Thr-Asn-Gly-Thr-Met-Met-Gln-Tyr-Phe-Glu-Trp-Tyr-Leu-Pro-Asn-Asp(SEQ ID No.3)或與N-端中所示的氨基酸序列(SEQID No.3)至少80％同源的α-淀粉酶，和/或(v)根據(jù)(i-iv)的α-淀粉酶，其中該α-淀粉酶可由嗜堿的芽孢桿菌得到，和/或(vi)根據(jù)(v)的α-淀粉酶，其中該淀粉酶可由NCIB 12289、NCIB12512、NCIB12513和DSM935中的任何菌株得到，和/或(vii)α-淀粉酶，其與具有分別對(duì)應(yīng)于SEQ ID No.1、ID No.2或ID No.3的氨基酸序列的α-淀粉酶產(chǎn)生的抗體表現(xiàn)出陽(yáng)性免疫交叉反應(yīng)活性，和/或(viii)母體α-淀粉酶變體，其中母體α-淀粉酶(1)具有分別在SEQ ID No.1、ID No.2或ID No.4中所示的一種氨基酸序列，或(2)表現(xiàn)出與一個(gè)或多個(gè)所述的氨基酸序列至少80％同源，和/或與具有一個(gè)所述氨基酸序列的α-淀粉酶產(chǎn)生的抗體表現(xiàn)出免疫交叉反應(yīng)活性，和/或由一種DNA序列編碼，該DNA序列與編碼具有一個(gè)所述氨基酸序列的α-淀粉酶的DNA序列相同的探針雜交，該變體中(A)所述母體α-淀粉酶中缺失至少一個(gè)氨基酸殘基；和/或(B)所述母體α-淀粉酶的至少一個(gè)氨基酸殘基被不同的氨基酸殘基代替；和/或(C)相對(duì)所述的母體α-淀粉酶，插入至少一個(gè)氨基酸殘基；所述變體具有α-淀粉酶活性并相對(duì)所述母體α-淀粉酶表現(xiàn)出至少一種以下性質(zhì)提高了熱穩(wěn)定性、提高了抗氧化的穩(wěn)定性；降低了對(duì)Ca離子的依賴(lài)性；在中性至相對(duì)高pH值下提高了穩(wěn)定性和/或α-淀粉分解活性；在相對(duì)高溫下提高了α-淀粉分解活性；和提高或降低了等電點(diǎn)(pI)，以便使α-淀粉酶變體的pI值更好地與介質(zhì)的pH匹配；和(c)一種或多種清洗輔助材料。
24.根據(jù)權(quán)利要求23的清洗組合物，其中所述蛋白酶變體是由枯草芽孢桿菌，優(yōu)選緩慢芽孢桿菌枯草溶菌素或枯草溶菌素309衍生得到。
25.根據(jù)權(quán)利要求23的清洗組合物，其中所述蛋白酶變體包括在選自以下位置的一個(gè)或多個(gè)位置處的氨基酸殘基的取代(1)62位置和在以下103、104、109、159、213、232、236、245、248和252位置中的一個(gè)或多個(gè)位置；(2)212位置和在以下12、98、102、103、104、159、232、236、245、248和252位置中的一個(gè)或多個(gè)位置；(3)230位置和在以下68、103、104、159、232、236和245位置中的一個(gè)或多個(gè)位置；(4)232位置和在以下12、61、62、68、76、97、98、101、102、103、104、109、130、131、159、183、185、205、209、210、212、213、217、230、236、245、248、252、257、260、270和275位置中的一個(gè)或多個(gè)位置；(5)232位置和在以下103、104、236和245位置中的一個(gè)或多個(gè)位置；(6)232和103位置和在以下12、61、62、68、76、97、98、101、102、103、104、109、130、131、159、183、185、205、209、210、212、213、217、230、236、245、248、252、257、260、270和275位置中的一個(gè)或多個(gè)位置；(7)232和104位置和在以下12、61、62、68、76、97、98、101、102、103、104、109、130、131、159、183、185、205、209、210、212、213、217、230、236、245、248、252、257、260、270和275位置中的一個(gè)或多個(gè)位置；(8)232和236位置和在以下12、61、62、68、76、97、98、101、102、103、104、109、130、131、159、183、185、205、209、210、212、213、217、230、236、245、248、252、257、260、270和275位置中的一個(gè)或多個(gè)位置；(9)232和245位置和在以下12、61、62、68、76、97、98、101、102、103、104、109、130、131、159、183、185、205、209、210、212、213、217、230、236、245、248、252、257、260、270和275位置中的一個(gè)或多個(gè)位置；(10)232、103、104、236和245位置和在以下12、61、62、68、76、97、98、101、102、103、104、109、130、131、159、183、185、205、209、210、212、213、217、230、236、245、248、252、257、260、270和275位置中的一個(gè)或多個(gè)位置；(11)252位置和在以下12、61、62、68、97、98、101、102、103、104、109、130、131、159、183、185、210、212、213、217、232、236、245、248和270位置中的一個(gè)或多個(gè)位置；(12)252位置和在以下103、104、236和245位置中的一個(gè)或多個(gè)位置；(13)252和103位置和在以下12、61、62、68、97、98、101、102、103、104、109、130、131、159、183、185、210、212、213、217、232、236、245、248和270位置中的一個(gè)或多個(gè)位置；(14)252和104位置和在以下12、61、62、68、97、98、101、102、103、104、109、130、131、159、183、185、210、212、213、217、232、236、245、248和270位置中的一個(gè)或多個(gè)位置；(15)252和236位置和在以下12、61、62、68、97、98、101、102、103、104、109、130、131、159、183、185、210、212、213、217、232、236、245、248和270位置中的一個(gè)或多個(gè)位置；(16)252和245位置和在以下12、61、62、68、97、98、101、102、103、104、109、130、131、159、183、185、210、212、213、217、232、236、245、248和270位置中的一個(gè)或多個(gè)位置；(17)252、103、104、236和245位置和在以下12、61、62、68、97、98、101、102、103、104、109、130、131、159、183、185、210、212、213、217、232、236、245、248和270位置中的一個(gè)或多個(gè)位置；(18)257位置和在以下68、103、104、205、209、210、232、236、245和275位置中的一個(gè)或多個(gè)位置。
26.根據(jù)權(quán)利要求23的清洗組合物，其中所述蛋白酶變體包括選自以下的一組取代12/102/103/104/159/212/232/236/245/248/252；61/68/103/104/159/232/236/245/248/252；62/103/104/130/159/213/232/236/245/248/252；62/103/104/159/213/232/236/245/248/252；62/103/104/109/159/213/232/236/245/248/252；62/103/104/159/232/236/245/248/252；62/101/103/104/159/212/213/232/236/245/248/252；68/103/104/159/232/236/245/248/252/270；68/103/104/159/185/232/236/245/248/252；68/103/104/159/210/232/236/245/248/252；68/103/104/159/185/210/232/236/245/248/252；68/103/104/159/213/232/236/245/248/252；68/103/104/159/230/232/236/245；68/76/103/104/159/209/232/236/245；68/103/104/232/236/245/248/257/275；68/103/104/213/232/236/245/248/252；68/103/104/159/232/236/245/248/252；68/103/104/159/209/232/236/245；68/76/103/104/159/232/236/245； 68/103/104/159/232/236/245/252；68/103/104/159/232/236/245；68/103/104/159/232/236/245/257；68/76/103/104/159/211/232/236/245； 68/76/103/104/159/215/232/236/245；68/103/104/159/210/232/236/245；68/103/104/159/213/232/236/245/260；68/76/103/104/159/213/232/236/245/260； 68/76/103/104/159/210/232/236/245/260；68/103/104/159/183/232/236/245/248/252；68/103/104/232/236/245/257/275；68/103/104/159/213/232/236/245；76/103/104/159/232/236/245；76/103/104/159/213/232/236/245/260；76/103/104/131/159/232/236/245/248/252；97/103/104/159/232/236/245/248/252；98/103/104/159/232/236/245/248/252；98/102/103/104/159/212/232/236/245/248/252；101/103/104/159/232/236/245/248/252；102/103/104/159/232/236/245/248/252； 103/104/159/232/236/245；103/104/159/248/252/270； 103/104/159/232/236/245/248/252；103/104/159/205/209/232/236/245/257 103/104/159/232/245/248/252；03/104/159/205/209/210/232/236/245/257；103/104/159/213/232/236/245/248/252；03/104/159/217/232/236/245/248/252；103/104/130/159/232/236/245/248/252；03/104/131/159/232/236/245/248/252；103/104/159/205/209/232/236/245；和03/104/159/232/236/245/257.
27.根據(jù)權(quán)利要求26的清洗組合物，其中所述蛋白酶變體包括選自以下的一組取代12R/102A/103A/104I/159D/212G/232V/236H/245R/248D/252K；61E/68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K；62D/103A/1041/109R/159D/213R/232V/236H/245R/248D/25K；62D/103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/248D/252K；62D/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K；62D/103A/104I/130G/159D/213R/232V/236H/245R/248D/252K；62D/101G/103A/104I/159D/212G/213R/232V/236H/245R/248D/252K；68A/76D/103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/260A；68A/76D/103A/104I/159D/210I/232V/236H/245R/260A；68A/103A/104I/159D/183D/232V/236H/245R/248D/252K；68A/103A/104I/159D/209W/232V/236H/245R；68A/76D/103A/104I/159D/211R/232V/236H/245R；68A/76D/103A/104I/159D/215R/232V/236H/245R；68A/103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/260A；68A/76D/103A/104I/159D/232V/236H/245R；68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/252K；68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R；68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/257V；68A/103A/104I/159D/185D/232V/236H/245R/248D/252K；68A/103A/104I/159D/210L/232V/236H/245R/248D/252K；68A/103A/104I/159D/185D/210L/232V/236H/245R/248D/252K；68A/103A/104I/159D/213E/232V/236H/245R/248D/252K；68A/103A/104I/159D/230V/232V/236H/245R；68A/76D/103A/104I/159D/209W/232V/236H/245R；68A/103A/104I/232V/236H/245R/248D/257V/275H；68A/103A/104I/232V/236H/245R/257V/275H；68A/103A/104I/213E/232V/236H/245R/248D/252K；68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K；68A/103A/104I/159D/210I/232V/236H/245R；68A/103A/104I/159D/210L/232V/236H/245R；68A/103A/104I/159D/213G/232V/236H/245R；68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K/270A；76D/103A/104I/159D/232V/236H/245R；76D/103A/104I/131V/159D/232V/236H/245R/248D/252K；76D/103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/260A；97E/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K；98L/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K；98L/102A/103A/104I/159D/212G/232V/236H/245R/248D/252K；101G/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K；102A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K；103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K；103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/248D/252K；103A/104I/130G/159D/232V/236H/245R/248D/252K；103A/104I/159D/217E/232V/236H/245R/248D/252K；103A/104I/159D/248D/252K/270V；103A/104I/159D/232V/236H/245R；103A/104I/159D/205I/209W/232V/236H/245R；103A/104I/159D/232V/236H/245R/257V；103A/104I/159D/205I/209W/232V/236H/245R/257V；103A/104I/131V/159D/232V/236H/245R/248D/252K；103A/104I/159D/205I/209W/2101/232V/236H/245R/257V；和103A/1041/159D/232V/245R/248D/252K.
28.根據(jù)權(quán)利要求23的清洗組合物，其中所述清洗輔助物質(zhì)選自表面活性劑、溶劑、緩沖劑、酶、污垢解脫劑、粘土污垢去除劑、分散劑、增白劑、抑泡劑、織物柔軟劑、增泡劑、酶穩(wěn)定劑、助洗劑、其他漂白劑、染料、香料、螯合劑和其混合物。
29.根據(jù)權(quán)利要求28的清洗組合物，其中所述清洗輔助物質(zhì)包括至少一種去污表面活性劑，優(yōu)選支化表面活性劑，更優(yōu)選中鏈支化的表面活性劑。
30.根據(jù)權(quán)利要求28的清洗組合物，其中清洗輔助物質(zhì)包括占組合物重量至少約0.1％表面活性劑，所述表面活性劑包括選自以下的物質(zhì)烷基苯磺酸鹽、伯烷基硫酸鹽、仲烷基硫酸鹽、烷基烷氧基硫酸鹽、烷基烷氧基羧酸鹽、烷基多苷和它們相應(yīng)的硫酸化多苷、a-磺化的脂肪酸酯、烷基和烷基酚烷氧基化物、甜菜堿和磺基甜菜堿、氧化胺、N-甲基葡糖酰胺、非離子伯醇乙氧基化物、帶有混合的乙氧基/丙氧基的非離子伯醇和其混合物。
31.根據(jù)權(quán)利要求30的清洗組合物，其還包含至少約5％助洗劑，其選自沸石、多羧酸鹽、層狀硅酸鹽、磷酸鹽和其混合物。
32.根據(jù)權(quán)利要求28的清洗組合物，其中所述清洗輔助物質(zhì)包括至少一種去污酶，其選自纖維素酶、脂肪酶、淀粉酶、磷脂酶、其他蛋白酶、過(guò)氧化物酶和其混合物。
33.根據(jù)權(quán)利要求28的清洗組合物，其中所述清洗輔助物質(zhì)包含至少一種漂白劑，其優(yōu)選選自過(guò)碳酸鹽、過(guò)硼酸鹽和其混合物，任選地，其還包含至少一種漂白活化劑，其優(yōu)選選自苯甲酰氧基苯磺酸鹽(BOBS)、壬酰氧基苯磺酸鹽(NOBS)、癸酰氧基苯磺酸鹽(C10-OBS)、辛酰氧基苯磺酸鹽(C8-OBS)、可過(guò)水解的酯、4-[N-(壬?；?氨基己?；鮙苯磺酸鈉(NACA-OBS)、月桂基氧基苯磺酸鹽(LOBS或C12-OBS)、10-十一碳烯?；趸交撬猁}(UDOBS或C11-OBS，在10-位置有不飽和度)和癸?；趸郊姿?DOBA)和其混合物，還任選地包含漂白催化劑，優(yōu)選3-(3，4-二氫異喹啉鎓)丙磺酸鹽。
34.根據(jù)權(quán)利要求23的清洗組合物，其中所述清洗組合物是織物清洗組合物，優(yōu)選是液體、顆粒、條、片、凝膠、粉末或泡沫體形式，其包含占該組合物重量至少約5％表面活性劑和至少約5％助洗劑。
35.根據(jù)權(quán)利要求23的清洗組合物，其中所述清洗組合物是織物清洗組合物，其包含(a)0.0001％-10％重量的所述蛋白酶變體；(b)按織物清洗組合物的重量計(jì)，0.0001％-0.1％重量的所述淀粉酶變體；(c)至少約5％重量表面活性劑，優(yōu)選其選自烷基苯磺酸鹽、伯烷基硫酸鹽、仲烷基硫酸鹽、烷基烷氧基硫酸鹽、烷基烷氧基羧酸鹽、烷基多苷和它們相應(yīng)的硫酸化多苷、a-磺化的脂肪酸酯、烷基和烷基酚烷氧基化物、甜菜堿和磺基甜菜堿、氧化胺、N-甲基葡糖酰胺、非離子伯醇乙氧基化物、帶有混合的乙氧基/丙氧基的非離子伯醇和其混合物；和其中另外助洗劑選自沸石、多羧酸鹽、層狀硅酸鹽、磷酸鹽和其混合物；和(d)至少約5％重量助洗劑，優(yōu)選其選自沸石、多羧酸鹽、層狀硅酸鹽、磷酸鹽和其混合物。
36.根據(jù)權(quán)利要求35的清洗組合物，其是包含至少約15％表面活性劑的濃縮粒狀織物清洗組合物形式。
37.一種清洗織物的方法，所述方法包括將需要清洗的織物與根據(jù)權(quán)利要求34或35的清洗組合物接觸。
38.根據(jù)權(quán)利要求23的清洗組合物，其中所述清洗組合物是洗餐具組合物，優(yōu)選是液體、顆粒、粉末、凝膠或片形式，其包含(a)0.0001％-10％重量所述蛋白酶變體；和(b)0.1％-10％重量表面活性劑。
39.一種清洗餐具的方法，所述方法包括將需要清洗的餐具與根據(jù)權(quán)利要求38的清洗組合物接觸。
40.一種個(gè)人清洗組合物，其包含(a)有效量的蛋白酶變體，其中所述蛋白酶變體包括在對(duì)應(yīng)于淀粉分解芽孢桿菌枯草溶菌素的62、212、230、232、252和257位中的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基位置處用另一種天然產(chǎn)生的氨基酸殘基取代所述位置的氨基酸殘基；(b)淀粉酶變體，其中所述淀粉酶變體選自(i)α-淀粉酶，特征在于由Phadebasα-淀粉酶活性實(shí)驗(yàn)測(cè)定，其在溫度25℃-55℃和pH值為8-10下，比活度比Termamyl的比活度高至少25％；和/或(ii)根據(jù)(i)的α-淀粉酶，其包含在SEQ ID No.1中所示的氨基酸序列或與SEQ ID No.1中所示的氨基酸序列至少80％同源的α-淀粉酶，和/或(iii)根據(jù)(i)的α-淀粉酶，其包含在SEQ ID No.2中所示的氨基酸序列或與SEQ ID No.2中所示的氨基酸序列至少80％同源的α-淀粉酶，和/或(iv)根據(jù)(i)的α-淀粉酶，其包含以下N-端氨基酸序列His-His-Asn-Gly-Thr-Asn-Gly-Thr-Met-Met-Gln-Tyr-Phe-Glu-Trp-Tyr-Leu-Pro-Asn-Asp(SEQ ID No.3)或與N-端中所示的氨基酸序列(SEQID No.3)至少80％同源的α-淀粉酶，和/或(v)根據(jù)(i-iv)的α-淀粉酶，其中該α-淀粉酶可由嗜堿的芽孢桿菌種得到，和/或(vi)根據(jù)(v)的α-淀粉酶，其中該淀粉酶可由NCIB 12289、NCIB12512、NCIB12513和DSM935中的任何菌株得到，和/或(vii)α-淀粉酶，其與具有分別對(duì)應(yīng)于SEQ ID No.1、ID No.2或ID No.3的氨基酸序列的α-淀粉酶產(chǎn)生的抗體表現(xiàn)出陽(yáng)性免疫交叉反應(yīng)活性，和/或(viii)母體α-淀粉酶變體，其中母體α-淀粉酶(1)具有分別在SEQ ID No.1、ID No.2或ID No.4中所示的一種氨基酸序列，或(2)表現(xiàn)出與一個(gè)或多個(gè)所述的氨基酸序列至少80％同源，和/或與具有一個(gè)所述氨基酸序列的α-淀粉酶產(chǎn)生的抗體表現(xiàn)出免疫交叉反應(yīng)活性，和/或由一種DNA序列編碼，該DNA序列與編碼具有一個(gè)所述氨基酸序列的α-淀粉酶的DNA序列相同的探針雜交，該變體中(A)所述母體α-淀粉酶中缺失至少一個(gè)氨基酸殘基；和/或(B)所述母體α-淀粉酶的至少一個(gè)氨基酸殘基被不同的氨基酸殘基代替；和/或(C)相對(duì)所述的母體α-淀粉酶，插入至少一個(gè)氨基酸殘基；所述變體具有α-淀粉酶活性并相對(duì)所述母體α-淀粉酶表現(xiàn)出至少一種以下性質(zhì)提高了熱穩(wěn)定性、提高了抗氧化的穩(wěn)定性；降低了對(duì)Ca離子的依賴(lài)性；在中性至相對(duì)高pH值下提高了穩(wěn)定性和/或α-淀粉分解活性；在相對(duì)高溫下提高了α-淀粉分解活性；和提高或降低了等電點(diǎn)(pI)，以便使α-淀粉酶變體的pI值更好地與介質(zhì)的pH匹配；和(c)一種或多種清洗輔助材料。
41.根據(jù)權(quán)利要求40的個(gè)人清洗組合物，其中所述個(gè)人清洗組合物包含(a)0.001％-5％，優(yōu)選0.001％-2％，更優(yōu)選0.002％-0.8％重量所述蛋白酶變體；(b)按該個(gè)人清洗組合物的重量計(jì)，0.0001％-0.1％所述淀粉酶變體；和(c)0.1％-95％重量表面活性劑體系，優(yōu)選其包含選自以下的表面活性劑陰離子羧酸鹽、氧化胺、烷基葡糖苷、葡糖酰胺、烷基硫酸鹽、烷基醚硫酸鹽、?；u乙磺酸鹽、烷基磺基琥珀酸鹽、烷基磷酸酯、乙氧基化磷酸酯、烷基甘油醚磺酸鹽和其混合物，更優(yōu)選包含選自以下的表面活性劑皂、?；劝彼猁}、烷基肌氨酸鹽、月桂基氧化胺、椰油基氧化胺、椰油酰氨基丙基氧化胺、癸基葡糖苷、月桂基硫酸鹽、月桂醚硫酸鹽、C12-18?；u乙磺酸鹽和其混合物；和(d)任選地，0.05％-50％重量酶穩(wěn)定劑。
42.根據(jù)權(quán)利要求41的個(gè)人清洗組合物，其中所述表面活性劑是皂，按清洗組合物的重量計(jì)，其含量為至少約2％，優(yōu)選至少約10％，更優(yōu)選至少約25％。
43.根據(jù)權(quán)利要求42的個(gè)人清洗組合物，其中皂與蛋白酶變體的比例為2000∶1-8∶1，優(yōu)選400∶1-40∶1。
44.一種個(gè)人清洗方法，所述方法包括將需要清洗的人體或低級(jí)動(dòng)物體部分與根據(jù)權(quán)利要求40的清洗組合物接觸。
45.一種預(yù)處理需要清洗的織物的方法，所述方法包括在用含有表面活性劑的水溶液洗滌所述織物之前，將所述織物與根據(jù)權(quán)利要求12或13的漂白組合物接觸。
46.一種預(yù)處理需要清洗的織物的方法，所述方法包括在用含有表面活性劑的水溶液洗滌所述織物之前，將所述織物與根據(jù)權(quán)利要求34或35的漂白組合物接觸。
全文摘要
本發(fā)明涉及包含蛋白酶變體的清洗組合物。一種清洗組合物包含一種蛋白酶變體,和一種或多種清洗輔助物質(zhì),所述蛋白酶變體包括在對(duì)應(yīng)于淀粉分解芽孢桿菌枯草溶菌素的103位的氨基酸殘基位置處用另一種天然產(chǎn)生的氨基酸殘基取代所述位置的氨基酸殘基,同時(shí)結(jié)合在對(duì)應(yīng)于淀粉分解芽孢桿菌枯草溶菌素的1、3、4、8、9、10、12、13、16、17、18、19、20、21、22、24、27、33、37、38、42、43、48、55、57、58、61、62、68、72、75、76、77、78、79、86、87、89、97、98、99、101、102、104、106、107、109、111、114、116、117、119、121、123、126、128、130、131、133、134、137、140、141、142、146、147、158、159、160、166、167、170、173、174、177、181、182、183、184、185、188、192、194、198、203、204、205、206、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、222、224、227、228、230、232、236、237、238、240、242、243、244、245、246、247、248、249、251、252、253、254、255、256、257、258、259、260、261、262、263、265、268、269、270、271、272、274和275位的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基位置處用另一種天然產(chǎn)生的氨基酸殘基取代所述位置的氨基酸殘基;其中當(dāng)所述蛋白酶變體包括在對(duì)應(yīng)于103和76位置處的氨基酸殘基的取代時(shí),還存在在非對(duì)應(yīng)于淀粉分解芽孢桿菌枯草溶菌素的27、99、101、104、107、109、123、128、166、204、206、210、216、217、218、222、260、265或274位的氨基酸殘基位置的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基位置處的氨基酸殘基的取代。另一種清洗組合物包含一種蛋白酶變體,一種淀粉酶變體和一種或多種清洗輔助物質(zhì),所述蛋白酶變體包括在對(duì)應(yīng)于淀粉分解芽孢桿菌枯草溶菌素的62、212、230、232、252和257位中的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基位置處用另一種天然產(chǎn)生的氨基酸殘基取代所述位置的氨基酸殘基。還提供了使用清洗組合物的方法。
文檔編號(hào)C11D7/42GK1327476SQ98812640
公開(kāi)日2001年12月19日 申請(qǐng)日期1998年10月23日 優(yōu)先權(quán)日1997年10月23日
發(fā)明者C·K·高希, A·C·貝克, R·奧塔尼, A·布施, M·S·肖維爾 申請(qǐng)人:寶潔公司