一種封閉式快速制備血小板裂解液裝置的制造方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本實(shí)用新型屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種血小板裂解液制備裝置。
【背景技術(shù)】
[0002]哺乳動物的血液由55%血漿、45%血液細(xì)胞組成的，其中血液細(xì)胞又可以分為紅細(xì)胞、白細(xì)胞和血小板三類。血小板在血液細(xì)胞中占比小于I %，在生理狀態(tài)下，起到維持血管內(nèi)皮的完整性，參與止血和凝血作用，當(dāng)身體創(chuàng)傷后，血小板啟動凝血機(jī)制，釋放出凝血因子、促血管活性因子和生長因子等成分，對早期的創(chuàng)傷愈合、血栓形成、組織修復(fù)起著重要的調(diào)節(jié)作用。
[0003]正常人血液中血小板計(jì)數(shù)為100?300 X 19/升，當(dāng)血液中血小板低于0.5 X 19/升時容易出血。有些疾病會伴隨著血小板缺少癥，因此在臨床疾病治療上輸入血小板可以用于救治一些因各種原因造成的血小板減少或功能異常的患者，例如白血病、再生障礙性貧血、淋巴瘤、骨髓移植前等血液病患者以及因放化療而引起骨髓抑制的癌癥病人，其中有很多患者需要依靠不間斷地輸注血小板來維持生命。另外，研宄表明，血小板中有很多細(xì)胞生長因子和調(diào)節(jié)因子，在多種生理病理?xiàng)l件下可以起到對機(jī)體的修復(fù)作用，比如血小板衍生生長因子(roGF)是由血小板的a顆粒合成的糖蛋白，主要通過與成纖維細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和巨噬細(xì)胞上的a受體結(jié)合，激活衰老受損局部細(xì)胞的有絲分裂，增加細(xì)胞基質(zhì)產(chǎn)物，使再生細(xì)胞增多，在激發(fā)新血管形成和促進(jìn)已有血管生長中也起到重要作用，PDGF是一種對高效促有絲分裂的因子，尤其對中胚層來源的細(xì)胞，包括肌肉細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞有促進(jìn)分裂和繁殖作用；轉(zhuǎn)化生長因子(TGF-β)是一種可以控制細(xì)胞增殖和分化的糖蛋白，可以促進(jìn)成纖維細(xì)胞的擴(kuò)增、促進(jìn)合成膠原和纖維蛋白原又掉骨基質(zhì)的沉淀和抑制骨吸收，同時TGF-β參與體內(nèi)許多炎癥反應(yīng)，是體內(nèi)多功能的基礎(chǔ)抗炎細(xì)胞因子；纖維細(xì)胞生長因子(FGF)能促進(jìn)血管新生，激發(fā)新活細(xì)胞生產(chǎn)，加速損傷組織修復(fù)和胚胎發(fā)育；表皮生長因子(EGF)能夠修復(fù)上皮細(xì)胞，加速細(xì)胞繁殖和分化；血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)能產(chǎn)生膠原蛋白，激生透明質(zhì)酸，從而有較強(qiáng)修復(fù)組織作用和促進(jìn)血管生成作用；胰島生長因子-1是成纖維細(xì)胞趨化劑并能促進(jìn)蛋白合成和骨形成作用。
[0004]利用血小板中營養(yǎng)因子進(jìn)行臨床治療可以采取兩種形式，一種是利用多次離心辦法將血小板富集濃縮后制成的富血小板血漿，然后利用凝血酶和鈣離子誘導(dǎo)其血小板釋放細(xì)胞因子，這種誘導(dǎo)方式是一種緩慢釋放的過程。另外一種方法就是將制備完成的盡量少含紅細(xì)胞的富血小板血漿利用凍融原理進(jìn)行裂解，經(jīng)過離心后去除血小板膜和其他細(xì)胞碎片，上清液成為血小板裂解液，此方法是個快速血小板中營養(yǎng)因子釋放方法，在骨、軟骨修復(fù)、皮膚損傷修復(fù)、常規(guī)方法難以修復(fù)的韌帶損傷修復(fù)、以及由于手術(shù)造成的骨缺損、頒面部重構(gòu)、牙齦缺損修復(fù)等過程都起到重要作用。由于血小板中的各種因子有促進(jìn)各類細(xì)胞增殖作用，在自體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)、自體脂肪干細(xì)胞培養(yǎng)中，可以采用供著自身的外周血血小板裂解液代替商業(yè)化動物血清，培養(yǎng)完成的細(xì)胞在移植人體的過程中沒有任何動物源和外源蛋白。近年來臍帶血干細(xì)胞庫的建立多采取體積降低方案，只需儲存含有干細(xì)胞的有核細(xì)胞部分，而將多余的臍帶血血漿去掉，這種方法又為富血小板來源打開了新渠道。研宄對比血小板裂解液和富血小板血漿發(fā)現(xiàn)，富血小板血漿存在較強(qiáng)的免疫原性，多用于自體移植，而血小板裂解液制備過程中不僅去除了殘余細(xì)胞結(jié)構(gòu)，降低了免疫原性，而且還保留了其中的多種生長因子，可為異體或異種移植創(chuàng)造條件。因此，如作為構(gòu)建組織工程化組織的潛在選擇，血小板裂解液可能具有比富小板血漿更優(yōu)越的應(yīng)用前景。
[0005]目前進(jìn)行血小板裂解液的制備方法都是通過在實(shí)驗(yàn)室潔凈環(huán)境開放式且手動分離的，這些方法中在多次離心并去掉紅細(xì)胞和大部分血漿的過程都是靠人工、用移液管或者吸管將不需要的組分分離后去除后制備得到富血小板血漿，然后在-80度低溫反復(fù)凍融裂解紅細(xì)胞，最終再離心取出上清液后獲得血小板裂解液。這種開放式方法多次需要人工進(jìn)行組分轉(zhuǎn)移，容易造成制備過程污染；同時由于樣本在-80度完全凍透需要幾個小時的時間，因此整個過程耗時長、采用的耗材種類和數(shù)量均較多；而且人工轉(zhuǎn)移紅細(xì)胞的方式也會造成過多紅細(xì)胞殘留和血小板流失。
【實(shí)用新型內(nèi)容】
[0006]本實(shí)用新型為克服上述手動、開放式制備血小板裂解液的不足，而提供了一種結(jié)構(gòu)簡單且使用方便、快捷的封閉式血小板裂解液制備裝置。
[0007]本實(shí)用新型的一種封閉式快速制備血小板裂解液裝置，它包括采血袋、轉(zhuǎn)移袋、凍融袋、16G采血針、針套、管道、止流夾一、止流夾二、止流夾三、連接管一和連接管二；
[0008]其中，采血袋與轉(zhuǎn)移袋通過連接管一連通，并在轉(zhuǎn)移袋下方的連接管一上設(shè)置有止流夾二 ；凍融袋與采血袋通過連接管二連通，并在采血袋下方的連接管二上設(shè)置有止流夾三；
[0009]采血袋通過管道與16G采血針連通，且在采血袋上方的管道上設(shè)置有止流夾一，所述的針套包裹16G采血針；
[0010]采血袋的左上端和右上端分別設(shè)置懸掛孔三和懸掛孔四；凍融袋的左上端和右上端分別設(shè)置懸掛孔一和懸掛孔二，并且凍融袋上端中間位置設(shè)置有樣本口。
[0011]本實(shí)用新型的裝置由一個三聯(lián)袋和三根導(dǎo)管組成。所述采血袋為50?200ml的無菌袋，內(nèi)裝抗凝劑。所述轉(zhuǎn)移袋為50?200ml無菌袋。所述凍融袋為25?10ml無菌袋。所述導(dǎo)管一根為帶有采血針的導(dǎo)管，一根將采血袋和轉(zhuǎn)移袋連接、一根將采血袋和凍融袋連接起來。導(dǎo)管上均有止流夾，防止液體在袋子之間隨意流動。導(dǎo)管可以為高頻熱封或超聲波焊接后閉合，從而在制備完成后將三袋分離。
[0012]本實(shí)用新型包含以下有益效果:
[0013]1、采用本實(shí)用新型的裝置進(jìn)行操作時，全程操作人員沒有在開放環(huán)境直接接觸樣本，使得樣本出現(xiàn)因?yàn)槿藛T操作帶進(jìn)的污染風(fēng)險極小，臨床應(yīng)用過程中安全性高。
[0014]2、本實(shí)用新型的裝置的采血袋和凍融袋均采用梯形設(shè)計(jì)，在分離血漿層和紅細(xì)胞層的時候分界面窄，可以起到兩相充分分離的作用。在離心完成后進(jìn)行紅細(xì)胞和血小板血漿分離過程、含血小板白膜層和去血小板血漿分離過程、血小板膜和血小板裂解液上清的分離過程分界面的面積小，紅細(xì)胞等不需要相分離重復(fù)。
[0015]3、本實(shí)用新型的裝置凍融袋選用的材質(zhì)可以耐受-196度凍融，因此將血小板裂解液制備環(huán)境從-80度冰箱的幾個小時，減小到了在液氮中快速凍融的幾分鐘，因此大大提高了制備效率，從而實(shí)現(xiàn)分離后的血小板在袋中直接、快速液氮凍融裂解且離心后有效分咼。
[0016]本實(shí)用新型構(gòu)思簡潔，能夠在封閉環(huán)境下分離血小板和血小板裂解液，沒有人員和樣本的直接接觸，減少了被污染的機(jī)會提高了分離過程的安全性，節(jié)省了時間。
【附圖說明】
[0017]圖1為本實(shí)用新型的結(jié)構(gòu)示意圖。
【具體實(shí)施方式】
[0018]為進(jìn)一步理解本實(shí)用新型的目的、結(jié)構(gòu)、特征和功能，以下提供了結(jié)合【具體實(shí)施方式】的詳細(xì)的描述。
[0019]【具體實(shí)施方式】一:結(jié)合圖說明本實(shí)施方式，本實(shí)施方式的一種封閉式快速制備血小板裂解液裝置，它包括采血袋1、轉(zhuǎn)移袋2、凍融袋3、16G采血針4、針套5、管道6、止流夾一 7、止流夾二 8、止流夾三9、連接管一 10和連接管二 11 ；
[0020]其中，采血袋I與轉(zhuǎn)移袋2通過連接管一 10連通，并在轉(zhuǎn)移袋2下方的連接管一10上設(shè)置有止流夾二 8 ;凍融袋3與采血袋I通過連接管二 11連通，并在采血袋I下方的連接管二 11上設(shè)置有止流夾三9 ；
[0021]采血袋I通過管道6與16G采血針4連通，且在采血袋I上方的管道6上設(shè)置有止流夾一 7，所述的針套5包裹16G采血針4 ；
[0022]采血袋I的左上端和右上端分別設(shè)置懸掛孔三14和懸掛孔四15 ;凍融袋3的左上端和右上端分別設(shè)置懸掛孔一 12和懸掛孔二 13，并且凍融袋3上端中間位置設(shè)置有樣本P 16。
[0023]本實(shí)施方式的懸掛孔一 12、懸掛孔二 13、懸掛孔三14和懸掛孔四15方便袋子的懸掛、提拉、夾緊等操作。
[0024]本實(shí)施方式的樣本口 16方便進(jìn)行血小板計(jì)數(shù)和臨床使用。
[0025]本實(shí)施方式的采血袋I在離心機(jī)內(nèi)擺放方法是懸掛孔三14和懸掛孔四15端向上放置，方便在低速離心完后，打開止流夾二 8，將紅細(xì)胞層通過連接管一 10以重力方式排放到轉(zhuǎn)移袋2中，然后，在第二次高速離心完后，打開止流夾三9，將富血小板血漿以重力的方式通過連接管一 10排放到凍融袋3中。裝有富血小板血漿的凍融袋3浸泡到液氮中，迅速結(jié)冰，然后在37度水浴快速復(fù)蘇，以此方法反復(fù)凍融后進(jìn)行離心。
[0026]本實(shí)施方式的凍融袋3在離心機(jī)內(nèi)擺放方法是懸掛孔一 12和懸掛孔二 13端向上放置，方便離心完成后，打開止流夾三9，將血小板膜和其他細(xì)胞碎片以重力的形式，排放到采血袋I中，從而使得血小板裂解液上清存留在凍融袋3中。
[0