Artalbic acid的衍生物的組合物用于制備抗紅細胞低下性貧血藥物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種Artalbic acid的O?(二氯乙胺基)乙基與O?(二(2?甲硫基乙基)胺基)乙基衍生物的組合物在抗紅細胞低下性貧血藥物中的應(yīng)用，本發(fā)明涉及有機合成和藥物化學領(lǐng)域，具體涉及Artalbic acid的O?(二氯乙胺基)乙基與O?(二(2?甲硫基乙基)胺基)乙基衍生物的組合物、制備方法及其在制備抗紅細胞低下性貧血藥物上的用途。本發(fā)明公開了一種Artalbic acid的O?(二氯乙胺基)乙基與O?(二(2?甲硫基乙基)胺基)乙基衍生物的組合物及其制備方法。藥理學實驗表明，本發(fā)明的Artalbic acid的O?(二氯乙胺基)乙基與O?(二(2?甲硫基乙基)胺基)乙基衍生物的組合物具有抗紅細胞低下性貧血的作用，具有開發(fā)抗紅細胞低下性貧血藥物的價值。
【專利說明】
Arta I b i c ac i d的衍生物的組合物用于制備抗紅細胞低下性 貧血藥物
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及有機合成和藥物化學領(lǐng)域，具體涉及組合物、制備方法及其用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 基于不同的臨床特點，貧血有不同的分類。如:按貧血進展速度分急、慢性貧血;按 骨髓紅系增生情況分增生性貧血(如溶血性貧血、缺鐵性貧血、巨幼細胞貧血等）和增生低 下性貧血(如再生障礙性貧血）。
[0003] 臨床上常從貧血發(fā)病機制和病因的分類：
[0004] 1.紅細胞生成減少性貧血
[0005] 造血細胞、骨髓造血微環(huán)境和造血原料的異常影響紅細胞生成，可形成紅細胞生 成減少性貧血。
[0006] (1)造血干祖細胞異常所致貧血
[0007] 1)再生障礙性貧血(AA)AA是一種骨髓造血功能衰竭癥，與原發(fā)和繼發(fā)的造血干祖 細胞損害有關(guān)。部分全血細胞減少癥的發(fā)病機制與B細胞產(chǎn)生抗骨髓細胞自身抗體，進而破 壞或抑制骨髓造血細胞有關(guān)。
[0008] 2)純紅細胞再生障礙貧血(PRCA)PRCA是指骨髓紅系造血干祖細胞受到損害，進而 引起貧血。依據(jù)病因，該病可分為先天性和后天性兩類。先天性PRCA即Diamond-Blackfan綜 合征，系遺傳所致;后天性PRCA包括原發(fā)、繼發(fā)兩類。有學者發(fā)現(xiàn)部分原發(fā)性PRCA患者血清 中有自身EPO或幼紅細胞抗體。繼發(fā)性PRCA主要有藥物相關(guān)型、感染相關(guān)型(細菌和病毒，如 微小病毒出 9、肝炎病毒等）、自身免疫病相關(guān)型、淋巴細胞增殖性疾病相關(guān)型（如胸腺瘤、淋 巴瘤、漿細胞病和淋巴細胞白血病等）以及急性再生障礙危象等。
[0009] 3)先天性紅細胞生成異常性貧血(CDA) CDA是一類遺傳性紅系干祖細胞良性克隆 異常所致的、以紅系無效造血和形態(tài)異常為特征的難治性貧血。根據(jù)遺傳方式，該病可分為 常染色體隱陛遺傳型和顯性遺傳型。
[0010] 4)造血系統(tǒng)惡性克隆性疾病這些疾病造血干祖細胞發(fā)生了質(zhì)的異常，包括骨髓增 生異常綜合征及各類造血系統(tǒng)腫瘤性疾病如白血病等。前者因為病態(tài)造血，高增生，高凋 亡，出現(xiàn)原位溶血;后者腫瘤性增生、低凋亡和低分化，造血調(diào)節(jié)也受到影響，從而使正常成 熟紅細胞減少而發(fā)生貧血。
[0011] (2)造血微環(huán)境異常所致貧血
[0012] 造血微環(huán)境包括骨髓基質(zhì)，基質(zhì)細胞和細胞因子。
[0013] 1)骨髓基質(zhì)和基質(zhì)細胞受損所致貧血骨髓壞死、骨髓纖維化、骨髓硬化癥、大理石 病、各種髓外腫瘤性疾病的骨髓轉(zhuǎn)移以及各種感染或非感染性骨髓炎，均可因損傷骨髓基 質(zhì)和基質(zhì)細胞，造血微環(huán)境發(fā)生異常而影響血細胞生成。
[0014] 2)造血調(diào)節(jié)因子水平異常所致貧血干細胞因子(SCF)、白細胞介素（IL)、粒-單系 集落刺激因子(GM-CSF)、粒系集落刺激因子(G-CSF)、紅細胞生成素(EPO)、血小板生成素 (TPO)、血小板生長因子(TGF)、腫瘤壞死因子(TNF)和干擾素（IFN)等均具有正負調(diào)控造血 作用。腎功能不全、肝病和垂體或甲狀腺功能低下等時產(chǎn)生EPO不足;腫瘤性疾病或某些病 毒感染會誘導(dǎo)機體產(chǎn)生較多的造血負調(diào)控因子如TNF、IFN、炎癥因子等，均可導(dǎo)致慢性病性 貧血(ACD)。
[0015] (3)造血原料不足或利用障礙所致貧血
[0016] 造血原料是指造血細胞增殖、分化、代謝所必需的物質(zhì)，如蛋白質(zhì)、脂類、維生素 (葉酸、維生素 B12等）、微量元素(鐵、銅、鋅等)等。任一種造血原料不足或利用障礙都可能 導(dǎo)致紅細胞生成減少。
[0017] 1)葉酸或維生素 B12缺乏或利用障礙所致貧血由于各種生理或病理因素導(dǎo)致機體 葉酸或維生素 B12絕對或相對缺乏或利用障礙可引起的巨幼細胞貧血。
[0018] 2)缺鐵和鐵利用障礙性貧血這是臨床上最常見的貧血。缺鐵和鐵利用障礙影響血 紅素合成，有稱該類貧血為血紅素合成異常性貧血。該類貧血的紅細胞形態(tài)變小，中央淡染 區(qū)擴大，屬于小細胞低色素性貧血。
[0019] 2.溶血性貧血(HA)
[0020] 即紅細胞破壞過多性貧血。
[0021] 3.失血性貧血
[0022] 根據(jù)失血速度分急性和慢性，慢性失血性貧血往往合并缺鐵性貧血?？煞譃槌瞿?血性疾?。ㄈ缣匕l(fā)性血小板減少性紫癜、血友病和嚴重肝病等)所致和非出凝血性疾病(如 外傷、腫瘤、結(jié)核、支氣管擴張、消化性潰瘍、痔和婦科疾病等)所致兩類。
[0023] 從天然產(chǎn)物中尋找化合物或先導(dǎo)化合物并進行結(jié)構(gòu)修飾獲得其衍生物，從而得到 高效低毒的潛在藥物最有重要價值。
[0024] 本發(fā)明涉及的化合物I是一個2011年發(fā)表（Antonella Maggio et al ·， 2011.Artalbic acid,a sesquiterpene with an unusual skeleton from Artemisia alba(Asteraceae)from Sicily·Tetrahedron Letters,52(2011 )4543-4545)的化合物，我 們對化合物I進行了結(jié)構(gòu)修飾，獲得了兩個新的衍生物即化合物III和化合物IV，并用化合 物III和化合物IV制備了組合物并對該組合物抗紅細胞低下性貧血活性進行了評價，其具 有抗紅細胞低下性貧血活性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0025] 本發(fā)明公開了一個新的組合物，該組合物由化合物III和化合物IV組成，該組合物 中化合物III和化合物IV的質(zhì)量百分數(shù)分別為45%和55%。
[0026]
[0027]
[0028] 本發(fā)明公開的組合物可以制成藥學上可接受的鹽或藥學上可接受的載體。
[0029] 本發(fā)明的目的在于提供本發(fā)明組合物在制藥領(lǐng)域中的新的應(yīng)用。
[0030] 本發(fā)明涉及組合物作為制備治療紅細胞低下性貧血藥物中的應(yīng)用。
[0031]以下通過實施例對本發(fā)明作進一步詳細的說明，但本發(fā)明的保護范圍不受具體實 施例的任何限制，而是由權(quán)利要求加以限定。
【具體實施方式】
[0032] 實施例1化合物Artalbic acid的制備
[0033] 化合物Artalbic acid(I)的制備方法參照Antonella Maggio等人發(fā)表的文獻 (Antonella Maggio et al.,2011.Artalbic acid,a sesquiterpene with an unusual skeleton from Artemisia alba(Asteraceae)from Sicily. Tetrahedron Letters ,52 (2011 )4543-4545)的方法。
[0034]
[0035] 實施例2Artalbic acid的0-溴乙基衍生物（II)的合成
[0036] 將化合物I(266mg，l .OOmmol)溶于IOmL苯，向溶液中加入四丁基溴化銨（TBAB) (0.088)，1，2-二溴乙燒(3.76(^，20.00_〇1)和61]1]^的50%氫氧化鈉溶液?；旌衔镌?0攝氏 度攪拌Iehieh之后將反應(yīng)液倒入冰水中，立即用二氯甲烷萃取兩次，合并有機相溶液。然 后對有機相溶液依次用水和飽和食鹽水洗滌5次，再用無水硫酸鈉干燥，最后減壓濃縮去除 溶劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn)物粗品用硅膠柱層析純化(流動相為:石油醚/丙酮= 100:1.0，v/V)， 收集棕色集中洗脫帶并揮去溶劑即得到化合物II的棕色粉末(272mg，73% )。
[0037] 1H NMR(500MHz,DMS0-d6)5ll.41(s,lH),6.06(s,lH),5.76(s,lH),4.99(s,lH), 4.71(s,1H),4.56(s,1H),3.86(s,2H),3.54(s,2H),2.65(s,1H),2.43(s,2H),2.33(s,2H), 2.10(s,lH),1.64(s,3H),1.54(s,lH),1.44(s,2H),0.95(s,3H).
[0038] 13C NMR(125MHz,DMS0-d6)S201.95(s),175.93(s),149.13(s),148.15(s),117.05 (s),109.43(s),81.86(s),70.27(s),57.68(s),41.26(s),39.07(s),38.86(s),35.69(s), 33.36(s),30.72(s),20.44(s),18.42(s).
[0039] HRMS(ESI)m/z[M+H]+calcd for Ci7H26BrO4:373.1014；found 373.1017.
[0040]
[00411 實施例3Artalbic acid的0_(二氯乙胺基）乙基衍生物（III)的合成
[0042] l、Artalbic acid的0_(二輕乙胺基）乙基衍生物的合成
[0043] 將化合物II(187mg，0.5mmo 1)溶于20mL乙腈當中，向其中加入無水碳酸鉀(690mg， 5.0_31)，碘化鉀（25211^，1.5_31)和二乙醇胺（105111^，10_31)，混合物加熱回流111。反應(yīng) 結(jié)束后將反應(yīng)液倒入20mL冰水中，用等量二氯甲烷萃取3次，合并有機相。依次用水和飽和 食鹽水洗滌合并之后的有機相，再用無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn) 物粗品用硅膠柱層析純化(流動相為:石油醚/丙酮= 100: l.〇，v/v)，收集黃色集中洗脫帶 并揮去溶劑即得到化合物ArtaIbi c ac id的O-(二輕乙胺基）乙基衍生物的淡黃色固體 (146.9mg,74%)〇
[0044] 1H NMR(500MHz，DMS0-d6)Sl8.72(s，lH)j6.11(s，lH)，5.80(s，lH)，5.14(s，lH)， 4.73(s,lH),4.63(s,lH),3.57(s,2H),3.45(s,4H),2.70(d,J=15.6Hz,3H),2.60(s,4H), 2.50(s,2H),2.46(s,2H),2.33(s,lH),1.88(s,2H),1.68(s,3H),1.62(d,J=19.9Hz,3H), 1.02(s,3H).
[0045] 13C NMR(125MHz,DMS0-d6)5202.01(s),176.11(s),149.21(s),148.55(s),117.15 (s),109.60(s),81.93(s),67.25(s),59.28(s),57.88(s),56.83(s),53.74(s),41.36(s), 39.24(s),38.93(s),35.88(s),30.82(s),20.61(s),18.49(s).
[0046] HRMS(ESI) :m/z[M+H].calcd for C2iH36Ni〇6:398.2543;found:398.2547〇
[0047]
[0048] LArtalbic acid的U-〈一虱乙妝垂j乙垂衍王敕Kill;的合成
[0049] 合成足夠多的Artalbic acid的〇-(二輕乙胺基）乙基衍生物，將Artalbic acid的 〇-(二輕乙胺基）乙基衍生物(0. l〇〇g，〇. 5mmol)溶于4mL氯仿，逐滴加入氯化亞砜(0.238g， 2mmol)，反應(yīng)物加熱回流2h。將反應(yīng)物冷卻至室溫，滴加甲醇分解過量的氯化亞砜，減壓濃 縮除去溶劑。產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱層析純化(石油醚/丙酮100:0.2，v/v)，得到化合物III的淡黃色 固體（145.4mg，67%)。
[0050] 1H NMR(500MHz，DMS0-d6)Sl3.05(s，lH)，S6.05(s，lH)，5.75(s，lH)，4.67(s，2H)， 4.58((1, J = 7.5Hz，1H)，3.68(s，4H)，3.50(s，2H) ,2.86(s，2H)，2.74(s，2H)，2.62((1, J = 0.9Hz，3H)，2.44(s，2H)，2.38(s，2H)，2.22(s，lH)，1.61(s，3H)，1.49(s，lH)，1.42(s，2H), 0.95(s,3H).
[0051] 13C NMR(125MHz,DMS0-d6)S201.68(s),175.56(s),148.88(s),147.80(s),116.82 (s),109.05(s),81.60(s),66.70(s),57.44(s),55.79(s),53.30(s),41.03(s),39.21(s), 38.80(s),38.49(s),35.44(s),30.38(s),20.17(s),18.05(s).
[0052] HRMS(ESI) :m/z[M+H]+calcd for C2iH34Cl2N〇4+:434.1865;found:434.1861。
[0053]
[0054] 頭施例4Artalbic acid的U-(二中恤S乙基）胺基）乙基衍生物（III)的合成
[0055] 制備足夠多的化合物III，將化合物III(0.217g，0.5mmo 1)溶于IOmL乙醇，室溫下 加入甲硫醇鈉(〇.21g，3mmol)，反應(yīng)物加熱回流2h。減壓濃縮除去溶劑，所得產(chǎn)物用硅膠柱 層析進行純化(石油醚/丙酮1 〇〇: 〇. 3，v/v)，得到黃色固體物，即化合物IV(0.158g，69%)。
[0056] 1H MMR(500MHz，Chloroform-dl)Sl8.86(s，lH)，6·14(s，lH)，5.82(s，lH),5.33 (s，lH)，4.75(s，lH)，4.62(s，lH)，3.54(s，2H)，2.86(s，lH)，2.72(dd，J=18.2,6·8Ηζ, 11H),2.50(s,2H),2.39(s,2H),2.12(s,6H),1.71(s,3H),1.56(s,2H),1.41(s,lH),1.06 (s,3H).
[0057] 13C NMR(125MHz,DMS0-d6)S201.96(s),175.97(s),149.17(s),148.22(s),117.11 (s),109.47(s),81.85(s),67.07(s),57.69(s),53.56(s),52.49(s),41.29(s),39.00(s), 38.79(s),35.63(s),32.15(s),30.74(s),20.43(s),18.43(s),14.87(s).
[0058] HRMS(ESI) :m/z[M+H]+calcd for C23H40NO4S2":434.1865；found:434.1863〇
[0059]
[0060] 實施例5組合物抗紅細胞低下性貧血實驗
[0061 ] -、組合物對失血小鼠的治療作用
[0062] ICR小鼠30只，早d各半，均分成5組(n = 10)。除生理鹽水組外，其它組每只小鼠從 眼眶靜脈放血0.5ml，24h后再取血測全部各組指標，然后連續(xù)灌胃給藥1周且給藥之后每天 放血0.5ml，末次給藥Ih后，從眼眶靜脈叢取血用F-800全血小板分析儀進行紅細胞計數(shù) (IO12A)。
[0063] 組合物的制備：將研磨之后過200目網(wǎng)的45mg化合物III的粉末和研磨之后過200 目網(wǎng)的55mg化合物IV的粉末裝入帶蓋的小管中并用渦輪攪拌儀混合即得到IOOmg組合物， 使用時用水溶解這IOOmg的組合物即得到組合物的溶液。
[0064]表1組合物對因失血所致紅細胞減少的治療作用
[0067] 與模型組比較:*ρ〈0·05
[0068] 結(jié)果表明，放血小鼠經(jīng)服用組合物治療7天后，與模型組比較，其紅細胞顯著高于 模型組，接近生理鹽水組。而化合物III和化合物IV無此作用。
[0069] 二、組合物對環(huán)磷酰胺致紅細胞減少的治療作用
[0070] 對小鼠骨髓造血功能損傷的防治作用ICR小鼠50只，??用，均分成5組(n=10)， 即生理鹽水組、造模組、組合物1.2mg/kg組、化合物III 1.2mg/kg組和化合物IV 1.2mg/kg 組，口服給藥，每天1次。第0、5、10日除生理鹽水組外，其它各組小鼠分別腹腔注射環(huán)磷酸胺 80mg/kg，然后繼續(xù)給藥3天。于末次給藥后lh，從眼眶靜脈叢取血，測紅細胞數(shù)(10 12/L)。 [0071 ]表2組合物對環(huán)磷酰胺所致紅細胞的影響
[0073] 與模型組比較:林ρ〈0·01
[0074] 結(jié)果表明，與生理鹽水組比較，環(huán)磷酸胺能使小鼠骨髓損傷，造成外周血細胞下 降，組合物組與模型組比較，可明顯對抗環(huán)磷酸胺所致小鼠紅細胞下降。而化合物III和化 合物IV無此作用。
[0075]三、組合物對苯所致紅細胞減少的治療作用
[0076]對再生障礙性貧血小鼠的影響：昆明種小鼠50只，罕痛用，均分成5組(n = 10)，除 生理鹽水組外，其它組小鼠皮下注射苯0.5ml/kg，連續(xù)12天，造模的當日，同時口服給藥，每 天1次，共18天，末次給藥后lh，眼眶靜脈叢取血，測紅細胞。
[0077]表3組合物對苯所致紅細胞減少的治療作用
[0079] 與模型組比較:林ρ〈0·01
[0080] 結(jié)果表明，組合物組與模型組比較，可明顯對抗苯所致再生障礙性貧血小鼠紅細 胞的下降。而化合物III和化合物IV無此作用。
[0081 ]結(jié)論:組合物能夠顯著升高紅細胞，可以用來制備治療貧血的藥物。而化合物III 和化合物IV不能夠顯著升高紅細胞，不能用來制備治療貧血的藥物。
[0082]實施例6本發(fā)明所涉及組合物片劑的制備
[0083]取2克組合物，加入制備片劑的常規(guī)輔料18克，混勻，常規(guī)壓片機制成100片。
[0084] 實施例7本發(fā)明所涉及組合物膠囊的制備
[0085] 取2克組合物，加入制備膠囊劑的常規(guī)輔料如淀粉18克，混勻，裝膠囊制成100粒。
【主權(quán)項】
1. 一種組合物，其特征為該組合物由化合物HI和化合物IV組成，該組合物中化合物 III和化合物IV的質(zhì)量百分數(shù)分別為45%和55%，2. 如權(quán)利要求1所述的組合物的制備方法，其特征為:將化合物III的粉末和化合物IV 的粉末按照質(zhì)量百分數(shù)分別為45%和55%充分混合。3. -種如權(quán)利要求1所述的組合物在治療紅細胞低下性貧血藥物中的應(yīng)用。4. 如權(quán)利要求3所述的組合物在治療紅細胞低下性貧血藥物中的應(yīng)用，其特征為:所述 紅細胞低下性貧血是由失血所引起的。5. 如權(quán)利要求3所述的組合物在治療紅細胞低下性貧血藥物中的應(yīng)用，其特征為:所述 紅細胞低下性貧血是由化學物質(zhì)所引起的紅細胞低下。6. 如權(quán)利要求5所述的組合物在治療紅細胞低下性貧血藥物中的應(yīng)用，其特征為:所述 化學物質(zhì)為苯，所述紅細胞低下性貧血是由苯所致的再生障礙性貧血。7. 如權(quán)利要求5所述的組合物在治療紅細胞低下性貧血藥物中的應(yīng)用，其特征為:所述 化學物質(zhì)為環(huán)憐酸胺，所述紅細胞低下性貧血是由環(huán)憐酸胺所致紅細胞下降。
【文檔編號】C07C323/25GK106074479SQ201610473002
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年6月24日
【發(fā)明人】丁秋菊
【申請人】南京海澳斯生物醫(yī)藥科技有限公司