一種用于治療阿爾茨海默病的中藥組合物及其制備方法和應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種用于治療阿爾茨海默病的中藥組合物及其制備方法和應(yīng)用。本發(fā)明的一種用于治療阿爾茨海默病的中藥組合物，由以下重量份的各原料藥組成：白術(shù)8?18份，龍眼肉10?20份，阿膠3?13份，魚鰾15?25份，敗醬草3?13份，地錦草5?20份，地膚子5?20份，夏枯草5?20份，蓮米5?20份，皂刺3?13份，白蒺藜3?15份以及威靈仙3?13份。本發(fā)明的中藥組合物具有益氣養(yǎng)血、補(bǔ)血補(bǔ)腎、清熱利濕、補(bǔ)脾消毒、祛風(fēng)通絡(luò)等功效。同時，本發(fā)明通過研究該中藥組合物對阿爾茨海默病動物模型的綜合治療效果，證明該中藥組合物對阿爾茨海默病治療有效并且無副作用，因此本發(fā)明的提出為阿爾茨海默病的治療提供了一種新的有效技術(shù)手段，在阿爾茨海默病的治療領(lǐng)域?qū)⒕哂袕V闊的應(yīng)用前景。
【專利說明】
-種用于治療阿爾茨海默病的中藥組合物及其制備方法和 應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明設(shè)及一種中藥組合物及其制備方法和應(yīng)用，特別設(shè)及一種用于治療阿爾茨 海默病的中藥組合物及其制備方法和應(yīng)用，本發(fā)明屬于中藥技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 阿爾茨海默病(Alzheimer'S disease，AD)是一種老年性、退行性、進(jìn)行性的中樞 神經(jīng)系統(tǒng)（Cental Nervous System,CNS)常見疾病之一（Gontier G,George C,Qiaker Z, et al.Blocking IGF Signaling in Adult Neurons Alleviates Alzheimer's Disease Pathology trough Amyloid-0Clearance[J].J 化urosci,2015,35(33):11500-11513.)。 AD主要表現(xiàn)為患者學(xué)習(xí)能力、記憶能力、分析能力、推理能力及其判斷能力減退，還可W伴 有精神障礙及其意識模糊等等。AD影響患者的生活質(zhì)量，甚至威脅患者的生命安全，AD對家 庭、社會和國家都帶來了極大的挑戰(zhàn)性。目前，AD已經(jīng)成為屯、腦血管疾病、腫瘤、腦中風(fēng)之 后，死亡率排在第四位的重要疾病。隨著全球人口老齡化的必然趨勢，AD理所當(dāng)然成為國家 和社會常見的老年性、神經(jīng)性、退行性疾病之一。AD幾乎分布于世界的各個角落，在發(fā)展中 國家和較不富裕發(fā)達(dá)國家內(nèi)，AD的發(fā)病率和死亡率也在迅速地增加。我們國家人口較多，老 齡人口也較多，因此探尋AD的發(fā)病機(jī)制和防治AD的新藥組方就顯得尤為重要。
[0003] AD病理特征包括很多，例如AD腦組織出現(xiàn)老年斑(Seni 1 e Plaques，SP)沉積，SP核 屯、主要是β-淀粉樣蛋白（β-amyloid,Αβ)、小膠質(zhì)細(xì)胞（Microglia，MG)、星形膠質(zhì)細(xì)胞 (As化ocytes，As)和變性的軸索等;神經(jīng)元信息傳遞部位突觸出現(xiàn)損傷或者數(shù)量減少;MG、 As產(chǎn)生介導(dǎo)炎癥反應(yīng)的炎癥介質(zhì);神經(jīng)元內(nèi)部神經(jīng)原纖維不規(guī)則排列形成神經(jīng)原纖維纏結(jié) (Neurof ibrilla巧tangles，NFTs);海馬錐體細(xì)胞出現(xiàn)桃紅色平野小體;腦組織神經(jīng)元數(shù) 量減少，顆?？张葑冃裕℅ranulo vacuolar degeneration，GVDKLatta CH,Sudduth TL, Weekman EM,et al.Determining the role of IL-4induced neuroinflammation in microglial activity and amyloid-Pusing BV2microglial cells and APP/ PSltransgenic mice[J].J Neuroin flammation,2015,4(12):41.;Tang Z, Io ja E, Bereczki E,et al.mTor mediates tau localization and secretion: Implication for Alzheimer's disease[J].Biochim Biophys Acta,2015,1853(7):1646-1657.;Agosta F, Dalla Libera D,Spinelli EG,et al.Myeloid microvesicles in cerebrospinal fluid are associated with myelin damage and neuronal loss in mild cognitive impairment and Alzheimer disease[J] .Ann Neurol ,2014,76(6) :813-825.)等等。
[0004] AD發(fā)病機(jī)制還不清楚，研究者們提出多種關(guān)于AD的學(xué)說或者假說，例如Αβ蛋白學(xué) 說、炎癥介質(zhì)學(xué)說、神經(jīng)血管假說、自由基損傷學(xué)說等等。Αβ蛋白學(xué)說是AD發(fā)病機(jī)制中最重 要的學(xué)說之一。在正常的情況下，腦組織Αβ是β-淀粉樣蛋白前體蛋白（Amyloid-化recursor 口1'〇16；[]1，4??)通過0、丫-分泌酶水解產(chǎn)生的一種多膚，40主要包括401-4日和401-42。401-42是腦 組織內(nèi)A的冗淀物形成的最關(guān)鍵組成部分，Αβι-42參與構(gòu)成SP的核屯、成分(Yang H，Yang H， Xie Z，et al.Self-assembling nanofibers alter the processing of amyloid precursorprotein ina transgenic mouse model of Alzheimer's disease[J].Neurol 民es，2015,37(1) :84-91 .)dA目1-42對神經(jīng)元產(chǎn)生神經(jīng)毒性，A目1-42還可W形成可溶性、擴(kuò)散性A β寡聚體（Am^doid beta-derived diffusible ligands，ADDLs)，腦組織A抓Ls(Liu X，Teng Z，Cui C，et al.Amyloid beta-derived diffusible ligands(ADDLs)induce abnormal expression of insulin receptors in rat hippocampal neurons[J].J Mol Neurosci, 2014,52(1) :124-130.)具有更大的神經(jīng)毒性，A目1-42和ADDLs均可W引起腦組織神經(jīng)元損 傷，造成神經(jīng)元數(shù)量減少，尤其是海馬神經(jīng)元侵犯最為嚴(yán)重，A目1-42和AM)Ls還可W降化AD動 物模型的學(xué)習(xí)記憶水平。研究表明，AD模型小贏學(xué)習(xí)記憶能力下降化i T，Yu Y，Cai Η.Effects of brain-derived neurotrophic factor-pretreated neuron stem cell transplantation on Alzheimer's diseasemodel mice[J].Int J Clin Exp Med,2015,8 (11) :21947-21955.),基于這些，評價AD的治療效果需要檢測腦組織海馬APP、A目i-42、A目1-40 和血清A目1-40水平，并觀察腦組織海馬的超微結(jié)構(gòu)。
[0005] 炎癥介質(zhì)學(xué)說與A目蛋白學(xué)說密切相關(guān)，AD中腦組織A目少量增加時，腦組織16可^ 吞瞻少量A目，而當(dāng)腦組織A目大量增加時，Αβ就會激活腦組織MG及As的分泌功能，腦組織A目促 進(jìn)MG及As產(chǎn)生大量炎癥介質(zhì)，例如腫瘤壞死因子-a(Tumor necrosis factor-a，TNF-c〇、白 介素-lβ(Interleukin-lβ，Iレlβ)、白介素-6(Interleukin-6，Iレ6)等等（GaoJ，HΘH， Jiang W，et al.Salidroside ameliorates cognitive impairment in a d-galactose- induced rat model of Alzheimer's disease[J].Behav Brain 民es，2015，15(293):27- 33.;Zhao L,Zhao Q，Zhou Y，et al.Atorvastatin May Correct Dyslipidemia in Adult Patients at 民isk for Alzheimer's Disease Through an Anti-Inflammatory Pathway [J].CNS Neurol Disord Drug Targets,2016，15(l):80-85·)。另外，AD伴有腦組織抗氧化 水平的化下、自由基產(chǎn)生增加、氧化產(chǎn)物積聚等等(Wang C，He L，Yan M，et al.Effects of polyprenols from pine needles of Pinus massoniana on ameliorating cognitive impairment in a D-galactose induced mouse model[J].Age(Dordr)，2014，36(4): 9676.)，例如六0可1^表現(xiàn)為總抗氧化能力（Total antioxidative capacity，T-A0C)、超氧 化物歧化酶（Super oxide dismutase，SOD)、谷脫甘版過氧化物酶（Glutathione peroxidase，G細(xì)-PX)含量降化及氧化產(chǎn)物丙二酸(Malondialde的de，MDA)含量增加，基于 這些，評價AD治療效果需要檢測腦組織海馬比-1目、TNF-a、化-6、T-A0C、S0D、G細(xì)-PX和MDA水 平。
[0006] 神經(jīng)血管假說與Αβ蛋白學(xué)說也是密切相關(guān)的，血腦屏障（Blood-Brain Barrier， BBB)通透性的改變可^影響Αβ的清除和轉(zhuǎn)運(yùn)(Zlokovic BV.Neuro vascular pathways to neurodegeneration in Alzheimer's disease and other disorders[J].Nat Rev Neurosci ,2011,12(12) :723-738.)，改善腦組織BBB通透性有助于AD的治療（Makani V， Jang YG,Christopher K，et al.BBB-Permeable，Neuroprotective，and Neuro trophic Polysaccharide，Midi-GAGR[J].PLoS One,2016,11(3) :θ0149715·)ηΑβ降解與腦組織對Αβ 轉(zhuǎn)運(yùn)密切相關(guān)，晚期糖基化終末產(chǎn)物受體（Receptor for advanced glycation end- products, RAGE) 可1^表達(dá)于腦組織神經(jīng)元、 MG、 血管 內(nèi)皮細(xì)胞等， 腦組織 RAGE 可與配體 Αβ 結(jié) 合，促進(jìn)NF-kB通路活化，加速Αβ進(jìn)入腦組織;腦組織八目可^和載脂蛋白J(Apolipoprotein J，Apo J)、載脂蛋白EUpolipoprotein Ε,Αρο E)等多種蛋白結(jié)合，Αβ的運(yùn)種結(jié)合可W被低 密度脂蛋白相關(guān)蛋白1 (Lipoprotein receptor-related proteinl，LRP1)識別，從而介導(dǎo)A β 轉(zhuǎn)出腦組織（Kim DK,化rk JD,Choi BS.Mercury-induced amyloid-beta(AP) accumulation in the brain is mediated by disruption of APtransport[J].J Toxicol Sci,2014,39(4):625-635.;Wan W,Chen H,Li Y.The potential mechanisms of Αβ-receptor for advanced glycation end-products interaction disrupting tight junctions of the blood-brain barrier in Alzheimer's disease[J].Int J Neurosci ,2014,124(2): 75-81.)。研究表明，腦組織RAGE通過NF-kB信號通路介導(dǎo)機(jī)體的腦 組織神經(jīng)性、無菌性炎癥反應(yīng)，引起TNF-a和比-1β等炎癥介質(zhì)含量增加 (Wang SY，Liu肝， Ji WW,e t al.Qifu-Yin attenuates AGE s induced Alzheimer-like pathophysiological changes through the RAGE/NF-kB pathway[J].Chin J Nat Med, 2014,12(12) :920-928.)，腦組織RAGE/NF-kB通路還介導(dǎo)D-半乳糖誘導(dǎo)的腦組織記憶障礙 和神經(jīng)變性（Ali T,Badshah H,Kim TH,et al.Melatonin attenuates D-galactose- induced memory impairment,neuroinflammation and neurodegeneration via RAGE/ NF-kB/JNK signaling pathway in aging mouse model[J].J Pineal Res,2015,58(1): 71-85.)，另外AD伴有腦組織線粒體細(xì)胞調(diào)亡途徑相關(guān)的Bd-2和Bax表達(dá)異常，引起腦組織 Bcl-2/Bax比值改變，促進(jìn)腦組織神經(jīng)元細(xì)胞調(diào)亡(Cai C,Dai X,Zhu Y,et al.A specific RAGE-binding peptide biopanning from phage display random peptide library that ameliorates symptoms in amyloidPpeptide-mediated neuronal disorder[J] .Appl Microbiol Biotechnol,2016,100(2):825-35.)。基于運(yùn)些，評價AD治療效果需要檢 測腦組織BBB通透性，腦組織海馬RAGE、NF-K化65、LRPl、Apo J、Apo E、Bcl-2和Bax等表達(dá)水 平。
[0007] 隨著科學(xué)技術(shù)的迅速發(fā)展，臨床上出現(xiàn)了許多治療AD的藥物，但是并沒有特別有 效的藥物，很多藥物都是改善AD學(xué)習(xí)記憶能力化earning and memcxry)，例如乙酷膽堿醋酶 (Acetylcholin esterase，A化E)抑制劑、抗神經(jīng)元細(xì)胞調(diào)亡(Apoptosis)藥物、抗氧化劑、 抗精神病藥物、雌激素、神經(jīng)營養(yǎng)因子(Neuro化ophic化ctor)、神經(jīng)干細(xì)胞(Neural stem cells)和抗Αβ藥物等等。雖然運(yùn)些藥物的治療效果較好，但是運(yùn)些藥物具有一定的不良反 應(yīng)，對機(jī)體身屯、健康造成一定的影響，因此探尋不良反應(yīng)小并且有效的藥物十分重要。祖國 中醫(yī)藥的明顯優(yōu)勢是中醫(yī)藥成分較多、成分之間存在協(xié)同作用、不良反應(yīng)較小，同時還具有 整體調(diào)節(jié)等等，因此，祖國中醫(yī)藥的中藥組合物(化inese medicinal composition)在AD治 療中就具有獨(dú)特優(yōu)勢?；诖耍瑢ふ抑嗅t(yī)藥新組方且有效的中藥組合物開展AD的治療就顯 得尤為重要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 針對現(xiàn)有問題，本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種能夠用于治療AD的中藥組 合物及其制備方法，該中藥組合物具有益氣養(yǎng)血、補(bǔ)血補(bǔ)腎、清熱利濕、補(bǔ)脾消毒、桂風(fēng)通絡(luò) 等功效，并且無副作用。
[0009] 為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)手段為：
[0010] 本發(fā)明中藥組合物包括十二種藥材，分別是中藥材白術(shù)、龍眼肉、阿膠、魚饌、敗醬 草、地錦草、地膚子、夏枯草、蓮米、皂刺、白裝襲和威靈仙。其中白術(shù)(A化actylodes)，性溫， 味苦、甘，歸脾經(jīng)、胃經(jīng)，具有益氣健脾、燥濕利水等功效;龍眼肉化ongan )，性溫，味甜，具有 補(bǔ)益屯、脾、養(yǎng)血安神等功效;阿膠(Gelatin),味微甘，具有補(bǔ)血滋陰、潤燥止血等功效;魚饌 (Maw),性平，味甘，歸腎經(jīng)，具有補(bǔ)腎益精、滋養(yǎng)筋脈、散疲消腫等功效;敗醬草(Patrina)， 性涼，味辛、苦，具有清熱解毒、桂疲排脈等功效;地錦草化umi化sa)，性平，味辛，歸肺經(jīng)、肝 經(jīng)、胃經(jīng)、大腸經(jīng)、膀脫經(jīng)，具有清熱解毒、利濕退黃、活血止血等功效;地膚子(Fructus)，性 寒，味辛、苦，歸腎經(jīng)、膀脫經(jīng)，具有清熱利濕、桂風(fēng)止癢等功效;夏枯草(Prunella),性寒，味 辛、苦，歸肝經(jīng)、膽經(jīng)，具有清熱瀉火、明目散結(jié)、消腫等功效;蓮米化otus seeds),性平，味 甘、澀，歸脾經(jīng)、腎經(jīng)、屯、經(jīng)，具有補(bǔ)脾止瀉、補(bǔ)腎澀精、養(yǎng)屯、安神等功效;皂刺(Soap thorn)， 性溫，味辛，歸肝經(jīng)、肺經(jīng)，具有消毒、透脈等功效；白裝襲(Tribulus terrestris)，性平，味 苦、辛，入肝經(jīng)，具有桂風(fēng)明目、平肝解郁等功效;威靈仙(Clematis),性溫，味辛、咸，歸膀脫 經(jīng)、肝經(jīng)，具有桂風(fēng)除濕、通絡(luò)止痛等功效。本發(fā)明中藥組合物具有益氣養(yǎng)血、補(bǔ)血補(bǔ)腎、清 熱利濕、補(bǔ)脾消毒、桂風(fēng)通絡(luò)等基本功效，說明中藥組合物可W補(bǔ)氣、補(bǔ)脾、補(bǔ)腎、補(bǔ)血、活 血，促進(jìn)氣旺血行，還可W散結(jié)清熱、通絡(luò)養(yǎng)陰，尤其是針對AD的本虛標(biāo)實(shí)、氣虛血疲，就會 有較好的治療效果。
[0011] 基于W上的綜合分析，本發(fā)明選擇中藥材白術(shù)、龍眼肉、阿膠、魚饌、敗醬草、地錦 草、地膚子、夏枯草、蓮米、皂刺、白裝襲和威靈仙，共十二種藥材組成中藥組合物。具體的， 本發(fā)明的一種用于治療AD的中藥組合物，由W下重量份的各原料藥組成：白術(shù)8-18份，龍眼 肉10-20份，阿膠3-13份，魚饌15-25份，敗醬草3-13份，地錦草5-20份，地膚子5-20份，夏枯 草5-20份，蓮米5-20份，皂刺3-13份，白裝襲3-15份W及威靈仙3-13份。
[0012] 在本發(fā)明中，優(yōu)選的，所述的中藥組合物由W下重量份的各原料藥組成：白術(shù)13 份，龍眼肉15份，阿膠8份，魚饌20份，敗醬草8份，地錦草12份，地膚子12份，夏枯草12份，蓮 米12份，皂刺8份，白裝襲9份W及威靈仙8份。
[0013] -種臨床上適宜的用于防治AD的中藥制劑，其由本發(fā)明所述的中藥組合物加入制 劑成型所需的輔料，按照制備藥物制劑的常規(guī)方法制成。
[0014] 其中，優(yōu)選的，所述的制劑為水煎劑、膠囊劑、丸劑、顆粒劑、片劑或日服液。
[0015] 進(jìn)一步的，本發(fā)明還提出了一種制備所述的中藥組合物的方法，其特征在于包括 W下步驟：
[0016] (1)按照本發(fā)明所述的重量份稱取各原料藥，將各原料藥混合均勻后放入高頸圓 底燒瓶中，加入藥物重量8-15倍的蒸饋水，浸泡1-化后，煎煮1-化，冷卻；
[0017] (2)將步驟(1)冷卻后的藥液用紗布過濾，得到第一次濾液；
[0018] (3)步驟(2)剩余的藥物殘?jiān)湃敫哳i圓底燒瓶中，重復(fù)步驟（1)和(2)得到第二次 濾液，合并二次濾液；
[0019] (4)干燥，得到所述中藥組合物的干膏。
[0020] 其中，優(yōu)選的，還包括將得到的干膏放在粉碎機(jī)內(nèi)粉碎，研磨，分子篩處理，得到所 述中藥組合物的干粉。
[0021] 為了說明本發(fā)明中藥組合物的使用效果，本發(fā)明使用免疫組織化學(xué)方法和Real- time-PCR方法測定了與AD密切相關(guān)的腦組織海馬RAGE、NF-K化65、LRP1、Apo J和Apo E蛋白 的表達(dá)量，W此評價中藥組合物防治AD的效果及其相關(guān)分子作用機(jī)制。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，模型 組AD小鼠腦組織海馬LRPl、Apo J和Apo E蛋白平均光密度值和mRNA的相對表達(dá)量降低，預(yù) 示模型組AD小鼠腦組織海馬LRP1、Apo J和Apo E蛋白和基因表達(dá)減少，說明模型組AD小鼠 腦組織海馬可W與Αβ結(jié)合的蛋白質(zhì)減少，降低了 Αβ轉(zhuǎn)出腦組織，A的冗積于腦組織，同時腦組 織海馬RAGE、NF-K化65蛋白平均光密度值和mRNA的相對表達(dá)量增加，預(yù)示模型組AD小鼠腦 組織海馬RAGE、NF-K化65蛋白和基因表達(dá)上調(diào)，利于Αβ從血清中進(jìn)入腦組織，增加腦組織Αβ 與神經(jīng)元RAGE的結(jié)合，激活多種通路加重腦組織神經(jīng)元的損傷，W此促進(jìn)AD的發(fā)展。經(jīng)過中 藥組合物治療后，中藥組合物高、中劑量可W增加 AD小鼠 LRPUApo J和Apo E平均光密度值 和mRNA的相對表達(dá)量，預(yù)示中藥組合物高、中劑量增加小鼠腦組織海馬LRP1、Apo J和Apo E 蛋白和基因表達(dá)，減少腦組織Αβ的積聚，同時中藥組合物高、中劑量可W使小鼠腦組織海馬 RAGE、NF-K化65蛋白平均光密度值和mRNA相對表達(dá)量減少，預(yù)示中藥組合物高、中劑量可W 使小鼠腦組織海馬RAGE、NF-K化65蛋白和基因表達(dá)下調(diào)，減少腦組織Αβ與神經(jīng)元RAGE的結(jié) 合，減弱多種通路的活化，減輕腦組織神經(jīng)元的損傷，W此治療AD。但是中藥組合物低劑量 對AD小鼠腦組織海馬RAGE、NF-K化65、LRP1、Apo J和Apo E蛋白和mRNA相對表達(dá)量的改變不 明顯，預(yù)示中藥組合物低劑量對AD小鼠腦組織海馬RAGE、NF-K化65、LRP1、Apo J和Apo E表 達(dá)的影響不明顯。本實(shí)驗(yàn)免疫組織化學(xué)方法和Real-time-PCR方法測得的腦組織海馬RAGE、 NF-K化65、LRPl、Apo J和Apo E蛋白和基因表達(dá)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的變化趨勢與AD小鼠學(xué)習(xí)記憶能 力，海馬超微結(jié)構(gòu)，海馬APP、Αβι-42、Αβι-40和血清Αβι-40水平，海馬炎癥介質(zhì)IL-10、TNF-a和 比-6水平，海馬Be 1-2、Bax水平、海馬T-A0C、SOD、G甜-PX和MDA水平，腦組織BBB通透性等等 變化趨勢有關(guān)，運(yùn)提示腦組織海馬RAGE、NF-K化65、LRP1、Apo J和Apo E是防治AD的祀點(diǎn)蛋 白。本實(shí)驗(yàn)預(yù)示中藥組合物通過下調(diào)海馬RAGE、NF-K化65表達(dá)且上調(diào)海馬LRPUApo J、Apo E表達(dá)，W此改善AD小鼠學(xué)習(xí)記憶能力，海馬超微結(jié)構(gòu)，海馬APP、Αβι-42、Αβι-4〇和血清Αβι-4〇水 平，海馬炎癥介質(zhì)化-ie、TNF-a和比-6水平，海馬Bd-2、Bax水平、海馬T-A0C、S0D、GSH-PX和 MDA水平及其BBB通透性等等。
[0022] AD伴有機(jī)體免疫功能的低下及其腦組織的萎縮。免疫器官脾產(chǎn)生B細(xì)胞和巨隧細(xì) 胞等等，其中B細(xì)胞可轉(zhuǎn)化成漿細(xì)胞后分泌大量抗體，抗體參與體液免疫;免疫器官胸腺可 W產(chǎn)生T細(xì)胞和胸腺素等等，其中T細(xì)胞參與細(xì)胞免疫。另外AD還伴有腦組織神經(jīng)元數(shù)量減 少，腦組織相對質(zhì)量減輕，進(jìn)而出現(xiàn)腦組織萎縮。因此本發(fā)明測定了小鼠的脾、胸腺和腦指 數(shù)，W此評價中藥組合物對AD小鼠免疫功能和腦萎縮程度的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，模型組小 鼠脾、胸腺和腦指數(shù)降低，預(yù)示模型組脾和胸腺相對質(zhì)量降低，參與體液免疫的漿細(xì)胞(B細(xì) 胞轉(zhuǎn)化)和參與細(xì)胞免疫的T細(xì)胞減少，進(jìn)而預(yù)示模型組小鼠免疫力降低；同時腦組織相對 質(zhì)量降低，預(yù)示模型組AD小鼠腦萎縮，腦組織的基本功能可能退化。經(jīng)過中藥組合物治療 后，中藥組合物高、中劑量改善小鼠的脾、胸腺和腦指數(shù)，預(yù)示中藥組合物高、中劑量脾和胸 腺相對質(zhì)量增加，參與體液免疫的漿細(xì)胞(B細(xì)胞轉(zhuǎn)化)和參與細(xì)胞免疫的T細(xì)胞增加，中藥 組合物高、中劑量可W使小鼠免疫功能增強(qiáng)；同時中藥組合物高、中劑量小鼠腦組織相對質(zhì) 量增加，說明腦萎縮程度得到改善，提示腦組織的基本功能可能部分恢復(fù)。但是中藥組合物 低劑量對小鼠的脾、胸腺和腦指數(shù)的影響不明顯，預(yù)示中藥組合物低劑量對小鼠的免疫功 能和腦萎縮程度改善效果較差。W上顯示中藥組合物高、中劑量可W增強(qiáng)AD小鼠的免疫功 能并改善AD小鼠腦組織萎縮的程度。
[0023] 為了初步評價中藥組合物高、中、低劑量對小鼠的副作用，本發(fā)明還使用電子天平 測定了小鼠的屯、、肺、肝、腎指數(shù)和小鼠的體重變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與對照組比較，模型組 小鼠屯、、肺、肝、腎指數(shù)和體重改變不明顯，預(yù)示對照組和模型組小鼠的重要器官指數(shù)和體 重變化不明顯。經(jīng)過中藥組合物治療后，與模型組比較，中藥組合物高、中、低劑量組小鼠的 屯、、肺、肝、腎指數(shù)和體重改變也不明顯，提示中藥組合物高、中、低劑量治療AD不會改變小 鼠的屯、、肺、肝、腎指數(shù)和體重，預(yù)示中藥組合物高、中、低劑量組小鼠的重要器官指數(shù)和體 重變化不明顯，說明中藥組合物高、中、低劑量對小鼠無副作用。
[0024] 綜上所述，本發(fā)明提出了一種能夠有效治療AD的中藥組合物，實(shí)驗(yàn)證明該中藥組 合物對AD治療有效并且無副作用。本發(fā)明的提出為進(jìn)一步研發(fā)治療AD的中藥新藥提供了客 觀依據(jù)。
【附圖說明】
[0025] 圖巧中藥組合物對AD小鼠潛伏期的影響；
[0026] 圖2為中藥組合物對AD小鼠游泳距離的影響；
[0027] 圖3為中藥組合物對AD小鼠目標(biāo)象限停留時間和跨平臺次數(shù)的影響；
[002引注:與對照組比較，中<0.05;與模型組比較，咕<0.05，咕>0.05;
[0029] 圖4為中藥組合物對AD小鼠腦組織海馬CAI區(qū)神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)的影響（TEM，X 2550)的影響；
[0030] 圖5為中藥組合物對AD小鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元細(xì)胞質(zhì)超微結(jié)構(gòu)影響（TEM，X 16500)；
[00川圖6為中藥組合物對AD小鼠腦組織海馬APP、A執(zhí)-42、Αβι-40和血清Αβι-40的影響；
[0032] 注:與對照組比較，*Ρ<0.05;與模型組比較，咕<0.05，咕>0.05;
[0033] 圖7為中藥組合物對AD小鼠腦組織海馬IL-lf3、TNF-a和IL-6含量的影響；
[0034] 注:與對照組比較，中<0.05;與模型組比較，咕<0.05，咕>0.05;
[0035] 圖8為中藥組合物對AD小鼠腦組織海馬Bd-2/Bax比值的影響；
[0036] 注:與對照組比較，中<0.05;與模型組比較，咕<0.05，咕>0.05;
[0037] 圖9為中藥組合物對AD小鼠腦組織海馬T-A0C含量的影響；
[003引注:與對照組比較，中<0.05;與模型組比較，咕<0.05，咕>0.05;
[0039] 圖10為中藥組合物對AD小鼠腦組織海馬SOD含量的影響；
[0040] 注:與對照組比較，*P<0.05;與模型組比較，咕<0.05，咕>0.05;
[0041 ]圖11為中藥組合物對AD小鼠腦組織海馬GSH-PX含量的影響；
[00創(chuàng)注:與對照組比較，*P<0.05;與模型組比較，咕<0.05，咕>0.05;
[0043] 圖12為中藥組合物對AD小鼠腦組織海馬MDA含量的影響；
[0044] 注:與對照組比較，中<0.05;與模型組比較，咕<0.05，咕>0.05;
[0045] 圖13為中藥組合物對AD小鼠腦組織BBB通透性的影響；
[0046] 注:與對照組比較，中<0.05;與模型組比較，咕<0.05，咕>0.05;
[0047] 圖14為中藥組合物對海馬RAGE、NF-K化65、LRPl、Apo J和Apo E蛋白表達(dá)影響；
[004引注:與對照組比較，中<0.05;與模型組比較，咕<0.05，咕>0.05;
[0049] 圖15為中藥組合物對海馬RAGE、NF-K化65、LRPl、Apo J和Apo E mRNA影響；
[0050] 注:與對照組比較，中<0.05;與模型組比較，咕<0.05，咕>0.05;
[0051 ]圖16為中藥組合物對AD小鼠脾、胸腺和腦指數(shù)的影響；
[005^ 注:與對照組比較，*P<0.05;與模型組比較，咕<0.05，咕>0.05;
[0053]圖17為中藥組合物對AD小鼠屯、、肺、肝和腎指數(shù)的影響；
[0化4] 注:與對照組比較，中>0.05;與模型組比較，咕>0.05;
[0化5]圖18為中藥組合物對AD小鼠體重的影響。
[0化6] 注:與對照組比較，中>0.05;與模型組比較，咕>0.05。
【具體實(shí)施方式】
[0057]下面結(jié)合具體實(shí)施例來進(jìn)一步描述本發(fā)明，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和特點(diǎn)將會隨著描述而 更為清楚。但實(shí)施例僅是范例性的，并不對本發(fā)明的范圍構(gòu)成任何限制。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng) 該理解的是，在不偏離本發(fā)明的精神和范圍下可W對本發(fā)明技術(shù)方案的細(xì)節(jié)和形式進(jìn)行修 改或替換，但運(yùn)些修改和替換均落入本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。
[005引實(shí)施例1 一種用于防治AD的中藥組合物的制備
[0059] 由W下重量的各原料藥組成：白術(shù)13g，龍眼肉15g，阿膠8g，魚饌20g，敗醬草8g，地 錦草12g，地膚子12g，夏枯草12g，蓮米12g，皂刺8g，白裝襲9gW及威靈仙8g。
[0060] 實(shí)施例2-種用于防治AD的中藥組合物的制備
[0061] 由W下重量的各原料藥組成：白術(shù)lOg，龍眼肉15g，阿膠8g，魚饌22g，敗醬草lOg， 地錦草12g，地膚子15g，夏枯草12g，蓮米13g，皂刺lOg，白裝襲lOgW及威靈仙9g。
[0062] 實(shí)施例3-種用于防治AD的中藥組合物的制備
[0063] 由W下重量的各原料藥組成：白術(shù)8g，龍眼肉lOg，阿膠3g，魚饌15g，敗醬草7g，地 錦草lOg，地膚子lOg，夏枯草12g，蓮米lOg，皂刺lOg，白裝襲lOgW及威靈仙lOg。
[0064] 實(shí)施例4 一種用于防治AD的中藥組合物的制備
[0065] 由W下重量的各原料藥組成：白術(shù)12g，龍眼肉15g，阿膠lOg，魚饌18g，敗醬草lOg， 地錦草lOg，地膚子12g，夏枯草lOg，蓮米lOg，皂刺7g，白裝襲8gW及威靈仙8g
[0066] 實(shí)施例5-種用于防治AD的中藥組合物的制備
[0067] 由W下重量的各原料藥組成：白術(shù)15g，龍眼肉20g，阿膠lOg，魚饌25g，敗醬草12g， 地錦草12g，地膚子14g，夏枯草12g，蓮米12g，皂刺8g，白裝襲12gW及威靈仙9g。
[006引實(shí)施例6-種用于防治AD的中藥組合物(干膏）的制備
[0069] (1)分別稱取原藥材白術(shù)13g、龍眼肉15g、阿膠8g、魚饌20g、敗醬草8g、地錦草12g、 地膚子12g、夏枯草12g、蓮米12g、皂刺8g、白裝襲9g和威靈仙8g，每份中藥組合物的原藥材 重量137g。
[0070] (2)配制4倍中藥組合物的原藥材，即548g中藥組合物，將548g中藥組合物放入 20000ml高頸圓底燒瓶中，加入蒸饋水7000ml，將中藥組合物浸泡化，煎煮中藥組合物化，10 層白色紗布過濾后得到第一次中藥組合物濾液；
[0071] (2)中藥組合物殘?jiān)诺?0000ml高頸圓底燒瓶中，加入蒸饋水7000ml，浸泡中藥 組合物殘?jiān)?，煎煮中藥組合物化，10層白色紗布過濾后得到第二次中藥組合物殘?jiān)鼮V液；
[0072] (3)合并第一次中藥組合物濾液和第二次中藥組合物殘?jiān)鼮V液，干燥箱70°C干燥 5d后，得到中藥組合物的干膏148.75g。
[0073] 中藥組合物出膏率=(干膏/中藥組合物）X 100%，經(jīng)過計(jì)算得到（148.75/548) X 100% =27.14%，顯示該中藥組合物出膏率為27.14%。
[0074] 實(shí)施例7-種用于防治AD的中藥組合物(干粉)的制備
[0075] 使用粉碎機(jī)將實(shí)施例6制備得到的中藥組合物干膏粉碎，研磨，分子篩處理，得到 中藥組合物干粉145.36g，中藥組合物出粉率=(干粉/中藥組合物）X 100%，經(jīng)過計(jì)算得到 (145.36/548) X 100 % = 26.53 %，顯示該中藥組合物出粉率為26.53 %。
[0076] 實(shí)驗(yàn)配制中藥組合物原藥材重量為548g，最終得到中藥組合物干粉145.36g，經(jīng)過 計(jì)算可W知道，Ig中藥組合物干粉相當(dāng)于中藥組合物原藥材3.77g;分裝中藥組合物干粉， 20g/袋，-80°C冰箱內(nèi)保存用于W下研究。
[0077] 實(shí)施例8本發(fā)明的中藥組合物在治療AD中的應(yīng)用 [007引 1材料
[0079] 1.1實(shí)驗(yàn)動物
[0080] 7月齡清潔級雄性巧7BL/6小鼠，體重（22±2)g，購買于北京維通利華實(shí)驗(yàn)動物技 術(shù)有限公司，動物合格證:SCXK(京）2012-0001。C57化/6小鼠由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物 中屯、李寶龍副主任、博±后負(fù)責(zé)日常管理和處理。
[0081] 1.2主要儀器設(shè)備
[0082] Morris水迷宮（安徽淮北正華生物儀器設(shè)備有限公司），6100型RT-雷杜酶標(biāo)儀(美 國RT公司），腦立體定位SN-2(日本儀器公司），組織脫水機(jī)和展片機(jī)（德國Leica公司）， TECNAI G2型透射電子顯微鏡(陽1/化ilips公司），101-0AB型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(天津市 泰斯特儀器有限公司），歷IAS高清晰度彩色醫(yī)學(xué)圖文分析系統(tǒng)(武漢千屏影像技術(shù)有限公 司），SIMF124制冰機(jī)、-80°C冰箱（日本SANYO)，PLZ0Z-S電子天平(梅特勒-托利多儀器有限 公司），TGkl6G臺式離屯、機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠)等等。
[0083] 2 方法
[0084] 2.1復(fù)制AD小鼠模型
[0085] 抓取健康7月齡巧7BL/6小鼠，10%水合氯醒麻醉小鼠，小鼠頭部固定于腦立體定 位儀器SN-2(日本儀器公司），剪去毛發(fā)，消毒，剪開皮膚，暴露煩骨，無菌微量加樣器于小鼠 雙側(cè)腦室一次性注入扣1凝聚態(tài)Αβι-42 ( 80ρπιο1/μ1)，留下針頭2min，封閉煩骨孔，滴慶大霉 素消毒，包扎小鼠，消毒，肌肉注射青霉素10萬/d，小鼠單籠飼養(yǎng)，避免小鼠感染和相互撕 咬。小鼠蘇醒后，第2d開始，每d小鼠腹腔注射D-半乳糖（180mg/kg)和灌胃給予Ξ氯化侶 (AICl3)17mg/kg，持續(xù)42cLW此A&-42、D-半乳糖、AICI3S個因素綜合處理C57BL/6小鼠，復(fù) 審IJAD模型小鼠。同時對照組巧7BL/6小鼠雙偵順室、腹腔注射和灌胃等量的生理鹽水。
[00化]2.2藥物劑量的設(shè)定 [0087] 2.2.1中藥組合物劑量的設(shè)定
[008引中藥組合物包括白術(shù)13g、龍眼肉15g、阿膠8g、魚饌20g、敗醬草8g、地錦草12g、地 膚子12g、夏枯草12g、蓮米12g、皂刺8g、白裝襲9g和威靈仙8g，每份中藥組合物137g/成人標(biāo) 準(zhǔn)體重。經(jīng)過評定后，137g/成人標(biāo)準(zhǔn)體重是該中藥組合物臨床患者安全有效劑量。另外，依 據(jù)小鼠和人的體表面積比值0.0026:1，求得標(biāo)準(zhǔn)體重小鼠的中藥組合物劑量是[(137gX 0.0026)/20g小鼠 ]X 50，即（17.8Ig/kg小鼠）。17.81 g/kg為中藥組合物中劑量，中藥組合物 高劑量是中藥組合物中劑量的兩倍，而中藥組合物低劑量是中藥組合物中劑量的二分之 一。因此本實(shí)驗(yàn)設(shè)定了中藥組合物的高、中、低劑量分別是35.62g/kg、17.81g/kg、8.91g/ kg ο
[0089] 2.2.2陽性藥物劑量的設(shè)定
[0090] 臨床上AD患者使用多奈贓齊安全有效劑量是(5-10 )mg，依據(jù)小鼠和人的體表面積 比值為0.0026:1，得到小鼠給予多奈贓齊進(jìn)行治療的多奈贓齊安全有效劑量是(5 X 0.0026 X 50-10 X 0.0026 X 50 )mg/kg，即（0.65-1.3)mg/kg，換算成分子是單位g，即（0.00065- 0.0013)g/kg，經(jīng)過黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院內(nèi)分泌科栗明副主任醫(yī)師、博±后評 定，本實(shí)驗(yàn)選擇0.0 Olg/kg多奈贓齊治療AD模型小鼠。
[0091 ] 2.3實(shí)驗(yàn)動物分組及其給藥
[00刮實(shí)驗(yàn)選擇A&-42、D-半乳糖和AICI3制備AD模型小鼠，確定40只AD模型小鼠，將AD模 型小鼠隨機(jī)分成模型組，治療組，中藥組合物高、中、低劑量組(分別簡稱高、中、低劑量組）， 每組8只。另設(shè)定同月齡、同背景、健康巧7BL/6小鼠8只為對照組。對照組、模型組小鼠分別 給予生理鹽水灌胃，治療組給予多奈贓齊0.OOlg/kg灌胃，按照Ig中藥組合物干粉相當(dāng)于中 藥組合物原藥材3.77g計(jì)算，中藥組合物高、中、低劑量組分別給予相當(dāng)于中藥組合物原藥 材35.62邑/1^、17.81邑/1^、8.91邑/4邑的中藥組合物干粉(實(shí)施例7制備)灌胃，灌胃時將干粉 溶解于與對照組、模型組等量的生理鹽水中，灌胃持續(xù)42d。
[0093] 2.4定位航行能力實(shí)驗(yàn)
[0094] 定位航行能力實(shí)驗(yàn)用于檢測小鼠學(xué)習(xí)能力，采用Morris水迷宮(MWM)儀器進(jìn)行測 定定位航行能力。MWM主要結(jié)構(gòu)包括圓形水池、水下平臺、電腦、攝像機(jī)和數(shù)據(jù)分析軟件系 統(tǒng)。實(shí)驗(yàn)設(shè)定實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的基本條件包括水溫(23±2)°C，水深20cm，水下平臺放于第IV象限， 室內(nèi)外參照物一致，無外界噪音干擾，水池內(nèi)放上奶粉及白色素，每次MWM測試后需用吹干 機(jī)吹干小鼠，避免小鼠生病，MWM水池邊緣標(biāo)記四個象限如第I象限、第II象限、第III象限、 第IV象限，實(shí)驗(yàn)者不要說話等等。MWM實(shí)驗(yàn)設(shè)定的時間是5d，其中第l-4d為小鼠的訓(xùn)練時間， 第5d為小鼠的巧聯(lián)時間。每次小鼠訓(xùn)練時間為60s，若小鼠60s內(nèi)未找到第IV象限水下平臺， 則將小鼠引至第IV象限水下平臺停留15s，此時小鼠潛伏期為60s。第5d開始測試小鼠的學(xué) 習(xí)能力，記錄小鼠到達(dá)第IV象限水下平臺位置的潛伏期，W此評價小鼠學(xué)習(xí)能力。
[0095] 2.5空間探索能力實(shí)驗(yàn)
[0096] 空間探索能力實(shí)驗(yàn)用于檢測各組小鼠記憶能力，實(shí)驗(yàn)過程及其注意事項(xiàng)同上 (2.4) ，在測試第5d時候撤去第IV象限水下平臺，測試在60s內(nèi)小鼠找到第IV象限水下平臺 的游泳距離，W此來評價小鼠記憶能力。
[0097] 2.6跨越平臺試驗(yàn)
[0098] 跨越平臺實(shí)驗(yàn)用于檢測小鼠學(xué)習(xí)記憶保持能力，MWM實(shí)驗(yàn)過程及注意事項(xiàng)同上 (2.4) ，在測試第5加寸撤去第IV象限水下平臺，測試在60s內(nèi)小鼠跨越平臺所在位置次數(shù)(跨 平臺次數(shù))及其小鼠在原第IV象限移動平臺所在象限的游泳時間（目標(biāo)象限停留時間），W 此來評價小鼠學(xué)習(xí)記憶保持能力。
[0099] 2.7透射電子顯微鏡巧61)觀察海馬〔41區(qū)結(jié)構(gòu)
[0100] MWM實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，小鼠水合氯醒（10%)腹腔注射麻醉后，固定小鼠四肢和頭部，剪 開胸腔，暴露屯、臟，輸液器針頭直接刺入小鼠左屯、室屯、尖搏動最明顯的地方，剪開右屯、耳， 緩慢勻速點(diǎn)滴生理鹽水90ml，小鼠肝臟逐漸變白為止，且右屯、耳流出白色清亮液體，使用 2.5%戊二醒溶液緩慢勻速灌注約80ml，直到各組小鼠四肢及其尾己僵硬為止，確定小鼠屯、 臟灌注成功。將小鼠放到超凈工作臺上，取材各組小鼠腦組織，尋找海馬，將小鼠腦組織海 馬CA1區(qū)切成l-3mm3小塊，2.5 %戊二醒固定小鼠腦組織海馬CA1區(qū)、四氧化餓固定、脫水、包 埋、CM1900冰凍切片機(jī)切片、染色，TECNAI G2型TEM(FEI/曲ilips公司）觀察各組小鼠腦組 織海馬CA1區(qū)的超微結(jié)構(gòu)，W此評價中藥組合物對AD小鼠腦組織海馬超微結(jié)構(gòu)的影響。
[0101] 2.8酶聯(lián)免疫吸附法化1^54)巧憶4〇小鼠腦組織海馬4口口、4&-42、4&-4日、比-10、了冊- α、比-6、Be 1 -2、Bax和血清Αβι-4日水平
[0102] iWM實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，抓取各組小鼠，眼科綴子快速摘除小鼠眼球，獲得小鼠眼眶的混 合血。斷頭處死小鼠，使用超凈工作臺迅速在冰上取材小鼠腦組織，去除小腦和腦干，取材 小鼠腦組織海馬，勻漿，4 °C冰箱靜置勻漿液1 h。TCL-16G臺式離屯、機(jī)3000巧m/mi η離屯、 20min，取上清液，分裝，檢測小鼠腦組織海馬樣品蛋白和血清樣品蛋白含量。余下小鼠腦組 織海馬樣品蛋白和小鼠血清樣品蛋白保存于-80°C冰箱備用。設(shè)置空白孔、標(biāo)準(zhǔn)品孔及樣品 孔。各孔中加入相應(yīng)的物質(zhì)。采用6100型RT-雷杜酶標(biāo)儀進(jìn)行測定450nm的波長下的吸光度 值。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線的方程及其各孔的吸光度值計(jì)算出小鼠腦組織海馬APP、A&-42、A&-4〇、Ik 1β、TNF-a、化-6、Be 1-2、Bax和血清Αβι-4〇含量，W此評價中藥組合物對AD小鼠腦組織海馬 APP相關(guān)蛋白、炎癥介質(zhì)、細(xì)胞調(diào)亡的影響。
[0103] 2.9測定腦組織 T-A0C、S0D、GSH-PX 和 MDA 含量
[0104] iWM實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，水合氯醒（10% )麻醉小鼠，取材小鼠腦組織，分離小鼠腦組織海 馬，勻漿，靜置海馬化，TGkl6G臺式離屯、機(jī)300化pm/min離屯、20min，取上清液，分裝，按照試 劑盒說明書測定小鼠腦組織海馬T-A0C、SOD、G細(xì)-ra和MDA含量，W此評價中藥組合物對AD 小鼠抗氧化能力的影響。
[0105] 2.10測定小鼠腦組織BBB通透性
[0106] 小鼠腦組織BBB通透性用腦組織伊文氏藍(lán)化B)滲出量進(jìn)行表示，按照倍比稀釋方 法依次配成8、4、2、1、0.5、0.254旨/1111的邸標(biāo)準(zhǔn)溶液，45°(：避光解育72}1，使用6100型1^-雷杜 酶標(biāo)儀檢測630nm的吸光度值(A)dW邸濃度為橫坐標(biāo)，吸光度值(A)為縱坐標(biāo)，求出EB濃度 的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程。MWM實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，小鼠尾靜脈注射2%EB，麻醉各組小鼠，輸液器針頭扎入 左屯、室屯、尖搏動最明顯的部位，緩慢灌注生理鹽水約90ml，剪開右屯、耳，將小鼠放到超凈工 作臺迅速解剖，取小鼠腦組織，記錄小鼠腦組織重量為腦組織濕重，浸泡甲酯胺溶液，45 °C 避光解育72h，勻漿腦組織，T化-16G臺式離屯、機(jī)3000巧m/min離屯、lOmin。使用6100型RT-雷 杜酶標(biāo)儀63化m處測定腦組織上清液吸光度值(A)。根據(jù)邸標(biāo)準(zhǔn)曲線求出EB含量，EB含量計(jì) 算公式為:邸含量(yg/g)=邸濃度/腦組織濕重。
[0107] 2.11免疫組織化學(xué)（IHC)測定小鼠腦組織海馬RAGE、NF-K化65、LRPl、Apo J和Apo E蛋白表達(dá)
[010引 2.11.1屯、臟灌注
[0109] 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，水合氯醒麻醉小鼠，剪開胸腔，暴露屯、臟，剪開右屯、耳，左屯、室屯、 尖處搏動最明顯的地方緩慢勻速點(diǎn)滴生理鹽水lOOml，直到小鼠肝臟組織完全變白為止， 4%多聚甲醒緩慢勻速灌注大約50ml，小鼠四肢及尾己僵硬，確定各組小鼠屯、臟灌注成功。
[0110] 2.11.2石蠟切片
[0111] 小鼠屯、臟灌注好后，超凈工作臺上準(zhǔn)備取材全腦，去除小鼠的小腦和腦干，將小鼠 腦組織修整齊后，放到含有4%多聚甲醒的固定容器中2地。使用從低濃度逐漸過渡到高濃 度的乙醇進(jìn)行脫水，二甲苯透明，小鼠腦組織放到融化的液態(tài)石蠟中，液態(tài)石蠟?zāi)毯?，?蠟塊放到冷水30min，切片機(jī)對小鼠腦組織進(jìn)行連續(xù)切片，腦組織切片的厚度是扣m，切片棟 于經(jīng)過多聚賴氨酸處理過的玻片上，切片烘烤化，保存于4°C冰箱中。
[0112] 2.11.3 I肥測定小鼠腦組織海馬RAGE、NF-K化65、LRPl、Apo J和Apo E蛋白的表達(dá)
[0113] 采用IHC測定海馬RAGE、NF-K化65、LRPl、Apo J和Apo E蛋白表達(dá)。IHC基本過程包 括石蠟切片脫蠟、3 %出化處理、加入一抗、4°C冰箱過夜、PBS洗涂、加入二抗、37 °C解育、PBS 洗涂、MB顯色、光學(xué)顯微鏡下觀察切片、蒸饋水沖洗、蘇木精復(fù)染、PBS洗涂、分化、藍(lán)化、脫 水、透明、封片等基本過程。同時設(shè)立陰性對照組和陽性對照組排除本實(shí)驗(yàn)假陽性和假陰 性，采用HMIAS高清晰度彩色醫(yī)學(xué)圖文分析系統(tǒng)進(jìn)行分析切片，計(jì)數(shù)各組小鼠腦組織海馬平 均光密度值，比較分析小鼠腦組織海馬RAGE、NF-K化65、LRP1、Apo J和Apo E蛋白的平均光 密度值，W此評價中藥組合物對RAGE、NF-K化65、LRPl、Apo J和Apo E蛋白的表達(dá)水平。
[0114] 2.12實(shí)時定量-PCR(RT-PCR)測定小鼠腦組織海馬RAGE、NF-K化65、LRPl、Apo J和 Apo E mRNA的表達(dá)
[0115] 取新鮮小鼠腦組織海馬化ippocampus)樣品放入預(yù)冷的研鉢中，加入液氮進(jìn)行充 分的研磨，將小鼠腦組織海馬粉末移入EP管中，提取總RNA。檢測提取的小鼠腦組織海馬總 RNA濃度，測定0D260/280的值為1.8-2.0之間，說明所提取的小鼠腦組織海馬RNA純度符合 要求，同時將總RNA進(jìn)行瓊脂糖(Agarose)電泳，驗(yàn)證小鼠腦組織海馬總RNA的完整性(28S、 18S兩條帶）。將小鼠腦組織海馬總RNA于冰箱中進(jìn)行保存，W備后面的實(shí)驗(yàn)使用。使用 TaKaRa反轉(zhuǎn)錄試劑盒，按組成配制RT-PCR的反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)液，進(jìn)行檢測小鼠腦組織（Brain tissue)海馬樣品。設(shè)定引物序列，包括RAGE、NF-K化65、LRPl、Apo J、Apo E和β-actin的正 反向引物(表1所示）。
[01W 表1引物名稱和序列 「01171
[0118] RT-PCR反應(yīng)參數(shù)為：50°C2min，95°C lOmin，1切Cle。50°C 2min，95 °C lOmin，95°C 15s，60°C Imin，40切cles。本實(shí)驗(yàn)的所有數(shù)據(jù)均采用Aet法計(jì)算。A cti =(中藥組合物未 處理樣品）基因 Mean Ct值一β-actin基因 Mean Ct值。ACt2=(中藥組合物處理樣品）基因 Mean Ct值一β-actin基因 Mean Ct值。Δ ACt=ACti(中藥組合物處理樣品）一ACt2(中藥 組合物未處理樣品），本實(shí)驗(yàn)采用法評價小鼠腦組織(Br曰in tissue)海馬目的基因表 達(dá)的水平，法表示的RT-PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果數(shù)值越大，則目的基因表達(dá)越強(qiáng)，W此評價中藥 組合物對小鼠腦組織海馬RAGE、NF-K化65、LRPl、Apo J和Αρο Ε mRNA的表達(dá)水平。
[0119] 2.13測定小鼠體重和臟器指數(shù)
[0120] 中藥組合物給藥過程中，平均每7d使用電子天平測定小鼠體重。mm實(shí)驗(yàn)結(jié)束后， 斷頭處死小鼠，超凈工作臺上解剖各組小鼠，取材小鼠脾、胸腺、腦、屯、、肺、肝和腎，洗涂小 鼠的脾、胸腺、腦、屯、、肺、肝和腎，吸干臟器水分，電子天平稱量小鼠脾、胸腺、腦、屯、、肺、肝 和腎臟器質(zhì)量，計(jì)算小鼠脾、胸腺、腦、屯、、肺、肝和腎指數(shù)，比較各組小鼠的體重和臟器指數(shù) 差異，W此評價中藥組合物的副作用。臟器指數(shù)(mg/g)=臟器質(zhì)量(mg)/小鼠體重(g)。
[0121] 2.14統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
[0122] 采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS19.0分析處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)使用?±8進(jìn)行表示，實(shí)驗(yàn)數(shù) 據(jù)符合正態(tài)分布(Normal Distribution)及其方差齊等統(tǒng)計(jì)學(xué)的基本標(biāo)準(zhǔn)，單因素方差分 析(化e way AN0VA)多組間的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P>0.05表示差異 無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
[0123] 3 結(jié)果
[0124] 3.1中藥組合物對AD小鼠潛伏期的影響
[0125] 實(shí)驗(yàn)使用潛伏期評價小鼠定位航行能力，隨著各組小鼠訓(xùn)練時間延長，各組小鼠 的潛伏期均表現(xiàn)出下降趨勢，預(yù)示各組小鼠尋找第IV象限水下平臺的能力逐漸增強(qiáng)，說明 小鼠定位航行能力逐漸增強(qiáng)。統(tǒng)計(jì)分析訓(xùn)練第4d和測試第5d潛伏期，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與對照 組比較，模型組AD小鼠潛伏期明顯延長(P<0.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，預(yù)示模型組AD小鼠 尋找第IV象限水下平臺比較困難，說明AD模型小鼠學(xué)習(xí)能力下降，模型建立成功，適合選擇 該模型開展抗AD的實(shí)驗(yàn)研究；與模型組比較，治療組、中藥組合物高劑量組、中藥組合物中 劑量組小鼠潛伏期明顯縮短(P<〇.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，預(yù)示中藥組合物高、中劑量可 W促進(jìn)小鼠較快地尋找到第IV象限水下平臺，捜尋第IV象限水下平臺的時間縮短，說明中 藥組合物高、中劑量可W改善各組小鼠的學(xué)習(xí)能力；與模型組比較，中藥組合物低劑量組小 鼠潛伏期改變不明顯(P>〇.05)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，預(yù)示中藥組合物低劑量組小鼠尋找第 IV象限水下平臺的能力較弱，說明中藥組合物低劑量改善AD模型小鼠的學(xué)習(xí)能力較差。見 表2、圖1。
[0126] 表2中藥組合物對AD小鼠潛伏期的影響店±S，n = 8) Γ01271
[0128] 注:與對照組比較，沖<0.05;與模型組比較，咕<0.05，中>0.05 [0129 ] 3.2中藥組合物對AD小鼠游泳距離的影響
[0130] 實(shí)驗(yàn)使用小鼠的游泳距離評價小鼠的空間探索能力，隨著小鼠訓(xùn)練時間的延長， 各組小鼠的游泳距離均表現(xiàn)出下降的趨勢，預(yù)示第IV象限移動平臺的位置在小鼠腦組織內(nèi) 部已經(jīng)存儲、加工、提取，說明小鼠的空間探索能力逐漸增強(qiáng)。統(tǒng)計(jì)分析訓(xùn)練第3-4d和測試 第5d游泳距離，結(jié)果表明，對照組比較，模型組AD小鼠游泳距離明顯增加(P<0.05)，差異有 統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，預(yù)示小鼠尋找第IV象限水下移動平臺比較困難，說明模型組小鼠的記憶能力 不佳，提示AD模型穩(wěn)定;與模型組比較，治療組、中藥組合物高劑量組、中藥組合物中劑量組 小鼠游泳距離明顯減少(P<〇.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，預(yù)示中藥組合物高、中劑量可W促 進(jìn)小鼠較快尋找到第IV象限水下平臺，提示第IV象限水下平臺的位置已經(jīng)在小鼠的腦組織 記憶腦區(qū)存儲、加工、提取，說明小鼠的記憶能力逐漸得到改善;與模型組比較，中藥組合物 低劑量組小鼠游泳距離改變不明顯(P>〇.05)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，預(yù)示中藥組合物低劑量 改善AD模型小鼠的記憶能力較差。見表3、圖2。
[0131] 表3中藥組合物對AD小鼠游泳距離的影響G±s，n = 8)
[0132]
[0134] 注:與對照組比較，沖<0.05;與模型組比較，咕<0.05，咕>0.05
[0135] 3.3中藥組合物對AD小鼠目標(biāo)象限停留時間和跨平臺次數(shù)的影響
[0136] 通過檢測小鼠的目標(biāo)象限停留時間和跨平臺次數(shù)，W此評價各組小鼠的學(xué)習(xí)記憶 保持能力。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與對照組比較，模型組AD小鼠目標(biāo)象限停留時間明顯縮短，且跨 平臺次數(shù)明顯降低(P<〇.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，預(yù)示模型組AD小鼠對第IV象限移動平臺 的學(xué)習(xí)記憶保持能力不佳，說明模型組AD小鼠的學(xué)習(xí)記憶保持能力較弱；與模型組比較，治 療組、中藥組合物高劑量組、中藥組合物中劑量組小鼠目標(biāo)象限停留時間明顯延長，且跨平 臺次數(shù)明顯增加(P<〇.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，預(yù)示中藥組合物高、中劑量組小鼠的學(xué)習(xí) 記憶保持能力逐漸改善;與模型組比較，中藥組合物低劑量組小鼠目標(biāo)象限停留時間和跨 平臺次數(shù)改變不明顯(P>〇.05)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，預(yù)示中藥組合物低劑量對小鼠學(xué)習(xí)記 憶保持能力影響不明顯。見表4、圖3。
[0137]表4中藥組合物對AD小鼠目標(biāo)象限停留時間和跨平臺次數(shù)的影響(王±8，11 = 8)
[013 引
[0139] 注:與對照組比較，中<0.05;與模型組比較，咕<0.05，咕>0.05
[0140] 3.4中藥組合物對AD小鼠腦組織海馬CA1區(qū)超微結(jié)構(gòu)的影響
[0141] ??Μ觀察對照組小鼠腦組織海馬CA1區(qū)神經(jīng)元形態(tài)較規(guī)則，胞體較大，核楠圓形且 清晰，線粒體和粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)豐富，核膜較清晰，預(yù)示對照組小鼠腦組織海馬CA1區(qū)神經(jīng)元結(jié) 構(gòu)正常;模型組AD小鼠腦組織海馬CA1區(qū)神經(jīng)元不規(guī)則，細(xì)胞器不豐富，細(xì)胞核小而楠圓，粗 面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)較少，高爾基復(fù)合體較少，預(yù)示模型組小鼠腦組織海馬CA1區(qū)神經(jīng)元結(jié)構(gòu)欠佳;治 療組、中藥組合物高劑量組、中藥組合物中劑量組小鼠腦組織海馬CA1區(qū)神經(jīng)元形態(tài)規(guī)則， 胞體較大，核較大且楠圓形，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基復(fù)合體較多，預(yù)示中藥組合物高、中劑量改 善小鼠腦組織海馬CA1區(qū)神經(jīng)元的基本結(jié)構(gòu)；中藥組合物低劑量組小鼠腦組織海馬CA1區(qū)神 經(jīng)元細(xì)胞核圓形，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)線粒體較少，預(yù)示中藥組合物低劑量對小鼠腦組織海馬CA1區(qū)神 經(jīng)元的結(jié)構(gòu)影響不明顯。見圖4、圖5。
[0142] 3.5中藥組合物對AD小鼠腦組織海馬APP含量的影響
[0143] 結(jié)果表明，與對照組比較，模型組AD小鼠腦組織海馬APP含量明顯增加(P<0.05)， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，預(yù)示模型組AD小鼠腦組織產(chǎn)生Αβ的原材料APP增加，有利于腦組織APP 生成Αβ;與模型組比較，治療組、中藥組合物高劑量組、中藥組合物中劑量組小鼠腦組織海 馬ΑΡΡ含量明顯降低(Ρ<0.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，預(yù)示中藥組合物高、中劑量可W減少腦 組織Αβ的原材料，減少腦組織Αβ的生成，進(jìn)而減輕AD的癥狀和體征；與模型組比較，中藥組 合物低劑量組小鼠腦組織海馬ΑΡΡ含量改變不明顯(Ρ>0.05)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明中 藥組合物低劑量對小鼠腦組織海馬ΑΡΡ含量影響較弱。見表5、圖6。
[0144] 表5中藥組合物對AD小鼠腦組織海馬APP含量的影響侶超）
[0145]
[0146] 注:與對照組比較，吁<0.05;與模型組比較，咕<0.05，中>0.05
[0147] 3.6中藥組合物對AD小鼠腦組織海馬A執(zhí)-4洽量的影響
[0148] 結(jié)果表明，與對照組比較，模型組AD小鼠腦組織海馬Αβι-42含量明顯增加（P< 0.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，預(yù)示模型組AD小鼠腦組織可W形成SP和A孤Ls的Αβ水平增加，有 利于模型組AD小鼠腦組織SP和A孤Ls的形成，加重AD的癥狀和體征；與模型組比較，治療組、 中藥組合物高劑量組、中藥組合物中劑量組小鼠腦組織海馬Αβ?-42含量明顯降低（P< 0.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，預(yù)示中藥組合物高、中劑量可W減少小鼠腦組織SP和A孤Ls的形 成，有利于AD的治療；與模型組比較，中藥組合物低劑量組小鼠腦組織海馬Αβ?-42含量改變 不明顯(Ρ>0.05)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，預(yù)示中藥組合物低劑量對小鼠腦組織海馬Αβι-42含 量影響較弱。見表6、圖6。
[0149] 表6中藥組合物對AD小鼠腦組織海馬A執(zhí)-4洽量的影響(V±S)
[0150]
[0151] 注:與對照組比較，*P<0.05;與模型組比較，咕<0.05,中>0.05
[0152] 3.7中藥組合物對AD小鼠腦組織海馬A執(zhí)-4倫量的影響
[0153] 結(jié)果表明，與對照組比較，模型組AD小鼠腦組織海馬Αβι-4〇含量明顯增加（P< 0.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，預(yù)示模型組AD小鼠腦組織可W進(jìn)行跨BBB轉(zhuǎn)運(yùn)的Αβ含量增加，腦 組織容易形成SP;與模型組比較，治療組、中藥組合物高劑量組、中藥組合物中劑量組小鼠 腦組織海馬Αβι-4〇含量明顯降低(Ρ<〇.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，預(yù)示中藥組合物高、中劑量 可W減少小鼠腦組織族-40含量;與模型組比較，中藥組合物低劑量組小鼠腦組織海馬族-40 含量改變不明顯(P>〇.05)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表7、圖6。
[0154] 表7中藥組合物對AD小鼠腦組織海馬A執(zhí)-4倫量的影響(；±S)
[0155]
[0156] 注:與對照組比較，*P<0.05;與模型組比較，咕<0.05，咕>0.05
[0157] 3.8中藥組合物對AD小鼠血清A執(zhí)-4倫量的影響
[015引結(jié)果表明，與對照組比較，模型組AD小鼠血清Αβι-40含量明顯增加(P<0.05)，差異 有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，預(yù)示肝、腎、脾、胃等器官對施-40代謝較少，或者血清中可W結(jié)合施-40的可 溶性LRP1蛋白含量減少而導(dǎo)致游離的Αβι-40水平增加；與模型組比較，治療組、中藥組合物 高劑量組、中藥組合物中劑量組小鼠血清Αβι-40含量明顯減少(Ρ<0.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意 義，預(yù)示肝、腎、脾、胃等器官對施-40代謝較多，或者血清中可W結(jié)合施-40的可溶性LRP1蛋 白含量增加而導(dǎo)致游離的Αβι-40水平減少；與模型組比較，中藥組合物低劑量組小鼠血清A 01-40含量改變不明顯(P>0.05)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，預(yù)示中藥組合物低劑量干擾肝、腎、 脾、胃等器官對Αβι-40代謝不明顯。見表8、圖6。
[0159] 表8中藥組合物對AD小鼠血清A執(zhí)-40含量的影響(Τ±?〇
[0160]
[0161 ] 注:與對照組比較，吁<0.05;與模型組比較，咕<0.05，中>0.05
[0162] 3.9中藥組合物對AD小鼠腦組織海馬IL-10含量的影響
[0163] 結(jié)果表明，與對照組比較，模型組AD小鼠腦組織海馬IL-1 β含量明顯增加 （Ρ < 0.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，預(yù)示模型組AD小鼠腦組織海馬MG活躍，分泌大量炎癥介質(zhì)IL-1 β，介導(dǎo)腦組織神經(jīng)性、無菌性炎癥反應(yīng);與模型組比較，治療組、中藥組合物高劑量組、中藥 組合物中劑量組小鼠腦組織海馬IL-Ιβ含量明顯降低(Ρ<0.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，預(yù)示 中藥組合物高、中劑量可W降低腦組織海馬MG的活躍程度，減少炎癥介質(zhì)IL-Ιβ釋放，進(jìn)而 減輕小鼠腦組織海馬神經(jīng)性、無菌性炎癥反應(yīng);與模型組比較，中藥組合物低劑量組小鼠腦 組織海馬IL-Ιβ含量改變不明顯(P>0.05)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，預(yù)示中藥組合物低劑量對 小鼠腦組織海馬MG的活躍程度影響不明顯。見表9、圖7。
[0164] 表9中藥組合物對AD小鼠腦組織海馬IL-10含量的影響G±S)
[01 化]
[0167] 注:與對照組比較，吁<0.05;與模型組比較，咕<0.05,中>0.05
[016引 3.10中藥組合物對AD小鼠腦組織海馬TNF-a含量的影響
[0169] 結(jié)果表明，與對照組比較，模型組AD小鼠腦組織海馬TNF-α含量明顯增加 （P < 0.05 )，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，預(yù)示模型組AD小鼠腦組織神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞釋放炎癥介質(zhì)TNF-a增 加，加重腦組織海馬區(qū)域的神經(jīng)性、無菌性炎癥反應(yīng);與模型組比較，治療組、中藥組合物高 劑量組、中藥組合物中劑量組小鼠腦組織海馬TNF-a含量明顯降低(P<0.05)，差異有統(tǒng)計(jì) 學(xué)意義，預(yù)示中藥組合物高、中劑量可W降低腦組織神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的活躍程度，降低小鼠腦 組織海馬TNF-a水平，從而減輕小鼠腦組織海馬神經(jīng)性炎癥反應(yīng);與模型組比較，中藥組合 物低劑量組小鼠腦組織海馬TNF-a含量改變不明顯(P>〇.05)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，預(yù)示中 藥組合物低劑量對小鼠腦組織海馬神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的活躍程度影響不明顯。見表10、圖7。
[0170] 表10中藥組合物對AD小鼠腦組織海馬TNF-a含量的影響片±s)
[0171]
[01巧注:與對照組比較，*P<0.05;與模型組比較，咕<0.05，咕>0.05
[0173] 3.11中藥組合物對AD小鼠腦組織海馬IL-6含量的影響
[0174] 結(jié)果表明，與對照組比較，模型組AD小鼠腦組織海馬IL-6含量明顯增加 （P < 0.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，預(yù)示模型組AD小鼠海馬神經(jīng)性、無菌性炎癥反應(yīng)明顯;與模型組 比較，治療組、中藥組合物高劑量組、中藥組合物中劑量組小鼠腦組織海馬IL-6含量明顯降 低(P<0.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，預(yù)示中藥組合物高、中劑量可W改善腦組織海馬神經(jīng)性、 無菌性炎癥反應(yīng)；與模型組比較，中藥組合物低劑量組小鼠腦組織海馬IL-6含量改變不明 顯(P>0.05)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，預(yù)示中藥組合物低劑量對小鼠腦組織海馬神經(jīng)性、無菌 性炎癥反應(yīng)的影響不明顯。見表11、圖7。
[0175] 表11中藥組合物對AD小鼠腦組織海馬IL-6含量的影響G±S)
[0176]
[0177] 注:與對照組比較，吁<0.05;與模型組比較，巧<0.05,中>0.05
[017引 3.12中藥組合物對AD小鼠腦組織海馬Bd-2和Bax含量的影響
[0179] 實(shí)驗(yàn)采用化ISA方法檢測小鼠腦組織海馬Bd-2和Bax含量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與對照 組比較，模型組小鼠腦組織海馬Bcl-2/Bax的比值明顯降低(P<0.05)，提示Bd-2-Bax異二 聚體減少，Bax-Bax同二聚體增加，預(yù)示AD小鼠腦組織海馬神經(jīng)元的線粒體細(xì)胞調(diào)亡較為明 顯。與模型組比較，治療組、中藥組合物高劑量組、中藥組合物中劑量組小鼠腦組織海馬 Bcl-2/Bax的比值明顯升高(P<0.05)，顯示小鼠腦組織海馬抗調(diào)亡蛋白表達(dá)明顯上調(diào)，而 促調(diào)亡蛋白表達(dá)改變不明顯，預(yù)示Bd-2-Bax異二聚體增加，Bax-Bax同二聚體減少，進(jìn)而導(dǎo) 致了Bcl-2/Bax的比值升高，預(yù)示不同劑量中藥組合物可通過增加小鼠腦組織海馬Bcl-2/ Bax的比值來發(fā)揮抗調(diào)亡的積極作用。見表12、圖8。
[0180] 表12中藥組合物對AD小鼠腦組織海馬Bcl-2/Bax比值的影響G±s，n = 8)
[0181]
[0183] 注:與對照組比較，沖<0.05;與模型組比較，咕<0.05，中>0.05
[0184] 3.13中藥組合物對AD小鼠腦組織海馬T-A0C含量的影響
[01化]結(jié)果表明，與對照組比較，模型組AD小鼠腦組織海馬T-A0C含量明顯降低（P< 0.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，預(yù)示模型組AD小鼠腦組織海馬的抗氧化能力減弱，導(dǎo)致腦組織 自由基的產(chǎn)生增加；與模型組比較，治療組、中藥組合物高劑量組、中藥組合物中劑量組小 鼠腦組織海馬T-A0C含量明顯升高(P<0.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明中藥組合物高、中劑 量可W增強(qiáng)AD小鼠腦組織海馬的抗氧化能力，減輕自由基對機(jī)體腦組織的干擾;與模型組 比較，中藥組合物低劑量組小鼠腦組織海馬T-A0C含量改變不明顯(P>0.05)，差異無統(tǒng)計(jì) 學(xué)意義，預(yù)示中藥組合物低劑量對小鼠腦組織海馬的抗氧化能力影響不明顯。見表13、圖9。
[0186] 表13中藥組合物對AD小鼠腦組織海馬T-A0C含量的影響(；±S)
[0187]
[018引注:與對照組比較，中<0.05;與模型組比較，咕<0.05，咕>0.05
[0189] 3.14中藥組合物對AD小鼠腦組織海馬SOD含量的影響
[0190] 結(jié)果表明，與對照組比較，模型組AD小鼠腦組織海馬SOD含量明顯降低(P<0.05)， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，預(yù)示模型組AD小鼠腦組織海馬自由基的清除能力減弱;與模型組比較， 治療組、中藥組合物高劑量組、中藥組合物中劑量組小鼠腦組織海馬SOD含量明顯升高(P< 0.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，預(yù)示中藥組合物高、中劑量組小鼠腦組織海馬清除自由基的能 力增強(qiáng)；與模型組比較，中藥組合物低劑量組小鼠腦組織海馬SOD含量改變不明顯（P> 0.05)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明中藥組合物低劑量對小鼠腦組織海馬自由基的清除能力影 響不明顯。見表14、圖10。
[0191] 表14中藥組合物對AD小鼠腦組織海馬SOD含量的影響G±s)
[0192]
[0194] 注:與對照組比較，吁<0.05;與模型組比較，咕<0.05，中>0.05
[0195] 3.15中藥組合物對AD小鼠腦組織海馬GSH-PX含量的影響
[0196] 結(jié)果表明，與對照組比較，模型組AD小鼠腦組織海馬GSH-PX含量明顯降低（P< 0.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，預(yù)示模型組AD小鼠腦組織海馬抗氧化能力減弱；與模型組比較， 治療組、中藥組合物高劑量組、中藥組合物中劑量組小鼠腦組織海馬GSH-PX含量明顯增加 (P<0.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，預(yù)示中藥組合物高、中劑量明顯提高小鼠腦組織清除自由 基的能力，增強(qiáng)小鼠腦組織海馬抗氧化能力；與模型組比較，中藥組合物低劑量組小鼠腦組 織海馬GSH-PX含量改變不明顯(P>0.05)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，預(yù)示中藥組合物低劑量對小 鼠腦組織海馬的抗氧化能力影響不明顯。見表15、圖11。
[0197] 表15中藥組合物對AD小鼠腦組織海馬GSH-PX含量的影響 [019 引
[0199] 注:與對照組比較，*P<0.05;與模型組比較，咕<0.05，咕>0.05
[0200] 3.16中藥組合物對AD小鼠腦組織海馬MDA含量的影響
[0201] 結(jié)果表明，與對照組比較，模型組AD小鼠腦組織海馬MDA含量明顯增加(P<0.05)， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，預(yù)示模型組AD小鼠腦組織海馬氧化產(chǎn)物增加，抗氧化能力減弱；與模型 組比較，治療組、中藥組合物高劑量組、中藥組合物中劑量組小鼠腦組織海馬MDA含量明顯 降低(P<〇.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，預(yù)示中藥組合物高、中劑量組小鼠腦組織海馬氧化產(chǎn) 物減少，抗氧化能力增強(qiáng)，說明中藥組合物高、中劑量可W改善小鼠腦組織海馬氧化產(chǎn)物的 堆積，增強(qiáng)抗氧化能力；與模型組比較，中藥組合物低劑量組小鼠腦組織海馬MDA含量改變 不明顯(P>0.05)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，預(yù)示中藥組合物低劑量不能改善小鼠腦組織海馬氧 化產(chǎn)物的堆積。見表16、圖12。
[0202] 表16中藥組合物對AD小鼠腦組織海馬MDA含量的影響(T±S)
[0203]
[0204] 注:與對照組比較，吁<〇. 05;與模型組比較，咕<0.05，中>0.05 [02化]3.17中藥組合物對AD小鼠腦組織BBB通透性的影響
[0206] 小鼠腦組織BBB的通透性使用小鼠腦組織EB濃度和邸含量來表示，實(shí)驗(yàn)測定小鼠 腦組織EB濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為Υ = 0.2414X+0.1997，R2 = 0.9874。結(jié)果表明，與對照組比 較，模型組AD小鼠腦組織邸濃度和邸含量明顯增加(Ρ<0.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，預(yù)示模 型組AD小鼠腦組織邸的滲出量增加，說明模型組AD小鼠腦組織ΒΒΒ的通透性增加，促進(jìn)異常 的小分子物質(zhì)進(jìn)入腦組織；與模型組比較，治療組、中藥組合物高劑量組、中藥組合物中劑 量組小鼠腦組織邸濃度和邸含量明顯降低(Ρ<〇.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，預(yù)示腦組織邸的 滲出量減少，說明中藥組合物高、中劑量可W改善AD小鼠腦組織的ΒΒΒ通透性，減少異常的 小分子物質(zhì)進(jìn)入腦組織；與模型組比較，中藥組合物低劑量組小鼠腦組織ΕΒ濃度和邸含量 改變不明顯(Ρ>〇.05)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，預(yù)示中藥組合物低劑量對小鼠腦組織的ΒΒΒ通 透性影響不明顯。見表17、圖13。
[0207] 表17中藥組合物對AD小鼠腦組織ΒΒΒ通透性的影響(?±8)
[020引
[0209]
[0210] 注:與對照組比較，*P<〇.05;與模型組比較，咕<0.05,中>0.05
[0211] 3.18中藥組合物對AD小鼠腦組織海馬RAGE蛋白表達(dá)的影響
[0212] RAGE表達(dá)于海馬神經(jīng)元細(xì)胞膜和/或細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，統(tǒng)計(jì)分析小鼠腦組織海馬RAGE平 均光密度值，結(jié)果表明，與對照組比較，模型組AD小鼠腦組織海馬RAGE平均光密度值明顯增 加(P<0.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，預(yù)示模型組AD小鼠腦組織海馬RAGE蛋白表達(dá)增加，提示 模型組AD小鼠腦組織海馬神經(jīng)元與Αβ結(jié)合較多，模型組AD小鼠腦組織海馬神經(jīng)性炎癥反 應(yīng)、氧化應(yīng)激反應(yīng)和細(xì)胞調(diào)亡較強(qiáng)，加重了模型組AD小鼠腦組織海馬的損傷；與模型組比 較，治療組、中藥組合物高劑量組、中藥組合物中劑量組小鼠腦組織海馬RAGE平均光密度值 明顯減少（P<〇. 05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，預(yù)示中藥組合物高、中劑量組小鼠腦組織海馬 RAGE蛋白表達(dá)減弱，提示中藥組合物高、中劑量組小鼠腦組織海馬神經(jīng)元與Αβ結(jié)合較少，海 馬神經(jīng)性炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激反應(yīng)和細(xì)胞調(diào)亡較弱，說明中藥組合物高、中劑量可W改善小 鼠腦組織海馬的神經(jīng)性、無菌性炎癥反應(yīng)等，進(jìn)而減輕了小鼠腦組織海馬的損傷;與模型組 比較，中藥組合物低劑量組小鼠腦組織海馬RAGE平均光密度值改變不明顯(Ρ>0.05)，差異 無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，預(yù)示中藥組合物低劑量對小鼠腦組織海馬RAGE蛋白表達(dá)影響不明顯。見表 18、圖14。
[0213] 表18中藥組合物對AD小鼠腦組織海馬RAGE蛋白表達(dá)的影響朽±S) 「02141
[0215] 注:與對照組比較，*P<〇.05;與模型組比較，咕<0.05,中>0.05
[0216] 3.19中藥組合物對AD小鼠腦組織海馬NF-KBp65蛋白表達(dá)的影響
[0217] NF-K化65表達(dá)于小鼠腦組織海馬神經(jīng)元細(xì)胞質(zhì)和/或細(xì)胞核等等，統(tǒng)計(jì)分析小鼠 腦組織海馬NF-K化65的平均光密度值，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與對照組比較，模型組AD小鼠腦組織 海馬NF-K化65的平均光密度值明顯增加 （P < 0.05)，預(yù)示模型組AD小鼠腦組織海馬NF-K 化65表達(dá)增加，提示模型組AD小鼠腦組織海馬神經(jīng)性炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激反應(yīng)、細(xì)胞調(diào)亡明 顯，進(jìn)而導(dǎo)致腦血流量減少，促進(jìn)小鼠腦組織損傷;與模型組比較，治療組、中藥組合物高劑 量組、中藥組合物中劑量組小鼠腦組織海馬NF-K化65平均光密度值明顯減少(P<0.05)，預(yù) 示中藥組合物高、中劑量小鼠腦組織海馬NF-K化65表達(dá)減弱，提示中藥組合物高、中劑量可 W改善小鼠腦組織海馬神經(jīng)性炎癥反應(yīng)和腦組織血流量等等；與模型組比較，中藥組合物 低劑量組小鼠腦組織海馬NF-K化65平均光密度值改變不明顯(P > 0.05 )，預(yù)示中藥組合物 低劑量對小鼠腦組織海馬NF-K化65蛋白表達(dá)影響不明顯。見表19、圖14。
[0218] 表19中藥組合物對AD小鼠腦組織海馬NF-KBp65蛋白表達(dá)的影響(；±S)
[0219]
[0220] 注:與對照組比較，*P<0.05;與模型組比較，咕<0.05,中>0.05
[0221 ] 3.20中藥組合物對AD小鼠腦組織海馬LRP1蛋白表達(dá)的影響
[0222] LRP1表達(dá)于小鼠腦組織海馬神經(jīng)元、血管內(nèi)皮細(xì)胞等細(xì)胞質(zhì)和/或細(xì)胞核內(nèi)，統(tǒng)計(jì) 分析小鼠腦組織海馬LRP1平均光密度值，結(jié)果表明，與對照組比較，模型組AD小鼠腦組織海 馬LRP1平均光密度值明顯減少(P<0.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，預(yù)示模型組AD小鼠腦組織海 馬LRP1表達(dá)減弱，提示模型組AD小鼠腦組織海馬清除Αβ的能力減弱，容易造成海馬A財只聚， 促進(jìn)AD的發(fā)生發(fā)展；與模型組比較，治療組、中藥組合物高劑量組、中藥組合物中劑量組小 鼠腦組織海馬LRP1平均光密度值明顯增加(P<0.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，預(yù)示中藥組合物 高、中劑量組小鼠腦組織海馬LRP1表達(dá)增強(qiáng)，說明中藥組合物高、中劑量小鼠腦組織海馬清 除Αβ的能力增強(qiáng)，有利于治療AD;與模型組比較，中藥組合物低劑量組小鼠腦組織海馬LRP1 平均光密度值改變不明顯(Ρ>〇.05)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，預(yù)示中藥組合物低劑量對小鼠腦 組織海馬清除Αβ的能力影響不明顯。見表20、圖14。
[0223] 表20中藥組合物對AD小鼠腦組織海馬LRP1蛋白表達(dá)的影響(之±8)
[0224]
[02巧]注:與對照組比較，*P<0.05;與模型組比較，咕<0.05,中>0.05
[0226] 3.21中藥組合物對AD小鼠腦組織海馬Apo J蛋白表達(dá)的影響
[0227] Apo J蛋白表達(dá)于小鼠腦組織海馬神經(jīng)元細(xì)胞核內(nèi)，統(tǒng)計(jì)分析小鼠腦組織海馬Apo J平均光密度值，結(jié)果表明，與對照組比較，模型組AD小鼠腦組織海馬Apo J平均光密度值明 顯減少(P<〇.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，預(yù)示模型組AD小鼠腦組織海馬Apo J表達(dá)減弱，提示 模型組AD小鼠腦組織海馬Αβ清除率降低；與模型組比較，治療組、中藥組合物高劑量組、中 藥組合物中劑量組小鼠腦組織海馬Apo J平均光密度值明顯增加(Ρ<0.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué) 意義，預(yù)示中藥組合物高、中劑量組小鼠腦組織海馬Apo J表達(dá)增強(qiáng)，提示中藥組合物高、中 劑量組小鼠腦組織海馬Αβ清除率增加；與模型組比較，中藥組合物低劑量組小鼠腦組織海 馬Apo J平均光密度值改變不明顯(Ρ>0.05)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，預(yù)示中藥組合物低劑量 對小鼠腦組織海馬Αβ清除率影響不明顯。見表21、圖14。
[022引表21中藥組合物對AD小鼠腦組織海馬Apo J蛋白表達(dá)的影響保:±句
[0229]
[0230] 注:與對照組比較，吁<0.05;與模型組比較，咕<0.05,中>0.05
[0231] 3.22中藥組合物對AD小鼠腦組織海馬Apo E蛋白表達(dá)的影響
[0232] 統(tǒng)計(jì)分析小鼠腦組織海馬Apo E平均光密度值，結(jié)果表明，與對照組比較，模型組 AD小鼠腦組織海馬Apo E平均光密度值明顯減少(P<0.05)，預(yù)示模型組AD小鼠腦組織海馬 Apo E表達(dá)減弱，不利于小鼠腦組織Αβ清除；與模型組比較，治療組、中藥組合物高劑量組、 中藥組合物中劑量組小鼠腦組織海馬Apo Ε平均光密度值明顯增加(Ρ<0.05)，預(yù)示中藥組 合物高、中劑量可W增強(qiáng)小鼠腦組織海馬Apo E表達(dá)，有利于小鼠腦組織Αβ清除；與模型組 比較，中藥組合物低劑量組小鼠腦組織海馬Αρο Ε平均光密度值改變不明顯(Ρ>0.05)，預(yù) 示中藥組合物低劑量對小鼠腦組織海馬Αρο Ε的表達(dá)改變不明顯。見表22、圖14。
[0233] 表22中藥組合物對AD小鼠腦組織海馬Αρο Ε蛋白表達(dá)的影響(i±S)
[0234]
[0Z3引注:與對照組比較，吁<0.05;與模型組比較，咕<0.05,中>0.05
[0236] 3.23中藥組合物對AD小鼠腦組織海馬RAGE mRNA表達(dá)的影響
[0237] 統(tǒng)計(jì)分析小鼠腦組織海馬RAGE mRNA相對表達(dá)量，結(jié)果表明，與對照組比較，模型 組AD小鼠腦組織海馬RAGE mRNA相對表達(dá)量明顯增加(P<0.05)，預(yù)示模型組AD小鼠腦組織 海馬RAGE基因表達(dá)增強(qiáng)，加重模型組AD小鼠腦組織海馬的神經(jīng)性炎癥反應(yīng)等等；與模型組 比較，治療組、中藥組合物高劑量組、中藥組合物中劑量組小鼠腦組織海馬RAGE mRNA相對 表達(dá)量明顯降低（P<〇.05)，預(yù)示中藥組合物高、中劑量減弱小鼠腦組織海馬RAGE基因表 達(dá)，減輕小鼠腦組織海馬的神經(jīng)性炎癥反應(yīng)等等;與模型組比較，中藥組合物低劑量組小鼠 腦組織海馬RAGE mRNA相對表達(dá)量改變不明顯(P>0.05)，預(yù)示中藥組合物低劑量對小鼠腦 組織海馬RAGE基因影響不明顯。見表23、圖15。
[023引表23中藥組合物對AD小鼠腦組織海馬RAGE mRNA表達(dá)的影響(i±s，n = 8)
[0239]
[OW] 注:與對照組比較，中<0.05;與模型組比較，咕<0.05，咕>0.05
[0242] 3.24中藥組合物對AD小鼠腦組織海馬NF-K化65mRNA表達(dá)的影響
[0243] 統(tǒng)計(jì)分析小鼠腦組織海馬NF-K化65mRNA相對表達(dá)量，結(jié)果表明，與對照組比較，模 型組AD小鼠腦組織海馬NF-K化65mRNA相對表達(dá)量明顯增加(P<0.05)，預(yù)示模型組AD小鼠 腦組織海馬NF-K化65基因表達(dá)增加，提示模型組AD小鼠腦組織海馬出現(xiàn)神經(jīng)性炎癥反應(yīng)和 細(xì)胞調(diào)亡等等；與模型組比較，治療組、中藥組合物高劑量組、中藥組合物中劑量組小鼠腦 組織海馬NF-K化65mRNA相對表達(dá)量明顯降低(P<0.05)，預(yù)示中藥組合物高、中劑量改善小 鼠腦組織海馬神經(jīng)性炎癥反應(yīng)和細(xì)胞調(diào)亡等等；與模型組比較，中藥組合物低劑量組小鼠 腦組織海馬NF-K化65mRNA相對表達(dá)量改變不明顯(P>0.05)，預(yù)示中藥組合物低劑量對小 鼠腦組織海馬NF-K化65基因的影響不明顯，說明中藥組合物低劑量對小鼠腦組織海馬神經(jīng) 性炎癥反應(yīng)和細(xì)胞調(diào)亡等影響不明顯。見表24、圖15。
[0244] 表24中藥組合物對AD小鼠腦組織海馬NF-K化65mRNA表達(dá)的影響（?±s，n = 8)
[0245]
[0246] 注:與對照組比較，*P<0.05;與模型組比較，咕<0.05，中>0.05
[0247] 3.25中藥組合物對40小鼠腦組織海馬〇?口11111?^4表達(dá)的影響
[024引統(tǒng)計(jì)分析小鼠腦組織海馬LRP1 mRNA相對表達(dá)量，結(jié)果表明，與對照組比較，模型 組AD小鼠腦組織海馬LRP1 mRNA相對表達(dá)量明顯降低(P<0.05)，預(yù)示模型組AD小鼠腦組織 海馬LRP1基因表達(dá)增加，不利于神經(jīng)元代謝Αβ，減少腦組織Αβ外流，促進(jìn)AD的發(fā)生發(fā)展;與 模型組比較，治療組、中藥組合物高劑量組、中藥組合物中劑量組小鼠腦組織海馬LRP1 mRNA相對表達(dá)量明顯增加(Ρ<0.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，預(yù)示中藥組合物高、中劑量組小 鼠腦組織海馬LRP1表達(dá)上調(diào)，利于神經(jīng)元代謝Αβ，增加腦組織Αβ外流，減緩AD的發(fā)生發(fā)展； 與模型組比較，中藥組合物低劑量組小鼠腦海馬LRP1 mRNA相對表達(dá)量改變不明顯（Ρ> 0.05 )，預(yù)示中藥組合物低劑量對小鼠腦海馬LRP1基因表達(dá)影響不明顯。見表25、圖15。 [0249] 表25中藥組合物對AD小鼠腦組織海馬LRP1 mRNA表達(dá)的影響(?化，η = 8)
[0巧0]
[ο巧1 ] 注:與對照組比較，*Ρ<0.05;與模型組比較，咕<0.05，中>0.05 [0巧2] 3.26中藥組合物對40小鼠腦組織海馬49〇11111?酷表達(dá)的影響 [0巧3]統(tǒng)計(jì)分析小鼠腦組織海馬Apo J mRNA相對表達(dá)量，結(jié)果表明，與對照組比較，模型 組AD小鼠腦組織海馬Apo J mRNA相對表達(dá)量明顯降低(P<0.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，預(yù)示 模型組AD小鼠腦組織海馬Apo J基因表達(dá)減弱，降低了小鼠腦組織海馬Αβ的清除率;與模型 組比較，治療組、中藥組合物高劑量組、中藥組合物中劑量組小鼠腦組織海馬Apo J mRNA相 對表達(dá)量明顯增加(P<〇.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，預(yù)示中藥組合物高、中劑量組小鼠腦組 織海馬Apo J基因表達(dá)增強(qiáng)，增加了小鼠腦組織海馬Αβ的清除率;與模型組比較，中藥組合 物低劑量組小鼠腦組織海馬Apo J mRNA相對表達(dá)量改變不明顯(Ρ>0.05)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué) 意義，預(yù)示中藥組合物低劑量對小鼠腦組織海馬Apo J基因表達(dá)影響不明顯。見表26、圖15。 [0254] 表26中藥組合物對AD小鼠腦組織海馬Apo J mRNA表達(dá)的影響（；±s，n = 8)
[0 巧5]
[0巧7] 注:與對照組比較，吁<0.05;與模型組比較，咕<0.05,中>0.05
[0巧引 3.27中藥組合物對AD小鼠腦組織海馬Apo E mRNA表達(dá)的影響
[0259]統(tǒng)計(jì)分析小鼠腦組織海馬Apo E mRNA相對表達(dá)量，結(jié)果表明，與對照組比較，模型 組AD小鼠腦組織海馬Apo E mRNA相對表達(dá)量明顯降低(P<0.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，預(yù)示 模型組AD小鼠腦組織海馬Apo E基因表達(dá)減弱，不利于小鼠腦組織海馬Αβ清除；與模型組比 較，治療組、中藥組合物高劑量組、中藥組合物中劑量組小鼠腦組織海馬Apo Ε mRNA相對表 達(dá)量明顯增加(P<〇.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，預(yù)示中藥組合物高、中劑量組小鼠腦組織海 馬Apo E基因表達(dá)增強(qiáng)，有利于小鼠腦組織海馬Αβ清除；與模型組比較，中藥組合物低劑量 組小鼠腦組織海馬Apo Ε mRNA相對表達(dá)量改變不明顯(Ρ>0.05)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，預(yù)示 中藥組合物低劑量不利于小鼠腦組織海馬Αβ的清除。見表27、圖15。
[0260] 表27中藥組合物對AD小鼠腦組織海馬Apo Ε mRNA表達(dá)的影響G±s，n = 8)
[0261]
[0%^ 注:與對照組比較，*P<0.05;與模型組比較，咕<0.05,中>0.05
[0263] 3.28中藥組合物對AD小鼠脾、胸腺和腦指數(shù)的影響
[0264] 統(tǒng)計(jì)分析各組小鼠脾、胸腺和腦指數(shù)，結(jié)果表明，與對照組比較，模型組AD小鼠脾、 胸腺和腦指數(shù)明顯降低(P<〇.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，預(yù)示模型組AD小鼠脾、胸腺和腦相 對質(zhì)量減輕，產(chǎn)生B細(xì)胞和T細(xì)胞水平低下，體液免疫和細(xì)胞免疫較弱，伴有腦組織相對質(zhì)量 減輕而出現(xiàn)腦萎縮，說明模型組AD小鼠免疫功能降低和腦組織出現(xiàn)萎縮;與模型組比較，治 療組、中藥組合物高劑量組、中藥組合物中劑量組小鼠脾、胸腺和腦指數(shù)明顯增加（P< 0.05)，預(yù)示中藥組合物高、中劑量可W增加脾、胸腺和腦的相對質(zhì)量，促進(jìn)B細(xì)胞和T細(xì)胞水 平上調(diào)，說明中藥組合物高、中劑量可W改善小鼠的免疫功能，并且減輕腦萎縮的程度;與 模型組比較，中藥組合物低劑量組小鼠脾、胸腺和腦指數(shù)改變不明顯(P>〇.05)，預(yù)示中藥 組合物低劑量對小鼠的免疫功能和腦萎縮的影響不明顯。見表28、圖16。
[0265] 表28中藥組合物對AD小鼠脾、胸腺和腦指數(shù)的影響(別S>n = 8)
[0%6]
[Ο%7] 注:與對照組比較，*Ρ<0.05;與模型組比較，咕<0.05，咕>0.05 [0%引3.29中藥組合物對AD小鼠屯、、肺、肝和腎指數(shù)的影響
[0269] 統(tǒng)計(jì)分析小鼠的屯、、肺、肝和腎指數(shù)，結(jié)果表明，與對照組比較，模型組AD小鼠的 屯、、肺、肝和腎指數(shù)改變不明顯(Ρ>〇.05)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示模型組AD小鼠的重要臟 器指數(shù)改變不明顯，預(yù)示模型組與對照組重要臟器的相對質(zhì)量改變不明顯；與模型組比較， 治療組、中藥組合物高劑量組、中藥組合物中劑量組、中藥組合物低劑量組小鼠的屯、、肺、肝 和腎指數(shù)改變不明顯(Ρ>〇.05)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明中藥組合物高、中、低劑量對各組 小鼠無副作用。見表29、圖17。
[0270] 表29中藥組合物對AD小鼠屯、、肺、肝和腎指數(shù)的影響G巧，η = 8)
[0271]
[0的引注:與對照組比較，吁>0.05;與模型組比較，咕>0.05
[0274] 3.30中藥組合物對AD小鼠體重的影響
[0275] 中藥組合物不同劑量給藥處理小鼠過程中，每7d測定各組小鼠體重，并且得到各 組小鼠的體重變化，顯示中藥組合物不同劑量給藥42加寸間內(nèi)，小鼠體重逐漸增加，預(yù)示中 藥組合物不同劑量對小鼠無副作用。統(tǒng)計(jì)分析各組間小鼠體重的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明， 與對照組比較，模型組AD小鼠體重改變不明顯(P>0.05)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與模型組比 較，治療組、中藥組合物高劑量組、中藥組合物中劑量組、中藥組合物低劑量組小鼠體重改 變不明顯(P>〇.05)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，預(yù)示中藥組合物不同劑量對小鼠無副作用。見表 30、表 31、圖 18。
[0276] 表30中藥組合物對AD小鼠0、7、14、21d體重的影響G主s，n = 8)
[0277]
[0的引注:與對照組比較，中>0.05;與模型組比較，咕>0.05
[0279] 表31中藥組合物對AD小鼠28、35、42d體重的影響(J±s、n = 8)
[0280]
[02W] 注:與對照組比較，吁>0.05;與模型組比較，咕>0.05
[0282] W上實(shí)驗(yàn)綜合表明，中藥組合物高、中劑量可W提高AD小鼠學(xué)習(xí)記憶能力，改善AD 小鼠海馬超微結(jié)構(gòu)，降低AD小鼠腦組織海馬APP、Αβι-42、Αβι-4〇及血清Αβι-4〇水平，降低海馬炎 癥介質(zhì)化-lf3、TNF-a和IL-6水平，增強(qiáng)AD小鼠腦組織海馬Bcl-2表達(dá)且減弱Bax表達(dá)，增加海 馬T-A0C、SOD、G甜-ra水平且降低MDA水平，改善AD小鼠腦組織BBB的通透性，減弱AD小鼠腦 組織海馬RAGE和NF-K化65表達(dá)且增強(qiáng)海馬LRPUApo J和Apo E表達(dá)，改善AD模型小鼠脾、胸 腺和腦指數(shù)，而中藥組合物不同劑量對AD小鼠其他臟器指數(shù)和體重?zé)o影響，基于運(yùn)些，說明 中藥組合物高、中劑量治療AD有效并且無副作用。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種用于治療阿爾茨海默病的中藥組合物，其特征在于該中藥組合物由以下重量份 的各原料藥組成：白術(shù)8-18份，龍眼肉10-20份，阿膠3-13份，魚鰾15-25份，敗醬草3-13份， 地錦草5-20份，地膚子5-20份，夏枯草5-20份，蓮米5-20份，皂刺3-13份，白蒺藜3-15份以及 威靈仙3-13份。2. 如權(quán)利要求1所述的中藥組合物，其特征在于該中藥組合物由以下重量份的各原料 藥組成：白術(shù)13份，龍眼肉15份，阿膠8份，魚鰾20份，敗醬草8份，地錦草12份，地膚子12份， 夏枯草12份，蓮米12份，皂刺8份，白蒺藜9份以及威靈仙8份。3. -種臨床上適宜的用于防治阿爾茨海默病的中藥制劑，其特征在于由權(quán)利要求1或2 所述的中藥組合物加入制劑成型所需的輔料，按照制備藥物制劑的常規(guī)方法制成。4. 如權(quán)利要求3所述的中藥制劑，其特征在于所述的制劑為水煎劑、膠囊劑、丸劑、顆粒 劑、片劑或口服液。5. -種制備權(quán)利要求1或2所述的中藥組合物的方法，其特征在于包括以下步驟： (1) 按照權(quán)利要求1或2所述的重量份稱取各原料藥，將各原料藥混合均勻后放入高頸 圓底燒瓶中，加入藥物重量8-15倍的蒸餾水，浸泡1-2h后，煎煮1-2h，冷卻； (2) 將步驟(1)冷卻后的藥液用紗布過濾，得到第一次濾液； (3) 步驟(2)剩余的藥物殘?jiān)湃敫哳i圓底燒瓶中，重復(fù)步驟（1)和（2)得到第二次濾 液，合并二次濾液； (4) 干燥，得到所述中藥組合物的干膏。6. 如權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于還包括將得到的干膏放在粉碎機(jī)內(nèi)粉碎，研 磨，分子篩處理，得到所述中藥組合物的干粉。7. 權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的中藥組合物在制備治療阿爾茨海默病藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號】A61K35/36GK105998316SQ201610343999
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2016年5月23日
【發(fā)明人】費(fèi)洪新, 張曉杰, 李春旭, 張英博
【申請人】齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院