茴芹果抗腫瘤提取物及其組合物的制備方法和醫(yī)藥用圖
【專利摘要】本發(fā)明屬醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種維吾爾藥茴芹果抗腫瘤提取物及其組合物的制備方法和其在制備預(yù)防及治療腦膠質(zhì)瘤、乳腺癌、肺癌、胃癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、宮頸癌、肝癌等惡性腫瘤藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明提取物通過如下方法獲得：維吾爾藥茴芹果經(jīng)溶劑超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱，先用體積比100：0-100:6的石油醚-丙酮混合溶劑洗脫，繼用體積比100:2-100：50的石油醚-丙酮混合溶劑洗脫，石油醚：丙酮=100:2-100：50洗脫液干燥后即得。
【專利說明】
茴芹果抗腫瘤提取物及其組合物的制備方法和醫(yī)藥用途
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種維吾爾藥茴芹果抗腫瘤提取物及其組合物 的制備方法和其在制備預(yù)防及治療肝癌、肺癌、胃癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、乳腺癌、宮頸癌、腦膠 質(zhì)瘤等惡性腫瘤藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 本品為傘形科（Apiaceae)茴序?qū)佘钚颍瑢W名Pimpinellaanisum的干燥種子。果 實近卵圓形，長約3. 5公尺（0. 12寸），有5條縱脊。原產(chǎn)埃及和地中海東部地區(qū)，栽培于歐 洲、俄羅斯南部、近東、北非、巴基斯坦、中國、墨西哥、美國。種子可作為食品的調(diào)味料及藥 用，幼苗可作青菜或沙拉配菜用。
[0003] 茴芹果功效溫中散寒，驅(qū)風下氣，活血鎮(zhèn)痛，健胃止痢。治脘腹脹滿，腸炎，痢疾。本 發(fā)明通過系統(tǒng)地篩選研究，意外地發(fā)現(xiàn)茴芹果提取物具有顯著抗腫瘤活性，即茴芹果提取 物對乳腺癌、宮頸癌、肝癌、肺癌、胃癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、腦膠質(zhì)瘤等惡性腫瘤的具有很好的 預(yù)防及治療作用，可以應(yīng)用癌癥的預(yù)防和治療。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明所解決的技術(shù)問題是提供一種茴芹果提取物。
[0005] 本發(fā)明還提供了以茴芹果提取物為主要活性成分的組合物。
[0006] 本發(fā)明同時提供了茴芹果提取物及其組合物的制備和在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng) 用。
[0007] 本發(fā)明是通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)的：
[0008] 維吾爾藥茴芹果經(jīng)甲醇超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠 柱，用石油醚-丙酮混合溶劑（100:0-0:00)梯度洗脫（石油醚：丙酮，具體比例見表1)，各 石油醚-丙酮比例混合溶劑洗脫液，濃縮，干燥后，利用體外抗腫瘤活性篩選體系測試其抗 腫瘤活性，意外地發(fā)現(xiàn)先用石油醚-丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:0-100:6,體積比，優(yōu) 選100:0-100:1或100:6)洗脫，繼用石油醚-丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:8-100:50， 優(yōu)選100:8或100:12-25,體積比）洗脫，石油醚：丙酮=100:8-100:50洗脫液干燥后，具有 顯著地抗腫瘤活性。優(yōu)選地，先用石油醚-丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:1，體積比）洗 脫，繼用石油醚-丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:2,體積比）洗脫，石油醚：丙酮=100:2 洗脫液干燥即得?？鼓[瘤活性的化合物，可以通過以上方法，得到富集，從而與其他雜質(zhì)類 成分分離開。該活性部位從未見文獻報道，其100:2洗脫液TLC分析表征如圖1所示。色 譜條為GF 254硅膠板，展開系統(tǒng)是石油醚：乙酸乙酯：丙酮=6:1:1，香草醛濃硫酸顯色。
[0009] 或先用石油醚-丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:6,體積比）洗脫，繼續(xù)用石油 醚-丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:12-25,體積比）洗脫，石油醚：丙酮=100:12-25的 洗脫液干燥。更為優(yōu)選地是，先用石油醚-丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:6,體積比） 洗脫，繼續(xù)用石油醚-丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:12,體積比）洗脫，石油醚：丙酮= 100:12的洗脫液干燥即得。本發(fā)明的抗腫瘤活性的化合物，可以通過以上方法，得到富集， 從而與其他雜質(zhì)類成分分離開。該活性部位從未見文獻報道，其1〇〇: 12洗脫液的TLC分析 表征如圖2所示。色譜條件為GF254硅膠板，展開系統(tǒng)是石油醚：乙酸乙酯：丙酮=1:1:1， 香草醛-濃硫酸顯色。
[0010] 具體，發(fā)現(xiàn)過程如下：
[0011] 1、茵序果超聲提取物的制備
[0012] 取維吾爾藥茴芹果20g，經(jīng)100mL溶劑超聲提取15min，提取液濃縮后得到提取物 4.9306g，留樣 3.0816g。剩余 1.902g。
[0013] 2、石油醚-丙酮混合溶劑梯度洗脫方法和結(jié)果
[0014] 取維吾爾藥茴芹果20g，經(jīng)100mL溶劑超聲提取15min，提取液濃縮后得到提取物 4. 9306g，留樣3. 0816g.剩余I. 902g。上柱，甲醇溶解，共用甲醇15ml。上硅膠柱色譜，拌樣 硅膠2. 0g，空白硅膠10. 0g，玻璃柱內(nèi)徑2cm，石油醚-丙酮系統(tǒng)梯度洗脫（條件見表1)，柱 體積11ml，每個梯度洗脫200ml，得到，各個濃度提取洗脫液的洗脫物，回收溶劑，即得，石 油醚-丙酮梯度洗脫提取物，收率見表1，TLC分析結(jié)果見圖3,圖4。色譜條件分別是GF 254 硅膠板，展開系統(tǒng)為石油醚：乙酸乙酯：丙酮=6:1:1，石油醚：乙酸乙酯：丙酮=1:1:1， 香草醛-濃硫酸顯色。
[0015] 表 1

[0018] 3、抗腫瘤活性篩選方法和結(jié)果
[0019] 1)實驗條件
[0020] a)細胞株信息
[0021] 大鼠膠質(zhì)瘤C6細胞購于中國典型培養(yǎng)物保藏中心細胞庫。
[0022] b)藥品及試劑
[0023] 樣品無菌條件下，DMSO溶解配置成母液濃度為100mg/mL，使用時用RPMI-1640培 養(yǎng)液稀釋至所需濃度（DMSO彡1%。）。
[0024] RPMI Medium 1640培養(yǎng)基干粉購于美國GIBCO公司。胎牛血清購于北京元亨圣馬 生物技術(shù)研究所。Trypsin 1:250、二甲基二苯基四氮唑溴鹽（MTT)。
[0025] c)儀器
[0026] CO2培養(yǎng)箱（SANYO,日本）
[0027] 垂直層流潔凈工作臺（上海上凈凈化設(shè)備有限公司）
[0028] 倒置生物顯微鏡（重慶光電儀器有限公司）
[0029] 低/高速臺式離心機（上海安亭科學儀器廠）
[0030] 電子天平（奧豪斯儀器有限公司）
[0031] 酶標儀（伯樂生命醫(yī)學產(chǎn)品有限公司）
[0032] 立式壓力蒸汽滅菌器（上海申安醫(yī)療器械廠）
[0033] 鼓風干燥箱（上海躍進醫(yī)療器械廠）
[0034] PH 計（SART0RIUS，德國）
[0035] 2)實驗方法和過程
[0036] 大鼠膠質(zhì)瘤C6細胞以4000/孔的密度鋪于96孔板，每孔100ul，12h后使用。各 組分以DMSO溶解為lOOmg/mL儲存液，保存于-20°C待用。鋪板后12h，觀察細胞匯合率約 為40 %，加藥，濃度均為100 μ g/mL，每個組分3個復孔。每板細胞設(shè)立二個對照組（培養(yǎng) 基+細胞；含〇. 1% DMSO培養(yǎng)基+細胞），3個空白孔（只有培養(yǎng)基）。加入藥物24小時 后，加入20μ 1四甲基偶氮唑鹽化學名為3-(4,5-二甲基噻唑）-2,5-二苯基四氮唑溴鹽 (3_(4, 5-dimethyl_2thiazolyl)-2, 5-diphenyl-tetrazolium bromide，MTT)，繼續(xù)培養(yǎng) 4 小時。完全棄去上清液，加入100 μ I DMS0,混勻使MTT完全溶解，去氣泡。490nm測定OD 值。
[0037]
[0038] 3)實驗結(jié)果
[0039] 表 2
[0042] 結(jié)果發(fā)現(xiàn)：
[0043] 本發(fā)明優(yōu)選如下技術(shù)方案：維吾爾藥茴芹果經(jīng)有機溶劑超聲提取，提取液濃縮后， 用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱，先用石油醚-丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:1，體積 比）洗脫，繼用石油醚-丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:2,體積比）洗脫，石油醚：丙酮 =100:2洗脫液經(jīng)回收有機溶劑，干燥，得到高活性提取物，即為該抗腫瘤的提取物。該活 性部位從未見文獻報道，其TLC分析表征如圖1所示。
[0044] 或維吾爾藥茴芹果經(jīng)有機溶劑超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的 硅膠柱，先用石油醚-丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:6,體積比）洗脫，繼用石油醚-丙 酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100 :12,體積比）洗脫，石油醚：丙酮=100:12洗脫液經(jīng)回收 有機溶劑，干燥，得到高活性提取物，即為該抗腫瘤的提取物。該活性部位從未見文獻報道， 其TLC分析表征如圖2。
[0045] 4、抗腫瘤有效提取物的提取方法研究
[0046] 1)提取溶劑的種類研究
[0047] 分別用甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶劑、乙醇水混合溶劑等有 機溶劑提取，并測試提取物對C6細胞的抗腫瘤活性，結(jié)果如下：
[0048]表 3
[0050] 研究結(jié)果表明：提取用有機溶劑可以為甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水 混合溶劑、乙醇水混合溶劑。
[0051] 2)提取溶劑的用量研究
[0052] 分別用1、2、5、10、20、30、40、50倍（重量/體積比）有機溶劑提取，并測試提取物 對C6細胞的抗腫瘤活性，結(jié)果如下：
[0053] 表 4
[0057] 提取物提取用有機溶劑用量為藥材重量的2-50倍（重量/體積比）。
[0058] 3)干燥方法的研究
[0059] 分別用真空干燥法、冷凍干燥法、鼓風干燥、離心干燥、旋蒸干燥法等方法，對得到 的抗腫瘤活性部位進行干燥，以含水量、TLC、活性測試為指標，發(fā)現(xiàn)真空干燥法、冷凍干燥 法、鼓風干燥、離心干燥、旋蒸干燥法適用于對C6細胞提取物進行干燥，其中，最優(yōu)為真空 干燥法、冷凍干燥法。
[0060] 表 5
LUUDZJ VLiSEim, _片禾?/UIT悃伲桿乂柳的帀U食刀:
[0063] 維吾爾藥茴芹果經(jīng)溶劑超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠 柱，先用石油醚-丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:1，體積比）洗脫2-50倍柱體積，繼用 石油醚：丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:2,體積比）洗脫2-50倍柱體積，石油醚：丙 酮=100:2洗脫液經(jīng)回收有機溶劑，干燥，即為該提取物。以上條件最優(yōu)為先用石油醚-丙 酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:1，體積比）洗脫10倍柱體積，繼用石油醚-丙酮混合溶 劑（石油醚：丙酮，100:2,體積比）洗脫15倍柱體積。
[0064] 1)提取物提取用溶劑可以為甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶劑、 乙醇水混合溶劑，最優(yōu)條件為甲醇和95%乙醇。提取物提取用有機溶劑用量為藥材重量的 2-50倍（重量/體積比）。
[0065] 2)提取物干燥方法可以為真空干燥法、冷凍干燥法、鼓風干燥、離心干燥、旋蒸干 燥法等，最優(yōu)為真空干燥法、冷凍干燥法。
[0066] 維吾爾藥茴芹果經(jīng)溶劑超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠（SiO2)柱分離，上樣后的 硅膠柱，先用石油醚-丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:6,體積比）洗脫2-50倍柱體積， 繼用石油醚-丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:12,體積比）洗脫2-50倍柱體積，石油 醚：丙酮=100:12洗脫液經(jīng)回收有機溶劑，干燥，即為該提取物。以上條件最優(yōu)為先用石 油醚-丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:10,體積比）洗脫15倍柱體積，繼用石油醚-丙 酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:12,體積比）洗脫15倍柱體積。其中，
[0067] 1)提取物提取用溶劑可以為甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶劑、 乙醇水混合溶劑，最優(yōu)條件為甲醇和95%乙醇。提取物提取用有機溶劑用量為藥材重量的 2-50倍（重量/體積比）。
[0068] 2)提取物干燥方法可以為真空干燥法、冷凍干燥法、鼓風干燥、離心干燥、旋蒸干 燥法等，最優(yōu)為真空干燥法、冷凍干燥法。
[0069] 5.茴芹果抗腫瘤有效提取物的抗腫瘤活性研究
[0070] 利用各種腫瘤細胞，如腦膠質(zhì)瘤、乳腺癌、肺癌、胃癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、宮頸癌、肝 癌等惡性腫瘤細胞株，分別測試茴芹果抗腫瘤提取物的抗腫瘤活性，IC 5。結(jié)果如下：
[0071]表 6
[0074] 因此，我們發(fā)現(xiàn)，茴芹果抗腫瘤提取物具備抗腫瘤活性，可望用于各種腫瘤如腦膠 質(zhì)瘤、肺癌、胃癌、腸癌、胰腺癌、結(jié)腸癌、宮頸癌、肝癌等惡性腫瘤的預(yù)防及治療。
[0075] 6、茴芹果抗腫瘤有效提取物的組合物及其制備方法研究
[0076] 1)固體分散體
[0077] 處方
[0080] 制備方法：
[0081] 稱取茴芹果提取物和載體聚乙烯吡咯烷酮（PVP)按比例、1:2、1:4、1:6的質(zhì)量比 分別放入燒杯中，加入無水乙醇，磁力攪拌器攪拌至茴芹果提取物和載體完全溶解，轉(zhuǎn)入旋 蒸儀中出去有機溶劑，干燥，粉碎過80目篩，即得茴芹果提取物PVP包合物。
[0082] 2)環(huán)糊精包合物
[0083] 處方：
[0085] 制備方法：
[0086] 將β -環(huán)糊精與1~5倍水研勻，加茴芹果提取物（水難溶性的應(yīng)先溶于少量有 機溶劑中）充分研磨至成糊狀物，低溫干燥即得。
[0087] 3)分散片處方：
[0088]
[0089] 制備方法：
[0090] 1.茴芹果提取物淀粉分散體的制備，精密稱取茴芹果提取物提取物，加入適量的 十二烷基硫酸鈉，用70%的乙醇溶解加入等比例的可溶性淀粉混合均勻后，在70°C的溫度 下蒸干，粉碎，過100目篩；
[0091] 2.稱取處方量，茴芹果提取物淀粉分散體，交聯(lián)聚維酮，預(yù)膠化淀粉，用70%乙 醇做濕潤劑，邊加入邊攪拌，制成濕顆粒過14目篩，室溫下放置15min后，60°C烘箱烘干 45min，16目篩整粒，加入滑石粉和微分硅膠，混合均勻后，壓片。
[0092] 7、茴芹果抗腫瘤有效提取物的檢測方法研究
[0093] 我們發(fā)現(xiàn)，可以用薄層色譜的方法，很好地檢測和標示茴芹果抗腫瘤有效提取物 的特征。見圖1，圖2。
[0094] 色譜條件：GF254硅膠板，展開系統(tǒng)：石油醚：乙酸乙酯：丙酮=6:1: 1，石油醚：乙 酸乙酯：丙酮=1:1:1，顯色方法：香草醛-濃硫酸顯色。
【附圖說明】：
[0095] 圖1茴芹果C6抑制活性提取物的TLC色譜圖；
[0096] 圖2茴芹果C6抑制活性提取物的TLC色譜圖；
[0097] 圖3茴芹果提取物的化學組分的TLC色譜圖；
[0098] 圖4茴芹果提取物的化學組分的TLC色譜圖。
【具體實施方式】
[0099] 以下實施例表示本發(fā)明的實用性，本發(fā)明不受此限制。
[0100] 實施例1 :
[0101] 取維吾爾藥茴芹果20g，經(jīng)100mL甲醇超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分 離,上樣后的硅膠柱（I. 5cm內(nèi)徑小柱），先用石油醚-丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:1， 體積比）洗脫15倍柱體積，繼用石油醚-丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:2,體積比）洗 脫20倍柱體積，石油醚：丙酮=100:2洗脫液經(jīng)回收有機溶劑，真空干燥，即為該提取物， 收率0. 08%。
[0102] 實施例2 :
[0103] 取維吾爾藥茴芹果20g，經(jīng)100mL乙醇超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分 離,上樣后的硅膠柱（I. 5cm內(nèi)徑小柱），先用石油醚-丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:1， 體積比）洗脫15倍柱體積，繼用石油醚-丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:2,體積比）洗 脫20倍柱體積，石油醚：丙酮=100:2洗脫液經(jīng)回收有機溶劑，冷凍干燥，即為該提取物， 收率0. 07%。
[0104] 實施例3 :
[0105] 取維吾爾藥茴芹果20g，經(jīng)100mL丙酮超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分 離,上樣后的硅膠柱（I. 5cm內(nèi)徑小柱），先用石油醚-丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:1， 體積比）洗脫15倍柱體積，繼用石油醚-丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:2,體積比）洗 脫20倍柱體積，石油醚：丙酮=100:2洗脫液經(jīng)回收有機溶劑，鼓風干燥，即為該提取物， 收率0. 04%。
[0106] 實施例4:
[0107] 取維吾爾藥茴序果20g，經(jīng)100mL氯仿超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分 離,上樣后的硅膠柱（I. 5cm內(nèi)徑小柱），先用石油醚-丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:1， 體積比）洗脫15倍柱體積，繼用石油醚-丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:2,體積比）洗 脫20倍柱體積，石油醚：丙酮=100:2洗脫液經(jīng)回收有機溶劑，離心干燥，即為該提取物， 收率0. 05%。
[0108] 實施例5 :
[0109] 取維吾爾藥茴芹果20g，經(jīng)100mL乙酸乙酯超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅膠 柱分離，上樣后的硅膠柱（I. 5cm內(nèi)徑小柱），先用石油醚-丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮， 100:1，體積比）洗脫15倍柱體積，繼用石油醚-丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:2,體 積比）洗脫20倍柱體積，石油醚：丙酮=100:2洗脫液經(jīng)回收有機溶劑，旋蒸干燥，即為該 提取物，收率〇. 05 %。實施例6 :
[0110] 取維吾爾藥茴芹果20g，經(jīng)100mL甲醇水混合溶劑（甲醇：水=1:1)超聲提取 15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱（I. 5cm內(nèi)徑小柱），先用石油醚-丙 酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:1，體積比）洗脫15倍柱體積，繼用石油醚-丙酮混合溶 劑（石油醚：丙酮，100:2,體積比）洗脫20倍柱體積，石油醚：丙酮=100:2洗脫液經(jīng)回 收有機溶劑，冷凍干燥，即為該提取物，收率0. 07%。
[0111] 實施例7:
[0112] 取維吾爾藥茴芹果20g，經(jīng)100mL乙醇水混合溶劑（乙醇：水=1:1)超聲提取 15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱（I. 5cm內(nèi)徑小柱），先用石油醚-丙 酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:1，體積比）洗脫15倍柱體積，繼用石油醚-丙酮混合溶 劑（石油醚：丙酮，100:2,體積比）洗脫20倍柱體積，石油醚：丙酮=100:2洗脫液經(jīng)回 收有機溶劑，真空干燥，即為該提取物，收率0. 07%。
[0113] 實施例8:
[0114] 取維吾爾藥茴芹果20g，經(jīng)100mL乙醇水混合溶劑（乙醇：水=90:10)超聲提取 15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱（I. 5cm內(nèi)徑小柱），先用石油醚-丙 酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:1，體積比）洗脫15倍柱體積，繼用石油醚-丙酮混合溶 劑（石油醚：丙酮，100:2,體積比）洗脫20倍柱體積，石油醚：丙酮=100:2洗脫液經(jīng)回 收有機溶劑，冷凍干燥，即為該提取物，收率0. 06%。
[0115] 實施例9:
[0116] 取維吾爾藥茴序果20g，經(jīng)100mL甲醇超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分 離,上樣后的硅膠柱（I. 5cm內(nèi)徑小柱），先用石油醚-丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:6， 體積比）洗脫20倍柱體積，繼用石油醚-丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:12,體積比） 洗脫30倍柱體積，石油醚：丙酮=100:12洗脫液經(jīng)回收有機溶劑，真空干燥，即為該提取 物，收率0. 25%。
[0117] 實施例10 :
[0118] 取維吾爾藥茴芹果20g，經(jīng)100mL乙醇超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分 離,上樣后的硅膠柱（I. 5cm內(nèi)徑小柱），先用石油醚-丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:6， 體積比）洗脫20倍柱體積，繼用石油醚-丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:12,體積比） 洗脫30倍柱體積，石油醚：丙酮=100:12洗脫液經(jīng)回收有機溶劑，冷凍干燥，即為該提取 物，收率0. 23%。
[0119] 實施例11 :
[0120] 取維吾爾藥茴芹果20g，經(jīng)100mL丙酮超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分 離,上樣后的硅膠柱（I. 5cm內(nèi)徑小柱），先用石油醚-丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:6， 體積比）洗脫20倍柱體積，繼用石油醚-丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:12,體積比） 洗脫30倍柱體積，石油醚：丙酮=100:12洗脫液經(jīng)回收有機溶劑，鼓風干燥，即為該提取 物，收率0. 15%。
[0121] 實施例12 :
[0122] 取維吾爾藥茴芹果20g，經(jīng)100mL氯仿超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分 離,上樣后的硅膠柱（I. 5cm內(nèi)徑小柱），先用石油醚-丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:6， 體積比）洗脫20倍柱體積，繼用石油醚-丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:12,體積比） 洗脫30倍柱體積，石油醚：丙酮=100:12洗脫液經(jīng)回收有機溶劑，離心干燥，即為該提取 物，收率0. 17%。
[0123] 實施例13 :
[0124] 取維吾爾藥茴芹果20g，經(jīng)100mL乙酸乙酯超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅膠 柱分離，上樣后的硅膠柱（I. 5cm內(nèi)徑小柱），先用石油醚-丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮， 100:6,體積比）洗脫20倍柱體積，繼用石油醚-丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:12,體 積比）洗脫30倍柱體積，石油醚：丙酮=100:12洗脫液經(jīng)回收有機溶劑，旋蒸干燥，即為 該提取物，收率〇. 16%。實施例14 :
[0125] 取維吾爾藥茴芹果20g，經(jīng)100mL甲醇水混合溶劑（甲醇：水=1:1)超聲提取 15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱（I. 5cm內(nèi)徑小柱），先用石油醚-丙 酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:6,體積比）洗脫20倍柱體積，繼用石油醚-丙酮混合溶 劑（石油醚：丙酮，100:12,體積比）洗脫30倍柱體積，石油醚：丙酮=100:12洗脫液經(jīng) 回收有機溶劑，冷凍干燥，即為該提取物，收率0. 21 %。
[0126] 實施例15 :
[0127] 取維吾爾藥茴芹果20g，經(jīng)100mL乙醇水混合溶劑（乙醇：水=1:1)超聲提取 15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱（I. 5cm內(nèi)徑小柱），先用石油醚-丙 酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:6,體積比）洗脫20倍柱體積，繼用石油醚-丙酮混合溶 劑（石油醚：丙酮，100:12,體積比）洗脫30倍柱體積，石油醚：丙酮=100:12洗脫液經(jīng) 回收有機溶劑，冷凍干燥，即為該提取物，收率0. 19%。
[0128] 實施例16 :
[0129] 取維吾爾藥茴芹果20g，經(jīng)100mL乙醇水混合溶劑（乙醇：水=90:10)超聲提取 15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱（I. 5cm內(nèi)徑小柱），先用石油醚-丙 酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:6,體積比）洗脫20倍柱體積，繼用石油醚-丙酮混合溶 劑（石油醚：丙酮，100:12,體積比）洗脫30倍柱體積，石油醚：丙酮=100:12洗脫液經(jīng) 回收有機溶劑，冷凍干燥，即為該提取物，收率0. 17%。
[0130] 實施例17 :固體分散體
[0131] 稱取茴芹果提取物和載體聚乙烯吡咯烷酮（PVP)按比例、1:2、1:4、1:6的質(zhì)量比 分別放入燒杯中，加入無水乙醇，磁力攪拌器攪拌至茴芹果提取物和載體完全溶解，轉(zhuǎn)入旋 蒸儀中除去有機溶劑，干燥，粉碎過80目篩，即得茴芹果提取物PVP包合物。
[0132] 實施例18 :環(huán)糊精包合物
[0133] 將β -環(huán)糊精與1~5倍水研勻，加茴芹果提取物（水難溶性的應(yīng)先溶于少量有 機溶劑中）充分研磨至成糊狀物，低溫干燥即得。
[0134] 實施例19 :分散片
[0135] 1.稱取干燥的茴芹果提取物，加入適量的十二烷基硫酸鈉，使用70%的乙醇充分 溶解，加入水溶性淀粉與茴芹果提取物（I: 1)，攪拌混合均勻，在70°C下干燥，粉碎，過100 目篩，得茴芹果提取物分散體。
[0136] 2.精密稱取處方量，茴芹果提取物分散體，交聯(lián)聚維酮，可壓性淀粉，用70%乙醇 做濕潤劑，邊加入邊攪拌，14目篩制成濕顆粒，室溫下放置15min后，70°C烘箱烘干45min， 16目篩整粒，加入滑石粉和微分硅膠，混合均勻后，壓片。
【主權(quán)項】
1. 一種維吾爾藥茴芹果提取物，其特征為，維吾爾藥茴芹果經(jīng)溶劑超聲提取，提取液濃 縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱，先用體積比100 :0-100:6的石油醚-丙酮混合溶劑 洗脫，繼用體積比100:8-100 :50的石油醚-丙酮混合溶劑洗脫，石油醚：丙酮=100:8-100 : 50洗脫液干燥后即得。2. 如權(quán)利要求1所述的維吾爾藥天山堇菜提取物，其特征為，提取用溶劑為甲醇、乙 醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶劑或乙醇水混合溶劑，優(yōu)選甲醇或95%乙醇。3. 如權(quán)利要求1所述的一種維吾爾藥茴芹果提取物，其特征為，先用體積比100:1的石 油醚-丙酮混合溶劑洗脫，繼用體積比100:2的石油醚-丙酮混合溶劑洗脫，石油醚：丙酮 =100:2洗脫液干燥后即得； 或先用體積比100:6的石油醚-丙酮混合溶劑洗脫，繼續(xù)用體積比100:12的石油 醚-丙酮混合溶劑洗脫，石油醚：丙酮=100:12的洗脫液干燥即得。4. 如權(quán)利要求1所述的維吾爾藥茴芹果提取物，其特征為，先用體積比為100 :0-100:6 的石油醚-乙酸乙酯混合溶劑2-50倍洗脫，繼用體積比100:8-100 :50的石油醚-乙酸乙 酯混合溶劑2-50倍洗脫，優(yōu)選先用體積比為100 :0-100:6的石油醚-乙酸乙酯混合溶劑10 倍洗脫，繼用體積比100:8-100 :50的石油醚-乙酸乙酯混合溶劑15倍洗脫。5. 如權(quán)利要求2所述維吾爾藥茴芹果提取物，其特征為，先用體積比100:1的石油 醚-乙酸乙酯混合溶劑洗脫2-50倍柱體積，繼用體積比100:2的石油醚-乙酸乙酯混合溶 劑洗脫2-50倍柱體積，優(yōu)選先用體積比100:1的石油醚-乙酸乙酯混合溶劑洗脫10倍柱 體積，繼用體積比100:2的石油醚-乙酸乙酯混合溶劑洗脫15倍柱體積； 或用體積比100:6的石油醚-乙酸乙酯混合溶劑洗脫2-50倍柱體積，繼用體積比 100:12的石油醚-乙酸乙酯混合溶劑洗脫2-50倍柱體積，優(yōu)選先用體積比100:6的石油 醚-乙酸乙酯混合溶劑洗脫10倍柱體積，繼用體積比100:12的石油醚-乙酸乙酯混合溶 劑洗脫15倍柱體積。6. -種藥物組合物，其特征在于，包含權(quán)利要求1-5任何一項所述的提取物和藥學上 可接受的載體。7. -種藥物制劑，其特征在于，包含權(quán)利要求1-5任何一項所述的提取物或權(quán)利要求6 所述的藥物組合物。8. 權(quán)利要求1-5任何一項所述的茴芹果提取物或權(quán)利要求7所述的組合物或權(quán)利要求 8所述的藥物制劑在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。9. 如權(quán)利要求8所述維吾爾藥茴芹果提取物，其特征為，所述腫瘤為乳腺癌、肺癌、胃 癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、宮頸癌、腦膠質(zhì)瘤或肝癌。10. 權(quán)利要求1-5任何一項所述的維吾爾藥茴芹果提取物，其特征為，用TLC法檢測， 其色譜條件為：GF254硅膠板，展開系統(tǒng)：石油醚：乙酸乙酯：丙酮=6:1:1，石油醚：乙酸乙 酯：丙酮=1:1: 1，顯色方法：香草醛濃硫酸顯色。
【文檔編號】A61P35/00GK105982932SQ201510079800
【公開日】2016年10月5日
【申請日】2015年2月15日
【發(fā)明人】王金輝, 黃健, 姚大紅
【申請人】沈陽藥科大學