用于治療認(rèn)知障礙的5-HT₄受體促效劑化合物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及用于治療認(rèn)知障礙的5?HT4受體促效劑化合物。本發(fā)明還涉及特異性5?HT4受體促效劑化合物用于治療認(rèn)知障礙的用途，具體來說，涉及這些化合物與其它藥劑(明確地說是乙酰膽堿酯酶抑制劑)組合用于治療阿爾茨海默氏病(Alzheimer's disease)和其它認(rèn)知障礙的用途。
【專利說明】用于治療認(rèn)知障礙的5-HT4受體促效劑化合物
[00011 本發(fā)明是申請(qǐng)?zhí)枮?01080016497.6、申請(qǐng)日為2010年4月12日、發(fā)明名稱為"用于 治療認(rèn)知障礙的5-HT4受體促效劑化合物"的發(fā)明專利申請(qǐng)的分案申請(qǐng)。
技術(shù)領(lǐng)域
[0002] 本發(fā)明涉及特異性5-HT4受體促效劑化合物用于治療認(rèn)知障礙的用途，具體來說 涉及這些化合物與其它藥劑（明確地說是乙酰膽堿酯酶抑制劑）組合用于治療阿爾茨海默 氏病(Alzheimer's disease)和其它認(rèn)知障礙的用途。
【背景技術(shù)】
[0003] 在全世界范圍內(nèi)，隨著預(yù)期壽命提高，具有患上癡呆風(fēng)險(xiǎn)的老年人數(shù)目迅速增長。 根據(jù)一些專家所言，阿爾茨海默氏病是老年人中癡呆的最常見病因，占所有病例的50-60%。2008年，僅在美國就有估計(jì)520萬人正忍受著阿爾茨海默氏病，占65歲以上美國人口 的 13%〇
[0004] 阿爾茨海默氏病定義為與正常衰老不一致的進(jìn)行性認(rèn)知下降和功能狀態(tài)受損。認(rèn) 為膽堿能系統(tǒng)不足是造成與阿爾茨海默氏病有關(guān)的認(rèn)知癥狀的主要促因。因此，對(duì)于阿爾 茨海默氏病的主要藥物治療通過使用乙酰膽堿酯酶抑制劑來使癥狀適度減輕。這些藥劑據(jù) 信是通過降低乙酰膽堿降解的速率從而使大腦中的乙酰膽堿濃度增加來起作用。
[0005] 血清素(5-羥基色胺，5-HT)是廣泛分布于整個(gè)身體內(nèi)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)和周圍神經(jīng) 系統(tǒng)中的神經(jīng)傳遞素。已鑒別出血清素受體的至少7種亞型并且血清素與這些不同受體之 間的相互作用與多種生理功能有關(guān)聯(lián)。大腦中的血清素能系統(tǒng)（serotonergic system)已 顯示與認(rèn)知過程有關(guān)。具體來說，已證明5-HT4受體在記憶增強(qiáng)的神經(jīng)元機(jī)制和動(dòng)物模型中 的認(rèn)知過程中起作用。5-HT 4受體活化增強(qiáng)乙酰膽堿從膽堿能神經(jīng)元的釋放，因此提供另一 種可有利地增加腦內(nèi)突觸處乙酰膽堿濃度的藥理學(xué)干預(yù)的潛在方法(梅耶(Maillet)等人， (2004)，當(dāng)今阿爾茨海默氏病研究（Current Alzheimer Research)，1:79-85)。此外，已表 明一些5-HT4受體促效劑化合物可用于治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)病癥，包括認(rèn)知障礙、行為障礙、 情緒障礙(例如抑郁癥和焦慮癥)和自主功能控制障礙。
[0006] 5-HT4受體活化還刺激α分泌酶活性，導(dǎo)致可溶性淀粉樣前體蛋白a(s〇luble amyloid precursor protein alpha，sAPPa)(其具有神經(jīng)營養(yǎng)和神經(jīng)保護(hù)性質(zhì)）的含量增 加，并且還與臨床前認(rèn)知增強(qiáng)有關(guān)。β淀粉樣蛋白（Αβ)是一種具有39-43個(gè)氨基酸的肽，其似 乎是阿爾茨海默氏病患者腦中淀粉樣蛋白斑塊的主要成分。Αβ是在淀粉樣前體蛋白經(jīng)β分 泌酶和γ分泌酶裂解后形成。在臨床前研究中，5-ΗΤ 4受體促效劑誘導(dǎo)的a分泌酶活化以及 sAPPa產(chǎn)生使邰的含量降低。預(yù)期這種Αβ含量降低是有益的。因此，5-HT4受體促效劑呈現(xiàn)出 提供癥狀益處與疾病改善益處的潛力（萊佐茨（Lezoualc'h)，（2007)實(shí)驗(yàn)神經(jīng)學(xué) (Experimental Neurology)，205:325-329)〇
[0007] 迄今為止，尚未批準(zhǔn)利用5-HT4機(jī)制用于治療認(rèn)知障礙的潛在效用進(jìn)行的治療。因 此，仍需要利用通過使用5-HT 4受體促效劑所預(yù)期的乙酰膽堿濃度增加和其它潛在益處來 治療罹患阿爾茨海默氏病的人的記憶功能障礙。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明涉及特異性5-HT4受體促效劑化合物的用途并且涉及特異性5-HT4受體促效 劑化合物與乙酰膽堿酯酶抑制劑組合用于治療阿爾茨海默氏病或認(rèn)知障礙的用途。具體來 說，本發(fā)明涉及5-HT 4受體促效劑化合物與乙酰膽堿酯酶抑制劑的用途，其中各藥劑的使用 濃度低于其單獨(dú)使用時(shí)可觀測到顯著作用時(shí)的濃度。
[0009] 5-HT4受體促效劑1-異丙基-2-氧代-1,2-二氫喹啉-3-甲酸{(lS，3R，5R)-8-[(R)-2-羥基-3-(甲烷磺酰基-甲基-氨基)丙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺（l)和其醫(yī)藥 學(xué)上可接受的鹽
[0011] 揭示于US 7,375，114 B2中?；衔?可替代地表示為1，2_二氫-N-[(3-內(nèi)橋)-8-[(2R)-2-羥基-3-[甲基（甲基磺?；?氨基]丙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基]-1-(1-甲 基乙基)-2-氧代-3-喹啉甲酰胺。
[0012] 5-HT4受體促效劑4-(4-{[(2_異丙基-1H-苯并咪唑-4-羰基)氨基]甲基}-哌啶-卜 基甲基)哌啶-1-甲酸甲酯(2)和其醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽
[0014] 揭示于US 7,256,294 B2和US2006/0270652 A1中?；衔?可替代地表示為4_ [[4_[[ [[2-(1-甲基乙基)-1Η-苯并咪唑-7-基]羰基]氨基]甲基]-1-哌啶基]甲基]-1-哌啶 甲酸甲酯。
[0015] 化合物1和化合物2是有效的選擇性5-HT4受體促效劑，其在活體外分析中顯示中 度至高度固有活性?；衔?和化合物2已各自證明在大鼠莫里斯水迷宮(Morris water maze)臨床前認(rèn)知模型中減弱由蕈毒堿詰抗劑(muscarinic antagonist)誘導(dǎo)的記憶缺失。 在單獨(dú)使用時(shí)具有極少作用或無作用的劑量下在化合物1與乙酰膽堿酯酶抑制劑多奈哌齊 (donepezil)之間以及化合物2與多奈哌齊之間觀測到與加和或協(xié)同效應(yīng)一致的結(jié)果。化合 物1和化合物2也已顯示在活體外分析中引起隨濃度變化的sAPPa增加。因此預(yù)期化合物1和 化合物2可有益于治療記憶功能障礙。
[0016] 在一方面中，本發(fā)明可用于治療患者的阿爾茨海默氏病或認(rèn)知障礙的方法中，所 述方法包含向患者投與5-HT4受體促效劑化合物，其中所述化合物選自1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-甲酸{(1S，3R，5R) -8- [ (R) -2-羥基-3-(甲烷磺?；?甲基-氨基)丙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺和4-(4-{[(2-異丙基-lH-苯并咪唑-4-羰基)氨基]甲基}-哌啶-1-基甲基）哌啶-1-甲酸甲酯和其醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽。因此，在一方面中，本發(fā)明提 供用于治療阿爾茨海默氏病或認(rèn)知障礙的如上所述的5-HT4受體促效劑化合物。
[0017] 本發(fā)明的5-HT4促效劑化合物可有利地與用于抑制體內(nèi)乙酰膽堿酯酶作用的藥劑 組合使用。適用抑制劑包括(但不限于)鹽酸多奈哌齊(以安理申? (Aricept?)購得）、氫溴 酉愛加蘭他敏（galantamine hydrobromide，或者寫成galanthamine hydrobromide)('拉 扎口定? (Razadytie?)、雷明尼爾? (Reminyl?).)、酒石酸利斯的明（rivastigmine t art rat e )(?？宋髀? (Exelon?))和鹽酸他克林（tacrine hydrochloride) (康奈斯?: (Cognex?:.)).。
[0018] 本發(fā)明可用于治療患者的阿爾茨海默氏病或認(rèn)知障礙的方法中，所述方法包含向 患者投與5-HT4受體促效劑化合物與乙酰膽堿酯酶抑制劑，其中所述化合物選自1-異丙基-2_氧代-1，2-二氫喹啉-3-甲酸{(IS，3R，5R)-8-[(R)-2-羥基-3-(甲烷磺?；?甲基-氨基） 丙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺和4-(4-{[(2-異丙基-1!1-苯并咪唑-4-羰基)氨 基]甲基}-哌啶-1-基甲基)哌啶-1-甲酸甲酯和其醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽。
[0019] 因此，在另一方面中，本發(fā)明提供與乙酰膽堿酯酶抑制劑組合用于治療阿爾茨海 默氏病或認(rèn)知障礙的本發(fā)明5-HT4受體促效劑化合物。本發(fā)明進(jìn)一步提供用于增強(qiáng)乙酰膽 堿酯酶抑制劑用于治療阿爾茨海默氏病或認(rèn)知障礙的效力的本發(fā)明5-HT 4受體促效劑化合 物。
[0020] 在本發(fā)明的一方面中，在上述方法中，5-HT4促效劑化合物和乙酰膽堿酯酶抑制劑 各自以低于在單獨(dú)投與時(shí)有效治療阿爾茨海默氏病或認(rèn)知障礙的劑量的劑量投與。
[0021 ]在一特定方面中，5-HT4受體促效劑化合物是1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-甲酸{(13,31?，51〇-8-[(10-2-羥基-3-(甲烷磺?；?甲基-氨基)丙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1] 辛_3_基}酰胺鹽酸鹽并且乙酰膽堿酯酶抑制劑是多奈哌齊。
[0022]在另一特定方面中，5-HT4受體促效劑化合物是4-(4-{[(2_異丙基-1H-苯并咪唑-4_羰基)氨基]甲基}_哌啶-1-基甲基)哌啶-1-甲酸甲酯并且乙酰膽堿酯酶抑制劑是多奈哌 齊。
[0023] 本發(fā)明另外可用于增強(qiáng)經(jīng)受記憶缺失的患者的記憶力的方法中，所述方法包含向 患者投與5-HT4受體促效劑化合物與乙酰膽堿酯酶抑制劑，其中所述化合物選自1-異丙基-2_氧代-1，2-二氫喹啉-3-甲酸{(IS，3R，5R)-8-[(R)-2-羥基-3-(甲烷磺酰基-甲基-氨基） 丙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺和4-(4-{[(2-異丙基-1!1-苯并咪唑-4-羰基)氨 基]甲基}-哌啶-1-基甲基)哌啶-1-甲酸甲酯和其醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽。
[0024] 在一方面中，5-HT4促效劑化合物和乙酰膽堿酯酶抑制劑各自以低于在單獨(dú)投與 時(shí)有效增強(qiáng)經(jīng)受記憶缺失的患者的記憶力的劑量的劑量投與。
[0025] 因?yàn)閟APPa含量增加與認(rèn)知增強(qiáng)有關(guān)，所以在另一方面中，本發(fā)明可用于增加患者 的sAPPa含量的方法中，所述方法包含：（a)鑒別需要增加 sAPPa產(chǎn)生的患者，即罹患認(rèn)知損 傷的患者;和(b)向患者投與治療有效量的5-HT4受體促效劑化合物，其中所述化合物選自 1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-甲酸{(IS，3R，5R)-8-[ (R)-2-羥基-3-(甲烷磺?；?甲 基-氨基)丙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1 ]辛_3_基}酰胺和4-(4-{ [ (2-異丙基-1H-苯并咪唑-4-羰基)氨基]甲基}_哌啶-1-基甲基)哌啶-1-甲酸甲酯和其醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽。
[0026]本發(fā)明進(jìn)一步提供包含醫(yī)藥學(xué)上可接受的載劑、5-HT4受體促效劑化合物與乙酰 膽堿酯酶抑制劑的醫(yī)藥組合物，其中所述化合物選自1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-甲酸{(13,31?，51〇-8-[(10-2-羥基-3-(甲烷磺?；?甲基-氨基)丙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1] 辛-3-基}酰胺和4-(4-{[(2_異丙基-1H-苯并咪唑-4-羰基)氨基]甲基}-哌啶-1-基甲基)哌 啶-1-甲酸甲酯和其醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽。
【附圖說明】
[0027]通過參考隨附圖式來說明本發(fā)明的各個(gè)方面。
[0028]圖1到圖6顯示在大鼠莫里斯水迷宮認(rèn)知功能模型中測試的動(dòng)物在測試第三天的 平均逃離潛伏期（escape latency)(以秒計(jì)）。
[0029] 圖1顯不投與媒劑、東莨菪堿（scopolamine) (Scop) (0 · 5mg/kg)、多奈哌齊(0 · 3mg/ 1^)+東莨菪堿(0.511^/1^)、多奈哌齊（111^/1^)+東莨菪堿(0.511^/1^)以及多奈哌齊(311^/ kg)+東莨菪堿(0.5mg/kg)的結(jié)果。*關(guān)于媒劑在統(tǒng)計(jì)上顯著(具有邦弗朗尼調(diào)整的學(xué)生t檢 驗(yàn)（student t-test with Bonferroni adjustment)，ρ〈0·025);#關(guān)于東首菪喊（0.5mg/ kg)在統(tǒng)計(jì)上顯著(關(guān)于東莨菪堿(0.5mg/kg)和所有劑量的多奈哌齊+東莨菪堿(0.5mg/kg) 的單因素方差分析(one-way AN0VA)，事后杜奈特檢驗(yàn)(post-hoc Dunnett's test)，p〈 0·05)〇
[0030]圖2顯示投與媒劑、東莨菪堿（Scop) (0 · 5mg/kg)、多奈哌齊（3mg/kg)+東莨菪堿 (0 · 5mg/kg)、化合物1 (0 · 01mg/kg)+東莨菪堿(0 · 5mg/kg)、化合物1 (0 · 03mg/kg)+東莨菪堿 (0 · 5mg/kg)、化合物1 (0 · lmg/kg)+東莨菪堿(0 · 5mg/kg)以及化合物1 (0 · lmg/kg)+東莨菪堿 (0.5mg/kg)的結(jié)果。***關(guān)于媒劑在統(tǒng)計(jì)上顯著（具有邦弗朗尼調(diào)整的學(xué)生t檢驗(yàn)，p〈 0.0005) ;#關(guān)于東莨菪堿(0· 5mg/kg)在統(tǒng)計(jì)上顯著（關(guān)于東莨菪堿(0.5mg/kg)和所有劑量 的化合物1+東莨菪堿(0.5mg/kg)的單因素方差分析，事后杜奈特檢驗(yàn)，p〈0.05)。
[0031]圖3顯示投與媒劑、東莨菪堿（5(3叩）（0.511^/1^)、61?125487(111^/1^)、化合物1 (0 · lmg/kg)+GR125487( lmg/kg)和東莨菪堿(0 · 5mg/kg)以及化合物 1 (0 · lmg/kg)+東莨菪堿 (0.5mg/kg)的結(jié)果。*關(guān)于媒劑在統(tǒng)計(jì)上顯著（具有邦弗朗尼調(diào)整的學(xué)生t檢驗(yàn)，p〈0.025); t_ 1"關(guān)于化合物1 (〇 · lmg/kg)+GR125487( lmg/kg)和東莨菪堿(0 · 5mg/kg)在統(tǒng)計(jì)上顯著（具 有邦弗朗尼調(diào)整的學(xué)生t檢驗(yàn)，p〈0.005);#關(guān)于東莨菪堿(0.5mg/kg)在統(tǒng)計(jì)上顯著(具有邦 弗朗尼調(diào)整的學(xué)生t檢驗(yàn)，p〈0.025)。
[0032]圖4顯示投與媒劑、東莨菪堿(Scop) (0.5mg/kg)、多奈哌齊(0· lmg/kg)+東莨菪堿 (0.5mg/kg)、化合物l(0.01mg/kg)+東莨菪堿(0.5mg/kg)以及化合物l(0.01mg/kg)+多奈哌 齊（0 . lmg/kg)和東莨菪堿（0.5mg/kg)的結(jié)果。*關(guān)于媒劑在統(tǒng)計(jì)上顯著（學(xué)生t檢驗(yàn)，p〈 0.05)〇
[0033]圖5顯示投與媒劑、東莨菪堿（Scop) (0 · 5mg/kg)、多奈哌齊（3mg/kg)+東莨菪堿 (0 · 5mg/kg)、化合物2(0 · 01mg/kg)+東莨菪堿(0 · 5mg/kg)、化合物2(0 · 03mg/kg)+東莨菪堿 (0· 5mg/kg)、化合物2(0. lmg/kg)+東莨菪堿(0· 5mg/kg)以及化合物2(lmg/kg)+東莨菪堿 (0.5mg/kg)的結(jié)果。***關(guān)于媒劑在統(tǒng)計(jì)上顯著（具有邦弗朗尼調(diào)整的學(xué)生t檢驗(yàn)，p〈 0.0005) ;#關(guān)于東莨菪堿(0· 5mg/kg)在統(tǒng)計(jì)上顯著（關(guān)于東莨菪堿(0.5mg/kg)和所有劑量 的化合物2+東莨菪堿（0.5mg/kg)的單因素方差分析，p = 0.0096;事后杜奈特檢驗(yàn)，p〈 0.05)〇
[0034]圖6顯示投與媒劑、東莨菪堿(Scop) (0.5mg/kg)、多奈哌齊(0· lmg/kg)+東莨菪堿 (0.5mg/kg)、化合物2(0.01mg/kg)+東莨菪堿(0.5mg/kg)以及化合物2(0.01mg/kg)+多奈哌 齊(0.1mg/kg)和東莨菪堿(0.5mg/kg)的結(jié)果。**關(guān)于媒劑在統(tǒng)計(jì)上顯著（具有邦弗朗尼調(diào) 整的學(xué)生t檢驗(yàn)，p〈0.005);#關(guān)于東莨菪堿(0.5mg/kg)在統(tǒng)計(jì)上顯著(具有邦弗朗尼調(diào)整的 學(xué)生t檢驗(yàn)，p〈0.025)。
【具體實(shí)施方式】
[0035] H
[0036] ^述本發(fā)明的組合物和方法時(shí)，除非另外說明，否則以下術(shù)語具有以下含義。
[0037] 術(shù)語"治療有效量"意謂在投與到需要治療的患者時(shí)足以實(shí)現(xiàn)治療的量。
[0038] 術(shù)語"低于有效量的量"或等效地"低于有效劑量的劑量"意謂低于治療有效量或 劑量的量或劑量。
[0039] 如本文中所用的術(shù)語"治療"意謂治療患者(例如哺乳動(dòng)物(尤其是人類））的疾病、 病癥或醫(yī)學(xué)病狀，其包括一種或一種以上下列情形：
[0040] (a)預(yù)防疾病、病癥或醫(yī)學(xué)病狀發(fā)生，即患者的預(yù)防性治療；
[0041] (b)改善疾病、病癥或醫(yī)學(xué)病狀，即消除患者的疾病、病癥或醫(yī)學(xué)病狀或使患者的 疾病、病癥或醫(yī)學(xué)病狀消退，包括抵消其它治療劑的作用；
[0042] (c)抑制疾病、病癥或醫(yī)學(xué)病狀，即減緩或阻止患者的疾病、病癥或醫(yī)學(xué)病狀發(fā)展； 或
[0043] (d)減輕患者的疾病、病癥或醫(yī)學(xué)病狀的癥狀。
[0044] 如本文中所用的術(shù)語"組合療法"意謂投與兩種或兩種以上治療劑作為預(yù)期由所 述治療劑的組合作用提供有益效果的治療方案的一部分。
[0045]如本文中所用的術(shù)語"乙酰膽堿酯酶抑制劑"意謂具有抑制乙酰膽堿酯酶作用的 效應(yīng)的任何藥劑。所述術(shù)語包括稱為膽堿酯酶抑制劑的藥劑，其除了例如作為丁酰膽堿酯 酶抑制劑以外，還可能具有其它活性。
[0046]術(shù)語"多奈哌齊"在本文中使用時(shí)與鹽酸多奈哌齊相等。
[0047] 活體內(nèi)認(rèn)知增強(qiáng)的證明
[0048]如以下實(shí)例中進(jìn)一步描述，在莫里斯水迷宮模型中評(píng)估5-HT4促效劑1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-甲酸{(15,31?，51〇-8-[(10-2-羥基-3-(甲烷磺?；?甲基-氨基）丙 基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺（1)和4-(4-{[(2-異丙基-1!1-苯并咪唑-4-羰基)氨 基]甲基}-哌啶-1-基甲基)哌啶-1-甲酸甲酯（2)在大鼠中逆轉(zhuǎn)蕈毒堿拮抗劑誘導(dǎo)的記憶損 傷的功效。
[0049]劑量為0 · 03mg/kg、0 · lmg/kg和lmg/kg的化合物1和劑量為0 · 03mg/kg和0 · lmg/kg 的化合物2減弱大鼠中由注射東莨菪堿所誘導(dǎo)的記憶損傷。對(duì)于這兩種化合物，在0.1mg/kg 下觀測到統(tǒng)計(jì)上顯著的反應(yīng)。兩種5 -HT4促效劑化合物的效力和/或功效似乎與多奈哌齊 (銷售用于阿爾茨海默氏病的對(duì)癥治療的乙酰膽堿酯酶抑制劑)類似。通過共同投與各化合 物與選擇性5-HT4拮抗劑阻止了化合物1和化合物2的認(rèn)知增強(qiáng)效應(yīng)，證實(shí)在所觀測的反應(yīng) 中涉及5-HT4受體。
[0050]在劑量分別為0.01mg/kg和0.1mg/kg的化合物1與多奈哌齊之間以及劑量分別為 0.01mg/kg和0. lmg/kg的化合物2與多奈哌齊之間明顯注意到加和或協(xié)同效應(yīng)，所述劑量在 單獨(dú)投與時(shí)不能有效逆轉(zhuǎn)東莨菪堿誘導(dǎo)的認(rèn)知下降。
[0051 ] 活體外sAPPa釋放的證明
[0052]在經(jīng)人類5-HT4⑷受體和人類APP695 (淀粉樣前體蛋白）穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的HEK293細(xì)胞中 研究了化合物1和化合物2對(duì)sAPPa的細(xì)胞外釋放的影響。兩種化合物都引起隨濃度變化的 sAPPa釋放增加。5-HT4受體選擇性拮抗劑GR113808可阻斷釋放，表明所觀測到的效應(yīng)與5-HT4受體的促效作用有關(guān)。
[0053] 治療方法
[0054]預(yù)期本發(fā)明的5-HT4促效劑化合物1和化合物2適用于治療阿爾茨海默氏病或認(rèn)知 障礙，包括治療輕度認(rèn)知損傷，和治療與阿爾茨海默氏病有關(guān)的記憶功能障礙和阿爾茨海 默型癡呆(dementia of Alzheimer's type)。所述化合物可進(jìn)一步用于治療其它中樞神經(jīng) 系統(tǒng)病癥，包括行為障礙、情緒障礙(例如抑郁癥和焦慮癥），和自主功能控制障礙。另外，表 明增強(qiáng)乙酰膽堿濃度的化合物也可用于治療其它形式的癡呆，例如與帕金森氏病 (Parkinson ' s disease)有關(guān)的癡呆、由于血管機(jī)制而引起的癡呆和路易體癡呆（Lewy body dementia)。
[0055] 當(dāng)本發(fā)明的5-HT4化合物與乙酰膽堿酯酶抑制劑在以各化合物單獨(dú)投與時(shí)無效的 劑量下共同投與時(shí)，在大鼠水迷宮實(shí)驗(yàn)中注意到加和或協(xié)同效應(yīng)。因此，當(dāng)本發(fā)明化合物與 乙酰膽堿酯酶抑制劑（例如鹽酸多奈哌齊（安理申? )、氫溴酸加蘭他敏（拉扎啶?、 雷明尼爾?)、酒石酸利斯的明（?？宋髀?)或鹽酸他克林(康奈斯?))組合投與時(shí)，預(yù)期 本發(fā)明化合物適用于治療阿爾茨海默氏病或認(rèn)知障礙。除了提供通過不同的互補(bǔ)作用機(jī)制 作用的藥劑的益處以外，組合療法還提供允許使用較低劑量的各藥劑，由此限制暴露于任 何不良副作用的其它潛在益處。
[0056] 此外，當(dāng)與經(jīng)設(shè)計(jì)以通過其它作用機(jī)制對(duì)阿爾茨海默氏病患者進(jìn)行對(duì)癥治療的藥 劑組合投與時(shí)，化合物1和化合物2可為適用的。舉例來說，本發(fā)明化合物可用于與NMDA受體 詰抗劑美金剛(memantine)(納蒙達(dá)? (Namenda?))組合?？山M合用于治療阿爾茨海默氏 病的其它藥劑包括5-HT6拮抗劑，例如DMXB-阿那巴辛（anabaseinehGSIWASASTJUVN-SO〗 、PRX-07034 和 SAM-531 (WAY-262531); 煙堿受體促效劑 ，例如 ABT-089 、 SSR-180711 、AZD-0328 和 EVP-6124;蕈毒堿 Μι 促效劑，例如 NGX-267、AF-102B(西維美林（Cevimeline))和WAL 2014FU(他沙利定（talsaclidine));組胺H3拮抗劑，例如GSK-189254和PF-365474;和狄夢 邦(dimebon)。此外，5-HT4促效劑與其它建議疾病改善療法(例如淀粉樣蛋白β和τ聚集抑制 劑)和β分泌酶抑制劑或γ分泌酶抑制劑(例如BMS-708163)組合可為有益的。
[0057]當(dāng)用于組合療法中時(shí)，本發(fā)明的5-ΗΤ4化合物與其它治療劑物理混合以形成含有 兩種藥劑的組合物;或各藥劑存在于獨(dú)立而不同的組合物中，這些組合物同時(shí)或以任何順 序依序投與到患者。當(dāng)分別調(diào)配時(shí)，組合療法包括實(shí)質(zhì)上同時(shí)投與兩種藥劑，以及在不同時(shí) 間投與各藥劑。
[0058] 舉例來說，可使用常規(guī)程序和設(shè)備將本發(fā)明的5-HT4化合物與第二治療劑組合以 形成包含化合物1或化合物2與第二治療劑的組合物。另外，治療劑可與醫(yī)藥學(xué)上可接受的 載劑組合以形成包含化合物1或化合物2、第二治療劑和醫(yī)藥學(xué)上可接受的載劑的醫(yī)藥組合 物。在這個(gè)實(shí)施例中，組合物的組分通常經(jīng)混合或摻合以產(chǎn)生物理混合物。隨后使用下文所 述的任何途徑以治療有效量投與物理混合物。
[0059] 或者，治療劑在投與患者之前可保持獨(dú)立而且不同。在這個(gè)實(shí)施例中，藥劑在投與 之前并未物理混合在一起，而是以獨(dú)立組合物形式同時(shí)投與或在獨(dú)立時(shí)間投與。所述組合 物可獨(dú)立包裝或可以試劑盒形式包裝在一起。試劑盒中的兩種治療劑可通過相同投藥途徑 或通過不同投藥途徑投與。
[0060] 當(dāng)用于治療阿爾茨海默氏病或認(rèn)知障礙時(shí)，化合物1或化合物2通常將以單次日劑 量或以每天多次劑量經(jīng)口投與，但也可使用其它投藥形式。在某些情形下，經(jīng)皮或不經(jīng)腸投 與本發(fā)明5-HT 4化合物可為有利的。每個(gè)劑量所投與的活性劑的量或每天所投與的總量通 常將由醫(yī)師根據(jù)相關(guān)情形確定，包括所欲治療病狀的嚴(yán)重程度、所選投藥途徑、所投與的特 定化合物和其相對(duì)活性、個(gè)別患者的年齡、體重和反應(yīng)等。
[0061] 對(duì)于平均70kg的人來說，適用于治療阿爾茨海默氏病或認(rèn)知障礙的劑量范圍將為 每天約0.1 mg到約9Omg的5-HT4促效劑，包括例如每天約1 mg到約5Omg化合物1，和每天約 0.5mg到約20mg化合物2。
[0062]當(dāng)本發(fā)明5-HT4化合物與乙酰膽堿酯酶抑制劑用于組合療法中時(shí)，以治療有效量， 即當(dāng)與化合物1或化合物2共同投與時(shí)產(chǎn)生治療有益效果的任何量，投與乙酰膽堿酯酶抑制 劑。與本發(fā)明化合物組合投與的乙酰膽堿酯酶抑制劑的適合劑量通常在每天約lmg到每天 約30mg的范圍內(nèi)。如先前所述，當(dāng)用作組合療法的一部分時(shí)，各個(gè)別藥劑的有效劑量可能低 于所述藥劑獨(dú)立使用時(shí)的有效劑量。
[0063] 醫(yī)藥組合物
[0064] 本發(fā)明的5-HT4促效劑和其它治療劑(例如乙酰膽堿酯酶抑制劑)通常以醫(yī)藥組合 物或調(diào)配物形式投與患者。所述醫(yī)藥組合物可通過任何可接受的投藥途徑投與患者，包括 (但不限于)經(jīng)口、經(jīng)直腸、經(jīng)陰道、經(jīng)鼻、吸入、局部(包括經(jīng)皮)和不經(jīng)腸投藥模式。
[0065] 醫(yī)藥組合物通常含有治療有效量的活性劑。但是，所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)認(rèn)識(shí)到， 醫(yī)藥組合物可含有大于治療有效量(即散裝組合物)或小于治療有效量(即設(shè)計(jì)成多次投藥 來獲得治療有效量的個(gè)別單位劑量)的量。
[0066] 通常，所述醫(yī)藥組合物將含有約0.1重量％到約95重量％的活性劑；優(yōu)選約5重 量％到約70重量％的活性劑。
[0067] 任何常規(guī)載劑或賦形劑都可用于本發(fā)明的醫(yī)藥組合物中。特定載劑或賦形劑或者 載劑或賦形劑的組合的選擇將取決于用于治療特定患者的投藥模式，或醫(yī)學(xué)病狀或疾病病 況的類型。就此來說，適用于特定投藥模式的醫(yī)藥組合物的制備完全屬于制藥領(lǐng)域技術(shù)人 員的技能范圍之內(nèi)。另外，本發(fā)明的醫(yī)藥組合物中所用的載劑或賦形劑可購得。作為進(jìn)一步 說明，常規(guī)調(diào)配技術(shù)描述于以下文獻(xiàn)中：雷明頓:藥學(xué)技術(shù)與實(shí)踐(Remington:The Science and Practice of Pharmacy),第20版，利平科特·威廉斯?懷特出版公司（Lippincott Wi 11 iams&Whi te)，巴爾的摩（Baltimore)，馬里蘭州（Maryland)(2000);和安塞爾 (H.C.Ansel)等人，醫(yī)藥劑型和藥物遞送系統(tǒng)（Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems),第7版，利平科特·威廉斯?懷特出版公司（Lippincott Williams& White)，巴爾的摩（Baltimore)，馬里蘭州（Maryland) (1999) 〇
[0068] 可用作醫(yī)藥學(xué)上可接受的載劑的材料的代表性實(shí)例包括(但不限于）以下:糖，例 如乳糖、葡萄糖和蔗糖;淀粉，例如玉米淀粉和馬鈴薯淀粉;纖維素，例如微晶纖維素，和其 衍生物，例如羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素和乙酸纖維素;粉末狀黃芪膠;麥芽；明膠;滑石； 賦形劑，例如可可脂和栓劑蠟；油，例如花生油、棉籽油、紅花油、芝麻油、橄欖油、玉米油和 大豆油;二醇，例如丙二醇；多元醇，例如甘油、山梨糖醇、甘露糖醇和聚乙二醇;酯，例如油 酸乙酯和月桂酸乙酯;瓊脂;緩沖劑，例如氫氧化鎂和氫氧化鋁;海藻酸;無熱原質(zhì)水;等滲 鹽水;林格氏溶液(R i n g e r ' s s ο 1 u t i ο η);乙醇;磷酸鹽緩沖溶液;和用于醫(yī)藥組合物中的其 它無毒相容性物質(zhì)。
[0069] 通常通過充分而緊密地混合或摻合活性劑與醫(yī)藥學(xué)上可接受的載劑和一種或一 種以上任選成分來制備醫(yī)藥組合物。隨后可使用常規(guī)程序和設(shè)備使所得均勻摻合的混合物 成形為片劑、膠囊、丸劑等或裝入片劑、膠囊、丸劑等中。
[0070] 醫(yī)藥組合物優(yōu)選包裝成單位劑型。術(shù)語"單位劑型"是指適用于向患者給藥的物理 個(gè)別單元，即，各單元含有預(yù)定量的活性劑，所述量是經(jīng)過計(jì)算而單獨(dú)或與一個(gè)或一個(gè)以上 其它單元組合產(chǎn)生所要治療作用。舉例來說，這些單位劑型可為膠囊、片劑、丸劑等，或者適 用于不經(jīng)腸投與的單位包裝。
[0071] 在一實(shí)施例中，本發(fā)明的醫(yī)藥組合物適于經(jīng)口投與。適用于經(jīng)口投與的醫(yī)藥組合 物可呈膠囊、片劑、丸劑、糖錠、扁膠劑、糖衣藥丸、散劑、顆粒劑形式;或呈于水性或非水性 液體中的溶液或懸浮液形式；或呈水包油或油包水液體乳液形式；或呈酏劑或糖漿形式； 等;各劑型含有預(yù)定量的治療化合物作為活性成分。
[0072] 當(dāng)打算以固體劑型（即呈膠囊、片劑、丸劑等形式)經(jīng)口投與時(shí)，醫(yī)藥組合物通常將 包含活性劑和一種或一種以上醫(yī)藥學(xué)上可接受的載劑，例如檸檬酸鈉或磷酸二鈣。或者或 任選地，所述固體劑型還可包含:填充劑或增量劑，例如淀粉、微晶纖維素、乳糖、蔗糖、葡萄 糖、甘露糖醇和/或硅酸;粘合劑，例如羧甲基纖維素、海藻酸鹽、明膠、聚乙烯吡咯烷酮、蔗 糖和/或阿拉伯膠;保濕劑，例如甘油；崩解劑，例如瓊脂、碳酸鈣、馬鈴薯或木薯淀粉、海藻 酸、某些硅酸鹽和/或碳酸鈉;溶解延遲劑，例如石蠟；吸收促進(jìn)劑，例如季銨化合物；潤濕 劑，例如鯨蠟醇和/或單硬脂酸甘油酯；吸收劑，例如高嶺土和/或膨潤土；潤滑劑，例如滑 石、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、固體聚乙二醇、月桂基硫酸鈉和/或其混合物;著色劑;和緩沖劑。
[0073] 脫模劑、潤濕劑、包衣劑、甜味劑、調(diào)味劑和加香劑、防腐劑和抗氧化劑也可存在于 本發(fā)明的醫(yī)藥組合物中。醫(yī)藥學(xué)上可接受的抗氧化劑的實(shí)例包括:水溶性抗氧化劑，例如抗 壞血酸、半胱氨酸鹽酸鹽、硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉、亞硫酸鈉等；油溶性抗氧化劑，例如抗壞 血酸棕櫚酸酯、丁基化羥基茴香醚、丁基化羥基甲苯、卵磷脂、沒食子酸丙酯、生育酚等； 和金屬螯合劑，例如檸檬酸、乙二胺四乙酸、山梨糖醇、酒石酸、磷酸等。用于片劑、膠囊、丸 劑等的包衣劑包括用于腸溶衣的那些包衣劑，例如乙酸鄰苯二甲酸纖維素、聚乙酸乙烯酯 鄰苯二甲酸酯、鄰苯二甲酸羥丙基甲基纖維素、甲基丙烯酸-甲基丙烯酸酯共聚物、乙酸偏 苯三酸纖維素、羧甲基乙基纖維素、乙酸丁二酸羥丙基甲基纖維素等。包衣劑還包括滑石、 聚乙二醇、羥丙甲纖維素(hypomellose)和二氧化鈦。
[0074] 還可使用例如不同比例的羥丙基甲基纖維素;或其它聚合物基質(zhì)、脂質(zhì)體和/或微 球體來調(diào)配醫(yī)藥組合物以提供活性劑的緩慢或控制釋放。另外，醫(yī)藥組合物可任選含有遮 光劑并且可經(jīng)調(diào)配以使得其僅在或優(yōu)先在胃腸道的某一部分中任選以延遲方式釋放活性 成分。可使用的包埋組合物的實(shí)例包括聚合物質(zhì)和蠟?；钚詣┻€可呈微囊封形式，適當(dāng)時(shí)具 有一種或一種以上上述賦形劑。
[0075] 適用于經(jīng)口投與的液體劑型包括例如醫(yī)藥學(xué)上可接受的乳液、微乳液、溶液、懸浮 液、糖漿和酏劑。液體劑型通常包含活性劑;和惰性稀釋劑，例如水或其它溶劑;增溶劑和乳 化劑，例如乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、芐醇、苯甲酸芐酯、丙二醇、1，3_丁二醇、油 (尤其是棉籽油、落花生油、玉米油、胚芽油、橄欖油、蓖麻油和芝麻油）、甘油、四氫糠醇、聚 乙二醇和脫水山梨糖醇脂肪酸酯和其混合物。除活性成分以外，懸浮液還可含有懸浮劑，例 如乙氧基化異硬脂醇、聚氧乙烯山梨糖醇和脫水山梨糖醇酯、微晶纖維素、偏氫氧化鋁、膨 潤土、瓊脂和黃芪膠，和其混合物。
[0076] 本發(fā)明的活性劑還可不經(jīng)腸投與(例如通過靜脈內(nèi)、皮下、肌肉內(nèi)或腹膜內(nèi)注射）。 對(duì)于不經(jīng)腸投與，通常將活性劑與適用于不經(jīng)腸投與的媒劑混合，所述媒劑包括例如無菌 水溶液、鹽水、低分子量醇（例如丙二醇、聚乙二醇）、植物油、明膠、脂肪酸酯（例如油酸乙 酯)等。不經(jīng)腸調(diào)配物還可含有一種或一種以上抗氧化劑、增溶劑、穩(wěn)定劑、防腐劑、潤濕劑、 乳化劑、緩沖劑或分散劑。通過使用無菌可注射介質(zhì)、殺菌劑、過濾、輻照或加熱可使這些調(diào) 配物無菌。
[0077] 或者，藥劑經(jīng)調(diào)配以通過吸入投與。適用于通過吸入投與的醫(yī)藥組合物通常呈氣 霧劑或粉末的形式。所述組合物一般使用眾所周知的遞送裝置(例如計(jì)量吸入器、干粉吸入 器、噴霧器或類似遞送裝置)投與。
[0078] 當(dāng)使用加壓容器通過吸入投與時(shí)，本發(fā)明的醫(yī)藥組合物通常包含活性成分和合適 推進(jìn)劑，例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它合適氣體。另外， 醫(yī)藥組合物可呈膠囊或藥筒(例如由明膠制成）的形式，其包含本發(fā)明化合物和適用于粉末 吸入器的粉末。合適的粉末基質(zhì)包括例如乳糖或淀粉。
[0079]最后，還可使用已知的經(jīng)皮遞送系統(tǒng)和賦形劑來經(jīng)皮投與活性劑。舉例來說，可將 活性劑與滲透增強(qiáng)劑(例如丙二醇、聚乙二醇單月桂酸酯、氮雜環(huán)烷-2-酮等)混合，并且并 入貼片或類似遞送系統(tǒng)中。必要時(shí)，所述經(jīng)皮組合物中也可使用其它賦形劑，包括膠凝劑、 乳化劑和緩沖劑。
[0080] 適用于治療阿爾茨海默氏病或認(rèn)知障礙的代表性醫(yī)藥組合物包括(但不限于）以 下實(shí)例，其中'本發(fā)明化合物'表示化合物1或化合物2?；衔?通常以鹽酸鹽形式供應(yīng)，而 化合物2通常以游離堿形式供應(yīng)，但應(yīng)了解，適用于特定投藥模式的任何形式的化合物（即 游離堿或醫(yī)藥鹽)均可用于以下醫(yī)藥組合物中。
[0081] 調(diào)配物實(shí)例A:用于經(jīng)口投與的硬明膠膠囊
[0082]將本發(fā)明化合物(20mg)、淀粉(89mg)、微晶纖維素(89mg)和硬脂酸鎂(2mg)充分摻 合并且隨后通過第45號(hào)篩目美國篩(U.S. sieve)。將所得組合物裝入硬明膠膠囊中（每個(gè)膠 囊200mg組合物）。
[0083]調(diào)配物實(shí)例B:用于經(jīng)口投與的明膠膠囊
[0084]將本發(fā)明化合物（1 Omg)、聚氧乙烯脫水山梨糖醇單油酸酯（50mg)和淀粉粉末 (250mg)充分摻合并且隨后裝入明膠膠囊中（每個(gè)膠囊310mg組合物）。
[0085]調(diào)配物實(shí)例C:用于經(jīng)口投與的片劑
[0086] 將本發(fā)明化合物（5mg)、微晶纖維素（400mg)、氣相二氧化娃（fumed silicon di〇Xide)(10mg)和硬脂酸(5mg)充分摻合并且隨后壓制形成片劑(每個(gè)片劑420mg組合物）。 [0087]調(diào)配物實(shí)例D:用于經(jīng)口投與的片劑
[0088]將本發(fā)明化合物(2mg)、微晶纖維素(400mg)、氣相二氧化娃（10mg)和硬脂酸(5mg) 充分摻合并且隨后壓制形成片劑(每個(gè)片劑417mg組合物）。
[0089]調(diào)配物實(shí)例E:用于經(jīng)口投與的片劑
[0090]將本發(fā)明化合物（20mg)、微晶纖維素（400mg)、氣相二氧化硅（1 Omg)和硬脂酸 (5mg)充分摻合并且隨后壓制形成片劑(每個(gè)片劑435mg組合物）。
[0091] 調(diào)配物實(shí)例F:用于經(jīng)口投與的單刻痕片劑(Single-scored Tablet)
[0092]將本發(fā)明化合物（15mg)、玉米淀粉（50mg)、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉（25mg)、乳糖 (120mg)和硬脂酸鎂（5mg)充分摻合并且隨后壓制形成單刻痕片劑（每個(gè)片劑215mg組合 物)。
[0093]調(diào)配物實(shí)例G:用于經(jīng)口投與的懸浮液
[0094]將以下成分充分混合以形成每10mL懸浮液含有20mg活性成分的用于經(jīng)口投與的 懸浮液:本發(fā)明化合物(200mg)、苯甲酸鈉、朽1檬酸鈉、純化水(補(bǔ)足到100mL)。
[0095] 調(diào)配物實(shí)例H:可注射調(diào)配物
[0096]將本發(fā)明化合物(20mg)與0.1M檸檬酸鈉緩沖溶液（15mL)摻合。使用1N鹽酸水溶液 或1N氫氧化鈉水溶液將所得溶液的pH值調(diào)節(jié)到pH 6。隨后添加于檸檬酸鹽緩沖液中的無菌 生理鹽水，得到20mL的總體積。
[0097]調(diào)配物實(shí)例I:用于經(jīng)口投與的單刻痕片劑
[0098]將本發(fā)明化合物（5mg)、鹽酸多奈哌齊（5mg)、玉米淀粉（50mg)、微晶纖維素 (15mg)、羥丙基纖維素（10mg)、乳糖（120mg)和硬脂酸鎂(5mg)充分摻合并且隨后壓制形成 單刻痕片劑(每個(gè)片劑210mg組合物）。
[0099]調(diào)配物實(shí)例J:用于經(jīng)口投與的懸浮液
[0100]將以下成分充分混合以形成每10mL懸浮液含有5mg各藥劑的用于經(jīng)口投與的懸浮 液：本發(fā)明化合物（50mg)、酒石酸利斯的明（50mg)、苯甲酸鈉、檸檬酸鈉、純化水（補(bǔ)足到 100mL)〇
[0101] 實(shí)例
[0102] 在大鼠莫里斯水迷宮動(dòng)物模型中評(píng)估單獨(dú)或與乙酰膽堿酯酶抑制劑多奈哌齊組 合使用的5-HT4促效劑1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-甲酸{(IS，3R，5R)-8-[ (R)-2-羥 基-3-(甲烷磺?；?甲基-氨基)丙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺（1)和4-(4-{ [(2-異丙基-1H-苯并咪唑-4-羰基)氨基]甲基}-哌啶-1-基甲基)哌啶-1-甲酸甲酯（2)防止由蕈 毒堿受體拮抗劑東莨菪堿誘導(dǎo)的空間記憶損傷的能力(莫里斯(Morris)，（1984)神經(jīng)科學(xué) 方法雜志(Journal of Neuroscience Methods) ,11:47-60·)。在所有實(shí)驗(yàn)中都使用化合物 1的鹽酸鹽。
[0103] 莫里斯水迷宮模型方法
[0104] 在各研究前一天由研究人員處理成年的雄性史泊格-多利大鼠（Sprague-Dawley rat)(體重范圍為275-400g)約5分鐘。在研究第一天，經(jīng)腹膜內(nèi)（i .p.)對(duì)各大鼠給藥，首先 給與測試化合物或媒劑，隨后立即給與蕈毒堿受體拮抗劑東莨菪堿(ο. 5mg/kg)(所述劑量 先前經(jīng)鑒別以在這個(gè)模型中提供接近最大認(rèn)知下降)或媒劑。給藥后30分鐘，將大鼠個(gè)別地 放在填充有水（保持在23?！捆）柕纳钏{(lán)色圓形聚乙烯槽（直徑為6英尺）中。將透明的 珀思配克斯? (PerwCT?)平臺(tái)定位在距水表面下方lcm并且距槽壁34cm的固定位置中。將 四個(gè)視覺線索(A4紙大小的具有不同黑色與白色符號(hào)的圖片)等距安置在槽壁上，緊鄰水表 面上方。將黑色窗簾安置在槽周圍并且在整個(gè)測試期間產(chǎn)生白色噪音。將各大鼠釋放到水 中，在指定起始點(diǎn)（即在槽北邊)面向槽壁，并且在各安置后允許定位浸沒的平臺(tái)60秒。借助 于攝影機(jī)（加利福尼亞州圣地亞哥儀器公司（San Diego Instrument，CA))和跟蹤軟件 (SMART軟件，加利福尼亞州圣地亞哥儀器公司（San Diego Instrument，CA))自動(dòng)記錄將大 鼠釋放到水中與其定位平臺(tái)之間的逃離潛伏期（以秒計(jì)）。當(dāng)大鼠不能在60秒內(nèi)找到平臺(tái) 時(shí)，將其引導(dǎo)到平臺(tái)并且隨后安置于其上(面向特定視覺線索）。允許大鼠在平臺(tái)上停留30 秒以觀測外部視覺線索并且將其與平臺(tái)的相對(duì)位置進(jìn)行配對(duì)。隨后使大鼠離開平臺(tái)并且用 紙巾輕輕擦干，隨后再重復(fù)測試三次(從南邊、接著東邊并且最后西邊起始位置）。在第四次 測試后，將各大鼠放在加熱燈下5分鐘，隨后返回其居住籠中。在第2天和第3天重復(fù)整個(gè)程 序。在測試的三天內(nèi)，大鼠學(xué)會(huì)將浸沒平臺(tái)的位置(和其逃離水的唯一方式)與視覺線索相 關(guān)聯(lián)。
[0105] 評(píng)估測試藥劑抑制東莨菪堿誘導(dǎo)的認(rèn)知損傷的能力。在第4天，如前述對(duì)各大鼠給 藥并且進(jìn)行2分鐘"探針試驗(yàn)"，其中已從槽中移走平臺(tái)。記錄各象限中先前平臺(tái)位置的穿過 次數(shù)與大鼠所花費(fèi)的時(shí)間。已了解平臺(tái)位置的動(dòng)物在適當(dāng)象限中花費(fèi)較多時(shí)間并且重復(fù)穿 過所述象限。通過進(jìn)行探針測試，可根據(jù)分析來排除假陽性（即，先前已通過與視覺線索無 關(guān)的策略(例如隨機(jī)游泳直到腿碰到平臺(tái)）定位平臺(tái)的大鼠）。沒能根據(jù)三天測試與探針測 試之間相矛盾的數(shù)據(jù)排除動(dòng)物。
[0106] 數(shù)據(jù)分析
[0107] 對(duì)個(gè)別大鼠計(jì)算同一測試日的四次試驗(yàn)各自的平均逃離潛伏期，并且隨后將這些 數(shù)據(jù)組合以確定第1天、第2天和第3天的各治療組的平均逃離潛伏期。對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行以下統(tǒng)計(jì) 測試：
[0108] 學(xué)生t檢驗(yàn)比較媒劑/媒劑和媒劑/東莨菪堿組的逃離潛伏期。因?yàn)槊絼?東莨菪堿 組進(jìn)行學(xué)生t檢驗(yàn)和單因素方差分析檢驗(yàn)兩者，所以α值進(jìn)行邦弗朗尼調(diào)整到0.025。
[0109] 使用單因素方差分析、接著杜奈特事后檢驗(yàn)來比較媒劑/東莨菪堿和測試化合物/ 東莨菪堿組的逃離潛伏期，其中Ρ〈〇.05,表明統(tǒng)計(jì)上顯著的差異。
[0110] 使用雙因素重復(fù)測量方差分析（two-way repeated-measures AN0VA)、接著邦弗 朗尼事后檢驗(yàn)來比較連續(xù)三個(gè)測試日各自的平均逃離潛伏期，其中P〈〇. 05，表明統(tǒng)計(jì)上顯 著的差異。
[0111] 材料
[0112] 分別根據(jù)1^ 7,375，11482和1^ 7,256,29482中所述的程序來制備5-冊(cè)4促效劑化 合物1和化合物2,所述專利的揭示內(nèi)容以引用的方式并入本文中。鹽酸多奈哌齊購自常州 大華進(jìn)出口有限公司（Changzhou Dahua Imp.and Exp.Corp.Ltd.)(中國江蘇省常州市 (Changzhou,Jiangsu,China))，而鹽酸東莨菪堿購自西格瑪奧德里奇(Sigma Aldrich)(密 蘇里州圣路易斯市（St. Louis，M0))或美國斯百全化工有限公司（Spectrum Chemical Mfg.Corp.)(加利福尼亞州加迪納市(Gardena，CA))。61?125487氨基磺酸鹽購自托克利斯 (Tocris)(密蘇里州埃利斯維爾(Ellisville，MO))。將化合物1和化合物2與多奈哌齊調(diào)配 于5%二甲亞砜和95%無菌鹽水中，而東莨菪堿和GR125487是在100%無菌鹽水中制備。劑 量是關(guān)于各化合物的游離堿重量進(jìn)行表示。
[0113] 模型驗(yàn)證
[0114] 在各研究中，在測試前30分鐘向大鼠給與(腹膜內(nèi)）媒劑導(dǎo)致逃離潛伏期的進(jìn)行性 縮減。第1天，經(jīng)媒劑處理的大鼠通常定位在隱藏的平臺(tái)上，其中四次試驗(yàn)的平均潛伏期在 40-50秒的范圍內(nèi)，而第3天，平均潛伏期已縮短到10-25秒。與經(jīng)媒劑處理的動(dòng)物相比，東莨 菪堿(0.5mg/kg，腹膜內(nèi)）產(chǎn)生學(xué)習(xí)能力的統(tǒng)計(jì)上顯著的減弱(p〈0.025,具有邦弗朗尼調(diào)整 的學(xué)生t檢驗(yàn)）。乙酰膽堿酯酶抑制劑多奈哌齊(3mg/kg，腹膜內(nèi)）與5-HT4受體促效劑化合物 1 (lmg/kg，腹膜內(nèi)）和化合物2 (lmg/kg，腹膜內(nèi)）在單獨(dú)投與時(shí)（即當(dāng)投與未暴露于東莨菪堿 的動(dòng)物時(shí))對(duì)大鼠獲悉浸沒平臺(tái)位置的能力無正面或負(fù)面影響。多奈哌齊(〇.3-3mg/kg，腹 膜內(nèi)）以劑量依賴性方式逆轉(zhuǎn)東莨菪堿(〇. 5mg/kg，腹膜內(nèi)）誘導(dǎo)的認(rèn)知缺失，如顯示第三測 試日的平均逃離潛伏期的圖1中所示。劑量為3mg/kg的多奈哌齊產(chǎn)生統(tǒng)計(jì)上顯著的逆轉(zhuǎn)。
[0115] 實(shí)例1:化合物1對(duì)東莨菪堿誘導(dǎo)的認(rèn)知損傷的影響
[0116] 在大鼠莫里斯水迷宮模型中測試劑量為0.0111^/1^、0.0311^/1^、0.111^/1^和111^/ kg的化合物1。如顯示第三測試日的平均逃離潛伏期的圖2中所示，化合物1與由0.5mg/kg東 莨菪堿產(chǎn)生的記憶損傷的逆轉(zhuǎn)有關(guān)。劑量為0. lmg/kg的化合物1的作用關(guān)于東莨菪堿 (0.5mg/kg)達(dá)到統(tǒng)計(jì)上顯著。劑量反應(yīng)曲線明顯呈"U形"；與0. lmg/kg劑量不同，最高劑量 的化合物1 (lmg/kg)對(duì)東莨菪堿誘導(dǎo)的反應(yīng)無影響。在第3天化合物1 (0. lmg/kg，腹膜內(nèi)）產(chǎn) 生與多奈哌齊(3mg/kg，腹膜內(nèi)）類似的逆轉(zhuǎn)（即在50-60%的范圍內(nèi)，參看圖1)。
[0117] 實(shí)例2:化合物1與5-HT4受體拮抗劑一起對(duì)東莨菪堿誘導(dǎo)的認(rèn)知損傷的影響
[0118] 為了探查所觀測到的化合物1的作用是否可歸因于對(duì)5-HT4受體的促效作用，將化 合物1與選擇性5-HT4受體拮抗劑化合物GR125487-起進(jìn)行測試。如圖3中所示，GR125487 (lmg/kg，腹膜內(nèi)）在單獨(dú)投與時(shí)無作用。然而，共同投與詰抗劑GR125487(lmg/kg，腹膜內(nèi)） 消除了化合物1(0. lmg/kg，腹膜內(nèi)）逆轉(zhuǎn)東莨菪堿誘導(dǎo)的認(rèn)知損傷的能力。因此，合理地推 斷出所觀測到的化合物1的作用是歸因于5-HT 4受體促效作用。
[0119] 實(shí)例3:共同投與化合物1與乙酰膽堿酯酶抑制劑多奈哌齊對(duì)東莨菪堿誘導(dǎo)的認(rèn)知 損傷的影響
[0120]在圖4中說明共同投與化合物1與多奈哌齊的作用。劑量為0.01mg/kg的化合物1和 劑量為〇. lmg/kg的多奈哌齊在單獨(dú)投與時(shí)均未發(fā)現(xiàn)具有顯著作用。然而，同樣劑量的化合 物1和多奈哌齊在一起調(diào)配于5 %DMS0和95 %無菌鹽水中時(shí)，導(dǎo)致東莨菪堿誘導(dǎo)的認(rèn)知下降 顯著減弱。
[0121]實(shí)例4:化合物2對(duì)東莨菪堿誘導(dǎo)的認(rèn)知損傷的影響
[0122]如實(shí)例1中所述測試化合物2。如圖5中所示，劑量為0. lmg/kg的化合物2的作用關(guān) 于東莨菪堿達(dá)到統(tǒng)計(jì)上顯著。劑量反應(yīng)曲線明顯呈"U形"；與0.03mg/kg和0. lmg/kg劑量不 同，最高劑量的化合物2(lmg/kg)對(duì)東莨菪堿誘導(dǎo)的反應(yīng)無影響。在第3天化合物2(0. lmg/ kg，腹膜內(nèi)）產(chǎn)生與多奈哌齊(3mg/kg，腹膜內(nèi)）類似的逆轉(zhuǎn)（即在50-60%的范圍內(nèi)，參看圖 1)〇
[0123] 實(shí)例5:化合物2與5-HT4受體拮抗劑一起對(duì)東莨菪堿誘導(dǎo)的認(rèn)知損傷的影響
[0124] 如實(shí)例2中所述探查共同投與化合物2與5-HT4受體拮抗劑GR125487的作用。添加 GR125487(lmg/kg，腹膜內(nèi)）消除了化合物2(0. lmg/kg，腹膜內(nèi)）逆轉(zhuǎn)東莨菪堿誘導(dǎo)的認(rèn)知損 傷的能力，表明所觀測到的化合物2的作用是歸因于5-HT4受體促效作用。
[0125] 實(shí)例6:共同投與化合物2與乙酰膽堿酯酶抑制劑多奈哌齊對(duì)東莨菪堿誘導(dǎo)的認(rèn)知 損傷的影響
[0126] 在圖6中說明共同投與化合物2與多奈哌齊的作用。劑量為0.01mg/kg的化合物2和 劑量為〇.lmg/kg的多奈哌齊在單獨(dú)投與時(shí)均未發(fā)現(xiàn)具有顯著作用。然而，同樣劑量的化合 物2和多奈哌齊在一起調(diào)配于5 %DMS0和95 %無菌鹽水中時(shí)，導(dǎo)致東莨菪堿誘導(dǎo)的認(rèn)知下降 在統(tǒng)計(jì)上顯著逆轉(zhuǎn)(具有邦弗朗尼調(diào)整的學(xué)生t檢驗(yàn)，p〈0.025)。
[0127] 實(shí)例7:化合物1和化合物2對(duì)HEK293-5-HT4(d)_APP695細(xì)胞中sAPPa的細(xì)胞外釋放的 影響的活體外研究
[0128] 細(xì)胞培養(yǎng)
[0129] 使經(jīng)人類5-HT4(d)受體cDNA和人類APP695cDNA穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的HEK-293(人類胚胎腎）細(xì) 胞(HEK293-5-HT4(d)_APP 695)在37°C下在5%⑶2加濕培育箱中于補(bǔ)充有10%胎牛血清、2mM GlutaMax-1和 100單位青霉素（penicillin)(100yg)和 100yg/mL 鏈霉素 （streptomycin)的 含有D_葡萄糖的杜貝卡氏改良伊格爾培養(yǎng)基(Dulbecco's Modified Eagles Medium， DMEM)中生長。通過添加 G418 (500yg/mL)抗生素使細(xì)胞在連續(xù)選擇壓力下生長。
[0130] sAPPa 釋放
[0131] 使HEK293-5-HT4(d)_APP695細(xì)胞(3 X 105個(gè)細(xì)胞/孔)血清饑餓4小時(shí)，隨后在37 °C下 用促效劑培育30分鐘（除非另外說明）。吸出培養(yǎng)基，離心以去除細(xì)胞碎片并且利用西方印 跡法（Western blot)測定sAPPa含量。使用抗體6E10 (希格耐特（Signet)/科文斯 (Covance))和山羊抗小鼠 HRP結(jié)合2°抗體檢測sAPPa。利用ECL底物（皮爾斯(Pierce))和 FluorChem HD2影像系統(tǒng)(阿爾法創(chuàng)新技術(shù)公司(Alpha Innotech))觀測和定量對(duì)應(yīng)于sAPP α的免疫反應(yīng)性條帶。一式兩份進(jìn)行樣品的西方印跡分析。
[0132] 莖里
[0133] 以pEC5Q值(EC5Q值的以10為底的負(fù)對(duì)數(shù))報(bào)導(dǎo)效能數(shù)據(jù)，其中EC5Q為達(dá)到50%最大 反應(yīng)的有效濃度。在這個(gè)分析中展現(xiàn)較高pEC 5Q值的測試化合物具有刺激sAPPa釋放的較高 效能。為測定EC5Q值，使用Graph Pad Pri sm軟件將來自獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)同時(shí)擬合成S形濃度 反應(yīng)曲線(斜率限制為一）。下文給出化合物1和化合物2的效能數(shù)據(jù)，連同相對(duì)于濃度為ΙμΜ 的內(nèi)源性配體5-ΗΤ的作用的反應(yīng)百分比：
[0135] 通過用ΙμΜ GR113808培育細(xì)胞10分鐘，隨后用濃度為100ηΜ(化合物在所述濃度下 引起接近最大或最大反應(yīng)）的化合物1或化合物2培育細(xì)胞來探查5-ΗΤ4受體選擇性拮抗劑 GR113808的作用。拮抗劑完全阻斷化合物1和化合物2的作用，表明所觀測到的sAPPa釋放與 5-HT4受體的促效作用有關(guān)。
[0136]盡管已參考本發(fā)明的具體實(shí)施例描述本發(fā)明，但所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)了解，可 在不偏離本發(fā)明的真實(shí)精神和范圍的情況下進(jìn)行各種改變并且可進(jìn)行等效內(nèi)容的替代。另 外，可進(jìn)行許多修改以使特定情形、材料、物質(zhì)組合物、方法、方法步驟與本發(fā)明的目的、精 神和范圍相適應(yīng)。預(yù)期所有所述修改都在隨附權(quán)利要求書的范圍內(nèi)。另外，上文中所引用的 所有公開案、專利和專利文獻(xiàn)都是以全文引用的方式并入本文中，其并入程度如同以引用 的方式單獨(dú)并入一般。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種5-HT4促效劑化合物與鹽酸多奈哌齊的用途，其用于制造一種藥物，所述藥物是 用于治療患者的阿爾茨海默氏病(Alzheimer's disease)或認(rèn)知障礙， 其中所述5-HT4促效劑化合物是1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-甲酸{(IS，3R，5R)-8-[(R)-2-羥基-3-(甲烷磺酰基-甲基-氨基)丙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺的鹽 酸鹽，且 其中在劑量分別為〇. 〇lmg/kg和0. lmg/kg時(shí)，所述5-HT4促效劑化合物和鹽酸多奈哌齊 化合物在大鼠莫里斯水迷宮認(rèn)知功能模型中呈現(xiàn)加和或協(xié)同效應(yīng)。2. -種5-HT4受體促效劑化合物與鹽酸多奈哌齊的用途，其用于制造一種藥物，所述藥 物是用于增強(qiáng)經(jīng)受記憶缺失的患者的記憶力， 其中所述5-HT4受體促效劑化合物是1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-甲酸{(IS，3R， 5R)-8-[(R)-2-羥基-3-(甲烷磺?；?甲基-氨基)丙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺 的鹽酸鹽，且 其中在劑量分別為〇. 〇lmg/kg和0. lmg/kg時(shí)，所述5-HT4促效劑化合物和鹽酸多奈哌齊 化合物在大鼠莫里斯水迷宮認(rèn)知功能模型中呈現(xiàn)加和或協(xié)同效應(yīng)。3. -種5-HT4促效劑化合物與鹽酸多奈哌齊的組合，其用于治療患者的阿爾茨海默氏病 或認(rèn)知障礙， 其中所述5-HT4促效劑化合物是1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-甲酸{(IS，3R，5R)-8-[(R)-2-羥基-3-(甲烷磺酰基-甲基-氨基)丙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺的鹽 酸鹽，且 其中在劑量分別為〇. 〇lmg/kg和0. lmg/kg時(shí)，所述5-HT4促效劑化合物和鹽酸多奈哌齊 化合物在大鼠莫里斯水迷宮認(rèn)知功能模型中呈現(xiàn)加和或協(xié)同效應(yīng)。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的組合，其中所述1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-甲酸 {(IS，3R,5R)_8_[ (R)_2_羥基_3_(甲燒橫?；?甲基-氨基)丙基]_8_氮雜雙環(huán)[3.2.1 ]辛_ 3_基}酰胺的鹽酸鹽，是用于增強(qiáng)所述鹽酸多奈哌齊的效力。5. -種5-HT4促效劑化合物與鹽酸多奈哌齊的組合，其用于增強(qiáng)經(jīng)受記憶缺失的患者的 記憶力， 其中所述5-HT4促效劑化合物是1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-甲酸{(IS，3R，5R)-8-[(R)-2-羥基-3-(甲烷磺?；?甲基-氨基)丙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺的鹽 酸鹽，且 其中在劑量分別為〇. 〇lmg/kg和0. lmg/kg時(shí)，所述5-HT4促效劑化合物和鹽酸多奈哌齊 化合物在大鼠莫里斯水迷宮認(rèn)知功能模型中呈現(xiàn)加和或協(xié)同效應(yīng)。6. -種醫(yī)藥組合物，其包含鹽酸多奈哌齊、5-HT4受體促效劑化合物和醫(yī)藥學(xué)上可接受 的載劑， 其中所述5-HT4受體促效劑化合物是1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-甲酸{(IS，3R， 5R)-8-[(R)-2-羥基-3-(甲烷磺酰基-甲基-氨基)丙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺 的鹽酸鹽，且 其中在劑量分別為〇. 〇lmg/kg和0. lmg/kg時(shí)，所述5-HT4促效劑化合物和鹽酸多奈哌齊 化合物在大鼠莫里斯水迷宮認(rèn)知功能模型中呈現(xiàn)加和或協(xié)同效應(yīng)。
【文檔編號(hào)】A61K31/445GK105832735SQ201610257689
【公開日】2016年8月10日
【申請(qǐng)日】2010年4月12日
【發(fā)明人】大衛(wèi)·貝亞蒂耶, 沈菲, 杰奎琳·A·M·史密斯, 羅伯特·默里·麥金內(nèi)爾, 蕾·張
【申請(qǐng)人】施萬生物制藥研發(fā)Ip有限責(zé)任公司