基于番茄粉的組合物的制作方法
【專(zhuān)利說(shuō)明】基于番前粉的組合物
[0001] 本發(fā)明涉及基于番茄粉的組合物，及其制備方法和用途。
[0002] 前列腺癌(PCa)是西方國(guó)家男性中最常見(jiàn)的非皮膚性惡性腫瘤，在美國(guó)每年引起 30,000人死亡（1)。隨著全世界超過(guò)50歲年齡的男性人群的增長(zhǎng)，受折磨的男性的數(shù)量快速 增加。因此，發(fā)現(xiàn)用于預(yù)防前列腺癌發(fā)生和進(jìn)展的策略是至關(guān)重要的醫(yī)學(xué)挑戰(zhàn)。
[0003] 來(lái)自流行病學(xué)試驗(yàn)的發(fā)現(xiàn)首次認(rèn)識(shí)到番茄，特別是加工過(guò)的番茄制品，與PCa風(fēng)險(xiǎn) 30-40%的降低相關(guān)。最近的元分析表明與偶爾食用生番茄的那些人相比，對(duì)于食用生番茄 和烹調(diào)過(guò)的番茄制品的那些人，最高四分位數(shù)番茄攝入中的PCa的相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)(RR)分別降至 0.89和0.81(2)。評(píng)價(jià)番茄紅素(主要的番茄類(lèi)胡蘿卜素）的血液濃度的研究提供了血清番茄 紅素和PCa發(fā)生之間的逆相關(guān)的支持性證據(jù)(3)。此外，干預(yù)研究表明通過(guò)用番茄制品的膳 食干預(yù)可以改變與前列腺癌發(fā)生相關(guān)的生物標(biāo)志物(4)。大部分使用源自水果和蔬菜的天 然化合物進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)性癌發(fā)生研究采用了檢查單種化學(xué)組分的"還原論者"方法。
[0004] 然而，在測(cè)試番茄和番茄紅素的臨床研究中，只有番茄補(bǔ)充顯示出降低血清前列 腺特異性抗原水平（5，6)。相似地，在前列腺癌發(fā)生的匪U-雄激素-誘發(fā)的和Dunning R3327-H前列腺癌模型中，顯示出番茄粉的抗癌作用不能通過(guò)單獨(dú)的番茄紅素來(lái)說(shuō)明（7,8， 9)。實(shí)際上，除了番茄紅素，番茄還含有各種其他植物化學(xué)品（例如，其他類(lèi)胡蘿卜素，多酚 類(lèi)），其具有可能的抗炎和抗癌活性，并且少量存在的組分也可能與決定番茄對(duì)抗PCa的最 終功效有關(guān)(10,11)。
[0005] 有幾個(gè)觀察數(shù)據(jù)表明番茄加工是對(duì)癌癥化學(xué)預(yù)防的仍然未經(jīng)確認(rèn)的貢獻(xiàn)者的可 能來(lái)源。
[0006] 首先，在加工過(guò)程中，作為熱降解和形成不同順式番茄紅素異構(gòu)體(其相對(duì)于全反 式形式能更好地吸收）的異構(gòu)化的結(jié)果，全反式番茄紅素、抗壞血酸鹽和其他天然抗氧化劑 的含量降低（12，13)。然而，熱處理過(guò)的番茄汁或其他制品的總抗氧化劑活性可能沒(méi)有降低 并且實(shí)際上常常增加（12-14)。
[0007] 其次，食用加工過(guò)的番茄制品，而不是新鮮番茄，在流行病學(xué)上與降低的前列腺癌 風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)（15)。在食品加工過(guò)程中，作為熱和機(jī)械處理、脫水和其他物理?xiàng)l件的結(jié)果，食品 組分之間發(fā)生多重化學(xué)反應(yīng)。最值得注意和常見(jiàn)的化學(xué)轉(zhuǎn)化之一是美拉德反應(yīng)，其主要引 起烘焙、烘烤和干燥食品的褐變和特定的風(fēng)味。干燥的水果和蔬菜，包括加工的番茄粉，含 有相當(dāng)大量的酮胺(ketosamine)，主要呈不可消化的果糖-氨基酸綴合物的形式（16)，其部 分地被吸收進(jìn)入循環(huán)，但未改變地被排泄。
[0008] 已經(jīng)報(bào)道了合成的酮胺在黑素瘤、乳癌和前列腺癌模型中的抗腫瘤潛能（11，17， 18)。在番茄制品中，通常認(rèn)識(shí)到三種主要類(lèi)別的結(jié)構(gòu)上明確的抗氧化劑分子：（a)抗壞血酸 (新鮮番茄中230mg/100g;加工的番茄中低得多）和其他維生素，如生育酚；（b)類(lèi)胡蘿卜素， 包括番茄紅素和胡蘿卜素(新鮮番茄中多達(dá)60mg/100g); (c)多酚化合物(多達(dá)550mg/100g)， 包括咖啡酸和香豆酸的綴合物、類(lèi)黃酮櫟精和山奈酚等(19)。
[0009] 酮胺，其總含量多達(dá)8,000mg/100g番茄粉干物質(zhì)，代表一種新類(lèi)型的潛在膳食抗 氧化劑，雖然專(zhuān)門(mén)用于由重建的干燥番茄制品制得的食品（11，20)。
[0010]最近十年已經(jīng)看到了基于動(dòng)物的癌癥研究從異種移植腫瘤模型朝向疾病的轉(zhuǎn)基 因模型的顯著轉(zhuǎn)變。這種轉(zhuǎn)變背后的智力動(dòng)機(jī)是轉(zhuǎn)基因模型將更準(zhǔn)確地重演整個(gè)致癌過(guò)程 的信念(21)。這種假設(shè)扎根于當(dāng)與異種移植系統(tǒng)相比時(shí)轉(zhuǎn)基因模型提供的幾個(gè)優(yōu)勢(shì)的認(rèn) 識(shí)。這些優(yōu)勢(shì)是致癌過(guò)程從正常細(xì)胞開(kāi)始，通過(guò)截然不同的遺傳和組織學(xué)階段進(jìn)展，在免疫 感受態(tài)宿主中發(fā)生，在其適當(dāng)?shù)募?xì)胞微環(huán)境中發(fā)生，并且可以沿著途徑發(fā)生轉(zhuǎn)移并轉(zhuǎn)移至 與臨床疾病相關(guān)的部位?；蛟S未被承認(rèn)的屬性在于以下事實(shí)，因?yàn)榧膊〔皇怯扇祟?lèi)行動(dòng)發(fā) 起的，而是由經(jīng)過(guò)種系的遺傳程序啟動(dòng)的，所以該疾病過(guò)程"重置"了每一代。在統(tǒng)計(jì)學(xué)上， 癌癥的轉(zhuǎn)基因模型的進(jìn)展因此應(yīng)當(dāng)穿越時(shí)間以及在集落之間精確地重演。鑒于合適的記錄 和數(shù)據(jù)分析，這一特征應(yīng)當(dāng)使得大統(tǒng)計(jì)力的、無(wú)遺傳和環(huán)境變化的數(shù)學(xué)噪音、沒(méi)有人類(lèi)醫(yī)學(xué) 的許多經(jīng)濟(jì)和倫理約束的流行病學(xué)式研究成為可能。遺傳工程化小鼠（GEM)模型已經(jīng)用于 癌癥研究中，以鑒別癌癥發(fā)展中所涉及的途徑、研究特定基因突變/缺失在癌發(fā)生中的作用 和確認(rèn)作為治療靶標(biāo)的關(guān)鍵基因。這些模型已經(jīng)廣泛用于測(cè)試用于前列腺癌控制的預(yù)防性 方案、化學(xué)預(yù)防劑和/或藥物的組合、癌癥疫苗和靶向治療(22)。
[0011]在男性中，早期前列腺腫瘤發(fā)生似乎與從增生性炎性萎縮開(kāi)始的發(fā)育異常相關(guān)， 所述增生性炎性萎縮可能發(fā)展成低級(jí)前列腺上皮內(nèi)瘤樣病變(PIN)、高級(jí)PIN、原發(fā)性癌癥、 轉(zhuǎn)移性癌癥和激素治療后激素難治愈的癌癥(23，24)。小鼠前列腺的轉(zhuǎn)基因腺癌(TRAMP)是 其中前列腺癌的進(jìn)展反映人形式的從PIN至未分化的雄激素?zé)o關(guān)性腫瘤的階段的模型 (25)。通過(guò)前列腺特異性啟動(dòng)子前列腺堿性蛋白驅(qū)動(dòng)的SV40早期基因的表達(dá)導(dǎo)致前列腺細(xì) 胞轉(zhuǎn)化并且所有TRAMP小鼠自發(fā)地產(chǎn)生前列腺癌。因此，這種模型常常用于評(píng)價(jià)前列腺癌的 化學(xué)預(yù)防(22)。
[0012]慢性炎癥/血管生成在小鼠和人前列腺癌產(chǎn)生和進(jìn)展中也是重要的（26,27)。炎癥 已經(jīng)被指為人前列腺癌中潛在的發(fā)病原因。病毒和細(xì)菌感染乃至化學(xué)致癌物質(zhì)(如，熟肉中 發(fā)現(xiàn)的那些)已經(jīng)被提名為炎性刺激物，但癌癥誘導(dǎo)的機(jī)理是未知的（26)。最近關(guān)于來(lái)自人 前列腺的正常和惡性上皮干細(xì)胞中的基因表達(dá)模式的信息提供了針對(duì)炎癥誘發(fā)的癌發(fā)生 的新假設(shè)。該假設(shè)指出在位于前列腺的基細(xì)胞區(qū)室中的干細(xì)胞中，激活的前列腺上皮干細(xì) 胞通過(guò)表達(dá)多種相同細(xì)胞因子中的一種(如白細(xì)胞間介素-6(IL6))獲得了存活優(yōu)勢(shì)。一個(gè) 或多個(gè)自分泌信號(hào)回路的建立導(dǎo)致這些細(xì)胞在不存在炎癥的情況下擴(kuò)充，作為腫瘤發(fā)展的 潛在第一階段(28)<JL-6型細(xì)胞因子（IL-6、制癌蛋白Μ和IL-11)及其受體在前列腺中表達(dá) 并且以自分泌和旁分泌的方式調(diào)節(jié)其生長(zhǎng)(對(duì)于綜述，參見(jiàn)參考文獻(xiàn)32)。因?yàn)樵诨加修D(zhuǎn)移 性和激素難治愈前列腺癌的患者中，血清IL-6和IL-11濃度提高(33)，IL-6濃度的測(cè)量導(dǎo)致 更準(zhǔn)確的疾病進(jìn)展和存活的預(yù)測(cè)。此外，IL-6在從雄激素依賴(lài)性轉(zhuǎn)變成雄激素?zé)o關(guān)性狀態(tài) 中起著重要作用、促進(jìn)神經(jīng)內(nèi)分泌區(qū)分，并且引起前列腺癌患者中的惡病質(zhì)(34,35)。
[0013]血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)與男性和TRAMP小鼠中的血管生成和轉(zhuǎn)移性形成都高度 相關(guān)(29-31)。其受到TD的抑制，所述TD延遲/阻斷首先P并且隨后分化差的激素?zé)o關(guān)性腫瘤 的發(fā)展所需要的血管生成轉(zhuǎn)變(30)。
[0014]在最近的論文(36)中，我們報(bào)道了番茄膳食(富含10%"番茄粉"的對(duì)照膳食，所述 番茄粉的組成記載于表1中）提高了 TRAMP小鼠的存活。實(shí)際上，Kap lan-Me i er存活曲線揭示 了當(dāng)與飼喂對(duì)照膳食的動(dòng)物相比時(shí)飼喂番茄膳食小鼠的動(dòng)物整體存活率的顯著提高(67% 對(duì) 11% ;Ρ = 0·0018)(36)。
[0015] 番茄紅素處理的小鼠的存活比例（17%)與接受對(duì)照膳食的小鼠的比例（11%)沒(méi) 有顯著差異(P = 〇.384)(未公開(kāi)的觀察數(shù)據(jù)）。
[0016] 再者，番茄膳食延遲了從前列腺上皮內(nèi)瘤形成進(jìn)展為腺癌，并且降低了 TRAMP小鼠 中分化差的癌的發(fā)生率。生化數(shù)據(jù)披露了血清抗氧化劑活性的提高和前列腺癌發(fā)生特別相 關(guān)的炎癥/血管生成標(biāo)志物(如VEGF和IL6)的血清水平的降低(36)。
[0017]鑒于以上情況，本發(fā)明的目的是提供新的基于番茄的組合物，其更具有活性，特別 是在降低患者的VEGF和IL6血清水平中更具有活性。
[0018] 通過(guò)提供包含第一組分和第二組分的組合物已經(jīng)解決了這個(gè)問(wèn)題，其中：
[0019] (a)所述第一組分是番茄粉;和
[0020] (b)所述第二組分是多酚提取物，優(yōu)選源自橄欖油和/或橄欖油廢水。
[0021] 根據(jù)特別優(yōu)選的實(shí)施方案，按照下文中所述的制備番茄粉和/或多酚提取物。
[0022] 優(yōu)選，番茄粉富含類(lèi)胡蘿卜素、類(lèi)黃酮和/或酮胺，特別是如果與上述的番茄膳食相 比較。
[0023]例如，番茄粉可以含有以重量計(jì)約0 · 40-0 · 60 % (重量/重量）（w/w)，更優(yōu)選約 0.45-0.55 % w/w和最優(yōu)選約0.50 % w/w的類(lèi)胡蘿卜素，如全反式番前紅素、5-順?lè)凹t素、葉 黃素和/或胡蘿卜素。
[0024] 番茄粉進(jìn)一步優(yōu)選包含約0 · 10-0 · 30 %w/w，更優(yōu)選約0 · 15-0 · 25 %w/w和最優(yōu)選約 0.20 % w/w的類(lèi)黃酮，如櫟精、柑桔黃素和/或其衍生物。
[0025] 酮胺優(yōu)選以0.006-0.01%￥/￥，更優(yōu)選約0.008%￥/?的量包含在番茄粉中。尤其優(yōu) 選的酮胺的實(shí)例是果糖基-氨基酸，并且特別是Fru-HisJru-His表示潛在的膳食抗氧化 劑。在生理pH下，F(xiàn)ru-His與銅相對(duì)高的親和性在Fru-His存在的情況下提供了非常低的殘 留游離銅，并且因此可以轉(zhuǎn)化成這種氧化還原催化劑的滅活和保護(hù)生物上重要的分子免受 體內(nèi)氧化降解。Fru-His證明了有效阻斷生物聚合物的金屬依賴(lài)性氧化損害，同時(shí)還呈現(xiàn)出 R0S清除能力。在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明使用的番茄粉包含0.00005_ 0 · 00007 % w/w 并且甚至更優(yōu)選約0 · 00006 % w/w 的Fru-His。
[0026] 根據(jù)優(yōu)選的實(shí)施方案，番茄粉包含以重量計(jì)約0.5%類(lèi)胡蘿卜素，約0.2%類(lèi)黃酮， 約0.008%酮胺。還可以包含更多的蛋白質(zhì)、碳水化合物(如糖類(lèi)）、脂質(zhì)和/或膳食纖維。本 文中所述的番茄粉還可以包含生育酚。
[0027] 根據(jù)特別優(yōu)選的實(shí)施方案，番茄粉是干提取物，即，含有低于約6%w/w水分，更優(yōu) 選低于5%w/w水分，并且甚至更優(yōu)選低于4%w/w水分，和最優(yōu)選低于3%w/w水分。
[0028] 根據(jù)特別優(yōu)選的實(shí)施方案，番茄粉包含以重量計(jì)約0.5%類(lèi)胡蘿卜素，約0.2%類(lèi)黃 酮，約0.008%酮胺(1^1:〇83111；[116)，約15-18%，更優(yōu)選16.5%蛋白質(zhì)，約60-70%，更優(yōu)選約 63.5 %碳水化合物，約2-5 %，更優(yōu)選約3.4 %脂質(zhì)，和/或約14-20 %，更優(yōu)選約15.9 %膳食 纖維和低于約4%水分。換句話說(shuō)，根據(jù)本發(fā)明的100g番茄粉樣品包含約96g或更多干物質(zhì)， 約63.5g碳水化合物，約3.4g脂質(zhì)，約500mg類(lèi)胡蘿卜素，約190mg番前紅素異構(gòu)體，約2.3mga-生育酚，約200mg類(lèi)黃酮，約8mg酮胺和/或約15.9g纖維。
[0029] 如上所述，根據(jù)優(yōu)選實(shí)施方案，如下文中所述制備根據(jù)本發(fā)明的組合物中使用的 多酚提取物。該多酚提取物優(yōu)選地是橄欖油生產(chǎn)的廢水的提取物。合適的橄欖油生產(chǎn)方式 的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。
[0030]根據(jù)特別優(yōu)選的實(shí)施方案，多酚提取物包含
[0031 ]約5_7%w/w，更優(yōu)選約6%w/w橄欖苷糖苷配基(oleuropeinaglycon)，
[0032] 約l_3%w/w，更優(yōu)選約2%w/w ligstrosideaglycon，
[0033] 約15-17%w/w，更優(yōu)選約6%w/w橄欖苷二醛糖苷配基 (oleuropeindialdehydeaglycon),
[0034] 約 6_8%w/w，更