肉蓯蓉苯乙醇苷類提取物作為制備防治肝纖維化藥物的應用
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及肉巧蓉苯己醇巧類提取物的應用技術領域，是一種肉巧蓉苯己醇巧類 提取物作為制備防治肝纖維化藥物的應用。
【背景技術】
[0002] 肝纖維化。胎paticfibrosis,Η巧是肝臟遭受反復或慢性損傷后的一種損傷與 修復過程，主要與慢性炎癥和引起慢性肝臟損傷的化學因素相關，已成為一個發(fā)病率和死 亡率都很高的世界醫(yī)學難題，各種肝病多數(shù)經肝纖維化最后發(fā)展為晚期的肝硬化，成為肝 病死亡的主要原因。目前研究已經明確：肝纖維化是細胞外基質（ECM)合成與降解失衡的 動態(tài)過程；肝纖維化及早期肝硬化是完全可W逆轉的。
[0003] 中醫(yī)藥治療肝纖維化有悠久的歷史和肯定的臨床療效，研究證實，中醫(yī)藥治療肝 纖維化具有多祀點、多環(huán)節(jié)、多途徑復合作用的特點。中藥肉巧蓉具有補腎益氣、養(yǎng)血潤燥 等功效，素有"沙漠人參"之稱，臨床應用已有數(shù)千年的歷史。近年來肉巧蓉W其顯著的生 物活性倍受人們的關注。其化學成分及藥理作用研究顯示，苯己醇巧類化合物（CPhGs)是 肉巧蓉發(fā)揮藥效的主要物質基礎之一。該類化合物具有抗氧化、抗抑郁、抗炎、抗病毒、抗腫 瘤、抗菌和免疫調節(jié)等多種生物活性。Peter于1989年首次發(fā)現(xiàn)苯己醇巧類化合物(松果菊 巧)具有顯著的保肝護肝作用，隨后引起人們對CPhGs進行抗肝纖維化研究的興趣。通過文 獻檢索，尚未有關于肉巧蓉苯己醇巧提取物用于防治肝纖維化的報道。

【發(fā)明內容】

[0004] 本發(fā)明提供了一種肉巧蓉苯己醇巧類提取物作為制備防治肝纖維化藥物的應用， 首次公開了肉巧蓉苯己醇巧類提取物作為制備防治肝纖維化藥物的應用。
[0005] 本發(fā)明的技術方案是通過W下措施來實現(xiàn)的；一種肉巧蓉苯己醇巧類提取物作為 制備防治肝纖維化藥物的應用。
[0006] 下面是對上述發(fā)明技術方案的進一步優(yōu)化或/和改進： 上述苯己醇巧類提取物按下述步驟得到：第一步，將干燥的肉巧蓉屬植物粉碎后得到 肉巧蓉粉碎物，將肉巧蓉粉碎物用體積分數(shù)為70%至95%的己醇水溶液進行回流提取，回流 提取的次數(shù)為2次至3次，每次回流提取的時間為2小時至3小時，將每次回流提取的提取 液進行合并后得到總提取液，其中，每千克肉巧蓉粉碎物用0. 8升至0. 9升體積分數(shù)為70% 至95%的己醇水溶液進行回流提??；第二步，將總提取液經過AB-8樹脂純化后得到肉巧蓉 苯己醇巧類提取物。
[0007] 上述肉巧蓉屬植物為肉巧蓉或鹽生肉巧蓉或管花肉巧蓉。
[0008] 本發(fā)明首次公開了肉巧蓉苯己醇巧類提取物作為制備防治肝纖維化藥物的應用， 肉巧蓉苯己醇巧類提取物抗肝纖維化的療效明顯，能夠抑制肝星狀細胞的活化與增殖，減 少膠原合成，促進膠原的降解，降低肝纖維化肝組織中的膠原及肝組織的居脯氨酸含量，從 而抑制細胞外基質的合成，起到抗肝纖維化的作用，為肝纖維化疾病的防治提供了新方向。【附圖說明】
[0009] 附圖1為各組SD大鼠肝組織Masson染色結果圖（MassonX200)。
[0010] 附圖2為各組SD大鼠肝組織免疫組化I型膠原表達的結果圖（I型膠原X200)。
[0011] 附圖3為各組SD大鼠肝組織免疫組化III型膠原結果圖狙I型膠原X200)。
[001引附圖4為各組SD大鼠肝組織免疫組化TGF- 1結果圖燈GF- iX200)。
[0013] 附圖1至4中，A至F依次為正常對照組、肝纖維化模型組、復方整甲軟肝片陽性 對照組、CPhGs高劑量組、CPhGs中劑量組和CPhGs低劑量組。
【具體實施方式】
[0014] 本發(fā)明不受下述實施例的限制，可根據(jù)本發(fā)明的技術方案與實際情況來確定具體 的實施方式。
[0015] 下面結合實施例對本發(fā)明作進一步描述： 實施例1:肉巧蓉苯己醇巧類提取物作為制備防治肝纖維化藥物的應用。
[0016] 實施例2;與上述實施例的不同之處在于，苯己醇巧類提取物按下述步驟得到：第 一步，將干燥的肉巧蓉屬植物粉碎后得到肉巧蓉粉碎物，將肉巧蓉粉碎物用體積分數(shù)為70% 至95%的己醇水溶液進行回流提取，回流提取的次數(shù)為2次至3次，每次回流提取的時間為 2小時至3小時，將每次回流提取的提取液進行合并后得到總提取液，其中，每千克肉巧蓉 粉碎物用0. 8升至0. 9升體積分數(shù)為70%至95%的己醇水溶液進行回流提?。坏诙?，將總 提取液經過AB-8樹脂純化后得到肉巧蓉苯己醇巧類提取物。AB-8樹脂為市售的AB-8樹 脂。
[0017] 實施例3;與上述實施例的不同之處在于，肉巧蓉屬植物為肉巧蓉或鹽生肉巧蓉 或管花肉巧蓉。
[0018] 下面為根據(jù)本發(fā)明中上述實施例的肉巧蓉苯己醇巧類提取物作為制備防治肝纖 維化藥物的應用的具體藥理試驗： 1.實驗方法 雄性健康SD大鼠75只，SPF級，體重180g至220g，由新疆醫(yī)科大學實驗動物中 必提供，動物生產許可證號；SCXK(新）2011-0004,SPF環(huán)境實驗動物使用許可證號： SYXK(新）2011-0004。將上述75只雄性健康SD大鼠隨機分為6組，即正常對照組、肝纖維 化模型組、復方整甲軟肝片陽性對照組（600mg/kg)、肉巧蓉苯己醇巧類提取物（CPhGs)高 劑量組巧00mg/kg)、肉巧蓉苯己醇巧類提取物（CPhGs)中劑量組（250mg/kg)、肉巧蓉苯己 醇巧類提取物（CPhGs)低劑量組（125mg/kg)，CPhGs高劑量組、CPhGs中劑量組和CPhGs低 劑量組的SD大鼠均為13只，其余每組各12只。除正常對照組外，肝纖維化模型組、復方整 甲軟肝片陽性對照組、CPhGs高劑量組、CPhGs中劑量組和CPhGs低劑量組的SD大鼠均采用 朱啟貴等的方法制備免疫性肝纖維化模型，造模分為致敏階段和尾靜脈攻擊階段。采用朱 啟貴等的方法制備免疫性肝纖維化模型為現(xiàn)有公知技術。
[0019] 在致敏階段，除正常對照組注射生理鹽水（0. 5mL/只）W外，其余各組動物均多點 皮下注射含BSA的弗氏不完全佐劑，BSA(牛血清白蛋白）的濃度為9mg/mL，0. 5mL/次，共五 次，前兩次注射的時間間隔為14天，后Η次注射的時間間隔為7天，末次致敏注射后1周， 肝纖維化模型組、復方整甲軟肝片陽性對照組、CPhGs高劑量組、CPhGs中劑量組和CPhGs低劑量組的每只動物于眼她靜脈叢采血，采用雙向擴散法檢測SD大鼠血清抗BSA抗體，除 正常對照組外，其余各組的BSA抗體均呈陽性，抗體呈陽性的SD大鼠繼續(xù)進行尾靜脈攻擊， 即肝纖維化模型組、復方整甲軟肝片陽性對照組、CPhGs高劑量組、CPhGs中劑量組和CPhGs 低劑量組的SD大鼠尾靜脈注射BSA，一周2次，連續(xù)5周，注射劑量由2mg/只逐漸遞增至 4mg/只；正常對照組尾靜脈注射生理鹽水。造模同時對肝纖維化模型組、復方整甲軟肝片 陽性對照組、CPhGs高劑量組、CPhGs中劑量組和CPhGs低劑量組進行給藥，除正常對照組 和肝纖維化模型組灌胃給予蒸傭水外，其余各組均按設定劑量灌胃給藥(復方整甲軟肝片 陽性對照組；600mg/kg/天的復方整甲軟肝片；CPhGs高劑量組；500mg/kg/天的CPhGs, CPhGs中劑量組；250mg/kg/天的CPhGs,CPhGs低劑量組；125mg/kg/天的CPhGs);造模 結束后，除正常對照組和肝纖維化模型組繼續(xù)灌胃給予蒸傭水4周外，其余各組均按設定 劑量繼續(xù)灌胃給藥4周。各組末次給藥后禁食（不禁水）12h，稱重，經戊己比妥鋼腹腔注 射麻醉后，腹主動脈采血，35(K)r/min離必lOmin，分離血清，分裝-2(TC凍存，W供檢測血 清HA、LN、P過II、IV-C和TGF-A水平之用；采血后處死SD大鼠，取肝臟左葉同一部位，固 定，切片，膠原纖維Masson染色，進行病理組織學觀察及免疫組化測定，在光鏡下觀察各組 SD大鼠肝組織Masson染色結果、各組SD大鼠肝組織免疫組化I型膠原表達的結果、各組 SD大鼠肝組織免疫組化III型膠原結果和各組SD大鼠肝組織免疫組化TGF- i結果，各組 SD大鼠肝組織Masson染色結果如圖1所示，各組SD大鼠肝組織免疫組化I型膠原表達的 結果如圖2所示，各組SD大鼠肝組織免疫組化III型膠原結果如圖3所示，各組大鼠肝組織 免疫組化TGF- 1結果如圖4所示。牛血清白蛋白免疫損傷所致的肝纖維化與臨床上的慢 性肝炎所致的肝纖維化在發(fā)病機制上更加接近。
[0020] 實驗結果 (1)檢測正常對照組(正常組)、肝纖維化模型組(模型組)、復方整甲軟肝片陽性對照組 (整甲軟肝片組XCPhGs高劑量組偏劑量組）、CPhGs中劑量組沖劑量組）和CPhGs低劑 量組（低劑量組）的血清中的HA礎明質酸酶)、LN(層粘連蛋白XPCIII(III型前膠原)、 IV-C(IV型膠原）含量，正常組、模型組、整甲軟肝片組、高劑量組、中劑量組和低劑量組的 血清中的HA、LN、PCIII、IV-C含量(單位；（mg/L))如表1所示。表1中的HA、LN、PCIII、 IV-C含量均W采±資表示，η為動物存活數(shù)。
[0021] 通過ΗΑ可較準確靈敏地反映肝內已生成的纖維量及肝細胞受損狀況，是肝纖維 化和肝硬變的敏感指標；LN與肝纖維化活動程度及口靜脈壓力呈正相關，慢活肝和肝硬變 及原發(fā)性肝