用于捕食線蟲的真菌和驅(qū)蟲藥聯(lián)合藥劑盒及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于微生物學(xué)和寄生蟲學(xué)領(lǐng)域，具體設(shè)及一種捕食線蟲性真菌和驅(qū)蟲藥聯(lián) 合的組合物。
【背景技術(shù)】
[0002] 動物寄生性線蟲病是家畜的一類常見疫病，給畜牧業(yè)造成嚴(yán)重的損失和危害。長 期W來，對其防治主要依靠一些驅(qū)蟲藥物來發(fā)揮了作用。但是隨著驅(qū)蟲藥產(chǎn)生的抗藥性；藥 物殘留在乳、肉、蛋中對人體健康的危害；W及藥物代謝產(chǎn)物排出后對環(huán)境的污染等問題的 日益突出，已經(jīng)引起人們的普遍關(guān)注。
[0003] 捕食線蟲性真菌是線蟲的自然天敵，它通過形成菌環(huán)和菌網(wǎng)等捕食性器官，來捕 獲殺滅線蟲幼蟲，從而達(dá)到生物防控寄生性線蟲對家畜感染的目的。正是因?yàn)榇祟愓婢?運(yùn)個(gè)特點(diǎn)，所W在寄生性線蟲病防治方面，捕食線蟲性真菌是一個(gè)國家極其重要的寶貴生 物資源。利用捕食線蟲性真菌，來對抗寄生性線蟲對動物的感染是一項(xiàng)嶄新的生物技術(shù)。利 用運(yùn)種方法來防控家畜線蟲病，不僅有利于避免蟲體產(chǎn)生抗藥性，而且對環(huán)境保護(hù)，食品安 全W及可持續(xù)的畜牧業(yè)發(fā)展等方面都有著重要的作用和意義。雖然捕食線蟲性真菌在防治 家畜線蟲病方面有著較好的遠(yuǎn)景，但在生產(chǎn)實(shí)踐中的最佳臨床應(yīng)用模式究竟是什么？特別 是如何結(jié)合中國國情，將其應(yīng)用于畜牧業(yè)生產(chǎn)實(shí)際，值得我們深入進(jìn)行相關(guān)研究。
[0004] 國內(nèi)目前對家畜線蟲病的防控驅(qū)蟲，實(shí)際上是在給予動物驅(qū)蟲藥后，并不局限于 家畜的活動，運(yùn)樣導(dǎo)致的結(jié)果是蟲體被藥物殺死后，蟲體崩解，含有蟲卵的子宮破裂，短期 內(nèi)家畜排出的糞便中會含有大量蟲卵，隨著家畜的無限制活動，糞便隨意排泄，蟲卵也到處 散布，廣泛污染草場。由于驅(qū)蟲藥一般對蟲卵幾乎沒有作用，運(yùn)些糞中的蟲卵還會繼續(xù)發(fā)育 成感染性幼蟲，家畜放牧吃草時(shí)再吃進(jìn)去，造成感染，再引發(fā)疾病，運(yùn)就是目前我國家畜驅(qū) 蟲現(xiàn)實(shí)中存在的一個(gè)問題。那么能否不用驅(qū)蟲藥，而單獨(dú)使用捕食線蟲性真菌來防控運(yùn)類 寄生蟲感染呢？回答是可W，但究竟采用一種什么方式，國內(nèi)外都在探討。把其制成制劑， 散布在草場上，需要大量的人力、物力和財(cái)力，成本太大，實(shí)際上是行不通的；國內(nèi)外多數(shù)學(xué) 者現(xiàn)在一般認(rèn)為，最好是給家畜飼喂進(jìn)去，運(yùn)樣運(yùn)種對家畜體無害的真菌可W通過家畜消 化道，隨糞排出后，就能對糞中發(fā)育的線蟲幼蟲發(fā)揮作用。但運(yùn)種純粹用捕食線蟲性真菌來 防控寄生蟲感染的方法在我國目前還行不通，因?yàn)椴妒尘€蟲性真菌并不能對家畜體內(nèi)的線 蟲成蟲作用，它只能對排出蟲卵發(fā)育形成的幼蟲發(fā)揮作用，避免家畜繼續(xù)不斷發(fā)生新的感 染。所W，利用捕食線蟲性真菌來生物防控寄生蟲病是一個(gè)緩慢漸進(jìn)的過程，需要較長的時(shí) 間才可W逐漸降低寄生蟲的種群數(shù)量。因此，從目前我國當(dāng)前情況來看，單獨(dú)用捕食線蟲性 真菌來防控家畜線蟲病尚不現(xiàn)實(shí)，因?yàn)樗蝗珧?qū)蟲藥效果來的更直觀快速。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 針對本領(lǐng)域存在的問題，本發(fā)明的目的是提出一種用于捕食線蟲的真菌和驅(qū)蟲藥 聯(lián)合藥劑盒。
[0006] 本發(fā)明的第二個(gè)目的是提出所述聯(lián)合藥劑盒的應(yīng)用。 陽007] 實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的的技術(shù)方案為：
[0008] 一種用于捕食線蟲的真菌和驅(qū)蟲藥聯(lián)合藥劑盒，其特征在于，包括捕食線蟲性真 菌值UddingtoniafIagrans)和驅(qū)蟲藥，所述驅(qū)蟲藥有效成分選自阿苯達(dá)挫（丙硫咪挫）、 伊維菌素、阿維菌素、左旋咪挫、甲苯咪挫、嚷苯達(dá)挫等常用驅(qū)線蟲藥中的一種或多種；驅(qū)蟲 藥和捕食線蟲性真菌值uddingtoniaflagrans)的比例為0. 1~15mg:lX106個(gè)厚壁抱子。
[0009] 其中，所述捕食線蟲性真菌值uddingtoniaflagrans)菌株的保藏號為：CGMCC No.9201O
[0010] 優(yōu)選地，所述捕食線蟲性真菌值uddingtoniaflagrans)W凍干制劑的抱子懸液 形式存在，每mL凍干制劑的抱子懸液中含有1X1〇6個(gè)厚壁抱子。
[0011] 其中，所述驅(qū)蟲藥有效成分中的阿苯達(dá)挫、伊維菌素、阿維菌素、左旋咪挫、甲苯咪 挫、嚷苯達(dá)挫W口服劑或注射劑形式存在。
[0012] 作為本發(fā)明優(yōu)選技術(shù)方案之一，所述驅(qū)蟲藥有效成分中的阿苯達(dá)挫、阿維菌 素、左旋咪挫、甲苯咪挫、嚷苯達(dá)挫W口服劑形式存在，有效成分和捕食線蟲性真菌 (Duddingtoniaflagrans)的比例為 10 ~15mg:lXIO6個(gè)厚壁抱子。
[0013] 本發(fā)明另一優(yōu)選技術(shù)方案為：所述驅(qū)蟲藥中的伊維菌素W注射劑形式存在，有效 成分和捕食線蟲性真菌值uddingtoniaflagrans)的比例為0.2mg:lXIO6個(gè)厚壁抱子。
[0014] 其中，伊維菌素注射劑濃度可為0.Olg/ml。
[0015] 進(jìn)一步優(yōu)選地，所述的聯(lián)合藥劑盒包括捕食線蟲性真菌值uddingtonia flagrans)和驅(qū)蟲藥，所述驅(qū)蟲藥為阿苯達(dá)挫；驅(qū)蟲藥和捕食線蟲性真菌值uddingtonia flagrans)的比例為：12mg:1XIO6個(gè)厚壁抱子。
[0016] 本發(fā)明所述的聯(lián)合藥劑盒是在家畜寄生性線蟲病防控中應(yīng)用。
[0017] 所述應(yīng)用，具體到羊的寄生性線蟲病，阿苯達(dá)挫給藥劑量為12mg/千克體重；伊維 菌素給藥劑量為〇.2mg/千克體重，捕食線蟲性真菌值uddingtoniaflagrans)給藥劑量為 1X1〇6個(gè)厚壁抱子/千克體重。
[0018] 本發(fā)明的有益效果在于：
[0019] 針對目前我國無法迅速擬棄化學(xué)驅(qū)蟲藥而單獨(dú)采用捕食線蟲性真菌防治家畜寄 生性線蟲病的現(xiàn)狀，本發(fā)明進(jìn)行了捕食線蟲性真菌與驅(qū)蟲藥聯(lián)合應(yīng)用模式的研究，W發(fā)揮 兩者在殺滅寄生蟲方面的各自優(yōu)點(diǎn)，同時(shí)彌補(bǔ)雙方的不足，在短期內(nèi)起到事半功倍的作用， 更使捕食線蟲性真菌的臨床應(yīng)用方法接近于生產(chǎn)實(shí)際，更符合中國的國情，也更利于其在 國內(nèi)外家畜寄生性線蟲病防控中得到推廣應(yīng)用。捕食線蟲性真菌與驅(qū)蟲藥聯(lián)合應(yīng)用的原理 是當(dāng)消化道線蟲被藥物殺滅崩解后，大量的蟲卵W及捕食性真菌共同隨糞排到外界，在糞 便小環(huán)境中，當(dāng)蟲卵發(fā)育為幼蟲時(shí)，就會刺激捕食性真菌產(chǎn)生捕食器-菌環(huán)和菌網(wǎng)，對蟲體 進(jìn)行捕食殺滅，從而避免了幼蟲擴(kuò)散到草場上，再對家畜造成新的感染。運(yùn)樣不僅提高了藥 物殺蟲的實(shí)際效率，對殺蟲后排出蟲卵所解出的幼蟲進(jìn)行殺滅。避免重新感染家畜；而且可 W逐步減少化學(xué)驅(qū)蟲藥的使用次數(shù)，乃至最后停用，從而達(dá)到家畜寄生蟲病防控的終極目 標(biāo)。
【附圖說明】
[0020] 圖I為實(shí)施例I中C組與D組EPG值的比較結(jié)果。
[0021] 圖2為實(shí)施例1中C組與D組LPG值比較結(jié)果。 陽02引圖3為實(shí)施例1中A組、B組與D組LPG比較結(jié)果。 陽02引 圖4為實(shí)施例2中E組、F組與D組LPG比較結(jié)果。
【具體實(shí)施方式】
[0024] 現(xiàn)WW下實(shí)施例來說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例中使用的手 段，如無特別說明，均使用本領(lǐng)域常規(guī)的手段。
[00巧]本發(fā)明設(shè)及的捕食線蟲性真菌-Duddingtoniaflagrans菌株，該菌株（菌株名稱 為CIMl)的保藏號為：CGMCCNo.9201，保藏日期：2014年5月5日。所述菌株保藏于中國 微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中屯、（CGMCC)，地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院 3號，中國科學(xué)院微生物研究所，郵政編碼100101，電話：（010)64807355。 陽0%] 凍干制劑及混懸液的制備方法如申請?zhí)朇N201410227501. 3專利所公開的方法。 陽〇27] 實(shí)施例1 :
[0028] 1、試驗(yàn)動物分組：
[0029] 將40只試驗(yàn)動物分為4組（A組、B組、C組、D組），每組10只羊。其中A組為捕 食線蟲性真菌-Duddingtoniaflagrans(D.flagrans)聯(lián)合阿苯達(dá)挫（A化endazole,也叫 丙硫咪挫）藥物組巧組為單一阿苯達(dá)挫藥物組；C組為單一捕食線蟲性真菌-D.flagrans 組；D組為空白對照組。
[0030] 2、試驗(yàn)動物給藥：
[0031] (I)A組綿羊按照藥品說明書劑量，投喂阿苯達(dá)挫藥物（12mg/千克體重）；并W 1XIO6個(gè)厚壁抱子/千克體重的劑量，投喂捕食線蟲性真菌-D.flagrans凍干生物制劑配 置的厚壁抱子混懸液。
[0032] (2)B組綿羊僅投喂阿苯達(dá)挫藥物，投喂劑量同A組。
[0033] (3)C組綿羊僅投喂捕食線蟲性真菌-D.flagrans厚壁抱子混懸液，投喂劑量同A 組。
[0034] (4)D組綿羊作為空白對照組，僅投喂等量的蒸饋水。
[0035] 3、試驗(yàn)動物糞便的采集及第=期幼蟲培養(yǎng)
[0036] 在給藥和投喂真菌前化W及投喂后1211、2地、3611、4她、6011、7化時(shí)，分別對各組綿 羊進(jìn)行直腸采糞，用于線蟲蟲卵計(jì)數(shù)。同時(shí)，取各個(gè)試驗(yàn)動物一定量的糞便，分別放置于直 徑為90mm的平皿中，于27°C恒溫培養(yǎng)箱中15d，進(jìn)行第=期幼蟲培養(yǎng)；每天加適量蒸饋水于 糞便中，并進(jìn)行攬拌，W保證糞樣的濕度與氧氣。
[0037] 4、捕食線蟲性真菌-D.flagrans臨床殺蟲模式比較
[00測 （1)克糞便蟲卵數(shù)牌G)計(jì)數(shù)及比較
[0039] 將采集到的40份糞便采用McMaster氏法進(jìn)行線蟲蟲卵計(jì)數(shù)，得出克糞便蟲卵數(shù) 巧PG)，并得出各組的平均EPG數(shù)。結(jié)果見圖1顯示：C組羊在投喂化flagrans捕食線蟲性 真菌生物制劑混懸液后，羊糞便中的蟲卵數(shù)量變化不明顯，說明捕食線蟲性真菌對試驗(yàn)動 物體內(nèi)的成蟲不起任何作用，該試驗(yàn)組線蟲成蟲象D組（空白對照組）的成蟲一樣，會持續(xù) 產(chǎn)生蟲卵。也表明捕食線蟲性真菌對排出的線蟲卵同樣也不具有直接捕殺作用。 W40] 似克糞便幼蟲數(shù)（LPG)計(jì)數(shù)及比較
[0041] 采用貝爾曼氏法，對培養(yǎng)糞便中的線蟲第3期幼蟲進(jìn)行分離計(jì)數(shù)，得出每個(gè)試驗(yàn) 動物的克糞便幼蟲數(shù)（LPG)，再計(jì)數(shù)出各組的平均LPG數(shù)。結(jié)果見下表和圖2、圖3。
[0042] 表1不同試驗(yàn)組在各時(shí)間節(jié)點(diǎn)LPG值結(jié)果
W44] 注：同行肩標(biāo)不同表示差異顯著P< 0.