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一種分離山茱萸美拉德反應(yīng)分級產(chǎn)物的方法及其應(yīng)用

文檔序號:9496337閱讀:790來源:國知局
一種分離山茱萸美拉德反應(yīng)分級產(chǎn)物的方法及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于中藥提取領(lǐng)域,具體涉及山茱萸美拉德反應(yīng)分級產(chǎn)物的提取及超濾分 離方法及其抗氧化作用。
【背景技術(shù)】
[0002] 美拉德反應(yīng)是指羰基化合物(還原糖類)與氨基化合物(蛋白質(zhì)與氨基酸)經(jīng)過 一系列復(fù)雜的反應(yīng)最終生成棕色甚至是黑色的被稱為類黑精或擬黑素(Melanoidins)的 大分子物質(zhì)的非酶促反應(yīng)。許多研究表明美拉德反應(yīng)在中藥炮制過程中也廣泛存在著,例 如燙狗脊在炮制過程中產(chǎn)生了美拉德反應(yīng)中間產(chǎn)物γ-吡喃酮和糠醛類化合物、何首烏在 炮制后產(chǎn)生的新成分5-羥基麥芽酚和5-羥甲基糠醛均為美拉德反應(yīng)的標(biāo)志性產(chǎn)物等,其 在炮制過程中均發(fā)生了美拉德反應(yīng),產(chǎn)生了美拉德反應(yīng)產(chǎn)物。
[0003] 中藥山茱萸為山茱萸科植物山茱萸CornusofficinalisSieb.etZucc.的干燥 成熟果肉(藥材常稱為"山萸肉"),是我國最常用中藥材之一,被2010年版藥典收錄。秋末 冬初果皮變紅時采收果實,用文火烘或置沸水中略燙后,及時除去果核,干燥,即為生山萸 肉。臨床一般以制山萸肉入藥,其酸、濕,微溫。歸肝、腎經(jīng)。功能補益肝腎,澀精固脫。用 于眩暈耳鳴,腰膝酸痛,陽痿遺精,遺尿尿頻,崩漏帶下,大汗虛脫。前期研究表明,山茱萸在 炮制過程中發(fā)生了美拉德反應(yīng),產(chǎn)生了美拉德反應(yīng)產(chǎn)物。
[0004] 超濾是按分子量大小范圍進(jìn)行物質(zhì)分離、濃縮和提純的一種膜分離技術(shù)。超濾將 不同分子量美拉德反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行分級分離,根據(jù)需要取出某一分子量范圍的級分進(jìn)行利 用。超濾的膜孔徑以分子量為單位,一般在1000-1000000道爾頓(Da,碳原子分子質(zhì)量的 十二分之一)之間。超濾目前廣泛應(yīng)用于化工分離及食品加工,這為其在中藥中的應(yīng)用提 供了良好的基礎(chǔ)。選用不同孔徑的超濾膜,將美拉德反應(yīng)產(chǎn)物分成不同級數(shù),各級分子量段 截留產(chǎn)物粒度分布均勻且單一,具有較高的利用價值。目前為止尚未見山茱萸美拉德反應(yīng) 產(chǎn)物的分離和活性的相關(guān)報道。本發(fā)明使用超濾技術(shù)將山茱萸美拉德反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行分級分 離,得到山茱萸美拉德反應(yīng)分級產(chǎn)物,并報道其抗氧化活性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供一種分離山茱萸美拉德反應(yīng)分級產(chǎn)物的方法。
[0006] 本發(fā)明的另一個目的在于提供山茱萸美拉德反應(yīng)分級產(chǎn)物的抗氧化作用。
[0007] 本發(fā)明采取以下途徑實現(xiàn):
[0008] -種分離山茱萸美拉德反應(yīng)分級產(chǎn)物的方法,包括以下步驟:
[0009] A.藥材的炮制:取凈山茱萸藥材,加入藥材質(zhì)量比例的15-25%黃酒,拌勾,悶潤, 待黃酒吸盡,常壓蒸制,取出,干燥,作為山茱萸美拉德反應(yīng)產(chǎn)物粗品;
[0010]B.超濾前樣品處理:取步驟A酒蒸后山茱萸美拉德反應(yīng)產(chǎn)物粗品,加水煎煮提取 兩次,每次40-80min,第一次加藥材質(zhì)量10-14倍量的水,第二次加藥材質(zhì)量8-12倍量的 水,合并水煎液,過濾得濾液,離心,上清液減壓抽濾,得到山茱萸美拉德反應(yīng)產(chǎn)物;
[0011] C.超濾:取步驟B所得山茱萸美拉德反應(yīng)產(chǎn)物,采用中空纖維膜分級過濾,過膜級 數(shù)為0. 22μm~lKDa,經(jīng)過七級中空纖維膜的作用,將藥液進(jìn)行超濾分離,得到七級截留分 子量的樣品,為山茱萸美拉德反應(yīng)各分子量段截留產(chǎn)物;
[0012] D.超濾后樣品處理:對步驟C所得山茱萸美拉德反應(yīng)各分子量段截留產(chǎn)物進(jìn)行濃 縮,再經(jīng)冷凍干燥制得山茱萸美拉德反應(yīng)分級產(chǎn)物。
[0013] 所述的分離山茱萸美拉德反應(yīng)產(chǎn)物的方法,超濾過程中,采用中空纖維膜分級 過濾,連接在中空纖維膜設(shè)備上,設(shè)置其操作壓力為〇. 1~1.OMPa,溫度為室溫,電壓為 40-50V〇
[0014] 所述的分離山茱萸美拉德反應(yīng)產(chǎn)物的方法,采用中空纖維膜分級過濾,過膜 級數(shù)七級分別為0. 22μm,lOOKDa,50KDa,lOKDa,4KDa,2KDa,lKDa。分別得到分子量為 0. 22μπι~lKDa之間的山茱萸美拉德反應(yīng)分級產(chǎn)物。
[0015] 所述的山茱萸美拉德反應(yīng)分級產(chǎn)物在制備具有抗氧化性能保健品或化妝品中的 應(yīng)用。
[0016] 有益效果:通過超濾技術(shù)可以根據(jù)需要分離山茱萸美拉德反應(yīng)產(chǎn)物的某一分子量 范圍的組分,便于后續(xù)加以利用,得到的山茱萸美拉德反應(yīng)分級產(chǎn)物粒度分布均勻且單一, 性質(zhì)穩(wěn)定,可重現(xiàn),具有較高的利用價值,可以將此分離山茱萸美拉德反應(yīng)產(chǎn)物的技術(shù)應(yīng)用 于工業(yè)生產(chǎn)中。通過實驗證明山茱萸美拉德反應(yīng)分級產(chǎn)物具有抗氧化功效。
【附圖說明】
[0017]圖1為山茱萸美拉德反應(yīng)分級產(chǎn)物和蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品的鐵氰化鉀還原能力,其中 A. < 4KDa,B. 10-4KDa,C. 50-10KDa,D. 100-50KDa,E. 0· 22ym-100KDa,F(xiàn). 0· 45-0. 22μπι, G.蘆丁
【具體實施方式】
[0018] 實施例1 :
[0019]A.藥材炮制:取凈山茱萸藥材3kg,按比例加入20 % (約600mL)液體輔料黃酒 (產(chǎn)地:浙江紹興女兒紅釀酒有限公司,批號:20140917A),拌勻,置密閉容器中悶潤3h,待 黃酒吸盡,置于蒸鍋中,密閉隔水常壓蒸制,于24h時取出,置減壓干燥箱中50°C干燥,作為 山茱萸美拉德反應(yīng)產(chǎn)物粗品。
[0020] B.超濾前樣品處理:取步驟A酒蒸后山茱萸美拉德反應(yīng)產(chǎn)物粗品,置多功能提取 罐中水煎煮提取兩次,第一次80min,第二次60min,第一次加藥材質(zhì)量14倍量的水,第二 次加藥材質(zhì)量12倍量的水,合并兩次水煎液,用7層紗布過濾,得濾液;6000r·min1離心 12min,上清液減壓抽濾,除去濾液中的固體顆粒及膠體物質(zhì),得到山茱萸美拉德反應(yīng)產(chǎn)物。
[0021] C.超濾:取步驟B所得山茱萸美拉德反應(yīng)產(chǎn)物,采用中空纖維膜分級過濾,過膜級 數(shù)分別為〇. 22μm,lOOKDa,50KDa,lOKDa,4KDa,2KDa,lKDa,設(shè)置中空纖維膜設(shè)備操作壓力 為0.IMPa,溫度為室溫,電壓為50V。當(dāng)步驟B所得山茱萸美拉德反應(yīng)產(chǎn)物經(jīng)由水栗進(jìn)入中 空纖維膜時,分子量小于膜孔徑的物質(zhì)隨溶劑透過膜流出設(shè)備,分子量大于膜孔徑的物質(zhì) 被截留在膜表面。經(jīng)過各級中空纖維膜的作用,將藥液進(jìn)行超濾分離,得到山茱萸美拉德反 應(yīng)各分子量段截留產(chǎn)物。
[0022] D.超濾后樣品處理:對步驟C所得山茱萸美拉德反應(yīng)各分子量段截留產(chǎn)物進(jìn)行濃 縮,再經(jīng)冷凍干燥制得山茱萸美拉德反應(yīng)分級產(chǎn)物。
[0023] 實施例2 :
[0024] A.藥材炮制:取凈山茱萸藥材3kg,按比例加入20 % (約600mL)液體輔料黃酒 (產(chǎn)地:浙江紹興女兒紅釀酒有限公司,批號:20140917A),拌勻,置密閉容器中悶潤3h,待 黃酒吸盡,置于蒸鍋中,密閉隔水常壓蒸制,于24h時取出,置減壓干燥箱中50°C干燥,作為 山茱萸美拉德反應(yīng)產(chǎn)物粗品。
[0025] B.超濾前樣品處理:取步驟A酒蒸后山茱萸美拉德反應(yīng)產(chǎn)物粗品,置多功能提取 罐中水煎煮提取兩次,第一次60min,第二次60min,第一次加藥材質(zhì)量12倍量的水,第二 次加藥材質(zhì)量10倍量的水,合并兩次水煎液,用6層紗布過濾,得濾液;5000r·π?η-1離心 15min,上清液減壓抽濾,除去濾液中的固體顆粒及膠體物質(zhì),得到山茱萸美拉德反應(yīng)產(chǎn)物。
[0026]C.超濾:取步驟B所得山茱萸美拉德反應(yīng)產(chǎn)物,采用中空纖維膜分級過濾,過膜級 數(shù)分別為〇. 22μm,lOOKDa,50KDa,lOKDa,4KDa,2KDa,lKDa,設(shè)置中空纖維膜設(shè)備操作壓力 為1.OMPa,溫度為室溫,電壓為50V。當(dāng)步驟B所得山茱萸美拉德反應(yīng)產(chǎn)物經(jīng)由水栗進(jìn)入中 空纖維膜時,分子量小于膜孔徑的物質(zhì)隨溶劑透過膜流出設(shè)備,分子量大于膜孔徑的物質(zhì) 被截留在膜表面。經(jīng)過各級中空纖維膜的作用,將藥液進(jìn)行超濾分離,得到山茱萸美拉德反 應(yīng)各分子量段截留產(chǎn)物。
[0027] D.超濾后樣品處理:對步驟C所得山茱萸美拉德反應(yīng)各分子量段截留產(chǎn)物進(jìn)行濃 縮,再經(jīng)冷凍干燥制得山茱萸美拉德反應(yīng)分級產(chǎn)物。
[0028] 實施例3 :
[0029]A.藥材炮制:取凈山茱萸藥材3kg,按比例加入20 % (約600mL)液體輔料黃酒 (產(chǎn)地:浙江紹興女兒紅釀酒有限公司,批號:20140917A),拌勻,置密閉容器中悶潤3h,待 黃酒吸盡,置于蒸鍋中,密閉隔水常壓蒸制,于24h時取出,置減壓干燥箱中50°C干燥,作為 山茱萸美拉德反應(yīng)產(chǎn)物粗品。
[0030] B.超濾前樣品處理:取步驟A酒蒸后山茱萸美拉德反應(yīng)產(chǎn)物粗品,置多功能提取 罐中水煎煮提取兩次,第一次60min,第二次40min,第一次加藥材質(zhì)量10倍量的水,第二 次加藥材質(zhì)量8倍量的水,合并兩次水煎液,用5層紗布過濾,得濾液;4000r·min-1離心 20min,上清液減壓抽濾,除去濾液中的固體顆粒及膠體物質(zhì),得到山茱萸美拉德反應(yīng)產(chǎn)物。
[0031] C.超濾:取步驟B所得山茱萸美拉德反應(yīng)產(chǎn)物,采用中空纖維膜分級過濾,過膜級 數(shù)分別為〇. 22μm,.lOOKDa,50KDa,lOKDa,4KDa,2KDa,lKDa,設(shè)置中空纖維膜設(shè)備操作壓力 為0. 5MPa,溫度為室溫,電壓為
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