一種利用亞臨界水同時(shí)提取山楂中熊果酸和齊墩果酸的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種利用亞臨界水同時(shí)提取山楂中熊果酸和齊墩果酸的方法，屬于天然活性成分提取領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]山楂為薔微科山楂屬植物山里紅Grataegus pinnatifida Bunge var.major N.E.Br或山楂Grataegus pinnatif ida Bunge的干燥成熟果實(shí)，具有消食化積、活血化瘀的功效?；瘜W(xué)成分分析顯示，山楂中熊果酸的平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2.393 mg/g，齊墩果酸的平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.449 mg/g，(丁銀花，孫永成，王振中，等.不同產(chǎn)地山楂中熊果酸和齊墩果酸量的差異分析[J].中草藥，2014，45(14):1367-1373.)。藥理學(xué)研究表明，熊果酸的藥理作用主要表現(xiàn)抗糖尿病、抗愛滋病以及抗腫瘤等方面(王鵬，張忠義，吳忠.熊果酸在藥用植物中的分布及藥理作用[J].中草藥，2000，23 (11):717-722.)，齊墩果酸具有消炎，增強(qiáng)免疫力，抑制血小板降集，降糖等多方面的臨床藥理作用(王立新，韓廣軒，劉文庸，等.齊墩果酸的化學(xué)及藥理研究[J].藥學(xué)實(shí)踐雜志，2001，19(2):104-107.)。
[0003]目前山楂中熊果酸和齊墩果酸的提取方法主要是采用水提法、回流提取法、超聲波/微波提取法、酶提取法等。翁彩珠等人(翁彩珠，巨敏，劉軍海.微波輔助提取山楂中熊果酸的工藝研究[J].天津化工，2011，25 (1):33-36.)應(yīng)用微波輔助提取技術(shù)，乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)為85%、提取溫度為55°C、微波時(shí)間為4min、液料比為16: 1、微波功率300W，在此條件下的熊果酸提取率為3.42%。孫協(xié)軍等人(孫協(xié)軍，劉羽純，潘龍飛，等.山楂中齊墩果酸和熊果酸超聲提取工藝研究[J].工藝技術(shù)，2015，36 (14):321-326.)利用超聲工藝，在乙醇體積分?jǐn)?shù)90%，液固比35: lmL/g，超聲波功率352W，提取時(shí)間為4.6min的條件下超聲波輔助提取山楂齊墩果酸和熊果酸，其含量之和為2.87mg/g。雖然提取時(shí)間縮短，但超聲條件對設(shè)備要求較高，很難實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。
[0004]亞臨界水又稱為高壓熱水，是指在壓力大于IMPa時(shí)，將水加熱到100°C以上，臨界溫度374°C以下，水體依然保持液體狀態(tài)。同文獻(xiàn)報(bào)道的提取方法相比，亞臨界水提取效率高，溶解性與滲透能力強(qiáng)，其作用效果迅速且能量消耗較少，同時(shí)亞臨界水會(huì)使蛋白質(zhì)、淀粉等變性，給后續(xù)的分離純化帶來方便，非常適用于工業(yè)的大規(guī)模生產(chǎn)的提取。此種方法提取山楂中熊果酸和齊墩果酸價(jià)廉、無污染且提取率高，是一種綠色萃取技術(shù)，目前尚未見報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是解決現(xiàn)有技術(shù)的不足和缺陷，提供一種前處理簡單，提取溶劑綠色環(huán)保，同時(shí)又能保持有效成分結(jié)構(gòu)與抗氧化活性的適應(yīng)工業(yè)生產(chǎn)的亞臨界水提取山楂中熊果酸和齊墩果酸的方法。
[0006]本發(fā)明提出的一種利用亞臨界水同時(shí)提取山楂中熊果酸和齊墩果酸的方法，具體包括以下步驟:
(1)將山楂干洗凈、烘干、碾碎，過20?80目篩，得到山楂粉末。
[0007](2)將步驟(1)所得的山楂粉末裝入亞臨界水提取裝置中，亞臨界水與山楂末的液固比為10?45mL/g，提取壓力為0.5?2.5MPa，提取溫度為100?160°C，提取時(shí)間為10?50min，重復(fù)抽提1?3次，得到混合液A。
[0008]所述的亞臨界水提取裝置為TGYF-A型不銹鋼高壓提取器。
[0009](3)將混合液A，放入離心機(jī)的離心管中，在轉(zhuǎn)速3000?5000r/min下離心5?15min后，取下離心管，得到上清液A和沉淀物A。
[0010](4)將沉淀物A放入試驗(yàn)瓶中，將無水乙醇與沉淀物A以固液比為15?45mL/g的比例混合，將試驗(yàn)瓶放入振蕩器中，在震動(dòng)頻率1000?4000Hz下震動(dòng)5?15min后，取下試驗(yàn)瓶，得到混合液B。
[0011](5)將步驟(4)所得的混合液B，放入離心機(jī)的離心管中，在轉(zhuǎn)速3000?5000r/min下離心5?15min后，取下離心管，得到上清液B和沉淀物B。
[0012](6)采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)將上清液B濃縮，得到沉淀物C，然后用3?6倍體積的70%?100% (體積分?jǐn)?shù))的乙醇溶解，調(diào)pH值為7?10，過濾后得到上清液C。
[0013](7)將步驟(6)所得上清液C中加入3%?10%的活性炭，回流20?60min，過濾后得到上清液D。
[0014](8)將步驟(7)所得上清液D，調(diào)pH值為4?7，采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)將上清液D濃縮，在4?10°C下靜置2?10h，過濾后得到熊果酸和齊墩果酸粗品。
[0015](9)將步驟(8)所得粗品用2?4倍體積的無水乙醇溶解，上200?300目的硅膠柱層析，用石油醚-丙酮以4: 1?6: 1的體積比做為洗脫液洗脫，合并熊果酸和齊墩果酸的洗脫液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)將洗脫液濃縮至干，得到熊果酸和齊墩果酸產(chǎn)品。
[0016]本發(fā)明提出的一種利用亞臨界水同時(shí)提取山楂中熊果酸和齊墩果酸的方法，得到的產(chǎn)品中熊果酸收率2.53?3.05mg/g，齊墩果酸收率0.71?0.88mg/g。
[0017]本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)如下:
(1)本發(fā)明提出的一種利用亞臨界水同時(shí)提取山楂中熊果酸和齊墩果酸的方法，采用亞臨界水提取山楂中熊果酸和齊墩果酸，提取率明顯高于傳統(tǒng)的熱水浸提法，并且提取時(shí)間短，提取效率尚。
[0018](2)本發(fā)明提出的一種利用亞臨界水同時(shí)提取山楂中熊果酸和齊墩果酸的方法，該工藝流程簡單，生產(chǎn)周期短，綠色無污染，且設(shè)備要求低，易實(shí)現(xiàn)工業(yè)應(yīng)用。
【附圖說明】
[0019]圖1:本發(fā)明提出的一種利用亞臨界水同時(shí)提取山楂中熊果酸和齊墩果酸的方法的工藝流程圖。
【具體實(shí)施方式】
[0020]下面將結(jié)合附圖和實(shí)施例對本發(fā)明做進(jìn)一步的詳細(xì)說明。
[0021]本發(fā)明提出的一種利用亞臨界水提取山楂中熊果酸的方法，如圖1所示，具體包括以下步驟: (1)將山楂干洗凈、烘干、碾碎，過20?80目篩，得到山楂粉末。
[0022](2)將步驟(1)所得的山楂粉末裝入亞臨界水提取裝置中，亞臨界水與山楂末的液固比為10?45mL/g，提取壓力為0.5?2.5MPa，提取溫度為100?160°C，提取時(shí)間為10?50min，重復(fù)抽提1?3次，得到混合液A。
[0023]所述的亞臨界水提取裝置為TGYF-A型不銹鋼高壓提取器。
[0024](3)將混合液A，放入離心機(jī)的離心管中，在轉(zhuǎn)速3000?5000r/min下離心5?15min后，取下離心管，得到上清液A和沉淀物A。
[0025](4)將沉淀物A放入試驗(yàn)瓶中，將無水乙醇與沉淀物A以固液比為15?45mL/g的比例混合，將試驗(yàn)瓶放入振蕩器中，在震動(dòng)頻率1000?4000HZ下震動(dòng)5?15min后，取下試驗(yàn)瓶，得到混合液B。
[0026](5)將步驟(4)所得的混合液B，放入離心機(jī)的離心管中，在轉(zhuǎn)速3000?5000r/min下離心5?15min后，取下離心管，得到上清液B和沉淀物B。
[0027](6)采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)將上清液B濃縮，得到沉淀物C，然后用3?6倍體積的70%?100% (體積分?jǐn)?shù))的乙醇溶解，調(diào)pH值為7?10，過濾后得到上清液C。
[0028](7)將步驟(6)所得上清液C中加入3%?10%的活性炭，回流20?60min，過濾后得到上清液D。
[0029](8)將步驟(7)所得上清液D，調(diào)pH值為4?7，采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)將上清液D濃縮，在4?10°C下靜置2?10h，過濾后得到熊果酸和齊墩果酸粗品。
[0030](9)將步驟(8)所得粗品用2?4倍體積的無水乙醇溶解，上200?300目的硅膠柱層析，用石油醚-丙酮以4: 1?6: 1的體積比做為洗脫液洗脫，合并熊果酸和齊墩果酸的洗脫液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)將洗脫液濃縮至干，得到熊果酸和齊墩果酸產(chǎn)品。
[0031]本發(fā)明提出的一種利用亞臨界水同時(shí)提取山楂中熊果酸和齊墩果酸的方法，得到的產(chǎn)品中熊果酸收率2.53?3.05mg/g，齊墩果酸收率0.71?0.88mg/g。
[0032]實(shí)施 例 1:
本發(fā)明提出的一種利用亞臨界水提取山楂中熊果酸的方法，具體包括以下步驟:
(1)將山楂干洗凈、烘干、碾碎，過60目篩，得到山楂粉末。
[0033](2)將步驟(1)所得的山楂粉末裝入亞臨界水提取裝置中，亞臨界水與山楂末的液固比為20mL/g，提取壓力為1.5MPa，提取溫度為130°C，提取時(shí)間為30min，重復(fù)抽提1次，得到混合液A。
[0034]所述的亞臨界水提取裝置為TGYF-A型不銹鋼高壓提取器。
[0035](3)將混合液A，放入離心機(jī)的離心管中，在轉(zhuǎn)速4000r/min