以包含生長(zhǎng)因子及氨基酸為特征的功能性化妝品組合物的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及包含生長(zhǎng)因子(Growth factors)及氨基酸(Amino acids)的功能性化妝品組合物，尤其涉及作為生長(zhǎng)因子包含表皮生長(zhǎng)因子(Epidermal growth factor)、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(fibroblast growth factor)及血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(Vascularendothelial growth factor)和作為氨基酸包含脯氨酸(proline)、甘氨酸(glycine)及絲氨酸(Serine)的具有優(yōu)秀的改善皮膚皺紋、改善皮膚彈力、皮膚保濕、皮膚再生及皮膚防老化效果的功能性化妝品組合物。
【背景技術(shù)】
[0002]—般而言，人的皮膚隨著年齡的增加，因承擔(dān)皮膚屏障功能的脂質(zhì)層的脂質(zhì)組成和含量的變化，其功能急劇降低，從而降低皮膚的水分含量，導(dǎo)致皮膚干燥，而且，引起各種皮膚病變。
[0003]現(xiàn)代人的過(guò)度的疲勞和壓力或因環(huán)境污染導(dǎo)致的紫外線(xiàn)量的增加和大氣污染等生成反應(yīng)性高的活性氧、自由基及過(guò)氧化物，而皮膚受上述物質(zhì)的影響導(dǎo)致人體成分(蛋白質(zhì)、核酸、細(xì)胞膜脂質(zhì)等)的氧化或變性，而這成為皮膚老化的主要原因。
[0004]尤其是，構(gòu)成皮膚結(jié)合組織的膠原蛋白(collagen)成分等被氧化而喪失其功能，從而使皮膚失去彈力，過(guò)度形成皮膚的皺紋，變成老人狀皮膚。
[0005]因此，為防止及改善皮膚老化，叫元旦被成分的補(bǔ)充是非常重要的，而人們以此為目的進(jìn)行含有膠原蛋白成分的改善皮膚老化用功能性材料的研究。
[0006]另外，生長(zhǎng)因子(growth factor)是結(jié)合于位于細(xì)胞表面的受體(receptor)而刺激細(xì)胞的增殖和分化的蛋白質(zhì)，因其功能非常多，所以刺激各種細(xì)胞的分裂，但在有些時(shí)候只作用于特異的細(xì)胞類(lèi)型。生長(zhǎng)因子是為細(xì)胞增殖的刺激的必需的成分，20年之前已展開(kāi)研究，而結(jié)果表明可調(diào)節(jié)細(xì)胞分化、轉(zhuǎn)移、增殖過(guò)程。
[0007]在上述生長(zhǎng)因子中，表皮生長(zhǎng)因子(Epidermal growth factor)、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(fibroblast growth factor)及血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(Vascular endothelialgrowth factor)等作為改善皮膚老化的功能性材料得到廣泛研究。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008]技術(shù)課題
[0009]本發(fā)明的目的在于提供一種包含為皮膚細(xì)胞的再生的三種生長(zhǎng)因子及膠原蛋白生物合成的氨基酸前驅(qū)體的具有優(yōu)秀的改善皮膚皺紋、改善皮膚彈力、皮膚保濕、皮膚再生及皮膚防老化效果的功能性化妝品組合物及利用上述組合物的功能性化妝品。
[0010]技術(shù)方案
[0011]為達(dá)到上述目的，本發(fā)明提供一種功能性化妝品組合物，其特征在于:作為生長(zhǎng)因子(Growth factors)包含表皮生長(zhǎng)因子(Epidermal growth factor)、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(fibroblast growth factor)及血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(Vascular endothelialgrowth factor)和作為氨基酸(Amino acids)包含脯氨酸(proline)、甘氨酸(glycine)及絲氨酸(Serine)。
[0012]較佳地，上述生長(zhǎng)因子為人類(lèi)生長(zhǎng)因子。
[0013]較佳地，上述表皮生長(zhǎng)因子、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子及血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子在組合物中各以0.01?1.0ppm的濃度被包含。
[0014]較佳地，上述生長(zhǎng)因子被30?200nm大小的納米微脂囊捕集。
[0015]較佳地，上述脯氨酸、甘氨酸及絲氨酸在組合物中各以I?300ppm的濃度被包含。
[0016]較佳地，上述功能性從改善皮膚皺紋、改善皮膚彈力、皮膚保濕、皮膚再生及皮膚防老化構(gòu)成的組中選擇。
[0017]另外，本發(fā)明提供利用本發(fā)明的上述化妝品組合物的功能性化妝品。
[0018]較佳地，上述化妝品從柔軟化妝水、收斂化妝水、營(yíng)養(yǎng)化妝水、發(fā)毛營(yíng)養(yǎng)劑、眼霜、營(yíng)養(yǎng)霜、按摩膏、潔面霜、潔面泡沫、潔面水、粉、精華、精華露及面膜構(gòu)成的組中選擇。
[0019]有益效果
[0020]本發(fā)明的包含三種生長(zhǎng)因子及膠原蛋白生物合成氨基酸前驅(qū)體的功能性化妝品組合物及包含該組合物的功能性化妝品具有優(yōu)秀的改善皮膚皺紋、改善皮膚彈力、皮膚保濕、皮膚再生及皮膚防老化效果。
【附圖說(shuō)明】
[0021]圖1a為在DMEM培養(yǎng)液中人類(lèi)成纖維細(xì)胞之后的相差倒置顯微鏡照片(100倍率)；
[0022]圖1b為在DMEM培養(yǎng)液中培養(yǎng)發(fā)育人類(lèi)成纖維細(xì)胞的相差倒置顯微鏡照片(100倍率)；
[0023]圖1c為在各添加人表皮生長(zhǎng)因子、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子及血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子的DMEM培養(yǎng)液中培養(yǎng)發(fā)育人類(lèi)成纖維細(xì)胞的相差倒置顯微鏡照片(100倍率)；
[0024]圖2為在各添加本發(fā)明的實(shí)施例1的人表皮生長(zhǎng)因子、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子及血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子的DMEM培養(yǎng)液中培養(yǎng)成纖維細(xì)胞并比較調(diào)查細(xì)胞增殖效果的結(jié)果曲線(xiàn)圖；
[0025]圖3為利用ELISA分析法調(diào)查在含有人表皮生長(zhǎng)因子、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子及血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子和作為膠原蛋白前驅(qū)物質(zhì)的脯氨酸(proline)、甘氨酸(glycine)及絲氨酸(Serine)的DMEM培養(yǎng)液中人類(lèi)成纖維細(xì)胞的膠原蛋白的合成量的結(jié)果曲線(xiàn)圖。
【具體實(shí)施方式】
[0026]下面，對(duì)本發(fā)明的進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。
[0027]本發(fā)明的發(fā)明人在進(jìn)行關(guān)于包含對(duì)皮膚細(xì)胞再生有積極意義的三種生長(zhǎng)因子的化妝品組合物的研究的過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，若在上述組合物中添加作為膠原蛋白生物合成的前驅(qū)物質(zhì)的脯氨酸、甘氨酸及絲氨酸，則成纖維細(xì)胞的增殖和膠原蛋白的合成明顯增加，以此完成了將其用作功能性化妝品組合物的發(fā)明。
[0028]因此，本發(fā)明提供一種功能性化妝品組合物，其特征在于:作為生長(zhǎng)因子(Growth factors)包含表皮生長(zhǎng)因子(Epidermal growth factor)、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(fibroblast growth factor)及血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(Vascular endothelial growthfactor)和作為氨基酸(Amino acids)包含脯氨酸(proline)、甘氨酸(glycine)及絲氨酸(Serine)。
[0029]較佳地，上述三種生長(zhǎng)因子為人類(lèi)生長(zhǎng)因子。較佳的具體示例為，上述生長(zhǎng)因子可使用從利用加密人類(lèi)表皮生長(zhǎng)因子(Epidermal growth factor)、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(fibroblast growth factor)及血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(Vascular endothelial growthfactor)的基因進(jìn)行轉(zhuǎn)型的大腸菌分離及提純的生長(zhǎng)因子。
[0030]較佳地，上述表皮生長(zhǎng)因子、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子及血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子在組合物中各以0.01?1.0ppm的濃度被包含。若上述含量低于0.0lppm，則難以獲得所希望的效果，而若上述含量高于1.0ppm,則將引起費(fèi)用問(wèn)題及因過(guò)量使用生長(zhǎng)因子導(dǎo)致的人體安全性問(wèn)題等。
[0031]較佳地，上述生長(zhǎng)因子被30?200nm大小的納米微脂囊捕集。本發(fā)明的生長(zhǎng)因子成分存在皮膚滲透問(wèn)題及長(zhǎng)期放置于室溫下是因失活而降低穩(wěn)定性的問(wèn)題，而這可通過(guò)被納米微脂囊捕集來(lái)解決。較佳的具體示例為，上述納米微脂囊可以卵磷脂為原料并利用微射流機(jī)制造，而本發(fā)明的生長(zhǎng)因子可各自或一同捕集于卵磷脂粒子內(nèi)。納米微脂囊的制造方法是公知的，可采用任意方法。上述納米微脂囊粒子為30?200nm為宜，若小于30nm，貝Ij因皮膚滲透過(guò)快而有可能引起皮膚副作用，而若大于200nm，則因難以滲透于皮膚而無(wú)法獲得使用納米微脂囊的效果。
[0032]較佳地，上述脯氨酸、甘氨酸及絲氨酸在組合物中各以I?300ppm的濃度被包含。本發(fā)明的上述脯氨酸、甘氨酸及絲氨酸是用于合成作為細(xì)胞外基質(zhì)成分的膠原蛋白的氨基酸前驅(qū)體，與一同包含于組合物中的生長(zhǎng)因子一同產(chǎn)生作用而用于細(xì)胞的膠原蛋白的合成。
[0033]上述功能性是指能改善皮膚狀態(tài)的功能，例如有改善皮膚皺紋、改善皮膚彈力、皮膚保濕、皮膚再生及皮膚防老化等，但非限制。
[0034]如在下述實(shí)施例中所記載的那樣，本發(fā)明的上述功能化妝品組合物對(duì)成纖維細(xì)胞的增殖及膠原蛋白的合成具有顯著的效果，因此，可用于改善皮膚狀態(tài)的功能性化妝品中。
[0035]因此，本發(fā)明提供利用本發(fā)明的上述化妝品組合物的功能性化妝品。
[0036]上述化妝品從柔軟化妝水、收斂化妝水、營(yíng)養(yǎng)化妝水、發(fā)毛營(yíng)養(yǎng)劑、眼霜、營(yíng)養(yǎng)霜、按摩膏、潔面霜、潔面泡沫、潔面水、粉、精華、精華露及面膜構(gòu)成的組中選擇，但非限制。
[0037]較佳的具體示例為，本發(fā)明的化妝品組合物可制作成本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域熟知的化妝品，而包含于上述換裝品的成分除作為有效成分的三種生長(zhǎng)因子和膠原蛋白前驅(qū)物質(zhì)之外，還可包括化妝品中通常使用的成分。例如，可包含其他有效成分、穩(wěn)定劑、溶解劑、維生素、顏料、香料等通常的輔助劑及載體。
[0038]較佳的具體示例為，本發(fā)明的化妝品可制作成本領(lǐng)域通常制作的任何劑型，例如溶液、混懸液、乳池液、膏、凝膠、霜、乳液、粉、香阜、潔面霜、油、粉末粉底、乳池液粉底、蠟狀粉底、噴霧劑等。例如，在本發(fā)明的劑型為霜、乳液或凝膠時(shí)，可混合適當(dāng)?shù)挠偷扔蜖畛煞?、表面活性劑、水、增粘劑、穩(wěn)定劑等制作成W/0或0/W形式的乳劑完成制作，而這樣的制造方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的。
[0039]下面，通過(guò)實(shí)驗(yàn)例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行更詳細(xì)的說(shuō)明。
[0040][實(shí)施例]
[0041]實(shí)施例1
[0042]在本實(shí)施例1中，在細(xì)胞培養(yǎng)液中添加人類(lèi)生長(zhǎng)因子(EGF、FGF、VEGF)之后，觀(guān)察對(duì)皮膚成纖維細(xì)胞的增殖促進(jìn)效果。
[0043](I)從人體組織分離成纖維細(xì)胞
[0044]取人腹部皮膚組織放入經(jīng)滅菌的1cm beaker中，并利用相同皮膚(I:1)的磷酸化緩沖溶液(D-PBS)清洗。在Clean bench中投入20ml的D-PBS，用一只手利用forces抓住組織并利用手術(shù)刀將皮膚組織切割成2_以下的大小?；厥涨懈畹慕M織和溶液并以20ml為一份放入多個(gè)50ml離心分離用conical tubes。添加相同量的0.15% collagenasetype-Ι溶液(Invitrogen)并在37°C下反應(yīng)1-2小時(shí)。用D-PBS清洗之后，在400xg下離心分離5分鐘