用于具有擴(kuò)展的動(dòng)態(tài)量程的測(cè)試條的系統(tǒng)和方法
【專(zhuān)利說(shuō)明】用于具有擴(kuò)展的動(dòng)態(tài)量程的測(cè)試條的系統(tǒng)和方法
【背景技術(shù)】
[0001] 有許多用于總膽固醇、皿L和甘油S醋的測(cè)定法已被批準(zhǔn)用于上述分析物的定量。 例如在CobasIntegra?400+上進(jìn)行的羅氏總膽固醇測(cè)定法的動(dòng)態(tài)量程為從~4-800mg/ 化。讀數(shù)高于SOOmgML的樣品按照1 : 1到1 : 10被稀釋于機(jī)器板上并重新分析，從而 進(jìn)行定量。運(yùn)些測(cè)定法通常使用血清或血漿作為樣品類(lèi)型，在昂貴的臨床化學(xué)分析儀上進(jìn) 行測(cè)試，并且需要經(jīng)過(guò)培訓(xùn)認(rèn)證的專(zhuān)業(yè)人員來(lái)操作。
[0002] 在即時(shí)檢測(cè)（point-of-care)環(huán)境中，膽固醇、皿L膽固醇或甘油S醋分析通過(guò) 使用Cardio化ek?測(cè)試條而被快速定量（~2分鐘）。存在其他的即時(shí)檢測(cè)系統(tǒng)，例如 化Olestech的膽固醇、皿L和甘油S醋測(cè)試，它們也可W在10分鐘內(nèi)獲得結(jié)果。然而，運(yùn)兩 種類(lèi)型測(cè)試的局限性在于，動(dòng)態(tài)量程無(wú)法覆蓋非常高分析物濃度的樣品，并且因此要么由 于稀釋液的不可用性導(dǎo)致不能運(yùn)行，要么使用未經(jīng)批準(zhǔn)的稀釋液重新運(yùn)行從而給出可疑的 結(jié)果。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 擴(kuò)展的量程的測(cè)試條的一個(gè)實(shí)施例包括一個(gè)簡(jiǎn)單系統(tǒng)，其中，最終用戶(hù)可W采用 單滴全血確定處于高濃度的分析物的濃度。單滴血液擴(kuò)散穿過(guò)擴(kuò)散層并進(jìn)入多試劑疊加 部。測(cè)試條的多試劑疊加部可W通過(guò)添加過(guò)氧化物調(diào)節(jié)劑而被構(gòu)造成對(duì)不同量程進(jìn)行測(cè) 試。通過(guò)讀取產(chǎn)生的比色響應(yīng)，多試劑疊加部的可W被同時(shí)測(cè)試。從試劑疊加部的最低量 程到最高量程來(lái)操作，第一個(gè)低于其最大量程的試劑疊加部被認(rèn)為是產(chǎn)生與樣品中分析物 的實(shí)際量有關(guān)的比色響應(yīng)的試劑疊加部。
[0004] 在一個(gè)實(shí)施例中，一種改變分析物測(cè)試條靈敏度的方法包括提供分析物測(cè)試條， 該測(cè)試條具有用于分析物的第一動(dòng)態(tài)量程和第一靈敏度和精確度。該方法還包括用一定量 的過(guò)氧化物調(diào)節(jié)劑處理該分析物測(cè)試條，其中該處理導(dǎo)致該分析物測(cè)試條具有對(duì)應(yīng)于所添 加的過(guò)氧化物調(diào)節(jié)劑的量的第二動(dòng)態(tài)量程并具有第二靈敏度和精確度，該第二靈敏度和精 確度與第一靈敏度和精確度相當(dāng)。任選地，該過(guò)氧化物調(diào)節(jié)劑是谷脫甘膚。在一個(gè)構(gòu)造中， 分析物是膽固醇。在一個(gè)可選方案中，分析物測(cè)試條包括4-氨基安替比林（4-AA巧和N， N-二取代苯胺衍生物，其產(chǎn)生比色響應(yīng)。在另一個(gè)可選方案中，谷脫甘膚與過(guò)氧化氨反應(yīng)從 而產(chǎn)生無(wú)色產(chǎn)物谷脫甘膚二硫化物。
[0005] 在一個(gè)實(shí)施例中，一種具有針對(duì)分析物的修飾靈敏度的測(cè)試條包括反應(yīng)層，該反 應(yīng)層提供具有用于分析物的第一動(dòng)態(tài)量程W及第一靈敏度和精確度。該測(cè)試條還包括一定 量的過(guò)氧化物調(diào)節(jié)劑，該過(guò)氧化物調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)該反應(yīng)層W具有對(duì)應(yīng)于所添加的過(guò)氧化物調(diào) 節(jié)劑的量的第二動(dòng)態(tài)量程，W及第二靈敏度和精確度，該第二靈敏度和精確度與第一靈敏 度和精確度相當(dāng)。任選地，該過(guò)氧化物調(diào)節(jié)劑是谷脫甘膚。在一個(gè)構(gòu)造中，分析物是膽固 醇。任選地，反應(yīng)層包括4-氨基安替比林（4-AA巧和N，N-二取代苯胺衍生物，其產(chǎn)生比色 響應(yīng)。在一個(gè)可選方案中，當(dāng)全血被加到測(cè)試條時(shí)，谷脫甘膚與過(guò)氧化氨反應(yīng)從而產(chǎn)生無(wú)色 產(chǎn)物谷脫甘膚二硫化物。
[0006] 在一個(gè)實(shí)施例中，一種多量程測(cè)試條包括擴(kuò)散層。該多量程測(cè)試條還包括第一分 析物疊加部和第二分析物疊加部，該第一和第二分析物疊加部與擴(kuò)散層流體連通，該第一 和第二分析物疊加部具有用于測(cè)試分析物的層和試劑。關(guān)于第一和第二分析物疊加部的用 于測(cè)試分析物的層和試劑是相同的。第二疊加部包括過(guò)氧化物調(diào)節(jié)劑；第一疊加部具有關(guān) 于分析物的第一動(dòng)態(tài)量程W及第一靈敏度和精確度；并且，第二疊加部具有對(duì)應(yīng)于所添加 的第一量的過(guò)氧化物調(diào)節(jié)劑的第二動(dòng)態(tài)量程W及第二靈敏度和精確度，該第二靈敏度和精 確度與第一靈敏度和精確度相當(dāng)。任選地，該過(guò)氧化物調(diào)節(jié)劑是谷脫甘膚。在一個(gè)可選方案 中，分析物是膽固醇。作為選擇，用于測(cè)試分析物的層和試劑包括4-氨基安替比林（4-AAP) 和N，N-二取代苯胺衍生物，其產(chǎn)生比色響應(yīng)。任選地，當(dāng)全血被加到測(cè)試條時(shí)，谷脫甘膚與 過(guò)氧化氨反應(yīng)從而生成谷脫甘膚二硫化物。在另一個(gè)可選方案中，第一量程是100-400mg/ 化，并且第二量程是400-800mg/化。在一個(gè)實(shí)施例中，該多量程測(cè)試條還包括第S分析物疊 加部，該第=分析物疊加部與擴(kuò)散層流體連通。該第=分析物疊加部具有用于測(cè)試分析物 的層和試劑，關(guān)于第一、第二和第=疊加部的用于測(cè)試分析物的層和試劑是相同的。第=疊 加部包括過(guò)氧化物調(diào)節(jié)劑，并且，第=疊加部具有對(duì)應(yīng)于所添加的第二量的過(guò)氧化物調(diào)節(jié) 劑的第=動(dòng)態(tài)量程W及第=靈敏度和精確度，該第=靈敏度和精確度約等于第一靈敏度和 精確度。任選地，該第S量程是800-1400mg/化。
[0007] 在一個(gè)實(shí)施例中，一種使用被構(gòu)造用于在較低量程處測(cè)試的分析物測(cè)試條來(lái)測(cè)試 處于較高量程的分析物的方法，包括添加一定量的過(guò)氧化物調(diào)節(jié)劑到該分析物測(cè)試條。該 方法還包括將未稀釋的全血樣品加到該測(cè)試條，其中過(guò)氧化物調(diào)節(jié)劑的添加導(dǎo)致較高量 程。任選地，沒(méi)有過(guò)氧化物調(diào)節(jié)劑的分析物測(cè)試條的靈敏度和精確度約等于具有過(guò)氧化物 調(diào)節(jié)劑的分析物測(cè)試條的靈敏度和精確度。作為選擇，過(guò)氧化物調(diào)節(jié)劑是谷脫甘膚。在一 個(gè)可選方案中，過(guò)氧化物調(diào)節(jié)劑不會(huì)干擾分析物測(cè)試條的比色試劑。
【附圖說(shuō)明】
[0008] 下面參照附圖詳細(xì)描述了說(shuō)明性的實(shí)施例。
[0009] 圖1示出使用對(duì)苯二酪用于顯色的反應(yīng)路徑的實(shí)施例；
[0010] 圖2示出使用谷脫甘膚用于顯色的反應(yīng)路徑的實(shí)施例；
[0011] 圖3示出采用動(dòng)態(tài)量程的測(cè)試條的實(shí)施例； 陽(yáng)01引圖4示出圖3的測(cè)試條的窗口；
[0013] 圖5示出K/S對(duì)于膽固醇濃度之間的顯著劑量響應(yīng)圖，其使用采用了動(dòng)態(tài)量程的 測(cè)試條的實(shí)施例；
[0014] 圖6示出關(guān)于所采用的所有四個(gè)水平的G甜的K/S對(duì)于膽固醇濃度之間的顯著劑 量響應(yīng)圖，其使用采用了動(dòng)態(tài)量程的測(cè)試條的實(shí)施例；
[0015]圖7示出良好相關(guān)性的線(xiàn)圖，其指示在較高膽固醇值時(shí)的良好精確度，其使用采 用了動(dòng)態(tài)量程的測(cè)試條的實(shí)施例；
[0016] 圖8示出曲線(xiàn)圖，該曲線(xiàn)圖顯示當(dāng)采用動(dòng)態(tài)量程的測(cè)試條的實(shí)施例被施加W全血 中增大濃度的膽固醇時(shí)，動(dòng)力學(xué)中成比例的增加被觀察到；W及
[0017] 圖9示出關(guān)于所采用的所有四個(gè)水平的G甜的K/S對(duì)于膽固醇濃度之間的顯著劑 量響應(yīng)，其使用采用了動(dòng)態(tài)量程的測(cè)試條的實(shí)施例。
【具體實(shí)施方式】
[0018] 本文所述的是具有擴(kuò)展的動(dòng)態(tài)量程的測(cè)試條的實(shí)施例，W及使用它們和制造它們 的方法。
[0019] 用于測(cè)試人的血液有許多不同的分析物測(cè)試條是可用的，它們具有特定的量程。 聚合物技術(shù)系統(tǒng)有限公司（PTS)目前提供具有動(dòng)態(tài)量程為100-400mgAlL的膽固醇測(cè)試。它 采用4-氨基安替比林（4-AA巧和N，N-二取代苯胺衍生物來(lái)產(chǎn)生比色響應(yīng)（參見(jiàn)示意圖1 的反應(yīng)路線(xiàn)a)。通過(guò)在膽固醇反應(yīng)膜中使用過(guò)氧化物清除劑類(lèi)的對(duì)苯二酪，運(yùn)樣一個(gè)測(cè)試 條的構(gòu)造可W被修改W獲得更高濃度膽固醇的靈敏度和精確度。由于一些原因，運(yùn)可能不 是優(yōu)選的方式。對(duì)苯二酪在過(guò)氧化氨的存在下與4-氨基安替比林（4-AA巧反應(yīng)從而產(chǎn)生 無(wú)色化合物（參見(jiàn)示意圖I的反應(yīng)路線(xiàn)b)。該反應(yīng)比4-AAP和N，N-二取代苯胺衍生物的 禪合要更快。運(yùn)被認(rèn)為是次優(yōu)的，但可能是有效的途徑。
[0020] 使用對(duì)苯二酪作為清除劑的一個(gè)局限是副反應(yīng)，該副反應(yīng)產(chǎn)生導(dǎo)致不完善的顯色 并且因此導(dǎo)致不準(zhǔn)確。此外，對(duì)苯二酪與4-AAP反應(yīng)，而4-AAP是用于有色產(chǎn)物的起始原料， 由此減少了 4-AAP用于反應(yīng)的可用性。運(yùn)導(dǎo)致了準(zhǔn)確度的損失（歸因于勒夏特列原理），并 且也導(dǎo)致測(cè)試條隨時(shí)間的不穩(wěn)定性。
[0021] 過(guò)氧化氨清除劑的一個(gè)替代方案是使用還原型谷脫甘膚（GSH)(稱(chēng)為過(guò)氧化物調(diào) 節(jié)劑）。該實(shí)體與過(guò)氧化氨反應(yīng)從而形成被稱(chēng)為谷脫甘膚二硫化物（GSSG)的二聚體種類(lèi)。 G甜的一個(gè)重要特征是它不與4-氨基安替比林（4-AA巧反應(yīng)（參見(jiàn)圖2中所示的示意圖 II)，留下完整的4-氨基安替比林與N，N-二取代苯胺衍生物反應(yīng)。G甜的二聚反應(yīng)似乎比 圖1中所示的示意圖的"路線(xiàn)a"中所示的4-AAP和N，N-二取代苯胺衍生物的氧化禪合更 快。
[0022] 該系統(tǒng)的優(yōu)點(diǎn)是，GSH現(xiàn)在可W被用作調(diào)節(jié)膽固醇反應(yīng)膜的靈敏度的一個(gè)變量。 通過(guò)滴定測(cè)量膽固醇制劑中的GSH的最佳量，過(guò)氧化氨清除的程度可W實(shí)現(xiàn)。處于較高濃 度的G甜所觀察到的百分反射率然后可W被索引到選擇的膽固醇濃度。運(yùn)允許設(shè)置動(dòng)態(tài)量 程，該動(dòng)態(tài)量程可W被設(shè)置到較高值，該較高值在即時(shí)檢測(cè)環(huán)境設(shè)置中通常不會(huì)被觀察到。
[0023] 例如，可W創(chuàng)建=個(gè)不同的膽固醇反應(yīng)膜，其中，第一膜的動(dòng)態(tài)量程可W是從 100-400mg/化，第二個(gè)是從400-800mg/化，并且第S個(gè)是從800-1400mg/化，如圖3所示。圖 3示出了測(cè)試條300的一個(gè)實(shí)施例。測(cè)試條300包括基座310和蓋315,它們構(gòu)成了該測(cè)試 條的固定部分。測(cè)試條300包括多個(gè)層320、330、335，它們可^執(zhí)行與被測(cè)定的分析物相關(guān) 的不同的分離和處理步驟。在一些構(gòu)造中，層320是擴(kuò)散層；層330是紅血細(xì)胞分離層；并 且，層335是第二血液分離層、空白層或分析物特異性層。
[0024] 根據(jù)本公開(kāi)，運(yùn)些層的許多不同構(gòu)造是本領(lǐng)域技術(shù)人員可W想到的。各種膜可W 被用于擴(kuò)散層320,包括但不限于化tex。層330和335可W是血液分罔和束^血液分罔 層，包括分別具有地aselous尋常型凝集素和切tosep(0. 15%硫酸葡聚糖/150mMMgCl)的 D-23Brosilicate玻璃纖維。作為選擇，擴(kuò)散層320可W是聚酸諷（PES) 18/13TWHy地il。 作為選擇，第二分離層335可W是LDL或皿L或任何其他分析物選擇性層。在一個(gè)構(gòu)造中， 第二分離層335可W是皿L分級(jí)層，包括去離子水800. 00血，硫酸儀5. 00克，憐鶴酸45. 00 克，W及山