含有接觸途徑抑制添加劑的血液采集裝置的制造方法
【專利說明】含有接觸途徑抑制添加劑的血液采集裝置
[0001] 相關(guān)申請的交叉參考
[0002] 該申請要求2013年2月1日提交的美國臨時(shí)專利申請?zhí)?1/759, 742的權(quán)益。其 公開內(nèi)容在此通過引用并入本文。 陽00引發(fā)明背景
[0004] 眾所周知的是當(dāng)被暴露在可活化最終形成纖維蛋白的凝結(jié)途徑的條件下時(shí)，血液 和血漿將凝固。通過凝血酶的活性，形成纖維蛋白本身，因此它是凝血酶生成的結(jié)果。凝血 酶生成由兩個(gè)酶促級聯(lián)引發(fā)，運(yùn)兩個(gè)酶促級聯(lián)設(shè)及幾個(gè)不同的因子（膚酶），它們最終匯集 成產(chǎn)生活性凝血酶的常見途徑。導(dǎo)致凝血酶形成的兩個(gè)級聯(lián)是組織因子燈巧凝結(jié)途徑（它 也被稱為外源性途徑）和接觸凝結(jié)途徑（它也被稱為內(nèi)源性途徑）。通過循環(huán)因子Vn暴露 于與血管損傷（靜脈穿刺）一起出現(xiàn)的內(nèi)皮和內(nèi)皮下表達(dá)的組織因子燈巧，組織因子燈巧 途徑被引發(fā)。隨后從因子VII到因子Vila的轉(zhuǎn)化導(dǎo)致TF-VIIa復(fù)合體，TF-VIIa復(fù)合體直 接促進(jìn)因子X轉(zhuǎn)化為因子Xa(因子X的活化形式），并且通過因子IX轉(zhuǎn)化為因子IXa(活化 的IXa)，然后將X轉(zhuǎn)化為Xa。因子Xa的產(chǎn)生促進(jìn)了凝血酶原轉(zhuǎn)化為凝血酶。然后凝血酶 可將纖維蛋白原轉(zhuǎn)化為纖維蛋白。 陽0化]凝血酶也通過接觸或內(nèi)源性凝結(jié)途徑來生成。當(dāng)血液與外源表面，尤其帶負(fù)電荷 的表面接觸時(shí)，接觸或內(nèi)源性凝結(jié)途徑出現(xiàn)。體內(nèi)接觸途徑活化劑的例子包括玻璃、二氧化 娃、高嶺±和延伸程度（extent)較小的塑料。包含因子XII、因子XI、高分子量激膚原（HMK) 和前激膚釋放酶的酶總體（ensemble)引發(fā)接觸途徑，它們組織在活化表面上，導(dǎo)致形成因 子XIIa(因子XII的活化形式）。激膚釋放酶，作為前激膚釋放酶的活化形式，可通過蛋白 水解生成因子XIIa,因子XIIa進(jìn)而可通過蛋白水解將前激膚釋放酶轉(zhuǎn)化為激膚釋放酶。 運(yùn)些相互作用的凈影響是通過因子XIIa在血液中的擴(kuò)增與蓄積和隨后因子XI轉(zhuǎn)化為因子 XIa,引發(fā)接觸凝結(jié)途徑。因子Xia然后催化因子IX轉(zhuǎn)化為因子IXa。從那開始，接觸途徑 和組織因子燈巧途徑遵循上述相同的過程（常見途徑）。
[0006] 在血液采集的過程中，血液暴露于外源表面例如套管、管線和血液容器裝置壁 (例如真空的血液采集管）。運(yùn)種接觸活化了內(nèi)源性（接觸）凝結(jié)途徑，運(yùn)如上所述導(dǎo)致因 子Xn轉(zhuǎn)化為活性因子XII狂IIa)。如果任其發(fā)展，F(xiàn)XIIa會將FXI轉(zhuǎn)化為FXIa,FXIa然后 會將FIX轉(zhuǎn)化為FIXa。該級聯(lián)最終導(dǎo)致活性凝血酶生成和纖維蛋白凝塊形成。
[0007] 當(dāng)血液樣品被采集時(shí)，期望抑制凝塊的形成。將馨合劑如巧樣酸鋼添加至血液采 集管W幫助減少凝血酶生成和纖維蛋白凝塊形成。隨著血液與巧樣酸鋼混合，因子XIa、因 子IXa和因子Xa的巧依賴性活性被阻抑，阻止凝血酶生成，因此抑制凝塊形成。
[0008] 通過接觸凝結(jié)途徑阻止凝血酶生成的其它方法在本領(lǐng)域被熟知。在運(yùn)些方法中的 是抑制因子XIIa活性，運(yùn)直接抑制因子XIIa介導(dǎo)的因子XI至因子XIa的轉(zhuǎn)化。玉米膜蛋 白酶抑制劑（CTI)是一種本領(lǐng)域中已知的抑制劑，它抑制因子XIIa介導(dǎo)的因子XI至因子 XIa的轉(zhuǎn)化。但是，使用CTI通過接觸凝結(jié)途徑抑制凝血酶生成存在幾個(gè)問題。一個(gè)運(yùn)樣 的問題是累積的因子XIIa通過激膚釋放酶-激膚系統(tǒng)的參與的擴(kuò)增。另一個(gè)問題是包含 CTI的血液采集管不可W被滅菌，因此不能與某些臨床應(yīng)用結(jié)合使用。
[0009] 兩種用于監(jiān)測凝血酶生成和凝血的應(yīng)用是血栓彈力描記術(shù)（TEG)和自動校正凝 血酶曲線法（CAT)分析。TEG是一個(gè)用于外科手術(shù)和麻醉學(xué)中的重要分析，它評價(jià)血小板功 能、凝塊強(qiáng)度和纖維蛋白溶解，其它測試?yán)鏰PPT則不能評價(jià)運(yùn)些。通過獲取患者的血液 并且至45°的角度緩緩轉(zhuǎn)動（例如每分鐘6次），TEG測量凝結(jié)。置于用于TEG的采 集設(shè)備中的細(xì)線測量通過凝血酶生成的凝塊形成。凝血酶通過接觸途徑生成可使TEG結(jié)果 出現(xiàn)偏差，運(yùn)取決于測試中所使用的器皿或容器。
[0010] CAT分析是用于研究帶有凝結(jié)性過低或過高表型的患者的一種工具。在運(yùn)個(gè)分析 中，凝血酶生成由組織因子燈巧、憐脂和氯化巧（CaClz)誘導(dǎo)。因?yàn)樵摲治鋈Q于通過TF 導(dǎo)致的凝血酶形成，基于接觸途徑的凝血酶生成將使CAT分析結(jié)果出現(xiàn)失真。 1] 因此，仍需要運(yùn)樣的組合物和方法：其選擇性抑制用于TEG和CAT分析的采集血液 樣品中接觸凝結(jié)途徑的凝血酶生成。優(yōu)選地，運(yùn)些組合物和方法不依賴于用于血液采集測 試的實(shí)驗(yàn)室器皿或容器。 陽〇1引發(fā)明概述
[0013] 本發(fā)明的一個(gè)方面設(shè)及采集血液（例如全血樣品）或含有血液組分的組合物（例 如血漿）的裝置，該裝置具有第一端和第二端和至少一個(gè)內(nèi)壁，該內(nèi)壁限定了接受血液或 其組分的儲液器部分。儲液器含添加劑或添加劑的組合，其每一個(gè)W有效使血液或血液組 分中接觸凝結(jié)途徑活化介導(dǎo)的凝血酶生成穩(wěn)定的量抑制接觸凝結(jié)途徑活化。運(yùn)些添加劑被 稱為接觸途徑抑制劑，因?yàn)樗鼈円种茖?dǎo)致凝血酶生成的接觸凝血級聯(lián)途徑。盡管申請人不 想拘泥于特定的原理，但是申請人認(rèn)為本文中考慮的添加劑阻滯因子XIa(FXIa)活性、因 子XIIa活性或激膚釋放酶活性或其任意組合中的至少一種。阻滯FXIa活性具有非常強(qiáng)的 效果，而無需同時(shí)的FXII抑制。在一個(gè)實(shí)施方式中，接觸途徑抑制劑組合巧樣酸鋼真空血 液采集管的使用顯著地延長了運(yùn)些管中采集的血液的凝血時(shí)間。在一些實(shí)施方式中，采集 裝置裝有用針可穿透的封閉物（例如用于將血液供應(yīng)到儲液器），并且它是無菌和真空的。
[0014] 本發(fā)明的另一個(gè)方面設(shè)及采集血液或含有血液組分的組合物（例如血漿）的方 法，其中至凝血的接觸途徑被抑制，該方法包括將血液或組合物引入運(yùn)樣的裝置，該裝置具 有第一端和第二端和至少一個(gè)限定用于接受血液或組合物的儲液器部分的內(nèi)壁，W及布置 于儲液器中的除巧樣酸鹽之外的接觸途徑抑制添加劑（本文中的添加劑）。在某些實(shí)施方 式中，添加劑為激膚釋放酶抑制劑。在其它實(shí)施方式中，添加劑包括下列中的至少一種：i) 因子XI抑制劑，它是例如并且不限于抗人FXI抗體；U)因子XII抑制劑訊iU)激膚釋 放酶抑制劑；和iv)i、ii和iii的任意組合。因子XII抑制劑的例子包括但不限于玉米膜 蛋白酶抑制劑。激膚釋放酶抑制劑的例子包括但不限于抑膚酶。W有效阻抑通過接觸凝 結(jié)途徑的凝血酶形成的量提供抑膚酶。運(yùn)些量超過當(dāng)在采集和保存血液的管中用作廣義堿 基絲氨酸蛋白酶抑制劑時(shí)存在的抑膚酶量。運(yùn)些管典型地含有圧DTA]和本文描述的管中 不存在的其它穩(wěn)定劑。繼采集和儲藏之后，血液或組合物可被利用，例如用于診斷分析或治 療目的。激膚釋放酶抑制劑（例如抑膚酶）的濃度是樣品（例如血液）中的約500激膚釋 放酶劑單位化IU)至約5000KIU/mL。如果存在，抗人因子FXI抗體的濃度是樣品（例如血 液）中的約2Jig/mL至約14Jig/mL。
[0015] 本發(fā)明的進(jìn)一步方面設(shè)及包括至少一個(gè)運(yùn)樣的裝置（并且優(yōu)選多個(gè)運(yùn)樣的裝置） 的包裝或套件。
[0016] 附圖簡述
[0017] 圖1是其中放置本發(fā)明的添加劑的常規(guī)真空采集管的示意圖。
[001引圖2A是比較由不同材料制成的管的巧樣酸化天然凝血時(shí)間的表格。
[0019] 圖2B是圖2A所含有的數(shù)據(jù)的圖表。
[0020] 圖3A是比較對于來自不同材料的管的巧樣酸化血漿樣品在TF存在和缺乏的情況 下凝血酶生成分析性能的圖表。
[0021] 圖3B是凝血酶生成曲線的圖表，圖3A中的數(shù)值來自該圖表。
[0022] 圖4A是一組顯示使用抑膚酶對因子XIIa上游的接觸凝結(jié)途徑的劑量依賴性抑 制。
[0023] 圖4B是顯示使用自動校正凝血酶曲線法（CAT)分析的在沒有組織因子師）情況 下的凝血酶生成曲線的圖表，其圖示來自玻璃和塑料制品的接觸途徑貢獻(xiàn)的嚴(yán)重程度，W 及本文描述的添加劑提供的減緩。
[0024] 圖5A是顯示單克隆抗FXI抗體延長玻璃巧樣酸鹽管中溫育的樣品的巧樣酸化天 然全血凝血時(shí)間的劑量依賴性能力的圖表。
[0025] 圖5B是顯示在缺乏TF的情況下抗因子XI抗體對因子XIIa上游的接觸途徑活化 減緩的圖表。
[00%] 圖6是顯示用抑膚酶和抗因子XI抗體對接觸凝結(jié)途徑選擇性抑制，同時(shí)保留組織 因子驅(qū)動的凝血酶生成和凝血酶活性的圖。
[0027]圖7是顯示用抑膚酶和利用抗因子XI抗體的因子XI抑制對激膚釋放酶選擇性抑 制提供與利用CTI抑制因子XIIa的接觸途徑減緩等同的接觸途徑減緩的圖表。 陽0測詳細(xì)描述
[0029]廣義上，本發(fā)明的采集裝置可包含任意采集裝置，包括管，例如試管或離屯、管；封 閉系統(tǒng)血液采集裝置，例如采集袋；注射器，尤其預(yù)填充注射器；導(dǎo)管；微量滴定器和其它 多孔板；陣列；管系；實(shí)驗(yàn)室器皿，例如燒瓶、旋轉(zhuǎn)瓶、滾瓶、小瓶、顯微鏡載玻片、顯微鏡載 玻片組裝件、蓋玻片、薄膜和多孔基底和組裝件；移液管和移液管頭；組織和其它生物樣品 采集容器；和其它適用于保