一種含當(dāng)歸的植物組合物提取方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及中藥制劑技術(shù)領(lǐng)域，具體設(shè)及一種含當(dāng)歸的植物組合物提取方法及應(yīng) 用。
【背景技術(shù)】
[0002] 含當(dāng)歸的植物組合物由當(dāng)歸lOOg，小白花蘇80g、附地菜50g、小魚仙草150g作 為原料藥制成，目前的提取方法是加水煎煮二次，每次2-3小時(shí)，合并煎液，濾過，濃縮成稠 膏，制粒，干燥，壓制成1000片，包糖衣，即得，能活血化疲、清熱滲濕。
[0003] 現(xiàn)有技術(shù)中，尚未有含當(dāng)歸的植物組合物在提取制備方面采用微波技術(shù)的報(bào)道， 而采用水煎煮的方法，工藝粗糖、落后，雜質(zhì)多，導(dǎo)致患者用量過大，不方便服用，嚴(yán)重影響 了本品在臨床上應(yīng)用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 發(fā)明目的：為了解決上述問題，本發(fā)明的目的在于提供一種含當(dāng)歸的植物組合物 提取方法。 陽〇化]本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供一種含當(dāng)歸的植物組合物在制備抑制小鼠結(jié)腸癌C26細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用。
[0006] 技術(shù)方案：本發(fā)明的目的是通過如下的方案實(shí)現(xiàn)的： 陽007]-種含當(dāng)歸的植物組合物提取方法，植物組合物由當(dāng)歸lOOg，小白花蘇80g、附地 菜50g、小魚仙草150g作為原料藥制成，制備方法由下列步驟組成：取上述原料藥，粉碎，加 入化的70%乙醇，投入微波萃取裝置中進(jìn)行微波萃取，萃取功率為400-600W，萃取2次，每 次4-8分鐘，合并萃取液，濃縮，加到D101大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱 體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加常規(guī)輔料制備成片劑、膠囊或顆 粒劑。
[0008] 上述一種含當(dāng)歸的植物組合物提取方法，制備方法中微波萃取功率為500W，每次 萃取6分鐘。
[0009] 一種含當(dāng)歸的植物組合物在制備抑制小鼠結(jié)腸癌C26細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用，含 當(dāng)歸的植物組合物由當(dāng)歸lOOg，小白花蘇80g、附地菜50g、小魚仙草150g作為原料藥制成， 制備方法由下列步驟組成：取上述原料藥，粉碎，加入化的70 %乙醇，投入微波萃取裝置 中進(jìn)行微波萃取，萃取功率為400-600W，萃取2次，每次4-8分鐘，合并萃取液，濃縮，加到 D101大孔吸附樹脂柱上，50 %乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮并 干燥，得微波提取物，加常規(guī)輔料制備成片劑、膠囊或顆粒劑。
[0010] 上述一種含當(dāng)歸的植物組合物在制備抑制小鼠結(jié)腸癌C26細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng) 用，制備方法中所述微波萃取功率為500W，每次萃取6分鐘。
[0011]現(xiàn)有技術(shù)中，含當(dāng)歸的植物組合物每片〇.4g，每次4片，一日3次，采用本發(fā)明制備 成的含當(dāng)歸的植物組合物每片0. 4g，但含有的藥材量是原來的2倍，因此每次僅需2片，一 日服用3次，在具有更多活性成分的條件下大大減少了服用量。
【具體實(shí)施方式】
[0012]W下通過實(shí)施例形式，對(duì)本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)一步的詳細(xì)說明，但不應(yīng)將此 理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于W下的實(shí)例，凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均 屬于本發(fā)明的范圍。 陽〇1引實(shí)施例1
[0014]取當(dāng)歸lOOg，小白花蘇80g、附地菜50g、小魚仙草150g，粉碎，加入化的70 %乙 醇，投入微波萃取裝置中進(jìn)行微波萃取，萃取功率為400-600W，萃取2次，每次4-8分鐘，合 并萃取液，濃縮，加到D101大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減 壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加常規(guī)輔料制備成片劑，每片0. 4g。 陽〇1引 實(shí)施例2
[0016] 取當(dāng)歸lOOg，小白花蘇80g、附地菜50g、小魚仙草150g，粉碎，加入化的70%乙 醇，投入微波萃取裝置中進(jìn)行微波萃取，萃取功率為400-600W，萃取2次，每次4-8分鐘，合 并萃取液，濃縮，加到D101大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減 壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加常規(guī)輔料制備成膠囊。
[0017] 實(shí)施例3 陽0化]取當(dāng)歸lOOg，小白花蘇80g、附地菜50g、小魚仙草150g，粉碎，加入化的70 %乙 醇，投入微波萃取裝置中進(jìn)行微波萃取，萃取功率為400-600W，萃取2次，每次4-8分鐘，合 并萃取液，濃縮，加到D101大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減 壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加常規(guī)輔料制備成顆粒劑。
[0019]小白花蘇為玄參科植物大獨(dú)腳金的全草。清熱滲濕，利尿。治膀脫炎，尿道炎，腎 炎，黃痘型肝炎，肝硬化腹水。
[0020] 附地菜為紫草科附地菜屬植物附地菜Trigonotispedun州laris(Trev. )Benth.,W全草入藥。溫中健胃，消腫止痛，止血。用于胃痛，吐酸，吐血；外用治跌打損傷，骨折。
[0021] 小魚仙草，拉下學(xué)名為Mosladianthera(Buch.-Ham.exRoxb. )Maxim.，是唇形科 石莽寧屬一年生草本植物。莖高至1米，呈四轅形。葉卵狀披針形或菱伏披針形，總狀花序 生于主莖及分枝的頂部，小堅(jiān)果灰褐色，近球形?；?、果期在5-11月。W全草入藥，夏秋采 收，洗凈，鮮用或曬干，具有多種醫(yī)藥價(jià)值。桂風(fēng)發(fā)表，利濕止癢。用于感冒頭痛，扁桃體炎， 中暑，潰瘍病，頻疾；外用治濕疹，萍子，皮膚痊癢，瘡巧，娛蟻咬傷。取半陰干的全草燒煙可 W熏蚊。本發(fā)明W全草入藥。其余藥材為藥典品種。
[0022] 實(shí)施例4 :含當(dāng)歸的植物組合物抑制小鼠結(jié)腸癌C26細(xì)胞增殖的實(shí)驗(yàn)研究資料 陽〇2引 1實(shí)驗(yàn)材料
[0024] 1. 1實(shí)驗(yàn)用細(xì)胞株 陽0巧]小鼠結(jié)腸癌C26細(xì)胞，南京醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中屯、實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞庫，DMEM+10%FBS 常規(guī)培養(yǎng)。 陽0%] 1. 2實(shí)驗(yàn)藥物
[0027]研究藥物：本發(fā)明含當(dāng)歸的植物組合物：按實(shí)施例1方法制備。
[0028]藥液儲(chǔ)液：稱取lOOmg含當(dāng)歸的植物組合物，溶于5ml無水乙醇中，0. 2ym濾器過 濾，500y1doff管分裝，-20°C存儲(chǔ)，同時(shí)0. 2ym濾器過濾無水乙醇W備對(duì)照組之用。
[0029] 1. 3實(shí)驗(yàn)試劑
[0030] DMEM(GIBC0 公司Cat.No. 12100-061Lot.No. 758137);胎牛血清（浙江天杭生物 科技有限公司Lot.No. 100419) ;NaHC03(上海久億化學(xué)試劑有限公司化t.No. 11810-033 Lot.No. 1088387) ;T巧psin(AMRESC0 公司批號(hào)：2010/04);邸TA(AMRESC0 公司批號(hào)： 2009/10);PenicillinGSodiumSalt(AMRESC0公司批號(hào)：2010242) ;Str巧tomycin Sul化te(AMRESC0公司批號(hào)：2010382);無水乙醇（南京化學(xué)試劑有限公司批號(hào)： 080310182) ;MTT度iosha巧批號(hào)：0793) ;PBS(實(shí)驗(yàn)室自配）；
[0031] 1.4實(shí)驗(yàn)器材
[00巧萊卡倒置顯微鏡（德國Leica型號(hào)：DM1L);可見-紫外光微孔板檢測(cè)儀（美國MD公司型號(hào)：S陽CTRAMAX190) ;C02培養(yǎng)箱（FORMA型號(hào)：3111);超凈臺(tái)（蘇凈集團(tuán)安泰公 司制造型號(hào)：SW-CJ-Z抑）；純水儀（美國Spring公司型號(hào)：S/N020579);精密移液器（法 國吉爾森公司型號(hào)：P2);電子天平（德國賽多利斯有限公司型號(hào)：BT323巧；全自動(dòng)高壓滅 菌鍋（日本SANYO公司型號(hào)：MLS-3020);臺(tái)式電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海精密實(shí)驗(yàn)設(shè)備公司型 號(hào)：畑G9123A);冰箱（西口子公司型號(hào)：KG18V2m);液氮罐仰S型號(hào)：2001);低速離屯、 機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠型號(hào)：KA-1000) ;0. 濾器（MILLIP0RE型號(hào)：SLGP033RB) ;10cm 培養(yǎng)皿（肥ST公司）、96孔培養(yǎng)板（肥ST公司）；細(xì)胞計(jì)數(shù)板；離屯、管、移液管、Tips若干。 陽03引 2實(shí)驗(yàn)方法
[0034] 1)小鼠結(jié)腸癌C26細(xì)胞用DMEM+10%FBS于37°C、5%C02進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)（10cm培 養(yǎng)皿），當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)期時(shí)，收集細(xì)胞，棄去培養(yǎng)液，PBS輕洗3遍，加入3ml0. 25 %膜 蛋白酶-0. 04%邸TA，37°C消化2min后，向其中加入5ml完全培養(yǎng)基中和反應(yīng)，吹打細(xì)胞后 將其轉(zhuǎn)入離屯、管中，100化pm離屯、5min，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度3X104個(gè)/ml。 陽03引。將細(xì)胞種入96孔培養(yǎng)板中，每孔加入細(xì)胞懸液180y1，培養(yǎng)板放入細(xì)胞培養(yǎng)箱 中（37°C，5%C02)常規(guī)培養(yǎng)。
[0036] 3)根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)情況，一般長(zhǎng)至50% -70%，加入含當(dāng)歸的植物組合物溶液，繼續(xù) 培養(yǎng)2地。
[0037]4) 2地后加入20y1MTT溶液巧mg/ml，即0. 5 %MTT)，繼續(xù)培養(yǎng)地。
[0038] 5)地后扣板法倒去上清，用吸水紙輕輕拍干，每孔加入200y1二甲基亞諷，置搖 床上低速振蕩lOmin，使結(jié)晶物充分溶解。在酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀490nm處測(cè)量各孔的吸光值。 6)同時(shí)設(shè)置本底（不加細(xì)胞，只加培養(yǎng)液），對(duì)照孔（細(xì)胞、相同濃度的藥物溶解介質(zhì)、培養(yǎng) 液、MTT、二甲基亞諷），每組設(shè)定6個(gè)復(fù)孔。
[0039] 7)結(jié)果W藥物對(duì)細(xì)胞的抑制率表示： 柳4〇] 細(xì)胞增值抑制率（％ )=(對(duì)照孔0D值-給藥孔0D值）/對(duì)照孔0D值X100 %。 實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。
[0041] 3統(tǒng)計(jì)處理
[0042] 采用MicrosoftExcel2003軟件中的相關(guān)分析和Studentt檢驗(yàn)，數(shù)據(jù)W mean+S.D.表不。
[0043] 4實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0044] M1T法實(shí)驗(yàn)后統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，當(dāng)劑量達(dá)到5mg/ml時(shí)，對(duì)小鼠結(jié)腸癌 C26細(xì)胞增殖抑制有差異（P<0. 05)，劑量在lOmg/ml時(shí)該差異具有顯著性（P<0. 01)，當(dāng)劑量 達(dá)到15-20mg/ml時(shí)有極顯著性差異（P<0. 001)。 W45] 表1含當(dāng)歸的植物組合物對(duì)小鼠結(jié)腸癌C26細(xì)胞增殖抑制影響研究
[0046] 巧+SD)
[0047]
[0049] 注：與對(duì)照組比較，沖<0. 01 ;*沖<0. 001
[0050] 5實(shí)驗(yàn)結(jié)論
[0051] 含當(dāng)歸的植物組合物可W抑制小鼠結(jié)腸癌C26細(xì)胞增殖，減少小鼠結(jié)腸癌C26細(xì) 胞的細(xì)胞生長(zhǎng)數(shù)目，該作用呈劑量依賴性。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種含當(dāng)歸的植物組合物提取方法，其特征在于植物組合物由當(dāng)歸l〇〇g，小白花蘇 80g、附地菜50g、小魚仙草150g作為原料藥制成，制備方法由下列步驟組成：取上述原料 藥，粉碎，加入2L的70 %乙醇，投入微波萃取裝置中進(jìn)行微波萃取，萃取功率為400-600W， 萃取2次，每次4-8分鐘，合并萃取液，濃縮，加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50 %乙醇洗脫， 收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加常規(guī)輔料制備成 片劑、膠囊或顆粒劑。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述一種含當(dāng)歸的植物組合物提取方法，其特征在于制備方法中微 波萃取功率為500W，每次萃取6分鐘。3. -種含當(dāng)歸的植物組合物在抑制小鼠結(jié)腸癌C26細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用，其特征在 于含當(dāng)歸的植物組合物由當(dāng)歸l〇〇g，小白花蘇80g、附地菜50g、小魚仙草150g作為原料藥 制成，制備方法由下列步驟組成：取上述原料藥，粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取 裝置中進(jìn)行微波萃取，萃取功率為400-600W，萃取2次，每次4-8分鐘，合并萃取液，濃縮，加 到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮 并干燥，得微波提取物，加常規(guī)輔料制備成片劑、膠囊或顆粒劑。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述一種含當(dāng)歸的植物組合物在抑制小鼠結(jié)腸癌C26細(xì)胞增殖藥物 中的應(yīng)用，其特征在于制備方法中所述微波萃取功率為500W，每次萃取6分鐘。
【專利摘要】本發(fā)明提供一種含當(dāng)歸的植物組合物提取方法，由當(dāng)歸100g，小白花蘇80g、附地菜50g、小魚仙草150g作為原料藥制成，采用微波提取方法制備而成，使得含量有很大提高，用量減少，本發(fā)明還提供了含當(dāng)歸的植物組合物在制備抑制小鼠結(jié)腸癌C26細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用。
【IPC分類】A61K36/80, A61P35/00
【公開號(hào)】CN105147843
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510654670
【發(fā)明人】嚴(yán)白雙
【申請(qǐng)人】南京市棲霞區(qū)回春堂電子商務(wù)咨詢中心
【公開日】2015年12月16日
【申請(qǐng)日】2015年10月11日