阿魏酸松柏酯在制備抗抑郁藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】：
[0001] 本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及阿魏酸松柏酯在制備抗抑郁藥物方面的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】：
[0002] 抑郁癥（Depression)是以持續(xù)情緒低落和認(rèn)知功能障礙為主要臨床特征，包括 焦躁情趣、快感缺乏、睡眠障礙、負(fù)罪感和反復(fù)自殺念頭等，具有高患病率、高復(fù)發(fā)率、高致 殘率和高致死率等特點(diǎn)。世界衛(wèi)生組織報(bào)道稱全球范圍內(nèi)，共有超過3. 5億人患有抑郁癥， 到2020年抑郁癥可能成為僅次于心臟病的第二大疾病。隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)的快速發(fā)展，生活節(jié) 奏加快，人們的壓力增加，各種情感沖擊加大，造成抑郁癥的發(fā)病率逐年增高。抑郁癥被稱 為"二十一世紀(jì)的流行病"，其危害已越來越引起醫(yī)藥衛(wèi)生界的重視。
[0003]目前，治療抑郁癥的主流藥物主要包括：選擇性五羥色胺再攝取抑制劑（SSRIs)， 去甲腎上腺素與特定五羥色胺再攝取抑制劑（NaSSA)，三環(huán)類抗抑郁藥（TCAs)，單胺氧化 酶抑制劑（MAOIs)和五羥色胺與去甲腎上腺素再攝取抑制劑（SNARI)。這些抗抑郁藥物存 在抗抑郁譜窄，起效時(shí)間慢，毒副作用大，價(jià)格昂貴等缺點(diǎn)，嚴(yán)重影響其臨床使用。近年來， 中醫(yī)中藥對(duì)于抑郁癥的治療越來越受到人們的廣泛關(guān)注，從中草藥中挖掘具有良好抗抑郁 作用的天然化合物的研究也日益增多，已成為國(guó)際制藥業(yè)開發(fā)抗抑郁藥物的趨勢(shì)。
[0004] 阿魏酸松柏酯（Coniferylferulate)，無色油狀物，其分子式為C2()H2(j06，分子量為 356. 37,是一種天然活性物質(zhì)，存在于傘形科植物歐當(dāng)歸、當(dāng)歸、川芎等植物中?，F(xiàn)代藥理研 究表明阿魏酸松柏酯具有抗菌、抗腫瘤、抗氧化、血管舒張等藥理作用。有關(guān)阿魏酸松柏酯 在制備預(yù)防或和治療抑郁癥藥物中的應(yīng)用還未見報(bào)道。本發(fā)明分別通過體內(nèi)外試驗(yàn)對(duì)阿魏 酸松柏酯的抗抑郁活性進(jìn)行了研究，結(jié)果表明該單體化合物藥理作用清楚，抗抑郁功效強(qiáng)， 可以作為預(yù)防和治療抑郁癥的藥物。

【發(fā)明內(nèi)容】
：
[0005] 本發(fā)明的目的在于提供阿魏酸松柏酯在制備抗抑郁藥物中的新用途。
[0006] 本發(fā)明提供阿魏酸松柏酯在制備抗抑郁藥物中的應(yīng)用，所述的阿魏酸松柏酯的結(jié) 構(gòu)式為：
[0007]
[0008] -種抗抑郁藥物，由阿魏酸松柏酯和藥學(xué)上可接受的載體組成。
[0009] 所述的載體是聚乙二醇、植物油、淀粉、糊精、環(huán)糊精、各種化學(xué)修飾的環(huán)糊精、蔗 糖等常規(guī)藥物輔料中的一種或多種。
[0010] 所述藥物的劑型是口服制劑、注射劑或局部給藥制劑。所述的口服制劑是片劑、泡 騰片、膠囊、脂質(zhì)體、納米微膠囊、硬膠囊、納米口服液或微丸。所述的注射劑是注射液劑型 或注射用凍干粉針劑型。所述的局部給藥制劑是軟膏劑、噴霧劑或貼劑。
[0011] 本發(fā)明的有益效果在于：
[0012] 1.本發(fā)明對(duì)化合物阿魏酸松柏酯或其藥學(xué)上可接受的鹽發(fā)掘出了新的藥用價(jià)值， 將其用于抗抑郁癥，并可制備成預(yù)防、調(diào)理或治療抑郁癥的藥物，從而為當(dāng)歸、川穹等藥材 的應(yīng)用開拓了一個(gè)新的領(lǐng)域。
[0013] 2.本發(fā)明分別使用體內(nèi)外試驗(yàn)，采用不同的細(xì)胞模型及動(dòng)物模型對(duì)阿魏酸松柏酯 抗抑郁活性進(jìn)行研究，試驗(yàn)結(jié)果表明：（1)阿魏酸松柏酯對(duì)皮質(zhì)酮和谷氨酸損傷的PC12細(xì) 胞具有較好的保護(hù)活性，并呈明顯的量效關(guān)系；（2)能明顯縮短小鼠強(qiáng)迫游泳和懸尾試驗(yàn) 的不動(dòng)時(shí)間，表明阿魏酸松柏酯具有較強(qiáng)的抗抑郁作用。
[0014] 3.本發(fā)明所述的阿魏酸松柏酯來源廣泛，能夠從天然物質(zhì)中直接提取分離而得， 提取分離的操作簡(jiǎn)便，由其生產(chǎn)的抗抑郁藥物具有低成本的特點(diǎn)。
【附圖說明】：
[0015] 圖1.阿魏酸松柏酯在不同濃度下對(duì)皮質(zhì)酮誘發(fā)的PC12細(xì)胞損傷的細(xì)胞存活率
[0016] 圖2.阿魏酸松柏酯在不同濃度下對(duì)谷氨酸誘發(fā)的PC12細(xì)胞損傷的細(xì)胞存活率
【具體實(shí)施方式】：
[0017] 以下通過實(shí)施例來進(jìn)一步描述本發(fā)明，應(yīng)該理解的是，這些實(shí)施例僅用于說明本 發(fā)明，而不是限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0018] 實(shí)施例1阿魏酸松柏酯對(duì)皮質(zhì)酮和谷氨酸分別損傷PC12細(xì)胞的保護(hù)活性
[0019] 1.細(xì)胞培養(yǎng)
[0020] PC12細(xì)胞購(gòu)自中科院上海細(xì)胞庫(kù)，培養(yǎng)體系用含5%胎牛血清和10%馬血清的 RPMI-1640培養(yǎng)基，于37°C，5%C02細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。培養(yǎng)前用多聚L-賴氨酸（O.Olmg/ ml)包被培養(yǎng)瓶和培養(yǎng)皿，每隔3天換液。
[0021] 2?實(shí)驗(yàn)步驟
[0022] 本發(fā)明采用MTT法，評(píng)價(jià)了阿魏酸松柏酯對(duì)皮質(zhì)酮和谷氨酸分別損傷PC12細(xì)胞的 保護(hù)活性。PC12細(xì)胞經(jīng)胰酶消化后用完全培養(yǎng)基制成每毫升含細(xì)胞個(gè)數(shù)為2X105的懸液， 接種于96孔培養(yǎng)板，每孔100yL，放入37°C5%C02孵箱培養(yǎng)。24h后棄去細(xì)胞液，空白組 加入無血清培養(yǎng)基，模型組加入含400yM噸1皮質(zhì)酮（或20mM*L1谷氨酸）的無血清培養(yǎng) 基，給藥組加入含400yM，L1皮質(zhì)酮（或20mM，L1谷氨酸）及濃度分別為2, 10, 20yM，L1 阿魏酸松柏酯的無血清培養(yǎng)基，每個(gè)濃度設(shè)3個(gè)副孔。孵育48h后每孔加入10yLMTT溶 液（5mg/mL，PBS溶液配置），繼續(xù)培養(yǎng)4h后，用移液槍吸取上清液；然后沒孔中分別加入 lOOiiLDMS0,于微量振蕩器上振蕩至結(jié)晶完全溶解，570nm下用酶標(biāo)儀測(cè)定各孔的吸光值 (0D值），計(jì)算各組的細(xì)胞存活率。
[0023] 3?實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0024] 阿魏酸松柏酯對(duì)皮質(zhì)酮損傷PC12細(xì)胞的保護(hù)作用活性結(jié)果見圖1 (##P〈0.Olvs空 白對(duì)照組；*P〈〇. 05，#p〈0.Olvs模型組）。結(jié)果表明，在2, 10, 20yM濃度下，給藥組的細(xì)胞 存活率與模型組細(xì)胞存活率之間均存在顯著性差異，說明該化合物能有效減少皮質(zhì)酮誘導(dǎo) 的PC12細(xì)胞損傷。
[0025] 阿魏酸松柏酯對(duì)谷氨酸損傷PC12細(xì)胞的保護(hù)作用活性結(jié)果見圖2廣P〈0.Olvs空 白對(duì)照組；#P〈〇.Olvs模型組）。結(jié)果表明，2, 10, 20yM?L1的阿魏酸松柏酯對(duì)谷氨酸損 傷的PC12細(xì)胞均具有明顯的保護(hù)作用，并呈明顯的量效關(guān)系。
[0026] 體外實(shí)驗(yàn)表明阿魏酸松柏酯可作為制備預(yù)防及治療抑郁癥的藥物，具有良好的開 發(fā)前景。
[0027] 下面通過體內(nèi)藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)來進(jìn)一步說明阿魏酸松柏酯的抗抑郁作用。
[0028] 實(shí)施例2阿魏酸松柏酯抗抑郁體內(nèi)藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)
[0029] 1. 1實(shí)驗(yàn)材料及分組
[0030] 雄性ICR小鼠，體重18~20g，由北京維通利華動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。每10只/籠 裙養(yǎng)，自由攝食和飲水，室溫（22±2) °C，自然光照。將正常小鼠按體重隨機(jī)分成5組，每組 12只，S卩空白對(duì)照組、陽性藥氟西汀組（10mg/kg)、阿魏酸松柏酯高（40mg/kg)、中（20mg/ kg)、低（10mg/kg)劑量組。各組均按0? 2mL/10g體重灌胃給藥7天。
[0031] 1.2實(shí)驗(yàn)方法
[0032] 1.2.1小鼠懸尾試驗(yàn)
[0033] 于第7天給藥lh后將單個(gè)小鼠尾端（距尾端2cm處）用膠布粘在紙箱上部，使其 成倒掛狀態(tài)，頭部離箱底15cm，中間以隔板隔離小鼠視線。觀察6min，記錄后4min內(nèi)小鼠 累計(jì)不動(dòng)時(shí)間為絕望時(shí)間。每次平行做6只小鼠。
[0034] 1. 2. 2小鼠強(qiáng)迫游泳試驗(yàn)
[0035] 小鼠給藥lh后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，將其置于高20cm，直徑10cm的有機(jī)玻璃缸中，其中放 入22±2°C的水，高度15cm，每次操作一只，并用動(dòng)物行為視頻分析系統(tǒng)（上海吉量軟件科 技有限公司）記錄6min內(nèi)小鼠的游泳行為，分析后4min內(nèi)小鼠強(qiáng)迫游泳的累計(jì)不對(duì)時(shí)間 (s)。不動(dòng)時(shí)間判斷為動(dòng)物在水中停止掙扎，呈漂浮狀態(tài)，只有細(xì)小的肢體運(yùn)動(dòng)以保持頭部 浮在水面上。
[0036] 1. 3實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0037] 小鼠懸尾試驗(yàn)結(jié)果見表1，結(jié)果表明，阿魏酸松柏酯各劑量組與空白對(duì)照組比較， 不動(dòng)時(shí)間均有所減少，且中劑量組、高劑量組與空白對(duì)照組比較，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P〈〇. 05， P〈0. 01);中劑量組效果與陽性藥組相當(dāng)，高劑量組效果明顯優(yōu)于陽性藥組。
[0038] 表1.阿魏酸松柏酯對(duì)小鼠懸尾不動(dòng)時(shí)間的影響
[0039]
[0040]與空白組比較：*P〈0. 05, **P〈0. 01
[0041] 小鼠強(qiáng)迫游泳試驗(yàn)結(jié)果見表2,結(jié)果表明，阿魏酸松柏酯中、高劑量組能明顯縮短 小鼠強(qiáng)迫游泳不懂時(shí)間（與空白組比較，*P〈〇. 05, #P〈0. 01)，顯示阿魏酸松柏酯有較強(qiáng)的 抗抑郁作用。
[0042] 表2.阿魏酸松柏酯對(duì)小鼠強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間的影響
[0043]
[0044]與空白組比較：*P〈0. 05, **P〈0. 01
[0045] 以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明中涉及的阿魏酸松柏酯不僅對(duì)皮質(zhì)酮和谷氨酸損傷的 PC12細(xì)胞具有較好的保護(hù)作用，還能顯著減少小鼠強(qiáng)迫游泳和懸尾試驗(yàn)中的不動(dòng)時(shí)間，因 此可以認(rèn)為該化合物具有顯著的抗抑郁作用，可以用于制備治療抑郁癥的藥物。
[0046] 實(shí)施例3.阿魏酸松柏酯軟膠囊的制備
[0047] 取阿魏酸松柏酯20g，植物油180g，攪拌，充分混勻，作為內(nèi)容物備用。分別取甘 油、明膠和水（按比例1:3:3)適量，于明膠中加入適量的水使其充分吸水膨脹，甘油及余下 的水混合后置入化膠桶中加熱至70~80°C，加入膨脹的明膠及對(duì)羥基苯甲酸丙酯適量，攪 拌，作為囊材備用。將內(nèi)容物和囊材在軟膠囊機(jī)上壓制成軟膠囊，干燥定形，即得阿魏酸松 柏酯軟膠囊。
[0048] 實(shí)施例4.阿魏酸松柏酯片劑的制備
[0049] 將80g聚乙二醇4000加熱熔化，邊攪拌邊加入20g阿魏酸松柏酯，混勻冷卻，將冷 卻后所得固化物粉碎，加入淀粉185g，混勻制成顆粒，加入羧甲基淀粉鈉15g，硬脂酸鎂適 量混勻，壓片，即得阿魏酸松柏酯片。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 阿魏酸松柏酯在制備抗抑郁藥物中的應(yīng)用，所述的阿魏酸松柏酯的結(jié)構(gòu)式為：2. -種抗抑郁藥物，其特征在于由阿魏酸松柏酯和藥學(xué)上可接受的載體組成。3. 如權(quán)利要求2所述的一種抗抑郁藥物，其特征在于，所述藥物的劑型是口服制劑、注 射劑或局部給藥制劑。4. 如權(quán)利要求3所述的一種抗抑郁藥物，其特征在于，所述的口服制劑是片劑、泡騰 片、膠囊、脂質(zhì)體、納米微膠囊、硬膠囊、納米口服液或微丸。5. 如權(quán)利要求3所述的一種抗抑郁藥物，其特征在于，所述的注射劑是注射液劑型或 注射用凍干粉針劑型。6. 如權(quán)利要求3所述的一種抗抑郁藥物，其特征在于，所述的局部給藥制劑是軟膏劑、 噴霧劑或貼劑。
【專利摘要】本發(fā)明提供了阿魏酸松柏酯在制備抗抑郁藥物中的應(yīng)用，涉及醫(yī)藥領(lǐng)域。本發(fā)明通過體外活性試驗(yàn)證明阿魏酸松柏酯對(duì)皮質(zhì)酮和谷氨酸損傷的PC12細(xì)胞具有較好的保護(hù)活性；體內(nèi)試驗(yàn)結(jié)果顯示阿魏酸松柏酯能顯著縮短小鼠強(qiáng)迫游泳和懸尾試驗(yàn)的不動(dòng)時(shí)間。實(shí)驗(yàn)證明阿魏酸松柏酯具有顯著的抗抑郁作用，可用于制備預(yù)防和治療抑郁癥的藥物。
【IPC分類】A61K31/216, A61P25/24
【公開號(hào)】CN105055391
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510420767
【發(fā)明人】周玉枝, 宮文霞, 秦雪梅, 張麗增, 高曉霞, 田俊生
【申請(qǐng)人】山西大學(xué)
【公開日】2015年11月18日
【申請(qǐng)日】2015年7月16日