灰氈毛忍冬咖啡酰奎寧酸類提取物的制備方法及用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及中藥領(lǐng)域，具體而言，涉及灰氈毛忍冬咖啡?？鼘幩犷愄崛∥锏闹苽?方法及用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 灰毯毛忍冬（LoniceramacranthoidesHand. -Mazz)為忍冬科 (Caprifoliaceae)忍冬屬植物，具有清熱解毒、抗菌消炎的功效。廣泛分布于四川、福建、 江西、湖南、貴州等地區(qū)，在西南地區(qū)有大面積栽培。2005年版中國(guó)藥典將其作為新品種收 載，與紅腺忍冬、華南忍冬一同列入新增的山銀花項(xiàng)下。灰氈毛忍冬應(yīng)用歷史悠久，分布廣、 產(chǎn)量高、資源充足，合理開發(fā)利用這一豐富的自然資源具有重要的經(jīng)濟(jì)意義。
[0003] 糖尿病長(zhǎng)期高血糖對(duì)機(jī)體許多組織和器官產(chǎn)生危害，導(dǎo)致多種糖尿病慢性并發(fā)癥 發(fā)生，如糖尿病白內(nèi)障、神經(jīng)病變、腎臟病變、視網(wǎng)膜病變、動(dòng)脈粥樣硬化等。這些并發(fā)癥目 前已成為威脅糖尿病患者健康和生命的最主要原因。目前，大量研宄已證實(shí)，糖尿病并發(fā)癥 與糖代謝的多元醇通路激活有關(guān)。當(dāng)血糖升高時(shí)，催化葡萄糖轉(zhuǎn)化為6-磷酸葡萄糖的己糖 激酶被飽和，刺激醛糖還原酶（AR)的生成，從而使AR活性明顯增強(qiáng)，超過正常的4倍，激活 山梨醇通路。山梨醇由于自身的極性不易透過細(xì)胞膜，在細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生大量山梨醇。AR是聚 醇通路中的關(guān)鍵酶，是Aldo-keto還原酶家族成員之一，廣泛存在于人類和哺乳動(dòng)物的晶 狀體上皮細(xì)胞、周圍神經(jīng)Schwann細(xì)胞、腎臟Papilla細(xì)胞和胰腺Largerhans胰島中?，F(xiàn) 代醫(yī)學(xué)研宄證明，糖尿病并發(fā)癥如糖尿病腎病、血管病變、視網(wǎng)膜病變、外周神經(jīng)病變等都 與多元醇通路有關(guān)，AR作為多元醇通路的限速酶，就成了延緩和防治糖尿病并發(fā)癥的關(guān)鍵 因素。
[0004] 大量動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床研宄表明，醛糖還原酶抑制劑可抑制聚醇通路中的AR，阻止 逆轉(zhuǎn)多元醇代謝中的葡萄糖轉(zhuǎn)化為山梨醇，可使多元醇水平恢復(fù)正常，并能改善神經(jīng)傳導(dǎo) 功能、延遲白內(nèi)障的形成及蛋白尿的出現(xiàn)，從而達(dá)到預(yù)防和延緩糖尿病并發(fā)癥的目的。從20 世紀(jì)70年代開始，醛糖還原酶抑制劑的研宄成為糖尿病治療領(lǐng)域新的熱點(diǎn)，在合成、中藥、 微生物等方面都有許多新型、高效的醛糖還原酶抑制劑涌現(xiàn)，并有不少已進(jìn)入臨床和上市， 但這些醛糖還原酶抑制劑大部分由合成得到，均存在一些問題，如Sorbinil因引起嚴(yán)重的 過敏反應(yīng)而被迫終止臨床試驗(yàn)，Tolrestate沒有表現(xiàn)出足夠的療效而未能通過FDA的批 準(zhǔn)，所以，繼續(xù)尋找高效低毒的醛糖還原酶抑制劑仍是科研工作者的任務(wù)。
[0005] 從中草藥中得到的醛糖還原酶抑制劑具有來源豐富、價(jià)格便宜、不良反應(yīng)少的特 點(diǎn)，因此，從中草藥中尋找高效低毒的醛糖還原酶抑制劑具有很大優(yōu)勢(shì)，對(duì)具有醛糖還原酶 抑制作用的中草藥的開發(fā)具有較大潛力。而目前關(guān)于灰氈毛忍冬提取物對(duì)醛糖還原酶的抑 制作用的研宄以及在糖尿病并發(fā)癥的治療和保健作用的應(yīng)用還未見報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 針對(duì)于上述問題，本發(fā)明目的在于提供灰氈毛忍冬咖啡酰奎寧酸類提取物的制備 方法，以實(shí)現(xiàn)從灰氈毛忍冬原材料中提取出灰氈毛忍冬咖啡?？鼘幩犷愄崛∥?；本發(fā)明的 另一個(gè)目的在于提供灰氈毛忍冬咖啡?？鼘幩犷愄崛∥锏挠猛?，將灰氈毛忍冬咖啡奎寧酸 類提取物應(yīng)用于制備用以治療糖尿病并發(fā)癥的藥品或保健食品。
[0007] 本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的： 灰氈毛忍冬咖啡酰奎寧酸類提取物的制備方法，包括以下步驟： A. 用溶劑對(duì)灰氈毛忍冬原材料進(jìn)行至少一次提取，得到含有灰氈毛忍冬咖啡?？鼘幩?類粗提取物的提取液；所述含有灰氈毛忍冬咖啡酰奎寧酸類粗提取物的提取液經(jīng)過減壓濃 縮得到灰氈毛忍冬咖啡?？鼘幩犷惔痔崛∥?； B. 所述步驟A中得到的所述灰氈毛忍冬咖啡?？鼘幩犷惔痔崛∥锊捎么罂讟渲?法和/或柱層析法進(jìn)行分離純化，得到含有灰氈毛忍冬咖啡?？鼘幩犷愄崛∥锏奶崛∫?； 所述含有灰氈毛忍冬咖啡酰奎寧酸類提取物的提取液經(jīng)過減壓濃縮得到灰氈毛忍冬咖啡 ?？鼘幩犷愄崛∥?。
[0008] 進(jìn)一步，所述步驟A中的所述溶劑為水、甲醇、乙醇、正丁醇中的至少一種。
[0009] 上述步驟A通過溶劑提取法首次從灰氈毛忍冬原材料中提取得到灰氈毛忍冬咖 啡?？鼘幩犷惔痔崛∥?，溶劑提取法所用的溶劑可以選用水、甲醇、乙醇、正丁醇或者其他 低級(jí)脂肪醇中的一種，也可以選用水、甲醇、乙醇、正丁醇以及其他低級(jí)脂肪醇中的兩種或 者多種以任意比例配制而成溶劑。
[0010] 在使用溶劑進(jìn)行提取時(shí)，可以用溶劑對(duì)灰氈毛忍冬原材料進(jìn)行至少1次提取。由 于提取次數(shù)較少時(shí)，灰氈毛忍冬原材料中的活性成分提取不充分，造成灰氈毛忍冬原材料 的浪費(fèi)；隨著提取次數(shù)增多，溶劑的提取效果會(huì)逐漸降低，因此，優(yōu)選地，用溶劑對(duì)灰氈毛忍 冬原材料進(jìn)行3次提取，這樣不僅可以使灰氈毛忍冬原材料得到充分的利用，而且有效地 節(jié)約了溶劑的用量。
[0011] 上述用溶劑對(duì)灰氈毛忍冬原材料進(jìn)行提取時(shí)，可以采用室溫浸提法進(jìn)行提取，即 在室溫條件下將灰氈毛忍冬原材料浸入溶劑中進(jìn)行提取。容易理解地，還可以采用其他方 法對(duì)灰氈毛忍冬原材料進(jìn)行提取，例如超聲提取法，加熱提取法和加熱回流提取法。
[0012] 進(jìn)一步，所述步驟B為：所述灰氈毛忍冬咖啡?？鼘幩犷惔痔崛∥锵群蠓謩e采用 大孔樹脂吸附法和柱層析法進(jìn)行分離純化，得到灰氈毛忍冬咖啡?？鼘幩犷愄崛∥铮凰?大孔樹脂吸附法采用大孔吸附樹脂柱和大孔吸附樹脂柱洗脫劑進(jìn)行分離純化，所述柱層析 法采用硅膠柱和硅膠柱洗脫劑進(jìn)行分離純化。
[0013] 大孔樹脂吸附法和柱層析法均屬于分離純化方法，因此可以單獨(dú)采用大孔樹脂吸 附法或者柱層析法對(duì)上述步驟A中得到的灰氈毛忍冬咖啡?？鼘幩犷惔痔崛∥镞M(jìn)行分離 純化，從而得到灰氈毛忍冬咖啡酰奎寧酸類提取物。
[0014] 為了使制備的灰氈毛忍冬咖啡?？鼘幩犷愄崛∥锏募兌雀?，充分除去灰氈毛忍 冬咖啡酰奎寧酸類粗提取物中的雜質(zhì)和色素，優(yōu)選地，同時(shí)使用大孔樹脂吸附法和柱層析 法，而使上述步驟A中得到的灰氈毛忍冬咖啡?？鼘幩犷惔痔崛∥锓謩e經(jīng)過大孔吸附樹脂 柱和硅膠柱的分離純化作用，從而得到灰氈毛忍冬咖啡?？鼘幩犷愄崛∥?。由于灰氈毛忍 冬咖啡?？鼘幩犷惔痔崛∥锵群蠓謩e經(jīng)過大孔吸附樹脂柱和硅膠柱，使灰氈毛忍冬咖啡酰 奎寧酸類粗提取物得到富集，并使其中所含的雜質(zhì)和色素經(jīng)過兩次分離純化而去除，所以 可以進(jìn)一步提高最終得到的灰氈毛忍冬咖啡?？鼘幩犷愄崛∥锏募兌取?br>[0015] 進(jìn)一步，所述大孔吸附樹脂柱洗脫劑選用水、甲醇、乙醇、丙酮、以任意體積百分比 配制的甲醇水溶液、乙醇水溶液、丙酮水溶液中的至少一種；所述大孔吸附樹脂柱的固定相 為D-101大孔樹脂、HP-20大孔樹脂、DM130大孔樹脂中的一種。
[0016] 優(yōu)選地，大孔吸附樹脂柱過柱時(shí)，先后采用水和甲醇作為大孔吸附樹脂柱洗脫劑 對(duì)大孔吸附樹脂柱進(jìn)行洗脫。容易理解的，也可以采用水和乙醇，水和丙酮中的一種作為大 孔吸附樹脂柱洗脫劑對(duì)大孔吸附樹脂柱進(jìn)行洗脫。
[0017] 進(jìn)一步，所述硅膠柱為反相硅膠柱；所述硅膠柱洗脫劑選用水、甲醇、乙醇、丙酮、 甲醇水溶液、乙醇水溶液、丙酮水溶液中的至少一種；所述硅膠柱的固定相為十八烷基硅烷 鍵合硅膠或者辛烷基硅烷鍵合硅膠。
[0018] 上述甲醇水溶液采用甲醇和水以任意體積百分比配制而成；上述乙醇水溶液采用 乙醇和水以任意體積百分比配制而成；上述丙酮水溶液采用丙酮和水以任意體積百分比配 制而成。
[0019] 由于灰氈毛忍冬咖啡?？鼘幩犷愄崛∥锏臉O性較大，因此硅膠柱采用反相硅膠 柱，這樣過柱時(shí)可以采用較大極