藥物-蛋白質(zhì)綴合物的制作方法
【專利說明】藥物-蛋白質(zhì)綴合物
[0001] 本發(fā)明涉及新的藥物-蛋白質(zhì)綴合物。
[0002] 結(jié)合蛋白對靶細胞和分子的表面上的特定標(biāo)志物的特異性已經(jīng)導(dǎo)致了它們作為 多種診斷和治療試劑的載體的廣泛用途。例如，發(fā)現(xiàn)這類綴合至標(biāo)記物和報告基團（例如 熒光基團、放射性同位素和酶）的蛋白質(zhì)可用于在標(biāo)記和成像應(yīng)用中，而與細胞毒性試劑 和化療藥物的綴合使得能夠?qū)⑦@類試劑靶向遞送至特定的組織或結(jié)構(gòu)（例如特定的細胞 類型或生長因子），從而將對正常健康組織的影響降到最低并顯著降低與化療治療相關(guān)的 副作用。這類綴合物在一些疾病領(lǐng)域尤其在癌癥領(lǐng)域中具有廣泛的潛在的治療性應(yīng)用。
[0003] 水溶性的合成的聚合物，尤其是聚燒二醇（polyalkarlene glycol)，被廣泛用于 綴合治療活性分子，例如肽或蛋白配體，包括抗體。這些治療性綴合物已被證明可通過延長 循環(huán)時間和降低清除率而有利地改變藥物代謝動力學(xué)，從而降低全身毒性并且在一些情況 下展示出增加的臨床效力。將聚乙二醇（PEG)共價綴合至蛋白質(zhì)的過程通常被稱為"PEG 化"。
[0004] 對于最佳效力和保證劑量間的一致性來說重要的是：每個結(jié)合蛋白的綴合部分 的數(shù)目是相同的，并且每個部分被特異性地綴合至每個結(jié)合蛋白中相同的氨基酸殘基。因 此，已經(jīng)開發(fā)了很多方法來提高這類綴合物的均一1性。Liberatore et al, Bioconj. Chem 1990, 1，36-50，和 del Rosario et al, Bioconj. Chem. 1990, 1，51-59 描述了可用于交聯(lián)蛋 白質(zhì)（包括抗體）中的二硫鍵的試劑的用途。WO 2005/007197描述了將聚合物綴合至蛋白 質(zhì)的方法，其使用能夠與源自蛋白質(zhì)中二硫鍵的兩個硫原子綴合以產(chǎn)生新硫醚綴合物的新 綴合試劑。
[0005] 澳瑞他汀（auristatins)是抗腫瘤劑，是一種高效的細胞殺傷類藥物。這類的 多個成員，包括天然產(chǎn)品多拉司他汀l〇(dolastatin 10)(分離自截尾海兔（Dolabella auricularia))、一甲基澳瑞他汀E、一甲基澳瑞他汀F、一甲基澳瑞他汀D、澳瑞他汀PYE和 澳瑞他汀PHE，正在被開發(fā)以用于多種疾病（包括癌癥）的治療。它們是高毒性的，因而許多 研宄目前正致力于開發(fā)包含澳瑞他汀的綴合物。WO 2009/117531涉及具有包括通過C-末 端與接頭連接從而與抗體連接的澳瑞他汀的藥物綴合物。據(jù)稱這些綴合物不需要自消基團 (self-immolative group)來釋放藥物就可顯示出效力。WO 2009/052431涉及⑶19結(jié)合 試劑，并公開了澳瑞他汀綴合物。
[0006] 兩種抗體藥物綴合物已經(jīng)得到監(jiān)管機構(gòu)批準(zhǔn)：一種是貝倫妥單抗-維多 ?。╞rentuximab vedotin)，其中的藥物為澳瑞他??；一種是曲妥珠單抗-美坦辛 (trastuzumab emtansine)，其中的藥物為美登素（maytansine)。在這兩種市售綴合物中， 藥物與抗體的連接都使用了基于馬來酰亞胺的接頭。馬來酰亞胺在綴合試劑中被廣泛使 用。然而，與許多其他綴合試劑相同的是，馬來酰亞胺的使用存在許多困難：綴合反應(yīng)的控 制是困難的，導(dǎo)致具有低均一性的產(chǎn)物，并且所得到的綴合物的穩(wěn)定性可能是一個問題。
[0007] 因此，仍然需要可被有效制備并證明具有所需效力的，具有改善的穩(wěn)定性和均一 性的改良澳瑞他汀-抗體綴合物。
[0008] 因此，本發(fā)明提供了一種含有澳瑞他汀的綴合物，其具有以下通式：
[0009] (((Dq-Lk1)m-P) p-Lk2-Lk3) n-Ab (I)
[0010] 其中D代表澳瑞他汀部分；
[0011] q代表從1至10的整數(shù)；
[0012] Lk1代表接頭；
[0013] m代表從1至10的整數(shù)；
[0014] P代表鍵或z價基團-P1-NH-,其中z為2-11，并且P1為含有至少一個亞乙基單 元-CH2-CH2-或乙二醇（ethylene glycol)單元-O-CH2-CH2-的基團；
[0015] p代表從1至10的整數(shù)；
[0016] Lk2代表鍵或y價接頭，其中y為2-11，并且其由1-9個天冬氨酸和/或谷氨酸殘 基組成；
[0017] Lk3代表具有以下通式的接頭：
[0018] -CO-Ph-X-Y- (II)
[0019] 其中Ph為任選地取代的苯基；X代表CO基團或CH. OH基團；并且Y代表具有下式 的基團：
[0020]
【主權(quán)項】
1. 一種具有以下通式的包含澳瑞他汀的綴合物： (((Dq-Lk1) m_P) J5-Lk2-Lk3) n_Ab (I) 其中D代表澳瑞他汀部分； q代表1至10的整數(shù)； Lk1代表接頭； m代表1至10的整數(shù)； P代表鍵或Z-價基團-P1-NH-,其中z為2-11并且P1是包含至少一個亞乙基單元-CH 2-CH2-或乙二醇單兀-O-CH2-CH2-的基團； P代表1至10的整數(shù)； Lk2代表鍵或y-價接頭，其中y為2-11并且其是由1至9個天冬氨酸和/或谷氨酸殘 基組成； Lk3代表具有以下通式的接頭： -CO-Ph-X-Y- (II) 其中Ph是任選地取代的苯基基團；X代表CO基團或CH. OH基團；并且Y代表具有下式 的基團：
其中A和B中的每一個均代表CV4亞烷基或亞烯基基團； Ab代表能夠結(jié)合靶標(biāo)上的結(jié)合伴侶的結(jié)合蛋白或肽，所述結(jié)合蛋白或肽經(jīng)由源自所述 結(jié)合蛋白或肽中的二硫鍵的兩個硫原子被鍵合至Lk3上；并且 η代表從1至s的整數(shù)，其中s是綴合至Lk3之前存在于所述結(jié)合蛋白或肽中的二硫鍵 的數(shù)目； 選擇m、n、p、q、y和ζ的含義使得所述綴合物包含1至10個D基團。
2. 權(quán)利要求1所述的綴合物，其中所述澳瑞他汀為經(jīng)由其末端氮原子鍵合的一甲基澳 瑞他汀E或一甲基澳瑞他汀F。
3. 權(quán)利要求1或權(quán)利要求2所述的綴合物，其中所述澳瑞他汀為經(jīng)由末端氮原子鍵合 的一甲基澳瑞他汀E。
4. 前述權(quán)利要求中任一項所述的綴合物，其中Lk1為可降解的接頭。
5. 權(quán)利要求4所述的綴合物，其中Lk1包含以下基團中的一個：
其中R、R'、R"和R"'中的每一個均代表氫原子或烷基基團，并且AA代表蛋白酶特異 性的氨基酸序列。
6. 權(quán)利要求5所述的綴合物，其中Lk 1包含：
7. 權(quán)利要求1至3中任一項所述的綴合物，其中q為2至10的整數(shù)，并且Lk 1SmA 一個或多個天冬氨酸或谷氨酸殘基的多價接頭。
8. 權(quán)利要求1至7中任一項所述的綴合物，其中P代表鍵，或P代表-P ^ΝΗ-，其中P1 包含2至10個乙二醇單元。
9. 權(quán)利要求1至7中任一項所述的綴合物，其中P代表聚乙二醇。
10. 權(quán)利要求1至9中任一項所述的綴合物，其中Lk 3中的苯基基團Ph是未取代的。
11. 權(quán)利要求1至10中任一項所述的綴合物，其中Y具有下式：
12. 權(quán)利要求1至11中任一項所述的綴合物，其中Ab代表全長抗體或包含全長抗體的 抗原結(jié)合區(qū)的抗體片段。
13. 權(quán)利要求12所述的綴合物，其中Ab代表1gGl或IgG4或者IgGl或IgG4的片段。
14. 一種制備權(quán)利要求1至13中任一項所述的綴合物的方法，其包括還原結(jié)合蛋白中 的一個或多個二硫鍵并隨后與具有以下通式的綴合試劑反應(yīng)： ((DrLkVP)p-Lk2-Lk3a (VIII) 其中D、Lk^PxLk2以及m、p和q具有權(quán)利要求1中給出的含義，并且Lk3a代表下式的 基團： -CO-Ph-Xa-Ya (IX) 其中Ph具有權(quán)利要求1中給出的含義，Xa代表CO基團，并且Ya代表下述基團：
其中A和B具有權(quán)利要求1中給出的含義，每個L獨立地代表離去基團，并且X代表1 至4的整數(shù)，從而制備其中X代表CO的式I綴合物；并且任選地還原所述最初形成的CO基 團X以生成具有CH. OH基團X的綴合物。
15. 權(quán)利要求14所述的方法，其中Y a代表：
16. -種具有以下通式的化合物： ((Dti-Lk1) m-P)p-Lk2-Lk3a (VIII) 其中D具有權(quán)利要求1至3中任一項給出的含義；Lk1具有權(quán)利要求1和4至7中任一 項給出的含義；P具有權(quán)利要求1、8和9中任一項給出的含義；Lk2、m、p和q具有權(quán)利要求 1給出的含義，并且Lk 3a代表具有下式的基團： -CO-Ph-Xa-Ya (IX) 其中Ph具有權(quán)利要求1或權(quán)利要求10給出的含義，Xa代表CO基團，并且Y 3代表以下 基團：
其中A和B具有權(quán)利要求1給出的含義，每個L獨立地代表離去基團，并且X代表1至 4的整數(shù)。
17. 權(quán)利要求16所述的化合物，其中Y a代表：
18. -種藥物組合物，其包含權(quán)利要求1至13中任一項所述的綴合物，以及藥學(xué)上可接 受的載體，以及任選的額外的治療試劑。
19. 權(quán)利要求1至13中任一項所述的綴合物或權(quán)利要求18所述的組合物用于治療。
20. -種治療患者的方法，其包括給予患者藥學(xué)上有效量的權(quán)利要求1至13中任一項 所述的綴合物或權(quán)利要求18所述的藥物組合物。
21. -種綴合物，其具有以下通式： (((Drqi -Lk1 )m-P)p-Lk2-Lk3)n-Ab (I') 其中D'代表藥物部分； q'代表2至10的整數(shù)； Lk1'代表接頭； m代表1至10的整數(shù)； P代表鍵或Z-價基團-P1-NH-,其中z是2-11并且P1是包含至少一個亞乙基基團-CH 2-CH2-或乙二醇單兀-O-CH2-CH2-的基團； P代表1至10的整數(shù)； Lk2代表鍵或y-價接頭，其中y為2-11并且其由1至9個天冬氨酸和/或谷氨酸殘基 組成； Lk3代表具有以下通式的接頭： -CO-Ph-X-Y- (II) 其中Ph是任選地取代的苯基基團；X代表CO基團或CH. OH基團；而Y代表具有下式的 基團：
其中A和B中的每一個均代表CV4亞烷基或亞烯基基團； Ab代表能夠結(jié)合靶標(biāo)上的結(jié)合伴侶的結(jié)合蛋白或肽，所述結(jié)合蛋白質(zhì)經(jīng)由源自所述結(jié) 合蛋白質(zhì)或肽中的二硫鍵的兩個硫原子被鍵合至Lk3上；以及 η代表1至s的整數(shù)，其中s是綴合至Lk3之前存在于所述結(jié)合蛋白或肽中的二硫鍵的 數(shù)目； 選擇m、n、p、q'、y和ζ的含義以使所述綴合物包含1-10個D'基團。
22. -種化合物，其通式為： ((D' -Lk1 '）m-P)P-Lk2-Lk3a (VIII，） 其中D'、q' jk^nuP、p、Lk2和Lk 3具有權(quán)利要求21中給出的含義，并且Lk3a具有權(quán) 利要求16中給出的含義。
【專利摘要】本申請描述了包含澳瑞他汀和結(jié)合蛋白或肽的特異性綴合物以及制備其的方法。所述綴合物使用特異性接頭技術(shù)，其給出了優(yōu)于已知抗體-藥物綴合物的優(yōu)勢。本申請還描述了其中存在多于一個拷貝的藥物的藥物與結(jié)合蛋白或肽的特異性綴合物。
【IPC分類】A61K47-48
【公開號】CN104870021
【申請?zhí)枴緾N201380055880
【發(fā)明人】J·伯特, A·戈德溫, M·弗里赫里奧, G·巴蒂斯庫
【申請人】寶力泰銳克斯有限公司
【公開日】2015年8月26日
【申請日】2013年10月11日
【公告號】CA2884299A1, EP2911700A1, WO2014064423A1