一種枳提取物的降脂用圖
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明屬食品醫(yī)藥領域，涉及天然來源的枳提取物在制備降脂功能食品、保健品 或藥物中的應用，尤其涉及枳提取物的制備方法和在小鼠體內水平上降脂的應用。
【背景技術】
[0002] 脂質是維持細胞正常生理功能和保持機體平衡的重要生物大分子?，F(xiàn)代社會中， 由于生活方式的改變，脂質和脂蛋白代謝異常導致的肥胖、心血管疾病、糖尿病等諸多慢性 非傳染性疾病呈顯著上升發(fā)展態(tài)勢。目前，市場上存在多種調節(jié)脂質代謝異常的手段，如他 汀類藥物以膽固醇合成路徑為靶標，具有強降膽固醇作用，是治療動脈粥樣硬化相關疾病 的重要藥物；貝特類藥物能有效降低血漿甘油三酯水平；噻唑烷二酮類藥物可改善機體胰 島素敏感性，是代謝綜合征病人的重要治療藥物。然而，這些藥物均存在自身固有的缺陷或 副作用。例如，血脂異常的代謝綜合征病人單獨服用他汀類藥物并不能達到脂質治療目的， 他汀類藥物對部分病人有較強副作用，如肌肉毒性等；噻唑烷二酮類藥物有促進增重等副 作用。因此，研宄脂質代謝調節(jié)，尤其是代謝綜合征相關脂質代謝異常的新的干預和治療方 法至關重要。
[0003] 從天然產物中尋找安全、毒副作用較低的脂質代謝調控物質是目前研宄熱點。枳 (/7Oflcirw 1S iri/b7iaia)，別名枳實、枸橘、橘紅等，屬落葉灌木或小喬木，在我國多地均有 栽培，廣泛用作綠蘺。枳果實可提有機酸；種子可榨油；葉、花及果皮可提芳香油。枳殼是傳 統(tǒng)的中藥材，可供藥用，能破氣消積等。然而，關于枳提取物在活體內是否具有降脂活性，鮮 見報道。

【發(fā)明內容】

[0004] 本發(fā)明的目的是提供一種枳提取物在制備降脂功能食品、保健品或藥物中的應 用。所述枳提取物通過將枳油胞層、白皮層、囊衣和汁胞提取物從其冷凍干燥粉末開始，經 過甲醇超聲提取、旋轉蒸發(fā)、過固相萃取柱、真空干燥得到。
[0005] 1.本發(fā)明強調枳提取物這種天然產物在降脂中的最新發(fā)現(xiàn)。本發(fā)明枳油胞層、白 皮層、囊衣和汁胞提取物(劑量均為40mg/kg BW)能夠在高脂誘導肥胖C57BL/6小鼠體內 (i/7 Wra)顯著降低體重，顯著降低肝臟、睪周脂肪、腎周脂肪和褐色脂肪重量，顯著降低 血清中的甘油三酯和低密度脂蛋白膽固醇水平，顯著提高血清中的高密度脂蛋白膽固醇水 平。因此，本發(fā)明的枳提取物可作為降脂功能食品、保健品或防治藥物用于脂肪代謝異常相 關疾病的防治。
[0006] 本發(fā)明提供一種天然產物中尋找安全、毒副作用較低的脂質代謝調控物質在制備 降脂功能食品或藥物中的應用，經試驗證明，所述的枳提取物能夠在高脂誘導肥胖C57BL/6 小鼠體內（i/? Wra)顯著降低體重，顯著降低肝臟、睪周脂肪、腎周脂肪和褐色脂肪重量，顯 著降低血清中的甘油三酯和低密度脂蛋白膽固醇水平，顯著提高血清中的高密度脂蛋白膽 固醇水平。可作為功能食品、保健品或防治藥物用于脂肪代謝異常相關疾病的防治。本發(fā) 明提供的枳提取物，來源豐富，在我國多地均有栽培，制備成本低，易于推廣，經濟適用。
【附圖說明】
[0007] 圖1是以高脂飲食誘導C57BL/6小鼠為飼喂對象，枳油胞層、白皮層、囊衣和汁胞 提取物對其體重的影響。低脂+清水組為低脂飲食組，高脂+清水組為高脂飲食誘導肥胖 組，4個處理組劑量都為40 mg/kg BW，n=6-10。用SPSS軟件進行差異顯著性分析，進行t 檢驗，01，***/X0. 001，與高脂+清水組比較。
[0008] 圖2是以高脂飲食誘導C57BL/6小鼠為飼喂對象，枳油胞層、白皮層、囊衣和汁胞 提取物對其肝臟、睪周脂肪重量的影響。給藥13周，試驗結束后處死小鼠，分離肝臟、睪周 脂肪、腎周脂肪和褐色脂肪，進行稱重。低脂+清水組為低脂飲食組，高脂+清水組為高脂 飲食誘導肥胖組，4個處理組劑量都為40 mg/kg BW，n=6-10。用SPSS軟件進行差異顯著性 分析，進行t檢驗，05, 01，***/X0. 001，與高脂+清水組比較。
[0009] 圖3是以高脂飲食誘導C57BL/6小鼠為飼喂對象，枳油胞層、白皮層、囊衣和汁胞 提取物對其腎周脂肪和褐色脂肪重量的影響。給藥13周，試驗結束后處死小鼠，分離肝臟、 睪周脂肪、腎周脂肪和褐色脂肪，進行稱重。低脂+清水組為低脂飲食組，高脂+清水組為 高脂飲食誘導肥胖組，4個處理組劑量都為40 mg/kg BW，n=6-10。用SPSS軟件進行差異顯 著性分析，進行t檢驗，05, 01，***/X0. 001，與高脂+清水組比較。
[0010] 圖4是以高脂飲食誘導C57BL/6小鼠為飼喂對象，枳油胞層、白皮層、囊衣和汁胞 提取物對其血清甘油三酯、血清高密度脂蛋白膽固醇（HDL-c)和血清低密度脂蛋白膽固醇 (LDL-c)的影響。給藥13周，試驗結束后處死小鼠，采集血清。低脂+清水組為低脂飲食組， 高脂+清水組為高脂飲食誘導肥胖組，4個處理組劑量都為40 mg/kg BW，n=6-9。用SPSS 軟件進行差異顯著性分析，進行t檢驗，05, **/?<0. 01，***/X0. 001，與高脂+清水組 比較。
【具體實施方式】
[0011] 本發(fā)明結合附圖和實施例作進一步的說明。
[0012] 實施例1枳提取物的制備 枳成熟果實(采自浙江省臺州市黃巖區(qū)）經過手工分離得到油胞層、白皮層、囊衣和汁 胞，液氮速凍后經過低溫真空干燥，磨樣后得到冷凍干燥粉末。分別稱取枳油胞層、白皮層、 囊衣和汁胞冷凍干燥粉末I g，用80%甲醇20 mL (固液比1:20)超聲30 min，頻率為60 kHz，功率為30 W。提取液通過10000 rpm離心得到澄清上清液，如此提取3次，合并上清 液，在旋轉蒸發(fā)儀上蒸去甲醇，得到枳提取物水溶液。
[0013] 水溶液用固相萃取S印-Pak? C18柱進行純化（12 cc/2 g，Waters)，純化過程分為 活化、平衡、上樣、淋洗和洗脫五個步驟：SPE小柱首先用20 mL甲醇活化，再用20 mL去離 子水平衡，然后水溶液上樣，待充分吸附后，小柱用40-80 mL去離子水淋洗以洗去果實中的 糖酸等極性物質，真空抽干后用40-80 mL甲醇充分洗脫(根據(jù)洗脫顏色判斷充分與否)，洗 脫液先用旋轉蒸發(fā)儀濃縮，再用真空干燥儀蒸干，分別得到粉末66. 7 mg、64. 4 mg、69. 9 mg 和34. 2 mg，得到的粉末即為枳油胞層、白皮層、囊衣和汁胞提取物。
[0014] 實施例2枳提取物的C57BL/6小鼠試驗 C57BL/6小鼠購自上海斯萊克實驗動物有限責任公司，飼喂的低脂飼料(含10%脂 肪）和高脂飼料(含45%脂肪）購自江蘇美迪森生物醫(yī)藥有限公司。所有小鼠在恒溫恒 濕環(huán)境下飼養(yǎng)，提供12小時光照12小時黑暗環(huán)境。每組10只小鼠，低脂+清水組為 低脂飲食組，高脂+清水組為高脂飲食誘導肥胖組，枳油胞層、白皮層、囊衣和汁胞提 取物4個處理組劑量都為40 mg/kg BW。所有小鼠可以自由攝取食物和蒸餾水，處理 組通過灌胃針灌胃的方式進行給藥，低脂和高脂對照組灌胃蒸餾水。試驗為期13周， 1周連續(xù)給藥6天，停藥1天。試驗每周測定1次小鼠重量，數(shù)據(jù)用平均值土標準誤 (SE )表示，用SPSS軟件進行差異顯著性分析，進行t檢驗，01，***/X0. 001，與高 脂+清水組比較，具體的13周內小鼠體重變化見附圖1。低脂+清水組為低脂飲食組，高脂 +清水組為高脂飲食誘導肥胖組，4個處理組劑量都為40 mg/kg BW，n=6-10。
[0015] 試驗進行13周后處死小鼠，分離得到肝臟、睪周脂肪、腎周脂肪和褐色脂肪，分別 稱重，數(shù)據(jù)用平均值土標準誤（SE )表示，用SPSS軟件進行差異顯著性分析，進行t檢 驗，05, **/?〈0. 01，001，與高脂+清水組比較，具體的C57BL/6小鼠臟器重量 見附圖2、3。
[0016] 試驗進行13周后處死小鼠，采集血清，使用羅氏Cobas 8000生化儀測定血清甘 油三酯、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-c)和低密度脂蛋白膽固醇（LDL-c)，數(shù)據(jù)用平均值土 標準誤（f± SE)表示，用SPSS軟件進行差異顯著性分析，進行t檢驗，*/X0. 05, **/?<0. 01， ***/X0. 001，與高脂+清水組比較，具體的C57BL/6小鼠血清脂質含量見附圖4。
【主權項】
1. 一種枳提取物在制備降脂功能食品、保健品或藥物中的應用，其特征在于，枳提取 物的劑量為40mg/kgBW。
2. 根據(jù)權利要求1所述的一種枳提取物在制備降脂功能食品、保健品或藥物中的應 用，其特征在于，所述枳提取物為油胞層、白皮層、囊衣和汁胞提取物。
3. 根據(jù)權利要求1或2所述的一種枳提取物在制備降脂功能食品、保健品或藥物中的 應用，其特征在于，所述枳提取物是通過將枳油胞層、白皮層、囊衣和汁胞提取物從其冷凍 干燥粉末開始，經過甲醇超聲提取、旋轉蒸發(fā)、過固相萃取柱、真空干燥得到。
【專利摘要】本發(fā)明提供一種枳提取物在制備降脂功能食品、保健品或藥物中的應用。枳油胞層、白皮層、囊衣和汁胞提取物從其冷凍干燥粉末開始，經過甲醇超聲提取、旋轉蒸發(fā)、過固相萃取柱、真空干燥得到。枳提取物能夠在高脂誘導肥胖C57BL/6小鼠體內顯著降低體重，顯著降低肝臟、睪周脂肪、腎周脂肪和褐色脂肪重量，顯著降低血清中的甘油三酯和低密度脂蛋白膽固醇水平，顯著提高血清中的高密度脂蛋白膽固醇水平。可作為功能食品、保健品或防治藥物用于脂肪代謝異常相關疾病的防治。
【IPC分類】A23L1-29, A61K36-752, A61P3-06
【公開號】CN104840572
【申請?zhí)枴緾N201510216162
【發(fā)明人】李鮮, 賈勝, 孫崇德, 陳昆松
【申請人】浙江大學
【公開日】2015年8月19日
【申請日】2015年5月2日