一枝黃花提取物，該提取物的制備方法及醫(yī)藥用圖
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及中藥提取物領域，具體涉及一種一枝黃花提取物，該提取物的制備方 法及醫(yī)藥用途，該提取物可以應用于制備治療痛風性關節(jié)炎的藥物。
【背景技術】
[0002] -枝黃花為菊科植物一枝黃花的全草或帶根全草。夏、秋間采收。別名野黃菊（《南 寧市藥物志》）、山邊半枝香、灑金花（《江西民間草藥》），黃花細辛、黃花一枝香（《廣西中 藥志》），千根癀（《閩南民間草藥》），土澤蘭，百條根、鐵金拐《泉州本草》），薟子草、小白龍 須、黃花馬蘭、大敗毒、紅柴胡（《湖南藥物末》)，黃花仔、紅膠苦萊（《閩東本草》)、一枝香、 大葉七星劍（《廣東中藥》），蛇頭王（《上海常用中草藥》），金鎖匙、滿山黃、黃花兒（《浙 江民間常用草藥》），黃柴胡（四川）。
[0003] 原植物一枝黃花多年生草本，高15~80厘米。莖直立，下部光滑無毛，上部微有 茸毛。葉互生；卵形至矩圓形，長1~5厘米，闊0. 2~2. 5厘米，下部葉具柄，有極小的鋸 齒，上部葉較小而狹，近于全緣，上面深綠色，下面灰綠色，兩面近光滑無毛。圓錐花序，由腋 生的總狀花序再聚集而成；頭狀花序小，直徑5~8毫米，單生或2~4聚生于腋生的短花 序柄上；總苞片狹而尖，具干膜質邊緣，長2~5毫米，大小不等，數列呈覆瓦狀排列；花托 禿裸；外圍的舌狀花黃色，雌性，約8枚；中央筒狀花，兩性，花冠5裂，花藥聚合，基部鈍。瘦 果近圓柱形，禿凈或有柔毛.花期10月。果期11月。生于山野、林緣。全國大部分地區(qū)有 分布。

【發(fā)明內容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種一枝黃花提取物，其制備方法和液相分析方法，含有 該提取物的藥物制劑及利用該提取物制備治療痛風性關節(jié)炎的藥物的用途。
[0005] 本發(fā)明的上述目的是通過下面的技術方案得以實現的：
[0006] -種一枝黃花提取物，該提取物由以下方法制備：
[0007] (a)以重量計，每100份藥材包含干燥的一枝黃花80~90份和干燥的薄荷10~ 20份，混合粉碎，用75 %乙醇溶液熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味得到乙醇提取濃 縮液；(b)將步驟（a)所得乙醇提取濃縮液用水稀釋，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和的 正丁醇萃取，減壓濃縮，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（c)正 丁醇萃取物用水溶解，過濾，用大孔樹脂富集活性成分，先用10%乙醇沖洗8個柱體積除去 大極性成分，再用70%乙醇洗脫12個柱體積，收集70%洗脫液，減壓濃縮即得。
[0008] 為了能夠通過建立HPLC指紋圖譜的方法控制不同批次制備的提取物的批間差 異，所述提取物的液相分析方法為：
[0009] 色譜柱：Agilent Zorbax Extent_C18 柱（4. 6mmX 250mm，5 μ m);
[0010] 流動相：A為乙腈，B為0. 5%磷酸溶液；
[0011] 梯度洗脫程序：0 ~5min，A 10%-15%;5 ~10min，A 15%-48%;10 ~25min， A48%- 78% ;25 ~30min，A 78%- 10% ;
[0012] 流動相流速：1. OmL · min S檢測波長：240nm ;
[0013] 柱溫：35°C ;進樣量：10yL。
[0014] 藥物制劑，含有治療有效量的所述提取物和藥學上可接受的載體。
[0015] 所述的提取物在制備治療痛風性關節(jié)炎的藥物中的應用。
[0016] 所述的藥物制劑在制備治療痛風性關節(jié)炎的藥物中的應用。
[0017] 本發(fā)明提取物用作藥物時，可以直接使用，或者以藥物制劑的形式使用。
[0018] 所述藥物制劑含有治療有效量的本發(fā)明一枝黃花提取物，其余為藥物學上可接受 的、對人和動物無毒和惰性的可藥用載體和/或賦形劑。
[0019] 所述的可藥用載體或賦形劑是一種或多種選自固體、半固體和液體稀釋劑、填料 以及藥物制品輔劑。將本發(fā)明的藥物制劑以單位體重服用量的形式使用。本發(fā)明提取物可 通過口服或注射的形式施用于需要治療的患者。用于口服時，可將其制成片劑、緩釋片、控 釋片、膠囊、滴丸、微丸、混懸劑、乳劑、散劑或顆粒劑、口服液等；用于注射時，可制成滅菌的 水性或油性溶液、無菌粉針、脂質體或乳劑等。
[0020] 本發(fā)明的優(yōu)點：本發(fā)明通過對干燥的一枝黃花和薄荷進行提取、除雜、富集處理， 能得到具有治療痛風性關節(jié)炎的提取物；本發(fā)明提供的液相分析方法可以用于建立該提取 物的指紋圖譜，用于控制不同批次制備的提取物的批間差異。
【附圖說明】
[0021] 圖1為一枝黃花提取物HPLC液相圖譜。
【具體實施方式】
[0022] 下面結合實施例進一步說明本發(fā)明的實質性內容，但并不以此限定本發(fā)明保護范 圍。盡管參照較佳實施例對本發(fā)明作了詳細說明，本領域的普通技術人員應當理解，可以對 本發(fā)明的技術方案進行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術方案的實質和范圍。
[0023] 實施例1 :一枝黃花提取物①制備（85份一枝黃花，15份薄荷）
[0024] 藥材來源：一枝黃花和薄荷購自安徽亳州中藥材市場。
[0025] 主要試劑：食品級乙醇購自上海凌峰化學試劑有限公司；醫(yī)藥級AB-8大孔樹脂購 自天津波鴻樹脂有限公司；乙腈為HPLC級，購于TEDIA ;85 %磷酸為HPLC級，購于TEDIA ; 色譜用純凈水為哇哈哈純凈水。
[0026] 制備方法：將8. 5kg干燥一枝黃花根莖和1. 5kg干燥薄荷混合粉碎，用75 %乙醇 溶液熱回流提取（25LX3次），合并提取液，濃縮至無醇味得到乙醇提取濃縮液（2L);將所 得乙醇提取濃縮液用水稀釋至3L，依次用石油醚（3LX3次）、乙酸乙酯（3LX3次）和水飽 和的正丁醇（3LX3次）萃取，減壓濃縮，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇 萃取物232g ; (c)正丁醇萃取物用1. 5L水溶解，醫(yī)用脫脂棉過濾，用AB-8大孔樹脂（2kg，柱 體積1. 5L)富集活性成分，先用10 %乙醇沖洗8個柱體積（12L)除去大極性成分，再用70 % 乙醇洗脫12個柱體積（18L)，收集70 %洗脫液，減壓濃縮，即得一枝黃花提取物約150g。
[0027] 實施例2 :-枝黃花提取物②制備（80份一枝黃花，20份薄荷）
[0028] 制備方法：將8. 0kg干燥一枝黃花根莖和2. 0kg干燥薄荷混合粉碎，用75 %乙醇 溶液熱回流提?。?5LX3次），合并提取液，濃縮至無醇味得到乙醇提取濃縮液（2L);將所 得乙醇提取濃縮液用水稀釋至3L，依次用石油醚（3LX3次）、乙酸乙酯（3LX3次）和水飽 和的正丁醇（3LX3次）萃取，減壓濃縮，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇 萃取物232g ; (c)正丁醇萃取物用1. 5L水溶解，醫(yī)用脫脂棉過濾，用AB-8大孔樹脂（2kg，柱 體積1. 5L)富集活性成分，先用10 %乙醇沖洗8個柱體積（12L)除去大極性成分，再用70 % 乙醇洗脫12個柱體積（18L)，收集70 %洗脫液，減壓濃縮，即得一枝黃花提取物約150g。
[0029] 實施例3 :-枝黃花提取物③制備（90份一枝黃花，10份薄荷）
[0030] 制備方法：將9. 0kg干燥一枝黃花根莖和1. 0kg干燥薄荷混合粉碎，用75 %乙醇 溶液熱回流提取（25LX3次），合并提取液，濃縮至無醇味得到乙醇提取濃縮液（2L);將所 得乙醇提取濃縮液用水稀釋至3L，依次用石油醚（3LX3次）、乙酸乙酯（3LX3次）和水飽 和的正丁醇（3LX3次）萃取，減壓濃縮，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇 萃取物232g ; (c)正丁醇萃取物用1. 5L水溶解，醫(yī)用脫脂棉過濾，用AB-8大孔樹脂（2kg，柱 體積1. 5L)富集活性成分，先用10 %乙醇沖洗8個柱體積（12L)除去大極性成分，再用70 % 乙醇洗脫12個柱體積（18L)，收集70 %洗脫液，減壓濃縮，即得一枝黃花提取物約150g。
[0031] 實施例4 :一枝黃花提取物④制備（75份一枝黃花，25份薄荷）
[0032] 制備方法：將7. 5kg干燥一枝黃花根莖和2. 5kg干燥薄荷混合粉碎，用75 %乙醇 溶液熱回流提?。?5LX3次），合并提取液，濃縮至無醇味得到乙醇提取濃縮液（2L);將所 得乙醇提取濃縮液用水稀釋至3L，依次用石油醚（3LX3次）、乙酸乙酯（3LX3次）和水飽 和的正丁醇（3LX3次）萃取，減壓濃縮，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇 萃取物232g ; (c)正丁醇萃取物用1. 5L水溶解，醫(yī)用脫脂棉過濾，用AB-8大孔樹脂（2kg，柱 體積1. 5L)富集活性成分，先用10 %乙醇沖洗8個柱體積（12L)除去大極性成分，再用70 % 乙醇洗脫12個柱體積（18L)，收集70 %洗脫液，減壓濃縮，即得一枝黃花提取物約150g。
[0033] 實施例5 :-枝黃花提取物⑤制備（95份一枝黃花，5份薄荷）
[0034] 制備方法：將9. 5kg干燥一枝黃花根莖和0. 5kg干燥薄荷混合粉碎，用75 %乙醇 溶液熱回流提?。?5LX3次），合并提取液，濃縮至無醇味得到乙醇提取濃縮液（2L);將所 得乙醇提取濃縮液用水稀釋至3L，依次用石油醚（3LX3次）、乙酸乙酯（3LX3次）和水飽 和的正丁醇（3LX3次）萃取，減壓濃縮，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇 萃取物232g ; (c)正丁醇萃取物用1. 5L水溶解，醫(yī)用脫脂棉過濾，用AB-8大孔樹脂（2kg，柱 體積1. 5L)富集活性成分，先用10 %乙醇沖洗8個柱體積（12L)除去大極性成分，再用70 % 乙醇洗脫12個柱體積（18L)，收集70 %洗脫液，減壓濃縮，即得一枝黃花提取物約150g。
[0035] 實施例6 :液相色譜分析
[0036] 供試品溶液配制：取實施例1方法制得的提取物5mg至50mL棕色容量瓶中，加 30mL 10 %乙腈水溶液超聲溶解，冷卻至室溫后，繼續(xù)加10 %乙腈水溶液定容。分析方法如 下：
[0037] 高效液相色譜儀：Agilent 1260,二元栗；
[0038] 色譜柱：Agilent Zorbax Extent_C18 柱（4. 6mmX 250mm，5 μ m);
[0039] 流動相：A為乙腈，B為0. 5%磷酸溶液；
[0040] 梯度洗脫程序

[0041] 流動相流速：1. OmL · min S檢測波長：240nm ;柱溫：35°C ;進樣量：10 μ L。
[0042] 用制備的10批次的一枝黃花提取物進行分析，進行色譜峰匹配，結果1~10號峰 在10批樣品色譜圖中均出現。因此標定10個峰為共有色譜峰，據此建立該提取物的HPLC 質量控制圖譜，結果見圖1。該10批次的一枝黃花提取物藥理活性相似。
[0043] 實施例7 :提取物藥理試驗
[0044] 一、材料與方法
[0045] 1. 1藥物：一枝黃花提取物①~⑤分別按照實施例1~5制得。秋水仙堿片，批號 100206,規(guī)格0. 5mg/s，西雙版納版納藥業(yè)有限責任公司；取6片秋水仙堿，研磨，加蒸餾水