Il-1r在篩選用于治療由金黃色葡萄球菌易感所引起的肺炎的藥物中的用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，特別是涉及IL-1R在篩選用于治療由金黃色葡萄球菌易感所引起的肺炎的藥物中的用途。
【背景技術(shù)】
[0002]盡管近年來科學(xué)家們已經(jīng)研制出很多有效的抗菌方法和手段，細(xì)菌性肺炎依然在全球各國，甚至發(fā)達(dá)國家(如美國等)的致死病因中位居前列。金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是一種常見的人類病原菌，隸屬于葡萄球菌屬(Staphylococcus)，有“嗜肉菌”的別稱，是革蘭氏陽性菌的代表，可引起許多嚴(yán)重感染，帶菌者大約有30%左右。金黃色葡萄球菌可造成各種侵染性感染，包括肺炎、感染性休克、細(xì)菌性腦膜炎、過敏性皮膚炎等。近幾年金黃色葡萄球菌，尤其是其號稱“超級細(xì)菌”的耐甲氧西林和多重耐藥菌株幾乎能抵抗人類所有的藥物，屢次成為公眾在健康方面所關(guān)注的焦點(diǎn)。所以，探索防御病原體的關(guān)鍵性固有免疫通路對于金黃色葡萄球菌所引起的肺炎的臨床研究具有重要意義。
[0003]哺乳動物固有免疫體系所識別的病原體相關(guān)分子模式(PAMPs，pathogen-associated molecular patterns)可為許多微生物所共享,但在高等真核生物中卻無法找到。作為模式識別受體家族的重要一族，Toll樣受體(Toll-like receptors,TLRs)能夠識別PAMPs并激活信號通路，在針對微生物侵襲的早期宿主防御中扮演重要作用。TLRs信號主要通過與MyD88受體蛋白，依次激活I(lǐng)kB激酶(IkB kinase，IKK)和促分裂原活化的蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPK)通路,從而激活轉(zhuǎn)錄因子核因子 kB (nuclear factor (NF)_kB)和激活蛋白-1 (activator protein(AP)-1)。TLR2涉及金黃色葡萄球菌的偵測，并有助于小鼠系統(tǒng)模型中對于病原體的宿主防御?？墒?，當(dāng)暴露于金黃色葡萄球菌時，來自TLR2+JLR9+和TLR2+/TLR9+小鼠的巨噬細(xì)胞依然生成炎性細(xì)胞因子。此外，不同于金黃色葡萄球菌皮膚、全身感染模型所觀察到的現(xiàn)象，體內(nèi)試驗(yàn)尚未有效證明TLRs信號在金黃色葡萄球菌肺部感染中具有顯著作用。以上結(jié)果顯示，肯定還有其他關(guān)鍵的類型識別受體從某種程度上與葡萄球菌所引起的肺部感染以及宿主防御的發(fā)生有關(guān)。
[0004]金黃色葡萄球菌(S.aureus)所引起的肺炎是一個醫(yī)學(xué)上非常棘手的問題，但是人們對從肺部識別和清除這種病原體的關(guān)鍵性固有免疫(innate immune)通路依然知之甚少。RIP2,—種 NOD 樣受體(NOD-like receptors)的銜接分子(adaptor molecule)已經(jīng)被發(fā)現(xiàn)涉及胞內(nèi)菌的宿主反應(yīng)，但其在肺中對于胞外菌(如金黃色葡萄球菌)的宿主防御中所起的作用在很大程度上仍是個未知數(shù)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]金黃色葡萄球菌是造成社會獲得性肺炎和醫(yī)院獲得性肺炎的主要原因，但免疫系統(tǒng)如何識別金黃色葡萄球菌依然不得而知。RIP2 (receptor interacting protein2),一種核苷酸結(jié)合寡聚化結(jié)構(gòu)域NOD樣受體(nucleotide-binding oligomerizat1ndomain (NOD) -like receptors, NLRs)的銜接分子已經(jīng)被發(fā)現(xiàn)涉及胞內(nèi)菌的宿主反應(yīng)，但其在肺中對于胞外菌(如金黃色葡萄球菌)的宿主防御中所起的作用在很大程度上仍是個未知數(shù)。
[0006]鑒于以上所述現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明第一方面提供RIP2 (AAL96436.1)在篩選用于治療由金黃色葡萄球菌易感所引起的肺炎的藥物中的用途。
[0007]優(yōu)選的，所述用途為金黃色葡萄球菌易感動物模型構(gòu)建中的用途，具體為RIP2缺陷所引起的金黃色葡萄球菌易感。
[0008]更優(yōu)選的，所述易感動物模型為肺部易感動物模型。
[0009]進(jìn)一步優(yōu)選的，所述動物模型為小鼠動物模型。
[0010]所述篩選藥物可理解為，將待篩選的藥物分別給予構(gòu)建后的金黃色葡萄球菌易感動物模型與正常動物模型，并對動物模型進(jìn)行比較，從而對所述待篩選的藥物進(jìn)行生物活性、藥理作用及藥用價值的評估。
[0011]由于RIP2+小鼠對于金黃色葡萄球菌肺部易感，且RIP2+影響金黃色葡萄球菌肺部感染的早期細(xì)胞因子反應(yīng)，并阻礙細(xì)菌廓清，所以RIP2的缺陷可用于構(gòu)建金黃色葡萄球菌的肺部易感模型，在篩選用于治療由金黃色葡萄球菌易感所引起的肺炎的藥物中具有實(shí)際應(yīng)用價值。
[0012]本發(fā)明進(jìn)一步提供RIP2缺陷所引起的金黃色葡萄球菌肺部易感小鼠動物模型的構(gòu)建方法，所述方法具體為:對RIP2+小鼠進(jìn)行麻醉，將氣管暴露后進(jìn)行金黃色葡萄球菌感染，再對皮膚切口進(jìn)行縫合。
[0013]所述細(xì)菌感染的具體方法為:給予3 X 17CFU的30ul PBS。
[0014]本發(fā)明證實(shí)了 RIP2對肺部金黃色葡萄球菌宿主防御中的作用，并進(jìn)一步闡述了相關(guān)免疫機(jī)理。
[0015]本發(fā)明發(fā)明人發(fā)現(xiàn)RIP2-介導(dǎo)的固有免疫響應(yīng)在金黃色葡萄球菌所造成的肺炎的宿主防御中不可或缺；并率先證明了在肺部胞外菌感染的宿主防御中，N0D-RIP2激酶通路有著關(guān)鍵性的作用。
[0016]本發(fā)明第二方面提供IL-1R (interleukin-lreceptor) (EDL14572.1)在篩選用于治療由金黃色葡萄球菌易感所引起的肺炎的藥物中的用途。
[0017]優(yōu)選的，所述用途為金黃色葡萄球菌易感動物模型構(gòu)建中的用途，具體為IL-1R缺陷所引起的金黃色葡萄球菌易感。
[0018]更優(yōu)選的，所述易感動物模型為肺部易感動物模型。
[0019]進(jìn)一步優(yōu)選的，所述動物模型為小鼠動物模型。
[0020]本發(fā)明進(jìn)一步提供IL-1R缺陷所引起的金黃色葡萄球菌肺部易感小鼠動物模型的構(gòu)建方法，所述方法具體為:對IL-1R+小鼠進(jìn)行麻醉，將氣管暴露后進(jìn)行金黃色葡萄球菌感染，再對皮膚切口進(jìn)行縫合。
[0021]所述細(xì)菌感染的具體方法為:給予3 X 17CFU的30ul PBS。
[0022]由于IL-1R+動物展現(xiàn)出與RIP2+動物類似的表型，所以IL-1R的缺陷可用于構(gòu)建金黃色葡萄球菌的肺部易感模型，在篩選用于治療由金黃色葡萄球菌易感所引起的肺炎的藥物中具有實(shí)際應(yīng)用價值。
[0023]本發(fā)明第三方面提供IL-1 β (ΑΑΗ11437.1)在制備用于治療由金黃色葡萄球菌易感所引起的炎癥的藥物中的用途。
[0024]優(yōu)選的，所述炎癥為RIP2或IL-1R缺陷導(dǎo)致的金黃色葡萄球菌易感所引起的。
[0025]優(yōu)選的，所述炎癥為肺炎。
[0026]更優(yōu)選的，所述藥物的給藥方式為氣管給藥。
[0027]本發(fā)明進(jìn)一步提供由金黃色葡萄球菌易感所引起的肺炎的治療方法，所述方法具體為:給予有效量的重組白介素-1 β ;優(yōu)選給藥方式為氣管給藥。
[0028]本發(fā)明發(fā)明人通過氣管注射rIL-lb，恢復(fù)了 RIP2+和IL-1R+小鼠對于金黃色葡萄球菌的免疫響應(yīng)，驗(yàn)證了 IL-1 β在RIP2所介導(dǎo)的免疫反應(yīng)的重要作用。所以我們能夠證實(shí)IL-1 β在制備用于治療由金黃色葡萄球菌易感所引起的肺炎的藥物中具有實(shí)際應(yīng)用價值，具體為由RIP2或IL-1R缺陷所導(dǎo)致的金黃色葡萄球菌易感。
[0029]本發(fā)明發(fā)明人對RIP+，IL-1R+和野生型(WT)的同窩出生仔畜進(jìn)行金黃色葡萄球菌氣管注射，并觀察相關(guān)感染結(jié)果后發(fā)現(xiàn)，RIP2+小鼠對于金黃色葡萄球顯著易感，其在感染24h時肺部的細(xì)菌負(fù)荷明顯上升，且相對于WT小鼠，RIP+小鼠的存活率明顯下降。在感染的早期階段，我們發(fā)現(xiàn)在RIP2+小鼠中促炎性細(xì)胞因子(如IL-1 β，IL-6)和中性粒細(xì)胞趨化因子(如KC和MIP-2)產(chǎn)量衰減，并伴隨著肺部髓過氧化物酶活性的受損以及中性粒細(xì)胞浸潤的延誤。巧合的是，I