表現(xiàn)出不溶性微粒顯著減少的依那西普制劑的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及被穩(wěn)定化以便依那西普的長期儲存的含水藥物組合物，制造該組合物 的方法、該組合物的給藥方法以及包含該組合物的試劑盒，其中，該穩(wěn)定化的依那西普組合 物表現(xiàn)出不溶性微粒（sub-visible particle)的顯著減少。本發(fā)明包括不需要精氨酸用 于穩(wěn)定化的依那西普制劑。本發(fā)明還涉及使患者更少地遭受依那西普制劑中的不溶性微粒 的制品和方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 多肽通常必須在其使用之前儲存。當(dāng)長時(shí)間儲存時(shí)，多肽經(jīng)常在溶液中不穩(wěn)定 (Manning et al.，1989, Pharm. Res. 6:903-918)。為了延長其保質(zhì)期，已經(jīng)開發(fā)了另外的處 理步驟，諸如干燥，例如凍干。然而，凍干的藥物組合物使用不太方便。
[0003] 通過改變制劑的元素的濃度，或者通過添加賦形劑來修改該制劑可以提出提高多 肽穩(wěn)定性的典型做法（參見，例如，美國專利第5580856和61715865號）。然而，使用添加劑 仍然可導(dǎo)致無活性的多肽。此外，在凍干的情況下，再水化步驟可導(dǎo)致多肽的失活，例如，通 過聚集或變性（Hora et al·，1992, Pharm. Res. ,9:33-36 ;Liu et al·，1991，Biotechnol. Bioeng. ,37:177-184)。不希望多肽聚集，因?yàn)槠淇赡軙?dǎo)致免疫原性（Cleland et al.,1993,Crit. Rev. Therapeutic Drug Carrier Systems，10:307-377 ;and Robbins et al.，1987, Diabetes，36:838-845)。
[0004] 另一種提高多肽的穩(wěn)定性的方式是使用特定濃度的L-精氨酸（美國專利第 7648702 號）。
[0005] 在使用之前儲存長達(dá)兩年的一種多肽是依那西普（Ellbrel?, Immunex公司），其 是由連接于人IgGl的Fc部分的人75千道爾頓（P75)腫瘤壞死因子受體（TNFR)的胞外配 體結(jié)合部分組成的二聚融合多肽。其由934個(gè)氨基酸組成并且具有約150千道爾頓的表觀 分子量（Physicians Desk Reference, 2002, Medical Economics Company Inc·)。依那西 普的Fe組分包含重鏈恒定結(jié)構(gòu)域2 (CH2)、重鏈恒定結(jié)構(gòu)域3 (CH3)和鉸鏈區(qū)，但不包含人 IgGl的重鏈恒定結(jié)構(gòu)域I(CHl)。Fc結(jié)構(gòu)域可以包含上述結(jié)構(gòu)域中的一種或全部。依那西 普通常通過在中國倉鼠卵巢（CHO)哺乳動物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)中的重組DNA技術(shù)產(chǎn)生。
[0006] 藥物蛋白質(zhì)制劑（包括依那西普制劑）中的公知問題是該種制劑傾向于表現(xiàn)出不 溶性微粒的存在。據(jù)認(rèn)為，當(dāng)對患者給藥蛋白質(zhì)制劑時(shí)，這種微粒與不希望的免疫反應(yīng)（免 疫原性）有關(guān)。這種免疫反應(yīng)會減少蛋白質(zhì)治療的有效性，并可能對患者有害。
[0007] 本發(fā)明提供一種實(shí)現(xiàn)長期儲存并且形成不溶性微粒的傾向顯著降低的新穎的穩(wěn) 定的依那西普液體制劑。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明提供一種含水藥物組合物，包括依那西普和用于防止、抑制或者減少所述 組合物中的不溶性微粒的出現(xiàn)的穩(wěn)定劑，其中，所述穩(wěn)定劑包括表面活性劑，優(yōu)選地，所述 表面活性劑選自聚山梨醇酯表面活性劑和泊洛沙姆表面活性劑，其中與不包含表面活性劑 的依那西普組合物相比，所述表面活性劑能夠使得所述組合物中的不溶性微粒顯著減少。 本發(fā)明考慮使用能夠達(dá)到不溶性微粒的期望減少的任何藥學(xué)上可接受的表面活性劑。
[0009] 在另一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明是一種包括依那西普和用于防止、抑制或者減少所 述組合物中的不溶性微粒的出現(xiàn)的穩(wěn)定劑的含水藥物組合物，其中，所述穩(wěn)定劑包括選自 聚山梨醇酯表面活性劑和泊洛沙姆表面活性劑的表面活性劑。所述穩(wěn)定劑包括選自聚山 梨醇酯80、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯40和聚山梨醇酯20的聚山梨醇酯表面活性劑，或 者泊洛沙姆表面活性劑，諸如，例如普朗尼克F-68。意外地，本發(fā)明的制劑在不需要商業(yè) Enbrel?制劑中存在的精氨酸穩(wěn)定劑的情況下表現(xiàn)出優(yōu)良的穩(wěn)定性和不溶性微粒的減少。 因此，所述制劑優(yōu)選地不含有精氨酸，或者基本上不含有精氨酸。
[0010] 在本發(fā)明的又一個(gè)實(shí)施方式中，包含針對不溶性微粒的形成而用于穩(wěn)定化的聚山 梨醇酯或者泊洛沙姆表面活性劑的依那西普制劑可以進(jìn)一步包括選自以下的額外的穩(wěn)定 化成分：（i)選自絲氨酸、脯氨酸和谷氨酸鹽的氨基酸；（ii)選自鈣、鎂和鋅的金屬離子； (iii)選自單獨(dú)的木糖醇、或者木糖醇和葡甲胺的組合的木糖醇穩(wěn)定劑；（iv)選自單獨(dú)的 氯化鈉；氯化鈉與蔗糖或者海藻糖的組合，以及氯化鈉、蔗糖和海藻糖的組合的氯化鈉穩(wěn)定 劑；(V)選自單獨(dú)的葡甲胺；葡甲胺與蔗糖的組合；葡甲胺與氯化鈉的組合；葡甲胺與氯化 鈉和蔗糖的組合的葡甲胺穩(wěn)定劑；和（vi)糖和多元醇的組合。
[0011] 因此，在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明提供包括依那西普、針對不溶性微粒的形成而用 于穩(wěn)定化的聚山梨醇酯或者泊洛沙姆表面活性劑、和抑制依那西普的不穩(wěn)定、聚集和/或 片段化的另外的穩(wěn)定劑成分的穩(wěn)定的含水藥物組合物，其中，該另外的穩(wěn)定劑包括選自絲 氨酸、脯氨酸和谷氨酸鹽的化合物。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，該穩(wěn)定劑包括谷氨酸鹽。
[0012] 在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明提供包括依那西普、針對不溶性微粒形成而用于穩(wěn)定 化的聚山梨醇酯或者泊洛沙姆表面活性劑、和抑制依那西普的不穩(wěn)定、聚集和/或片段化 的另外的穩(wěn)定劑的穩(wěn)定的含水藥物組合物，其中，所述另外的穩(wěn)定劑包括穩(wěn)定化金屬離子。 優(yōu)選地，所述表面活性劑是聚山梨醇酯80或者普朗尼克F-68,并且所述金屬離子選自鈣、 鎂、鋅或者它們的組合。在甚至更優(yōu)選的實(shí)施方式中，鈣、鎂、鋅分別作為氯化鈣、氯化鎂和 氯化鋅提供。特別優(yōu)選氯化鈣和氯化鎂作為用于依那西普的穩(wěn)定劑。
[0013] 在又一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明提供包括依那西普、針對不溶性微粒形成而用于穩(wěn) 定化的聚山梨醇酯或者泊洛沙姆表面活性劑、和抑制依那西普的不穩(wěn)定、聚集和/或片段 化的另外的穩(wěn)定劑成分的穩(wěn)定的含水藥物組合物，其中，所述另外的穩(wěn)定劑選自離子多元 醇衍生物，諸如葡甲胺、甘露糖基甘油酸酯、葡糖基甘油酸酯、甘露糖基乳酸酯、甘露糖基乙 醇酸酯和磷酸二甘油酯。在該實(shí)施方式中，優(yōu)選的依那西普含水穩(wěn)定化制劑包括：依那西 普；山梨醇酯80表面活性劑或者普朗尼克表面活性劑；和阻止制劑中的依那西普的不穩(wěn) 定、聚集和片段化的穩(wěn)定化成分，所述穩(wěn)定化成分由（a)葡甲胺；或者（b)葡甲胺與蔗糖的 組合；或者（c)葡甲胺與氯化鈉的組合；或者（d)葡甲胺與氯化鈉和蔗糖的組合組成。
[0014] 在又一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明提供包括依那西普、針對不溶性微粒形成而用于穩(wěn) 定化的聚山梨醇酯或者泊洛沙姆表面活性劑、和抑制依那西普的不穩(wěn)定、聚集和/或片段 化的另外的穩(wěn)定劑成分的穩(wěn)定的含水藥物組合物，其中，所述另外的穩(wěn)定劑包括糖和多元 醇的組合。優(yōu)選地，表面活性劑是PS-80或者普朗尼克F-68,所述糖是蔗糖以及所述多元醇 選自甘露醇和山梨醇。在該實(shí)施方式的又一方面中，所述糖是右旋糖以及所述多元醇選自 甘露醇和山梨醇。在本實(shí)施方式的特別優(yōu)選的實(shí)施例中，本發(fā)明涉及穩(wěn)定化的依那西普制 劑，其中，存在蔗糖和甘露醇的組合以提供依那西普單體的穩(wěn)定化。
[0015] 在又一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明提供包括依那西普、針對不溶性微粒形成而用于穩(wěn) 定化的聚山梨醇酯或者泊洛沙姆表面活性劑的穩(wěn)定的含水藥物組合物，其中，本發(fā)明提供 用于降低依那西普的不穩(wěn)定、聚集和/或片段化的另外的用于穩(wěn)定化的成分，所述制劑包 括約25至約75mg/ml的依那西普和一種或者多種穩(wěn)定劑，其中，所述另外的穩(wěn)定劑成分選 自（i)氯化鈉和（ii)氯化鈉與蔗糖或者海藻糖的組合；以及（iii)氯化鈉、蔗糖和海藻糖 的組合；其中，用于減少不溶性微粒的穩(wěn)定劑/表面活性劑優(yōu)選PS 80或者普朗尼克F-68。
[0016] 在又一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明提供包括依那西普、針對不溶性微粒形成而用于穩(wěn) 定化的聚山梨醇酯或者泊洛沙姆表面活性劑（優(yōu)選PS-80或者普朗尼克F-68)的穩(wěn)定的含 水藥物組合物，其中，本發(fā)明提供用于降低依那西普的不穩(wěn)定、聚集和/或片段化的另外的 穩(wěn)定化的成分，其中所述另外的穩(wěn)定劑包括木糖醇或者木糖醇和葡甲胺的組合。
[0017] 本發(fā)明還涉及用于降低依那西普制劑中的不溶性微粒的數(shù)量的方法，所述方法包 括以構(gòu)成所述制劑的約0· 0001至約0· 5w/v% (優(yōu)選約0· 01至0· 05w/v% )的量向依那西 普制劑加入表面活性劑（優(yōu)選聚山梨醇酯或者泊洛沙姆表面活性劑）的步驟，從而使得與 在不存在所述表面活性劑的情況下制備的相同制劑相比，每毫升制劑中的具有約1至10微 米的尺寸的不溶性微粒的數(shù)量減少至少50%，并且優(yōu)選減少至少約60至70% ;其中，通過 在制備制劑時(shí)以及在其任何可感知的儲存或者熱應(yīng)力之前進(jìn)行的流式影像分析測量不溶 性微粒的數(shù)量。
[0018] 在又一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明提供一種制品，所述制品包括包含最終劑型的依那 西普制劑的容納裝置，其中，所述制劑包括依那西普和藥學(xué)上可接受的表面活性劑，其中， 與不具有表面活性劑的相同制劑相比，制劑中存在的不溶性微粒的量大幅降低。在所述制 劑中以范圍為0.0005-1% (w/v)的量存在的表面活性劑優(yōu)選是如上所述的聚山梨醇酯（例 如，聚山梨醇酯80)或者泊洛沙姆表面活性劑（例如，普朗尼克F-68)。如果需要，所包含的 制劑可以包括一種或者多種以上討論的另外的穩(wěn)定化的成分。通過諸如流式影像分析的常 規(guī)手段在"T0"時(shí)確定的所包含的制劑中的不溶性微粒的量優(yōu)選是使得所述制劑具有（i) 每毫升少于約2500個(gè)、尺寸為約5-10 μ m的微粒；（ii)少于約3500個(gè)、尺寸為約2-5 μ m的 微粒和（iii)每毫升少于約700個(gè)、尺寸為約1-2 μ m的微粒。與不具有表面活性劑的相同 的所包含的制劑相比，所包含的依那西普/表面活性劑制劑中存在的不溶性微粒的水平優(yōu) 選表現(xiàn)出不溶性微粒的至少約50% -70%的減少。
[0019] 在又一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明提供一種使受試者更少地遭受依那西普制劑中的不 溶性微粒的方法，所述方法包括對所述受試者施用包括依那西普和藥學(xué)上可接受的表面活 性劑的依那西普制劑，其中，與不具有表面活性劑的相同制劑相比，制劑中存在的不溶性微 粒的量大幅減少。在所述制劑中以范圍為0.0005-1 % (w/v)的量存在的表面活性劑優(yōu)選是 如上所述的聚山梨醇酯（例如，聚山梨醇酯80)或者泊洛沙姆表面活性劑（例如，普朗尼克 F-68)。如果需要，所包含的制劑可以包括一種或者多種以上討論的另外的穩(wěn)定化成分。通 過諸如流式影像分析的常規(guī)手段在"T0"時(shí)確定的所述制劑中的不溶性微粒的量優(yōu)選是使 得所述制劑具有（i)每毫升少于約2500個(gè)的尺寸為約5-10 μ m的微粒；（ii)少于約3500 個(gè)的尺寸為約2-5 μ m的微粒和（iii)每毫升少于約700個(gè)的尺寸為約1-2 μ m的微粒。與 不具有表面活性劑的相同的制劑相比，依那西普/表面活性劑制劑中存在的不溶性微粒的 水平優(yōu)選表現(xiàn)出不溶性微粒的至少約50% -70%的減少。
[0020] 不同于市售的依那西普，我們發(fā)現(xiàn)，令人意外的是本文所描述和例舉的每個(gè)依那 西普的制劑實(shí)施方式都不需要用于長期穩(wěn)定化的精氨酸，但是如果需要仍然可以加入精氨 酸。再者，含有或不含有精氨酸，并且利用本文所述的表面活性劑，該制劑能夠表現(xiàn)出不溶 性微粒的優(yōu)良降低。提供不利用精氨酸穩(wěn)定化的依那西普制劑的能力，以及表現(xiàn)出對不溶 性微粒形成的優(yōu)良抵抗，通過為患者和醫(yī)療服務(wù)人員提供與需要精氨酸來穩(wěn)定化的現(xiàn)有商 業(yè)依那西普制劑（即，Enbrel? )相比可以以更低的成本獲得的依那西普的替代制劑（包 括商業(yè)Enbrel?的生物仿制藥和生物改進(jìn)變體）顯示出對醫(yī)療系統(tǒng)的潛在顯著益處。在減 少蛋白治療的免疫原性方面，不溶性微粒的減少也被看作是一個(gè)非常顯著的優(yōu)點(diǎn)。
[0021] 如本文所用的術(shù)語"不穩(wěn)定"或類似術(shù)語表示依那西普單體在儲存期間經(jīng)歷各種 不希望的轉(zhuǎn)化的傾向，包括可能導(dǎo)致不同粒徑的不溶性微粒的形成或者出現(xiàn)的轉(zhuǎn)化。這種 轉(zhuǎn)化包括非常高分子量的（多種）聚集體的形成，其中基本上完整的依那西普單體的多個(gè) 拷貝通過各種非共價(jià)的吸引力（例如，靜電相互作用）彼此隨機(jī)地相關(guān)聯(lián)。在儲存期間不 希望的轉(zhuǎn)化還可以包括依那西普單體降解成更小的片段和/或低聚物。理想的情況下，依 那西普制劑應(yīng)盡量（在最大程度上）減少制劑在儲存過程中造成的不溶性微粒、依那西普 單體的聚集體、低聚體和/或片段的形成的傾向。由降低不需要的聚集體或者片段的形成 的能力帶來的重要益處是藥物的免疫原性的降低。
[0022] 可以以任選地不含有或者基本上不含有精氨酸的制劑提供以上提及的每個(gè)實(shí)施 方式。術(shù)語"基本上不含有精氨酸"意圖表示精氨酸（即便存在）不有助于制劑中的依那 西普單體的穩(wěn)定化以致于本領(lǐng)域的技術(shù)人員將從穩(wěn)定化的立場判斷其存在益處。
[0023] 從以下各個(gè)實(shí)施方式的描述可以明顯看出這些和其他方面，但是可能影響其中的 變化和修改而不偏離本公開的新穎構(gòu)思的精神和范圍。
[0024] 應(yīng)該理解的是，前述一般描述和以下的詳細(xì)描述都只是示例和說明性的，并不如 所要求地限制本發(fā)明。
[0025] 附圖的簡要說明
[0026] 圖1是表示對應(yīng)于說明書的表VIII中的數(shù)據(jù)的在"T0"時(shí)測量的不溶性微粒的 流式影響分析的柱狀圖。如在說明書中進(jìn)一步