鹽酸氟桂利嗪在制備抑制腫瘤細胞轉(zhuǎn)移和擴散的藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及鹽酸氟桂利嗪在制藥領(lǐng)域新的用途，具體涉及鹽酸氟桂利嗪在制備抑 制腫瘤細胞轉(zhuǎn)移和擴散的藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 鹽酸氟桂利嗪是是一種鈣通道阻斷劑，能防止因缺血等原因?qū)е碌募毎麅?nèi)病理性 鈣超載而造成的細胞損害。適用于腦動脈硬化，腦血栓形成，腦栓塞，高血壓所致的腦循環(huán) 障礙，腦出血，蛛網(wǎng)膜所致的腦循環(huán)障礙，腦出血等。
[0003] 鹽酸氟桂利嗪能防止因缺血等原因?qū)е碌募毎麅?nèi)病理性鈣超載而造成的細胞損 害，主要作用有 ： (1) 緩解血管痙攣，對血管收縮物質(zhì)引起的持續(xù)性血管痙攣有持久的抑制作用，尤其對 基底動脈和頸內(nèi)動脈明顯，其作用比腦益嗪強15倍； (2) 前庭抑制作用，能增加耳蝸小動脈血流量，改善前庭器官循環(huán)； (3) 抗癲癇作用，可阻斷神經(jīng)細胞的病理性鈣超載而防止陣發(fā)性去極化，細胞放電，從 而避免癲癇發(fā)作； (4) 保護心肌，明顯減輕缺血性心肌損害； (5) 氟桂利嗪尚有改善腎功能之作用，可用于慢性腎功能衰竭；另外本品還有抗組織胺 作用。
[0004] 現(xiàn)有公開文獻中尚未發(fā)現(xiàn)鹽酸氟桂利嗪的其他藥理作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 發(fā)明目的：本發(fā)明目的在于提供一種鹽酸氟桂利嗪在制備抑制腫瘤細胞轉(zhuǎn)移和 擴散的藥物中的應(yīng)用。
[0006] 技術(shù)方案：鹽酸氟桂利嗪在制備抑制腫瘤細胞轉(zhuǎn)移和擴散的藥物中的應(yīng)用。
[0007] 優(yōu)選地，所述腫瘤細胞為結(jié)腸癌細胞。
[0008] 優(yōu)選地，其中鹽酸氟桂利嗪的濃度為0. 5uM~luM。
[0009] 發(fā)明人通過細胞層面的實驗研究發(fā)現(xiàn)，鹽酸氟桂利嗪對腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移能力有一 定的抑制作用。目前針對現(xiàn)有的適應(yīng)癥一般給藥途徑為口服，每次6~12mg(每次1~2片)。
[0010] 本發(fā)明需要根據(jù)現(xiàn)有的制劑服用方法為參考依據(jù)，在現(xiàn)有的細胞層面實驗基礎(chǔ)上 根據(jù)新的適應(yīng)癥療效以及后續(xù)相關(guān)實驗設(shè)計確定新的臨床給藥方法及劑量。
[0011] 本發(fā)明通過將腫瘤細胞采集培養(yǎng)后，再利用藥物刺激細胞，觀察細胞形態(tài)、并定量 分析細胞層的面積，即細胞能夠與其他細胞接觸的面積，從而判斷腫瘤細胞的擴散能力。細 胞層面積越大越有利于與其他細胞形成連接。細胞遷移需要內(nèi)外因素的配合。外部的因素 指的是細胞外的信號分子。內(nèi)部因素則指細胞的信號傳導(dǎo)系統(tǒng)和執(zhí)行運動的細胞骨架和分 子馬達，還有參與粘著斑形成的各種分子。細胞外信號結(jié)合胞膜受體完成其使命后，需要 細胞內(nèi)信號分子接力，將運動信息進一步傳給細胞遷移的執(zhí)行單位一細胞骨架和分子馬 達。種類繁多的細胞內(nèi)信號分子會相互作用，影響后述這兩種分子的分布，結(jié)構(gòu)和活性，達 到精細調(diào)整細胞運動的目的。由此可見，腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移，與細胞本身以及細胞之間的關(guān)系 緊密。
[0012] 癌細胞與其同源正常組織相比，細胞間的粘著性降低，故癌細胞在體內(nèi)容易分散 和轉(zhuǎn)移。在正常細胞外被中的纖粘連蛋白是一種細胞外粘著糖蛋白，它增強了細胞與細胞 外基質(zhì)間的粘著。癌細胞的纖粘連蛋白顯著減少或缺失，鈣粘蛋白合成發(fā)生障礙，從而破 壞了細胞與基質(zhì)之間和細胞與細胞之間的粘著，因此癌細胞具有易于侵潤組織和轉(zhuǎn)移的屬 性。癌細胞的面積的增大增強了各個細胞之間的接觸面積更利于相互之間的粘連和附著。
[0013]雖然腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移是由多種因素共同形成導(dǎo)致的，但是以細胞層的面積，即細 胞能夠與其他細胞接觸的面積作為細胞轉(zhuǎn)移能力大小的依據(jù)，以此作為細胞間連接強度的 測定的方法，具有成本低廉、操作簡便、結(jié)果易判的優(yōu)點，其表現(xiàn)出來的細胞面積增大是最 容易直接觀察辨別的，主要就是通過加藥刺激后對細胞間連接分子E-Cadherin蛋白質(zhì)進 行免疫染色，繼而進行定量測定。細胞層面積越大越有利于與其他細胞形成連接。
[0014]本發(fā)明以為鹽酸氟桂利嗪為實驗對象，評估考量其在抑制腫瘤細胞轉(zhuǎn)移的能力評 價。具體以藥物刺激前后細胞面積的變化為主要依據(jù)。
[0015] 有益效果：1、本發(fā)明利用鹽酸氟桂利嗪制備的藥物對腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移能力進行抑 制，鹽酸氟桂利嗪為低毒藥物，可在腫瘤擴散過程中起到較大的阻斷作用，與此同時再采用 其他相關(guān)腫瘤藥物進行治療，可以大量減少正常細胞的死亡量；而現(xiàn)有的腫瘤藥物多為細 胞毒藥物，在殺死腫瘤細胞的同時大量正常細胞也一起死亡；2、本發(fā)明所使用的鹽酸氟桂 利嗪為成藥庫的現(xiàn)有藥物化合物，研發(fā)周期與新藥研發(fā)的周期相比可明顯減少。
【附圖說明】
[0016] 圖1為0. 5uM濃度鹽酸氟桂利嗪處理后的結(jié)腸癌細胞圖； 圖2為IuM濃度鹽酸氟桂利嗪處理后的結(jié)腸癌細胞圖； 圖3為5uM濃度鹽酸氟桂利嗪處理后的結(jié)腸癌細胞圖； 圖4為IOuM濃度鹽酸氟桂利嗪處理后的結(jié)腸癌細胞圖； 圖5為50uM濃度鹽酸氟桂利嗪處理后的結(jié)腸癌細胞圖； 圖6為IOOuM濃度鹽酸氟桂利嗪處理后的結(jié)腸癌細胞圖； 圖7為陽性對照組，由10uM濃度nocodazole處理后的結(jié)腸癌細胞圖； 圖8為陰性對照組。
【具體實施方式】
[0017]下面通過附圖對本發(fā)明技術(shù)方案進行詳細說明，但是本發(fā)明的保護范圍不局限于 所述實施例。
[0018] 實施例1:鹽酸氟桂利嗪在制備抑制結(jié)腸癌細胞轉(zhuǎn)移和擴散的藥物中的應(yīng)用。具 體實驗方案如下： 1、實驗材料 本發(fā)明實驗階段采用的是結(jié)腸癌細胞（HT29)，陽性對照采用的藥物是nocodazole(實 驗濃度為10uM)。陰性對照組沒有經(jīng)過任何處理。
[0019] 其中實驗采用鹽酸氟桂利嗪化合物C26H28C12f2N2,CASNO.為30484-77-6， 52468-60-7 [flunarazine]，濃度分別為 100uM，50uM，10uM，5uM，luM，0.5uM。
[0020] 2、實驗方法 對培養(yǎng)24小時的結(jié)腸癌細胞(細胞密度：IO5)進行藥物刺激2小時處理： (1) 將培養(yǎng)皿中狀態(tài)較好的結(jié)腸癌細胞離心，加入適量培養(yǎng)液制成細胞懸浮液； (2) 取細胞懸液計數(shù)，按照IO5的密度加入24孔盤中，放入37°C的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)； (3) 24小時后，換液，培養(yǎng)液中加入相應(yīng)量的鹽酸氟桂利嗪化合物配置到實驗所需濃 度，以及陽性對照藥物，然后繼續(xù)培養(yǎng)2小時； (4) 培養(yǎng)2小時后將細胞于2%的PFA溶液下37°C固定10分鐘，再進行熒光染色。
[0021] 3、實驗結(jié)果處理 對熒光染色后的結(jié)腸癌細胞觀察，將觀察的圖片用ImageJ處理并計算其細胞面積在 加藥前后的數(shù)據(jù)，Ratio是實驗組與陰性對照組的比值。結(jié)果見表1。
[0022] 表1鹽酸氟桂利嗪對HT29細胞刺激2小時后的面積大小
【主權(quán)項】
1. 鹽酸氟桂利嗪在制備抑制腫瘤細胞轉(zhuǎn)移和擴散的藥物中的應(yīng)用。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其中腫瘤細胞為結(jié)腸癌細胞。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其中鹽酸氟桂利嗪的濃度為0. 5uM~luM。
【專利摘要】本發(fā)明公開鹽酸氟桂利嗪在制備抑制腫瘤細胞轉(zhuǎn)移和擴散的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明利用鹽酸氟桂利嗪制備的藥物對腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移能力進行抑制，鹽酸氟桂利嗪為低毒藥物，可在腫瘤擴散過程中起到較大的阻斷作用，與此同時再采用其他相關(guān)腫瘤藥物進行治療，可以大量減少正常細胞的死亡量；而現(xiàn)有的腫瘤藥物多為細胞毒藥物，在殺死腫瘤細胞的同時大量正常細胞也一起死亡。
【IPC分類】A61P35-04, A61K31-495
【公開號】CN104644636
【申請?zhí)枴緾N201510069894
【發(fā)明人】滕文臣
【申請人】南京聞智生物科技有限公司
【公開日】2015年5月27日
【申請日】2015年2月10日