一種上焦水飲內(nèi)停大鼠模型及其構(gòu)建方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種上焦水飲內(nèi)停大鼠模型及其構(gòu)建方法，屬于醫(yī)療評(píng)價(jià)、檢測技術(shù) 領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 中醫(yī)認(rèn)為肺居于上焦，故稱"華蓋"又稱之為"水之上源"。肺的主要生理功能是主 氣、司呼吸、主宣發(fā)肅降，通調(diào)水道。津液的運(yùn)行敷布與肺的宣降運(yùn)動(dòng)有關(guān)。"脾氣散精，上歸 于肺，"肺通過宣發(fā)作用將津液敷布到頭面諸竅，皮毛腠理。而藉著其肅降作用將津液輸送 至其他臟腑，下注膀胱，如此則水精四布，五經(jīng)并行，臟腑及全身皆得營養(yǎng)。肺為水之上源， 肺氣宣降失職，水精不得四布，則留飲與肺中為痰為飲。痰飲蘊(yùn)肺又能引起肺氣郁而不宣或 逆而不降，即所謂"痰因氣成，氣因痰成"。
[0003] 上焦水飲內(nèi)停是臨床常見證型，許多慢性疾病均伴有上焦水飲內(nèi)停證。其主要是 由于氣道梗阻，外感風(fēng)寒，淤血阻肺等原因?qū)е路问?，通調(diào)失職，聚水為痰飲?！夺t(yī)貫?內(nèi) 經(jīng)十二官?形景圖記》："喉下為肺，兩葉白瑩，謂之華蓋，以覆諸臟，虛如蜂巢，下元透竅，故 吸之則滿，呼之則虛，一呼一吸，本之有源，無有窮也，乃清濁之交運(yùn)，人身之橐龠"。肺為呼 吸之橐龠，是清氣吸入，濁氣排出的產(chǎn)所，這一清濁交運(yùn)是肺宣發(fā)肅降的具體表現(xiàn)。氣道梗 阻，則有礙于肺宣發(fā)肅降的協(xié)調(diào)共濟(jì)，導(dǎo)致水濕停聚?！毒霸廊珪吩疲?風(fēng)寒之痰以邪自皮 毛，侵襲與肺，肺氣不清乃至生痰"?？梢婏L(fēng)寒外襲，內(nèi)舍于肺，影響肺之氣化，肺津不布，可 凝為痰飲。關(guān)幼波老師亦提出"痰與血同屬陰，易于膠結(jié)凝固，氣血流暢則津液并行，無痰以 生，氣滯血瘀痰結(jié)"是言血行淤阻而生痰。《金匱》心水者，其身少氣，不得臥，煩而躁，其人 陰腫。這些描述與心衰臨床癥狀相似?？梢娦闹餍醒?，血行不利，淤血一旦形成，也可影響 肺失宣降，使水濕停聚生痰飲。
[0004] 為進(jìn)一步深入探討上焦水飲內(nèi)停本質(zhì)及探尋其有效治療中藥，很有必要進(jìn)行上焦 水飲內(nèi)停大鼠模型復(fù)制的研宄。模型復(fù)制時(shí)需考慮動(dòng)物的生物學(xué)特性，盡量選擇與人生理、 代謝、疾病特點(diǎn)相似，符合試驗(yàn)?zāi)康牡膭?dòng)物。由于動(dòng)物癥狀、體征采集的復(fù)雜性，故理性的動(dòng) 物模型不僅要求在癥狀體征上與人相近或相同，更需要用量化的客觀指標(biāo)來準(zhǔn)確評(píng)價(jià)。
[0005] 目前，還未見有上焦水飲內(nèi)停大鼠模型。僅見痰濁蘊(yùn)肺，寒飲蘊(yùn)肺，等大鼠模型的 報(bào)道，多采用熏煙、氣管滴注脂多糖、外加寒冷刺激的方法造模。但病因、表現(xiàn)等符合中醫(yī)理 論的指導(dǎo)的造模并不多見，中醫(yī)證候的研宄亟需符合中醫(yī)癥狀特點(diǎn)的動(dòng)物模型。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 針對上述現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的目的是提供一種上焦水飲內(nèi)停大鼠模型及其構(gòu)建方 法，以肺失宣降水飲內(nèi)停病機(jī)理論為指導(dǎo)，采用大鼠氣管插管，結(jié)合腹部皮下注射異丙腎上 腺素，外加寒冷刺激模擬肺失宣降，并設(shè)計(jì)專門時(shí)序，用大鼠誘導(dǎo)40天，建立一種上焦水飲 內(nèi)停大鼠模型。并主要從水濕這一方面進(jìn)行評(píng)價(jià)，結(jié)果表明該方法可成功復(fù)制上焦水飲內(nèi) 停動(dòng)物模型，而且該復(fù)制方法穩(wěn)定性、重復(fù)性好，簡單、客觀，符合中醫(yī)理論的指導(dǎo)。
[0007] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用下述技術(shù)方案：
[0008] -種上焦水飲內(nèi)停大鼠模型的構(gòu)建方法，包括以下步驟：
[0009] (1)將無特定病原體（SPF)級(jí)維斯塔爾（Wistar)大鼠置于獨(dú)立送回風(fēng)凈化籠 (IVC)中，飼以普通飼料，自由進(jìn)食、飲水；
[0010] (2)對Wistar大鼠給予異丙腎上腺素腹部皮下注射，第一天20mg/kg、第二天 10mg/kg、第三天5mg/kg、從第四天開始3mg/kg. d，連續(xù)20天，觀察兩周；
[0011] (3)行氣管內(nèi)置管：第34天，使用氣管插管裝置（包括氣管插管外套管、內(nèi)管，內(nèi) 置管套于內(nèi)管頂端）進(jìn)行氣管內(nèi)置管的置入。大鼠仰臥固定，氣道在食道上方，開口器上 挑，可見氣道口，聲門呈魚嘴狀開合，將插管弧度朝上，把握好大鼠呼吸節(jié)奏，趁聲門打開瞬 間迅速將準(zhǔn)備好的插管裝置插入大鼠氣管至標(biāo)記部位，聲門下lcm，先將內(nèi)管抽出，頂端的 氣管內(nèi)置管受外套管阻擋后斷開與裝置連接，抽出外套管，內(nèi)置管便被置入動(dòng)物氣管中，保 留7天；
[0012] (4)將行氣管內(nèi)置管后的Wistar大鼠每日置于溫度為0°C的冰柜中4小時(shí)，接受 寒冷刺激，連續(xù)7天。得到上焦水飲內(nèi)停大鼠模型。
[0013] 造模過程中，觀察大鼠一般狀況。模型建立結(jié)束后，以心肺組織病理學(xué)作為評(píng)價(jià)組 織損傷程度的客觀指標(biāo)，結(jié)合其他心肺損傷指標(biāo)（肺通透指數(shù)、肺泡灌洗液回收量、肺濕干 重比W/D、心肺臟器指數(shù)、肌酸激酶CK表達(dá)）來綜合評(píng)價(jià)上焦水飲內(nèi)停大鼠模型建立的成功 與否。
[0014] 本發(fā)明主要從水濕這一方面對上焦水飲內(nèi)停大鼠模型進(jìn)行評(píng)價(jià)，具體評(píng)價(jià)指標(biāo)如 下：
[0015] ①一般狀況觀察：模型組大鼠出現(xiàn)皮毛干枯晦暗，呼吸急促，伴有喘鳴音，唇舌黏 膜紫暗，鼻部有少量血性分泌物，活動(dòng)量差等癥狀；
[0016] ②肺通透指數(shù)、肺泡灌洗液回收量：統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果表明模型組大鼠肺通透指數(shù)明顯 升高（P〈0.05)肺泡灌洗液回收量明顯升高（P〈0.05);
[0017] ③大鼠臟器指數(shù)：統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果表明上焦水飲內(nèi)停模型組大鼠心臟重量及心臟器指 數(shù)顯著升高（P〈0.01)，肺濕干重比有明顯升高（P〈0.05)，肺臟重量、肺臟器指數(shù)有上升趨 勢；
[0018] ④肌酸激酶CK:統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果表明上焦水飲內(nèi)停模型組大鼠血清中肌酸激酶CK明 顯升高（P〈〇. 05);
[0019] ⑤肺組織病理學(xué)觀察上焦水飲內(nèi)停模型組大鼠肺組織肺泡間隔水腫增厚，炎性細(xì) 胞浸潤，肺泡腔內(nèi)充滿粉紅色水腫液，呈均質(zhì)狀，有肺水腫存在；
[0020] ⑥心組織病理學(xué)觀察上焦水飲內(nèi)停模型組大鼠心肌細(xì)胞肥大，部分心肌細(xì)胞有嗜 酸性變性和（或）壞死。
[0021] 本發(fā)明的有益效果：
[0022] (1)本發(fā)明解決了目前沒有上焦水飲內(nèi)停大鼠模型的不足，為規(guī)范、標(biāo)準(zhǔn)、科學(xué)的 評(píng)價(jià)中醫(yī)藥提供了一種新方法，具有造模方法簡單、易于操作和推廣，貼近臨床等優(yōu)點(diǎn)。
[0023] (2)本發(fā)明的建模方法穩(wěn)定性、重復(fù)性好，簡單、客觀，符合中醫(yī)理論的指導(dǎo)。
[0024] (3)本發(fā)明以Wistar大鼠作為建模的試驗(yàn)動(dòng)物，是動(dòng)物實(shí)驗(yàn)大鼠類最為常用及生 物醫(yī)學(xué)研宄中使用歷史最長的品種，廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)各領(lǐng)域的實(shí)驗(yàn)，其癥狀體征上與 人相近，建模更為理性、客觀。
【附圖說明】
[0025] 圖1大鼠肺組織病理學(xué)光學(xué)顯微鏡圖；
[0026] 圖中，1為空白組大鼠肺組織蘇木精一伊紅染色X40,2為模型組大鼠肺蘇木精一 伊紅染色組織X40,3為空白組大鼠肺組織蘇木精一伊紅染色X100,4為模型組大鼠肺組 織蘇木精一伊紅染色法X100;
[0027] 圖2大鼠心組織病理學(xué)光學(xué)顯微鏡圖；
[0028] 圖中，1為空白組大鼠心組織蘇木精一伊紅染色X200,2為模型組大鼠心組織蘇 木精一伊紅染色X 200, 3為空白組大鼠心組織蘇木精一伊紅染色X 400,4為模型組大鼠心 組織蘇木精一伊紅染色X 400。
【具體實(shí)施方式】
[0029] 結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的說明，應(yīng)該說明的是，下述說明僅是為了解釋本 發(fā)明，并不對其內(nèi)容進(jìn)行限定。
[0030] 實(shí)施例1 :上焦水飲內(nèi)停大鼠模