一種上焦水飲內(nèi)停大鼠模型及其構(gòu)建方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種上焦水飲內(nèi)停大鼠模型及其構(gòu)建方法,屬于醫(yī)療評(píng)價(jià)、檢測技術(shù) 領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 中醫(yī)認(rèn)為肺居于上焦,故稱"華蓋"又稱之為"水之上源"。肺的主要生理功能是主 氣、司呼吸、主宣發(fā)肅降,通調(diào)水道。津液的運(yùn)行敷布與肺的宣降運(yùn)動(dòng)有關(guān)。"脾氣散精,上歸 于肺,"肺通過宣發(fā)作用將津液敷布到頭面諸竅,皮毛腠理。而藉著其肅降作用將津液輸送 至其他臟腑,下注膀胱,如此則水精四布,五經(jīng)并行,臟腑及全身皆得營養(yǎng)。肺為水之上源, 肺氣宣降失職,水精不得四布,則留飲與肺中為痰為飲。痰飲蘊(yùn)肺又能引起肺氣郁而不宣或 逆而不降,即所謂"痰因氣成,氣因痰成"。
[0003] 上焦水飲內(nèi)停是臨床常見證型,許多慢性疾病均伴有上焦水飲內(nèi)停證。其主要是 由于氣道梗阻,外感風(fēng)寒,淤血阻肺等原因?qū)е路问?,通調(diào)失職,聚水為痰飲?!夺t(yī)貫?內(nèi) 經(jīng)十二官?形景圖記》:"喉下為肺,兩葉白瑩,謂之華蓋,以覆諸臟,虛如蜂巢,下元透竅,故 吸之則滿,呼之則虛,一呼一吸,本之有源,無有窮也,乃清濁之交運(yùn),人身之橐龠"。肺為呼 吸之橐龠,是清氣吸入,濁氣排出的產(chǎn)所,這一清濁交運(yùn)是肺宣發(fā)肅降的具體表現(xiàn)。氣道梗 阻,則有礙于肺宣發(fā)肅降的協(xié)調(diào)共濟(jì),導(dǎo)致水濕停聚?!毒霸廊珪吩疲?風(fēng)寒之痰以邪自皮 毛,侵襲與肺,肺氣不清乃至生痰"??梢婏L(fēng)寒外襲,內(nèi)舍于肺,影響肺之氣化,肺津不布,可 凝為痰飲。關(guān)幼波老師亦提出"痰與血同屬陰,易于膠結(jié)凝固,氣血流暢則津液并行,無痰以 生,氣滯血瘀痰結(jié)"是言血行淤阻而生痰。《金匱》心水者,其身少氣,不得臥,煩而躁,其人 陰腫。這些描述與心衰臨床癥狀相似??梢娦闹餍醒?,血行不利,淤血一旦形成,也可影響 肺失宣降,使水濕停聚生痰飲。
[0004] 為進(jìn)一步深入探討上焦水飲內(nèi)停本質(zhì)及探尋其有效治療中藥,很有必要進(jìn)行上焦 水飲內(nèi)停大鼠模型復(fù)制的研宄。模型復(fù)制時(shí)需考慮動(dòng)物的生物學(xué)特性,盡量選擇與人生理、 代謝、疾病特點(diǎn)相似,符合試驗(yàn)?zāi)康牡膭?dòng)物。由于動(dòng)物癥狀、體征采集的復(fù)雜性,故理性的動(dòng) 物模型不僅要求在癥狀體征上與人相近或相同,更需要用量化的客觀指標(biāo)來準(zhǔn)確評(píng)價(jià)。
[0005] 目前,還未見有上焦水飲內(nèi)停大鼠模型。僅見痰濁蘊(yùn)肺,寒飲蘊(yùn)肺,等大鼠模型的 報(bào)道,多采用熏煙、氣管滴注脂多糖、外加寒冷刺激的方法造模。但病因、表現(xiàn)等符合中醫(yī)理 論的指導(dǎo)的造模并不多見,中醫(yī)證候的研宄亟需符合中醫(yī)癥狀特點(diǎn)的動(dòng)物模型。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0006] 針對上述現(xiàn)有技術(shù),本發(fā)明的目的是提供一種上焦水飲內(nèi)停大鼠模型及其構(gòu)建方 法,以肺失宣降水飲內(nèi)停病機(jī)理論為指導(dǎo),采用大鼠氣管插管,結(jié)合腹部皮下注射異丙腎上 腺素,外加寒冷刺激模擬肺失宣降,并設(shè)計(jì)專門時(shí)序,用大鼠誘導(dǎo)40天,建立一種上焦水飲 內(nèi)停大鼠模型。并主要從水濕這一方面進(jìn)行評(píng)價(jià),結(jié)果表明該方法可成功復(fù)制上焦水飲內(nèi) 停動(dòng)物模型,而且該復(fù)制方法穩(wěn)定性、重復(fù)性好,簡單、客觀,符合中醫(yī)理論的指導(dǎo)。
[0007] 為實(shí)現(xiàn)上述目的,本發(fā)明采用下述技術(shù)方案:
[0008] -種上焦水飲內(nèi)停大鼠模型的構(gòu)建方法,包括以下步驟:
[0009] (1)將無特定病原體(SPF)級(jí)維斯塔爾(Wistar)大鼠置于獨(dú)立送回風(fēng)凈化籠 (IVC)中,飼以普通飼料,自由進(jìn)食、飲水;
[0010] (2)對Wistar大鼠給予異丙腎上腺素腹部皮下注射,第一天20mg/kg、第二天 10mg/kg、第三天5mg/kg、從第四天開始3mg/kg. d,連續(xù)20天,觀察兩周;
[0011] (3)行氣管內(nèi)置管:第34天,使用氣管插管裝置(包括氣管插管外套管、內(nèi)管,內(nèi) 置管套于內(nèi)管頂端)進(jìn)行氣管內(nèi)置管的置入。大鼠仰臥固定,氣道在食道上方,開口器上 挑,可見氣道口,聲門呈魚嘴狀開合,將插管弧度朝上,把握好大鼠呼吸節(jié)奏,趁聲門打開瞬 間迅速將準(zhǔn)備好的插管裝置插入大鼠氣管至標(biāo)記部位,聲門下lcm,先將內(nèi)管抽出,頂端的 氣管內(nèi)置管受外套管阻擋后斷開與裝置連接,抽出外套管,內(nèi)置管便被置入動(dòng)物氣管中,保 留7天;
[0012] (4)將行氣管內(nèi)置管后的Wistar大鼠每日置于溫度為0°C的冰柜中4小時(shí),接受 寒冷刺激,連續(xù)7天。得到上焦水飲內(nèi)停大鼠模型。
[0013] 造模過程中,觀察大鼠一般狀況。模型建立結(jié)束后,以心肺組織病理學(xué)作為評(píng)價(jià)組 織損傷程度的客觀指標(biāo),結(jié)合其他心肺損傷指標(biāo)(肺通透指數(shù)、肺泡灌洗液回收量、肺濕干 重比W/D、心肺臟器指數(shù)、肌酸激酶CK表達(dá))來綜合評(píng)價(jià)上焦水飲內(nèi)停大鼠模型建立的成功 與否。
[0014] 本發(fā)明主要從水濕這一方面對上焦水飲內(nèi)停大鼠模型進(jìn)行評(píng)價(jià),具體評(píng)價(jià)指標(biāo)如 下:
[0015] ①一般狀況觀察:模型組大鼠出現(xiàn)皮毛干枯晦暗,呼吸急促,伴有喘鳴音,唇舌黏 膜紫暗,鼻部有少量血性分泌物,活動(dòng)量差等癥狀;
[0016] ②肺通透指數(shù)、肺泡灌洗液回收量:統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果表明模型組大鼠肺通透指數(shù)明顯 升高(P〈0.05)肺泡灌洗液回收量明顯升高(P〈0.05);
[0017] ③大鼠臟器指數(shù):統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果表明上焦水飲內(nèi)停模型組大鼠心臟重量及心臟器指 數(shù)顯著升高(P〈0.01),肺濕干重比有明顯升高(P〈0.05),肺臟重量、肺臟器指數(shù)有上升趨 勢;
[0018] ④肌酸激酶CK:統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果表明上焦水飲內(nèi)停模型組大鼠血清中肌酸激酶CK明 顯升高(P〈〇. 05);
[0019] ⑤肺組織病理學(xué)觀察上焦水飲內(nèi)停模型組大鼠肺組織肺泡間隔水腫增厚,炎性細(xì) 胞浸潤,肺泡腔內(nèi)充滿粉紅色水腫液,呈均質(zhì)狀,有肺水腫存在;
[0020] ⑥心組織病理學(xué)觀察上焦水飲內(nèi)停模型組大鼠心肌細(xì)胞肥大,部分心肌細(xì)胞有嗜 酸性變性和(或)壞死。
[0021] 本發(fā)明的有益效果:
[0022] (1)本發(fā)明解決了目前沒有上焦水飲內(nèi)停大鼠模型的不足,為規(guī)范、標(biāo)準(zhǔn)、科學(xué)的 評(píng)價(jià)中醫(yī)藥提供了一種新方法,具有造模方法簡單、易于操作和推廣,貼近臨床等優(yōu)點(diǎn)。
[0023] (2)本發(fā)明的建模方法穩(wěn)定性、重復(fù)性好,簡單、客觀,符合中醫(yī)理論的指導(dǎo)。
[0024] (3)本發(fā)明以Wistar大鼠作為建模的試驗(yàn)動(dòng)物,是動(dòng)物實(shí)驗(yàn)大鼠類最為常用及生 物醫(yī)學(xué)研宄中使用歷史最長的品種,廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)各領(lǐng)域的實(shí)驗(yàn),其癥狀體征上與 人相近,建模更為理性、客觀。
【附圖說明】
[0025] 圖1大鼠肺組織病理學(xué)光學(xué)顯微鏡圖;
[0026] 圖中,1為空白組大鼠肺組織蘇木精一伊紅染色X40,2為模型組大鼠肺蘇木精一 伊紅染色組織X40,3為空白組大鼠肺組織蘇木精一伊紅染色X100,4為模型組大鼠肺組 織蘇木精一伊紅染色法X100;
[0027] 圖2大鼠心組織病理學(xué)光學(xué)顯微鏡圖;
[0028] 圖中,1為空白組大鼠心組織蘇木精一伊紅染色X200,2為模型組大鼠心組織蘇 木精一伊紅染色X 200, 3為空白組大鼠心組織蘇木精一伊紅染色X 400,4為模型組大鼠心 組織蘇木精一伊紅染色X 400。
【具體實(shí)施方式】
[0029] 結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的說明,應(yīng)該說明的是,下述說明僅是為了解釋本 發(fā)明,并不對其內(nèi)容進(jìn)行限定。
[0030] 實(shí)施例1 :上焦水飲內(nèi)停大鼠模