專利名稱：肝實質(zhì)細胞增殖因子藥用制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及治療或預(yù)防缺血性疾病或動脈疾病的藥用制劑，其有效成分為肝實質(zhì)細胞增殖因子(HGF)。具體地說，涉及一種肌肉內(nèi)用藥制劑，其中該制劑用于治療或預(yù)防心臟或四肢的缺血性疾病或動脈疾病、在患部及其周圍肌肉局部給藥。
背景技術(shù)：
肝實質(zhì)細胞增殖因子(HGF)作為對于成熟肝細胞的強力增殖促進因子被發(fā)現(xiàn)，是一種基因克隆蛋白質(zhì)(Biochem Biophys ResCommun,122,1450(1984)、Proc.Natl.Acad.Sci.USA,83,6489,(1986)、FEBS Letter,22,231(1987)、Nature,342,440(1989)、Proc.Natl.Acad.Sci.USA,87,3200,(1991))。通過其后的研究證實，在in vivo,HGF不僅作為肝再生因子在肝臟修復(fù)再生中起作用，它還具有血管新生作用，在缺血性疾病和動脈疾病的治療或預(yù)防中，起著重要的作用(Symp.Soc.Exp.Biol.,47cell behavior,227-234(1993),Proc.Natl.Acad.Sci.90,1937-1941(1993),Circulation,97,381-390(1998))。據(jù)報道，兔下肢缺血模型給藥時，發(fā)現(xiàn)HGF有顯著的血管新生作用，具有血流量改善、抑制血壓降低、缺血癥狀改善的效果。根據(jù)這些報道，認為HGF作為血管新生因子之一被發(fā)現(xiàn)、并發(fā)揮作用。
據(jù)此，HGF具有以血管新生因子的功能為主的各種功能，為使之作為醫(yī)藥品發(fā)揮作用，人們進行了各種嘗試。可是，在此成為問題的是HGF在血中的半衰期。HGF的半衰期短、約10分鐘，很難維持血藥濃度，另外，有效量HGF向患部的轉(zhuǎn)運也成為問題。
一般來說，蛋白性制劑多采用靜脈內(nèi)給藥，例如，對于上述缺血性疾病模型，HGF也有在靜脈和動脈內(nèi)給藥的例子(Circulation,97,381-390(1998))。這種動物模型，通過靜脈或動脈內(nèi)給藥，對于缺血性疾病或動脈疾病HGF的有效性盡管已被證明，但是具體有效的給藥方法及給藥量尚無定論。特別是HGF，既存在上述半衰期的問題、在患部的轉(zhuǎn)運問題，并且關(guān)于HGF的有效給藥方法或給藥量等，還沒有結(jié)論。
本發(fā)明的目的在于提供用于治療或預(yù)防缺血性疾病或動脈疾病的藥用制劑，其中該制劑含有有效成分HGF。具體地說，涉及一種肌肉內(nèi)用藥制劑，其中該制劑用于治療或預(yù)防心臟或四肢的缺血性疾病或動脈疾病，在患部及其周圍肌肉局部給藥。本發(fā)明的肌肉內(nèi)用藥制劑，例如直接給藥到受損部位的心臟、四肢缺血部位的肌肉內(nèi)，給藥后的HGF的利用效率非常大、與靜脈內(nèi)給藥相比，能夠減少用藥量。進而，由于從給藥部位的肌肉向除去血液、給藥部位的肌肉組織及其周圍組織外的全身的轉(zhuǎn)運、分布、作用少，所以能夠減輕對其他部位的作用，具有選擇性更高的效果。
針對將HGF適用于缺血性疾病或動脈疾病過程中，本發(fā)明者對于給藥量、給藥方法進行了銳意研究。對于上述疾病的HGF給藥方法，設(shè)定為靜脈內(nèi)團塊給藥、靜脈內(nèi)連續(xù)給藥、皮下給藥、腹腔內(nèi)給藥、肌肉內(nèi)給藥等，對此進行了研究。
如前所記，通常蛋白性制劑多為靜脈內(nèi)給藥，加之缺血性疾病及動脈疾病是血管損傷，所以從血管內(nèi)側(cè)使藥劑發(fā)揮作用有效。因此，對于缺血性疾病模型和動脈疾病模型，幾乎所有的HGF用藥例都是從靜脈或動脈內(nèi)給藥，關(guān)于HGF的肌肉內(nèi)給藥，包括文獻在內(nèi)無任何資料，而且未發(fā)現(xiàn)有關(guān)HGF藥代動力學(xué)的報道。這樣，對于缺血性疾病模型和動脈疾病模型，沒有進行肌肉內(nèi)用藥的報道，因此HGF的肌肉內(nèi)用藥是否有效，迄今完全未知。
本發(fā)明者使用大鼠，比較研究了在下肢缺血部位進行肌肉內(nèi)用藥的藥動學(xué)和其他用藥途徑(靜脈內(nèi)給藥)的藥動學(xué)。結(jié)果表明與靜脈內(nèi)給藥相比，在肌肉內(nèi)給藥時，所投與的HGF在給藥部位維持很高的濃度、在血清及肝、腎的轉(zhuǎn)運低。另外，HGF在皮下給藥時，與肌肉內(nèi)給藥一樣，也能在給藥部位維持高HGF濃度、從給藥部位向循環(huán)血中的轉(zhuǎn)移率低。
一方面，在靜脈內(nèi)給予HGF的情況下，與血中維持高HGF濃度相反，在肌肉內(nèi)的HGF濃度卻很低。由此，初次闡明如果想要HGF在缺血患部及其周圍肌肉或存在于這些地方的血管發(fā)揮作用的話，靜脈內(nèi)給藥的效果很差、而直接給藥到患部或其周圍肌肉有效。
另外，在比較HGF的肌肉內(nèi)給藥與靜脈內(nèi)團塊給藥時發(fā)現(xiàn)肌肉內(nèi)給藥時，血液、肝臟及腎贓的最大藥物濃度是靜脈內(nèi)團塊給藥的1/100以下，更確切地說是1/1000以下。進一步發(fā)現(xiàn)，在肌肉內(nèi)給藥時，給藥部位的肌肉組織內(nèi)濃度是靜脈內(nèi)團塊給藥的50倍以上，更確切地說是200倍以上。
進而，在肌肉內(nèi)給藥和靜脈內(nèi)團塊給藥兩種情況下，比較其血液、肝臟及腎贓中的AUC時發(fā)現(xiàn)在肌肉內(nèi)給藥時，血液、肝臟及腎贓中的AUC是靜脈內(nèi)團塊給藥時的1/5以下，更確切地說是1/10以下。
進一步發(fā)現(xiàn)給藥部位肌肉組織內(nèi)的AUC，在肌肉內(nèi)給藥時，是靜脈內(nèi)團塊給藥時的50倍以上，更確切地說是200倍以上。
由上可知，通過肌內(nèi)給藥，能維持HGF在給藥患部的高濃度，其次，就肌肉組織內(nèi)的HGF向患部組織和血管的轉(zhuǎn)運、是否能真正發(fā)揮HGF的作用進行了研究。即，以是否能發(fā)現(xiàn)c-Met的磷酸化作為指標，確認了HGF的功能。其中，c-Met為HGF的受體。結(jié)果表明，在大鼠肌內(nèi)給予30-3000μg/kgHGF時，在肌肉組織，c-Met的Tyr殘基受到磷酸化、被激活，但是在肝臟和腎臟組織，與未處理動物相比，其c-Met完全沒有被激活。該結(jié)果意味著HGF在給藥的肌肉組織發(fā)揮了作用、在肝臟和腎臟未顯示作用。
如上所述，由于HGF的作用得到確認后，本發(fā)明人為探討HGF肌肉內(nèi)給藥的有效性，使用閉塞性動脈硬化癥(ASO)的動物模型，進行了研究。即，用大鼠下肢缺血模型，探討了在進行上述肌肉內(nèi)給藥后，下肢缺血障礙得到多大程度的改善。作為研究方法用自動測溫儀測定下肢皮膚溫度，以抑制皮膚表面溫度的降低為指標，確認肌內(nèi)給藥的效果。結(jié)果發(fā)現(xiàn)通過肌肉內(nèi)給藥，缺血下肢的皮膚表面溫度的降低受到抑制。該結(jié)果顯示，由于HGF所具有的血管新生作用，缺血下肢的血行狀況得到改善、溫度的降低受到抑制。
根據(jù)以上試驗，對于ASO模型，HGF在肌內(nèi)給藥時的有效性初次得到證實。
進而，本發(fā)明人用大鼠下肢缺血ASO模型及兔下肢缺血ASO模型，在進行上述肌內(nèi)給藥后，測定了I/N比值(％)(缺血肢體血壓/正常肢體血壓×100)。結(jié)果證明，在低給藥量、低給藥次數(shù)情況下，I/N比值的改善有顯著性差異。該結(jié)果顯示，由于HGF具有的血管新生作用，缺血肢體的血行動態(tài)得到改善。進而，在兔模型還進行了血管造影，在給予HGF的動物群，血管造影斑點的增加率升高，具有顯著性差異。該結(jié)果顯示由于HGF的作用，促進了側(cè)副血行通路的發(fā)達。另外，對缺血肢關(guān)節(jié)的硬化度、缺血肢肢端的壞死。脫落及缺血肢下腿部潰瘍的有無進行研究時證實，通過HGF的肌內(nèi)給藥，以上各項有改善趨勢。
通過以上研究證實，對于缺血性疾病，HGF的肌內(nèi)給藥非常有效。
在上述實驗結(jié)果中，用自動測溫儀，有效性能得到確認，意味著對臨床上ASO患者、特別是從輕癥階段，有缺血下肢冷感這種自覺癥狀的患者，HGF的肌內(nèi)給藥有效，加上I/N比值和血管造影的恢復(fù)促進作用、又進一步確認了缺血肢體癥狀的減輕等改善效果，這顯示從初期ASO患者到嚴重ASO患者，通過HGF的肌內(nèi)給藥的治療是有效的。在發(fā)展到因缺血必須截去下肢的嚴重ASO之前，使ASO能夠在輕癥階段得到治療成為可能，因此，對于眾多的尚無有效治療方法的輕度ASO患者來說，本發(fā)明的肌內(nèi)用藥制劑能夠提供劃時代的治療方法，其中該治療方法能抑制、改善和恢復(fù)癥狀的發(fā)展。而且，能夠提供一種醫(yī)藥品，其中該藥品在低給藥量有效，而且與靜脈給藥時相比，在患部以外的部位作用少。
另外還證明，為了更大地發(fā)揮上述HGF的效果，理想的制劑為不含硫酸軟骨素等構(gòu)成細胞外基質(zhì)的蛋白聚糖以及含這些成分的蛋白載體。即，以膠原為基質(zhì)制成小丸，在探討硫酸軟骨素的配伍對于從小丸中釋放HGF的影響時，得到如下結(jié)論，與不配伍硫酸軟骨素而配伍了丙氨酸的含HGF小丸相比較，在配伍了硫酸軟骨素的含HGF小丸中，HGF釋放的快。這表明，不配伍硫酸軟骨素等構(gòu)成細胞外基質(zhì)的蛋白聚糖的HGF制劑，HGF的釋放慢。該現(xiàn)這意味著如上述那樣，不合硫酸軟骨素等構(gòu)成細胞外基質(zhì)的蛋白聚糖的HGF制劑，在給藥局部組織中易于保持，能夠抑制其經(jīng)血液向全身其他臟器的轉(zhuǎn)運、分布。
發(fā)明公開本發(fā)明是基于上述發(fā)現(xiàn)完成的。即、本發(fā)明涉及(1)一種制劑，該制劑的有效成分為HGF、使有效量的該因子向給藥部位的組織及其周圍組織轉(zhuǎn)運、分布、發(fā)揮作用，并且能夠減少在給藥部位以外的血液及全身組織的轉(zhuǎn)運、分布、作用。
(2)上述(1)記載的制劑，該制劑用于治療或預(yù)防缺血疾病或動脈疾病。
(3)上述(1)或(2)記載的肌肉內(nèi)給藥制劑，其中給藥部位為肌肉。
(4)上述(1)或(2)記載的肌肉內(nèi)給藥制劑、外用制劑或濕布劑，其給藥部位為皮下或表皮。
(5)上述(3)記載的肌肉內(nèi)給藥制劑，其給藥部位為骨骼肌或心肌。
(6)上述(1)、(2)、(3)或(5)記載的制劑、其特征在于在給藥部位的肌肉組織的轉(zhuǎn)運、分布、作用要遠遠超過在血液、肝臟及腎臟的轉(zhuǎn)運、分布、作用。
(7)上述(1)、(2)、(3)、(5)或(6)記載的肌肉內(nèi)給藥制劑、其特征在于與靜脈內(nèi)團塊給予同等劑量的、含有有效成分HGF的制劑時相比，在血液、肝臟及腎臟的最大濃度為1/100以下，給藥部位的肌肉組織內(nèi)濃度為50倍以上。
(8)上述(1)、(2)、(3)、(5)或(6)記載的肌肉內(nèi)給藥制劑、其特征在于與靜脈內(nèi)團塊給予同等劑量的、含有有效成分HGF的制劑時相比，在血液、肝臟及腎臟的AUC為1/5以下，在給藥部位的肌肉組織內(nèi)AUC為50倍以上。
(9)上述(1)、(2)、(3)、(5)、(6)、(7)或(8)記載的肌肉內(nèi)給藥制劑、該制劑用于治療或預(yù)防心臟或四肢的缺血性疾病或動脈疾病。
(10)上述(9)記載的肌肉內(nèi)給藥制劑、用于治療或預(yù)防心臟或四肢的缺血性疾病或動脈疾病、給藥部位是患部及其周圍肌肉局部。
(11)上述(1)、(2)、(3)、(5)、(6)、(7)、(8)、(9)或(10)記載的肌肉內(nèi)給藥制劑、其特征在于一次給藥量為0.01～500μg/kg。
(12)上述(11)記載的肌肉內(nèi)給藥制劑、其特征在于一次給藥量為0.1～10μg/kg。
(13)上述(1)～(12)中任意一項記載的制劑，其中動脈疾病為閉塞性動脈硬化癥。
(14)上述(1)～(12)中任意一項記載的制劑，其中缺血性疾病為缺血性心臟疾病。
(15)上述(1)～(14)中任意一項記載的制劑，其特征在于含有有效成分HGF，并且不含有結(jié)合、吸附HGF的物質(zhì)。
附圖簡述

圖1顯示的是在大鼠大腿后部肌肉內(nèi)給予HGF后、肌肉中的濃度變化。
圖2顯示的是在大鼠大腿部肌肉內(nèi)給予HGF后，血清中的濃度變化。
圖3顯示的是在大鼠大腿部肌肉內(nèi)給予HGF后，肝臟中的濃度變化。
圖4顯示的是在大鼠大腿部肌肉內(nèi)給予HGF后，腎臟中的濃度變化。
圖5顯示的是HGF對大鼠下肢缺血模型皮膚表面溫度的改善效果。
圖6顯示的是HGF從含HGF膠原(collagen millipellet)小丸中的釋放。
圖7顯示的是在大鼠大腿部肌肉內(nèi)給予HGF后，肌肉、肝臟、腎臟內(nèi)c-Met的磷酸化。
圖8顯示的是在兔下肢缺血ASO模型的肌肉內(nèi)給予HGF后，I/N比值(％)(缺血肢體血壓/正常肢體血壓×100)的測定結(jié)果。
圖9顯示的是在兔下肢缺血ASO模型的肌肉內(nèi)給予HGF后，下肢血壓I/N比值(％)變化的測定結(jié)果。
圖10顯示的是在兔下肢缺血ASO模型的肌肉內(nèi)給予HGF后，下肢血壓I/N比值(％)變化的測定結(jié)果。
圖11顯示的是在兔下肢缺血ASO模型的肌肉內(nèi)給予HGF后，血管造影斑點增加率的測定結(jié)果。
圖12顯示的是在大鼠下肢缺血ASO模型的肌肉內(nèi)給予HGF(1μg/kg×2次給藥)后、I/N比值的測定結(jié)果。
圖13顯示的是在大鼠下肢缺血ASO模型的肌肉內(nèi)給予HGF(3μg/kg×單次給藥)、I/N比值的測定結(jié)果。
實施發(fā)明的最佳形態(tài)在本發(fā)明中使用的HGF是眾所周知的物質(zhì)，只要能精制成作為醫(yī)藥品能使用的程度，能夠使用用各種方法制成的該物質(zhì)，另外，也可以使用市售的產(chǎn)品(例如，東洋紡株式會社，Code No.HGF-101等)。作為HGF的制備方法，例如培養(yǎng)能產(chǎn)生HGF的第一代培養(yǎng)細胞和株化細胞、從培養(yǎng)上清液等進行分離純化，能夠得到該HGF?；蛘呃眠z傳工程的方法，將編碼HGF的基因組入合適的媒體，將此插入適當?shù)乃拗鲀?nèi)進行轉(zhuǎn)化，從該轉(zhuǎn)化體的培養(yǎng)上清液能夠得到目的物重組HGF。(如參照Nature,342,400(1989)、日本特開平5-111383號公報、Biochem.Biophys.Res.Commun.163,967(1989)等)。對上述宿主細胞不加特殊限定，以前在生物工程方法中被使用的各種宿主細胞，例如大腸菌，酵母或動物細胞等都能夠使用。由此得到的HGF與天然型HGF有基本相同的作用，即便其氨基酸序列中的1個或數(shù)個氨基酸被置換、缺失及/或添加也可以，同樣糖甙被置換、缺失及/或添加也可以。
本發(fā)明的含HGF的制劑的特征在于使有效量的該因子轉(zhuǎn)運、分布、作用于給藥部位局部的組織及其周圍組織，并且能夠減少在給藥部位以外的血液及全身組織中的轉(zhuǎn)運、分布、作用。
作為具體的適應(yīng)疾病，例如可舉出稱為缺血性疾病或動脈疾病、目前為止HGF的藥效得到確認的所有循環(huán)系統(tǒng)疾病。即，作為心臟疾病可舉出缺血性心臟病，心肌梗塞，急性心肌梗塞，心肌癥，心絞痛、不穩(wěn)定心絞痛、冠狀動脈硬化、心功能不全等。作為四肢缺血性疾病可舉出閉塞性動脈硬化癥、血栓閉塞性脈管炎、血管損傷、動脈栓塞癥，動脈血栓癥，臟器動脈閉塞、動脈瘤等。
作為給藥方法，只要能滿足下述條件，任何給藥方法都可以。即，如上所述，能使有效量的HGF轉(zhuǎn)運、分布、作用于給藥部位局部的組織及其周圍組織，并且能夠減少該成分在給藥部位以外的血液及全身組織中的轉(zhuǎn)運、分布、作用。具體可舉出肌肉內(nèi)給藥(骨骼肌、心肌)、皮下或表皮給藥。作為給藥劑型，例如可舉出注射用水制劑或油性制劑、軟膏劑、霜劑、洗劑、氣霧劑、濕布劑等。進一步制成緩釋性小丸制劑，埋置于患部附近，或使用滲選泵等，在患部連續(xù)緩慢給藥也是可能的。這些制劑可使用迄今周知的技術(shù)制劑，對于有性成分HGF，也可以根據(jù)需要添加pH調(diào)整試劑、緩沖試劑、穩(wěn)定劑、防腐劑、或增溶劑等。
這種情況下，本發(fā)明的含HGF制劑，理想為不合在HGF上結(jié)合、吸附的物質(zhì)。即、在本發(fā)明中，不配伍硫酸軟骨素等細胞外基質(zhì)構(gòu)成成分的HGF制劑，與配伍了上述物質(zhì)的制劑相比，具有HGF從給藥部位釋放慢的特點。因此，能夠抑制HGF從給藥局部向血液、其它臟器的大量轉(zhuǎn)運。另外，與硫酸軟骨素一樣，由于配伍細胞外基質(zhì)構(gòu)成成分的肝素，血中的清除率受到抑制(Hepatology,20,417,(1994)),而本發(fā)明的制劑因不含細胞外基質(zhì)構(gòu)成成分、所以不會抑制HGF向血中轉(zhuǎn)運的清除率。因此，認為能夠進一步抑制向其它臟器的轉(zhuǎn)運性及反應(yīng)性，提高在給藥部位肌肉的有效性。
在此，作為結(jié)合、吸附HGF的物質(zhì)，例如可舉出糖、糖蛋白、糖脂質(zhì)、復(fù)合糖等細胞外基質(zhì)(基質(zhì))構(gòu)成成分。更具體地舉出硫酸軟骨素、硫酸乙酰肝素、肝素、肝素樣物質(zhì)等。含硫酸基的糖、糖蛋白、糖脂質(zhì)、復(fù)合糖等，吸附、結(jié)合于HGF上的物質(zhì)也同樣是這類物質(zhì)。另外，并不限于機體構(gòu)成成分，由于含有上述糖、糖蛋白、糖脂質(zhì)、復(fù)合糖的一部分，也同樣是吸附、結(jié)合于HGF上的物質(zhì)。作為吸附、結(jié)合于HGF上的物質(zhì)，也包含在蛋白制劑中使用的蛋白質(zhì)、糖蛋白質(zhì)等蛋白載體或在這些載體中含有的吸附、結(jié)合于HGF上的物質(zhì)。作為吸附·結(jié)合HGF的物質(zhì)，在蛋白制造中使用的蛋白質(zhì)、糖蛋白等的蛋白載體或含在這些物質(zhì)中在HGF上吸附、結(jié)合的物質(zhì)也包括在該范疇。作為本發(fā)明含HGF的制劑，理想為不含上述物質(zhì)的制劑，其中這些物質(zhì)能吸附、結(jié)合在HGF上。
另外，在蛋白制劑中，由于pH值和離子強度、離子濃度等條件的不同，或化學(xué)修飾等，蛋白質(zhì)的重合比例等物性有所差異。認為這種蛋白質(zhì)物性的差異也影響到本發(fā)明藥用制劑在肌肉等的給藥組織的保持、向血中的轉(zhuǎn)運。
如下述實施例所示，本發(fā)明的藥用制劑用藥量少也是其特征之一。作為給藥劑量，根據(jù)患者的癥狀、年齡、性別等有所差異，例如在成人患者的患部或其周圍肌肉組織內(nèi)給藥時，可舉出如下的給藥量。
即、1〕在本實施例，給藥量為1μg/kg時有效性得到確認2〕將在本實施例確認的大鼠有效給藥量(單位體重)換算成單位體表面積的給藥量，推定人的有效給藥量，考慮為0.2μg/kg程度，及3)在反復(fù)考慮本領(lǐng)域技術(shù)人員的技術(shù)常識、等，作為本發(fā)明制劑的給藥量，可舉例為至少在500μg/kg/次以下，更具體為0.01-500μg/kg/次，理想為0.1～10μg/kg/次的程度。另外，作為給藥期間·給藥頻率，可例舉為給藥期間最長為3個月以內(nèi)、一周1～2次的給藥頻率，理想為1周以內(nèi)的給藥期間，每周7次以下的給藥頻率。最理想為1周以內(nèi)的給藥期間，1次或2次的給藥頻率。
在適用本發(fā)明藥用制劑的患者，作為給藥部位的確定及給藥方法，可例舉如下。例如，在閉塞性動脈硬化癥的缺血肢的診斷時，安靜時的疼痛、間歇性跛行、有無潰瘍、用トレツドミ時可步行距離的測定，用多普勒血流計進行Ankle Pressure Index(上肢血壓與腕血壓之比)的測定，推斷缺血肢、缺血區(qū)域。通過使用造影劑進行血管血管造影(Angiography)、Digital Subtraction Angiography,Magnetic Resonance Angiography等，詳細確定血管狹窄、閉塞部位。關(guān)于肢體狀態(tài)的判定，例如按照Society for VscularSurgery/North American and International Society forCardiovascular Surgery推薦的標準書進行。對于由血管造影確定的缺血部位的肌肉及其周圍肌肉，按照其區(qū)域的大小分成1-20個地方、理想為3-6個地方，給予本發(fā)明的藥用制劑。
進而，在上述治療目的之外，本發(fā)明的肌肉內(nèi)藥用制劑也能夠用于這些疾病的預(yù)防。
實施例以下，通過實施例具體說明本發(fā)明。但本發(fā)明絲毫不受這些實施例的限定。
實施例1根據(jù)給藥途徑比較HGF的藥動學(xué)1．肌肉內(nèi)給藥時HGF藥動學(xué)的探討(1)方法用フィツシヤ-系大鼠，測定以0.3、1、3mg/kg肌肉內(nèi)給予HGF時和以6、60、600μg/kg/hr,3小時靜脈內(nèi)連續(xù)給藥時，血清、肝臟、腎臟、肌肉(給藥部位及其對側(cè))中HGF的濃度。在乙醚麻醉下，在大鼠左大腿后部中央部分進行肌肉內(nèi)給藥。給藥容量為1ml/kg，以含有0.3M NaCl,0.03％Tween80,5mg/ml L-丙氨酸的10mM枸櫞酸緩沖液(pH5.5)作為溶劑。在給予HGF后，經(jīng)過5分、30分、2小時、8小時、24小時，得到大鼠的血清、肝左側(cè)葉、腎臟、肌肉(給藥部位及其對側(cè))。從大鼠尾靜脈進行靜脈內(nèi)連續(xù)給藥，給藥速度為0.07ml/hr。給藥后開始后經(jīng)過3小時以上，同樣得到血清、肝左側(cè)葉、腎臟、肌肉。血清及各臟器中人HGF濃度的測定，使用測定人HGF用ELISA試劑盒免疫化HGF EIA(特殊免疫研究所制)進行。臟器中的HGF用含有2M NaCl、1mM PMSF、1mM EDTA、0.1％Tween80的20mM Tris-HCl(pH7.5)作為提取液(肌肉12ml/g組織、肝臟，腎臟8ml/g組織)、用1分鐘制勻漿后、在4℃、15,000rpm離心分離60分鐘，用上述ELISA試劑盒測定提取液中的HGF量。測定時，所用的標準溶液采用未給予HGF的大鼠臟器，加入已知濃度的HGF，同樣進行提取，該提取液用作標準溶液。另外，樣品稀釋液也使用同樣配制的大鼠臟器提取液。其中所用臟器為未給予HGF的臟器。濃度變化的解析使用moment解析法。
(2)結(jié)果在大腿部肌肉內(nèi)給予HGF后，肌肉內(nèi)的HGF濃度變化見圖1。尾靜脈連續(xù)給予HGF后的結(jié)果也表示于圖1。以6、60μg/kg/hr,3小時連續(xù)從尾靜脈給予HGF時，肌肉內(nèi)的濃度在測定限(1.5ng/g組織)以下。以3mg/kg肌肉內(nèi)給藥時，肌肉中的藥動學(xué)參數(shù)列于表1。在給藥部位肌肉內(nèi)，HGF的t1/2是10.6小時，在給藥24小時后，濃度還維持在峰濃度的約18％。尾靜脈團塊給予HGF時，在肌肉內(nèi)檢出的HGF濃度也是10ng/g組織的程度。其中，HGF的給藥量為3mg/kg。
表1

另外，表1中的對側(cè)指的是對應(yīng)于給藥部位的反對側(cè)。即，在本例中，因為是在左大腿后部肌肉給藥，因此，是其反對側(cè)的大腿后部肌肉。
如上述圖1及表1所示，肌肉內(nèi)給予HGF時，在給藥肌肉內(nèi)顯示很高的濃度。認為該濃度大大超過了HGF藥效顯示的濃度。一方面，在對側(cè)肌肉內(nèi)，只停留于給藥部位濃度的約1/1000。如圖2所示，肌肉內(nèi)給予HGF時，血清中HGF在較低濃度變化，從給藥肌肉向循環(huán)血中的轉(zhuǎn)移率低，僅為6.7％。另外如圖3、4所示，肌肉內(nèi)給予HGF時，肝臟、腎臟中的HGF濃度與靜脈內(nèi)給藥時相比極低。靜脈內(nèi)連續(xù)給予HGF后，血清、肝臟、腎臟內(nèi)HGF的濃度結(jié)果也表示于圖2、3、4。
靜脈內(nèi)連續(xù)給予HGF時，相對于血清、肝臟、腎臟中維持高HGF濃度，肌肉內(nèi)HGF的濃度極低。以最高給藥量600μg/kg/hr組為例，相對于血清中536ng/ml的HGF濃度，肌肉中只有不足10ng/g組織。由此認為，以下列情況為給藥目的時，靜脈內(nèi)給藥的效率差，而在肌肉內(nèi)直接給藥的方法有效。即，使HGF選擇性作用于缺血肌肉患部及其周圍組織或分布于這些部位的血管。另外，認為通過肌肉內(nèi)給予HGF，能夠在其它部位不發(fā)揮作用，而選擇性地作用于肌肉組織。
2據(jù)給藥途徑比較HGF血中濃度的變化(1)方法用フィツシヤ-系大鼠，測定以3mg/kg肌肉內(nèi)給藥和以0.3mg/kg靜脈內(nèi)團塊給藥及以3mg/kg皮下給藥時，血清中HGF的濃度。在乙醚麻醉下，在大鼠左大腿后部中央部分進行肌肉內(nèi)給藥。給藥容量為1ml/kg，用含有0.3M NaCl,0.03％Tween80,5mg/ml L-丙氨酸的10mM枸櫞酸緩沖液(pH5.5)為載體。在肌肉內(nèi)給藥時，給藥后經(jīng)過5分、30分、2小時、8小時、24小時，采取大鼠血清。在大鼠尾靜脈進行靜脈內(nèi)給藥，給藥后經(jīng)過5分、15分、30分、1小時、2小時、3小時、12小時、24小時，采取大鼠血清。在皮下給藥時，給藥后經(jīng)過5分、15分、30分、1小時、2小時、5小時、12小時、24小時，采取大鼠血清。大鼠血清中人HGF濃度的測定，使用測定人HGF用ELISA試劑盒-免疫化HGF EIA(特殊免疫研究所制)進行。濃度變化的解析使用moment解析法。
(2)結(jié)果解析測定結(jié)果得到的藥動學(xué)參數(shù)見表1。不過，在靜脈內(nèi)團塊給藥時，假設(shè)對于給藥量呈線性，計算出HGF給藥量為3mg/kg時的參數(shù)。與靜脈內(nèi)團塊給藥時相比，在肌肉內(nèi)給藥、皮下給藥時血清中藥物的AUC低，分別為靜脈內(nèi)團塊給藥時AUC的6.7％、2.6％。另外，與靜脈內(nèi)團塊給藥時相比，在肌肉內(nèi)給藥、皮下給藥時最高血藥濃度(Cmax)也低，分別為靜脈內(nèi)團塊給藥時CO的0.012％、0.0087％。
表2

3 根據(jù)給藥途徑比較肌肉內(nèi)HGF濃度的變化
(1)方法用SD系大鼠，測定以0.01mg/kg肌肉內(nèi)給予HGF時及以30mg/kg靜脈內(nèi)團塊給藥時肌肉中HGF的濃度。在乙醚麻醉下，從大鼠左大腿后部中央部分進行肌肉內(nèi)給藥。給藥容量為0.5ml/kg，用含有0.3MNaCl、0.03％Tween80、5mg/mlL-丙氨酸的10mM枸櫞酸緩沖液(pH5.5)為載體。給予HGF后經(jīng)過30分、6小時、24小時，得到大鼠的肌肉(給藥部位)。靜脈內(nèi)團塊給藥從大鼠尾靜脈進行，用藥容量為1ml/kg，給藥后經(jīng)過5分、30分、1小時、24小時，同樣采取肌肉。肌肉內(nèi)人HGF濃度的測定使用測定人HGF用ELISA試劑盒免疫化HGF EIA(特殊免疫研究所制)進行。臟器內(nèi)HGF的濃度，使用含有2M NaCl、1mM PMSF、1mM EDTA、0.1％Tween80的20mM Tris-HCl(pH7.5)作為提取液、臟器經(jīng)1分鐘制勻漿后、在4℃、15,000rpm離心分離60分鐘，用上述ELISA試劑盒測定提取液中的HGF量。測定時，所用的標準溶液為在未給予HGF的大鼠肌肉加入已知濃度的HGF，使用同樣提取溶液。另外，樣品稀釋液也使用同樣配制的大鼠肌肉提取液。其中所用肌肉為未給予HGF的臟器。濃度變化的解析使用moment解析法。
(2)結(jié)果由肌肉內(nèi)人HGF濃度的測定結(jié)果得到的藥動學(xué)參數(shù)列于表3。其中，為了比較，關(guān)于靜脈內(nèi)團塊給藥，假定與給藥量呈線性，計算出0.01mg/kg HGF給藥時的參數(shù)。假定給予相同量的HGF時，在肌肉內(nèi)給藥(給藥部位)時，其肌肉內(nèi)AUC明顯高于靜脈內(nèi)團塊給藥，約為靜脈內(nèi)團塊給藥時的650倍。而且，在肌肉內(nèi)給藥(給藥部位)時，其最高肌肉內(nèi)濃度(Cmax)明顯高于靜脈內(nèi)團塊給藥，約為靜脈內(nèi)團塊給藥時的960倍。
表3

實施例2
對于大鼠下肢缺血ASO模型的肌肉內(nèi)給藥的藥效探討(1)方法使用SD系大鼠(9周齡、雄性)。腹腔內(nèi)給予約50mg/kg的苯巴比妥(ダイナボツト社制造、ネンブタ-ル)，麻醉大鼠。結(jié)扎分支后，摘出左大腿動脈，制成大鼠下肢缺血模型。用乙醚麻醉大鼠，在左大腿內(nèi)側(cè)肌肉內(nèi)給予HGF或溶媒。大腿動脈摘出后立即開始給藥，給藥量為1mg/kg/day、給藥容量1ml/kg/day、1天1次，給藥5天。溶媒使用0.3M NaCl,0.03％Tween80,5mg/ml丙氨酸，10mM枸櫞酸鈉緩沖液(pH5.5)。大腿動脈摘出14天后，大鼠經(jīng)戊巴比妥麻醉，用脫毛軟膏脫去下肢周圍的毛后，用測溫儀(日本アビオニクス社制)，同時測定兩側(cè)下肢6個部位的皮膚表明溫度，這些部位是大腿下部內(nèi)側(cè)(圖5的部位1)、下腿部內(nèi)側(cè)(部位2)、膝下腿外側(cè)(部位3)、下腿前部外側(cè)(部位4)、大腿下部外側(cè)(部位5)、下腿部外側(cè)(部位)。就各自的測定部位，由缺血肢溫度減去正常肢溫度，算出皮膚表面溫度差。
(2)結(jié)果缺血肢溫度與正常肢溫度的皮膚表明溫度差見圖5。即，摘出大腿動脈，給予溶媒的動物組(圖中、白色)，與正常肢相比，缺血肢的各部位溫度低0.8-1.7℃。與此相反，在給予HGF的動物組(圖中、黑色)，溫度的降低被抑制到0.2-1.0℃。每個部位，分兩組比較其溫度的降低，發(fā)現(xiàn)在所有6個部位，給予HGF的組中，溫度的降低有減小的趨勢。并且，在下腿部內(nèi)側(cè)及大腿下部外側(cè)兩個部位，由于給予HGF，溫度的降低受到抑制，具有顯著性差異。
如上圖5所示，在制成大鼠下肢缺血模型，缺血肢的大腿部肌肉內(nèi)給予HGF時，缺血肢皮膚表面溫度的降低受到抑制。認為這是由于HGF具有血管新生作用，從而使缺血肢的血行動態(tài)得到改善、溫度的降低受到抑制。
實施例3在in vitro實驗系，硫酸軟骨素對于從含有HGF的小丸中釋放HGF的影響(1)含10％丙氨酸的HGF小丸的制法
HGF的含量131.2μg/mg小丸將6.9ml含有65.3mg HGF的水溶液和4.4ml 1％丙氨酸水溶液和16ml蒸餾水以及16.7g 2％骨膠原糊(アテロコラ-ゲン)混合，冷凍干燥后，加少量蒸餾水使之潤濕，黏合，成均一的混合液。將此物放入10ml的粉碎離心機內(nèi)，在10,000g、60分鐘離心脫氣。將該物從器具中取出后，干燥，切斷，得到每根含500μg HGF的棒狀小丸(直徑1.1mm，長4mm)。
(2)含10％硫酸軟骨素的HGF小丸的制法HGF的含量132.8μg/mg小丸將6.9ml含有65.3mg HGF的水溶液和2.9ml 1.5％硫酸軟骨素水溶液和17ml蒸餾水以及16.7g2％骨膠原糊混合，冷凍干燥后，加少量蒸餾水使之潤濕，黏合，成均一的混合液。將此物放入10ml的粉碎離心機內(nèi)，在10,000g、60分鐘離心脫氣。將該物從器具中取出后，干燥，切斷，得到每根含500μg HGF的棒狀小丸(直徑0.9mm，長4mm)。
(2)in vitro釋放實驗使用含有0.3％Tween20的PBS(pH7.4)作為釋放液。在37℃，將上述方法制成的小丸放入2ml釋放液中，測定HGF的釋放速度(n=2)。釋放液中HGF的濃度用肝素親和性層析法測定。
實驗結(jié)果如圖6所示。即、從含有硫酸軟骨素的小丸中，1天后幾乎100％的HGF釋放出來，與此相反，在不合硫酸軟骨素的含丙氨酸的小丸中，HGF緩慢釋放。釋放的HGF量，在釋放開始第7天后也只停留于小丸中含量的30％。這表明，由于與HGF具有親和性的硫酸軟骨素等蛋白聚糖與HGF的共存，能促使HGF的釋放。相反，不讓HGF與硫酸軟骨素等蛋白聚糖共存時，能夠使其釋放緩慢、使HGF在給藥局部發(fā)揮作用。
實施例4大鼠肌肉內(nèi)給予HGF后、各臟器c-Met的磷酸化(1)方法使用SD系大鼠(12周齡、雄性)，在肌肉內(nèi)給藥后，就肌肉、肝臟、腎臟c-Met的磷酸化進行了研究。在乙醚麻醉下，在大鼠左大腿后部肌肉內(nèi)給予3、0.3、0.03mg/kg的HGF。給藥5分、30分后，給大鼠脫血，摘出肌肉、肝臟、腎臟。在摘出的臟器內(nèi)加入RIPA緩沖液(50mM Tris-HCl(pH7.4),50mM NaCl,1％TritonX-100,5mMEDTA,10mM Na4P2O7,50mM NaF,1mM Na3VO4,0.4mM AEBSF,10μg/mlLeupeptin,10μg/ml Aprotinin,1μg/ml Pepstatin A)5(肌肉)或8(肝臟、腎臟)ml/g組織，用ポリトロン制成勻漿。然后，在4℃,16,000rpm，離心分離30分，除去沉淀。用RIPA緩沖液將含有10mg(肌肉)或5mg(肝臟、腎臟)蛋白稀釋至1ml，加入50μl(約50％)蛋白G瓊脂糖(Pharmacia社)，在4℃攪拌2小時。離心除去蛋白G瓊脂糖，在上清液加1μg抗c-Met抗體(Senta Cruz社)，在4℃攪拌一晚上。再加入20μl蛋白G瓊脂糖，在4℃攪拌2小時。離心除去上清液，用1mlRIPA緩沖液清洗蛋白G瓊脂糖3次后，加2×上樣浸沖液，100℃加熱5分，用于7.5％SDS-PAGE。電泳后的蛋白通過電轉(zhuǎn)錄、使之結(jié)合于硝化纖維素濾膜上。濾膜在含有3％BSA的TBS-T(10mM Tris-HCl(7.6),150mM NaCl,0.05％Tween20)中，通過振蕩，使之發(fā)生反應(yīng)。用TBST輕輕洗凈后，在含有1μg/ml的抗磷酸化酪氨酸抗體(Upstate Biotechnology社)的TBS-T中，室溫下振蕩1小時。進一步用TBS-T洗凈后，在含有2000倍稀釋的過氧化物酶標記抗小鼠Ig抗體(Amersham社)的TBS-T中，室溫下振蕩1小時。用TBS-T洗凈后，用ECL Western blot(Amersham社)檢出試劑，檢出磷酸化c-Met。
濾膜在65.2mM Tris-HCl(pH6.7),100mM 2-巰基乙醇，2％SDS溶液中，60℃振蕩30分，除去探針，用TBS-T洗凈，在含有3％BSA的TBS-T中振蕩，使之反應(yīng)。用TBS-T輕輕洗凈后，在含有0.5μg/ml的抗c-Met抗體的TBS-T中，室溫下振蕩1小時。進一步用TBS-T洗凈后，在含有2000稀釋過的氧化物酶標記抗兔Ig抗體(Amersham社)的TBS-T中，室溫下振蕩1小時。用TBS-T洗凈后，用ECLWestern blot檢出試劑，檢出c-Met。
(2)結(jié)果對于磷酸化c-Met的IP-Western結(jié)果表示于圖7。在0.03-3mg/kg的各給藥量，發(fā)現(xiàn)在肌肉組織，e-Met的磷酸化顯著。一方面，在肌肉內(nèi)給予HGF時，肝臟及腎臟中未發(fā)現(xiàn)c-Met的磷酸化。這一結(jié)果顯示，通過肌肉內(nèi)給予HGF，能夠使HGF在肝臟、腎臟不發(fā)揮作用、而選擇性作用于肌肉組織、肌肉組織中的血管。
實施例5對于大鼠下肢缺血ASO模型的肌肉內(nèi)給藥的藥效探討(1)(1)方法使用SD系大鼠(14周齡、雄性)。腹腔內(nèi)給予約50mg/kg的戊巴比妥，麻醉大鼠。結(jié)扎分支后，摘出左大腿動脈，制成大鼠下肢缺血模型(參照Cardiovascular Research,35,547-552(1997))。然后立即在左大腿內(nèi)側(cè)肌肉給予HGF或溶媒。給藥量為100μg/kg、給藥容量1ml/kg。4天后，在乙醚麻醉下，同樣進行給藥。溶媒使用0.3MNaCl,0.03％Tween80,5mg/ml丙氨酸，10mM枸櫞酸鈉緩沖液(pH5.5)。大腿動脈摘出14天后，大鼠經(jīng)戊巴比妥麻醉，用實驗動物用非觀血式血壓計測定下肢血壓。從正常肢、缺血肢各自的血壓計算I/N比值(％)=缺血肢血壓/正常肢血壓×100，進行評價。
(2)結(jié)果結(jié)果見圖8。與溶媒組相比，HGF給藥組的I/N比值得到改善，具有顯著性差異。認為這是由于HGF具有的血管新生作用。
實施例6對于兔下肢缺血ASO模型的肌肉內(nèi)給藥的藥效探討(1)方法使用NZW系兔(22周齡、雄性)。上腕部肌肉內(nèi)給予5mg/kg的甲苯噻嗪(バイエル株式會社制造、セラクタ-ル)及50mg/kg的氯胺酮(三共株式會社制造、ネ>プタ-ル)，麻醉兔。切開左大腿部，摘出左大腿動脈，制成兔下肢缺血模型(參照J.Clin.Invest.,93,662-670(1994))。10天及15天后，同樣進行麻醉，在左大腿部肌肉給予HGF或溶媒。給藥量為100μg/kg/、給藥容量1ml/kg/。作為溶媒，使用0.3M NaCl,0.03％Tween80,5mg/ml丙氨酸，10mM枸櫞酸鈉緩沖液(pH5.5)。大腿動脈摘出10天后(給藥液前)，22天及42天后，按上述方法麻醉兔，用多普勒血流計(Triton公司制造)和水銀血壓計測定兩下肢血壓。分別由正常肢及缺血肢的血壓計算出I/N比值(％)=缺血肢血壓/正常肢血壓×100，進行評價。也計算出10天后的I/N比值的增加率，進行評價。另外，在動脈摘出10天后及最終日(41或42天后)，用造影劑(山之內(nèi)制藥株式會社制造)進行左下肢的選擇性血管造影。在所得到的血管造影照片上，重合排列著直徑2.5mm圓的圖片，計數(shù)和血管重合的圓的數(shù)目，計算出占全部圓(800個)的比例，作為血管造影的斑點。由各兔血管摘出后10天的血管造影斑點，計算最后一天血管造影的增加率(％)，作為血管造影斑點增加率進行評價。在最后一天，觀察缺血肢關(guān)節(jié)的硬化度、缺血肢爪端的壞死、脫落、缺血肢下腿部的潰瘍。
(2)結(jié)果下肢血管I/N比值的變化見圖9。在HGF給藥組，從動脈摘出22天后，顯示高值趨勢，42天后，給藥組與溶媒組相比I/N比值的改善有顯著性差異。認為這一結(jié)果是由于HGF具有的血管新生作用使缺血肢血行動態(tài)得到改善。另外，下肢血壓的I/N比值的增加率見圖10。從動脈摘出后10天至42天后期間內(nèi)I/N比值的增加率，與溶媒組相比，在HGF給藥組，該值的增高有顯著性差異。血管造影得分的增加率見圖11。與溶媒組相比，在HGF給藥組，增加率的升高有顯著性差異。認為是由于HGF的作用促進了側(cè)副血行路的發(fā)達。在評價最終日的缺血肢的觀察結(jié)果時，也發(fā)現(xiàn)與溶媒組相比，HGF給藥組有癥狀輕的趨勢(表4)，認為它反映了HGF給藥對缺血肢血行動態(tài)的改善。
表4

實施例7對于大鼠下肢缺血ASO模型的肌肉內(nèi)給藥的藥效探討(2)(1)方法使用SD系大鼠(14周齡、雄性)。腹腔內(nèi)給予約50mg/kg的戊巴比妥(ダイナポツト社制造)，麻醉大鼠。結(jié)扎分支后，摘出左大腿動脈，制成大鼠下肢缺血模型(參照Cardiovascular Research,35,547-552(1997))。然后立即在左大腿部的肌肉給予HGF或溶媒。給藥量為1μg/kg、給藥容量在所有實驗均為1ml/kg。4天后，在乙醚麻醉下，同樣進行第2次給藥。溶媒使用0.3M NaCl,0.03％Tween80,5mg/ml丙氨酸，10mM枸櫞酸鈉緩沖液(pH5.5)。大腿動脈摘出7天后，大鼠經(jīng)戊巴比妥麻醉，使用實驗動物用非觀血式血壓計測定下肢血壓。由正常肢、缺血肢各自的血壓計算I/N比值(％)=缺血肢血壓/正常肢血壓×100，進行評價。
另外，為研究單次給藥時的效果，只在大腿動脈摘出當天給藥，進行同樣的實驗。HGF的給藥量為3μg/kg。
(2)結(jié)果2次給藥的結(jié)果見圖12。在大腿動脈摘出7天后，與溶媒組相比，HGF給藥組的I/N比值得到改善，具有顯著性差異。認為這是由于HGF具有的血管新生作用產(chǎn)生的效果。顯示在1μg/kg×2次這樣的低用量，HGF有效。
另外，單次給藥的結(jié)果見圖13。在大腿動脈摘出7天后，與溶媒組相比，HGF給藥組的I/N比值得到改善，具有顯著性差異。顯示HGF在單次該給藥時也有效。
制劑例1在100ml生理鹽水中，含有1mg HGF,1g甘露醇及10mg吐溫80的溶液，經(jīng)無菌方法配制，每支1ml，分裝于小瓶后，冷凍干燥，密封，得到冷凍干燥制劑。
制劑例2在100ml 0.02M磷酸緩沖溶液(含有0.15MNaCl及0.01％吐溫80,pH7.4)中，經(jīng)無菌方法配制含有1mg HGF及100mg人血清蛋白的水溶液，每支1ml，分裝于小瓶后，冷凍干燥，密封，得到冷凍干燥制劑。
產(chǎn)業(yè)上利用的可能性根據(jù)本發(fā)明，能提供含有有效成分HGF的藥用制劑。其中，該制劑用于治療或預(yù)防缺血性疾病或動脈疾病。本發(fā)明的肌肉內(nèi)給藥用制劑與靜脈給藥相比，半衰期長、在肌肉內(nèi)易于維持藥物濃度，因此，與以前的靜脈注射相比，具有減少用藥量、并且在患部以外的作用少的效果。
權(quán)利要求
1．以肝實質(zhì)細胞增殖因子為有性成分的制劑，其中該制劑使有效量的上述因子轉(zhuǎn)運、分布、作用于給藥部位的局部組織及其附近組織，并且能夠減少在給藥部位以外的血液中及全身組織的轉(zhuǎn)運、分布、作用。
2．權(quán)利要求1記載的制劑，其中該制劑用于治療或預(yù)防缺血性疾病或動脈疾病。
3．權(quán)利要求1或2記載的肌肉內(nèi)用藥制劑，其中該制劑的給藥部位是肌肉。
4．權(quán)利要求1或2記載的皮下用藥制劑、外用制劑或濕布劑，其中該制劑的給藥部位是皮下或表皮。
5．權(quán)利要求3記載的肌肉內(nèi)用藥制劑，其中該制劑的給藥部位是骨骼肌或心肌。
6．權(quán)利要求1、2、3或5記載的制劑，其特征在于向給藥部位肌肉組織的轉(zhuǎn)運、分布、作用遠遠大于向血液、肝臟及腎臟的轉(zhuǎn)運、分布、作用。
7．權(quán)利要求1、2、3、5或6記載的肌肉內(nèi)用藥制劑，其特征在于與靜脈內(nèi)團塊給予同等劑量藥物時相比，在血液、肝臟及腎臟的最大濃度是1％以下，而給藥部位的肌肉內(nèi)組織濃度是50倍以上；其中，該制劑含有有效成分肝實質(zhì)細胞增殖因子(HGF)。
8．權(quán)利要求1、2、3、5或6記載的肌肉內(nèi)用藥制劑，其特征在于與靜脈內(nèi)團塊給予同等劑量藥物時相比，在血液、肝臟及腎臟的AUC是1/5以下，而給藥部位的肌肉內(nèi)組織的AUC是50倍以上。其中，該制劑含有有效成分肝實質(zhì)細胞增殖因子(HGF)。
9．權(quán)利要求1、2、3、5、6、7或8記載的肌肉內(nèi)用藥制劑，其中該制劑用于治療或預(yù)防心臟或四肢的缺血性疾病或動脈疾病。
10．權(quán)利要求9記載的肌肉內(nèi)用藥制劑，該制劑的給藥部位是患部及其周圍肌肉局部，其中該制劑用于治療或預(yù)防心臟或四肢的缺血性疾病或動脈疾病。
11．權(quán)利要求1、2、3、5、6、7、8、9或10記載的肌肉內(nèi)用藥制劑，其特征在于一次的給藥量是0.01～500μg/kg。
12．權(quán)利要求11記載的肌肉內(nèi)用藥制劑，其特征在于一次的給藥量是0.1～10μg/kg。
13．權(quán)利要求1～12中任意一項記載的制劑，其中動脈疾病是閉塞性動脈硬化癥。
14．權(quán)利要求1～12中任意一項記載的制劑，其中缺血性疾病是缺血性心臟疾病。
15．權(quán)利要求1～14中任意一項記載的制劑，其特征在于含有作為有性成分的肝實質(zhì)細胞增殖因子(HGF)，并且不合結(jié)合、吸附HGF的物質(zhì)。
全文摘要
用于治療或預(yù)防缺血性疾病或動脈疾病的藥用制劑,該制劑的有效成分為肝實質(zhì)細胞增殖因子(HGF)。與靜脈內(nèi)給藥相比,這些制劑具有以下效果,即,能維持患部的HGF濃度、半衰期長、能減少給藥量,并且在用藥患部以外的作用少。
文檔編號A61K38/18GK1315867SQ99810379
公開日2001年10月3日 申請日期1999年8月4日 優(yōu)先權(quán)日1998年8月5日
發(fā)明者永野智一, 河村敬夫, 泰地睦夫, 宮東育枝, 野口浩, 谷俊輔, 前田弘雄 申請人:住友制藥株式會社