專利名稱:低聚寡糖在抗應(yīng)激腦損傷中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域:
本發(fā)明涉及衍生自中藥巴戟天的低聚寡糖在抗應(yīng)激腦損傷中的用途。
中藥巴戟天(mrinda officinalis How)具有補(bǔ)腎壯陽、強(qiáng)筋骨、抗風(fēng)濕功效。中國專利申請No.94103414.3披露了一種活性成分為巴戟天的抗精神性疾病的藥物。中國專利申請No.94103415.1披露了從巴戟天萃取得到的式(Ⅰ)低聚寡糖及其作為抗精神病藥物,其中n=1-8。 但式Ⅰ低聚寡糖在抗應(yīng)激腦損傷方面的活性還未見報(bào)道。
發(fā)明目的本發(fā)明的目的是尋找式Ⅰ低聚寡糖的新用途。
發(fā)明簡述本發(fā)明人經(jīng)研究現(xiàn)已出人意料發(fā)現(xiàn),式Ⅰ的低聚寡糖具有優(yōu)良的抗應(yīng)激腦損傷作用。
因此,本發(fā)明第一方面涉及式Ⅰ低聚寡糖在制備用于治療應(yīng)激腦損傷藥物中的用途。
本發(fā)明再一方面涉及的是治療應(yīng)激腦損傷的方法,其包括將上述定義的式Ⅰ低聚寡糖給予需治療的應(yīng)激腦損傷患者。
詳細(xì)描述
本發(fā)明涉及式Ⅰ的低聚寡糖在制備用于治療應(yīng)激腦損傷藥物 中的用途,其中n=1-8。
本發(fā)明還涉及治療激腦損傷的方法,其包括將式Ⅰ低聚寡糖 給予需治療的應(yīng)激腦損傷患者,n=1-8。
根據(jù)本發(fā)明,本發(fā)明作用的式Ⅰ低聚寡糖是通過萃取植物巴戟天得到的。萃取中所用溶劑為有機(jī)溶劑,含水有機(jī)溶劑或水。有機(jī)溶劑為醇類如甲醇、乙醇、丙醇或丁醇等,鹵代烷類如二氯甲烷或三氯甲烷等,酯類如乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯等,或醚類如石油醚或乙醚等。
根據(jù)本發(fā)明,式Ⅰ低聚寡糖在用于治療應(yīng)激腦損傷中可以單獨(dú)或以組合物形式使用。給藥方式可以是口服或非腸道途徑。給藥劑型可以是口服劑型如片劑或膠囊等,非腸道給藥劑型如無菌注射劑、滴注液等。
根據(jù)本發(fā)明,優(yōu)選的式Ⅰ低聚寡糖是n=4的式Ⅰ低聚寡糖。
本發(fā)明將通過下面的實(shí)施例及生物活性試驗(yàn)做進(jìn)一步說明,但這并不意味著對(duì)本發(fā)明的任何限制。
實(shí)施例1n=4的式Ⅰ低聚寡糖的制備取巴戟天1KG粉碎過50目篩,篩過物用石油醚提取。每次用石油醚5升,提取三次。合并,減壓蒸發(fā)干,得到石油醚提取物100g;藥渣用乙醇提取。每次用乙醇8升,提三次,合并,減壓蒸發(fā)干,得到乙醇提取物160g。提取物再用水溶解,過濾,濾過液在正丁醇和水中分配提取,得到可溶于正丁醇的提取物120g和水溶部分300g。將水溶部分100g用活性碳柱層析進(jìn)行分離,展開劑是10%-70%的乙醇。得到式Ⅰ低聚寡糖混合物,重26g(純度幾乎100%)。取其部分進(jìn)行高壓液相色譜(柱Spherisorb C18(4.5×250mm),檢測RI Waters DifferentialRefractometer 410(US),泵WatersTM600,洗脫5%甲醇水,流速1.0ml/分鐘),測得式Ⅰ低聚寡糖的保留時(shí)間為n 保留時(shí)間(分鐘)12.3923.0533.4344.2754.5366.3477.4888.47同時(shí)得到呈白色固體的n=4的式Ⅰ低聚寡糖,即(2→1)果呋喃糖基蔗糖六聚體。
〔α〕D-18.2(C=1.0,H2O)。
IRλmaxcm-13411(br,S,OH),2931,2895,1420(w),1032(s)。
負(fù)離子FAB-MS m/z989[M-H]-。
元素分析實(shí)測值,C,39.28,H,6.89(C36H62O31·6H2O),計(jì)算值,C,39.35,H,6.79。
1H-NMR(D2O)δ5.42(1H,d,J=3.9Hz,1-H),4.27,4.20,4.21,4.22,4.17,4.08,4.06,4.03,3.52(1H,dd,J=10.5,3.9Hz;2-H),3.45(1H,t,J=9.5Hz;4-H)。
生物活性實(shí)驗(yàn)實(shí)施例2、n=4的式Ⅰ低聚寡糖(今后簡稱化合物A)對(duì)慢性應(yīng)激大鼠血中皮質(zhì)酮及睪酮水平的調(diào)節(jié)1.方法與結(jié)果Wistar雄性大鼠,體重160±20g,隨機(jī)分為4組,每組8只,應(yīng)激對(duì)照組動(dòng)物每日給予電擊、強(qiáng)迫游泳、高速振蕩、固定、禁食(水)等不良刺激,時(shí)程28天,使動(dòng)物處于慢性應(yīng)激狀態(tài)。給藥組則在應(yīng)激后30分鐘腹腔注射(ip)n=4的式Ⅰ低聚寡糖,正常組則不接受任何應(yīng)激刺激,第15天斷頭取血并分離血清,利用皮質(zhì)酮、睪酮試劑盒進(jìn)行測定。結(jié)果用單因素方差分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)并見表1。
表1
***P<0.001,**P<0.01,*P<0.05 vs應(yīng)激對(duì)照。
2.討論慢性應(yīng)激的關(guān)鍵特征之一就是血中皮質(zhì)酮水平顯著升高、睪酮水平降低。由表1可看到化合物A二個(gè)劑量組可以逆轉(zhuǎn)這一結(jié)果,表示可以拮抗慢性應(yīng)激。
實(shí)施例3、化合物A對(duì)皮質(zhì)酮損傷的PC12細(xì)胞的保護(hù)作用1.方法用含5%胎牛血清及5%馬血清的DMEM培養(yǎng)液(含青霉素鈉200kU·L-1,鏈霉素100mg·L-1,pH7.4)將細(xì)胞稀釋為約2×108.L-1接種于預(yù)先用多聚賴氨酸(0.1g.L-1)處理過的96孔培養(yǎng)板,每孔100μL,放入CO2孵箱(美國Napco公司生產(chǎn))37℃,5%CO2條件下培養(yǎng)3~4天,待細(xì)胞長滿孔底后即可用于實(shí)驗(yàn),參照文獻(xiàn)(劉景根等,藥學(xué)學(xué)報(bào)1998,33(3)165)方法,稍加改進(jìn),吸去細(xì)胞液,換上含有相應(yīng)濃度藥物及0.2mmol.L-1皮質(zhì)酮(corticosterone,Cort)的無血清DMEM(對(duì)照組不含任何藥品),37℃5%CO2培養(yǎng)48小時(shí),吸去培養(yǎng)液,用D-Hanks液洗2遍,每孔加入含0.5g.L-1MTT的無血清DMEM培養(yǎng)4小時(shí)后吸去培養(yǎng)液,每孔加入10%十二烷基硫酸鈉100μL,待藍(lán)色顆粒完全溶解(約12~16小時(shí)),利用多孔掃描分光光度計(jì)(型號(hào)MCC/340)測定標(biāo)本在570nm的吸光度(A)值,用于定量反映活細(xì)胞數(shù)并計(jì)算藥物對(duì)皮質(zhì)酮損傷的PC12細(xì)胞損傷的抑制率。表2
***P<0.001 vs皮質(zhì)酮損傷對(duì)照。
2.結(jié)果PC12細(xì)胞經(jīng)0.2mmol.L-1皮質(zhì)酮處理48小時(shí)后,對(duì)MTT攝取能力下降,A值顯著低于正常對(duì)照組,表明細(xì)胞受到損傷或部分細(xì)胞已死亡,但當(dāng)化合物A存在時(shí),PC12細(xì)胞對(duì)MTT攝取能力明顯增強(qiáng),表明PC12細(xì)胞損傷明顯減弱,活細(xì)胞明顯增多,具有濃度依賴關(guān)系。此結(jié)果表明化合物A可以對(duì)抗應(yīng)激導(dǎo)致的腦神經(jīng)細(xì)胞的損傷。
權(quán)利要求
1.式Ⅰ低聚寡糖在制備用于治療應(yīng)激腦損傷藥物中的用途, 其中n=1-8。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的用途,其中所述藥物可以片劑或膠囊形式使用。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的用途,其中所述藥物可以無菌注射劑或滴注液形式使用。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的用途,其中式Ⅰ低聚寡糖為n=4的式Ⅰ低聚寡糖。
全文摘要
本發(fā)明涉及式Ⅰ低聚寡糖在制備用于治療應(yīng)激腦損傷藥物中的用途。
文檔編號(hào)A61K31/7004GK1289592SQ9912025
公開日2001年4月4日 申請日期1999年9月24日 優(yōu)先權(quán)日1999年9月24日
發(fā)明者李云峰, 羅質(zhì)璞, 趙毅民, 楊明 申請人:中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院毒物藥物研究所