專利名稱：低聚寡糖在抗應(yīng)激腦損傷中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及衍生自中藥巴戟天的低聚寡糖在抗應(yīng)激腦損傷中的用途。
中藥巴戟天(mrinda officinalis How)具有補(bǔ)腎壯陽、強(qiáng)筋骨、抗風(fēng)濕功效。中國專利申請No．94103414．3披露了一種活性成分為巴戟天的抗精神性疾病的藥物。中國專利申請No．94103415．1披露了從巴戟天萃取得到的式(Ⅰ)低聚寡糖及其作為抗精神病藥物，其中n=1-8。 但式Ⅰ低聚寡糖在抗應(yīng)激腦損傷方面的活性還未見報(bào)道。
發(fā)明目的本發(fā)明的目的是尋找式Ⅰ低聚寡糖的新用途。
發(fā)明簡述本發(fā)明人經(jīng)研究現(xiàn)已出人意料發(fā)現(xiàn)，式Ⅰ的低聚寡糖具有優(yōu)良的抗應(yīng)激腦損傷作用。
因此，本發(fā)明第一方面涉及式Ⅰ低聚寡糖在制備用于治療應(yīng)激腦損傷藥物中的用途。
本發(fā)明再一方面涉及的是治療應(yīng)激腦損傷的方法，其包括將上述定義的式Ⅰ低聚寡糖給予需治療的應(yīng)激腦損傷患者。
詳細(xì)描述
本發(fā)明涉及式Ⅰ的低聚寡糖在制備用于治療應(yīng)激腦損傷藥物 中的用途，其中n=1-8。
本發(fā)明還涉及治療激腦損傷的方法，其包括將式Ⅰ低聚寡糖 給予需治療的應(yīng)激腦損傷患者，n=1-8。
根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明作用的式Ⅰ低聚寡糖是通過萃取植物巴戟天得到的。萃取中所用溶劑為有機(jī)溶劑，含水有機(jī)溶劑或水。有機(jī)溶劑為醇類如甲醇、乙醇、丙醇或丁醇等，鹵代烷類如二氯甲烷或三氯甲烷等，酯類如乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯等，或醚類如石油醚或乙醚等。
根據(jù)本發(fā)明，式Ⅰ低聚寡糖在用于治療應(yīng)激腦損傷中可以單獨(dú)或以組合物形式使用。給藥方式可以是口服或非腸道途徑。給藥劑型可以是口服劑型如片劑或膠囊等，非腸道給藥劑型如無菌注射劑、滴注液等。
根據(jù)本發(fā)明，優(yōu)選的式Ⅰ低聚寡糖是n=4的式Ⅰ低聚寡糖。
本發(fā)明將通過下面的實(shí)施例及生物活性試驗(yàn)做進(jìn)一步說明，但這并不意味著對(duì)本發(fā)明的任何限制。
實(shí)施例1n=4的式Ⅰ低聚寡糖的制備取巴戟天1KG粉碎過50目篩，篩過物用石油醚提取。每次用石油醚5升，提取三次。合并，減壓蒸發(fā)干，得到石油醚提取物100g；藥渣用乙醇提取。每次用乙醇8升，提三次，合并，減壓蒸發(fā)干，得到乙醇提取物160g。提取物再用水溶解，過濾，濾過液在正丁醇和水中分配提取，得到可溶于正丁醇的提取物120g和水溶部分300g。將水溶部分100g用活性碳柱層析進(jìn)行分離，展開劑是10％-70％的乙醇。得到式Ⅰ低聚寡糖混合物，重26g(純度幾乎100％)。取其部分進(jìn)行高壓液相色譜(柱Spherisorb C18(4．5×250mm)，檢測RI Waters DifferentialRefractometer 410(US)，泵WatersTM600，洗脫5％甲醇水，流速1．0ml／分鐘)，測得式Ⅰ低聚寡糖的保留時(shí)間為n 保留時(shí)間(分鐘)12．3923．0533．4344．2754．5366．3477．4888．47同時(shí)得到呈白色固體的n=4的式Ⅰ低聚寡糖，即(2→1)果呋喃糖基蔗糖六聚體。
〔α〕D-18．2(C=1．0，H2O)。
IRλmaxcm-13411(br，S，OH)，2931，2895，1420(w)，1032(s)。
負(fù)離子FAB-MS m／z989[M-H]-。
元素分析實(shí)測值，C，39．28，H，6．89(C36H62O31·6H2O)，計(jì)算值，C，39．35，H，6．79。
1H-NMR(D2O)δ5．42(1H，d，J=3．9Hz，1-H)，4．27，4．20，4．21，4．22，4．17，4．08，4．06，4．03，3．52(1H，dd，J=10．5，3．9Hz；2-H)，3．45(1H，t，J=9．5Hz；4-H)。
生物活性實(shí)驗(yàn)實(shí)施例2、n=4的式Ⅰ低聚寡糖(今后簡稱化合物A)對(duì)慢性應(yīng)激大鼠血中皮質(zhì)酮及睪酮水平的調(diào)節(jié)1．方法與結(jié)果Wistar雄性大鼠，體重160±20g，隨機(jī)分為4組，每組8只，應(yīng)激對(duì)照組動(dòng)物每日給予電擊、強(qiáng)迫游泳、高速振蕩、固定、禁食(水)等不良刺激，時(shí)程28天，使動(dòng)物處于慢性應(yīng)激狀態(tài)。給藥組則在應(yīng)激后30分鐘腹腔注射(ip)n=4的式Ⅰ低聚寡糖，正常組則不接受任何應(yīng)激刺激，第15天斷頭取血并分離血清，利用皮質(zhì)酮、睪酮試劑盒進(jìn)行測定。結(jié)果用單因素方差分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)并見表1。
表1
***P＜0．001，**P＜0．01，*P＜0．05 vs應(yīng)激對(duì)照。
2．討論慢性應(yīng)激的關(guān)鍵特征之一就是血中皮質(zhì)酮水平顯著升高、睪酮水平降低。由表1可看到化合物A二個(gè)劑量組可以逆轉(zhuǎn)這一結(jié)果，表示可以拮抗慢性應(yīng)激。
實(shí)施例3、化合物A對(duì)皮質(zhì)酮損傷的PC12細(xì)胞的保護(hù)作用1．方法用含5％胎牛血清及5％馬血清的DMEM培養(yǎng)液(含青霉素鈉200kU·L-1，鏈霉素100mg·L-1，pH7．4)將細(xì)胞稀釋為約2×108．L-1接種于預(yù)先用多聚賴氨酸(0．1g．L-1)處理過的96孔培養(yǎng)板，每孔100μL，放入CO2孵箱(美國Napco公司生產(chǎn))37℃，5％CO2條件下培養(yǎng)3～4天，待細(xì)胞長滿孔底后即可用于實(shí)驗(yàn)，參照文獻(xiàn)(劉景根等，藥學(xué)學(xué)報(bào)1998，33(3)165)方法，稍加改進(jìn)，吸去細(xì)胞液，換上含有相應(yīng)濃度藥物及0．2mmol．L-1皮質(zhì)酮(corticosterone，Cort)的無血清DMEM(對(duì)照組不含任何藥品)，37℃5％CO2培養(yǎng)48小時(shí)，吸去培養(yǎng)液，用D-Hanks液洗2遍，每孔加入含0．5g．L-1MTT的無血清DMEM培養(yǎng)4小時(shí)后吸去培養(yǎng)液，每孔加入10％十二烷基硫酸鈉100μL，待藍(lán)色顆粒完全溶解(約12～16小時(shí))，利用多孔掃描分光光度計(jì)(型號(hào)MCC／340)測定標(biāo)本在570nm的吸光度(A)值，用于定量反映活細(xì)胞數(shù)并計(jì)算藥物對(duì)皮質(zhì)酮損傷的PC12細(xì)胞損傷的抑制率。表2
***P＜0．001 vs皮質(zhì)酮損傷對(duì)照。
2．結(jié)果PC12細(xì)胞經(jīng)0．2mmol．L-1皮質(zhì)酮處理48小時(shí)后，對(duì)MTT攝取能力下降，A值顯著低于正常對(duì)照組，表明細(xì)胞受到損傷或部分細(xì)胞已死亡，但當(dāng)化合物A存在時(shí)，PC12細(xì)胞對(duì)MTT攝取能力明顯增強(qiáng)，表明PC12細(xì)胞損傷明顯減弱，活細(xì)胞明顯增多，具有濃度依賴關(guān)系。此結(jié)果表明化合物A可以對(duì)抗應(yīng)激導(dǎo)致的腦神經(jīng)細(xì)胞的損傷。
權(quán)利要求
1．式Ⅰ低聚寡糖在制備用于治療應(yīng)激腦損傷藥物中的用途， 其中n=1-8。
2．根據(jù)權(quán)利要求1的用途，其中所述藥物可以片劑或膠囊形式使用。
3．根據(jù)權(quán)利要求1的用途，其中所述藥物可以無菌注射劑或滴注液形式使用。
4．根據(jù)權(quán)利要求1的用途，其中式Ⅰ低聚寡糖為n=4的式Ⅰ低聚寡糖。
全文摘要
本發(fā)明涉及式Ⅰ低聚寡糖在制備用于治療應(yīng)激腦損傷藥物中的用途。
文檔編號(hào)A61K31/7004GK1289592SQ9912025
公開日2001年4月4日 申請日期1999年9月24日 優(yōu)先權(quán)日1999年9月24日
發(fā)明者李云峰, 羅質(zhì)璞, 趙毅民, 楊明 申請人:中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院毒物藥物研究所