專利名稱：膽固醇生物合成抑制劑在降低家禽蛋類的膽固醇含量中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及膽固醇生物合成抑制劑或羥甲基戊二?；?HMG)-輔酶A(CoA)還原酶在降低家禽蛋類的膽固醇含量中的應(yīng)用，以及含有所述抑制劑的家禽飼料組合物。
膽固醇是人和動物細(xì)胞膜的基本組成，并且作為合成類固醇激素和膽酸類化合物的起始原料。內(nèi)源性和外源性膽固醇(食物膽固醇)可以采用相同的方式進(jìn)行中間代謝過程。
除吸煙、肥胖、高血壓和內(nèi)分泌機(jī)能亢進(jìn)以外，高血膽固醇癥(＞200mg/dl)是冠狀心臟病的危險(xiǎn)因素之一。食物膽固醇對動脈粥樣化形成的影響仍是激烈探討的主題。食物膽固醇對血漿膽固醇的作用極其不同。未患代謝疾病的人對膽固醇攝入的增加幾乎沒有反應(yīng)。部分人群(在美國有36％)對外源性膽固醇的反應(yīng)是其血漿膽固醇表現(xiàn)出明顯升高。在此人群中，不但吸收率較高，而且內(nèi)源膽固醇的合成在反饋機(jī)制上也出現(xiàn)損害。流行病學(xué)研究表明，當(dāng)血漿膽固醇水平降低1％時(shí)，冠狀心臟病的危險(xiǎn)減小2％(Palca，科學(xué)247，1170-1171，1990)。
膽固醇被降低的指標(biāo)包括了脂肪尤其是動物飽和脂肪攝入的減少。與此有關(guān)的膽固醇限度則位居其次。此外，應(yīng)提高一-或多元-不飽和脂肪酸，特別是具有脂質(zhì)降低作用的ω-3脂肪酸在食物中的比例(Deutsche Gesellschaft frErnhrurg，Beratungsstandards，1995)。
根據(jù)目前的發(fā)現(xiàn)，膽固醇本身不可能是唯一的危險(xiǎn)因素；相反地，危險(xiǎn)因素還包括氧化的脂質(zhì)類化合物，也包括LDL部分中的羥膽甾醇類化合物(Morel，D.W.& Lin Y.C，營養(yǎng)學(xué)和生物化學(xué)，7，495-506，1996)。所以，根據(jù)某些專家所說，提高抗氧劑特別是維生素E的攝取是一種有利的預(yù)防途徑，從而可避免局部缺血性疾病(Holvoet，P.& Collen D.，F(xiàn)ASEB J.8，1279-1284，1994，Jha，P.等，內(nèi)科學(xué)年報(bào)(Ann.Int.Med.)，123，11，860-872，1995)。
盡管對食物膽固醇的看法目前還不同，但國家專家委員會(例如DeutscheGesellschaft fr Ernhrung，美國營養(yǎng)研究委員會)，同時(shí)也是多數(shù)人的建議是每天膽固醇的攝取量應(yīng)限制在300mg內(nèi)。
總之，所有有關(guān)膽固醇的討論認(rèn)為，有營養(yǎng)和保健價(jià)值的蛋類對于人們來說極其不安全。因此，在德國，全國人均蛋消耗量在10年內(nèi)從280個(gè)減少到1994/95年的218個(gè)。
從對人體進(jìn)行的研究中可以看出，燕麥麩、稻麩以及大麥具有降脂作用(Poulter N.等，美國臨床營養(yǎng)學(xué)雜志(Am.J.Clin.Nutr.)58-66-9，1993；DuboisC.等，美國臨床營養(yǎng)學(xué)雜志(Am.J.Clin.Nutr.)61，325-333，1995；McIntoshG.H.等，世界營養(yǎng)學(xué)和食物學(xué)研究(Would Rev.Nutr.Diet)77，89-108，1995)。這種作用被長期只歸因于含有能夠通過吸收膽酸并提高食糜粘度來減少脂肪吸收的可溶性非淀粉多糖類化合物(β-葡聚糖類)。這些類型谷類的降膽固醇作用可能還歸因于其含有生育三烯酚類化合物(主要是α-生育三烯)(Qureshi，A.A.等，生物學(xué)和化學(xué)雜志，261，23，10544-10550，1986；Hegstedt，M.& Kousik，C.S.，路易斯安那州農(nóng)業(yè)(Louisiana Agriculture)36，2，16-17，1994；Qureshi，N.&Qureshi，A.A.，在Packer，L.und Fuchs，J.(ed.)，健康和疾病中的維生素E，Marcel Dekker，紐約，1993，247-267；Lia等，美國臨床營養(yǎng)學(xué)和食物學(xué)雜志62，1245-1251，1995)。生育三烯酚類一種膽固醇生物合成的關(guān)鍵酶，肝臟內(nèi)的β-羥基-β-甲基戊二?；?HMG)-CoA還原酶(轉(zhuǎn)錄后下調(diào))。在HepG2細(xì)胞培養(yǎng)物中被確認(rèn)是最有效異構(gòu)體的是γ-生育三烯酚(約比α-生育三烯酚強(qiáng)30倍)。外消旋體(合成的)和天然(手性)形式之間不存在區(qū)別。與酚和乙酸鹽形式相比，其煙酸鹽的作用最明顯(US 5,217,992)。
迄今人們試圖通過規(guī)定食物方式來影響家禽蛋類的膽固醇含量的努力收效甚微(Beyer，R.S.& Jensen，L.S.，家禽科學(xué)，1339-1348，1989；Naber，E.C.，飼料學(xué)(Feedstuffs)62，48-52，1990；Gerken，M.，Jahrbuch frGeflgelwirtschaft，Verlag Eugen Ulmer，Strttgart，1994，138-143；Grashorn，M.A.，混合飼料(Feed Mix)3，4，28-31，1995)。然而，隨著HMG-CoA還原酶抑制劑(所謂的他汀(statin)類化合物)的合成，在不影響家禽性能指標(biāo)(例如產(chǎn)蛋量)的同時(shí)，膽固醇含量可以降低15％(洛伐他汀)或30％((±)-(R*，R*)-3，4-二溴-β，δ-二羥基-2-(4-氟苯基)-5-(1-甲基乙基)-1H-吡咯-1-庚酸鈉鹽)(Elkin，R.G.&Rogler，J.C.，農(nóng)業(yè)和飼料化學(xué)雜志(J.Agric.Food Chem.)38，1635-1641，1990；Elkin，R.G.，農(nóng)業(yè)和飼料化學(xué)雜志，41，1094-1101，1993)。但是，他汀類化合物是合成型藥物，從而當(dāng)其用于飼養(yǎng)時(shí)，會出現(xiàn)合成殘余物定位于蛋內(nèi)的有害風(fēng)險(xiǎn)。而且，在另一個(gè)研究中，辛伐他汀對蛋類的膽固醇含量也無影響(Huggett，C.D.等人，Biochem.Soc.Trans.21，147，1993)。
在US 5,217,992中研究了生育三烯酚類在人體、小雞和高膽固醇血癥的豬類降低膽固醇的作用。但沒有描述嘗試降低家禽蛋類的膽固醇。根據(jù)Beyer，R.S.&Jensen，L.的研究(家禽科學(xué)，68，1703-1706，1993)，α-生育三烯酚對蛋類的膽固醇含量沒有影響。產(chǎn)蛋母雞依賴于膽固醇的最低合成，因?yàn)樾约に睾铣尚枰懝檀?。因此，母雞中的雌激素水平特別高。在胚胎發(fā)育期間，小雞也需要蛋黃中含有少量的膽固醇。所以，不能排除強(qiáng)制減少膽固醇會對產(chǎn)蛋母雞的蛋產(chǎn)量和/或小雞的胚胎發(fā)育所產(chǎn)生的副作用。
許多戊酸途徑(膽固醇的生物合成)的衍生物(植物萜類化合物)，例如芫荽油醇、香葉醇、檸檬烯和紫香酮在細(xì)胞培養(yǎng)物和試驗(yàn)動物(例如大鼠和小鼠)的化學(xué)預(yù)防性實(shí)驗(yàn)中，表現(xiàn)出對HMG-CoA還原酶的抑制作用，以及由此可抑制腫瘤(Elson，C.，Am.Inst.Nutr.1666-1672，1995；Yu，S.G.等，Am.Chem.Soc.42，7，1493-1498，1994；Yu，S.G.Am.Inst.Nutr.，2763-2767，1995；Elson，C.E.& Yu，S.G.，Am.Inst.Nutr.，607-614，1994)。胡蘿卜素類的番茄紅素和胡蘿卜素也可以抑制巨噬細(xì)胞合成膽固醇(Fuhrmann等，生物化學(xué)和生物物理學(xué)研究通訊(Biochem.Biophys.Res.Commun.)233，658-662，1997)。但是，這些公開物沒有建議這些化合物在降低家禽蛋類膽固醇含量中應(yīng)用的可能性，迄今為止也未進(jìn)行研究。
本發(fā)明的一個(gè)目的是發(fā)現(xiàn)降低家禽蛋類的膽固醇含量的新方法。
我們發(fā)現(xiàn)，該發(fā)明目的可以通過采用至少一種抑制劑作為家禽飼料的添加劑來實(shí)現(xiàn)，所述抑制劑含有類異戊二烯結(jié)構(gòu)組成。適用于本發(fā)明的化合物是一般的膽固醇生物合成的抑制劑。由于其作用可被解釋為是對HMG-CoA還原酶的抑制(但不與其結(jié)合)，所以在本發(fā)明文本中將它們稱作HMG-CoA抑制劑。
為了達(dá)到本發(fā)明的目的，具有類異戊二烯結(jié)構(gòu)組成的物質(zhì)是那些基本碳骨架構(gòu)筑在類異戊二烯組成上的化合物，也就是說，由異戊二烯單元，即C5構(gòu)件組成，或其衍生物。同時(shí)它們也被認(rèn)為是含有至少部分結(jié)構(gòu)由類異戊二烯組成構(gòu)成的化合物。這種類異戊二烯結(jié)構(gòu)單元的特征還在于含有至少一個(gè)碳-碳雙鍵。類異戊二烯結(jié)構(gòu)單元的例子是那些衍生自萜烯(即C10H16)、倍半萜(即C15H24)或四萜(C40H64)的化合物。
適用于本發(fā)明的HMG-CoA還原酶抑制劑的例子是生育三烯酚類化合物和萜類化合物。優(yōu)選的萜類化合物是植物萜類化合物，尤其是那些具有萜烯、倍半萜烯或四萜結(jié)構(gòu)或其衍生結(jié)構(gòu)。特別值得提及的是由萜烯或倍半萜烯結(jié)構(gòu)組成的抑制劑，尤其是選自紫香酮類化合物、芫荽油醇類化合物、法呢醇類化合物(farnesyl)和紫蘇子醇的化合物。
值得提及的生育三烯酚類化合物的例子是α-、β-、γ-和δ-生育三烯酚、其4-酮基類似物以及這些化合物的酯。
生育三烯酚類化合物如下列通式所示
α-生育三烯酚R1＝R2＝R3＝CH3β-生育三烯酚R1＝R3＝CH3，R2＝Hγ-生育三烯酚R1＝H，R2＝R2＝CH3δ-生育三烯酚R1＝R2＝H，R3＝CH3其4-酮基類似物在4位上含有酮基。其值得提及的例子是4-酮基-γ-生育三烯酚。上述生育三烯酚類化合物的適當(dāng)?shù)孽ナ窃?-OH位被一元-或二元的、飽和或一元-或多元不飽和C2-C22羧酸酯化。適當(dāng)?shù)亩替溗岬睦邮荂2-C6羧酸，例如甲酸、乙酸、丙酸或琥珀酸。長鏈酸的例子是檸檬酸、棕櫚酸、硬脂酸、油酸、亞油酸、α-和γ-亞油酸、二高-γ-亞油酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸。其他適用的酸是含雜原子的飽和或不飽和羧酸，例如α-硫辛酸或煙酸。
適用于本發(fā)明并且特別值得提及的萜類化合物的例子是植物萜類化合物。植物萜類化合物尤其可選自萜烯類化合物(衍生自C10H16結(jié)構(gòu)的化合物)，例如芫荽油醇、紫香酮和紫蘇子醇類化合物；或倍半萜烯(即衍生自C15H24結(jié)合的化合物)，例如法泥醇類化合物。
紫香酮類化合物具有如下通式
α-、β-和γ-紫香酮之間的區(qū)別在于雙鍵的位置。
適用于本發(fā)明的芫荽油醇可用下式表示
R＝H芫荽油醇R＝CO-?；据从痛减ブ档锰峒暗能据从痛减サ睦邮荂2-C6-羧酸里哪基酯，例如乙酸里哪醇酯。
適用于本發(fā)明的紫蘇子醇具有下列結(jié)構(gòu)式
適用于本發(fā)明的法呢醇類化合物是下式的法呢醇
及其衍生物?？商峒暗倪m用的酯是一元-或二元的、飽和或一元-或多元不飽和C2-C22羧酸的酯。適當(dāng)?shù)亩替溗岬睦邮荂2-C6羧酸，例如甲酸、乙酸、丙酸或琥珀酸。長鏈酸的例子是檸檬酸、棕櫚酸、硬脂酸、油酸、亞油酸、α-和γ-亞油酸、二高-γ-亞油酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸。其他適用的酸是含雜原子的飽和或不飽和羧酸，例如α-硫辛酸或煙酸。
適用于的四萜類化合物的例子類胡蘿卜素類化合物。特別值得提及的類胡蘿卜素類化合物是胡蘿卜素類化合物，如α-、β-、γ-、δ-、ε-或ψ，ψ-胡蘿卜素(番茄紅素)或全-順式-番茄紅素，但優(yōu)選β-胡蘿卜素和番茄紅素。
本發(fā)明上述種類的抑制劑是與常規(guī)飼料混合后施用給有關(guān)家禽。抑制劑的濃度自然應(yīng)隨所用的具體活性組分、家禽的種類以及飼養(yǎng)方式而改變，但是該用量約是5-10,000mg/kg飼料。而且，所屬領(lǐng)域技術(shù)人員可以不困難地判斷出在各個(gè)情況中最佳的活性組分的濃度。某些上述抑制劑的典型含量范圍(基于kg飼料的總重量)是生育三烯酚類化合物 5-5000mg/kg飼料酮基-生育三烯酚類化合物 5-5000mg/kg飼料芫荽油醇 10-5000mg/kg飼料β-紫香酮10-5000mg/kg飼料法呢醇 20-7500mg/kg飼料紫蘇子醇 5-7500mg/kg飼料類胡蘿卜素類化合物 5-7500mg/kg飼料本發(fā)明還包括上述抑制劑的純異構(gòu)體、光學(xué)純的形式、作為異構(gòu)體的混合物或作為立體異構(gòu)體混合物或異構(gòu)體和立體異構(gòu)體混合物的應(yīng)用。
在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所用抑制劑是那些使家禽蛋類膽固醇減少并且降低家禽蛋類和/或血漿中的甘油三酯的抑制劑。應(yīng)該提及的例子是γ-生育三烯酚的酯類化合物，例如γ-生育三烯酚的乙酸酯。
采用本發(fā)明的抑制劑通?？梢允沟包S中的膽固醇含量最高降低約達(dá)40％，優(yōu)選約10-約30％。根據(jù)本發(fā)明的觀察，蛋黃和/血漿中甘油三酯的含量減少約30％，特別是約10-20％。這樣的降低值一般是在給藥約10天后產(chǎn)生。
本發(fā)明還涉及家禽飼料組合物，該組合物含有至少一種上述的HMG-CoA還原酶抑制劑以及常規(guī)飼料組分。值得提及的典型飼料組分是玉米、大麥、小麥、燕麥、黑麥、黑小麥、高梁、稻米和麩、普通的麩、這些谷類的粗粉、大豆、大豆產(chǎn)品(例如提取的大豆粗粉)、油菜籽、提取的油菜籽粗粉、棉籽及其提取的粗粉、葵花、提取的葵花粗粉、亞麻籽、提取的亞麻籽粗粉、油籽壓榨物、蠶豆、豌豆、面筋、明膠、木薯淀粉、酵母、單細(xì)胞蛋白質(zhì)、肉和骨粉、肉粉、血粉、魚粉、鹽類、礦物質(zhì)、微量元素、維生素、氨基酸、飼料脂肪、油類(大豆油、菜籽油、葵花油等)。
本發(fā)明現(xiàn)在參考附圖作詳細(xì)說明。這些附圖表示

圖1當(dāng)飼料含有不同的HMG-CoA還原酶抑制劑和維生素E和煙酸時(shí)，雞蛋黃中膽固醇含量的條形圖。各條形規(guī)定如下1空白對照；2維生素E，1000mg/k；3γ-生育三烯酚乙酸酯，20mg/kg；4γ-生育三烯酚乙酸酯，500mg/kg；5d-檸檬烯，5000mg/kg；6煙酸，1500mg/kg；和7煙酸，15，000mg/kg(各種情況中的各數(shù)值是mg抑制劑/kg飼料)。條形上的箭頭表示膽固醇含量的降低(↓)或增高(↑)p＜0.05；圖2當(dāng)飼料含有HMG-CoA還原酶抑制劑和維生素E和煙酸時(shí)，蛋中甘油三酯含量的條形圖。各條形的定義與圖1中的相對應(yīng)。
實(shí)施例1a)飼料制劑制備基于玉米和木薯淀粉并且具有如表1組成的、粗粉形式的試驗(yàn)飼料。其中不采用大麥、燕麥、小麥和黑麥，因?yàn)樗鼈兒邢喈?dāng)量的生育三烯酚類化合物。大豆油可用作脂肪的來源和必需脂肪酸的載體，它如玉米油和橄欖油一樣不含有生育三烯酚(參見Qureshi & Qureshi，1993，loc.cit)。
表1試驗(yàn)飼料的組成及其被分析營養(yǎng)素的含量
1)Cefkaphos(MCP)＝磷酸一鈣2)PM＝預(yù)混3)ME＝可代謝能量b)試驗(yàn)方案被研究活性組分以2個(gè)劑量加入到表1所示的飼料配方中，但維生素E(全-外消旋-α-醋酸生育酚)的試驗(yàn)劑量僅是1000mg/kg(參見表2)。
表2試驗(yàn)方案1
a根據(jù)US 5,217,992所述的有效劑量b基于在食物中加入0.5％所產(chǎn)生的有效作用(Elson & Yu，1994， Loc.cit.)c 150-300 X RDA(推薦的食用量)的劑量對人體有效(Bssler等，1992，loc.cit.)。
除了HMG-CoA還原酶抑制劑以外，還采用煙酸和維生素E(全-外消旋-α-醋酸生育酚)。在文獻(xiàn)中一直報(bào)導(dǎo)了高劑量煙酸的降膽固醇作用(Bssler，K.H.等，Vitamin-Lexikon fr rzte，Apotheker und Ernhrungswissenschaftler，Gustav Fischer Verlag，1992)。在小雞中可觀察到，補(bǔ)充維生素E可刺激HMG-CoA還原酶，并且當(dāng)同時(shí)喂以膽固醇時(shí)，血漿膽固醇增高(Qureshi，A.A.等，Nutr.Rep.Int.40，5，992-1001，1989)。在產(chǎn)蛋母雞中進(jìn)行的這種試驗(yàn)中打算研究的就是這個(gè)作用。
試驗(yàn)開始時(shí)，產(chǎn)蛋母雞(Lohmann挑選的來航雞)已產(chǎn)蛋28周。10母雞組成處理組。開始用不同的活性組分飼養(yǎng)這些家禽達(dá)4周。隨后收集它們所產(chǎn)的蛋用于分析。將各個(gè)情況中的6個(gè)蛋作成3個(gè)獨(dú)立的蛋黃混合物并且冷藏，直至分析為止。通過酶促方法分析蛋黃的總膽固醇和甘油三酯。分析試驗(yàn)是按照手冊“Veterinarmedizinische Laboruntersuchungen fr die Diagnose undVerlaufskontrolle”(1985)，第3版，Behringer Mannheim GmbH，Mannheim出版，所述的方法進(jìn)行。
有關(guān)膽固醇的測定，通過膽固醇酯酶的作用，膽固醇酯類被裂解為膽固醇和脂肪酸。游離膽固醇通過空氣中的氧并且在膽固醇氧化酶的參與下轉(zhuǎn)化為Δ4＝膽甾烯酮和過氧化氫。生成的過氧化氫與4-氨比替啉和苯酚在過氧化物酶的催化作用下形成紅色染料，該染料顏色的強(qiáng)度直接與膽固醇的濃度成比例，并且可以在500-550nm下測定。
通過甘油含量的酶促分析法可以測出甘油三酯。通過脂肪酶和酯酶的催化，甘油三酯發(fā)生裂解。生成的甘油在甘油激酶GK催化的反應(yīng)中被ATP磷?；癁?-磷酸甘油酯。
生成的ADP通過丙酮酸激酶(PK)的作用下與磷酸烯醇丙酮酸(PEP)轉(zhuǎn)化回ATP，并形成丙酮酸酯。
PK丙酮酸通過乳酸鹽脫氫酶(LDH)和NADH的作用被氫化為乳酸酯，NADH氧化為NAD。
LDH在反應(yīng)期間，NADH的消耗量等于甘油的量。NADH是可變的，并且很容易可以根據(jù)其在Hg366nm，Hg334ng或340nm處的吸收加以測定。
蛋黃混合物中的生育酚類化合物和生育三烯酚類化合物是由HPLC測出。為了完成該檢測，將樣品在含水的醇介質(zhì)內(nèi)水解并且用乙醚提取數(shù)次。與外標(biāo)物比較可以進(jìn)行定量分析。固定相Spherisorb CN 5μm，250×4mm流動相含有0.25％異丙醇的正己烷。流速2ml/min熒光檢測292nm(消光)326nm(發(fā)射)UV/VIS 326nm典型的反應(yīng)時(shí)間是α-生育酚 3.74分鐘β-生育酚 12.15分鐘γ-生育酚 12.93分鐘β-生育三烯酚 14.22分鐘γ-生育三烯酚 16.49分鐘在試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，對生蛋和煮過的蛋進(jìn)行氣味試驗(yàn)。
數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析，并且平均值之間的差異通過Duncan試驗(yàn)分級。c)結(jié)果氣味試驗(yàn)的結(jié)果表明與對照沒有差別。
膽固醇和甘油三酯如圖1和2所示。由于蛋黃重量沒有顯著性差異，所以所示的含量是以全蛋黃計(jì)。用γ-生育三烯酚(500mg/kg)處理的蛋黃中的膽固醇和甘油三酯顯著降低了15％。低劑量的生育三烯酚和維生素E(全-外消旋-醋酸生育酚)對上述指標(biāo)沒有影響。在兩種情況的煙酸劑量下，甘油三酯的含量某些增高。
下表3表示用1、2、3和4處理后蛋黃中的生育酚和生育三烯酚。
表3用醋酸生育酚和醋酸生育三烯酚飼養(yǎng)后蛋黃中生育酚和生育三烯酚的含量
這些數(shù)值是在水解后得到。在使用了維生素E(全-外消旋-α-醋酸生育酚，1000mg/kg)對照組中α-生育酚在蛋黃中的含量從0.48mg升高至23mg。這與約21％的轉(zhuǎn)移率相對應(yīng)，該數(shù)值與文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)的數(shù)據(jù)相吻合(Sünder，A.等，營養(yǎng)學(xué)和生理學(xué)進(jìn)展，6，147，1997)。此外，高劑量的α-生育酚可以使蛋黃的γ-生育酚減少。這個(gè)發(fā)現(xiàn)也被文獻(xiàn)認(rèn)同。令人驚奇的是蛋黃中幾乎沒有蓄積任何γ-生育三烯酚。只有在高劑量下才可能在蛋黃中檢測出366μgγ-生育三烯酚。其向蛋黃中的轉(zhuǎn)移率只達(dá)到0.008％。實(shí)施例2另一個(gè)飼養(yǎng)試驗(yàn)按照類似于實(shí)施例1的方式進(jìn)行。在此試驗(yàn)中，本發(fā)明不但測出產(chǎn)蛋母雞的α-和δ-生育三烯酚，也測定生育三烯酚前體(4-酮基-γ-生育三烯酚)和其他萜類化合物，例如醋酸法呢醇酯、紫蘇子醇、芫荽油醇和β-紫香酮。a)飼料配方玉米/木薯淀粉/大豆(參見實(shí)施例1)+150ppm乙氧喹(抗氧劑)用豆油將亞油酸含量調(diào)至1％，根據(jù)NRC(營養(yǎng)研究協(xié)會/USA)(1994)的規(guī)定加入維生素E5ppm全-外消旋-α-醋酸生育酚。b)試驗(yàn)方案本試驗(yàn)的方案與實(shí)施例1相似但進(jìn)行以下的改動各處理組的家禽數(shù)目是8只母雞。
從對照組到高劑量處理組的每組中取4只家禽在試驗(yàn)結(jié)束時(shí)宰殺。取血后得到血漿，將這些家禽徹底放血。取出肝臟并冷藏直至用于分析。
測定4個(gè)獨(dú)立蛋黃混合物(得自6個(gè)蛋)和血漿中的甘油三酯和膽固醇。
此外，測定蛋黃和肝臟(處理組1至7)中α-、δ-和4-酮基-γ-生育三烯酚。
該試驗(yàn)方案如下表4所示
表4試驗(yàn)方案2
c)結(jié)果該試驗(yàn)按照上述方案進(jìn)行并且不進(jìn)行檢測。發(fā)現(xiàn)該處理沒有使產(chǎn)蛋量減少，也沒有使蛋的氣味有所不同。
膽固醇和甘油三酯的試驗(yàn)結(jié)果如下表5所示
表5<
>蛋黃和肝臟中生育酚和生育三烯酚的含量概括在下表6和7中
表6用α-和δ-生肓三烯酚和4-酮基-γ-生肓三烯酚飼養(yǎng)的蛋黃中生肓酚和生肓三烯酚的含量
表7用α-和δ-生肓三烯酚和4-酮基-γ-生肓三烯酚飼養(yǎng)的蛋黃中生肓酚和生肓三烯酚的含量
<p>上述試驗(yàn)表明，用α-和δ-生育三烯酚和紫蘇子醇處理的蛋黃中的膽固醇含量出現(xiàn)令人驚奇的降低趨勢。意外的是，用高劑量4-酮基-γ-生育三烯酚(500mg/kg)以及兩種劑量的萜類化合物芫荽油醇和β-紫香醇處理的蛋黃中膽固醇含量明顯降低，最多達(dá)到18％。這樣的處理對血漿膽固醇含量沒有影響。相反地，β-紫香酮、醋酸法呢醇酯和紫蘇子醇可將血漿甘油三酯的水平最多降低25％。多數(shù)被處理的蛋黃中的甘油三酯略有增加。
用生育三烯酚處理可以使蛋黃中α-生育酚升高。其原因在于所用產(chǎn)品仍含有少量的α-生育酚。只用α-生育三烯酚的處理不影響β-生育酚。α形式的生育三烯酚使蛋黃中生育三烯酚增加的最多，用500mg/kg α-生育三烯酚處理時(shí)的保留量為2.4mg。但是外推至全蛋黃，所得的轉(zhuǎn)移率約為2.2％，它低于α-生育酚處理時(shí)的情況。
除了α-和γ-生育酚以外，在家禽肝臟中只能檢測出α-生育三烯酚。
權(quán)利要求
1.至少一種膽固醇生物合成抑制劑在降低家禽蛋類的膽固醇含量中的應(yīng)用，其中所述抑制劑含有類異戊二烯結(jié)構(gòu)部分。
2.權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其中所述抑制劑選自生育三烯酚類化合物和萜類化合物。
3.權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其中所述生育三烯酚類化合物選自α-、β-、γ-和δ-生育三烯酚、其4-氧代類似物以及這些化合物的酯。
4.權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其中萜類化合物是植物萜類化合物。
5.權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其中植物萜類化合物是β-紫香酮。
6.權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其中所述植物萜類化合物選自芫荽油醇及其酯。
7.權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其中所述植物萜類化合物是法呢醇酯。
8.上述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其中所述抑制劑以純的異構(gòu)體、純的旋光體、異構(gòu)體混合物、立體異構(gòu)體混合物或異構(gòu)體和立體異構(gòu)體混合物形式應(yīng)用。
9.上述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其中所述抑制劑與飼料混合施用，其中含有使家禽蛋類膽固醇含量減少的濃度的抑制劑。
10.上述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其中用于同時(shí)減少家禽蛋類的膽固醇含量以及家禽蛋類和/或血漿內(nèi)甘油三酯的含量。
11.一種家禽飼料組合物，該組合物含有至少一種權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)所定義的抑制劑和常規(guī)飼料組分。
12.權(quán)利要求11的飼料組合物，該組合物含有使家禽蛋類膽固醇含量減少的濃度的特定抑制劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及至少一種膽固醇生物合成抑制劑在降低家禽蛋類的膽固醇含量中的應(yīng)用,所述抑制劑包含類異戊二烯結(jié)構(gòu)組成。
文檔編號A61K31/22GK1258457SQ9911969
公開日2000年7月5日 申請日期1999年8月7日 優(yōu)先權(quán)日1998年8月7日
發(fā)明者K·克雷默, K·－U·巴迪尼烏斯, P·P·霍佩 申請人:Basf公司