專利名稱：分離加蘭他敏的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及分離生物堿加蘭他敏的方法；由該方法生成的加蘭他敏；由此制成的植物制劑(蓋侖制劑)形式的加蘭他敏的用途；以及由此生成的加蘭他敏在治療閉角型青光眼、早老性癡呆(Alzheimer’s disease)和酒精及尼古丁依賴性方面的用途。
加蘭他敏(4a，5，9，10，11，12-六氫-3-甲氧基-11-甲基-6H-苯并呋喃并(3a，3，2-ef)-(2)并氮雜-6-醇)是一種四環(huán)生物堿，因其藥理特性而屬于具可逆作用的膽堿酯酶抑制劑。其作用類似于毒扁豆堿和新斯的明。但是，它還具有其獨(dú)有的特性，例如可與嗎啡相比的強(qiáng)鎮(zhèn)痛作用。作為膽堿酯酶抑制劑，加蘭他敏的治療范圍比毒扁豆堿和新斯的明寬3至6倍，因?yàn)樗⒉幌笏鼈兡菢佑卸?。該?yōu)點(diǎn)彌補(bǔ)了相對(duì)于劑量其膽堿酯酶抑制作用稍低的不足。加蘭他敏被用于治療脊髓灰質(zhì)炎和各種神經(jīng)系統(tǒng)疾病，但主要用于治療閉角型青光眼和作為使用箭毒后的解毒藥。使用加蘭他敏治療早老性癡呆尚在試驗(yàn)階段。最近，還記述了將其用于治療酒精及尼古丁依賴性(DE-OS4010079，DE-OS4301782)。
早老性癡呆、酒精及尼古丁依賴性以及閉角型青光眼的治療需要適應(yīng)具體情況的長(zhǎng)效藥物劑型。這可以是用于治療閉角型青光眼的眼膏。在早老性癡呆和酒精或尼古丁依賴性的治療中，顯然，復(fù)雜治療方案或長(zhǎng)時(shí)間輸注是不適當(dāng)?shù)?。在這些疾病中，透皮治療系統(tǒng)(TTS)是一種適宜的形式，例如DE-OS4301783中所述的。完整的皮膚或角膜都不能吸收活性成份的鹽。因此，在治療閉角型青光眼、早老性癡呆、或酒精及尼古丁依賴性時(shí)不能在軟膏或TTS中使用氫溴酸加蘭他敏或鹽酸加蘭他敏。所以，必須使用純加蘭他敏堿。
由于其具有有三個(gè)光學(xué)活性碳原子的復(fù)雜的四環(huán)結(jié)構(gòu)，所以不可能經(jīng)濟(jì)有效地合成加蘭他敏堿。因此，通常從石蒜科植物，例如雪花蓮屬，諸如snowdrop或夏雪片蓮(Leucojum aestivum)中分離加蘭他敏。這些植物的優(yōu)點(diǎn)在于含有濃度高達(dá)0.3％的加蘭他敏和少量的相伴生物堿，因此可使用DE-PS1193061中所述的萃取方法。但是，雪花蓮屬和夏雪片蓮都是受保護(hù)的。另一方面，DE-PS1193061中所述的萃取方法最好使用含氯烴，但后者因其毒性而受到限制。因此，西方的藥典提出含氯烴的殘留量必須小于10ppm。所以，在藥物的制備中應(yīng)盡可能避免使用含氯烴。而且，在已知的方法中，必須由氧化鋁吸附溶劑萃取液以確保樹脂狀物質(zhì)與相伴生物堿分離。然后，從濾除了氧化鋁的溶液中通過氫溴酸加蘭他敏純化加蘭他敏；這就涉及到鹵素鹽的處理。為了用于軟膏或TTS，然后必須從氫溴酸加蘭他敏中游離出加蘭他敏堿。
所以，本發(fā)明的目的之一是提供一種沒有現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)的分離和純化加蘭他敏的方法。具體地說(shuō)，該方法方便了純化，避免了使用含氯烴和利用加蘭他敏鹽進(jìn)行的純化。該目的是通過本發(fā)明中特征如權(quán)利要求1所述的方法達(dá)到的。從屬權(quán)利要求對(duì)優(yōu)選實(shí)施方式的特征進(jìn)行了描述。
具體地說(shuō)，本發(fā)明的主體是從生物材料中分離加蘭他敏的方法，生物材料收獲自農(nóng)業(yè)栽培的石蒜科植物或那些通常被認(rèn)作“雜草”的非保護(hù)植物，最好是自這些植物的球莖分離。這些石蒜科植物包括例如水仙或文殊蘭(cimum)。尤其適合的是黃水仙(Narcissus paseudonarcissus，“Carlton”)或蘇門答臘文殊蘭(Asian climber，Crinum amabile)。雖然這些植物中加蘭他敏含量只有受保護(hù)植物的十分之一，而且具有多達(dá)12種的相伴生物堿，但令人驚奇的是本發(fā)明的方法能夠從中分離出藥用純度的加蘭他敏堿。
根據(jù)本發(fā)明，用毒理學(xué)上安全的有機(jī)溶劑萃取含有加蘭他敏的生物材料，并利用液-液萃取從萃取液中提純加蘭他敏，最好將原料粉碎并與堿性粉末混合，堿粉末最好是氫氧化鈉顆粒、碳酸鈉、碳酸鉀、或其它適合從生物材料中游離出堿并制備成藥理活性物質(zhì)的類似的鹽。對(duì)成功實(shí)施本發(fā)明方法來(lái)說(shuō)尤其重要的是在液-液萃取的第一階段維持pH值。液-液萃取第一階段的pH約為4，第二階段約為9。除了濃氨之外，還可以使用其它堿的碳酸鈉溶液來(lái)調(diào)節(jié)pH值。利用乙醚或特定沸點(diǎn)汽油作為毒理學(xué)上安全的有機(jī)溶劑。以使用特別沸點(diǎn)的汽油為佳，利用它可以達(dá)到一定程度的預(yù)純化。將溶劑去除；從合適的溶劑，最好是異丙醇中重結(jié)晶加蘭他敏。由此可獲得熔點(diǎn)為129至130℃的白色加蘭他敏堿。由此獲得的加蘭他敏的純度顯示在HPLC色譜(圖2)中。
該結(jié)果是令人震驚的，因?yàn)槭褂弥两竦腄E-PS1193061所述的方法被發(fā)現(xiàn)是不適用于從含有少量加蘭他敏而且含有多達(dá)12種相伴生物堿的生物材料中分離加蘭他敏的。DE-PS1193061所述的方法會(huì)形成難以破乳的乳狀液，使得萃取無(wú)法進(jìn)行。略加改進(jìn)后的該方法生成油狀殘留物，根據(jù)HPLC色譜(

圖1)所示，至少被4種物質(zhì)所污染。
所以，必須將此認(rèn)為是一項(xiàng)驚人的特殊發(fā)現(xiàn)，即無(wú)需另外的氧化鋁吸附步驟，利用本發(fā)明的簡(jiǎn)單方法可從除大量相伴生物堿之外含有少量加蘭他敏的生物材料中高產(chǎn)率地分離出純的游離加蘭他敏堿。
由本發(fā)明方法制備的加蘭他敏堿可用于治療閉角型青光眼、早老性癡呆或酒精及尼古丁依賴性。此外，本發(fā)明方法制備的加蘭他敏堿還可用于同樣可治療上述疾病的植物制劑，例如眼膏或透皮治療系統(tǒng)。
以下實(shí)施例更具體地說(shuō)明了本發(fā)明，它們只用于說(shuō)明本發(fā)明而并不限定本發(fā)明。實(shí)施例1(比較實(shí)施例)根據(jù)DE-PS1193061所述的方法，小心地將10kg晾干并粉碎的黃水仙(Narcissus pseudonarcissus，“Carlton”)球莖與2.5L 8％的氨水溶液混合。原料發(fā)生溶脹；整批原料成為膏狀。為了萃取而加入23L二氯乙烷，結(jié)果生成無(wú)法破乳的乳狀液。
實(shí)施例2(比較實(shí)施例)對(duì)本領(lǐng)域已知的分離加蘭他敏的方法(DE-PS1193061)進(jìn)行改良。小心地將10kg晾干并粉碎的黃水仙(Narcissus pseudonarcissus，“Carlton”)球莖與400g碳酸鈉混合。加入23L二氯乙烷。將混合物靜置10小時(shí)；然后傾去溶劑。再一次用23L二氯乙烷浸泡球莖，2至3小時(shí)后傾去溶劑。然后，在球莖中第三次加入17L二氯乙烷；但是，這次立即傾去溶劑。用10％的硫酸(2×600ml；2×300ml)萃取混合后的二氯乙烷萃取液?；旌纤彷腿∫?，加入乙醚振蕩以去除微量二氯乙烷進(jìn)行純化。邊攪拌邊冷卻至15至20℃，然后加入25％的氨水溶液約200ml，直至石蕊反應(yīng)呈堿性。pH范圍為7至8。與現(xiàn)有技術(shù)中所說(shuō)的不同，相伴生物堿沒有沉淀。用鹽使堿性溶液飽和并用乙醚萃取。蒸發(fā)去除乙醚后，留下微量殘留物，這也與現(xiàn)有技術(shù)中所說(shuō)的不同。用碳酸鉀使水相飽和，將其pH調(diào)節(jié)至約14。用乙醚重復(fù)萃取水相。將混合后的乙醚萃取液蒸干，將留下的含加蘭他敏的殘留物溶解在丙酮(50ml)中。與現(xiàn)有技術(shù)相反，其中沒有沉淀。再加入350ml丙酮，加入200g氧化鋁，攪拌45分鐘。濾出氧化鋁，各用100ml丙酮洗滌兩次。將合并后的丙酮溶液蒸干，獲得1.3g油狀殘留物，用HPLC進(jìn)行檢測(cè)。其色譜如圖1所述。對(duì)主峰，即加蘭他敏作了標(biāo)明。顯然，由此獲得的加蘭他敏至少被4種物質(zhì)所污染。
實(shí)施例3小心地將100kg晾干的并經(jīng)粉碎的黃水仙(Narcissus pseudonarcissus，“Carlton”)球莖與4kg碳酸鈉混合。將混合物分成3等份，每份用15L特定沸點(diǎn)汽油80/110浸漬。將混合物靜置24小時(shí)。分別更換兩次溶劑，收集溶劑，在真空下蒸發(fā)至干。將萃取液加入2％硫酸水溶液，用濃氨水溶液調(diào)節(jié)pH至4。然后用乙醚萃取5次。用濃氨水將水相的pH調(diào)節(jié)至9，用乙醚萃取5次。匯集各份醚萃取液后用硫酸鈉干燥，然后蒸發(fā)。由此獲得20g淺黃色油狀殘留物，然后在熱異丙醇中重結(jié)晶。由此獲得10g熔點(diǎn)為129至130℃的白色加蘭他敏堿。在HPLC色譜(圖2)中只看見一個(gè)峰。
權(quán)利要求
1.一種分離加蘭他敏的方法，其特征在于，用毒理學(xué)上安全的有機(jī)溶劑來(lái)萃取含加蘭他敏的生物材料，利用液-液萃取來(lái)純化萃取液中的加蘭他敏，所述的液-液萃取其第一階段約在pH4進(jìn)行。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，在萃取前生物材料被粉碎并與堿粉末混合。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，液-液萃取的第二階段約在pH9進(jìn)行。
4.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，使用碳酸鈉作為堿粉末。
5.根據(jù)權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，使用乙醚或特定沸點(diǎn)汽油作為毒理學(xué)上無(wú)毒的有機(jī)溶劑，優(yōu)選特定沸點(diǎn)汽油。
6.根據(jù)權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，在合適的溶劑中重結(jié)晶以上制得的加蘭他敏。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，使用異丙醇作為溶劑。
8.根據(jù)權(quán)利要求1至7中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，使用植物的某部分，最好是石蒜科的球莖作為生物材料。
9.根據(jù)權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，使用的石蒜科植物是水仙，最好是黃水仙(Narcissus pseudonarcissus，“Carlton”)，或文殊蘭，最好是蘇門答臘文殊蘭(Crinum amabile)。
10.根據(jù)權(quán)利要求1至9中任一項(xiàng)所述方法生成的加蘭他敏。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的加蘭他敏在植物制劑(蓋侖制劑中)的用途。
12.根據(jù)權(quán)利要求10所述的加蘭他敏在眼膏中的用途。
13.根據(jù)權(quán)利要求10所述的加蘭他敏在透皮治療系統(tǒng)中的用途。
14.根據(jù)權(quán)利要求10所述的加蘭他敏在治療閉角型青光眼中的用途。
15.根據(jù)權(quán)利要求10所述的加蘭他敏在治療早老性癡呆中的用途。
16.根據(jù)權(quán)利要求10所述的加蘭他敏在治療酒精依賴性中的用途。
17.根據(jù)權(quán)利要求10所述的加蘭他敏在治療尼古丁依賴性中的用途。
18.一種藥物制劑，其特征在于，除了至今已知的藥用輔料外還包含權(quán)利要求10所述的加蘭他敏。
19.根據(jù)權(quán)利要求18所述的供外用的藥物產(chǎn)品。
20.根據(jù)權(quán)利要求18或19所述的用于治療閉角型青光眼的藥物產(chǎn)品。
21.根據(jù)權(quán)利要求18或19所述的用于治療早老性癡呆的藥物產(chǎn)品。
22.根據(jù)權(quán)利要求18或19所述的用于治療酒精依賴性的藥物產(chǎn)品。
23.根據(jù)權(quán)利要求18或19所述的用于治療尼古丁依賴性的藥物產(chǎn)品。
24.用于人的治療方法，其特征在于，使用權(quán)利要求10所述的加蘭他敏或權(quán)利要求18或19中任一項(xiàng)所述的藥物制劑。
全文摘要
本發(fā)明的目標(biāo)是分離生物堿加蘭他敏(結(jié)構(gòu)式Ⅰ)的方法,由所述方法生成的加蘭他敏,由此生成的植物制劑形式的加蘭他敏的用途,以及由此生成的加蘭他敏在治療閉角型青光眼、早老性癡呆(Alzheimer’s disease)和酒精及尼古丁依賴性方面的用途。
文檔編號(hào)A61K36/896GK1178533SQ96192578
公開日1998年4月8日 申請(qǐng)日期1996年3月14日 優(yōu)先權(quán)日1995年3月17日
發(fā)明者T·希勒, H·R·霍夫曼, M·克雷, R·馬圖什 申請(qǐng)人:Lts洛曼治療體系有限公司