專利名稱：含生長(zhǎng)激素的緩釋組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種含生長(zhǎng)激素緩釋(release-controlled)組合物，它在動(dòng)物體內(nèi)半衰期長(zhǎng)，無(wú)付用，本發(fā)明還涉及一種制備該組合物的方法。
大多數(shù)的具有生物活性的生長(zhǎng)激素配方在活體內(nèi)均有相對(duì)短的半衰期。為了提供足夠高的生物作用及保持生長(zhǎng)激素的生物活性延長(zhǎng)，不得不大量和/或經(jīng)常供藥，這樣可能會(huì)引起對(duì)給藥動(dòng)物嚴(yán)重的損傷。因此，一旦在活體內(nèi)供給生長(zhǎng)激素，即需要一個(gè)延長(zhǎng)其效果并對(duì)動(dòng)物又無(wú)害的用藥方案。為了滿足這種需要，已開發(fā)出各種生產(chǎn)具有滯延釋放特性并降低給藥頻率或劑量的生長(zhǎng)激素組合物的方法。
例如，美國(guó)專利4，985，440公開了一種含有一種過(guò)渡金屬?gòu)?fù)合物，特別是一種鋅一生長(zhǎng)激素復(fù)合物的組合物，該組合物溶于蔬菜或礦物質(zhì)油中，并與佐藥和賦型劑混合成的一種油脂懸浮載體。這種方法很復(fù)雜，并且需要一金屬或過(guò)渡金屬?gòu)?fù)合的生長(zhǎng)激素。例如，在嚴(yán)格的條件下，向生長(zhǎng)激素溶液內(nèi)加入氯化鋅制得鋅一生長(zhǎng)激素復(fù)合物，但要經(jīng)過(guò)多個(gè)步驟離心從含有這種復(fù)合物的懸浮液中洗去過(guò)量的氯化鋅。然后最終得到的溶液需要進(jìn)行凍干，提煉加工的全部過(guò)程即非常冗長(zhǎng)乏味，又廢時(shí)。
歐洲專利公開文獻(xiàn)216，485號(hào)也描述了一種含有懸浮在諸如花生油的油脂中的鋅一生長(zhǎng)激素組合物。8mg該組合物和40mg生長(zhǎng)激素示范性地向豬給藥，只顯示短短地9天藥效。另外，該制備方法也與美國(guó)專利4，985，404號(hào)一樣復(fù)雜。
美國(guó)專利4，863，736號(hào)披露一種制備含有生長(zhǎng)激素顆?？芍踩胄缘乃幫璧姆椒?，這種藥丸具有如，蟲膠、蜂蠟和纖維素的聚合物部分屏障涂層。這種藥丸控制生長(zhǎng)激素在活體內(nèi)的釋放。同樣，歐洲專利公開文獻(xiàn)374，120號(hào)也提供一種在滲透設(shè)備中制備含生長(zhǎng)激素的可植入性藥劑的方法。歐洲專利公開文獻(xiàn)246，540號(hào)也披露了一種制備合成含多肽和脂肪酸的可植入性藥劑的方法。
另外，美國(guó)專利4，786，501號(hào)記載了一種制備可植入性藥丸劑配方的方法，該方法包括混合生長(zhǎng)激素，蔗糖和乙基纖維素，以及用多孔和無(wú)孔聚乙稀涂敷該混合物。美國(guó)專利4，761，289號(hào)也討論了一種制備可植入性配方的方法，它包括混合生長(zhǎng)激素和非水溶性的聚合物，加入一種非水溶性的溶劑并干躁。雖然這些可植入性配方具有保持療效的作用，但它們需要經(jīng)手術(shù)或特別的器械才能植入或給藥;因此，需要相對(duì)復(fù)雜和不太方便的給藥程序。
另外，歐洲專利公開文獻(xiàn)193，917號(hào)披露一種組合物，它含有水分散性和水溶性的碳水化合物聚合物，以及一種具生物活性生長(zhǎng)激素大分子。歐洲專利公開文獻(xiàn)314，421號(hào)進(jìn)一步公開了一種含分散在油脂內(nèi)的一種多肽的組合物，它采用一種如右旋糖酐的碳水化合物聚合物作為支持物質(zhì)。歐洲專利公開文獻(xiàn)211，691號(hào)也報(bào)道了一種以幾種蜂蠟作為支持物質(zhì)含有分散在某種油脂中的多肽的組合物，但是它具有同上述那些歐洲專利公開文獻(xiàn)193，917一樣的缺點(diǎn)。在這些組合物中，動(dòng)物體常常將右旋糖酐等碳水化合物聚合物視為抗原而引起反應(yīng)，并且很敏感，因此不適合于長(zhǎng)期使用。
韓國(guó)專利公開文獻(xiàn)91-15302號(hào)描述了一種含有分散在生育酚內(nèi)并配有延遲釋放作用的動(dòng)物生長(zhǎng)激素的組合物。由于它的高粘度，這種組合物很難被注射使用，并具有在給藥組織中滯留時(shí)間長(zhǎng)的傾向，能引起對(duì)那一組織的損傷。
因此，本發(fā)明的目的在于提供制備一種生長(zhǎng)激素組合物的方法，該組合物在動(dòng)物活體內(nèi)半衰期長(zhǎng)，無(wú)付作用。
本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供一種采用本發(fā)明之方法制備的生長(zhǎng)激素組合物。
按照本發(fā)明，將提供一種制備生長(zhǎng)激素組合物的方法，它在活體內(nèi)的釋放是時(shí)間可控的，該方法包括如下步驟將卵磷脂和生長(zhǎng)激素溶解在水溶液內(nèi)，形成一種脂質(zhì)體生長(zhǎng)激素溶液;常規(guī)冷凍干躁條件下冷凍干躁所述的脂質(zhì)體生長(zhǎng)激素溶液;在生育酚衍生物中懸浮所述的冷凍干躁過(guò)的脂質(zhì)體生長(zhǎng)激素以制成本發(fā)明所述的新的組合物。
附圖簡(jiǎn)要說(shuō)明本發(fā)明還通過(guò)參考以下附圖進(jìn)一步加以理解，其中

圖1和圖2示出當(dāng)將本發(fā)明之組合物注射給奶牛后，對(duì)牛奶產(chǎn)量的影響;
圖3表示當(dāng)本發(fā)明之新型組合物注射給生長(zhǎng)期的豬后，其血清中豬生長(zhǎng)激素的濃度;
圖4所示將本發(fā)明之組合物注射給生長(zhǎng)期的豬后，其血清中尿素氮的濃度;
圖5示出將本發(fā)明之組合物注射給生長(zhǎng)期的豬后，其血清中類胰島素生長(zhǎng)因子Ⅰ的濃度。
按照本發(fā)明所述，生長(zhǎng)激素溶液同卵磷脂在均質(zhì)機(jī)中混合，然后采用常規(guī)的方法，將其懸浮在生育酚衍生物中獲得本發(fā)明之組合物。許多類型的生長(zhǎng)激素都能用于本發(fā)明，只要它們具備理想的生物活性即可。這種典型的生長(zhǎng)激素包括牛生長(zhǎng)激素，豬生長(zhǎng)激素，羊生長(zhǎng)激素等等。雖然本發(fā)明不要求采用金屬一，或過(guò)渡金屬-復(fù)合生長(zhǎng)激素或者用低度氫化的修飾過(guò)的生長(zhǎng)激素，但是這些種類的生長(zhǎng)激素也可以使用?？梢圆捎玫纳L(zhǎng)激素也包括那些經(jīng)過(guò)重組DNA技術(shù)從諸如大腸桿菌和酵母等縮主細(xì)胞中制得的生長(zhǎng)激素，以及從牛、羊和豬等動(dòng)物體腦重體中提取出來(lái)的天然生長(zhǎng)激素。
可用于本發(fā)明的生育酚衍生物包括d1-α-生育酚，d1-α-乙酸生育酚，d1-α-琥珀酸生育酚，d1-α-磷酸生育酚，1-α-生育酚，1-α-乙酸生育酚，1-α-琥珀酸生育酚，1-α-磷酸生育酚，和β，ξ1，ξ2，一生育酚衍生物;優(yōu)選是α-乙酸生育酚。生育酚衍生物維持如大鼠、小鼠、豚鼠、豬和牛等動(dòng)物的正常的生殖作用;幫助防止動(dòng)物肌肉發(fā)育缺陷;在活體內(nèi)生長(zhǎng)激素的緩釋起到載體的作用。另外，生育酚衍生物在活體內(nèi)防止不規(guī)則肌肉運(yùn)動(dòng)，或者增強(qiáng)肌肉的強(qiáng)度。生育酚還能防止雞不規(guī)則肌肉運(yùn)動(dòng)，或使肌肉變硬，也可以預(yù)防水貂、豬或貓的脂肪組織炎。本發(fā)明組合物內(nèi)采用的生育酚的量為占該組合物重量的85～99%，優(yōu)選90～99%。
本發(fā)明采用的具有生物活性的生長(zhǎng)激素同卵磷脂進(jìn)行混合，其混合比為7∶3至8∶2(重量比)。假如生長(zhǎng)激素的量少于低限(即70%重量)，它很難顯示出生物活性。假如生長(zhǎng)激素的量超過(guò)其上限(即80%重量)，則很難形成脂質(zhì)體生長(zhǎng)激素混合物。
存在于本發(fā)明組合物中的卵磷脂控制生長(zhǎng)激素在動(dòng)物體內(nèi)的釋放時(shí)間。典型地適合于本發(fā)明的卵磷脂包括磷脂酰膽堿，溶血磷脂(Lysophospholipid)，縮醛磷脂和鞘磷脂。
另外，可以加入合適的賦形劑和/或佐藥以使本發(fā)明組合物能制成各種類型的劑型。
如上所述，在某些公知的組合物中，生長(zhǎng)激素需要同金屬或過(guò)渡金屬，通過(guò)復(fù)雜的工藝包括滲析形成復(fù)合物形式，因?yàn)樵诨铙w內(nèi)其溶解性必須比較低，目的是獲得緩釋效果。生長(zhǎng)激素也可以超量給藥，以造成開始的沖擊效果。
相反，按本發(fā)明制備的組合物，包括一種懸浮在生育酚載體中的冷凍過(guò)的脂質(zhì)體生長(zhǎng)激素，當(dāng)它向動(dòng)物體給藥時(shí)，不必采用那種復(fù)雜的程序，即可以緩釋的方式釋放出具有生物活性生長(zhǎng)激素，提煉加工全部的配方組分和給藥程序非常簡(jiǎn)單和經(jīng)濟(jì)，更重要的是，本發(fā)明組合物的配方顯示出在活體內(nèi)生長(zhǎng)激素伴隨著較低的初始釋放或者突然沖擊釋放的一種高品質(zhì)的釋放型。
現(xiàn)有技術(shù)中采用的金屬?gòu)?fù)合生長(zhǎng)激素的配方中的金屬或過(guò)渡金屬可引起令人故慮的付作用，而本發(fā)明組合物無(wú)付作用。本發(fā)明所用的生育酚衍生物在活體中具有某種藥理輔助作用，并具有減輕或者預(yù)防活體對(duì)本發(fā)明組合物的排斥作用。
以下將結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步解釋本發(fā)明，這些實(shí)施例不具有限制本發(fā)明范圍的意圖。
實(shí)施例1取(用重組DNA技術(shù)(株式會(huì)社樂(lè)喜)生產(chǎn)的牛生長(zhǎng)激素溶液30.03mg/l)牛生長(zhǎng)激素溶液300ml，同大豆中提取的L-α-磷脂酰膽堿IV-S(L-α-卵磷脂)3g在均質(zhì)機(jī)內(nèi)混合20分鐘。將該溶液在5分鐘、4℃下經(jīng)過(guò)一微流體化儀(microfluidizer)將其倒入一燒瓶，在干冰-丙酮浴下快速冷凍至負(fù)70℃，然后冷凍干躁。將含有L-α-磷脂酰膽堿和牛生長(zhǎng)激素的冷凍干躁后的粉末133.3mg在均質(zhì)機(jī)中同1ml的α一生育酚均勻混合10分鐘。
選用10頭剛好為哺乳中期的豪斯頓(Holstein)奶牛做實(shí)驗(yàn)。每頭牛每?jī)芍茏⑷氡景l(fā)明的組合物共6次。其中5頭牛為實(shí)驗(yàn)組，另5頭牛不注射該組合物做為對(duì)照組。肩甲上部皮下注射該組合物。注射后，每天計(jì)量牛奶產(chǎn)量，平均每天產(chǎn)奶量見表1和圖1。
實(shí)施例2按實(shí)施例1的方法制備本發(fā)明組合物，只是取333.5mg冷凍干躁后的牛生長(zhǎng)激素與37.02mg卵磷脂同1ml的α-乙酸生育酚混合。
選12頭哺乳中期的豪斯頓奶牛進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。每頭牛每?jī)芍茏⑷?ml該配方組合物的共6次。其中6頭牛做為實(shí)驗(yàn)組，另6頭牛為對(duì)照組。按實(shí)施例1中所述的相同的方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，其實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2和圖2。
表1本發(fā)明組合物對(duì)每日產(chǎn)乳量的作用單位(kg)對(duì)照組注射組注射前21.5023.91第一次主射21.6627.75第二次注射21.8428.18第三次注射21.5128.10第四次注射20.7627.73第五次注射19.5928.06第六次注射18.5127.17第六次注射17.9423.45后的兩周表2本發(fā)明組合物對(duì)每日產(chǎn)乳量的作用單位(kg)對(duì)照組注射組注射前26.1425.50第一次注射22.623.8第二次注射23.825.6第三次注射22.324.8第四次注射22.024.5第五次注射20.723.0第六次注射21.023.2第六次注射后18.919.3的兩周實(shí)施例3按實(shí)施例1相同的方法制備豬生長(zhǎng)激素組合物。選14頭閹豬，每頭重約60kg做實(shí)驗(yàn)。其中7頭豬每三周每頭豬注入本發(fā)明配方組合物1.5ml，共兩次，另7頭豬用做對(duì)照組不注射該組合物。注射后三周稱量它們的體重和食料消耗量。計(jì)算喂食頻率(FE，feedefficiencykg/day)。表3所示平均每天的增量數(shù)(ADG，averagedailygainkg/day)和喂食頻率(FE＝食入量/體重增加量)。
表3平均每天增量和喂食頻率對(duì)照組注射組第一個(gè)三周ADG0.940.97之后FE3.553.33第二個(gè)三周ADG0.810.96之后FE4.283.31實(shí)施例4按實(shí)施例1相同的方法制備豬生長(zhǎng)激素配方組合物。用6頭閹豬進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，每頭豬重約60kg。其中3頭豬每頭注入1.5ml的該組合物。另外3頭豬不注射組合物做對(duì)照組。測(cè)量血清豬生長(zhǎng)激素濃度(PST)，血清尿素氮(BUN)濃度和類胰島素生長(zhǎng)因子Ⅰ濃度。
其測(cè)得結(jié)果見表4、圖4和圖5
表4血清PST濃度，BUN和類胰島素生長(zhǎng)因子Ⅰ的濃度血清PSTIGF-IBUN血清PSTIGF-IBUN天(ng/ml)(ng/ml)(mg/dl)(ng/ml)(ng/ml)(mg/dl)01.4334314.51.4444115.011.5230615.73258914.531.1530817.446.911358.061.4235615.08.3010186.0101.4435119.83.1069216.5141.4635419.71.0250619.0211.8034823.31.1043817.7如上表所見，按本發(fā)明的方法制備的組合物當(dāng)給動(dòng)物供藥時(shí)具有較長(zhǎng)的半衰期，而無(wú)副作用，由于它的粘性低適合用注射劑，并適合連續(xù)使用。該組合物很易給藥不必用手術(shù)或特別的器械。另外，其制法非常簡(jiǎn)單和經(jīng)濟(jì)。
有關(guān)上述本發(fā)明特殊實(shí)施方案的描述應(yīng)被視為本領(lǐng)域普通現(xiàn)本人員可以對(duì)其進(jìn)行修改和變化，但也落入本發(fā)明權(quán)利要求限定保護(hù)范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
1.制備含生長(zhǎng)激素的緩釋組合物的方法，它包括如下步驟將生長(zhǎng)激素同卵磷脂均勻混合制成一混合物；將該混合物溶解在水溶液內(nèi)形成脂質(zhì)體生長(zhǎng)激素溶液；在常規(guī)冷凍條件下，冷凍干躁所述的脂質(zhì)體生長(zhǎng)激素溶液；并在生育酚衍生物中懸浮所述的冷凍后的脂質(zhì)體生長(zhǎng)激素制成緩釋組合物。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述的生長(zhǎng)激素選自牛生長(zhǎng)激素、豬生長(zhǎng)激素和羊生長(zhǎng)激素。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述的生長(zhǎng)激素是經(jīng)重組DNA技術(shù)制備得到的。
4.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述的生育酚選自dl-α-生育酚，dl-α-乙酸生育酚，dl-α-琥珀酸生育酚，dl-α-磷酸生育酚，1-α-生育酚，1-α-乙酸生育酚，1-α-琥珀酸生育酚，1-α-磷酸生育酚，和β，ξ1，ξ2，-生育酚衍生物。
5.如權(quán)利要求4所述的方法，其中所述的生育酚衍生物是dl-α-乙酸生育酚。
6.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述的卵磷脂選自磷脂酰膽堿，溶血磷脂(Lysophospholipid)，縮醛磷脂和鞘磷脂。
7.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述的生長(zhǎng)激素與卵磷脂的重量混合比為7∶3至8∶2。
8.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述的冷凍干躁后的脂質(zhì)體生長(zhǎng)激素的量按組合物總重量計(jì)為1%至15%，而生育酚衍生物的量為85%至99%。
9.一種按權(quán)利要求1所述的方法制備的生長(zhǎng)激素緩釋組合物。
10.如權(quán)利要求9所述的組合物還含有賦形劑和/或佐藥。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種緩釋的生長(zhǎng)激素組合物，在動(dòng)物體內(nèi)半衰期長(zhǎng)而無(wú)副作用，還涉及其制法，包括混合生長(zhǎng)激素和卵磷脂制成一混合物，在水溶液中溶解該混合物制成一種脂質(zhì)體生長(zhǎng)激素溶液，冷凍該溶液，在生育酚衍生物中懸浮該冷凍后的脂質(zhì)體生長(zhǎng)激素，制成上述的緩釋組合物。
文檔編號(hào)A61K9/127GK1087277SQ93101680
公開日1994年6月1日 申請(qǐng)日期1993年2月24日 優(yōu)先權(quán)日1992年11月27日
發(fā)明者金南中, 趙興洙, 宋孟錫, 李炳建 申請(qǐng)人:株式會(huì)社樂(lè)喜